CN108076973A - 一种香菇浓缩菌种的生产方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种香菇浓缩菌种的生产方法，所述方法利用发酵技术生产液体香菇菌种，其中所述培养基中含有富硒玉米粉，通过富硒玉米粉与其他原料之间配合，为香菇菌种提供充足的营养物质，且硒元素能够促进保持香菇菌种的活性；此外在生产液体香菇菌种的过程中接种的比例控制在1:100‑500的范围，这样的接种量能够缩短菌丝繁殖到达高峰的时间，避免杂菌生长，得到纯种的香菇菌种；然后对液体香菇菌种进行培养，在无菌条件下进行浓缩，得到活性高的固态的香菇浓缩菌种，所述香菇浓缩菌种，生产周期为2周以内，生产周期短，运输方便，无污染，活性高。

Description

一种香菇浓缩菌种的生产方法

技术领域

本发明属于食用菌种植领域，具体涉及一种香菇浓缩菌种的生产方法。

背景技术

我国食用菌每年生产3千多万吨，其产值在农业中成为仅次于蔬菜、粮食和水果的第四大种植产业。香菇(Lentinula edodes)是一种重要的食用菌，产量在人工栽培食用菌中居第二位。随着生活品质的提高，人们开始逐渐认识到香菇的营养价值，由于其独特的风味和增强人体免疫功能的作用,成为人们餐桌上最喜爱的健康食品之一。

当前香菇的栽培主要是农户和合作社分散经营，生产环节多周期长，其中菌种生产是香菇生产的关键环节。当前国内香菇菌种的生产主要采用固体菌种和液体菌种两种，国体菌种分一级种，二级种，三级种进行生产，一级种主要是试管母种，二级种是菌种瓶装的麦粒母种，三级种是菌袋装的与栽培种，固体种生产周期长达3个月以上，菌袋口和菌袋底部的菌龄不一致，生产操作主要靠手工进行，生产工艺落后，生产周期长、易污染、活力低，成本高；液体菌种是利用大型的发酵罐深层快速培养获液态菌种，其菌丝生长速度快，大约需要培养5-7天，成本低，便于机械化操作，但香菇液体菌种不能长时间保存，生产完马上就地接种，且香菇液体菌种中菌种只占液体重量的5-8％左右，体积大不能长距离运输，限制了液体菌种的使用区域。

发明内容

本发明的目的在于针对现有香菇固体菌种和液体菌种技术存在的不足或缺陷，提供一种新的香菇浓缩菌种的生产方法，将制备好香菇液体菌种进行浓缩，去除多余的水分，缩小其体积，进行低温保存，以便于运输和接种。

本发明的目的是提供一种香菇浓缩菌种的生产方法。

本发明的另一目的是提供一种香菇浓缩菌种。

为了解决香菇液体菌种不便于运输的问题，将经过常规培养得到香菇液体菌种进行浓缩，得到浓缩香菇菌种，但是这些浓缩香菇菌种运输到栽培基地之后，进行稀释培养，其活性极低，远远达不到种植培养的要求。

根据具体实施方式，本发明提供一种活性高，生产周期短的香菇浓缩菌种的生产方法：

香菇浓缩菌种的生产方法，包括以下步骤：

(1)配制培养基：配制培养基，调节pH至6.6-7.0；所述培养基包括以下重量份的组分：富硒玉米粉0.2-2份，葡萄糖0.4-1.8份，蛋白胨0.1-0.5份，硫酸镁0.01-0.05份，磷酸二氢钾0.05-0.15份和水95-99份，每千克所述富硒玉米粉中硒元素含量为0.1-10mg；

(2)灭菌：将步骤(1)得到的培养基加入容器中进行蒸汽灭菌，冷却，得到无菌培养基；

(3)接种发酵：将香菇菌种接种至步骤(2)得到的无菌培养基上；

(4)发酵培养得到菌液；

(5)菌种浓缩：将步骤(4)得到的香菇菌液离心，去除上清液，收集菌丝，得到浓缩香菇菌种。

根据本发明具体实施方式的香菇浓缩菌种的生产方法，优选地，步骤(1)中，使用氨水或盐酸调节pH至6.6-7.0。

为了给香菇菌种提供良好的生长环境，促进香菇菌种的快速生长，本发明使用氨水或者盐酸调节培养基的pH至6.6-7.0。

根据本发明具体实施方式的香菇浓缩菌种的生产方法，优选地，在调节pH之前还包括向培养基中加入消泡剂，所述消泡剂的HLB值2.5-3.0。

在发酵过程中，培养基营养丰富，培养前期培养基营养成分消耗较少，因此容易起泡，而过多的泡沫会对发酵产生一定的不良影响，因此为破灭泡沫，消泡剂应该在泡膜上浓缩、集中。所以消泡剂在起泡液中是过饱和状态，只有不溶或难溶才易于达到过饱和状态。不溶或难溶，才易于聚集在气液界面，才易于浓缩在泡膜上，才能在较低浓度下发挥作用。向本发明的培养基中加入HLB值在2.5-3.0，疏水性消泡剂，能够有效消除泡沫。

根据本发明具体实施方式的香菇浓缩菌种的生产方法，优选地，步骤(2)中，所述灭菌的方法为蒸汽灭菌，灭菌的温度为115-121℃，灭菌时间为15-120min。

根据本发明具体实施方式的香菇浓缩菌种的生产方法，优选地，步骤(2)中，所述冷却过程中向培养基中通入无菌空气，保持容器内的压力为0.03-0.05MPa。

为了避免在降温过程中外界的细菌及污染物进行培养基，污染培养基，本发明采用通入无菌空气的方法，保持容器内的压力大于外界大气压，避免外界污染物进入污染培养基。

根据本发明具体实施方式的香菇浓缩菌种的生产方法，优选地，步骤(3)接种发酵之前还包括制备摇瓶种子，摇瓶种子的制备过程为挑选生长状态良好的香菇母种，连续培养2-3次，得到活力强的试管母种，然后接种至摇瓶培养基中，在18-28℃培养4-6天，得到香菇菌种。

为了缩短香菇浓缩菌种培养周期，本发明挑选生长状态良好的母种进行活化菌种，得到质量优良的香菇菌种，为后续培养提供方便。

根据本发明具体实施方式的香菇浓缩菌种的生产方法，优选地，步骤(3)中，接种过程中香菇菌种与无菌培养基的体积比为1:100-500。

在生产液体香菇菌种的过程中接种的比例控制在1:100-500的范围，这样的接种量能够缩短菌丝繁殖到达高峰的时间，避免杂菌生长，得到纯种的香菇菌种。

根据本发明具体实施方式的香菇浓缩菌种的生产方法，优选地，步骤(4)中，在21-25℃，压力为0.01-0.05MPa条件下培养120-170h，发酵至菌丝球充满发酵液，终止发酵。

根据本发明具体实施方式的香菇浓缩菌种的生产方法，优选地，步骤(5)中，所述离心的温度为0-4℃，离心的速率为6000-8000r/min，离心的时间为8-12min。

根据本发明具体实施方式的香菇浓缩菌种，由上述香菇浓缩菌种的生产方法制备。

本发明的有益效果为：

本发明提供一种香菇浓缩菌种的生产方法，所述方法利用发酵技术生产液体香菇菌种，其中所述培养基中含有富硒玉米粉，通过富硒玉米粉与其他原料之间配合，为香菇菌种提供充足的营养物质，且硒元素能够促进保持香菇菌种的活性；此外在生产液体香菇菌种的过程中接种的比例控制在1:100-500的范围，这样的接种量能够缩短菌丝繁殖到达高峰的时间，避免杂菌生长，得到纯种的香菇菌种；然后对液体香菇菌种进行培养，在无菌条件下进行浓缩，得到活性高的固态的香菇浓缩菌种，所述香菇浓缩菌种，生产周期为2周以内，生产周期短，运输方便，无污染，活性高。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。

实施例1

香菇浓缩菌种的生产方法，包括以下步骤：

(1)配置培养基：配制培养基，所述培养基包括以下重量份的组分：富硒玉米粉1份，葡萄糖0.8份，蛋白胨0.5份，硫酸镁0.05份，磷酸二氢钾0.1份和水95份，每千克所述富硒玉米粉中硒元素含量为10mg，将培养基混合均匀加入发酵罐后，加入适当的消泡剂，调节pH值到6.8；

(2)灭菌：将步骤(1)配好的培养基倒入发酵罐后立即开始灭菌，在灭菌的方法为高温蒸汽灭菌，水温在95℃以下采用夹层的热传导加热，95℃以上采用罐底直接通蒸汽加热，121℃高温蒸汽灭菌45min，然后进行降温冷却，在降温过程中通入过滤过的无菌的空气，使发酵罐的压力一直保持在0.05MPa；

(3)摇瓶种子制备，精选生长状态优良的香菇母种，利用2次复壮获得活力较强的试管母种，然后接种至摇瓶培养基，在28℃培养4天获得香菇菌种；

(4)接种发酵：将香菇菌种接种至步骤(2)得到的无菌培养基上，接种过程中香菇菌种与无菌培养基的体积比为1:200；

(5)发酵培养：在25℃，压力0.03MPa条件下培养120个小时，发酵至菌丝球充满发酵液，终止发酵；

(6)菌种浓缩：发酵结束后，在无菌条件下从发酵罐的底部放出发酵液，在温度为4℃条件下，以6000r/min的速率离心10min，去除上清液，收集菌丝，获得浓缩菌种。

将浓缩菌种在无菌的条件下稀释后接种菌棒300个，每个接种穴接种20毫升，同时接种液体菌种和固体菌种，统计菌丝在菌棒上的的生长速度。

实施例2

香菇浓缩菌种的生产方法，包括以下步骤：

(1)配置培养基：配制培养基，所述培养基包括以下重量份的组分：富硒玉米粉2份，葡萄糖0.4份，蛋白胨5份，硫酸镁0.01份，磷酸二氢钾0.1份和水99份，每千克所述富硒玉米粉中硒元素含量为5mg，将培养基混合均匀加入发酵罐后，加入适当的消泡剂，所述消泡剂的主要成分为单、双硬脂酸甘油酯，所述消泡剂的HLB值为2.5，调节pH值到6.6；

(2)灭菌：将步骤(1)配好的培养基倒入发酵罐后立即开始灭菌，在灭菌的方法为高温蒸汽灭菌，水温在95℃以下采用夹层的热传导加热，95℃以上采用罐底直接通蒸汽加热，121℃高温蒸汽灭菌30min，然后进行降温冷却，在降温过程中通入过滤过的无菌的空气，使发酵罐的压力一直保持在0.03MPa；

(3)摇瓶种子制备，精选生长状态优良的香菇母种，利用3次复壮获得活力较强的试管母种，然后接种至摇瓶培养基，在23℃培养5天获得香菇菌种；

(4)接种发酵：将香菇菌种接种至步骤(2)得到的无菌培养基上，接种过程中香菇菌种与无菌培养基的体积比为1:500；

(5)发酵培养：在25℃，压力0.03MPa条件下培养144个小时，发酵至菌丝球充满发酵液，终止发酵；

(6)菌种浓缩：发酵结束后，在无菌条件下从发酵罐的底部放出发酵液，在温度为2℃条件下，以8000r/min的速率离心8min，去除上清液，收集菌丝，获得浓缩菌种。

将浓缩菌种在无菌的条件下稀释后接种菌棒300个，每个接种穴接种20毫升，同时接种液体菌种和固体菌种，统计菌丝在菌棒的生长速度。

实施例3

香菇浓缩菌种的生产方法，包括以下步骤：

(1)配置培养基：配制培养基，所述培养基包括以下重量份的组分：富硒玉米粉0.5份，葡萄糖0.8份，蛋白胨0.3份，硫酸镁0.02份，磷酸二氢钾0.05份和水98份，每千克所述富硒玉米粉中硒元素含量为0.5mg，将培养基混合均匀加入发酵罐后，加入适当的消泡剂，所述消泡剂的主要成分为单、双硬脂酸甘油酯，所述消泡剂的HLB值为3.0，调节pH值到6.8；

(2)灭菌：将步骤(1)配好的培养基倒入发酵罐后立即开始灭菌，在灭菌的方法为高温蒸汽灭菌，水温在95℃以下采用夹层的热传导加热，95℃以上采用罐底直接通蒸汽加热，121℃高温蒸汽灭菌15min，然后进行降温冷却，在降温过程中通入过滤过的无菌的空气，使发酵罐的压力一直保持在0.04MPa；

(3)摇瓶种子制备，精选生长状态优良的香菇母种，利用3次复壮获得活力较强的试管母种，然后接种至摇瓶培养基，在22℃培养5天获得香菇菌种；

(4)接种发酵：将香菇菌种接种至步骤(2)得到的无菌培养基上，接种过程中香菇菌种与无菌培养基的体积比为1:300；

(5)发酵培养：在21℃，压力0.01MPa条件下培养144个小时，发酵至菌丝球充满发酵液，终止发酵；

(6)菌种浓缩：发酵结束后，在无菌条件下从发酵罐的底部放出发酵液，在温度为0℃的条件下，以6000r/min的速率离心12min，去除上清液，收集菌丝，获得浓缩菌种。

实施例4

香菇浓缩菌种的生产方法，包括以下步骤：

(1)配置培养基：配制培养基，所述培养基包括以下重量份的组分：富硒玉米粉0.2份，葡萄糖1.8份，蛋白胨0.1份，硫酸镁0.02份，磷酸二氢钾0.15份和水96份，每千克所述富硒玉米粉中硒元素含量为0.1mg，将培养基混合均匀加入发酵罐后，加入适当的消泡剂，所述消泡剂的HLB值为2.5，调节pH值到7；

(2)灭菌：将步骤(1)配好的培养基倒入发酵罐后立即开始灭菌，在灭菌的方法为高温蒸汽灭菌，水温在95℃以下采用夹层的热传导加热，95℃以上采用罐底直接通蒸汽加热，115℃高温蒸汽灭菌120min，然后进行降温冷却，在降温过程中通入过滤过的无菌的空气，使发酵罐的压力一直保持在0.05MPa；

(3)摇瓶种子制备，精选生长状态优良的香菇母种，利用3次复壮获得活力较强的试管母种，然后接种至摇瓶培养基，在18℃培养6天获得香菇菌种；

(4)接种发酵：将香菇菌种接种至步骤(2)得到的无菌培养基上，接种过程中香菇菌种与无菌培养基的体积比为1:100；

(5)发酵培养：在25℃，压力0.05MPa条件下培养170个小时，发酵至菌丝球充满发酵液，终止发酵；

(6)菌种浓缩：发酵结束后，在无菌条件下从发酵罐的底部放出发酵液，在温度为4℃条件下，以6000r/min的速率离心10min，去除上清液，收集菌丝，获得浓缩菌种。

将浓缩菌种在无菌的条件下稀释后接种菌棒300个，每个接种穴接种20毫升，同时接种液体菌种和固体菌种，统计菌丝的吃料速度。

分别将实施例1-4的浓缩菌种在无菌条件稀释后，接种至300个菌棒上，每个接种穴接种20mL，同时接种液体菌种和固体菌种，统计各项性能。结果见表1。

表1香菇菌种的各项性能统计结果。

注：菌种运输过程中要进行低温运输，保持车厢温度为：0-6℃，产品保存过程中加入专用低温保护液。

从表1的结果可以看出本发明提供的香菇浓缩菌种的生产方法生产周期短，得到的香菇浓缩菌种，体积小，方便运输，在进行接种之后，吃料速度与液体菌种吃料速度相当，具有较高的活性。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (10)

1.一种香菇浓缩菌种的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)配制培养基：配制培养基，调节pH至6.6-7.0；所述培养基包括以下重量份的组分：富硒玉米粉0.2-2份，葡萄糖0.4-1.8份，蛋白胨0.1-0.5份，硫酸镁0.01-0.05份，磷酸二氢钾0.05-0.15份和水95-99份，每千克所述富硒玉米粉中硒元素含量为0.1-10mg；

(2)灭菌：将步骤(1)得到的培养基加入容器中进行灭菌，冷却，得到无菌培养基；

(3)接种发酵：将香菇菌种接种至步骤(2)得到的无菌培养基上；

(4)发酵培养得到菌液；

(5)菌种浓缩：将步骤(4)得到的香菇菌液离心，去除上清液，收集菌丝，得到浓缩香菇菌种。

2.根据权利要求1所述的香菇浓缩菌种的生产方法，其特征在于，步骤(1)中，使用氨水或盐酸调节pH至6.6-7.0。

3.根据权利要求2所述的香菇浓缩菌种的生产方法，其特征在于，步骤(1)中，在调节pH之前向培养基中加入消泡剂，所述消泡剂的HLB值2.5-3.0。

4.根据权利要求1所述的香菇浓缩菌种的生产方法，其特征在于，步骤(2)中，所述灭菌的方法是蒸汽灭菌，灭菌的温度为115-121℃，灭菌时间为15-120min。

5.根据权利要求1所述的香菇浓缩菌种的生产方法，其特征在于，步骤(2)中，所述冷却过程中向培养基中通入无菌空气，保持容器内的压力为0.03-0.05MPa。

6.根据权利要求1所述的香菇浓缩菌种的生产方法，其特征在于，步骤(3)接种发酵之前还包括制备摇瓶种子的步骤，摇瓶种子的制备过程为挑选生长状

态良好的香菇母种，连续培养2-3次，得到活力强的试管母种，然后接种至摇瓶培养基中，在18-28℃培养4-6天，得到香菇菌种。

7.根据权利要求1所述的香菇浓缩菌种的生产方法，其特征在于，步骤(3)中，接种过程中香菇菌种与无菌培养基的体积比为1:100-500。

8.根据权利要求1所述的香菇浓缩菌种的生产方法，其特征在于，步骤(4)中，在21-25℃，压力为0.01-0.05MPa条件下培养120-170h，发酵至菌丝球充满发酵液，终止发酵。

9.根据权利要求1所述的香菇浓缩菌种的生产方法，其特征在于，步骤(5)中，所述离心的温度为0-4℃，离心的速率为6000-8000r/min，离心的时间为8-12min。

10.一种香菇浓缩菌种，其特征在于，由权利要求1-9任一所述的香菇浓缩菌种的生产方法制备。