CN109097288A - 一种液体培养基、暗褐网柄牛肝菌工厂化液体菌种的制备方法及该液体培养基的用途 - Google Patents

一种液体培养基、暗褐网柄牛肝菌工厂化液体菌种的制备方法及该液体培养基的用途 Download PDF

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    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor

Abstract

本发明提供了一种暗褐网柄牛肝菌培养基以及采用该种培养基快速培养暗褐网柄牛肝菌工厂化液体菌种方法。本发明通过采用糖蜜、蔗糖、KH2PO3、MgSO4、酵母浸膏、琼脂、水等按照一定比例配制成母种培养基和液体菌种培养基，使用牛肝菌子实体组织块或保藏菌丝块制备母种，用液体培养方法进行发酵培养。本发明还提供了一种暗褐网柄牛肝菌液体菌种培养基在暗褐网柄牛肝菌液体菌种培养和/或发酵罐发酵培养中的用途。本发明提供的暗褐网柄牛肝菌液体菌种培养基及采用该种培养基快速培养暗褐网柄牛肝菌工厂化液体菌种方法简便高效、能够克服现有技术的不足、实现工厂化大规模栽培。

Description

一种液体培养基、暗褐网柄牛肝菌工厂化液体菌种的制备方 法及该液体培养基的用途
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别是一种液体培养基及其用途，以及一种暗褐网柄牛肝菌液体菌种培养方法。
背景技术
暗褐网柄牛肝菌(Phelebopus portentosus)，又名黑牛肝菌，是一种珍稀食用菌，其味道鲜美，营养丰富，作为一种食用菌具有广阔的市场前景。然而，自然生长的此种菌子数量非常有限，为满足消费者对于暗褐网柄牛肝菌的需求，需要研制出一种人工培植方法。随着近几年针对暗褐网柄牛肝菌栽培种植技术研究的发展，目前已可实现用袋栽和瓶栽方法进行中等规模的栽培种植，但是现有技术仍未能克服技术难题、实现大规模种植。
液体菌种稳定培养是实现大规模栽培的关键前提之一，针对暗褐网柄牛肝菌的液体菌种培养目前也有了一些进展，然而，目前暗褐网柄牛肝菌液体菌种培养方法还是以实验型培养方法为主，其技术方案本身存在的不足，导致其尚未能推广至工厂化生产，例如，目前的培养方法中培养基原料的产地、品种、贮藏条件都极难把控，并且制备过程复杂，，使得每批次液体菌种很难稳定的培养，而且价格昂贵，无法进行大规模的工厂化生产。
因此，迫切需要一种更简便高效的、能够实现工厂化栽培的暗褐网柄牛肝菌培养基及液体菌种培养方法。
发明内容
为克服现有技术中不能实现工厂化培养的缺陷，本发明提出了一种简便高效、能够实现工厂化栽培的暗褐网柄牛肝菌液体培养基及制备暗褐网柄牛肝菌工厂化液体菌种的方法。该培养基原料易于收集、成本较低，且配制简单快捷，同时能够促进菌丝生长、稳定菌丝长势易于控制；该方法简单高效，实现了暗褐网柄牛肝菌工厂化液体菌种的培养。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种液体培养基，包括以下组分及含量：每1000ml水配糖蜜20～30g、蔗糖5～10g、KH2PO3 1～2g、MgSO4 1～2g、酵母浸膏1～3g，PH值为5.8～6.8。
一种培养基制备暗褐网柄牛肝菌工厂化液体菌种的方法，包括以下步骤：
步骤A：用母种培养基培养暗褐网柄牛肝菌菌丝块制备母种，包括以下步骤：
步骤a1：制备母种培养基：加入以下成分：每1000ml水配糖蜜20～30g、蔗糖5～10g、KH2PO3 1～2g、MgSO4 1～2g、酵母浸膏1～3g、琼脂粉16～20g，煮沸至琼脂完全融化，调整PH至5.8～6.8，得到母种培养基，加入试管中， 115℃～121℃灭菌20～30分钟，摆斜面，冷却；
步骤a2：取暗褐网柄牛肝菌菌丝块接种于步骤a1所制备得到的母种培养基中，置于28～30℃恒温培养25～28天，得母种；
步骤B：用所述的液体培养基培养暗褐网柄牛肝菌液体菌种，包括以下步骤：
步骤b1：制备液体菌种培养基：加入所述的一种暗褐网柄牛肝菌液体培养基的组分，搅拌均匀，调整PH值至5.8～6.8，得液体培养基；将培养基分装于三角瓶中，每瓶250～400ml，115℃灭菌30分钟，冷却后备用；
步骤b2：将液体培养基及步骤a2中培养的母种菌丝块粉碎接种于步骤b1 制备的三角瓶培养基中，在28～30℃，130～170r/min回旋式摇床中震荡培养，培养7天得液体菌种。
进一步地，所述的暗褐网柄牛肝菌菌丝块可用组织分离法分离暗褐网柄牛肝菌子实体组织块，也可用低温保藏的菌丝块。
进一步地，所述的液体培养基在暗褐网柄牛肝菌液体菌种培养和/或发酵罐发酵培养中的用途。
具体实施例
在本部分中，将对本发明的技术方案作进一步的解释和说明。需要指出的是，本实施例中仅作为解释与说明，不构成对本发明的限制，本发明的实施方式亦不限于以下一种或几种。
实施例1
一种液体培养基，包含以下成分及各成分含量如下：
一种利用所述的液体培养基制备暗褐网柄牛肝菌工厂化液体菌种的方法，包括以下步骤：
步骤A：用母种培养基培养暗褐网柄牛肝菌子实体组织块制备母种。包括以下步骤：
步骤a1：制备母种培养基。
在容器中加入以下成分：
加入之后，煮沸至琼脂完全融化，调整PH为5.8，得母种培养基，定量加入试管中，115℃灭菌30分钟，摆斜面，冷却后备用。
步骤a2：取暗褐网柄牛肝菌子实体分离组织块接种于母种培养基，置于 28℃恒温培养28天，得母种。
获取子实体分离组织块方法为现有技术中所有可实现的方法。
步骤B：用液体培养基培养液体菌种，包括以下步骤：
步骤b1：按照本实施例中提供的液体培养基的成分及含量进行配置，之后搅拌均匀，调整PH值5.8，得液体培养基；将培养基分装于三角瓶中，每瓶 250ml，115℃灭菌30分钟，冷却后备用。
步骤b2：将步骤a2中培养的母种的菌丝块连带培养基粉碎接种于步骤b1 的三角瓶培养基中，在28℃，130r/min回旋式摇床中震荡培养，培养7天得液体菌种。
实施例2
一种液体培养基，包含以下成分及各成分含量如下：
一种利用所述的暗褐网柄牛肝菌液体培养基制备暗褐网柄牛肝菌工厂化液体菌种的方法，包括以下步骤：
步骤A：用母种培养基培养保藏菌丝块制备母种，包括以下步骤：
步骤a1：制备母种培养基。在容器中加入以下成分，且各成分含量如下：
加入后煮沸至琼脂完全融化，调整PH为6.2，得母种培养基，定量加入试管中，121℃灭菌20分钟，摆斜面，待冷却即可使用。
步骤a2：取保藏菌丝块接种于母种培养基，置于29℃恒温培养26天，得母种。
步骤B：用液体培养基培养液体菌种，包括以下步骤：
步骤b1：按照本实施例中提供的液体菌种培养基的成分及含量进行配置，搅拌均匀，调整PH值至6.2，得液体培养基；将培养基分装于三角瓶中，每瓶 300ml，115℃灭菌30分钟，冷却后备用。
步骤b2：将步骤a2中培养的母种菌丝块连带培养基粉碎接种于步骤b1三角瓶培养基中，在29℃，150r/min回旋式摇床中震荡培养，培养7天得液体菌种。
实施例3
一种液体培养基，包含以下成分及各成分含量如下：
一种利用所述的暗褐网柄牛肝菌液体培养基制备暗褐网柄牛肝菌工厂化液体菌种的方法，包括以下步骤：
步骤A：用母种培养基培养保藏菌丝块制备母种，包括以下步骤：
步骤a1：制备母种培养基。在容器中加入以下成分，且各成分含量如下：
加入后煮沸至琼脂完全融化，调整PH6.8，得母种培养基，定量加入试管中，118℃灭菌25分钟，摆斜面，待冷却即可使用。
步骤a2：取暗褐网柄牛肝菌子实体分离组织块接种于母种培养基，取菌丝块接种于母种培养基，置于30℃恒温培养25天，得母种。
步骤B：用液体培养基培养液体菌种，包括以下步骤：
步骤b1：按照本实施例中提供的液体菌种培养基的成分及含量进行配置，搅拌均匀，调整PH值6.8，得液体培养基；将培养基分装于三角瓶中，每瓶 400ml，115℃灭菌30分钟，冷却后备用。
步骤b2：将步骤a2中培养的母种菌丝块连带培养基粉碎接种于步骤b1的三角瓶培养基中，在30℃，170r/min回旋式摇床中震荡培养，培养7天得液体菌种。
本发明提供的暗褐网柄牛肝菌液体菌种培养方法，与目前液体菌种培养方法比较具有以下优点：1.培养基配制简单快捷，无需处理原料，简单搅拌均匀即可；2.主料为其他产品下脚料，价格低廉；3.菌丝生长速度快，每批次间长势稳定。菌球大小一致，生长均匀，培养基无色透明，接种于发酵罐中发酵培养6天可得栽培种。
最后，还需注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。客观上，本发明不仅仅只限于以上实施例，还可以有相当一部分变化。因此，本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变化，均应当认为是本发明的保护范围，例如，原料糖蜜可以直接使用，也可以通过稀释、离心、沉淀等处理后使用。

Claims (4)

1.一种液体培养基，其特征在于，包括以下组分及含量：每1000ml水配糖蜜20～30g、蔗糖5～10g、KH2PO3 1～2g、MgSO4 1～2g、酵母浸膏1～3g，PH值为5.8～6.8。
2.采用如权利要求1所述的一种培养基制备暗褐网柄牛肝菌工厂化液体菌种的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤A：用母种培养基培养暗褐网柄牛肝菌菌丝块制备母种，包括以下步骤：
步骤a1：制备母种培养基：按照配比加入以下成分：每1000ml水配糖蜜20～30g、蔗糖5～10g、KH2PO31～2g、MgSO41～2g、酵母浸膏1～3g、琼脂粉16～20g，煮沸至琼脂完全融化，调整PH至5.8～6.8，得到母种培养基，加入试管中，115℃～121℃灭菌20～30分钟，摆斜面，冷却；
步骤a2：取暗褐网柄牛肝菌菌丝块接种于步骤a1所制备得到的母种培养基中，置于28～30℃恒温培养25～28天，得母种；
步骤B：用权利要求1所述的液体培养基培养暗褐网柄牛肝菌液体菌种，包括以下步骤：
步骤b1：制备液体菌种培养基：加入权利要求1所述的一种暗褐网柄牛肝菌液体培养基的组分及配比，搅拌均匀，调整PH值至5.8～6.8，得液体培养基；分装于三角瓶中，每瓶250～400ml，115℃灭菌30分钟，冷却后备用；
步骤b2：将液体培养基及步骤a2中培养的母种菌丝块粉碎接种于步骤b1制备的三角瓶培养基中，在28～30℃，130～170r/min回旋式摇床中震荡培养，培养7天得液体菌种。
3.如权利要求2所述的一种暗褐网柄牛肝菌液体培养基制备暗褐网柄牛肝菌工厂化液体菌种的方法，其特征在于：所述的暗褐网柄牛肝菌菌丝块可用组织分离法分离得到的暗褐网柄牛肝菌子实体组织块，也可用低温保藏的菌丝块。
4.如权利要求1所述的一种液体培养基的应用，其特征在于：所述的液体培养基用于暗褐网柄牛肝菌液体菌种培养和/或发酵罐发酵培养。
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