CN1463578A

CN1463578A - 香菇液体菌种的深层发酵培养方法及其培养基

Info

Publication number: CN1463578A
Application number: CN 02124094
Authority: CN
Inventors: 林翔鹰; 党俊梅; 刘富; 段新梅; 王玉忠; 李荣旗
Original assignee: BEIJING JINXIUDADI AGRICULTURE Co Ltd
Current assignee: BEIJING JINXIUDADI AGRICULTURE Co Ltd
Priority date: 2002-06-20
Filing date: 2002-06-20
Publication date: 2003-12-31
Anticipated expiration: 2022-06-20
Also published as: CN1322108C

Abstract

本发明香菇液体菌种的深层发酵培养方法及其培养基涉及菌种深层发酵培养方法及其培养基。本发明解决液体菌种发酵培养技术中母种繁殖时间较长，菌丝质量不高、生产菌球的时间长、菌球大小不一、生产成本较高的技术缺陷，提供一种解决上述问题的液体菌种深层发酵培养方法。该培养方法包括(1)将母种在母种培养基内进行培养；(2)将在母种培养基内培养长满试管的菌丝移种到木屑原种培养基内进行过渡培养，培养条件为：温度22－27±1℃，暗培养12－20天，待菌丝长满，(3)将木屑菌种充分打碎后立即移种到液体培养基中进行一级摇瓶的培养扩增；(4)将一级摇瓶内生长5－7天的菌液移入盛有新鲜液体培养基的二级摇瓶中进行扩增；(5)将二级摇瓶出来的菌液进行发酵处理即可得到成品香菇液体菌种。本发明涉及的培养基包括香菇母种专用培养基、木屑原种培养基和深层发酵培养基。

Description

香菇液体菌种的深层发酵培养方法及其培养基

技术领域：

本发明涉及菌种发酵培养方法，特别是香菇液体菌种的深层发酵培养方法及其培养基。

背景技术：

香菇生产一直使用固体菌种进行生产，近几年开始有人在进行液体菌种发酵培养技术的研究，但这种用于生产的菌种还存在很多问题，(1)母种的繁殖，多使用通用型培养基，没有专门用于香菇菌种的培养基，因此母种繁殖时间较长，菌丝质量不高；(2)在生产液体菌种的接种，多是用母种培养基培养的菌种直接进行一级摇瓶培养，这样生产菌球的时间长、菌球大小不一，不利于菌球的生长；(3)液体菌种所用的培养基含有大量的葡萄糖、蔗糖等成份，经济费用较高。

发明内容：

本发明克服现有香菇液体菌种发酵培养方法的不足，设计一种能培养出大小均匀适中的菌种且缩短培养时间的香菇液体菌种深层发酵培养方法。

本发明的另一目的是提供一种在香菇液体菌种培养过程中用于母种繁殖的专用母种培养基，该母种培养基能促使菌丝生长旺盛、生长时间短、菌丝强壮，菌丝质量高。

本发明的第三个目的是提供一种在香菇液体菌种培养过程中使用的木屑原种培养基，该培养基能提供生长旺盛、发菌均匀的菌丝片段。

本发明的第四个目的是提供一种在香菇液体菌种培养过程中使用的深层发酵培养基，该培养基能降低成本，利于产生高质量菌种。

本发明的技术方案为：

一种香菇液体菌种的培养方法：包括如下步骤：1、将母种在母种培养基内进行培养；2、将在母种培养基内培养长满试管的菌丝移种到木屑原种培养基内进行过渡培养，培养条件为：温度22-27±1℃，暗培养12-20天，待菌丝长满；3、将木屑菌种充分打碎后，立即移种到液体培养基中进行一级摇瓶的培养扩增；4、将一级摇瓶内生长5-7天的菌液移入盛有新鲜液体培养基的二级摇瓶中进行扩增；5、将二级摇瓶出来的菌液进行发酵处理即可得到成品香菇液体菌种。

上述木屑原种培养基为含有木屑的培养基。

上述木屑原种培养基为含有木屑、棉子壳和豆粉的培养基。

上述木屑原种培养基培养是在三角瓶内进行的。

上述木屑原种培养基原料部分的成分和重量百分比含量范围为：蔗糖0.5-1.5％，棉子壳70-75％，木屑5-10％，麦麸5-10％，豆粉2-6％，石膏粉(CaCO₃)0.5-2.5％，木屑原种培养基由上述原料与水按1∶1.2-1.4混合而得，其PH值为5.5-6.5

上述母种培养基为专用母种培养基，在原有的马铃薯培养基内加入了香菇废料浸出液，其PH值范围为5.5-6.5，其成分和重量百分比含量范围为：马铃薯10-30％，香菇废料1-5％，葡萄糖1-3％，酵母膏0.02-2％，蛋白胨0.05-0.2％，KH₂PO₄：0.05-0.2％，MgSO₄·7H₂O：0.01-0.07％，琼脂1-3％，水：60-85％。母种培养基内的培养条件为：温度20-27±1℃，黑暗培养，时间5-10天。

上述液体培养基为深层发酵培养基，其成分及其重量百分比含量范围为：酵母膏0.1-0.5％，麦麸0.5-3％，玉米粉1-5％，淀粉1-5％，石膏粉(CaCO₃)0.05-0.5％，KH₂PO₄：0.02-0.1％，MgSO₄·7H₂O：0.01-0.2％，NaCl：0.01-0.1％，维生素B1：0.0001-0.008％，琼脂0.05-0.9％，水：86-96％。采用本深层发酵培养基在一、二级摇瓶内液体菌种的培养条件为：温度25-27±1℃，振荡频率125-155转/分，培养时间3-5天，接种量和液体培养基装料系数根据所需的产物不同，分别是10-15％和100ml-150ml/500ml。采用本深层发酵培养基在发酵阶段的培养条件为：温度25-29±1℃，通气压力0.04-0.08Mpa，搅拌速度120-160转/分，频率指示20.0-26.6。时间5-7天。

技术效果：

本发明的香菇液体菌种的培养方法，在通常的液体菌种发酵培养工艺中增加了木屑原种培养基的过渡培养过程，即上述方法中的步骤2在现有技术中是没有的，该步骤由于木屑本身具有细小的间隙，香菇菌丝在该培养基内培养一段时间后再在接种时被充分打碎，就可增加大量菌丝片段，在液体培养基内形成大量发菌点，这些发菌点在合适的培养基中，就可形成大量细小均匀的有效菌丝球。因而能培养出大小均匀适中的菌种且缩短培养时间，从附图的对比图中可以看到，通过木屑原种培养基培养的菌种接种后形成大量细小的有效菌球，直径在0-2mm之间的有效菌球达90％以上，最具有活力。而直接通过母种培养基培养的菌种接种的菌球大小不一，大的菌球由于直径太大，已失去活力。

木屑原种培养基是一种加入了木屑、棉子壳、豆粉和石膏粉的培养基，木屑和棉子壳的细小间隙有利于菌丝生长，豆粉等其他营养成分的加入，可以使菌丝生长旺盛。

专用母种培养基由于是一种针对香菇液体菌种培养的专用培养基，因此在该培养基中加入了香菇废料培养物的浸出液，同时去掉了麸皮和降低了酵母膏的含量，由于在香菇废料中含有原来菌丝分解木屑多糖时所用的激素物质和含有被原菌丝分解、但没有被吸收完的多糖营养物质，故经专用母种培养基的培养，可以缩短培养时间，使菌丝生长旺盛，菌丝强壮。

深层发酵培养基与原有的液体培养基不同点，在于它不含有单糖成份(葡萄糖)，菌球生长所需的糖源来自多糖的玉米粉和淀粉，这两种物质的使用，不光降低了培养基的成本，也使菌丝生长在更接近自然的环境中，同时玉米粉和淀粉提供给菌丝生长所需的碳源。由于这种培养基在矿物质元素和琼脂含量方面进行了适当的变动，产生的产物就大不相同，所以可根据我们需要的发酵产物，来使用不同的培养基。

附图说明：

附图为采用木屑原种培养基培养的菌丝接种的菌种和直接采用母种培养基培养的菌丝接种的菌种的对比图。

具体实施方式：

实施例1：香菇液体菌种的培养方法：本实施例为较优实施例，其具体步骤是：(1)、将母种在母种培养基内进行培养：取0.5cm²见方香菇母种，接种至专用母种培养基培养，在23±1℃条件下，黑暗培养7天，进行菌种活化和继代，形成一支试管母种；本步骤的专用母种培养基配制的含量及成分为；100份专用母种培养基内含有马铃薯20份，香菇废料1.5份，葡萄糖2份，酵母膏0.05份，蛋白胨0.1份，KH₂PO₄：0.1份，MgSO₄·7H₂O：0.05份，琼脂2份，水：76.2份，按上述组分所得到的培养基的PH值为6.0；而原马铃薯培养基，酵母膏为0.25份，还有麦麸5份，本实施例的专用母种培养基增加了香菇废料1.5份，减少了酵母膏的含量，去掉了麦麸；相对于原马铃薯培养基，达到满瓶的培养时间至少可缩短2天，且母种在专用培养基上菌丝生长旺盛、菌丝强壮。(2)、将在母种培养基内培养满管的菌丝移种到木屑原种培养基内进行过渡培养：由步骤(1)所得的满瓶菌丝移种到150毫升的三角瓶中，可移栽六瓶，然后进行暗培养，温度条件为25±1℃，培养15天。木屑原种培养基原料部分的成分和重量百分比含量为：蔗糖1％，棉子壳72％，木屑10％，麦麸10％，豆粉5％，石膏粉(CaCO₃)2％，木屑原种培养基由上述原料与水按1∶1.2混合而得，其PH值为6.0；(3)一级摇瓶扩增：将上述六瓶满瓶的菌丝接种到六个500毫升的一级摇瓶，接种的同时要充分将木屑菌种打碎，使木屑菌种形成大量的菌丝碎片，增加在液体培养基中的发菌点，这些发菌点在合适的培养基中，就可形成大量细小的菌丝球，所以通过第二步木屑培养基培养的菌种在一级摇瓶中，培养三天就可见大量的均匀菌球产生，一级摇瓶的培养条件：温度25±1℃、振荡频率125转/分、接种量10％、液体培养基装料系数为100ml-150ml/500ml(三角瓶)，培养天数为3天；(4)二级摇瓶扩增：将一级摇瓶扩增后的菌丝接种到六瓶5000毫升的摇瓶中，培养条件与一级摇瓶相同；(5)将二级摇瓶出来的菌球进行深层行发酵处理，发酵过程包括种子罐和发酵罐培养两个阶段：首先将二级摇瓶出来的菌球接种到六个20L的种子罐内，然后接种到六个200L含有80％深层发酵培养基的发酵罐内，即可产生960L的香菇菌液，这些液体菌种可以接种棒重为5斤的菌棒约9600棒；种子罐和发酵罐的培养条件为：温度25±1℃、通气压力0.04Mpa-0.06Mpa，搅拌速度160转/分、频率指示26.6。上述一级摇瓶到发酵过程所使用的液体培养基均为深层发酵培养基，其成分和重量百分比含量为：100份发酵罐培养基中含酵母膏0.2份，麦麸1份，玉米粉2份，淀粉2份，石膏粉(CaCO₃)0.3份，KH₂PO₄：0.085份，MgSO₄·7H₂O：0.08份，NaCl：0.02份，维生素B1：0.005份，琼脂0.1份，其余为水。

通过液体培养基的改变，还可培养大量的菌球，通过过滤器大量提取菌球，在40-60℃的温度条件下烘干，粉碎后获得香菇菌球干粉，同时也可以直接销售培养好的培养液。

以本发明方法为基础进一步生产香菇的工艺流程，可在同一套设备上的不同阶段产生不同的产物(如香菇菌种、菌球干粉、菌棒、香菇)，为充分利用这套设备提供了可行的依据。

实施例2：实施例1中的液体培养基采用原有的香菇液体培养基，其成分和含量为：100分液体培养基中含马铃薯20份，葡萄糖2份，(NH₃)SO₄：0.2份，KH₂PO₄：0.1份，MgSO₄·7H₂O：0.05份，维生素B1：0.001份，琼脂0.05份，其余为水。本配方中不含有玉米粉和淀粉，而是含有马铃薯和葡萄糖(单糖)，因此相对实施例1成本较高。本实施例的其他步骤和条件同实施例1。

实施例3：专用母种培养基的成分和含量还可以为：100份专用母种培养基中马铃薯15份，香菇废料3份，葡萄糖1份，酵母膏0.02份，蛋白胨0.2份，KH₂PO₄：0.2份，MgSO₄·7H₂O：0.07份，琼脂2份，其余为水。

实施例4：专用母种培养基的成分和含量还可以为；100份专用母种培养基中马铃薯30份，香菇废料1.5份，葡萄糖1份，酵母膏0.2份，蛋白胨0.05份，KH₂PO₄：0.05份，MgSO₄·7H₂O：0.01份，琼脂1份，其余为水。

实施例5：专用母种培养基的成分和含量还可以为：100份专用母种培养基中马铃薯22份，香菇废料2份，葡萄糖3份，酵母膏0.1份，蛋白胨0.15份，KH₂PO₄：0.1份，MgSO₄·7H₂O：0.03份，琼脂3份，其余为水。

实施例6：木屑原种培养基原料部分的成分和重量百分比含量还可以为：蔗糖0.5％，棉子壳70％，木屑5％，麦麸10％，豆粉6％，石膏粉(CaCO₃)2.5％，木屑原种培养基由上述原料与水按1∶1.3混合而得。

实施例7：木屑原种培养基原料部分的成分和重量百分比含量还可以为：蔗糖1.5％，棉子壳75％，木屑5％，麦麸5％，豆粉2％，石膏粉(CaCO₃)0.5％，木屑原种培养基由上述原料与水按1∶1.4混合而得。

实施例8：深层发酵培养基，其成分和重量百分比含量还可以为：100分发酵罐培养基中酵母膏0.1份，麦麸0.5份，玉米粉5份，淀粉5份，石膏粉(CaCO₃)0.5份，KH₂PO₄：0.1份，MgSO₄·7H₂O：0.2份，NaCl：0.1份，维生素B1：0.008份，琼脂0.9份，其余为水。

实施例9：深层发酵培养基，其成分和重量百分比含量还可以为：100份培养基中酵母膏0.5份，麦麸3份，玉米粉1份，淀粉1份，石膏粉(CaCO₃)0.05份，KH₂PO₄：0.02份，MgSO₄·7H₂O：0.01份，NaCl：0.01份，维生素B1：0.0001份，琼脂0.05份，其余为水。

Claims

1.一种香菇液体菌种的深层发酵培养方法：其特征在于包括如下步骤：(1)、将母种在母种培养基内进行培养；(2)、将在母种培养基内培养长满试管的菌丝移种到木屑原种培养基内进行过渡培养，培养条件为：温度22-27±1℃，暗培养12-20天，待菌丝长满；(2)将木屑菌种充分打碎后立即移种到液体培养基中进行一级摇瓶的培养扩增；(4)、将一级摇瓶内生长5-7天的菌液移入盛有液体培养基的二级摇瓶中进行扩增；(5)、将二级摇瓶出来的菌液进行发酵处理即可得到成品香菇液体菌种。

2.根据权利要求1所述的香菇液体菌种的深层发酵培养方法：其特征在于所述木屑原种培养基为含有木屑的培养基。

3.根据权利要求1所述的香菇液体菌种的深层发酵培养方法：其特征在于所述木屑原种培养基为含有木屑、棉子壳和豆粉的培养基。

4.根据权利要求1所述的香菇液体菌种的深层发酵培养方法：其特征在于所述木屑原种培养基培养是在三角瓶内进行的。

5.权利要求1-4之一所述的香菇液体菌种的深层发酵培养方法所涉及的木屑原种培养基，其特征在于该培养基原料部分的成分和重量百分比含量范围为：蔗糖0.5-1.5％，棉子壳70-75％，木屑5-10％，麦麸5-10％，豆粉2-6％，石膏粉(CaCO₃)0.5-2.5％，木屑原种培养基由上述原料与水按1∶1.2-1.4混合而得，其PH值为5.5-6.5

6.权利要求1-4之一所述的香菇液体菌种的深层发酵培养方法所涉及的母种培养基为专用母种培养基，其特征在于该培养基在原有的马铃薯培养基内加入了香菇废料浸出液，其PH值范围为5.5-6.5，该培养基成分和重量百分比含量范围为：马铃薯10-30％，香菇废料1-5％，葡萄糖1-3％，酵母膏0.02-2％，蛋白胨0.05-0.2％，KH₂PO₄：0.05-0.2％，MgSO₄·7H₂O：0.01-0.07％，琼脂1-3％，水：60-85％。母种培养基内的培养条件为：温度20-27±1℃，黑暗培养，时间5-10天。

7.权利要求1-4之一所述的香菇液体菌种的深层发酵培养方法所涉及的液体培养基为深层发酵培养基，该培养基成分和重量百分比含量范围为：酵母膏0.1-0.5％，麦麸0.5-3％，玉米粉1-5％，淀粉1-5％，石膏粉(CaCO₃)0.05-0.5％，KH₂PO₄：0.02-0.1％，MgSO₄·7H₂O：0.01-0.2％，NaCl：0.01-0.1％，维生素B1：0.0001-0.008％，琼脂0.05-0.9％，水：86-96％。

8.根据权利要求7所述的深层发酵培养基，其特征在于采用本深层发酵培养基在一、二级摇瓶内液体菌种的培养条件为：温度25-27±1℃，振荡频率125-155转/分，培养时间3-5天，接种量和液体培养基装料系数根据所需的产物不同，分别是10-15％和100ml-150ml/500ml。

9.根据权利要求7所述的深层发酵培养基，其特征在于采用本深层发酵培养基在发酵阶段的培养条件为：温度25-29±1℃，通气压力0.04-0.08Mpa，搅拌速度120-160转/分，频率指示20.0-26.6。时间5-7天。