KR20100119996A - 혈관신생 및 암의 성장을 억제하는 카나비노이드 유도체를 함유하는 약학조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 화학식 1로 표시되는 카나비노이드 유도체를 유효성분으로 함유하는 혈관신생으로 인한 질환 및 암 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물에 관한 것으로, 화학식 1로 표시되는 카나비노이드 유도체는 융모요막 모델에서의 신생혈관형성 억제 및 암세포 생장 억제 효과가 탁월하여, 암질환 및 혈관신생으로 인한 질환의 예방 및 치료용 약학조성물로 사용할 수 있다.

카나비노이드 유도체, 혈관신생, 암질환

Description

혈관신생 및 암의 성장을 억제하는 카나비노이드 유도체를 함유하는 약학조성물{Pharmaceutical composition comprising cannabinoids having anti-angiogenic activity and cancer growth inhibitory activity}

본 발명은 혈관신생억제활성 및 암의 성장 억제 활성을 갖는 카나비노이드 유도체를 유효성분으로 함유하는 약학조성물에 관한 것이다.

혈관신생(angiogenesis)이란 기존의 미세혈관으로부터 새로운 모세혈관이 형성되는 과정이다. 혈관신생이 정상적으로 일어나는 경우는 배아 발생(embryonic development), 조직재생 및 상처치료, 주기적인 여성의 생식기 계통의 변화인 황체가 발달될 때이며 이러한 경우에도 엄격히 조절되어 진행된다(Folkman J et al., Int. Rev. Exp. Pathol., 16, pp207-248, 1976).

성인의 경우 혈관내피세포는 매우 느리게 자라며, 다른 종류의 세포에 비하여 상대적으로 잘 분열하지 않는다. 혈관신생이 일어나는 과정은 일반적으로 혈관신생 촉진인자의 자극에 의하여 프로테아제로 인한 혈관 기저막의 분해, 혈관 내피세포의 이동, 증식 및 혈관 내피세포 분화에 의한 관강의 형성으로 혈관이 재구성되어 새로운 모세혈관이 생성되는 것으로 이루어진다.

그러나 혈관신생이 자율적으로 조절되지 못하고 병적으로 성장함으로써 야기되는 질환들이 있다. 병리학적 상태에서 나타나는 혈관신생에 관련된 질환으로는 혈관종, 혈관섬유종, 혈관기형 및 심혈관 질환인 동맥경화, 혈관유착, 부종성 경화증이 있고, 혈관신생에 의한 안과 질환으로는 각막이식성 혈관신생, 혈관신생성 녹내장, 당뇨병성 망막증, 신생혈관에 의한 각막 질환, 반점의 변성, 익상편, 망막 변성, 후수정체 섬유 증식증, 과립성 결막염 등이 있다. 관절염과 같은 만성 염증성 질환, 건선, 모세관 확장증, 화농성 육아종, 지루성 피부염, 여드름과 같은 피부과 질환, 알츠하이머 및 비만도 혈관신생과 관련이 있으며, 암의 성장과 전이는 반드시 혈관신생에 의존한다(D'Amato RJ et al., Ophthalmology, 102(9), pp1261-1262, 1995; Arbiser JL, J. Am. Acad. Dermatol., 34(3), pp486-497, 1996; O'Brien KD et al. Circulation, 93(4), pp672-682, 1996; Hanahan D et al., Cell, 86, pp353-364, 1996).

특히 암의 경우 혈관신생은 암세포의 성장과 전이에 중요한 역할을 한다. 종양은 신생혈관을 통하여 성장과 증식에 필요한 영양과 산소를 공급받으며, 또한 종양까지 침투한 신생 혈관들은 전이하는 암세포가 혈액순환계로 들어가는 기회를 줌으로써 암세포가 전이(metastasis) 되도록 한다(Folkman and Tyler, Cancer Invasion and metastasis, Biologic mechanisms and Therapy(S.B. Day ed.) Raven press, New York, pp94-103, 1977; Polverini PJ, Crit. Rev. Oral. Biol. Med., 6(3), pp230-247, 1995). 암 환자가 사망하는 주원인은 전이이며, 현재 임상에서 사용되는 화학요법이나 면역요법들이 암 환자의 생존율을 높이는데 기여하지 못하 고 있는 것은 바로 암의 전이 때문이다.

염증성 질환의 대표적인 질환인 관절염은 자가면역 이상이 원인이지만, 병이 진행되면서 관절 사이의 활액강에 생긴 만성 염증이 혈관신생을 유도하여 연골이 파괴된다. 즉, 염증을 유도하는 사이토카인의 도움으로 활액세포와 혈관내피세포가 활액강에서 증식을 하여 혈관신생이 진행되면서 연골부에 발생하는 결합조직층인 관절 판누스를 형성하여 쿠션 역할을 하는 연골이 파괴된다(Koch AE et al., Arthritis. Rheum., 29, pp471-479, 1986; Stupack DG et al., Braz J. Med. Biol. Rcs., 32(5), pp578-581, 1999; Koch AE, Atrhritis. Rheum., 41(6), pp951-962, 1998).

해마다 전 세계적으로 수백만 명이 실명하게 되는 많은 안과질환도 혈관신생이 원인이 되고 있다(Jeffrey MI et al., J. Clin. Invest., 103, pp1231-1236, 1999). 그 대표적인 예로 노인에게 일어나는 퇴화반 (macular degeneration), 당뇨병성 망막증 (diabetic retinopathy), 조숙아의 망막증, 신생혈관성 녹내장과 신생혈관에 의한 각막 질환과 같은 질병은 혈관신생이 원인이 되는 질병들이다(Adamis AP et al., Angiogenesis, 3, pp9-14, 1999). 그 중 당뇨병성 망막증은 당뇨병의 합병증으로 망막에 있는 모세혈관이 초자체를 침습하여 결국 눈이 멀게 되는 질병이다.

붉은 반점과 인설의 피부가 특징인 건선도 피부에 생기는 만성의 증식성 질환인데 치유되지 않으며 고통과 기형을 수반한다. 정상인 경우 각질세포가 한달에 한번 증식하는데 비해 건선 환자는 적어도 일주일에 한번 증식한다. 이런 빠른 증 식을 하기 위해서는 많은 혈액이 공급되어야 하므로 혈관신생이 활발히 일어날 수밖에 없다 (Folkman J, J. Invest. Dermatol., 59, pp40-48, 1972).

혈관 신생 억제제를 이러한 각종 혈관신생 관련 질환의 치료제로 적용할 수 있으므로, 최근에 혈관신생을 억제시켜서 상기 질환들을 치료하려는 연구가 활발히 진행되고 있다. 이와 같은 혈관신생 억제제는 보통 환자에게 장기적으로 투여하여야 하기 때문에 독성이 적고 경구투여가 가능한 것이어야 가장 이상적인 치료제로 사용할 수 있다. 따라서 혈관신생 억제제로서 독성이 미비한 약제의 개발이 요구되어지고 있다.

이에, 본 발명자들은 본 발명의 카나비노이드 유도체가 우수한 혈관신생억제 및 암세포 성장 억제 효과를 가짐을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 카나비노이드 유도체를 유효성분으로 함유하는 혈관신생으로 인한 질환 및 암질환의 예방 및 치료를 위한 약학조성물을 제공하는 데에 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 카나비노이드 유도체 및 약학적으로 허용되는 담체를 함유하는 혈관신생으로 인한 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물을 제공한다:

[화학식 1]

상기 화학식 1에 있어서, R₁ 및 R₂는 각각 수소, C1-C10의 알킬카르보닐 또는 C1-C10의 알킬에서 선택된 어느 하나이다.

보다 바람직하게는, 상기 카나비노이드 유도체는 하기 화학식 2로 표시되는 화합물 즉, 3,6,6,9-테트라메틸-6a,7,8,9,10,10a-헥사하이드로-6H-벤조[c]크로멘- 1-올(3,6,6,9-tetramethyl-6a,7,8,9,10,10a-hexahydro-6H-benzo[c]chromen-1-ol) 또는 화학식 3으로 표시되는 화합물 즉, (1-하이드록시-6,6,9-트리메틸-6a,7,8,9,10,10a-헥사하이드로-6H-벤조[c]크로멘-2-일)에탄논[(1-hydroxy-6,6,9-trimethyl-6a,7,8,9,10,10a-hexahydro-6H-benzo[c]chromen-2-yl)ethanone] 중 어느 하나이다:

[화학식 2]

[화학식 3]

상기 혈관신생으로 인한 질환은 류마티스성 관절염, 골관절염, 패혈증성 관절염, 건선, 각막궤양, 노화와 관련된 황반 변성, 당뇨성 망막병증, 증식성 유리체 망막병증, 미성숙 망막병증, 안과 염증, 원추 각막, 쇼그렌 증후군, 근시 안과종양, 각막이식 거부, 이상 창상 유합, 골질환, 단백뇨증, 복대동맥류 질환, 외상성 관절 손상에 따른 퇴행성 연골손실, 신경계의 수초탈락 질환, 간경변, 신사구체 질환, 배태막의 미성숙 파열, 염증성 장질환, 치근막 질환, 동맥경화증, 재협착증, 중추신경계의 염증질환, 알츠하이머 질환, 피부노화 및 암의 침윤과 전이로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나이다.

또한, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 카나비노이드 유도체 및 약학적으로 허용되는 담체를 함유하는 암질환의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

보다 바람직하게는, 상기 카나비노이드 유도체는 화학식 2로 표시되는 화합물 즉, 3,6,6,9-테트라메틸-6a,7,8,9,10,10a-헥사하이드로-6H-벤조[c]크로멘-1-올(3,6,6,9-tetramethyl-6a,7,8,9,10,10a-hexahydro-6H-benzo[c]chromen-1-ol) 또는 화학식 3으로 표시되는 화합물 즉, (1-하이드록시-6,6,9-트리메틸-6a,7,8,9,10,10a-헥사하이드로-6H-벤조[c]크로멘-2-일)에탄논[(1-hydroxy-6,6,9-trimethyl-6a,7,8,9,10,10a-hexahydro-6H-benzo[c]chromen-2-yl)ethanone] 중 어느 하나이다.

상기 암질환은 폐암, 비소세포성폐암, 결장암, 골암, 췌장암, 피부암, 두부 또는 경부 암, 피부 또는 안구내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 위암, 항문부근암, 결장암, 유방암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병(Hodgkin's disease), 식도암, 소장암, 내분비선암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 방광암, 신장 또는 수뇨관 암, 신장세포 암종, 신장골반 암종, 중추신경계(CNS; central nervous system) 종양, 1차 CNS 림프종, 척수 종양, 뇌간 신경교종 및 뇌하수체 선종으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나이다.

본 발명의 카나비노이드 유도체는 닭의 융모요막 모델에서 혈관내피성장인자 와 같은 신생혈관형성 유도물질의 처리에 따른 신생혈관형성 증가를 억제하였으며, 융모요막에 암세포의 이식함으로 활성된 신생혈관형성 또한 억제하였으므로, 혈관신생으로 인한 질환의 예방 및 치료를 위한 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 카나비노이드 유도체는 NAG-1 유도를 통해 인간 대장암 세포의 아팝토시스를 유도함으로써 암질환의 예방 및 치료를 위한 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 카나비노이드 유도체를 포함하는 약학조성물의 적용량 및 적용방법은 제형 및 사용목적에 따라 다를 수 있다.

본 발명의 카나비노이드 유도체를 포함하는 약학조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 카나비노이드 유도체를 0.1 내지 50 중량 %로 포함한다.

또한, 본 발명의 카나비노이드 유도체를 포함하는 약학조성물은 약학조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

이러한 담체, 부형제 및 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

본 발명의 카나비노이드 유도체를 포함하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구 형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물은 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제한다.

또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 카나비노이드 유도체의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 0.1 내지 100 mg/㎏의 양을 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다. 또한 그 화합물의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위 를 한정하는 것은 아니다.

상기 약학조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명에 따른 카나비노이드 유도체는 닭의 융모요막 모델에서 혈관내피성장인자와 같은 신생혈관형성 유도물질의 처리에 따른 신생혈관형성 증가를 억제하며, 융모요막에 암세포의 이식함으로 활성된 신생혈관형성 또한 억제하므로, 혈관신생으로 인한 질환의 예방 및 치료를 위한 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 카나비노이드 유도체는 NAG-1 유도를 통해 인간 대장암 세포의 아팝토시스를 유도함으로써 암질환의 예방 및 치료를 위한 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

이하, 하기 실시예를 통해 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 다만, 이러한 실시예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 화학식 1의 화합물(HHC-7) 제조

오르시놀(orcinol; 124mg, 1mmol)과 알데히드로서 시트로넬랄(citronellal; 308 mg, 2mmol)을 사용하며, 촉매로서 EDDA(36mg, 0.2mmol)/TEA (2mL) 혼합촉매를 사용하여, 24시간 자일렌 환류조건에서 반응시켜 HHC-7(182 mg, 70%)을 제조하였 다.

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 6.26 (1H, s), 6.08 (1H, s), 5.67 (1H, s), 3.09 (1H, br d, J= 12.6 Hz), 2.51-2.43 (1H, m), 2.16 (3H, s), 1.86-1.83 (2H, m), 1.73-1.59 (3H, m), 1.49-1.42 (1H, m), 1.38 (3H, s), 1.14-1.10 (1H, m), 1.07 (3H, s), 0.94 (3H, d, J= 6.6 Hz);

¹³C NMR (CDCl₃, 75 MHz) δ 154.9, 154.7, 137.2, 110.5, 110.2, 108.5, 77.1, 49.1, 38.8, 35.4, 35.3, 32.7, 27.9, 27.4, 22.5, 20.9, 18.7;

IR (neat) 3387, 2922, 1624, 1580, 1510, 1454, 1332, 1267, 1188, 1138, 1115, 1086, 1057, 1001, 821, 740 cm^-1.

<실시예 2> 화학식 2의 화합물(HHC-8) 제조

2,4-디하이드록시아세토페논(152mg, 1mmol)과 알데히드로서 시트로넬랄(citronellal; 308 mg, 2mmol)을 사용하며, 촉매로서 EDDA(36mg, 0.2mmol) /TEA (2mL) 혼합촉매를 사용하여, 16시간 자일렌 환류조건에서 반응시켜 HHC-8(219 mg, 76%)을 제조하였다.

¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ13.5 (1H, s), 7.43 (1H, d, J= 8.9 Hz), 6.27 (1H, d, J= 8.9 Hz), 3.17 (1H, br d, J= 12.6 Hz), 2.57-2.48 (1H, m), 2.49 (3H, s), 1.85-1.78 (2H, m), 1.65-1.57 (3H, m), 1.49-1.42 (1H, m), 1.37 (3H, s), 1.14-1.04 (1H, m), 1.04 (3H, s), 0.91 (3H, d, J= 6.6 Hz);

¹³C NMR (CDCl₃, 75 MHz) δ 202.6, 164.2, 160.9, 129.8, 112.9, 112.8, 109.4, 78.6, 48.6, 38.1, 35.4, 34.9, 32.6, 27.8, 27.4, 26.1, 22.4, 19.1;

IR (neat) 2922, 1620, 1487, 1414, 1372, 1331, 1260, 1211, 1144, 1067, 912, 882, 847, 802 cm^-1.

<참고예 1> 실험준비 및 세포배양

1. 시약 및 기기 준비

유정란은 영남대학교 부속목장 (경산,한국)에서 구입하여 사용하였으며, 인간 대장암 세포인 HCT116 세포와 HT-29 세포, 인간 유방암 세포인 MCF-7 세포는 ATCC (Rockville, MD, USA)에서 구입하였다.

2-피리딘카르복스알데히드(2-carboxaldehyde)와 2-아세틸퓨란(2-acetylfuran) 및 코티존 아세테이트(cortisone acetate)는 알드리치사(Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA)에서 구입하였으며, 섬유아세포증식인자(FGF, fibroblast growth factor)는 인비트로젠(Invitrogen, USA)에서 구입하였으며, 혈관내피성장인자(VEGF, vascular endothelial growth factor)는 알앤디(R&D systems, Minneapolis, MN, USA)로부터 구입하였으며, Tetrac과 XT199는 알바니 약학대학 약학연구소로부터 제공받았으며, 와트만 필터 디스크(whatman filter disc)는 와트만사(Whatman, UK)로부터 구입하였다.

합성된 물질의 구조 규명에는 Bruker AMX 250 MHz 모델을 사용하여 1H-NMR 스펙트라(spectra)를 얻었으며, 액체크로마토그래피/질량분석기(LC/Mass Spectrometry)는 피니간 LCQ 어드벤티지(Finnigan LCQ Advantage) LC/MS/MS 분광계(spectrometry)를 엑스칼리버(Xcalibur) 프로그램을 이용하여 분석하였다. TLC(Thin-layer chromatography)와 컬럼 크로마토그래피(column chromatography)는 머크사(Merck)의 실리카겔 키젤겔(Silicagel Kieselgel) 60 F254 (230 - 240 mesh)를 사용하였다.

2. 세포 배양

인간 대장암 세포인 HCT116 세포와 HT-29 세포, 인간 유방암 세포인 MCF-7 세포는 미국 타이프 컬처 콜렉션(ATCC, Rockville, MA)에서 구입한 것을 사용하였다. 세포를 10% 우태아혈청(fetal bovine serum, GIBCO)를 포함하는 RPMI 1640(Sigma Chemical CO.) 배지조건, 37℃의 온도, 5 % CO₂/ 95 % 공기 조건의 가습 배양기에서 배양하였다. 이때, 배양 배지는 하루걸러 한번씩 교체하여 주었다. 컨플루언트 (confluent)하게 성장시킨 후, 트립신 (trypsin) 처리하여 2차 배양 (subculture)하였다.

<실험예 1> 세포독성 실험

세포 생존률을 측정하기 위하여 인간 대장암 세포인 HCT116 세포와 HT-29 세포를 10% 우태아혈청(fetal bovine serum, GIBCO)를 포함하는 RPMI 1640(Sigma Chemical CO.) 배지조건, 37 ℃의 온도, 5 % CO₂/ 95 % 공기 조건의 가습 배양기에서 배양하였다.

이때, 배양배지는 하루걸러 한번씩 교체하여 주었다. 컨플루언트 (confluent)하게 성장시킨 후, 0.25% 트립신-EDTA 용액으로 트립신(trypsin) 처리하여 2차 배양 (subculture)하였다.

상기와 같이 4 내지 5일 배양한 후, 24웰 플레이트에 5X10⁴ 세포/웰의 밀도로 분주하였고, 각 웰의 배지 용량은 1 ㎖로 맞추었다. 그후 실시예 1 및 실시예 2의 화합물을 각각 0.1, 1, 5, 10, 20, 50, 100 μM 농도로 처리하여 24시간 동안 배양한 후, 100㎕의 MTT[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide ; 5 g MTT/ℓin H₂O]를 첨가한 후 4시간 더 세포를 배양하였다.

그후, 각각의 세포가 포함된 웰에 디메틸술폭사이드(DMSO) 200 ㎕를 첨가하고 환원된 MTT 결정을 용해하기 위하여 피펫으로 혼합하였다. 상대적인 세포 생존률을 540 nm 필터를 가진 마이크로플레이트 리더 (Molecular Devices, Menlo Park, CA)로 스캐닝하여 측정하였다.

그 결과, 도 1에 도시된 바와 같이, 세포독성은 크지 않았다.

<실험예 2> 아팝토시스 유도 검토(유세포 분석)

인간 대장암 세포인 HCT116 세포와 HT-29 세포를 6 웰 플레이트에 5Ⅹ10⁴ 세포/웰의 밀도로 접종하여 24시간 배양한 후에 각 웰에 실시예 2의 화합물(10μM)을 시간별로 전처리하였다. 0.25% trypsin-EDTA 용액을 이용하여 세포를 모아 70% 에탄올에 고정시켜 4℃에서 overnight시켰다. 고정된 세포를 모아서 PBS로 1회 씻은 다음 100 μg/ml의 RNaes A 250μl를 37℃에서 30분간 반응시켰다. 반응후에 Propidium Iodide (1g/l)을 250μl 첨가하여 37℃에서 30분간 반응하여 여과한 다음 PI-DNA 복합체에서 방출되는 형광을 유세포 분석기 (FACScan cytometer ; Becton Dickinson 사, USA)를 이용하여 세포 사멸능을 측정하였다.

그 결과, 도 2a 내지 도 2c와 같이 실시예 2의 화합물은 아팝토시스를 유도하였다.

<실험예 3> p53 및 NAG-1 발현 유도 검토

인간 대장암 세포인 HCT116 세포와 HT-29 세포를 100 mm dish에 5Ⅹ10⁴ 세포/웰의 농도로 접종하여 24시간 배양한 후 실시예 2의 화합물(10μM) 및 술린닥 설파이드(sulindac sulfide; SS)로 처리한 후, 0.25% trypsin-EDTA 용액을 이용하여 세포를 수확하여 웨스턴 블롯을 통해 p53 및 NAG-1의 단백질 발현을 분석하였다.

전체 단백질 추출물은 lysis buffer (10 mM Tris pH 7.6, 10 mM EDTA, 150 mM NaCl, 0.1% NP-40, 2mM DTT, 1 mM PMSF, 0.7 μg/ml pepstatin A, 10 μg/ml Leupeptin, 1 μg/ml aprotinin)을 첨가하여 40분간 반응한 후 12,000 rpm에 10분간 원심분리하여 상청액을 획득하였다.

핵내의 단백질 추출물은 NE-PER kit (Pierce, Rockford, IL, USA)를 이용하여 추출하고 12,000 rpm에 10분간 원심분리하여 상청액을 얻었다. 각 추출물의 단백질량은 BCA protein assay kit (Pierce, Rockford, IL, USA)를 이용하여 정량하였으며, 소 혈청 알부민(BSA)을 표준단백으로 사용하였다.

위의 단백질 추출물을 12% SDS-PAGE을 이용하여 전기영동을 실시하였다. 전 기영동한 겔을 Hybond ECL nitrocellulose membrane (GE Healthcare, Little Chalfont, Buckinghamshire, UK)로 transfer한 다음 membrane은 Tris-buffered saline (TBS)-Tween-20 (TBST)에 5% skim milk로 1 시간 blocking하고, specific primary antibody는 TBS-5% skim milk에 희석하여 4℃에서 overnight하였다.

TBST로 세 번씩 5분간 washing하고 secondary antibody를 TBS-5% skim milk에 희석하여 실온에서 1시간 반응시킨 다음 TBST로 세 번씩 10분간 washing하고 ECL kit (Thermao scientific, IL, USA)를 이용하여 단백질을 확인하였다.

그 결과, 도 3a 및 도 3b와 같이 실시예 2의 화합물은 농도의존적으로 p53 및 NAG-1의 단백질 발현을 유도하였다.

또한, NAG-1 mRNA의 발현을 RT-PCR에 의해 분석하였다. 먼저, 실시예 2의 화합물을 전처리한 HCT116 세포와 HT-29 세포에 TNF-α(10ng/ml)의 자극을 3시간 가한 후 HCT116 세포와 HT-29 세포를 트리졸 용액(Invitrogen, Carlsbad, CA)을 이용하여 전령 RNA를 추출하였다.

mRNA 농도는 UV-Visible spectrophotometer 기기 (Shimadzu, Japan)를 이용하여 결정하였고, Ready-To-Go T-Primed First Strand Kit(Amersham Biosciences, USA)를 이용하여 37℃에서 1시간 동안 역전사하였다.

RT-PCR은 0.5U Taq DNA 폴리머라아제(TaKaRa, Japan)의 존재 하에 인간 MCP-1 및 IL-8 각각에 특이적인 프라이머 세트를 이용하여 수행하였다. 모든 유전자의 mRNA 양은 글리세르알데히드-3-포스페이트 디히드로게나아제(GAPDH)를 내부 대조군(Qiagen)으로 이용하여 표준화하였다.

이때, NAG-1의 mRNA 발현을 위한 RT-PCR은 94℃에서 4분 동안(1회 주기); 94℃에서 60초 동안, 58℃에서 60초 동안, 72℃에서 60초 동안(35회 주기); 및 마지막으로 72℃에서 10분 동안 반응시켰고, 사용된 프라이머는 각각 서열번호 1 및 2와 같다.

또한, GAPDH 유전자의 발현을 위한 RT-PCR은 94℃에서 4분 동안(1회 주기); 94℃에서 45초 동안, 58℃에서 45초 동안, 72℃에서 45초 동안(30회 주기); 및 마지막으로 72℃에서 10분 동안 반응시켰고, 사용된 프라이머는 각각 서열번호 3 및 4와 같다.

얻어진 PCR 산물은 2% 아가로오즈겔 전기영동에서 분리되고, 0.5㎍/ml의 에티듐 브로마이드로 염색되어 시각화되며, 겔분석기(gel documentation system; UVP, Cambridge, UK)를 이용하여 UV 광선 하에서 촬영되었다. 그 결과, 도 3c와 같이 RT-PCR에 의해 분석한 NAG-1 mRNA 발현 역시 실시예 2의 화합물이 농도의존적으로 유도하였다.

<실험예 4> p53 및 NAG-1 발현 유도 검토

p53 및 NAG-1 발현 유도 검토에 사용한 특이적 프라이머는 인간 NAG-1(서열번호 1: sense 5'-ACT CCG AAG ACT CCA GAT TCC GA-3'; 서열번호 2: antisense 5'-ATG CAC ATG GTC ACT TGC ACC T-3') 및 인간 GAPDH(서열번호 3: sense 5'-GGT GAA GGT CGG AGT CAA CG-3'; 서열번호 4: antisense 5'-CAA AGT TGT CAT GGA TGA CC-3')이었다.

또한, 안티센스 올리고데옥시뉴클레오타이드는 Bioneer Co.(Korea)에서 합성 된 것으로, p53 안티센스 올리고뉴클레오타이드(서열번호 5: 5'-CGGCTCCTCCATGGCAGT-3') 및 랜덤 올리고뉴클레오타이드(서열번호 6: 5'-CCGGTGAACGAGCGAGCACA-3')를 사용하였다.

위의 올리고뉴클레오타이드를 인간 대장암 세포인 HCT116 세포와 HT-29 세포의 transfection에 이용하였다. 즉, 올리고뉴클레오타이드와 Genejammer transfection reagent를 1:2.5의 비율로 혼합한 액을 최종농도가 400nM이 되도록 하여 충분히 자란 세포에 첨가하여 5시간 반응하였다.

그 이후에 transfection mixture을 제거하지 않은 상태에서 20% FBS 가 포함된 배지를 첨가하여 24시간 배양하여 형질감염시켰다.

p53 안티센스 올리고데옥시뉴클레오타이드(p53 AS oligo) 또는 무작위 올리고데옥시뉴클레오타이드(RD oligo)로 형질감염이 된 웰에 실시예 2의 화합물(10μM)을 48시간 동안 처리하였다. p53 및 NAG-1 단백질 발현을 웨스턴 블롯을 통해 분석하였고, MTT 분석을 통해 세포 생존율을 검토하였다.

그 결과, 도 4a 및 도 4b와 같이 p53의 저해가 HCT116 세포와 HT-29 세포에서 NAG-1의 하향 조절을 통해 세포사를 유도하였다.

<실험예 5> CAM 분석을 통한 혈관신생 억제효과 검토

생체내 시험상(in vivo)에서의 항혈관신생효과를 확인하기 위하여, 융모요막(chorioallantoic membrane, CAM) 분석을 실시하였다(Nguyen M et al., Microvascular Res., 47, pp31-40, 1994).

닭의 유정란을 온도 37℃, 상대습도 55%를 유지해주면서 배양시켜 10일째에 기낭(air sac) 부위에 피하주사침 (hypodermic needle, 녹십자의료공업, 한국)을 이용하여 첫 번째 작은 구멍을 뚫고, 창(window)을 낼 유정란의 평평한 부위에 두 번째 구멍을 뚫었다.

첫 번째 구멍인 기낭 부위의 구멍을 통해 공기를 빼냄으로써, 융모요막 (CAM)이 유정란의 껍질로부터 분리가 되게 하여 이 부위를 회전연마기(grinding wheel, Multipro 395JA, Dremel, Mexico)로 절단하여 창을 만들었다.

다음으로, 와트만 필터 디스크(whatman filter disk #1, whatman사, USA)에 코티존 아세테이트(cortisone acetate) 3 ㎎/㎖을 처리하여 건조시킨 후 혈관내피성장인자(VEGF)는 20 ng/CAM의 농도로 적셔두었다.

만들어 둔 창을 통해 필터 디스크를 혈관 위에 얹고, 실시예 1 및 실시예 2의 화합물을 디메틸술폭사이드(DMSO)로 녹여 인산완충용액(PBS)으로 희석하여 각 농도별(0.5, 1, 5㎍/CAM)로 처리하였다.

약물처리 3일 뒤, 필터 디스크가 얹힌 CAM 부분을 떼어내어 인산완충용액을 이용하여 씻어준 후, 입체현미경(Stemi SV6 stereomicroscope, Carl Zeiss, Germany)과 Image-Pro Plus software(Media Cybernetics; Silver Spring, MD, USA)를 이용하여 이미지를 촬영하여 혈관 가지의 개수를 측정하고 자료를 분석하였다.

그 결과, 도 5a 및 도 5b에 도시된 바와 같이, VEGF로 유도된 신생혈관형성 증가가 본 발명에 따른 화합물 처리로 인해 농도의존적으로 감소되었다.

<실험예 6> HUVEC 세포에서 VEGF-유도성 증식 억제 효과 검토

HUVEC 세포는 0.2%의 젤라틴(gelatin)이 코팅된 플라스크에서 배양되었다. 상기 HUVEC 세포는 EBM-2(Endothelial Cell Basal Medium-2, Clonetics, San Diego, CA) 배지에서 배양하였다.

이러한 EBM-2 배지는 우태아혈청(FBS), 하이드로코르티손 (hydrocortisone), hFGF-B(Human Basic Fibroblast Growth Factor), 혈관내피성장인자(VEGF, vascular endothelial growth factor), R3-IGF-1(human recombinant insulin-like growth factor), 아스코르브산(ascorbic acid), hEGF(human epidermal growth factor), GA-1000 및 헤파린(heparin)을 포함하였다.

HUVEC 세포를 4 내지 5일 배양하여 24웰 플레이트에 5ㅧ10⁴ 세포/웰의 밀도로 분주하였고, 각 웰의 배지 용량은 1 ㎖로 맞추었다. 그 후 실시예 1 및 실시예 2의 화합물을 각각 0.1, 1, 5, 10 μM 농도로 처리하여 48시간 동안 배양한 후, 100㎕의 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide; 5g MTT/ℓin H₂O)를 첨가한 후 4시간 더 세포를 배양하였다.

그 후, 각각의 세포가 포함된 웰에 디메틸술폭사이드(DMSO) 200 ㎕를 첨가하고 환원된 MTT 결정을 용해하기 위하여 피펫으로 혼합하였다. 상대적인 세포 생존률을 540 nm 필터를 가진 마이크로플레이트 리더(Molecular Devices, Menlo Park, CA)로 스캐닝하여 측정하였다.

도 6a에 도시된 바와 같이, 본 발명의 화합물은 VEGF-유도성 세포 증식을 농도의존적으로 감소시켰다.

<실험예 7> HUVEC 세포에서의 주화성 이동 억제효과 검토

본 발명의 화합물의 주화성 이동(chemostatic migration) 억제효과를 알아보기 위하여, in vitro에서 HUVEC 세포를 이용하여 실험하였다(Mi-Sung Kim et al., Cancer Research, 63, 5454-5461, 2003 Sang-Oh Yoon et al., The journal of Biological chemistry, 276, 20085-20092, 2001; Sonia Zorzet et al., The journal of pharmacology and experimental therapeutics, 295, 927-933, 2000). 여기서 사용된 배양 플레이트는 다수의 8 mm 크기의 구멍(pore)을 갖는 폴리카보네이트(polycarbonate) 필터를 포함하는 24웰 플레이트(Corning Costar, Cambridge, MA)를 사용하였다.

상기 폴리카보네이트 필터의 하면을 0.5㎎/㎖ 농도의 제1형 콜라겐(type Ⅰ collagen) 20ℓ로 코팅하였으며, 그 상면은 1.5㎎/㎖ 농도의 Matrigel(BD biosciences, Bedford, MA) 20ℓ로 코팅하였다.

여기서, 폴리카보네이트 필터의 하부 영역은 10% FBS를 함유한 배지로 채웠으며, HUVEC 세포는 폴리카보네이트 필터의 상부에 접종하였다. 이때, 실시예 1 및 실시예 2의 화합물을 디메틸술폭사이드(DMSO)로 녹여 인산완충용액(PBS)으로 희석하여 각각 농도별(1, 10μM)로 4시간 동안 처리하였다.

이렇게 접종된 HUVEC 세포를 37℃에서 18시간 동안 배양한 다음 폴리카보네이트 필터의 하면에 침투된 세포를 메탄올(methanol)로 고정(fix)하고, 헤마톡시린(hematoxylin)과 에오신(eosin)으로 염색하였다.

그 결과, 도 6b와 같이 본 발명의 화합물은 VEGF-유도성 주화성 이동을 농도의존적으로 감소시켰다.

<실험예 8> HUVEC 세포에서의 혈관형성 억제효과 검토

HUVEC 세포에서 본 발명의 화합물이 혈관형성에 미치는 효과를 알아보기 위하여 48-웰 플레이트에 HUVEC 세포를 배양시켰다. 여기서 48-웰 플레이트(96-well plate)의 각 웰에 40㎕의 Matrigel(BD biosciences, Bedford, MA)을 코팅한 다음, 96-웰 플레이트를 37℃에서 30분 동안 보관한 후 사용하였다.

HUVEC 세포는 2%의 우태아혈청을 포함하는 EBM-2(Endothelial Cell Basal Medium-2, Clonetics, San Diego, CA) 배지에 혼탁시켰다. 이러한 HUVEC 세포는 상기 matrigel이 코팅된 각 웰에 1X10⁴개의 세포가 주입되도록 하였다.

그 다음으로, 각각 다른 농도의 본 발명의 화합물을 각 웰에 첨가하고 14시간 동안 유지하였다. 이렇게 처리된 HUVEC 세포는 역상현미경과 연결된 디지털카메라로 촬영하였고, 그 결과, 도 6c에 도시된 바와 같이, 대조군에서 많이 형성된 혈관이 본 발명의 화합물 농도를 높일수록 감소하는 것을 확인할 수 있다.

<실험예 9> MCF-7 세포에서의 VEGF 발현 억제효과 검토

MCF-7 세포에 실시예 1 및 실시예 2의 화합물을 농도별로 18시간 동안 처리한 후, 전체 세포 용출물에서의 세포성 VEGF 발현 수준을 웨스턴 블롯으로 분석하였다.

그 결과, 도 7a와 같이 농도의존적으로 세포성 VEGF 발현을 억제하였다.

또한, 세포 상등액에서의 VEGF 분비 수준을 ELISA로 분석하였다. 그 결과, 도 7b와 같이 농도의존적으로 분비 VEGF 수준을 억제하였다.

또한, CAM에 종양 이식을 위해 2X10⁶ MCF-7 세포/CAM을 로딩하고, 종양 이식과 동시에 단 1회만 실시예 1 및 실시예 2의 화합물을 접종하였다. 그 결과, 도 7c와 같이 종양 크기의 성장을 농도의존적으로 억제하였다.

<실험예 10> 독성실험

6주령의 특정병원체부재(specific pathogen-free, SPF) SD계 랫트를 사용하여 급성독성실험을 실시하였다. 군당 5 마리씩의 동물을 이용하여 제조예에서 제조한 몰루긴 및 몰루긴 합성 유도체를 0.5% 메틸셀룰로즈 용액에 현탁하여 1g/㎏, 5g/㎏ 및 10g/㎏의 용량으로 1회 단회 경구투여하였다.

이러한 투여 후 동물의 폐사여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상여부를 관찰하였다.

그 결과, HHC-8을 투여한 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다.

이상의 결과, 본 발명의 HHC-8은 랫트에서 10g/㎏까지 독성변화를 나타내지 않으며, 따라서, 경구 투여 중간치사량(LD50)은 10g/kg 이상인 안전한 물질로 판단되었다.

이하, 본 발명의 카나비노이드 유도체를 함유하는 약학조성물의 제제예를 설 명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

<제제예 1> 산제의 제조

HHC-8 500 mg, 유당 100 mg 및 탈크 10 mg을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<제제예 2> 정제의 제조

HHC-8 500 mg, 옥수수전분 100 mg, 유당 100 mg 및 스테아린산 마그네슘 2 mg을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

<제제예 3> 캡슐제의 제조

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 HHC-8 500 mg, 옥수수전분 100 mg, 유당 100 mg 및 스테아린산 마그네슘 2 mg을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<제제예 4> 주사제의 제조

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) HHC-8 50 mg, 주사용 멸균 증류수 적량 및 pH 조절제 적량을 함유하여 제조하였다.

<제제예 5> 액제의 제조

통상의 액제의 제조방법에 따라 적량의 정제수에 HHC-8 100 mg, 이성화당 10 g 및 만니톨 5 g을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 후 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조하였다.

<제제예 6> 음료의 제조

HHC-8 0.5mg, 꿀 522㎎, 치옥토산아미드 5㎎, 니코틴산아미드 10㎎, 염산리보플라빈나트륨 3㎎, 염산피리독신 2㎎, 이노시톨 30㎎, 오르트산 50㎎ 및 물 200㎖의 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 음료를 제조하였다.

도 1은 본 발명에 따른 카나비노이드 유도체의 세포독성을 검토한 것이고,

도 2a 및 도 2b는 본 발명에 따른 카나비노이드 유도체의 아팝토시스 유도 효과를 각각 PI 및 DAPI 염색으로 검토한 것이고,

도 2c는 본 발명에 따른 카나비노이드 유도체 처리 후 형태적 변화를 나타낸 것이고,

도 3a 및 도 3b는 본 발명에 따른 카나비노이드 유도체의 p53 및 NAG-1 단백질 발현을 웨스턴 블롯으로 각각 분석한 것이고,

도 3c는 본 발명에 따른 카나비노이드 유도체에 의한 NAG-1 mRNA 발현 수준을 RT-PCR로 분석한 것이고,

도 4a는 p53 안티센스로 형질감염된 세포에서의 본 발명에 따른 카나비노이드 유도체 처리에 따른 아팝토시스 감소 효과를 나타낸 것이고,

도 4b는 p53 안티센스로 형질감염된 세포에서의 본 발명에 따른 카나비노이드 유도체 처리에 따른 세포생존율을 나타낸 것이고,

도 5a 및 도 5b는 본 발명에 따른 카나비노이드 유도체에 의한 각각 VEGF-유도성 혈관신생 억제 효과를 나타낸 것이고,

도 6a는 본 발명에 따른 카나비노이드 유도체에 의한 세포 증식 억제 효과를 나타낸 것이고,

도 6b는 본 발명에 따른 카나비노이드 유도체에 의한 VEGF-유도성 주화성 이동 억제 효과를 나타낸 것이고,

도 6c는 본 발명에 따른 카나비노이드 유도체에 의한 HUVEC 세포에서의 혈관 형성 억제 효과를 나타낸 것이고,

도 7a 및 도 7b는 본 발명에 따른 카나비노이드 유도체에 의한 VEGF 발현 효과를 나타낸 것이고,

도 7c는 본 발명에 따른 카나비노이드 유도체에 의한 종양 크기의 성장 억제 효과를 나타낸 것이다.

<110> Yeungnam University Industry-Academic Cooperation Foundation <120> Pharmaceutical composition comprising cannabinoids having anti-angiogenic activity and cancer growth inhibitory activity <130> dp-2009-0157 <160> 6 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> sense primer for human NAG-1 <400> 1 actccgaaga ctccagattc cga 23 <210> 2 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense primer for human NAG-1 <400> 2 atgcacatgg tcacttgcac ct 22 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> sense primer for human GAPDH <400> 3 ggtgaaggtc ggagtcaacg 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense primer for human GAPDH <400> 4 caaagttgtc atggatgacc 20 <210> 5 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> p53 antisense oligonucleotide <400> 5 cggctcctcc atggcagt 18 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> random oligonucleotide <400> 6 ccggtgaacg agcgagcaca 20

Claims (6)

1. 하기 화학식 1로 표시되는 카나비노이드 유도체 및 약학적으로 허용되는 담체를 함유하는 혈관신생으로 인한 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물:

   [화학식 1]

   

   상기 화학식 1에 있어서, R₁ 및 R₂는 각각 수소, C1-C10의 알킬카르보닐 또는 C1-C10의 알킬에서 선택된 어느 하나임.
2. 제 1항에 있어서, 상기 카나비노이드 유도체는 하기 화학식 2 또는 화학식 3으로 표시되는 화합물 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 혈관신생으로 인한 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물:

   [화학식 2]

   

   [화학식 3]

   
3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 혈관신생으로 인한 질환은 류마티스성 관절염, 골관절염, 패혈증성 관절염, 건선, 각막궤양, 노화와 관련된 황반 변성, 당뇨성 망막병증, 증식성 유리체 망막병증, 미성숙 망막병증, 안과 염증, 원추 각막, 쇼그렌 증후군, 근시 안과종양, 각막이식 거부, 이상 창상 유합, 골질환, 단백뇨증, 복대동맥류 질환, 외상성 관절 손상에 따른 퇴행성 연골손실, 신경계의 수초탈락 질환, 간경변, 신사구체 질환, 배태막의 미성숙 파열, 염증성 장질환, 치근막 질환, 동맥경화증, 재협착증, 중추신경계의 염증질환, 알츠하이머 질환, 피부노화 및 암의 침윤과 전이로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 혈관신생으로 인한 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물.
4. 하기 화학식 1로 표시되는 카나비노이드 유도체 및 약학적으로 허용되는 담체를 함유하는 암질환의 예방 및 치료용 약학조성물:

   [화학식 1]

   

   상기 화학식 1에 있어서, R₁ 및 R₂는 각각 수소, C1-C10의 알킬카르보닐 또는 C1-C10의 알킬에서 선택된 어느 하나임.
5. 제 1항에 있어서, 상기 카나비노이드 유도체는 하기 화학식 2 또는 화학식 3으로 표시되는 화합물 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 암질환의 예방 및 치료용 약학조성물:

   [화학식 2]

   

   [화학식 3]

   
6. 제 4항 또는 제 5항에 있어서, 암질환은 폐암, 비소세포성폐암, 결장암, 골암, 췌장암, 피부암, 두부 또는 경부 암, 피부 또는 안구내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 위암, 항문부근암, 결장암, 유방암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병(Hodgkin's disease), 식도암, 소장암, 내분비선암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 방광암, 신장 또는 수뇨관 암, 신장세포 암종, 신장골반 암종, 중추신경계(CNS; central nervous system) 종양, 1차 CNS 림프종, 척수 종양, 뇌간 신경교종 및 뇌하수체 선종으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 암질환의 예방 또는 치료용 약학조성물.

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