KR101189663B1 - 파리에틴을 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료를 위한 약학 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 파리에틴(parietin), 상기 파리에틴을 유효성분으로 함유하여 Egr-1 유전자의 발현을 촉진시킴으로써 암 세포의 증식을 억제하는 항암제용 조성물에 관한 것이다.
[화학식 1]

본 발명에 따른 파리에틴은 Egr-1 유전자 발현을 촉진하는 효과가 우수하여, 암 세포 억제를 위한 예방 및 치료제로서 유용하게 이용될 수 있다. 또한, 생약재로부터 분리된 파리에틴은 화학적으로 합성되어 판매되는 약물에 비해 상대적으로 독성 및 부작용이 적으며, 각종 식품 조성물에 첨가되어 암 질환 예방 및 치료용 보조제로도 유용하게 사용될 수 있다.

Description

파리에틴을 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료를 위한 약학 조성물{A Pharmaceutical Composition Comprising the Compound Parietin for Treating or Preventing Cancer}

본 발명은 파리에틴을 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료를 위한 약학 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 양제근(Rumex japonicus)으로부터 분리된 화학식 1로 표시되는 파리에틴(parietin), 상기 파리에틴을 유효성분으로 함유하여 Egr-1 유전자의 발현을 촉진시킴으로써 암 세포의 증식을 억제하는 항암제용 조성물에 관한 것이다.

Egr-1(Early Growth Response-1)은 사람의 5q.23-31 염색체에 위치하며 2개의 엑손(exon)과 1개의 700 base-pair 인트론(intron)을 함유하는 총 3.8 킬로베이스(kilobase) 크기의 유전자이다(Tsai-Morris 등, Nucleic Acids Res 1988;16:8835-46). 사람 Egr-1 유전자 산물은 543 아미노산을 가지는 약 80 kDa 크기의 단백질이며 c-말단(c-terminal)에 Cys₂-His₂ 형태의　징크 핑거 모티프(zinc-finger motif)를 가지는 전사인자이며(Sukhatme 등, 1988;Cell 53: 37-43), 서로 다른 그룹에서 클로닝 되어 NGFI-A(Milbrandt, Science 1987;238;797-799) 혹은 Zif268(Christy, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988;85:7857-7861), Krox-24 (Lemaire, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988;85:4691-4695), Tis8(Lim, Oncogene 1987;1:263-270)으로 불리기도 한다.

Egr-1은 TGF-β1, p21, p53, PTEN, 피브로넥틴(fibronectin) 등과 같은 다양한 암 억제 유전자들의 유전자 발현을 유도하여 세포성장을 조절하여 암 발생을 억제하는 기능을 가진다(Krones-Herzig 등, Proc Natl Acad Sci USA 2003;100:3233-3238, Krones-Herzig 등, Cancer Res 2005;65:5133, Baron 등, Cancer Gene Ther 2006;13:115, Virolle 등, 2001;Nat Cell Biol 3: 1124-1128). Egr-1 유전자는 정상적으로 성장하는 세포와 비정상적으로 과다 성장하는 세포 상태를 인식하여 세포 성장 속도를 조절하며, 과도한 자외선이나 방사선 노출로 인하여 생체의 DNA에 심각한 손상이 생기면, 손상된 세포에서 Egr-1 유전자 발현이 증가되어 DNA가 손상된 세포의 아포토시스(apoptosis) 즉, 세포사멸(cell death)을 유발하여, 우리 몸에서 손상된 DNA (돌연변이 DNA)를 가지는 세포가 증식하지 못하게 한다. Egr-1의 발현은 많은 종류의 암세포의 성장을 현저하게 감소시키며, 종양형성(tumorigenesis)을 저해시킨다(Liu 등, Cancer Gene Ther 1998;5:3, Liu 등, Prog. Natl. Acad. Sci USA 1996;93:11831, de Belle 등, Oncogene 1999;18:3633-3642, Calogero 등, Cancer Cell Int 2004;4:1). 다양한 암세포에서 Egr-1은 발현 정도가 적거나 전혀 발현되지 않으며, Egr-1의 부족은 종양 형성과 밀접한 관계가 있는 것으로 알려져 있다(Huang 등, Int J Cancer 1997;72:102, Huang 등, Cancer Res 1995;55:5054). 사람 섬유성육종 HT1080 세포, 골육종 SaOS2 세포, 신경교아세포종 U251 세포, 유방암 ZR75-1 세포 등에 Egr-1을 과발현 시키면 암세포에서 DNA 합성능이 감소되고 세포성장 속도가 억제되었으며(Huang 등, Cancer Res 1995;55:5054), 사람 섬유성육종 HT1080 세포에 Egr-1 유전자를 도입시키면 TGFβ1과 피브로넥틴(fibronectin), PAI-1 (plasminogen activator inhibitor-1)들의 유전자 발현이 증가되어 암세포 성장이 정지되고 전이능이 감소된다(Liu 등, J Biol Chem 1999;274:4400).

항암 물질들 중에서 암 억제 유전자 Egr-1의 발현을 조절해서 항암 효과를 나타내는 것들이 잘 알려져 있다. 그중에서 커쿠민(Curcumin)(Choi 등, Cancer Res 2008;68:1369-77), 레스베라트롤(Resveratrol)(Ragione 등, J Biol Chem 2003;278:23360-8), 타목시펜(Tamoxifen)(Kim 등, Cell Signal 2007;19:1290-300), 트리플루오페라진(trifluoperazine)(Shin 등, 2001;J Biol Chem 276:7797-7805)은 암 억제 유전자 Egr-1의 발현을 증가시켜 Egr-1의 표적 인 p21^waf1의 발현을 증가시켜 결과적으로 암세포 성장 세포 주기가 억제되어 항암 효과를 나타낸다고 알려져 있다(Choi 등 Cancer Res 2008;68:1369-77, Ragione 등, J Biol Chem 2003;278:23360-8).

양제근(Rumex japonicus)은 마디풀과에 속하는 참소리쟁이의 다른 이름으로 양의 발굽을 닮은 뿌리 모양에서 비롯된 이름이다. 양제근은 한방에서 지혈작용, 피부진균억제를 위해서 주로 사용되어 왔다.

그러나 일반적으로 알려진 양제근의 효능은 추출물에서 비롯된 것으로 본 발명에서 제시하는 바와 같이 양제근이 함유한 화합물 중 하나인 파리에틴에 의한 Egr-1 유전자 발현 촉진 효과에 대한 것은 보고된 바가 없다. 또한 파리에틴은 이끼류의 하나인 잔토리아 파리에티나(Xanthoria parietina)의 이차대사 산물로 알려져 왔으나 본 발명자들은 양제근(Rumex japonicus)에서 추출, 분리한 효능 물질의 구조를 규명한 결과, 파리에틴으로 밝혀졌고, 이 물질이 Egr-1 유전자 발현 촉진 효과 및 암 세포의 증식 억제 효과가 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다. 본 발명은 이 화합물의 Egr-1 유전자 발현 촉진 효과에 관한 것이다.(Solhaug, Knut A.; Yngvar Gauslaa (1996). "Parietin, a photoprotective secondary product of the lichen Xanthoria parietina". Oecologia 108 (3): 412-418)

본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 파리에틴 화합물을 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료를 위한 약학 조성물 및 건강기능식품을 제공하는 데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 양제근(Rumex japonicus)으로부터 분리된 하기의 화학식 1로 표시되는 화합물, 파리에틴(parietin) 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.

[화학식 1]

또한, 본 발명은 상기 화학식 1의 파리에틴을 유효성분으로 함유하며, Egr-1의 발현을 촉진시켜 암 세포의 성장을 억제하는 항암제용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 항암제용 조성물 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 상기 약학 조성물을 유효성분으로 함유하는 항암제를 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 암은 대장암인 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 파리에틴 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 함유하는 건강기능식품을 제공한다.

본 발명에 따른 양제근(Rumex japonicus)으로부터 분리된 폴리페놀 화합물의 일종인 파리에틴(parietin)은 Egr-1 유전자 발현을 촉진하는 효과가 우수하여, 암 세포 억제를 위한 예방 및 치료제로서 유용하게 이용될 수 있다. 또한, 양제근은 오랫동안 생약으로 사용되어 오던 약재로서 이로부터 분리된 파리에틴은 화학적으로 합성되어 판매되는 약물에 비해 상대적으로 독성 및 부작용이 적으며, 각종 식품 조성물에 첨가되어 암 질환 예방 및 치료용 보조제로도 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 양제근으로부터 분리한 파리에틴의 고성능액체크로마토그램이다.
도 2는 본 발명에 따른 베툴린의 ¹H-NMR(400 ㎒) 스펙트럼이다.
도 3는 본 발명에 따른 베툴린의 ¹³C-NMR(100 ㎒) 스펙트럼이다.
도 4는 본 발명에 따른 파리에틴의 핵자기공명분광 실험 결과로 얻은 화학적 이동도(chemical shift)이다.
도 5는 본 발명의 파리에틴을 HCT116 사람 대장암세포에 첨가하면 암세포 성장이 억제되는 효과를 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명의 파리에틴을 HCT116 사람 대장암세포에 첨가하면 암 억제 유전자인 Egr-1(A)과 Egr-1 표적으로써 암 억제 유전자 기능을 가지는 PTEN(B)의 유전자 발현이 증가되는 효과를 나타낸 것이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명은 양제근(Rumex japonicus)으로부터 분리된 하기의 화학식 1로 표시되는 화합물, 파리에틴(parietin) 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.

[화학식 1]

본 발명의 양제근으로부터 분리된 파리에틴은 통상적으로 사용되는 공지의 방법에 의해 분리될 수 있으며, 바람직하게는 건조된 양제근으로부터 용매를 사용하여 추출하는 단계, 상기 추출액을 여과 후 농축하는 단계 및 크로마토그래피로 정제하는 단계를 포함한다.

상기 추출용매로는 상기 양제근으로부터 분리된 파리에틴을 효과적으로 추출할 수 있는 용매라면 특별히 제한되지는 아니하나, 바람직하게는 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 에틸렌글리콜 등을 포함하는 알코올류, 염화메틸렌, 클로로포름, 사염화탄소 등을 포함하는 할로겐 원자로 치환된 탄화수소류, THF, DMF, DMSO, 에틸렌아세테이트 등에서 선택되는 1종 이상인 것이 좋다.

본 발명에서는 메탄올을 사용하여 추출하였으나 이것은 예시에 불과할 뿐, 상기 양제근으로부터 분리된 파리에틴이 다른 용매, 예를 들면, 메탄올, 에탄올과 물과의 일정비율을 가진 혼합물, 또는 카본설파이드, 알코올류, 에테르, 클로로포름, 벤젠, 아세트산 등에서도 잘 용해되므로 이의 사용을 제한하는 것은 아니다.

또한, 상기 용매로 추출하여 얻어진 추출액은 여과 및 용매의 증류에 의해 농축될 수 있는데, 용매의 증류는 통상 감압증류에 의해 성취되나 대기압 하에서 증류하는 것을 배재하는 것은 아니다. 감압증류된 농축액은 크로마토그래피에 의해 순수한 화합물로 정제된다.

본 발명에서는 농축액을 역상의 분리 수지인 C-18관 크로마토그래피 및 분취 고속 액체 크로마토그래피(컬럼: Phenomenex C18, 10 ㎜ × 250 ㎜, 유속: 2.5 ㎖/분, 이동상 50% 메탄올, 검출파장: UV 254 ㎚, 머무름 시간(RT): 19.3분)에 순차 적용하였으나, 당해 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 크로마토그래피에 사용되는 물질 및 전개 용매를 다양하게 변형할 수 있음은 자명할 것이다. 또한, 필요에 따라 재결정에 의해 보다 순수한 화합물을 얻을 수도 있다.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1의 파리에틴을 유효성분으로 함유하며, Egr-1 유전자 발현을 촉진시켜 암 세포의 성장을 억제하는 항암제용 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 파리에틴은 양제근으로부터 분리되는 것을 특징으로 하며, 특정 암 세포주, 바람직하게는 대장암 세포의 성장을 억제하여 예방 및 치료하는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명의 약학적 조성물은 해당 용도에 따라 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제와 함께 독립적으로 또는 약품 첨가제로 사용되거나, 사람에게 투여하기 적합한 기타 모든 형태로 사용될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물에 함유될 수 있는 담체로는 증량제, 고섬유 첨가제, 캡슐화제 및 지질 등이 포함될 수 있으며, 이러한 담체들의 예는 당업계에 충분히 공지되어 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 질환의 진행 정도, 나이, 성별, 신체 상태, 투여 기간, 투여 방법, 환자의 체중, 식사, 배출 속도 등에 따라 용량을 달리하여 투여될 수 있다.

그러나 바람직한 효과를 위해서 본 발명의 약학적 조성물을 통상 성인의 경우 1일, 100 ~ 1,000 ㎎의 범위로 비경구 또는 경구 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하지 아니한다.

또한, 본 발명의 조성물을 경구용 제제로서 조제하는 경우에는 부형제, 또한 필요에 따라서 결합제, 붕괴제, 활택제, 착색제, 교미교취제 등을 가한 후 통상적인 방법에 의해 정제, 피복정제, 과립제, 캡슐제 등으로 조제가 가능하다. 부형제로는 예를 들면 젖당, 옥수수 전분, 백당, 포도당, 솔비트, 결정 셀룰로오스 등이, 결합제로는 예를 들면 폴리비닐알코올, 폴리비닐에테르, 에틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 아라비아고무, 트라가칸트, 젤라틴, 셸락, 하이드록시프로필 셀룰로오스, 폴리비닐피리돈 등이, 붕괴제로는 예를 들면 전분, 한천, 젤라틴 분말, 결정 셀룰로오스, 탄산칼슘, 탄산수소나트륨, 구연산칼슘, 덱스트란, 펙틴 등이, 활택제로는 예를 들면 스테아린산 마그네슘, 활석, 폴리에틸렌글리콜, 실리카, 경화 식물유 등이, 착색제로는 의약품이 첨가하는 것이 허가되어 있는 것이, 교미교취제로는 예를 들면 코코아 분말, 박하뇌, 방향산, 박하유, 용뇌, 계핀 분말 등이 사용되며, 이들의 정제는, 과립제에는 당의, 젤라틴의, 기타 필요에 따라 적절히 코팅하는 것을 배제하는 것은 아니다.

또한, 주사제로는 조제하는 경우에는 필요에 따라 pH 조정제, 완충제, 안정화제, 보존제 등을 첨가하고, 통상적인 방법에 의해 피하, 근육 내, 정맥 주사제로 한다.

또한, 본 발명의 파리에틴은 필요에 따라 염산, 황산, 인산 등의 무기염 및 수산, 푸마르산, 말레인산, 능금산, 구연산, 주석산, 글루탐산 등의 유기염 등 약학적으로 허용 가능한 산부가염으로서도 약효를 충분히 발휘시킬 수 있다.

이하, 실시예에 의하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 양제근으로부터 화합물의 분리 및 정제

건조된 양제근 1.2 ㎏을 마쇄하여 메탄올 3,000 ㎖를 가해 72시간 동안 빛을 차단하고 침지시킨 후 실온에서 추출하고, 상기 추출물을 감압여과 하여 잔류물은 동일한 방법으로 2회 더 반복 추출하였다. 이때 얻어진 여과액은 모두 합쳐 40℃에서 감압농축한 후 영하 50℃에서 동결건조 하여 메탄올 추출물(196 g)을 얻었다.

상기 메탄올 추출물은 극성에 따른 분리 추출을 위하여 헥산과 물의 혼합액(1:1)으로 3회 분배 추출한 다음, 헥산 층을 제거한 물 층은 다시 클로로포름과 물(1:1)로 3회 분배 추출하였다.

또한, 클로로포름 층이 제거된 물 층은 마지막으로 에틸아세테이트와 물의 혼합액(1:1)으로 3회 분배 추출하여 각 층을 상기와 같은 방법으로 감압농축과 동결건조 하여 헥산 분획물(5.36 g), 클로로포름 분획물(0.86 g), 에틸아세테이트 분획물(38.09 g) 및 물 분획물을 얻었다.

상기 3개의 분획 중 에틸아세테이트 분획물 38.09 g에 대해 실리카겔 칼럼 크로마토그래피를 이용하여 분취하였다. 이때, 전개용매로는 헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트 혼합용매(1:1:1)를 사용하였으며, 상기 분취액을 3개의 중분획으로 나누어 상기 분획 중 첫번째 분획을 C-18 고속 크로마토그래피(컬럼: Phenomenex C18, 10 ㎜ × 250 ㎜, 유속: 2.5 ㎖/분, 이동상 50% 메탄올, 검출파장: UV 254 ㎚, 머무름 시간: 19.3분)를 사용하여 본 발명에 따른 화합물을 10 ㎎ 수득하였다. (도 1)

실험예 1. 양제근으로부터 분리한 화합물의 구조 분석

상기 실시예에서 분리, 정제하여 얻은 물질을 완전히 건조하여 0.5 ㎖ 중수소-디메틸설폭사이드(DMSO-d6)에 10 ㎎을 녹인 후, 5 ㎜의 튜브에 넣어 핵자기 공명 분광기(Nuclear Magnetic Resonance Spectrometer; Bruker, Advance 400(9.4T), 독일)를 이용하여 ¹H-NMR(400 ㎒), ¹³C-NMR(100 MHz) 및 DEPT-135(Distortionless Enhancement by Polarization Transfer) 스펙트럼 분석을 실시하였다.

또한, 상기 화합물의 2D-NMR 스펙트럼, 즉 COSY(correlated spectroscopy), TOCSY (total correlated spectroscopy), HMQC(heteronuclear multiple quantum correlation) 및 HMBC(heteronuclear multiple bonding correlation) 스펙트럼을 상기 핵자기 공명 분광기를 이용하여 조사하였다.

구체적으로, ¹H-NMR의 경우, 1초 간격으로 16번 스캔하고, 32K의 데이터포인트를 사용하였다. 90도 펄스는 9.5초로 하고, 스펙트럼 넓이는 4595.58 Hz로 하여 기록하였다.(도 2)

¹³C-NMR과 DEPT는 64K의 데이터포인트를 사용하였으며, 90도 펄스는 10.5초로 하고 스펙트럼 넓이는 20833.33Hz로 하였다.(도 3)

또한, 모든 2D-스펙트럼은 f2 dimension의 경우에는 2048개의 데이터포인트를 사용하였고, f1 dimension에서는 256을 사용하였으며, HMBC는 장거리 결합(long range) 결합상수를 62.5 밀리초로 하였다.

그 결과, ¹³C-NMR 스펙트럼과 DEPT에 의해 상기 화합물은 모두 16개의 탄소로 이루어진 것을 확인하였는데, 구체적으로는 2개의 일차탄소, 4개의 이차탄소와 10개의 사차탄소가 존재하는 것을 알 수 있었다. 화학적 이동도에 근거하여 두 개의 방향족 고리가 존재하며, 두 개의 메틸기가 있고, 두 개의 케톤기가 존재함이 확인되었다. COSY, TOCSY, HMQC 및 HMBC 분석에 근거하여 도 4와 같이 수소 및 탄소 화학적 이동도(chemical shift)를 얻을 수 있었다. 이와 같은 화학적 이동도 분석으로부터 아래 화학식 1과 같은 구조를 확인하였다.

상기와 같은 결과들로, 본 발명에 따른 양제근으로부터 분리한 화합물은 아래 화학식 1로 표시되며, 분자량이 284이고, C₁₆H₁₂O₅의 분자식을 갖는 폴리페놀의 일종인 1,8-다이하이드록시-3-메톡시-6-메틸안트라센-9,10-다이온(1,8-dihydroxy-3-methoxy-6-methylanthracene-9,10-dione)인 것으로 확인되었다. 이 화합물은 파리에틴(parietin)이라는 이름으로 알려져 있다.

[화학식 1]

실험예 2. 파리에틴의 항암 효과 확인

HCT116 사람 대장암세포를 ATTC(American Type Culture Collection, USA)로부터 구입하여, 10% FBS(Fetal Bovine Serum, Invitrogen Life Technologies)과 Antibiotic-Antimycotic solution (Invitrogen Life Technologies)이 함유되어 있는 DMEM (Invitrogen Life Technologies) 배양액을 2일에 한 번씩 100-mm 세포배양접시에 1 × 10⁶의 접종 밀도(seed density)로 계대하면서 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다.

파리에틴에 의한 세포증식 억제 효과는 암세포의 콜로니 형성능 (Colonogenic assay)이 얼마나 억제되는지의 여부로 측정하였다. HCT116 세포를 24-well 배양접시에 well 당 6000개 세포로 분주한 후 0, 10, 20, 40 μM 농도의 파리에틴을 처리하고, 7일 후 6% 글루타르알데하이드 (glutaraldehyde)와 0.5% 크리스탈 바이올렛 (crystal violet) 용액을 1 : 1로 섞어준 혼합액을 세포에 첨가한 후 15분 동안 반응시켜 남아있는 세포를 염색하였다.

그 결과, 도 5에 나타나는 바와 같이 파리에틴을 20 μM 농도 이상으로 처리했을 때 암세포의 콜로니 형성능이 점차 감소되었다. 이러한 사실로부터 파리에틴은 HCT116 대장암세포의 증식을 억제시키는 효과가 있다는 사실을 확인하였다.

실험예 3. 파리에틴의 Egr-1 유전자 발현 촉진 효과 확인

파리에틴이 HCT116 대장암세포에서 암 억제 유전자로 알려진 Egr-1의 유전자의 발현을 증가시키는지 확인하기 위하여, 상기 방법으로 배양한 HCT116 세포를 12시간 동안 0.5% FBS를 포함한 배지에서 배양 한 후 20 ㎍/㎖ 농도의 파리에틴을 2시간 동안 처리하였다. 파리에틴을 처리한 후 웨스턴 블롯(Western Blot)법으로 Egr-1 단백질의 발현을 확인해 보았다. 파리에틴을 처리한 세포를 수확하여 20 mM HEPES(pH 7.2), 1% Triton X-100, 10% 글리세롤(glycerol), 150 mM NaCl, 10 ㎍/㎖ 류펩틴(leupeptin), 1 mM PMSF가 함유된 용해액을 30분 동안 반응시켜 세포를 용해시킨 후 단백질 분리액을 10% SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)로 분리하였다. 분리된 겔 단백질을 니트로셀룰로스 막 (nitrocellulose membrane)으로 옮긴 후 Egr-1 단백질과 결합하는 1차 항체(rabbit anti-Egr-1 antibody; anti-GAPDH antibody)를 5시간 동안 반응시키고, Egr-1 항체를 인지하는 2차 항체(goat anti-rabbit antibody)를 30분 동안 반응 시켰다. 이때 1차 대조 항체로서 GAPDH 항체(anti-GAPDH antibody)를 사용하여 시료의 상대적 양이 정확한지를 비교하였다.

형광법(chemiluminescence detection system; Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ)을 이용하여 X-ray 필름에서 GAPDH와 Egr-1 단백질 양을 측정한 결과를 도 6에 나타내었다. HCT116 대장암세포에 파리에틴을 처리한 경우 대조 단백질인 GAPDH의 양은 변하지 않았으나 Egr-1 단백질 발현은 증가된다는 사실을 최종 확인하였다(도6-A). Egr-1 발현에 의해 암 억제 활성이 유도되는지를 확인하기 위하여 Egr-1 표적 유전자인 암 억제 유전자 PTEN의 유전자 발현을 조사하였다. 상기와 같은 방법으로 HCT116 대장암세포에 파리에틴을 6시간 처리한 후 웨스턴 블롯(Western Blot)법으로 GAPDH와 PTEN 단백질 양을 조사하였을 때, PTEN 단백질 양이 증가되는 사실을 확인할 수 있었다(도6-B). 이러한 결과는, 파리에틴이 HCT116 대장암세포에서 Egr-1 단백질 발현을 증가시키고, Egr-1 단백질이 활성화 되면 암 억제 유전자인 PTEN 유전자 발현이 증가되어 궁극적으로 HCT116 대장암세포의 성장을 억제 시킨다는 사실을 의미하는 것이다.

Claims (8)

1. 대장암 세포에 대하여 Egr-1 유전자의 발현을 촉진하여 세포사멸을(apoptosis)을 유도함으로서 대장암 세포의 성장억제 및 사멸작용을 갖는 하기 화학식 1로 표시되는 양제근으로부터 분리된 파리에틴(parietin)과 약학적으로 허용되는 염을 포함하여 이루어지는 대장암 질환의 예방 및 치료용 약학조성물.
   [화학식 1]
   

   
2. 제 1 항에 있어서,
   상기 약학조성물은 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 대장암 질환의 예방 및 치료용 약학조성물.
   
3. 대장암 세포에 대하여 Egr-1 유전자의 발현을 촉진하여 세포사멸(apoptosis)을 유도함으로서 대장암 세포의 성장억제 및 사멸작용을 갖는 하기 화학식 1로 표시되는 양제근으로부터 분리된 파리에틴(parietin)과 약학적으로 허용되는 염을 포함하여 이루어지는 건강기능식품.
   [화학식 1]
   

   

   
   
   
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