KR20100111245A

KR20100111245A - 화상 손상의 치료 또는 예방용 약학 조성물

Info

Publication number: KR20100111245A
Application number: KR1020100030722A
Authority: KR
Inventors: 곽병주; 박의진
Original assignee: 주식회사 뉴로테크
Priority date: 2009-04-06
Filing date: 2010-04-05
Publication date: 2010-10-14
Also published as: EP2417972A2; AU2016219606B2; WO2010117170A3; CN102421430B; CA2757466A1; JP2012522834A; JP5734953B2; KR101136513B1; AU2016219606A1; EP2417972B1; DK2417972T3; ES2633691T3; CA2757466C; EP2417972A4; CN102421430A; AU2010235334A1; WO2010117170A2; US20120289602A1

Abstract

본 발명은 화상 치료용 약학 조성물에 관한 것으로서, 특정 화학식으로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 한다. 따라서 본 발명은 이러한 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 유효 성분으로 함유하는 화상 치료용 조성물, 및 이러한 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 화상의 치료가 필요한 개체에게 투여하는 것을 포함하는 화상의 치료 방법을 제공한다.

Description

화상 손상의 치료 또는 예방용 약학 조성물{Pharmaceutical composition for preventing or treating burn injury}

본 발명은 화상 손상의 치료 또는 예방에 유용한 약학 조성물 및 화상 손상을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.

화상은 주로 사고에 의해 발생하며, 원인에 따라서 열에 의한 화상, 전류에 의한 화상, 화학물질에 의한 화상, 방사선에 의한 화상 등으로 분류할 수 있다. 화상의 중증도는 화상을 입은 넓이, 깊이, 화상을 유발한 물체의 온도와 접촉 시간, 피부 상태 등에 따라 1도, 2도, 3도 및 4도 화상으로 나누어지며, 2도 화상부터는 흉터를 남길 수 있으며 병원 치료를 요한다.

1도 화상은 피부가 붉게 되고, 따끔거리는 등의 통증을 수반한다. 피부층 중의 가장 바깥층인 표피의 손상을 가져오고, 통증과 홍반을 수반하면서 부어 오르기도 한다. 며칠 안에 증세가 없어지지만, 그 자리에 가벼운 낙설(落屑)과 색소침착이 남는 경우도 있다. 회복 후에는 반흔(흉터)가 남지 않는다. 햇볕화상(sun burn)의 경우는 가장 일반적인 1도 화상의 예이다.

2도 화상은 표피와 진피 둘 다에 영향을 미치며, 홍반, 통증, 부종, 그리고 사고 후 24시간 내에 물집을 생기게 한다. 이 화상은 또한 한선이나 모공에 영향을 미치기도 한다. 자각적으로는 작열감과 통증이 심하다. 수포가 터지면 미란면을 나타내고 다량의 분비액이 나온다. 화상 입은 면적이 체표면적의 약 15% 이상에 이르는 경우에는 특히 주의를 요한다. 수 주일 내로 치유되지만 그 자리에 색소침착이나 색소탈실이 남는 일이 많다. 2차 감염을 일으키면 국소증세는 더욱 심하고 경과도 오래간다.

3도 화상은 표피, 진피, 그리고 하피까지 영향을 미쳐서 피부가 검게 되거나 반투명백색이 되고, 피부 표면 바로 아래 혈관을 응고시킨다. 이 화상부위는 무감각해지게 될 수도 있지만, 환자는 극심한 통증을 느끼며, 피부조직과 구조가 괴사하게 되어 치료에 많은 시간이 걸리고 후에 흉터가 남게 된다. 사고 후 2주일이 지나면, 딱지가 벗겨져 궤양 면이 나타난다. 분비액이 많고, 출혈하기 쉽지만 점차 새로운 조직이 생겨 표피가 재생되어 반흔이 남고 치유된다. 피부괴사가 깊은 경우, 또는 2차 감염을 일으킨 경우, 치유가 늦어지고 반흔 표면이 불규칙해져 켈로이드가 생기거나 변형이나 운동장애가 남기도 한다. 화상 입은 면적이 신체 표면적의 10%이상에 미치는 경우에는 특히 주의를 요한다.

4도 화상은 화상 입은 부위 조직이 탄화되어 검게 변한 경우이며, 피부층 밑에 위치하는 지방층, 인대, 근막, 근육, 골조직 등까지 화상을 입은 경우를 말한다. 고압 전기 화상에서 주로 발생하며, 간혹 심재성 2-3도 화상에서 균 감염이 발생한 경우 나타날 수 있다. 화상의 범위가 20% 이상인 경우 전신적인 신체 반응이 일어날 수 있는데, 과도한 수액 손실에 따른 저혈압, 쇼크, 급성 신장 기능 부전 등이 발생할 수 있고, 추후 상처 감염이나 폐렴, 패혈증, 다발성 장기 기능 부전 증후군 등이 발생하기도 한다.

화상의 치료는 가능한 빨리 초기 화상 창상을 치유하거나 화상부위를 줄이는 것이 중요하다. 초기 화상 환부 드레싱에서 감염 및 염증의 조절, 습윤 환경의 유지, 피부재생을 돕는 성장인자나 사이토카인의 투여, 국소적 헤파린 사용 등을 통한 심부 화상으로의 전환을 방지하는 초기 치료가 강조되고 있다.

이러한 화상 손상의 심각성을 고려할 때, 화상 손상의 치료 또는 예방에 유용한 치료제가 개발된다면 화상 환자의 치료, 상태 개선 및 흉터 감소에 많은 도움이 될 것이다.

따라서 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 화상 손상의 치료 또는 예방에 유용한 약학 조성물, 및 이러한 약학 조성물의 의학적 용도를 제공하는 것이다.

상기 기술적 과제를 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 테트라플루오로벤질(tetrafluorobenzyl) 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 화상 손상의 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공한다.

상기 화학식 1에서,

R₁, R₂ 및 R₃는 서로 독립적으로 수소 또는 할로겐이고;

R₄는 하이드록시, 알킬, 알콕시, 할로겐, 할로겐으로 치환된 알콕시, 알카노일옥시 또는 니트로이며;

R₅는 카르복시산, 알킬기로 치환된 카르복시산, 카르복시아미드, 설폰산, 할로겐 또는 니트로이다.

즉, 본 발명은 화상 손상의 치료 또는 예방을 위한 상기 테트라플루오로벤질 유도체 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물의 약학 조성물 및 의약 용도를 제공한다.

상기 화학식 1에서, 알킬은 탄소수 1 내지 5의 알킬인 것이 바람직하고, 탄소수 1 또는 3의 알킬인 것이 더욱 바람직하다. 구체적으로, 상기 알킬은 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 2차-부틸 및 3차-부틸기가 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 알콕시는 탄소수 1 내지 5의 알콕시인 것이 바람직하고, 탄소수 1 또는 3인 알콕시인 것이 더욱 바람직하다. 구체적으로, 상기 알콕시로는 메톡시, 에톡시 및 프로톡시기가 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 할로겐은 불소, 염소, 브롬 및 요오드인 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 알카노일(alkanoyl)은 탄소수 2 내지 10의 알카노일인 것이 바람직하고, 탄소수 2 또는 5의 알카노일인 것이 더욱 바람직하다. 구체적으로 상기 알카노일로는 에탄노일(ethanoyl), 프로파노일(propanoyl), 및 시클로헥산카르보닐(cyclohexancarbonyl)가 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 알카노일옥시는 탄소수 1 내지 4의 알카노일옥시인 것이 바람직하다.

상기 화학식 1로 표시되는 테트라플루오로벤질 유도체의 바람직한 예는 2-하이드록시-5-(2,3,5,6-테트라플루오로-4-트리플루오로메틸-벤질아미노)벤조산(2-Hydroxy-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-4-trifluoromethyl-benzylamino)-benzoic acid) (이하, '2-hydroxy-TTBA'라 함), 2-니트로-5-(2,3,5,6-테트라플루오로-4-트리플루오로메틸-벤질아미노)-벤조산(2-Nitro-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-4-trifluoromethyl-benzylamino)-benzoic acid), 2-클로로-5-(2,3,5,6-테트라플루오로-4-트리플루오로메틸-벤질아미노)-벤조산(2-Chloro-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-4-trifluoromethyl-benzylamino)-benzoic acid), 2-브로모-5-(2,3,5,6-테트라플루오로-4-트리플루오로메틸-벤질아미노)-벤조산(2-Bromo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-4-trifluoromethyl-benzylamino)-benzoic acid), 2-하이드록시-5-(2,3,5,6-테트라플루오로-4-메틸벤질아미노)-벤조산(2-Hydroxy-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-4-methyl-benzylamino)-benzoic acid), 2-메틸-5-(2,3,5,6-테트라플루오로-4-트리플루오로메틸-벤질아미노)-벤조산(2-Methyl-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-4-trifluoromethyl-benzylamino)-benzoic acid), 2-메톡시-5-(2,3,5,6-테트라플루오로-4-트리플루오로메틸-벤질아미노)-벤조산(2-Methoxy-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-4-trifluoromethyl-benzylamino)-benzoic acid) 또는 5-(2,3,5,6-테트라플루오로-4-트리플루오로메틸-벤질아미노)-2-트리플루오로메톡시벤조산(5-(2,3,5,6-Tetrafluoro-4-trifluoromethyl-benzylamino)-2-trifluoromethoxy benzoic acid)을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 있어, 화상은 일반적으로 열에 의해 피부 세포가 파괴되거나 괴사되는 현상을 말하고, 예를 들어, 화재에 의한 화염화상, 뜨거운 액체(물, 기름 등)에 의한 열탕화상, 고온의 물체(전기 다리미, 밥솥 등)의 접촉에 의한 접촉화상, 강산, 강알칼리 등에 의한 화학화상, 그 외 여름철 강한 자외선에 의한 일광화상이나 방사선 및 X선 노출에 의한 방사선 화상 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 본 발명의 화상은 1도, 2도, 3도 또는 4도의 화상일 수 있다.

본 발명에 따른 화학식 1의 테트라플루오로 벤질 유도체 및 이들의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물은 이들 화상 손상 치료 또는 예방을 위해 사용될 수 있으나, 상기 화상의 구체적 종류 및 화상의 정도(심각성)에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 테트라플루오로벤질 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 미국특허 제6,927,303호에 개시된 제조 방법에 따라 제조될 수 있으나, 본 발명은 이러한 제조 방법에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 화합물들에 있어, 몇몇 화합물들은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 투여될 수 있다. "약학적으로 허용가능한 염"은 독성이 없거나 적은 산 또는 염기로 제조된 염들을 말한다. 본 발명의 화합물들이 상대적으로 산성일 경우 염기(base) 부가 염들은 충분한 양의 원하는 염기와 적당한 비활성(inert) 용매로 그러한 화합물들의 중성 형태를 접촉하여 얻을 수 있다. 약학적으로 허용가능한 염기 부가 염은 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 암모늄, 마그네슘 또는 유기 아미노로 이루어진 염을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 화합물들이 상대적으로 염기성일 경우 산(acid) 부가 염들은 충분한 양의 원하는 산과 적당한 비활성 용매로 그러한 화합물들의 중성 형태를 접촉하여 얻을 수 있다. 약학적으로 허용가능한 산 부가 염은 프로피온산, 이소부틸산, 옥살산, 사과산, 말론산, 안식향산, 호박산, 수버릭(suberic), 푸마르산, 만데릭산, 프탈릭산, 벤젠설폰산, p-토릴설폰산, 구연산, 주석산, 메탄설폰산, 염산, 브롬산, 질산, 탄산, 일수소탄산(monohydrogencarbonic), 인산, 일수소인산, 이수소인산, 황산, 일수소황산, 요오드화수소, 아인산(phosphorous acid) 등으로 형성된 염을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 알지네이트(arginate) 같은 아미노산의 염 및 글루쿠로닉(glucuronic) 또는 갈락투노릭(galactunoric) 산들과 같은 유기산의 유사체를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명은 또한 상기 화합물의 용매화물, 특히 수화물 형태를 포함하며, 용매화된 형태(예를 들어, 수화물)뿐만 아니라 비-용매화된(unsolvated) 형태도 포함한다. 또한 본 발명의 상기 화합물은 결정형 또는 무정형 형태로 존재할 수 있으며, 이러한 모든 물리적 형태는 본 발명의 범위에 포함된다. 또한 본 발명의 화합물들은 화합물에 따라 광학 중심인 비대칭 탄소원자 또는 이중 결합을 가질 수 있어 라세미체, 에난치오머, 디아스테레오머, 기하 이성질체 등이 존재할 수 있으며, 이들 또한 본 발명의 범위에 포함된다.

본 발명은 또한 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물과 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 첨가제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염/용매화물은 단독으로 혹은 어떤 편리한 운반체, 부형제 등과 함께 혼합하여 투여될 수 있고, 그러한 투여 제형은 단회투여 또는 반복투여 제형일 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 고형 제제 또는 액상 제제일 수 있다. 고형 제제는 산제, 과립제, 정제, 캅셀제, 좌제 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 고형 제제에는 부형제, 착향제, 결합제, 방부제, 붕해제, 활택제, 충진제 등이 포함될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 액상 제제로는 물, 프로필렌 글리콜 용액 같은 용액제, 현탁액제, 유제 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 적당한 착색제, 착향제, 안정화제, 점성화제 등을 첨가하여 제조할 수 있다.

예를 들어, 산제는 본 발명의 테트라플루오로 벤질 유도체 화합물과 유당, 전분, 미결정셀룰로오스 등 약제학적으로 허용되는 적당한 부형제를 단순 혼합함으로써 제조될 수 있다. 과립제는 본 발명의 테트라플루오로 벤질 유도체; 약제학적으로 허용되는 적당한 부형제; 및 폴리비닐피롤리돈, 히드록시프로필셀룰로오스 등의 약제학적으로 허용되는 적당한 결합제를 혼합한 후, 물, 에탄올, 이소프로판올 등의 용매를 이용한 습식과립법 또는 압축력을 이용한 건식과립법을 이용하여 제조될 수 있다. 또한 정제는 상기 과립제를 마그네슘스테아레이트 등의 약제학적으로 허용되는 적당한 활택제화 혼합한 후, 타정기를 이용하여 타정함으로써 제조될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 치료해야할 질환 및 개체의 상태에 따라 경구제, 주사제(예를 들어, 근육주사, 복강주사, 정맥주사, 주입(infusion), 피하주사, 임플란트), 흡입제, 비강투여제, 질제, 직장투여제, 설하제, 트랜스더말제, 토피칼제 등으로 투여될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 투여경로에 따라 통상적으로 사용되고 비독성인, 약제학적으로 허용되는 운반체, 첨가제, 비히클을 포함하는 적당한 투여 유닛 제형으로 제제화될 수 있다. 일정 시간 동안 약물을 지속적으로 방출할 수 있는 데포(depot) 제형 또한 본 발명의 범위에 포함된다.

본 발명은 또한 상기 화학식 1의 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물의 치료학적으로 유효한 양을 화상 손상의 치료 또는 예방이 필요한 개체에게 투여하는 것을 포함하는 화상 손상의 치료 또는 예방 방법을 제공한다.

화상 손상의 치료를 위한 사용에 있어 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물은 매일 약 0.1 mg/kg 내지 약 1000 mg/kg이 투여될 수 있으며, 약 2.5 mg/kg 내지 약 500 mg/kg의 1일 투여 용량이 바람직하다. 그러나 상기 투여량은 환자의 상태(연령, 성별, 체중 등), 치료하고 있는 상태의 심각성, 사용된 화합물 등에 따라 다양할 수 있다. 필요에 따라 편리성을 위하여 1일 총 투여량이 나누어지고 하루 동안 여러 번 나누어 투여될 수 있다.

본 발명은 상기 화학식 1의 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 화상 손상의 치료 또는 예방에 유용한 약학 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 상기 화학식 1의 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물의 화상 손상의 치료 또는 예방 용도를 제공한다. 본 발명은 또한 상기 화학식 1의 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물의 치료학적으로 유효한 양을 화상 손상의 치료 또는 예방이 필요한 개체에게 투여하는 것을 포함하는 화상 손상의 치료 또는 예방 방법을 제공한다.

도 1은 혈액 화학 검사를 통하여 혈청 내 락테이트 디하이드로게나제 농도를 측정한 결과이며, 이를 통해 2-hydroxy-TTBA가 화상의 치료에 효과적임을 보여주는 그래프이다.
도 2는 화상 손상 후 7일째의 등 피부를 관찰한 사진이다. 2-hydroxy-TTBA를 투여할 경우 화상 손성이 상대적으로 빨리 회복됨을 파악할 수 있다.
도 3은 분석 조직 부위의 상피층 상태를 헤마톡실린 에오신 염색을 통해 관찰한 사진 결과이다.
도 4는 헤마톡실린 에오신 염색을 통해 정체대(zone of stasis 또는 zone of tissue injury)의 피부 전층 조직 상태를 10배율에서 관찰한 현미경 사진 결과이다.
도 5는 크레실 바이올렛 염색을 통하여 정체대(zone of stasis 또는 zone of tissue injury) 피부 조직의 살아있는 세포를 10배율에서 관찰한 현미경 사진 결과이다.
도 6은 Masson's trichrom 염색을 통해서 정체대 피부 조직의 콜라겐과 근섬유를 관찰한 현미경 사진 결과이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.

<실시예 1> 접촉 열화상에 대한 치유효과

2-hydroxy-TTBA의 화상에 대한 치료 효과를 검증하기 위해서, 끓는 물(100℃ 유지)에서 3분 동안 예열한 brass comb를 이용하여 30초 동안 백서의 등 피부 양측에 접촉 열화상을 유발하였다. 5분 후에 2-hydroxy-TTBA 10mg/5ml/kg을 5분에 걸쳐 정맥 주사(intravenous injection)하였다. 이후, 하루에 두 번씩 (10~12시간 간격) 총 7일간 동일하게 투여를 지속하였다. 비히클(Vehicle) 투여군은 약물만 포함하지 않은 동량의 생리식염수만을 동일한 방법으로 투여하였다. 실험 그룹(Grouping of Rats for Burn experiments)은 하기 표 1과 같다.

그룹 (Groups)	정상대조군	화상대조군	Vehicle 투여군	2-hydroxy-TTBA 투여군
총 실험 동물 수	6	9	8	7
사망 동물 수	해당 없음(N/A)	2	0	0

상기 표 1에서, 결과 분석 시 비교를 위한 정상 대조군의 동물 수와 각 그룹의 실험동물 수, 그리고 화상 손상 후 7일 사이 사망한 수를 나타내었다. 화상 손상 후 아무것도 처리하지 않은 화상대조군에서 두 마리의 쥐가 각각 5일과 7일째 사망하였고, 다른 실험군에서는 모두 생존하였다.

혈액 화학 검사를 통한 혈청 내 락테이트 디하이드로게나제 측정

락테이트 디하이드로게나제(LDH)는 거의 모든 조직에 분포되어 있는 효소로서 파이루빅산(pyruvic acid)과 락틱산(lactic acid) 간의 가역적 전환에 관여하여 촉매작용을 한다. 조직과 세포가 파괴될 때는 혈액 중으로 흘러나와 혈중 LDH가 상승한다고 알려져 있다. 따라서 검사에 방해가 될 수 있는 용혈된 검체를 제외한 혈청으로부터 각 그룹간의 LDH 양을 조사하였다. 그 결과를 도 1에 나타내었다.

도 1에 나타나는 바와 같이, 화상대조군이 정상대조군에 비하여 LDH가 약 두 배 정도 증가하였으며, 2-hydroxy-TTBA 투여 그룹에서는 LDH가 화상대조군에 비해 유의적으로 감소하였다.

화상 후 등 피부 변화 관찰( Appearance of burns 7 days after injury in experimental groups )

도 2는 화상 손상 후 7일째의 등 피부를 관찰한 사진이다. 실험군 쥐의 등 양쪽에 예열한 Brass comb를 사용하여 네 개의 10×20 mm 크기의 직사각형 모양으로 피부 전층 화상을 유도하였다. 유도 후 두 시간째에는 등 양측에 거뭇하고 창백한 색의 4개의 응고대(zone of coagulation or zone of tissue necrosis)와 3개의 정체대(zone of stasis or zone of tissue injury)가 발생되었다. 응고대는 비가역적 세포 손상부위로써 시간이 지나도 회복이 불능하고, 정체대는 24-48시간 내 특별한 처치 없이는 세포 괴사가 진행되는 부위로써 지속적인 피브린 침착, 혈관 수축, 혈전 등으로 허혈을 초래하여 세포를 죽게 하는 부위이다.

따라서 본 실험에서는 약효의 탐색을 위하여 창상 전환 부위인 정체대 중에서 쥐 한 개체에서 발생하는 총 6개의 부위 중, 약물 투여를 위해 조끼를 착용하는 곳에 가까운 머리 쪽을 제외한 나머지 4개의 부위 (도면의 점선으로 표시된 직사각형 부위)에 대하여 분석하였다.

도 2의 사진 결과에서와 같이, 화상 손상 후 아무 처치를 하지 않은 화상대조군의 경우, 정체대에 가피가 형성되어 창상으로 전환되거나 상처가 분리되어 피부의 탈락이 관찰되기도 하였다. 비히클과 2-hydroxy-TTBA 투여군에서는 딱지와 같은 가피의 형성이 상대적으로 드물게 발생하였으며, 특히 2-hydroxy-TTBA 투여군의 경우 육안으로 관찰하기에도 털이 자라는 등의 양호한 피부상태로 회복되었다.

화상 후 가피의 생성과 피부 상피층의 재생 관찰( Histological Appearance of Eschar Formation and Wound Epidermis Formation )

도 3은 그룹별로 분석 조직 부위를 헤마톡실린 에오신 염색하여 상피층의 상태를 비교한 결과이다. 도 3에서와 같이, 정상대조군에서 관찰되는 건강한 모낭을 포함하여 바르게 배열된 정상 상피층(화살표로 표시된 부분)과 달리 화상대조군에서는 가피를 형성하여 염증세포를 제외하고는 정상적인 상피세포가 관찰되지 않았고, 비히클과 2-hydroxy-TTBA 투여군에서는 상피층의 재생이 진행되고 있는 것을 확인할 수 있었다. 이때 정상 상피층 두께 이상으로 상피 증식 (Hyperplasia of epidermis)이 일어난 경우도 관찰할 수 있었다. 이러한 현상을 그룹 당 총 28개 조직 부위를 분석하여(그룹당 7마리씩 4군데의 정체대 부위) 가피의 형성과 상피층 재생빈도를 측정한 결과, 화상대조군에서 발생된 약 93%의 창상 전환 빈도는 비히클과 2-hydroxy-TTBA 투여군에서 각각 약 18%와 4% 정도로 낮아졌다. 또한 재생 상피층이 관찰되는 경우도 화상대조군과 비교하여 각각 약 32%와 71%로 증가하였다. 그 결과를 하기 표 2(Histological appearance: 가피의 형성과 상피층 재생빈도)에 나타내었다.

그룹 (Groups)	화상대조군	비히클 투여군	2-hydroxy-TTBA 투여군
Eschar formation (%)	92.857	17.857	3.571
Wound epidermis formation (%)	10.714	32.143	71.429

헤마톡실린 에오신 염색을 통한 피부 전층의 조직학적 관찰( Histology of Full Thickness Skin stained by Hematoxylin and Eosin )

도 4는 헤마톡실린 에오신 염색을 통해 정체대의 피부 전층 조직 상태를 10배율에서 현미경으로 관찰한 사진이다. 화상대조군에서는 상피층, 진피층, 피하조직과 근육층까지 전층에 걸쳐 손상되었음을 알 수 있고, 가피를 형성하여 그 아래로 염증세포들이 침윤되어 있으며, 피하조직과 근육 사이에서 많은 수의 염증세포들이 존재하고 있음을 관찰할 수 있었다. 비히클 투여군은 딱지와 같은 가피를 형성하진 않았지만, 상당량의 염증세포들이 전 피부 조직과 피하 조직에 걸쳐 관찰되었으며, 재생되는 상피층 아래에 여전히 많은 수의 염증세포들이 침윤되어 있었다. 2-hydroxy-TTBA 투여군은 근육세포와 피하 조직층 부위를 제외하고는 염증세포의 침윤이 상당히 억제되어 있는 것을 알 수 있으며, 상피 재생은 물론 모낭과 피지선, 근육층에 있어서도 보호효과가 나타났다.

크레실 바이올렛을 통한 피부 전층의 조직학적 관찰( Histology of Full Thickness Skin Stained by Cresyl Violet )

도 5는 크레실 바이올렛 염색을 통하여 정체대 피부 조직의 살아있는 세포를 10배율에서 현미경으로 관찰한 사진이다. 화상대조군과 비히클 투여군에서는 모낭이 거의 관찰되지 않았으며, 많은 양의 염증세포가 피부 전층에 걸쳐서 관찰되는 반면, 2-hydroxy-TTBA 투여군에서는 살아있는 모낭과 상피층이 관찰되고 상대적으로 염증세포는 적게 관찰되었다.

Masson's trichrom 염색을 통한 피부 전층의 조직학적 관찰( Histology of Full Thickness Skin stained by Masson's trichrom )

도 6은 Masson's trichrom 염색을 통해서 정체대 피부 조직의 콜라겐과 근섬유를 관찰하였다. 정상대조군에서는 파란색의 콜라겐이 진피층 전체에 고르게 분포하고 근섬유가 붉은색으로 염색되었으나, 화상대조군에서는 가피 밑에 콜라겐이 불규칙적으로 침착되어 있으며 그 염색 정도도 정상에 비해 상대적으로 약했다. 근섬유도 거의 손상을 받아 염색이 되지 않았다. 비히클 투여군은 다른 그룹에 비해 상대적으로 콜라겐의 양이 가장 많이 관찰되었으며, 이는 정상대조군에 비해서도 굉장히 높은 수준이었다. 또한 근섬유는 손상 받아 염색이 되지 않거나, 상당량의 출혈과 염증세포의 침윤을 동반하고 있는 것이 관찰되었다. 하지만, 2-hydroxy-TTBA 투여군은 정상대조군과 비슷하게 상피층, 진피층, 피하 지방, 근육층이 구분되어 나타나며, 살아있는 모낭 주변으로 콜라겐들이 골고루 분포되어 있고 근섬유 또한 붉게 염색되어 나타났다.

Claims

하기 화학식 1로 표시되는 테트라플루오로벤질 유도체, 또는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 화상 손상의 치료 또는 예방용 약학 조성물:
<화학식 1>

상기 화학식 1에서, R₁, R₂ 및 R₃는 서로 독립적으로 수소 또는 할로겐이고; R₄는 하이드록시, 알킬, 알콕시, 할로겐, 할로겐으로 치환된 알콕시, 알카노일옥시 또는 니트로이며; R₅는 카르복시산, 탄소수 1 내지 4의 알킬기로 치환된 카르복시산, 카르복시아미드, 설폰산, 할로겐 또는 니트로임.
제 1항에 있어서, 상기 테트라플루오로벤질 유도체는 2-하이드록시-5-(2,3,5,6-테트라플루오로-4-트리플루오로메틸-벤질아미노)-벤조산, 2-니트로-5-(2,3,5,6-테트라플루오로-4-트리플루오로메틸-벤질아미노)-벤조산, 2-클로로-5-(2,3,5,6-테트라플루오로-4-트리플루오로메틸-벤질아미노)-벤조산, 2-브로모-5-(2,3,5,6-테트라플루오로-4-트리플루오로메틸-벤질아미노)-벤조산, 2-하이드록시-5-(2,3,5,6-테트라플루오로-4-메틸벤질아미노)-벤조산, 2-메틸-5-(2,3,5,6-테트라플루오로-4-트리플루오로메틸-벤질아미노)-벤조산, 2-메톡시-5-(2,3,5,6-테트라플루오로-4-트리플루오로메틸-벤질아미노)-벤조산 및 5-(2,3,5,6-테트라플루오로-4-트리플루오로메틸-벤질아미노)-2-트리플루오로메톡시 벤조산으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제 2항에 있어서, 상기 테트라플루오로벤질 유도체는 2-하이드록시-5-(2,3,5,6-테트라플루오로-4-트리플루오로메틸-벤질아미노) 벤조산인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.