JP5734953B2

JP5734953B2 - やけどによる損傷の治療または予防用薬学的組成物

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Publication number: JP5734953B2
Application number: JP2012504572A
Authority: JP
Inventors: クワァグ，ビョン−ジュ; パク，ウィ−ジン
Original assignee: Neurotech Pharmaceuticals Co Ltd
Current assignee: Neurotech Pharmaceuticals Co Ltd
Priority date: 2009-04-06
Filing date: 2010-04-05
Publication date: 2015-06-17
Anticipated expiration: 2030-04-05
Also published as: CA2757466A1; DK2417972T3; WO2010117170A3; KR20100111245A; EP2417972B1; CN102421430A; US20120289602A1; EP2417972A4; AU2016219606A1; WO2010117170A2; JP2012522834A; AU2010235334A1; CN102421430B; AU2016219606B2; KR101136513B1; CA2757466C; EP2417972A2; ES2633691T3

Description

本発明は、やけど（熱傷・火傷）による損傷の治療または予防に有用な薬学的組成物及びやけど（熱傷・火傷）による損傷を治療または予防する方法に関する。

やけどは、主に事故により発生し、原因に応じて、熱によるやけど、電流によるやけど、化学物質によるやけど、放射線によるやけどなどに分類することができる。やけどの重症度は、やけどをした面積の広さ、深さ、やけどを誘発した物体の温度と接触時間、皮膚の状態などに応じて１度、２度、３度と４度のやけどに分かれ、２度のやけどからは傷跡が残し得るため、病院での治療を要する。

１度のやけどは、皮膚が赤くなり、ひりひり感などの痛みを伴う。皮膚層の最も外層である表皮の損傷をもたらし、痛みや紅斑を伴いながら、腫れ上がることもある。数日内に症状がなくなるが、その部位に軽い落屑や色素沈着が残る場合もある。回復後に瘢痕は残らない。日焼けによるやけど（ｓｕｎｂｕｒｎ）の場合は、最も一般的な１度のやけどの例である。

２度のやけどは表皮と真皮両方に影響を及ぼし、紅斑、痛み、腫れ、そして事故後２４時間以内に水ぶくれを生じさせる。このやけどはまた、汗腺や毛穴に影響を及ぼすこともある。自覚的には灼熱感や痛みがひどい。水泡が破れてしまえばびらん面を示し、多量の分泌液が出てくる。やけどを受けた面積が体表面積の約１５％以上にいたる場合には特に注意を要する。数週間以内に治癒されるが、その場所に色素沈着や色素脱失が残ることが多い。二次感染を起こせば、局所症状はさらに激しく経過も長続きする。

３度のやけどは表皮、真皮、そして皮下まで影響を及ぼすことによって皮膚が黒くなったり、半透明の白になって、皮膚表面のすぐ下の血管を凝固させる。このやけどの部位は感覚がなくなることもがあり得るが、患者は激しい痛みを感じ、皮膚組織と構造が壊死することになって、治療に時間がかかり、後に傷跡が残ることになる。事故後２週間が経過すると、かさぶたが剥がれて潰瘍面が現れる。分泌液が多く、出血しがちであるが、徐々に新しい組織が生じ、表皮が再生され、瘢痕が残って治癒される。皮膚壊死が深い場合、または２次感染を起こした場合、治療が遅れて瘢痕表面が不規則になり、ケロイドができたり、変形や運動障害が残ったりする。やけどをした面積が体表面積の１０％以上に及ぶ場合には特に注意を要する。

４度のやけどは、やけどを受けた部位の組織が炭化して黒く変化した場合であり、皮膚層の下にある脂肪層、靭帯、筋膜、筋肉、骨組織などまでやけどをした場合をいう。高圧電気によるやけどで主に発生し、場合によっては深在性２〜３度のやけどで、菌の感染が発生した場合に生じることがある。やけどの範囲が２０％以上の場合、全身的な身体反応が起こり得るが、過度な体液の損失に伴う低血圧、ショック、急性腎不全などが生じ得、のちに傷の感染症や肺炎、敗血症、多発性臓器機能不全症候群などが発生することもある。

やけどの治療は、できるだけ早く、初期やけどの創傷を治癒したり、やけどの部位を減らすことが重要である。初期やけどの患部ドレッシングで感染症や炎症の調節、湿潤環境の維持、皮膚の再生を助ける成長因子やサイトカインの投与、局所的なヘパリンの使用等による深部やけどへの転換を防止する初期治療が強調されている。

これらのやけどによる損傷の深刻性を考慮すると、やけどによる損傷の治療または予防に有用な治療薬が開発される場合、やけど患者の治療、状態の改善および傷跡の減少に大いに役立つだろう。

したがって、本発明が成し遂げようとする技術的課題は、やけどによる損傷の治療または予防に有用な薬学的組成物及びこのような組成物の医学的な用途を提供することである。

前記の技術的課題を達成するために、本発明は下記の化学式１で表されるテトラフルオロベンジル（ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏｂｅｎｚｙｌ）誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を含むことを特徴とするやけどの治療または予防用薬学的組成物を提供する。

上記の化学式１において、
上記の化学式１において、Ｒ_１、Ｒ_２、及びＲ_３はそれぞれ独立して水素またはハロゲンであり；
Ｒ_４はヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、ハロゲンで置換されたアルコキシ、アルカノルオキシまたはニトロであり；
Ｒ_５は、カルボン酸、アルキル基で置換されたカルボン酸、カルボン酸アミド、スルホン酸、ハロゲンまたはニトロである。

すなわち、本発明は、やけどによる損傷の治療または予防のため、上記のテトラフルオロベンジル誘導体及びその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物の薬学的組成物および医薬用途を提供する。

上記の化学式１で、アルキルは、炭素数１ないし５のアルキルであることが好ましく、炭素数１または３のアルキルであることがより望ましい。具体的には、上記のアルキルはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、２次‐ブチル及び３次‐ブチル基が望ましいが、これらに限定されるものではない。アルコキシは炭素数１ないし５のアルコキシであることが好ましく、炭素数１または３であるアルコキシであることがより望ましい。具体的には、上記のアルコキシはメトキシ、エトキシ、プロトキシ基が望ましいが、これらに限定されるものではない。ハロゲンはフッ素、塩素、臭素及びヨードであることが望ましいが、これらに限定されるものではない。アルカノイル（ａｌｋａｎｏｙｌ）は、炭素数２〜１０のアルカノルであることが好ましく、炭素数２または５のアルカノルであることがより望ましい。具体的には、上記のアルカノルとしてはエタンノイル（ｅｔｈａｎｏｙｌ）、プロパノイル（ｐｒｏｐａｎｏｙｌ）、およびシクルロヘクサンカルボニル（ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｃａｒｂｏｎｙｌ）が望ましいが、これらに限定されるものではない。アルカノルオキシは、炭素数１ないし４のアルカノルオキシであることが望ましい。

前記の化学式１で表されるテトラフルオロベンジル誘導体の好ましい例は２‐ヒドロキシ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ−４−トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸（２‐Ｈｙｄｒｏｘｙ‐５‐（２，３，５，6‐ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏ‐４‐ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ−ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｏ）−ｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ）（以下、「２‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐ＴＴＢＡ」とする）、２‐ニトロ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸（２‐Ｎｉｔｒｏ‐５‐（２，３，５，6‐ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏ‐４‐ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ‐ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｏ）‐ｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ）、２‐クロロ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸（２‐Ｃｈｌｏｒｏ‐５‐（２，３，５，6‐ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏ‐４‐ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ‐ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｏ）‐ｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ）、２‐ブロモ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸（２‐Ｂｒｏｍｏ‐５‐（２，３，５，6‐ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏ‐４‐ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ‐ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｏ）‐ｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ）、２‐ヒドロキシ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐メチルベンジルアミノ）‐安息香酸（２‐Ｈｙｄｒｏｘｙ‐５‐（２，３，５，6‐ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏ‐４‐ｍｅｔｈｙｌ‐ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｏ）‐ｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ）、２‐メチル‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸（２‐Ｍｅｔｈｙｌ‐５‐（２，３，５，6‐ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏ‐４‐ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ‐ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｏ）‐ｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ）、２‐メトキシ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸（２‐Ｍｅｔｈｏｘｙ‐５‐（２，３，５，6‐ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏ‐４‐ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ‐ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｏ）‐ｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ）または、５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐２‐トリフルオロメトキシ安息香酸（５‐（２，３，５，6‐Ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏ‐４‐ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ‐ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｏ）‐２‐ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ）を含むが、これらに限定されるものではない。

本発明において、やけどは一般的に熱によって、皮膚細胞が破壊されたり壊死される現象を言い、例えば、火災による炎やけど、熱い液体（水、油など）による熱湯やけど、高温の物体（電気アイロン、炊飯器等）の接触による接触やけど、強酸、強アルカリ等による化学やけど、その他の夏の強い紫外線による日焼けや、放射線およびＸ線露光による放射線やけどを含むが、これらに限定されるものではない。また、本発明のやけどは１度、２度、３度または４度のやけどであることができる。

本発明による化学式１のテトラフルオロベンジル誘導体およびこれらの薬学的に許容可能な塩または溶媒和物は、これらのやけどによる損傷の治療または予防のために使用することができるが、上記やけどの具体的種類ややけどの程度（深刻度）に限定されるものではない。

本発明のテトラフルオロベンジル誘導体またはその薬学的に許容可能な塩は、米国特許第６，９２７，３０３号に開示された製造方法によって製造することができるが、本発明は、このような製造方法に限定されるものではない。

本発明に係る化合物々にとって、いくつかの化合物は薬学的に許容可能な塩の形態で投与することができる。「薬学的に許容可能な塩」は、毒性がないか少ない酸または塩基で製造された塩を言う。本発明の化合物が相対的に酸性の場合、塩基（ｂａｓｅ）付加塩は十分な量の所望の塩基と適切な不活性（ｉｎｅｒｔ）溶媒によりその化合物の中性形態を接触して得ることができる。薬学的に許容可能な塩基付加塩は、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、マグネシウムまたは有機アミノで構成される塩を含むが、これらに限定されるものではない。本発明の化合物が相対的に塩基性である場合、酸（ａｃｉｄ）付加塩は十分な量の所望の酸と適当な不活性溶媒によりその化合物の中性形態を接触して得ることができる。薬学的に許容可能な酸付加塩は、プロピオン酸、イソブチル酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸（ｓｕｂｅｒｉｃ）、フマル酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ‐トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸、塩酸、ブロム酸、硝酸、炭酸、一水素炭酸（ｍｏｎｏｈｙｄｒｏｇｅｎｃａｒｂｏｎｉｃａｃｉｄ）、リン酸、一水素リン酸、二水素りん酸、硫酸、一水素硫酸、よう化水素、亜リン酸（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓａｃｉｄ）などで形成された塩を含むが、これらに限定されるものではない。また、アルジネート（ａｒｇｉｎａｔｅ）のようなアミノ酸の塩及びグルクロニック（ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃ）またはガラクツロン（ｇｌａｃｔｕｎｏｒｉｃ）酸のような有機酸の類似塩を含むが、これらに限定されるものではない。

本発明はまた、上記化合物の溶媒和物、特に水和物の形態を含み、溶媒和された形態（例えば、水和物）だけでなく、非溶媒和（ｕｎｓｏｌｖａｔｅｄ）形も含む。また、本発明の上記化合物は、結晶形または無定形の形で存在し得、これらのすべての物理的形状は、本発明の範囲に含まれる。また、本発明の化合物は、化合物によって光学中心の不斉炭素原子または二重結合を有し得、ラセミ体、鏡像異性体（エナンチオマー）、ジアステレオマー（Ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒ）、幾何異性体などが存在することができ、これらもまた、本発明の範囲に含まれる。

本発明はまた、上記化合物またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物及び薬剤学的に許容される賦形剤や添加剤を含む薬学的組成物を提供する。本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩／溶媒和物は、単独で、あるいはいくつかの便利な担体、賦形剤などと一緒に混合して投与することができ、そのような投与剤形は、単回投与または反復投与剤形であることができる。

本発明の薬学的組成物は、固形製剤または液状製剤であることができる。固形製剤は、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、坐剤などがあるが、これらに限定されるものではない。固形製剤には、賦形剤、着香剤、結合剤、防腐剤、崩壊剤、滑沢剤、充填剤などが含まれることができるが、これらに限定されるものではない。液状製剤は、水、プロピレングリコール溶液のような溶液剤、懸濁液剤、乳剤などがあるが、これらに限定されるものではなく、適切な着色剤、着香剤、安定化剤、増粘剤などを添加して製造することができる。

たとえば、散剤は、本発明のテトラフルオロベンジル誘導体化合物と、乳糖、デンプン、微結晶セルロース等の薬剤学的に許容される適当な賦形剤を、単純混合することにより製造することができる。顆粒剤は、本発明のテトラフルオロベンジル誘導体；薬剤学的に許容される適当な賦形剤、およびポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース等の薬剤学的に許容される適当な結合剤を混合した後、水、エタノール、イソプロパノールなどの溶媒を用いた湿式造粒法または圧縮力を利用した乾式造粒法を用いて製造することができる。また、錠剤は、上記顆粒剤をステアリン酸マグネシウム等の薬剤学的に許容される適切な滑沢剤を混合した後、打錠機を用いて打錠することにより製造することができる。

本発明の薬学的組成物は、治療すべき疾患、およびオブジェクトの状態に応じて経口剤、注射剤（例えば、筋肉内注射、腹腔内注射、静脈内注射、注入（ｉｎｆｕｓｉｏｎ）、皮下注射、インプラント）、吸入剤、点鼻剤、膣に適用する製剤、直腸に適用する製剤、舌下錠、経皮製剤、局所用製剤などで投与されることができるが、これらに限定されるものではない。投与経路によって通常使用され、非毒性の、薬剤学的に許容される担体、添加剤、ビークルを含む適切な投与単位剤形に製剤化することができる。一定時間薬物を持続的に放出できるデポー（ｄｅｐｏｔ）剤形もまた本発明の範囲に含まれる。

本発明はまた、上記の化学式１の化合物、その薬学的に許容可能な塩または溶媒和物の治療学的に有効な量のやけどによる損傷の治療や予防が必要なオブジェクトに投与することを含むやけどによる損傷の治療または予防方法を提供する。

やけどによる損傷の治療のための使用において、本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物は、毎日約０．１ｍｇ／ｋｇないし約１０００ｍｇ／ｋｇを投与することができ、約２．５ｍｇ／ｋｇないし約５００ｍｇ／ｋｇの１日投与量が望ましい。しかし、上記投与量は患者の状態（年齢、性別、体重など）、治療している状態の深刻度、使用された化合物などによって変わり得る。必要に応じて、利便性のために１日の総投与量を分け、一日複数回に分けて投与することができる。

本発明は、上記化学式１の化合物、その薬学的に許容可能な塩または溶媒和物を有効成分として含むことを特徴とするやけどによる損傷の治療や予防に有用な薬学的組成物を提供する。本発明は、また、上記化学式１の化合物、その薬学的に許容可能な塩、または溶媒和物のやけどによる損傷の治療や予防に対する用途を提供する。本発明は、また、上記化学式１の化合物、薬学的に許容可能な塩または溶媒和物の治療学的に有効な量をやけどによる損傷の治療や予防が必要なオブジェクトに投与することを含むやけどによる損傷の治療または予防方法を提供する。

血液化学検査により血清中の乳酸脱水素酵素（ｌａｃｔａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）の濃度を測定した結果であり、これにより、２‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐ＴＴＢＡがやけどの治療に有効であることを示すグラフである。やけどの損傷後、７日目に、背中の皮膚を観察した写真である。２‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐ＴＴＢＡを投与する場合、やけどの損傷が比較的早く回復されることを把握できる。分析組織部位の上皮層の状態をヘマトキシリン・エオシン（ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎｅｏｓｉｎ）染色により観察した写真の結果である。ヘマトキシリン・エオシン染色により停滞帯（ｚｏｎｅｏｆｓｔａｓｉｓまたはｚｏｎｅｏｆｔｉｓｓｕｅｉｎｊｕｒｙ）の皮膚の全層組織の状態を１０倍率で観察した顕微鏡写真の結果である。クレシルバイオレット（ｃｒｅｓｙｌｖｉｏｌｅｔ）染色を通じて停滞帯（ｚｏｎｅｏｆｓｔａｓｉｓまたはｚｏｎｅｏｆｔｉｓｓｕｅｉｎｊｕｒｙ）の皮膚組織の生きた細胞を１０倍率で観察した顕微鏡写真の結果である。Ｍａｓｓｏｎ’ｓｔｒｉｃｈｒｏｍ染色を通じて停滞帯の皮膚組織のコラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）と筋線維を観察した顕微鏡写真の結果である。

以下、本発明の理解を助けるために実施例などを挙げて詳細に説明することにする。しかし、本発明による実施例は、さまざまな形に変形されることができ、本発明の範囲が下記の実施例に限定されるものと解釈されてはならない。本発明の実施例は、当業界で平均的な知識を持った者に本発明をより完全に説明するために提供されるものである。

＜実施例１＞接触による熱傷に対する治療効果
２‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐ＴＴＢＡのやけどに対する治療効果を検証するために、沸騰したお湯（１００℃維持）で３分間予熱した青銅製の櫛（ｂｒａｓｓｃｏｍｂ）を使用して、３０秒の間、ラットの背中皮膚の両側に接触によるに熱傷を誘発した。５分後に２‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐ＴＴＢＡ１０ｍｇ／５ｍｌ／ｋｇを５分にかけて静脈内注射（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）した。その後、１日２回（１０〜１２時間の間隔で）、全部で７日間、同じように投与を継続した。ビークル（Ｖｅｈｉｃｌｅ）投与群では薬物のみが含まれていない同量の生理食塩水のみを同様に投与した。実験グループ（ＧｒｏｕｐｉｎｇｏｆＲａｔｓｆｏｒＢｕｒｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ）は、下記の表１のとおりである。

上記の表１に、結果分析時の比較のために、正常対照群の動物数と各グループの実験動物数、およびやけどの損傷後、７日内に死亡した個体数を示した。やけどの損傷後、何も処理していないやけど対照群では２匹のラットがそれぞれ５日と７日目に死亡し、他の実験群では全て生存している。

〔血液化学検査による血清中の乳酸脱水素酵素（ｌａｃｔａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）の測定〕
乳酸脱水素酵素（ｌａｃｔａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ；ＬＤＨ）は、ほぼすべての組織に分布している酵素としてピルビン酸（ｐｙｒｕｖｉｃａｃｉｄ）と乳酸（ｌａｃｔｉｃａｃｉｄ）との間の可逆的転換に関与して触媒作用をする。組織や細胞が破壊されるときは、血液中に流れ出て、血中のＬＤＨが上昇すると知られている。このため、検査の妨げになる可能性がある溶血した検体を除いた血清から、各グループ間のＬＤＨ量を調査した。その結果を図１に示した。

図１に表示されるように、やけど対照群は正常対照群に比べてＬＤＨが約２倍に増加し、２‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐ＴＴＢＡ投与群ではＬＤＨがやけど対照群に比べ有意義に減少した。

〔やけどの後、背中の皮膚変化の観察（Ａｐｐｅａｒａｎｃｅｏｆｂｕｒｎｓ７ｄａｙｓａｆｔｅｒｉｎｊｕｒｙｉｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｓ）〕
図２は、やけどの損傷後、７日目の背中の皮膚を観察した写真である。実験群のラットの背中の両側に予熱した青銅製の櫛（Ｂｒａｓｓｃｏｍｂ）を使用して、４つの１０×２０ｍｍの大きさの長方形に皮膚の全層火傷を誘導した。誘導後、２時間目には、背中の皮膚の両側に黒ずんでいる青白い色の４つの凝固帯（ｚｏｎｅｏｆｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎｏｒｚｏｎｅｏｆｔｉｓｓｕｅｎｅｃｒｏｓｉｓ）と３つの停滞帯（ｚｏｎｅｏｆｓｔａｓｉｓｏｒｚｏｎｅｏｆｔｉｓｓｕｅｉｎｊｕｒｙ）が発生した。凝固帯は不可逆的な細胞の損傷部位であって、時間が経っても回復が不能であり、停滞帯は２４〜４８時間内に特別な処置がなければ細胞の壊死が進行する部位であって、持続的なフィブリン沈着、血管収縮、血栓などで虚血が発生し、細胞を死なせる部位である。

したがって、本実験では、薬効の探索のために、創傷の転換部位である停滞帯の中でラット一匹のオブジェクトで発生する総６つの部位のうち、薬剤投与のためにベスト（ｖｅｓｔ）を着用しているところに近い頭の方を除いた残りの４つの部位（図の点線で示されている長方形の部分）について分析した。

図２の写真の結果と同様に、やけどの損傷後に何の処置もしていないやけど対照群の場合、停滞帯に痂皮が形成され創傷になったり、傷が分離され、皮膚の脱落が観察されたりした。ビークルと２‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐ＴＴＢＡ投与群では、かさぶたのような痂皮の形成が相対的に稀に発生し、特に２‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐ＴＴＢＡ投与群では、肉眼で観察しても毛が伸びるなど、良好な皮膚の状態に回復された。

〔やけどから痂皮の生成と皮膚の上皮層の再生観察（ＨｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌＡｐｐｅａｒａｎｃｅｏｆＥｓｃｈａｒＦｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄＷｏｕｎｄＥｐｉｄｅｒｍｉｓＦｏｒｍａｔｉｏｎ）〕
図３は、グループ別に分析組織の部位をヘマトキシリン・エオシン染色し、上皮層の状態を比較した結果である。図３に示すように、正常対照群で観察される健康な毛包を含めて正しく配列された通常の上皮層（矢印で表示された部分）とは違って、やけど対照群では、痂皮を形成し、炎症細胞を除いては、正常な上皮細胞が観察されておらず、ビークル投与群と２‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐ＴＴＢＡ投与群では上皮層の再生が進んでいることが確認できた。このとき、通常の上皮層の厚さ以上に、上皮増殖（Ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａｏｆｅｐｉｄｅｒｍｉｓ）が起きた場合も観察することができた。このような現象を、グループごとに合計２８個の組織の部位を分析し、（グループごとに７匹ずつの４カ所の停滞帯の部位）痂皮の形成と上皮層の再生頻度を測定した結果、やけど群で発生した約９３％の創傷転換頻度は、ビークル投与群と２‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐ＴＴＢＡ投与群でそれぞれ約１８％と４％程度に低下した。また、再生上皮層が観察される場合にも、やけど対照群と比較して、それぞれ約３２％と７１％に増加した。その結果を下記の表２（Ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌａｐｐｅａｒａｎｃｅ：痂皮の形成と上皮層の再生頻度）に示した。

〔ヘマトキシリン・エオシン染色による皮膚全層の組織学的観察（ＨｉｓｔｏｌｏｇｙｏｆＦｕｌｌＴｈｉｃｋｎｅｓｓＳｋｉｎｓｔａｉｎｅｄｂｙＨｅｍａｔｏｘｙｌｉｎａｎｄＥｏｓｉｎ）〕
図４は、ヘマトキシリン・エオシン染色を使って停滞帯の皮膚全層組織の状態を１０倍率の顕微鏡で観察した写真である。やけど対照群では上皮層、真皮層、皮下組織や筋肉層まで全層にわたって損傷されていることが分かり、痂皮を形成し、その下に炎症細胞が浸潤しており、皮下組織と筋肉の間で多数の炎症細胞が存在していることを観察することができた。ビークル投与群は、かさぶたのような痂皮を形成していないが、相当量の炎症細胞が全皮膚組織や皮下組織にかけて観察され、再生される上皮層の下にまだ多くの炎症細胞が浸潤していた。２‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐ＴＴＢＡ投与群では筋細胞や皮下組織層の部位を除いては、炎症細胞の浸潤がかなり抑えられていることがわり、上皮の再生はもちろん、毛包や皮脂腺、筋肉層においても、保護効果が認められた。

〔クレシルバイオレットによる皮膚全層の組織学的観察（ＨｉｓｔｏｌｏｇｙｏｆＦｕｌｌｔｈｉｃｋｎｅｓｓｓｋｉｎｓｔａｉｎｅｄｂｙＣｒｅｓｙｌＶｉｏｌｅｔ）〕
図５は、クレシルバイオレット染色を介して停滞帯組織の生きた細胞を１０倍率の顕微鏡で観察した写真である。やけど対照群とビークル投与群では、毛包がほとんど観察されておらず、大量の炎症細胞が皮膚の全層に渡って観察される一方、２‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐ＴＴＢＡ投与群では生きている毛包と上皮層が観察され、相対的に炎症性細胞は少なく観察された。

〔Ｍａｓｓｏｎ’ｓｔｒｉｃｈｒｏｍ染色による皮膚全層の組織学的観察（ＨｉｓｔｏｌｏｇｙｏｆＦｕｌｌＴｈｉｃｋｎｅｓｓＳｋｉｎｓｔａｉｎｅｄｂｙＭａｓｓｏｎ’ｓｔｒｉｃｈｒｏｍ）〕
図６は、Ｍａｓｓｏｎ’ｓｔｒｉｃｈｒｏｍ染色を通じて停滞帯皮膚組織のコラーゲンと筋線維を観察した顕微鏡写真の結果である。正常対照群では、青色のコラーゲンは、真皮層全体に均一に分布して筋線維が赤色に染色されたが、やけど対照群では、痂皮の下にコラーゲンが不規則に沈着しており、その染色程度も、通常に比べて相対的に弱かった。筋線維もほとんど損傷を受けて染色されなかった。ビークル投与群では、他のグループに比べて相対的にコラーゲンの量が最も多く観察され、これは正常対照群に比べても非常に高い水準だった。また、筋線維は損傷を受けて染色されなかったり、または、相当量の出血と炎症細胞の浸潤を伴っていることが観察された。しかし、２‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐ＴＴＢＡ投与群では正常対照群と同様に上皮層、真皮層、皮下脂肪、筋肉層に区分されて現れ、生きている毛包の周囲にコラーゲンが均等に分布しており筋線維もまた、赤く染色されて現れた。

Claims

下記の化学式１で表されるテトラフルオロベンジル誘導体、またはこれらの薬学的に許容可能な塩を有効成分として含むことを特徴とするやけどによる皮膚の損傷を治療または予防するための薬学的組成物：
上記の化学式１において、Ｒ_１、Ｒ_２、およびＲ_３は、相互独立して水素またはハロゲンであり；Ｒ_４はハイドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、ハロゲンで置換されたアルコキシ、アルカノルオキシまたはニトロであり、Ｒ_５は、カルボン酸、炭素数１ないし４のアルキル基で置換されたカルボン酸、カルボン酸アミド、スルホン酸、ハロゲン、またはニトロである。
上記のテトラフルオロベンジル誘導体は、２‐ヒドロキシ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸、２‐ニトロ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸、２‐クロロ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸、２‐ブロモ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸、２‐ヒドロキシ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐メチルベンジルアミノ）‐安息香酸、２‐メチル‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸、２‐メトキシ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸、および５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐２‐トリフルオロメトキシ‐安息香酸からなる群から選択されたいずれか一つ以上であることを特徴とする請求項１に記載の薬学的組成物。
上記のテトラフルオロベンジル誘導体は、２‐ヒドロキシ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸であることを特徴とする請求項２に記載の薬学的組成物。
下記の化学式１で表されるテトラフルオロベンジル誘導体，またはそれらの薬学的に許容可能な塩の、やけどによる皮膚の損傷を治療または予防するための製剤の製造における、使用：
上記の化学式１において、Ｒ_１、Ｒ_２、およびＲ_３は、相互独立して水素またはハロゲンであり；Ｒ_４は、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、ハロゲンで置換されたアルコキシ、アルカノルオキシ、またはニトロであり；Ｒ_５は、カルボン酸、炭素数１ないし４のアルキル基で置換されたカルボン酸、カルボン酸アミド、スルホン酸、ハロゲン、またはニトロである。
上記のテトラフルオロベンジル誘導体は、２‐ヒドロキシ‐５‐（２，３，５，6‐テ
トラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸、２‐ニトロ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸、２‐クロロ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸、２‐ブロモ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸、２‐ヒドロキシ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐メチルベンジルアミノ）‐安息香酸、２‐メチル‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸、２‐メトキシ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸、および５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐２‐トリフルオロメトキシ安息香酸からなる群から選択されたいずれか一つ以上であることを特徴とする請求項４に記載の使用。
上記のテトラフルオロベンジル誘導体、２‐ヒドロキシ‐５‐（２，３，５，6‐テトラフルオロ‐４‐トリフルオロメチル‐ベンジルアミノ）‐安息香酸であることを特徴とする請求項５に記載の使用。