KR20100088160A

KR20100088160A - Ｃｍｔ 및 관련 장애를 치료하기 위한 신규 치료적 접근법

Info

Publication number: KR20100088160A
Application number: KR1020107014240A
Authority: KR
Inventors: 다니엘 코헨; 일리야 추마코프; 옥사나 구에라시멘코; 세르구이 나비로츠킨
Original assignee: 파넥스트
Priority date: 2007-11-30
Filing date: 2008-11-28
Publication date: 2010-08-06
Also published as: AU2008328745B2; NZ585440A; EP2211846A1; US10463640B2; PL2609916T3; TR201819564T4; EA201791669A3; JP6608309B2; SI2211846T1; EP2609916A1; KR101546031B1; EA032767B1; EP3459535B1; CA3031490C; HRP20130345T1; CA3031490A1; IL205741A0; CY1121183T1; EA019402B1; ES2831855T3

Abstract

본 발명은 샤르코-마리-투스 질환(Charcot-Marie-Tooth disease) 및 관련 장애를 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 객체에서의 PMP22 발현을 감소시키는 조합치료법에 관한 것이다.

Description

ＣＭＴ 및 관련 장애를 치료하기 위한 신규 치료적 접근법{NEW THERAPEUTIC APPROACHES FOR TREATING CMT AND RELATED DISORDERS}

본 발명은 샤르코-마리-투스 질환(Charcot-Marie-Tooth disease) 및 관련 장애를 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.

샤르코-마리-투스 질환 (Charcot-Marie-Tooth disease; "CMT")은 소아 유전 말초 다발성 신경장애(peripheral poly neuropathy)이다. 2,500명 중 약 1명에게 발병하는, 본 질환은 말초 신경 장애의 가장 흔한 유전 장애이다. 이 장애는 전형적으로 비록 유년기에 탐지될 수 있음에도 불구하고 10대 또는 20대에 발병한다. 본 질환의 원인은 점진적 신경근 변성증 (gradual neuromuscular degeneration)이 만성화되는 것이다. 본 질환은 동반하는 신경성 통증 및 극심한 근육 장애 증상으로 입증된다. CMT는 프랑스에서 약 30,000 명에 대한 유전적 병리원에 대해 가장 많이 연구된 분야이다. 대다수의 CMT 환자가 미엘린(myelin) 유전자(PMP22; CMT1A 형)를 포함하는 크로모좀 (chromosome) 17 단편의 중첩(duplication)을 품고 있는 반면에, 24개 유전자가 상이한 형태의 CMT와 관련된다. 따라서 기원상 단일 유전자임에도 불구하고, 이 병태는 가능한 조절 유전자로 기인한 임상적 이질성을 나타낸다. CMT 환자에서의 변이된 유전자는 슈완세포 (Schwann cells) 또는 신경세포의 분화에 영향을 미치거나 말초 신경에서의 이러한 세포들의 상호작용을 변화시키는 주변으로 밀집하고 단단하게 연계된 분자 경로들이다.

PMP22는 말초신경계에서 필수적으로 모든 유수 신경이 밀집된 부위상에서 발현되는 미엘린의 주요 구성요소이고 슈완세포 (Schwann cells)에서 주로 생산된다. 약간의 정상 PMP22 단백질의 1.5배 높은 과발현도 CMT 환자에서의 중첩으로 이질적인 슈완세포도 관찰되었다 (희귀한 사례로서 CMT1A-유사 표현형도 PMP22 단백질에서의 구조적 변이와 연계될 수 있다) (Lupski et al., 1992; Suter et al., 1992; Roa et al., 1993; Thomas et al., 1997; Suter & Scherer, 2003; Nave & Sereda, 2007). 비정상적인 PMP22 유전자 투여가 CMT1A-유사 표현형을 유발함을 PMP22 단백질로 과발현시킨 설치류 모델을 이용한 유전자 이식 실험에서 밝혀졌다 (Niemann et al., 1999; Perea et al., 2001; Robaglia-Schlupp et al., 2002; Meyer et al., 2006; Sereda & Nave, 2006). 게다가, 프로게스테론(progesterone) 수용체의 특이적 저해제인 오나프리스톤 (onapristone) (Sereda et al., 2003; Meyer zu Horste et al., 2007): 및 아스코르빈 산(ascorbic acid)(Passage et al., 2004)에 의한 치료학적 간섭이 상기 질환의 증상 진행을 경감시키거나 감소시키는 발현상의 감소를 나타냈다.

PMP22 단백질이 수초(myelin sheaths)의 구조적 구성요소일뿐만 아니라, 슈완세포에서의 다발성 형질 변이체를 초래하는 중요한 조절 단백질임이 이미 기존 실험에서 실험적으로 규명되었다. 상기 단백질의 정상 수준 농도와 변이성 CMT1A 신경 교질 세포에서 정상 기능상의 변화와의 정확한 관련 기전은 아직 완전하게 밝혀지진 않았으나, 슈완세포 생리에 대한 이들의 악영향을 잠재적으로 설명할 몇 가지 세포 기전들이 밝혀지기 시작했다.

CMT1A 질병의 분자 기전 및 병리학적 증상을 설명하는 공중에 입수 가능한 데이타의 수집을 기반으로 하여, 몇 개의 기능적인 세포성 모듈(cellular modules) (1) PMP22 유전자 전사 조절, (2) PMP22 단백질 접힘(folding)/분해(degradation), (3) 슈완세포 증식 및 세포 사멸, (4) 세포외 매트릭스 (matrix) 고착 및 리모델링(remodelling), (5) 면역 반응의 순으로 CMT-관련 치료학적 간섭을 위한 잠재적으로 합리적인 목표로서 우선 순위를 매길 수 있다. 이러한 비조절된 기능적 요소들의 시발점상의 조합된 충격 및 샤르코-마리-투스 질환의 병적 증상의 진행은 조합적인 CMT 치료법이 잠재적으로 효율성을 나타냄을 정당화한다.

CMT 병리학의 역동적 초기 치료설계는 CMT1A 질환-관련 세포 신호경로의 기능적 조절을 목표화하는 시중 구입가능한 약물 선택에 의하여 수행가능하다.

본 발명의 목적은 샤르코-마리-투스 질환(Charcot-Marie-Tooth disease) 및 관련 장애를 치료하기 위한 새로운 치료학적 접근법을 제공하는 것이다. 또한 객체의 PMP22 발현 조절을 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.

본 발명자들은 CMT 및 관련 장애를 개선시키기 위해 객체에서 조절 가능한 다양한 신호경로를 동정하였다. 또한 본 발명자들은 조합 또는 단독으로 CMT 및 관련 장애를 초래하는 신호 경로에 효과적으로 영향을 미칠 수 있고 이러한 장애를 치료하기 위한 새로운 치료법을 대표할 수 있는 몇 가지 약물을 발견하였다.

따라서, 본 발명은 CMT 질환 및 관련 장애를 치료하기 위한 새로운 조성물 및 방법을 제공하는 것이다.

보다 상세하게는, 본 발명의 목적은 CMT 질환 및 관련 장애를 치료하기 위한(약제 제조를 위한), GABA-B 수용체 작용제, 무스카린성(muscarinic) 수용체 작용제, 스테로이드 호르몬 수용체 길항제, D-소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, 오피오이드(opioid) 수용체 길항제 또는 부분 작용제, 갑상선 호르몬 신호 전달 저해제, ERK (세포외 신호-조절 키나제; extracellular signal-regulated kinase) 활성화제, pAkt 키나제 저해제(kinase inhibitor), COX 저해제 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 화합물 조합의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 CMT 질환 및 관련 장애를 치료하기 위한(약제 제조를 위한), 화합물 A: D-소르비톨 (Sorbitol, CAS 50-70-4) 및 이의 가능한 염, 전구체 및 유도체; 화합물 B: 바클로펜 (Baclofen, CAS 1134-47-0) 및 바클로펜 염산염 (CAS 63701-56-4) 및 이의 가능한 염, 전구체 및 유도체; 화합물 C: 필로카핀, (Pilocarpine, CAS 92-13-7) 및 필로카핀 염산염 (CAS 54-71-7) 및 이의 가능한 염, 전구체 및 유도체; 화합물 D: 날트렉손 (Naltrexone, CAS 16590-41-3) 및 날트렉손 염산염 (CAS 16676-29-2) 및 이의 가능한 염, 전구체 및 유도체; 화합물 E: 메티마졸 (Methimazole, CAS 60-56-0) 및 이의 가능한 염, 및 유도체; 화합물 F: 미페프리스톤 (Mifepristone, CAS 84371-65-3) 및 이의 가능한 염, 전구체 및 유도체; 몬테루카스트 (Montelukast, CAS 158966-92-8) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 케토프로펜 (Ketoprofen, CAS 22071-15-4) 및 케토프로펜 나트륨염 (CAS 57495-14-4) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 화합물 G 또는 이들의 개개 화합물들로부터 선택된 화합물 조합들의 용도와 관련된 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 CMT 질환 및 관련 장애를 치료하기 위한(약제 제조를 위한), 아세타졸아미드 (Acetazolamide, CAS 59-66-5) 및 이의 나트륨염 (CAS 1424-27-7) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 아미노글루테티미드 (Aminoglutethimide, CAS 125-84-8) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 아즈트레오남 (Aztreonam, CAS 78110-38-0) 및 아즈트레오남 이나트륨염 (CAS 80581-86-8) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 바클로펜 (Baclofen, CAS 1134-47-0) 및 바클로펜 염산염 (CAS 63701-56-4) 및 이의 가능한 염, 전구체 및 유도체; 발살라지드 (Balsalazide, CAS 80573-04-2), 150399-21-6 (이나트륨염), 213594-60-6 (이나트륨염), 및 82101-18-6 및 이의 가능한 염 및 유도체; 비칼루트아미드 (Bicalutamide, CAS 90357-06-5) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 브로모크립틴 (Bromocriptine, CAS 25614-03-3) 및 이의 메실레이트염 (CAS 22260-51-1) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 부메트아니드 (Bumetanide, CAS 28395-03-1) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 부스피론 (Buspirone, CAS 36505-84-7) 및 이의 염산염 (CAS 33386-08-2) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 시프로플록사신 (Ciprofloxacin, CAS 85721-33-1) 및 이의 염산염 (CAS 86393-32-0) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 클로니딘 (Clonidine, CAS 4205-90-7) 및 이의 염산염 (CAS 4205-91-8) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 시클로스포린 (Cyclosporine) A (CAS 59865-13-3) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 디설피람 (Disulfiram, CAS 97-77-8) 및 이의 가능한 염, 전구체 및 유도체; 엑세메스탄 (Exemestane, CAS 107868-30-4) 및 이의 가능한 염, 전구체 및 유도체; 펠바메이트 (Felbamate, CAS 25451-15-4) 및 이의 가능한 염, 전구체 및 유도체; 페노피브레이트 (Fenofibrate, CAS 49562-28-9) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 피나스테리드 (Finasteride, CAS 98319-26-7) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 플루마제닐 (Flumazenil, CAS 78755-81-4) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 플루니트라제팜 (Flunitrazepam, CAS 1622-62-4) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 퓨로세미드 (Furosemide, CAS 54-31-9) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 가바펜틴 (Gabapentin, CAS 60142-96-3) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 갈란타민 (Galantamine, CAS 357-70-0) 및 이의 브롬산 염 (CAS 1953-04-4) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 할로페리돌 (Haloperidol, CAS 52-86-8) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 이부프로펜 (Ibuprofen, CAS 15687-27-1) 및 이의 나트륨염 (CAS 31121-93-4) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 이소프로테레놀 ((Isoproterenol, CAS 7683-59-2), 이의 염산염 (CAS 51-30-9), CAS 5984-95-2 (이소프로테레놀(Isoproterenol) (-)-염산염)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; L-카르니틴 (carnitine, CAS 541-15-1) 및 염산염 (CAS 6645-46-1) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 리오티로닌 ((Liothyronine (T3), CAS 6893-02-3) 및 이의 나트륨염 (CAS 55-06-1)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 로사르탄 ((Losartan, CAS 114798-26-4) 및 이의 칼륨염 (CAS 124750-99-8)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 록사핀 ((Loxapine, CAS 1977-10-2), 이의 숙시네이트 염 (CAS 27833-64-3) 및 염산염 (CAS 54810-23-0)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 메타프로테레놀 ((Metaproterenol, CAS 586-06-1) 및 이의 황산염 (CAS 5874-97-5)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 메타라미놀 ((Metaraminol, CAS 54-49-9) 및 이의 비타르트레이트염 (bitartrate form, CAS 33402-03-8)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 메트포르민 ((Metformin, CAS 657-24-9) 및 이의 염산염 (CAS 1115-70-4)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 메티마졸 (Methimazole, CAS 60-56-0) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 메틸에르고노빈 (Methylergonovine, CAS 113-42-8) 및 이의 말레이트 염 (CAS 57432-61-8) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 메토피론 (Metopirone, CAS 54-36-4) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 메토프롤롤 ((Metoprolol, CAS 37350-58-6), CAS 51384-51-1 및 CAS 56392-17-7 (타르테이트(tartate) 염)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 미페프리스톤 (Mifepristone, CAS 84371-65-3) 및 이의 가능한 염, 전구체 및 유도체; 나돌롤 (Nadolol, CAS 42200-33-9) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 날록손 (Naloxone, CAS 465-65-6) 및 염산염 이수화물 (CAS 51481-60-8) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 날트렉손 (Naltrexone, CAS 16590-41-3) 및 날트렉손 염산염 (CAS 16676-29-2) 및 이의 가능한 염, 전구체 및 유도체; 노르플록사신 (Norfloxacin, CAS 70458-96-7) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 펜타조신 ((Pentazocine, CAS 359-83-1), 이의 (+) 체 (CAS 7361-76-4), 이의 락테이트염 (CAS 17146-95-1), 이의 염산염 (CAS 64024-15-3)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 페녹시벤자민 ((Phenoxybenzamine, CAS 59-96-1), 이의 염산염 (CAS 63-92-3)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 페닐부티레이트 ((Phenylbutyrate 나트륨염, (CAS 1716-12-7), 4-페닐부티르산(Phenylbutyric acid, CAS 1821-12-1)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 필로카핀 (Pilocarpine, CAS 92-13-7) 및 이의 염산염 (CAS 54-71-7) 및 이의 가능한 염, 전구체 및 유도체; 피오글리타존 (Pioglitazone, CAS 111025-46-8), 이의 염산염 (CAS 112529-15-4) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 프라조신 ((Prazosin, CAS 19216-56-9), 이의 염산염 (CAS 19237-84-4)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 랄록시펜 ((Raloxifene, CAS 84449-90-1), 이의 염산염 (CAS 82640-04-8)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 리팜핀 (Rifampin, CAS 13292-46-1) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 심바스타틴 (Simvastatin, CAS 79902-63-9) 및 이의 가능한 염 및 유도체; D-소르비톨 (Sorbitol, CAS 50-70-4) 및 이의 가능한 염, 전구체 및 유도체; 화합물 스피로노락톤 (Spironolactone, CAS 52-01-7) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 타목시펜 ((Tamoxifen, CAS 10540-29-1), 이의 시트레이트염 (CAS 54965-24-1)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 트릴로스탄 (Trilostane, CAS 13647-35-3) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 발프로인 산 ((Valproic acid, CAS 99-66-1), 이의 나트륨염 (CAS 1069-66-5) 및 디발프로엑스 나트륨염 (CAS 76584-70-8, Divalproex sodium forms)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 카바마제핀 ((Carbamazepine, CAS 298-46-4), 이의 이수화물 (CAS 85756-57-6)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 케토프로펜 ((Ketoprofen, CAS 22071-15-4) 및 케토프로펜 나트륨 염 (CAS 57495-14-4)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 플루비프로펜 ((Flurbiprofen, CAS 5104-49-4), 이의 S 이성체 (CAS 51543-39-6) 및 이의 R 이성체 (CAS 51543-40-9), 이의 나트륨염 (CAS 56767-76-1)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 디클로페낙 ((Diclofenac, CAS 15307-86-5), 이의 나트륨염 (CAS 15307-79-6), 이의 칼륨염 (CAS 15307-81-0) ) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 멜록시캄 (Meloxicam, CAS 71125-38-7) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 타크롤리무스 ((Tacrolimus, CAS 104987-11-3), 1수화물 고체상 (CAS 109581-93-3)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 디아제팜 (Diazepam, CAS 439-14-5) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 두타스테리드 (Dutasteride, CAS 164656-23-9) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 인도메타신 ((Indomethacin, CAS 53-86-1), 2 나트륨 염 (CAS 74252-25-8 및 7681-54-1)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 디노프로스톤 (Dinoprostone, CAS 363-24-6) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 카바콜 ((Carbachol, CAS 51-83-2), 이의 콜린 카보네이트 (에스테르)(Choline carbonate (ester), CAS 462-58-8) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 에스트라디올 (Estradiol, 베타형 (beta form, CAS 50-28-2) 및 알파형 (alpha form, 57-91-0) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 쿠르쿠민 (Curcumin, CAS 458-37-7) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 리튬 ((Lithium, CAS 7439-93-2), 무정형 탄산염 및 시트르산염 (CAS 554-13-2 및 919-16-4); 염산염 (CAS 7447-41-8)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 라파마이신 (Rapamycin, CAS 53123-88-9) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 베타인 ((Betaine), 클로랄 베타인 (chloral betaine, CAS 2218-68-0), 베타인, 베타인 1수화물, 베타인 염산염 및 베타인 1수화물 (CAS 107-43-7, 17146-86-0, 590-46-5, 590-47-6)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 트레할로스 (Trehalose, CAS 4484-88-2) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 아밀로리드 (Amiloride) (염산염 무수물 (CAS 2016-88-8), 아밀로리드 (IPA에서 동정; CAS 2609-46-3)) 및 이의 가능한 염 및 유도체; 알부테롤 ((Albuterol, CAS 18559-94-9), 이의 황산염 (CAS 51022-70-9)) 및 이의 가능한 염 및 유도체 또는 이들의 조합으로부터 선택된 화합물의 용도와 관련된 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 CMT 또는 관련 장애를 치료하기 위한(약제 제조를 위한), D-소르비톨 (Sorbitol; 화합물 A); 바클로펜 (Baclofen; 화합물 B); 필로카핀 (Pilocarpine; 화합물 C); 날트렉손 (Naltrexone; 화합물 D); 메티마졸 (Methimazole; 화합물 E); 미페프리스톤 (Mifepristone; 화합물 F), 및 케토프로펜 (Ketoprofen; 화합물 G) 또는 이의 염, 또는 이의 전구체로부터 선택된 2개 이상의 화합물들의 조합의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 CMT 또는 관련 장애를 치료하기 위한(약제 제조를 위한), D-소르비톨 (Sorbitol; 화합물 A); 바클로펜 (Baclofen; 화합물 B); 필로카핀 (Pilocarpine; 화합물 C); 날트렉손 (Naltrexone; 화합물 D); 메티마졸 (Methimazole; 화합물 E); 미페프리스톤 (Mifepristone; 화합물 F), 및 케토프로펜 (Ketoprofen; 화합물 G), 또는 이의 염, 이의 전구체 또는 작용제로부터 선택된 화합물들의 조합의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 CMT 또는 관련 장애를 치료하기 위한(약제 제조를 위한), 아세타졸아미드 (Acetazolamide), 아미노글루테티미드 (Aminoglutethimide), 아즈트레오남 (Aztreonam), 바클로펜 (Baclofen), 발살라지드 (Balsalazide), 비칼루타미드 (Bicalutamide), 브로모크립틴 (Bromocriptine), 부메타니드 (Bumetanide), 부스피론 (Buspirone), 시프로플록사신 (Ciprofloxacin), 클로니딘 (Clonidine), 시클로스포린 (Cyclosporine) A, 디설피람 (Disulfiram), 엑세메스탄 (Exemestane), 펠바메이트 (Felbamate), 페노피브레이트 (Fenofibrate), 피나스테리드 (Finasteride), 플루마제닐 (Flumazenil), 플루니트라제팜 (Flunitrazepam), 퓨로세미드 (Furosemide), 가바펜틴 (Gabapentin), 갈란타민 (Galantamine), 할로페리돌 (Haloperidol), 이부프로펜 (Ibuprofen), 이소프로테레놀 (Isoproterenol), L-카르니틴 (carnitine), 리오티로닌 (Liothyronine; T3), 로사르탄 (Losartan), 록사핀 (Loxapine), 메타프로테레놀 (Metaproterenol), 메타라미놀 (Metaraminol), 메트포르민 (Metformin), 메티마졸 (Methimazole), 메틸에르고노빈 (Methylergonovine), 메토피론 (Metopirone), 메토프롤롤 (Metoprolol), 미페프리스톤 (Mifepristone), 몬테류카스트 (Montelukast), 나돌롤 (Nadolol), 날트렉손 (Naltrexone), 날록손 (Naloxone), 노르플록사신 (Norfloxacin), 펜타조신 (Pentazocine), 페녹시벤즈아민 (Phenoxybenzamine), 페닐부티레이트 (Phenylbutyrate), 필로카핀 (Pilocarpine), 피오글리타존 (Pioglitazone), 프라조신 (Prazosin), 랄록시펜 (Raloxifene), 리팜핀 (Rifampin), 심바스타틴 (Simvastatin), 스피로노락톤 (Spironolactone), 타목시펜 (Tamoxifen), 트릴로스탄 (Trilostane), 발프론 산 (Valproic acid), 카바마제핀 (Carbamazepine), 케토프로펜 (Ketoprofen), 플루비프로펜 (Flurbiprofen), 디클로페낙 (Diclofenac), 멜록시캄 (Meloxicam), D-소르비톨 (Sorbitol), 타클로리무스 (Tacrolimus), 디아제팜 (Diazepam), 두타스테리드 (Dutasteride), 인도메타신 (Indomethacin), 디노프로스톤 (Dinoprostone), 카바콜 (Carbachol), 에스트라디올 (Estradiol), 쿠르쿠민 (Curcumin), 리튬 (Lithium), 라파마이신 (Rapamycin), 베타인 (Betaine), 트레할로스 (Trehalose), 아밀로리드 (Amiloride), 알부테롤 (Albuterol), 또는 이의 염, 이의 전구체 또는 작용제로부터 선택된 2개 이상의 화합물들의 조합의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 CMT 또는 관련 장애를 앓는 객체에서 PMP22 발현을 감소시키기 위한(약제 제조를 위한), D-소르비톨 (Sorbitol; 화합물 A); 바클로펜 (Baclofen; 화합물 B); 필로카핀 (Pilocarpine; 화합물 C); 날트렉손 (Naltrexone; 화합물 D); 메티마졸 (Methimazole; 화합물 E); 미페프리스톤 (Mifepristone; 화합물 F), 및 케토프로펜 (Ketoprofen; 화합물 G) 또는 이의 염, 이의 전구체 또는 작용제로부터 선택된 2개 이상의 화합물들의 조합의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 CMT 또는 관련 장애를 앓는 객체에서 PMP22 발현을 감소시키기 위한(약제 제조를 위한), 아세타졸아미드 (Acetazolamide), 아미노글루테티미드 (Aminoglutethimide), 아즈트레오남 (Aztreonam), 바클로펜 (Baclofen), 발살라지드 (Balsalazide), 비칼루타미드 (Bicalutamide), 브로모크립틴 (Bromocriptine), 부메타니드 (Bumetanide), 부스피론 (Buspirone), 시프로플록사신 (Ciprofloxacin), 클로니딘 (Clonidine), 시클로스포린 (Cyclosporine) A, 디설피람 (Disulfiram), 엑세메스탄 (Exemestane), 펠바메이트 (Felbamate), 페노피브레이트 (Fenofibrate), 피나스테리드 (Finasteride), 플루마제닐 (Flumazenil), 플루니트라제팜 (Flunitrazepam), 퓨로세미드 (Furosemide), 가바펜틴 (Gabapentin), 갈란타민 (Galantamine), 할로페리돌 (Haloperidol), 이부프로펜 (Ibuprofen), 이소프로테레놀 (Isoproterenol), L-카르니틴 (carnitine), 리오티로닌 (Liothyronine; T3), 로사르탄 (Losartan), 록사핀 (Loxapine), 메타프로테레놀 (Metaproterenol), 메타라미놀 (Metaraminol), 메트포르민 (Metformin), 메티마졸 (Methimazole), 메틸에르고노빈 (Methylergonovine), 메토피론 (Metopirone), 메토프롤롤 (Metoprolol), 미페프리스톤 (Mifepristone), 몬테류카스트 (Montelukast), 나돌롤 (Nadolol), 날트렉손 (Naltrexone), 날록손 (Naloxone), 노르플록사신 (Norfloxacin), 펜타조신 (Pentazocine), 페녹시벤즈아민 (Phenoxybenzamine), 페닐부티레이트 (Phenylbutyrate), 필로카핀 (Pilocarpine), 피오글리타존 (Pioglitazone), 프라조신 (Prazosin), 랄록시펜 (Raloxifene), 리팜핀 (Rifampin), 심바스타틴 (Simvastatin), 스피로노락톤 (Spironolactone), 타목시펜 (Tamoxifen), 트릴로스탄 (Trilostane), 발프론 산 (Valproic acid), 카바마제핀 (Carbamazepine), 케토프로펜 (Ketoprofen), 플루비프로펜 (Flurbiprofen), 디클로페낙 (Diclofenac), 멜록시캄 (Meloxicam), D-소르비톨 (Sorbitol), 타클로리무스 (Tacrolimus), 디아제팜 (Diazepam), 두타스테리드 (Dutasteride), 인도메타신 (Indomethacin), 디노프로스톤 (Dinoprostone), 카바콜 (Carbachol), 에스트라디올 (Estradiol), 쿠르쿠민 (Curcumin), 리튬 (Lithium), 라파마이신 (Rapamycin), 베타인 (Betaine), 트레할로스 (Trehalose), 아밀로리드 (Amiloride), 알부테롤 (Albuterol), 또는 이의 염, 이의 전구체 또는 이의 작용제로부터 선택된 2개 이상의 화합물들의 조합의 용도에 관한 것이다. .

본 발명의 또 다른 목적은 D-소르비톨 (Sorbitol), 바클로펜 (Baclofen), 필로카핀 (Pilocarpine), 날트렉손 (Naltrexone), 메티마졸 (Methimazole), 미페프리스톤 (Mifepristone) 및 케토프로펜 (Ketoprofen), 이의 염 또는 이의 전구체로부터 선택된 2개 이상의 화합물들의 조합 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 함유하는 약학조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 바람직한 구현예로서, 상기 약물들은 최고의 효과적인 약효를 제공하기 위하여 조합(들)으로 사용되는 것이다. 이러한 관점에서, 본 발명의 또 다른 목적에서, 본 발명은 CMT 또는 관련 장애를 치료하기 위한, (1) 스테로이드 호르몬 수용체 길항제 및 무스카린성 수용체 작용제 (muscarinic receptor agonist), GABA-B 수용체 작용제, ERK 활성화제(activator), pAkt 키나제 저해제(kinase inhibitor), 갑상선 호르몬 신호 전달계 영향 약물 (a drug affecting thyroid hormone signalling), D-소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, COX 저해제로부터 선택된 하나의 화합물;

- 무스카린성 수용체 작용제 및 GABA-B 수용체 작용제, ERK 활성화제(activator), pAkt 키나제 저해제(kinase inhibitor), 갑상선 호르몬 신호 전달계 영향 약물 (a drug affecting thyroid hormone signalling), D-소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, COX 저해제로부터 선택된 하나의 화합물;

- GABA-B 수용체 작용제 및 ERK 활성화제(activator), pAkt 키나제 저해제(kinase inhibitor), 갑상선 호르몬 신호 전달계 영향 약물 (a drug affecting thyroid hormone signalling), D-소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, 및 COX 저해제로부터 선택된 하나의 화합물;

- ERK 활성화제 및 pAkt 키나제 저해제(kinase inhibitor), 갑상선 호르몬 신호 전달계 영향 약물 (a drug affecting thyroid hormone signalling), D-소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, 및 COX 저해제로부터 선택된 하나의 화합물;

- pAkt 키나제 저해제 및 갑상선 호르몬 신호 전달계 영향 약물 (a drug affecting thyroid hormone signalling), D-소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, 및 COX 저해제로부터 선택된 하나의 화합물;

- 갑상선 호르몬 신호 전달계 영향 약물 및 D-소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, 및 COX 저해제로부터 선택된 하나의 화합물;

- D-소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, 및 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, 또는 COX 저해제;

- 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, 및 COX 저해제로부터 선택된 약물 조합의 용도를 제공한다.

본 발명의 특정한 측면으로서, 본 발명은 CMT 치료를 위한 상기 화합물들 또는 조성물들 또는 조합들의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또한 효과적인 양의 상술한 바와 같은 화합물들 또는 조성물들의 임의의 화합물 또는 조합을 CMT 또는 관련 장애를 갖는 객체에 투여함을 포함하는, CMT 또는 관련 장애, 특히 CMT를 치료하는 방법을 제공한다.

바람직한 방법으로는 상기한 화합물 A, 화합물 B, 화합물 C, 화합물 D, 화합물 E, 화합물 F, 및 화합물 G, 또는 이의 염 또는 전구체로부터 선택된 2개 이상의 화합물들의 조합을 투여함을 포함하는 것이다.

이러한 측면으로서, 본 발명의 특정한 목적으로서, 본 발명은 효과적인 양의 상술한 바와 같은 상기 화합물 또는 이들의 조합을 객체에게 투여함을 포함하는 CMT1a 를 치료하는 방법을 제공한다.

본원에서 개시된 다양한 용도 또는 방법 중 어느 것도 또한 CMT 또는 관련 장애, 특히 CMT1A를 갖는 환자를 진단; 또는 CMT 또는 관련 장애, 특히 CMT1A으로 발전할 위험성이 있는 개인을 동정하는 선택적인 단계를 추가로 포함할 수 있다.

이와 관련하여, 본 발명의 또 다른 목적은 (1) 객체가 CMT, 특히 CMT1a을 갖는지 여부를 측정하는 단계; (2) 효과적인 양의 상술한 바와 같은 화합물들 조합으로 CMT, 특히 CMT1a을 갖는 객체를 치료하는 단계를 포함하는, CMT, 특히 CMT1a를 치료하는 방법을 제공하는 것이다. 객체가 CMT, 특히 CMT1a을 갖는지 여부를 측정하는 상기 단계는 당업계에 잘 알려진, DNA 어세이법(assay)과 같은 다양한 시험법으로 수행가능하다.

본 발명은 어떠한 포유동물 객체, 특히 인간 객체에서의 CMT 또는 관련 장애, 보다 바람직하게는 CMT1a를 치료하는 방법으로 사용가능하다.

본 발명은 CMT 또는 관련 장애를 치료하기 위한 새로운 치료학적 접근법을 제공한다. 본 발명은 상기 질환을 효과적으로 치료가 가능하고 어떠한 포유동물 객체에서도 사용가능한 약물 또는 약물 조합의 새로운 용도를 개시한다.

본 발명의 범위 내에서, 용어“CMT 관련 장애 (CMT related disorder)”는 PMP22를 포함하는 미엘린 단백질의 비정상 발현을 수반하는 기타 질환을 의미한다. 이러한 질환의 다양성은 PMP22 역할의 다양성에 기인하다.

PMP22는 말초 신경계에서 필수적으로 모든 미엘린화 섬유의 밀집된 부위에서 발현되는 미엘린의 주요 구성요소이다. PMP22 단백질은 다른 구조적 미엘린 단백질인 P0와 상호반응함으로서 변환된 PMP22/P0 단백질 비는 미엘린 수초의 밀집에 영향을 미칠 수 있다 (Vallat et al., 1996; D’Urso et al., 1999). 시험관내 시험법에서 입증되는 바와 같이, PMP22 단백질은 또한 Rho-의존적으로 확산하여 축색돌기 외피화에 영향을 미칠 수 있는 세포 증식 조절과 관련된다 (Brancolini et al., 1999). 게다가, PMP22 는 α6β4 인티그린(integrins)과의 복합체를 형성하고 슈완세포의 세포외 매트릭스와의 상호작용을 매개할 수 있다 (Amici et al., 2006; Amici et al., 2007). 게다가, 증가된 양의 PMP22 단백질은 Arf6-조절된 혈장막 엔도좀 회수 경로(endosomal recycling pathway)를 변형시켜 후기 엔도좀에서의 PMP22의 축적을 초래한다 (Chies et al., 2003). 또한 과발현된 PMP22 단백질이 세포간 단백질 분류를 동요하게 하여 슈완세포에서 단백질 분해 과정에 과부하를 발생시킴이 입증되었다 (Notterpek et al.,1997; Tobler et al., 2002; Fortun et al., 2003; Fortun et al., 2006; Fortun et al., 2007; Khajavi et al., 2007). 결론적으로, PMP22는 세포 증식 및 프로그램화된 세포사의 조절과 직접적으로 관련되며 (Sancho et al., 2001; Atanasoski et al., 2002) 변이성 PMP22 단백질은 축색돌기 이온 채널의 긴밀한 인지 및 비정상적 발현을 야기시키는 것으로 알려졌다 (Ulzheimer et al., 2004; Devaux & Scherer, 2005). PMP22 는 또한 인간 뇌의 일부분에서 발현된다 (Ohsawa Y et al, 2006). 감정 장애 (Le-Niculescu H et al, 2008) 및 정신분열증 (Dracheva S et al, 2006)과의 상관성이 알려진 바 있다. PMP22 는 종종 다발성 경화증 및 신경퇴화성 질환상의 결함이 발견된 뇌혈관 장벽을 정립시키는데 중요한 역할을 한다 (Roux KJ et al, 2004).

결론적으로 본원에서 정의되는 용어“CMT 관련 장애”는 알츠하이머 질환 (Alzheimer’s disease, AD), AD 형 노인성 치매증 (SDAT), 파킨슨 질환 (Parkinson’s disease), 루이스 체 치매증 (Lewis body dementia), 혈관성 치매증 (vascular dementia), 자폐증 (autism), 경도 인지 장애 (mild cognitive impairment; MCI), 노화성 기억 장애 (age-associated memory impairment; AAMI) 및 노화에 따른 장애, 뇌염후 파킨슨 증후군 (post-encephalitic Parkinsonism), 정신분열증 (schizophrenia), 우울증 (depression), 조울증 (bipolar disease) 및 기타 감정 장애, 헌팅톤 질환 (Huntington’s disease), 근위축성 측색 경화증 (amyotrophic lateral sclerosis, ALS)을 포함하는 운동신경원 질환 (motor neurone disease), 다발성 경화증 (multiple sclerosis), 특발성 신경병증 (idiopathic neuropathies), 당뇨병성 신경병증 (diabetic neuropathy), 약물 치료에 기인한 신경병증을 포함하는 중독성 신경병증 (toxic neuropathy), HIV, 방사선, 중금속 및 비타민 결핍 상태로 인한 신경병증 (neuropathies), 크로이츠펠트-야콥병 (Creutzfeld-Jakob disease, CJD), 광우병 (bovine spongiform encephalopathy, BSE), GSS, FFI, Kuru 및 알퍼 증훈군 (Alper’s syndrome)을 포함하는 프리온-기원 신경퇴화증 (prion-based neurodegeneration)을 의미한다.

본 발명의 바람직한 구현예로서, CMT 관련 장애는 HNPP (압박마비유전신경병), CMT1B, CMT1C, CMT1D, CMT1X, CMT2A, CMT2B, CMT2D, CMT2E, CMT2-P0, 중증 말이집탈락성 신경병증 DSS (Dejerine-Sottas syndrome), CHN (선천성 저수초화 신경병증; congenital hypomyelinating neuropathy), CMT4A, CMT4B1, CMT4B2, CMT4D, CMT4F, CMT4, AR-CMT2A, HSN1을 포함하는 말이집탈락성 신경병증 (demyelinating neuropathies)과 같은 신경병증을 의미한다 .

본원에서 사용되는 바와 같이, 장애의“치료법(treatment)”은 상기 장애에 의하여 야기되는 통증의 치료(therapy), 예방 (prevention), 예방조치 (prophylaxis), 지연 (retardation) 또는 경감 (reduction)을 포함한다. 용어 “치료법(treatment)”은 특히 질환 진행 및 수반된 증상의 조절을 포함한다.

또한 상기 용어 “화합물(compound)”은 본원에서 특별하게 명명된 화학적 화합물뿐만 아니라 이의 허용가능한 염(salt), 수화물 (hydrate), 에스테르 (ester), 에테르 (ether), 이성체 (isomers), 라세믹체 (racemate), 접합체 (conjugates), 전구체(pro-drugs)를 갖는 임의의 약학적 조성물을 의미한다.

또한 상기 용어 “조합 (combination)”은 생물학적 효과를 유발하게 하기 위해 2개 이상 약물을 객체에 공동투여되는 치료를 의미한다. 조합치료법으로서, 상기 2개 이상 약물들은 동시에 또는 연속적으로 같이 또는 개별적으로 투여될 수 있다. 또한 상기 2개 이상 약물들은 서로 상이한 투여경로 및 프로토콜을 통하여 투여가능하다.

본 발명은 말초성 미엘린 단백질(들)의 기능성이 무스카린성 수용체 (muscarinic receptor), GABA-B 수용체, 스테로이드 호르몬 수용체, 오피오이드 수용체, 소르비톨 신호 전달 경로에 영향을 미치는 약물, 또는 ERK (세포외 신호-조절 키나제; extracellular signal-regulated kinase) 활성화제, COX 저해제, 갑상선 호르몬 신호 전달 저해제에 의하여 조절 및/또는 pAkt 키나제를 저해시키는 약물들에 의하여 조절됨으로서 CMT 및 관련 장애의 새로운 치료학적 접근법의 설계를 가능하게 한다.

게다가 본 발명은 상기 경로를 조합 또는 단독으로 조절하고 상기 질환을 치료하기에 사용가능한 특정 약물들의 동정 및 활성을 개시한다.

보다 상세하게는, 본 발명은 화합물 A, 화합물 B, 화합물 C, 화합물 D, 화합물 E, 화합물 F 및 화합물 G가 조합 또는 단독으로, 바람직하게는 조합하여, CMT 또는 관련 장애를 치료하는 데에 사용 가능함을 나타낸다.

D-소르비톨( Sorbitol ; 화합물 A)

본 약물, C₆H₁₄O₆, 은 방광 세척제, 완화제 및 고삼투성 약물군의 일종이다.

본 약물은 (i) 전립선 수술 또는 기타 방광계 수술 중 감염을 예방하기 위한 방광세척술 (ii) 활성탄과 혼합시 중독증 (성인) 및 (iii) 고삼투압성 완화제로서 작용하는 변비증(성인)(이는 대장내 액체를 체류함으로서 작용하며, 이는 장관에서의 근육 운동을 증가시키는데 도움을 준다)의 치료제로서 승인된 바 있다.

CMT1A 질환에서의 목표화된 대사 과정:

세포외 신호-조절된 키나제 (Extracellular Signal-Regulated Kinase; ERK) 및 Akt 과정은 정반대로 PMP22 유전자 발현을 조절하고: PMP22 유전자의 전사는 활성화된 PI3K/pAkt/GSK-3β 신호 전달계에 의하여 항진되고 Ras/MEK/ERK 키나제 케스케이드(kinase cascade)에 의하여 억제된다. 화합물 A는 ERK/JNK/p38 키나제(kinases)를 활성화시킬 수 있으며 아마도 ERK 키나제 활성(kinase activity)을 조절함으로서 PMP22 유전자 발현을 감소시킬 수 있다 (Bogoyevitch et al., 1995; Galvez et al., 2003).

PMP22 유전자의 과발현에 의해 야기되는 잘못 접힌 (misfolded) PMP22 단백질 응집은 CMT1A 슈완세포의 일체형 표현형의 특성이며 세포간 막 역학, 단백질 분류 및 분해에 영향을 미칠 것이다. 따라서, 샤페론성 활성(chaperone activity)을 갖는 세포성 삼투질로서 D-소르비톨은 추가적으로 세포간 기구의 능력을 증가시킴으로서 과발현된 PMP22의 악영향을 억제시키며, 이는 단백질 접힘 및 제거와 관련된다 (Fortun et al., 2005; Fortun et al., 2006; Welch & Brown, 1996).

화합물 A는 이와 특이적으로 결합하는 무스카린성 2형 수용체 (muscarinic type 2 receptor)의 자극을 통하여 상승된 효과를 발휘할 수 있다. 이는 PMP22 발현상의 감소를 초래한다.

최종적으로, 화합물 A는 알도스 리덕타제 경로(aldose reductase pathway)의 피이드백(feedback) 저해에 의한 세포사멸 및 산화적 스트레스를 억제한다. D-소르비톨은 알도스 리덕타제 대사 경로(aldose reductase metabolic pathway)에서 생성된다. 알도스 리덕타제 유전자의 감퇴(Attenuation)는 래트 세포의 세포사멸 및 산화적 스트레스를 억제한다 (Nambu H et al, 2008).

바클로펜 ( Baclofen ; 화합물 B)

본 약물, C₁₀H₁₂ClNO₂, 은 다발성 경화증 유래 가역적 경직의 신호 및 증상 완화, 특히 굴곡 경련 및 수반 통증, 간헐성 경련, 및 근육경직 완화, 및 경구 치료법에 반응하지 않거나 순응할 수 없는 환자의 척추 기원의 극심한 경직에 대한 척수강내 투여를 위하여 승인된 약물이다.

화합물 B는 GABA-B 수용체에서 직접 작용하는 작용제이다. 이의 정확한 작용기전은 완벽하게 알려지지 않았다. 이는 척수 수준에서 단일연접반사 및 다중연접반사의 모두를 척수 상에서 작용이 발생하여 그 임상 효과에 기여함에도 불구하고, 구심성 말단의 과분극에 의하여 억제할 수 있다.

CMT1A 질환에서의 목표화 대사 과정:

GABA(B) 수용체는 GPCR 상호작용 비계 단백질 (GPCR interacting scaffolding protein, GISP)을 통하여 ERK1/2 키나제를 활성화하여 PI3K-Akt-GSK-3β 신호전달 과정 및 슈완세포에서의 PMP22 유전자의 긍정적 전사 조절과 관련된 스테로이드 호르몬의 활성을 음성적으로 조절할 수 있음이 밝혀 졌다 (Kantamneni et al., 2007; Lange et al., 2007; Miller et al.,2007; Tu et al., 2007). 추가적으로, GABAB 수용체는, 문맥의존상, PMP22 발현의 긍적적 조절제로서 또한 인지하는 GABAA 수용체의 활성을 저하시킬 수가 있다 (Obrietan & van den Pol, 1998).

필로카핀 ( Pilocarpine , 화합물 C)

본 약물, C₁₁H₁₆N₂O₂, 은 (ⅰ) 두경부암의 방사선 치료에 기인한 침샘 기능 저하에 의한 구강건조증 증상 치료; 및 (ii) 쇼그렌 증후군 환자의 구강 건조증 치료에 대한 승인을 받은 약물이다.

무스카린성 수용체 작용제는 평활근 섬유 수축 (소화기관, 안구, 기관)을 유발하고 발한작용, 침, 기관지 및 위에서의 분비를 자극시킨다. 게다가, 이는 복잡한 심혈관 작용을 나타내고, 부교감 신경양 작용 (혈관확장) 흥분성 신경절 과정을 자극시킨다.

CMT1A 질환에서의 목표화 대사 과정:

본 발명자는 무스카린성 작용제인 필로카핀이 시험관내 시험에서 슈완세포의 PMP22 단백질 발현을 감소시킴을 증명하였다. 무스카린성 수용체는 서로 상이한 세포 세팅(cellular settings)에서 Akt 및 Erk 과정 모두를 조절할 수 있으므로 이러한 2개의 신호 전달 체계의 미세한 스위치 조절(switch control)을 참가가능하고 이는 PMP22 단백질의 음성적 및 양성적인 전사 조절과정과 각각 관련되게 한다. 본 발명자는 필로카핀에 의한 무스카린성 수용체의 자극이 -아마도 복잡한 분자 기전 집합체를 통하여- PMP22 유전자의 발현을 저해하는, 보다 확고한 E가 신호전달과정에 대한 Erk/Akt 활성 균형으로의 이동을 유도한다고 가정하였다. 예를 들어, 무스카린성 수용체들은 IRS-1 티로신 탈인산화과정을 촉진시킴으로서 pAkt/GSK-3β 기능적 모듈에 의하여 매개되는 IGF-1에 의한 신호전달과정을 선택적으로 차단할 수 있으며, 이는 자극된 IGF-1 수용체로부터 IRS-1가 분리되게 한다 (Batty et al., 2004; Stirnweiss et al., 2006).

날트렉손 ( Naltrexone , 화합물 D)

본 약물, C₂₀H₂₃NO₄, 은 알콜 의존증 치료 및 외인성으로 투여된 오피오이드 (opioid)의 효과를 차단시키는 약물로서 승인되었다.

본 약물은 길항적으로 오피오이드성 mu 수용체와 결합하여, 전통적인 오피오이드계 약물들(헤로인, 몰핀)의 오피오이드성 신경 반응과의 결합 및 유도를 차단하게 된다. 이는 정맥내로 투여된 오피오이드의 주 효과를 가역적으로 크게 약화시키거나 완전하게 차단시킨다. 만성적 관점에서 몰핀과 공동투여시에는 몰핀, 헤로인 및 기타 오피오이드계 약물의 육체적 의존성을 차단시킨다. 오피오이드계 약물에 대한 육체적인 의존성을 갖는 객체는 금단 증상을 촉발시킬 것이다.

알콜중독의 작용기전이 잘 밝혀지지는 않았으나, 내인성 오피오이드 시스템과의 관련성은 전임상 데이터로서 제시된 바 있다. 이는 이러한 수용체와 경쟁적으로 결합하여 내인성 오피오이드계 약물의 효과를 차단시킬 수 있다.

CMT1A 질환에서 목표화 대사 과정:

세포외 신호-조절된 키나제 (Extracellular Signal-Regulated Kinase, ERK) 및 Akt 과정은 서로 반대로 PMP22의 발현을 조절한다: PMP22 유전자의 전사는 활성화된 PI3K/pAkt/GSK-3β 신호 전달 과정에 의하여 상승되며 Ras/MEK/ERK 키나제 케스케이드(kinase cascade)에 의하여 제어된다. 화합물 C는 σ 오피오이드(opioid) 수용체의 음성적 조절을 통하여 pAkt 키나제 활성을 차단 가능하므로 PMP22 유전자의 전사과정을 감소시킨다.

적은 수준임에도 슈완세포는 모든 종류의 오피오이드계 약물 및 시그마 수용체 및 이들의 천연 리간드인 프로디노르핀 (prodynorphin) 및 프로엔케팔린 (proenkephalin)을 발현시킨다 - 이러한 현상은 자가분비성 오피오이드 신호전달과정이 이러한 교질세포의 생물학적 관점에서 중요한 역할을 수행할 수 있음을 의미한다.

오피오이드 수용체를 통한 신호전달과정은 지극히 복잡하고 급성 및 만성 작용제 적용 형태에 따라 변화된다. 본 발명자들은 날트렉손이 급성 몰핀 적용에 의하여 야기되는, (- 몇몇 신경 세포에서 입증되는 바와 같이) pAkt 키나제 및 Erk 키나제-매개성 신호전달과정의 하위 조절 활성화를 약화시킬 수 있음을 제시하였다 (Muller&Unterwald, 2004).

세포외 신호-조절된 키나제 (Extracellular Signal-Regulated Kinase, ERK) 및 Akt 과정은 서로 반대로 PMP22의 발현을 조절한다: PMP22 유전자의 전사는 활성화된 PI3K/pAkt/GSK-3β 신호 전달 과정에 의하여 상승되며 Ras/MEK/ERK 키나제 케스케이드(kinase cascade)에 의하여 제어된다. 화합물 C는 σ 오피오이드(opioid) 수용체의 음성적 조절을 통하여 pAkt 키나제 활성을 차단가능하고 Erk 키나제를 통한 신호를 증폭시킬 수 있으므로 PMP22 유전자의 전사과정을 감소시킨다.

메티마졸 ( Methimazole , 화합물 E)

본 약물은 갑상선 항진증, 갑상선종, 그레이브스 질환(Graves disease) 및 건선 치료를 위한 약제로 승인받았다.

메티마졸은 요오드 이온(iodide)을 요오드(iodine)으로 전환시키는 갑상선 호르몬 합성과정의 율속 결정 효소인, 티로이드 퍼옥시다제(thyroid peroxidise)와 결합하여 그 활성을 차단함으로서 메티마졸은 새로운 갑상선 호르몬의 생성을 효과적으로 저해하는 약물이다.

CMT1A 질환의 목표화 대사 과정:

슈완세포가 온전한 좌골신경의 갑상선 호르몬을 발현하지는 않음에도 불구하고, 손상된 말초 신경에서의 정상적 축색돌기-신경교 간의 상호작용 파괴는 슈완세포에서의 이러한 수용체들의 발현을 급속하게 유도하고, 이는 PNS 손상의 유도성 회복에 대한 갑상선 호르몬 신호 전달계의 중요성을 의미한다 (Walter, 1993). 추가적으로 이러한 가설은 손상된 좌골 신경이 갑상선 수용체를 발현시킬뿐만 아니라 갑상선 호르몬들, 즉, 티록신(thyroxine, T4)을 트리아이오도티로닌 (triiodothyronine, T3)으로 전환시키는 2 형 (type 2) 디이오디나제 (deiodinase), 및 갑상선 호르몬 분해를 담당하는 3 형 (type 3) 디이오디나제의 대사과정과 관련된 효소도 발현시킨다는 결과에 의하여 지지된다 (Walter et al., 1995; Li et al., 2001). 슈완세포에서 PMP22 유전자의 과발현이 CMT 환자의 손상된 말초신경에서의 정상적 축색돌기-신경교 간의 상호작용을 파괴시키므로 갑상선 수용체 신호 전달 과정은 또한 샤르코-마리-투스 질환(Charcot-Marie-Tooth disease)의 발병과정에 중요한 역할을 담당할 수 있다.

트리아이오도티로닌 T3 은 슈완세포에서 EGR2 발현의 강력한 활성화제이다; EGR2 전사 인자는 슈완세포에서의 말이집형성 촉진 전사 프로그램 (promyelinating transcription program)의 주요 양성적 조절제로 간주되므로, 갑상선 호르몬 수용체를 통한 신호전달과정은 PMP22 유전자의 전사과정에 영향을 미칠 수 있다 (Mercier et al., 2001). 본 발명자들은 메티마졸이 손상된 슈완세포에서의 갑상선 호르몬 신호전달을 약화시킴으로서 PMP22 유전자의 전사과정을 감소시킬 수 있음을 제시하였다.

미페프리스톤 ( Mifepristone , 화합물 F)

본 약물, C₂₉H₃₅NO₂, 은 49일째 자궁내 임신의 의학적 중절로 승인받은 약물이다.

화합물 F의 항-프로게스테론성 활성 (anti-progestational activity)은 프로게스테론-수용체 부위에서의 프로게스테론과의 경쟁적 상호작용으로 기인한 것이다. 몇몇 동물 종 (마우스, 래트, 토끼 및 원숭이)에서 다양한 경구 용량 시험에 근거하여, 상기 화합물은 내인성 또는 외인성 프로게스테론의 활성을 저해한다.

CMT1A 질환에서의 목표화 대사 과정:

화합물 F 는 프로게스테론 (progesterone) 및 글루코코르티코이드 (glucocorticoid) 수용체의 길항제이며, 이는 PMP22 전사의 양성적 조절제이다.

화합물 F가 프로게스테론 수용체 길항제로서 개발되었음에도 불구하고, 또한 글루코코르티코이드 (glucocorticoid) 호르몬 수용체 길항제로서 간주되며, 추가적으로 이 약물은 미약한 항-안드로겐성 활성 (anti-androgen activity)도 나타내나 에스트로겐 수용체 또는 무기질대사 부신피질 호르몬 (mineralocorticoid) 수용체에 대하여 결합하지는 않는다.

PMP22 단백질의 전사과정은 슈완세포에서 발현되는 스테로이드 호르몬 수용체를 포함하는 몇 개의 핵 수용체 (nuclear receptors)에 의하여 양성적으로 조절된다 (Robert et al., 2001; Schumacher et al., 2001).

본 발명자는 프로게스테론 (progesterone) 및 글루코코르티코이드 (glucocorticoid) 수용체 모두의 활성을 동시적으로 저하시키는 비특이적 길항제인 미페프리스톤이 PMP22 전사 과정의 보다 강력한 부정적 조절자가 될 수 있으므로, 특히 장기간 치료요법에서 미미한 치료효과만을 나타내는 이전의 시험된 프로게스테론 수용체-특이적 길항제보다 CMT1A-관련 약물 개발에 대한 유망한 후보 물질이 될 수 있음을 제시한 바가 있다 (Sereda et al., 2003; Meyer zu Horste et al., 2007); 또한 이러한 결론은 글루코코르티코이드 (glucocorticoid) 수용체가 프로게스테론 수용체보다 슈완세포에서 적어도 50배 이상 강력하게 발현된다는 최근 공개된 데이터로 입증된다 (Groyer et al., 2006).

케토프로펜 ( Ketoprofen , 화합물 G)

케토프로펜은 류마티스성 관절염 및 골관절염 치료제로 승인 받은 약물이다. 화합물 G 는 시클로옥시게나제 (cyclooxygenase)-1 (COX-1) 및 시클로옥시게나제-2 (COX-2) 모두의 활성을 차단하고 이러한 효과로 기인하여 프로스타글란딘 (prostaglandin) 및 류코트리엔 (leukotriene) 합성을 저해하는 비스테로이드성 항-염증 약물이다.

CMT1A 질환에서의 목표화된 대사과정:

슈완세포가 다양한 형태의 기능적 프로스타글란딘 (prostaglandin) EP, 프로스타사이클린 (prostacyclin) IP, 트롬복산 (trombaxone), 시스테이닐 류코트리엔 (cysteinyl leukotriene) 및 류코트리엔 (leukotriene) B4 수용체를 발현하며, 유도성 COX-2 활성을 나타내며 프로스타글란딘 E2, 트롬복산 A2 및 류코트리엔 LTC4을 생산할 수 있음이 이미 이전에 보고된 바 있다 (Constable et al., 1999; Muja et al., 2001; Woodhams et al., 2007).

프로스타글란딘(Prostaglandins)은 - 이들의 동족 GPCR 수용체를 통하여 -Akt 신호전달 과정의 활성을 증강시킬 수 있으며, 이는 PMP22을 포함하는 미엘린-관련 단백질의 발현을 촉진시킨다. 예를 들어, 최근의 보고에서 결과는 PGE2 프로스타글란딘이 슈완세포에서의 pAkt 신호 조절 하위 전달 효현제 및 말이집형성 촉진 전사 프로그램 활성화제인 β-카테닌(catenin)의 대사과정과 밀접하게 관련된다고 확인되었다 (Ogata et al., 2004). PGE2에 의해 EP 수용체가 활성화되면, 상기 Gαs 서브유니트(subunit)는 Axin/GSK-3β 복합체와 결합하고 GSK-3β-매개 인산화 및 β-카테닌의 분해를 감소시킴이 입증되었다. 관련하여, EP 수용체에 대한 PGE2의 결합은 Gβγ 서브유니트의 방출을 유발하고, 이는 포스파티딜이노시톨 3-키나제 (phosphatidylinositol 3-kinases, PI3K)를 통하여 Akt 단백질을 직접적으로 자극시킨다 (Castellone et al., 2006).

결국, COX-저해제인 케토프로펜 (화합물 G)은 슈완세포에서의 프로스타글란딘 수용체를 통하여 자가분비성 신호전달을 억제함으로서, PMP22 유전자의 전사과정을 감소시킬 수 있으며, 이는 β-카테닌의 활성을 증강시킨다.

추가적으로, 본 발명은 CMT 또는 관련 장애를 치료하기 위한, 하기 조합 또는 단독의 화합물들의 용도와 관련한다:

아세타졸아미드 (Acetazolamide), 아미노글루테티미드 (Aminoglutethimide), 아즈트레오남 (Aztreonam), 바클로펜 (Baclofen), 발살라지드 (Balsalazide), 비칼루타미드 (Bicalutamide), 브로모크립틴 (Bromocriptine), 부메타니드 (Bumetanide), 부스피론 (Buspirone), 시프로플록사신 (Ciprofloxacin), 클로니딘 (Clonidine), 시클로스포린 (Cyclosporine) A, 디설피람 (Disulfiram), 엑세메스탄 (Exemestane), 펠바메이트 (Felbamate), 페노피브레이트 (Fenofibrate), 피나스테리드 (Finasteride), 플라마제닐 (Flumazenil), 플루니트라제팜 (Flunitrazepam), 퓨로세미드 (Furosemide), 가바펜틴 (Gabapentin), 갈란타민 (Galantamine), 할로페리돌 (Haloperidol), 이부프로펜 (Ibuprofen), 이소프로테레놀 (Isoproterenol), L-카르니틴 (carnitine), 리오티로닌 (Liothyronine; T3), 로사르탄 (Losartan), 록사핀 (Loxapine), 메타프로테레놀 (Metaproterenol), 메타라미놀 (Metaraminol), 메트포르민 (Metformin), 메티마졸 (Methimazole), 메틸에르고노빈 (Methylergonovine), 메토피론 (Metopirone), 메토프롤롤 (Metoprolol), 미페프리스톤 (Mifepristone), 몬테류카스트 (Montelukast), 나돌롤 (Nadolol), 날트렉손 (Naltrexone), 날록손 (Naloxone), 노르플록사신 (Norfloxacin), 펜타조신 (Pentazocine), 페녹시벤즈아민 (Phenoxybenzamine), 페닐부티레이트 (Phenylbutyrate), 필로카핀 (Pilocarpine), 피오글리타존 (Pioglitazone), 프라조신 (Prazosin), 랄록시펜 (Raloxifene), 리팜핀 (Rifampin), 심바스타틴 (Simvastatin), 스피로노락톤 (Spironolactone), 타목시펜 (Tamoxifen), 트릴로스탄 (Trilostane), 발프론 산 (Valproic acid) 카바마제핀 (Carbamazepine), 케토프로펜 (Ketoprofen); 플루비프로펜 (Flurbiprofen), 디클로페낙 (Diclofenac), 멜록시캄 (Meloxicam), D-소르비톨 (Sorbitol), 타클로리무스 (Tacrolimus), 디아제팜 (Diazepam), 두타스테리드 (Dutasteride), 인도메타신 (Indomethacin), 디노프로스톤 (Dinoprostone), 카바콜 (Carbachol), 에스트라디올 (Estradiol), 쿠르쿠민 (Curcumin), 리튬 (Lithium), 라파마이신 (Rapamycin), 베타인 (Betaine), 트레할로스 (Trehalose), 아밀로리드 (Amiloride), 알부테롤 (Albuterol).

상술한 바와 같이, 본 발명은 특정 세포 경로가 CMT 또는 관련 장애를 효과적으로 치료하기 위하여 조절될 수 있음을 나타낸다. 보다 구체적으로는, 본 발명은 말초성 미엘린 단백질(들)의 발현, 접힘 또는 수송을 포함하는 PMP22의 기능성은 무스카린성 수용체 (muscarinic receptor), GABA-B 수용체, 스테로이드 호르몬 수용체 (steroid hormone receptor), 오피오이드 수용체 (opioid receptor), 소르비톨 신호 전달 경로 (sorbitol signalling pathways), 갑상선 호르몬 신호 전달 경로 (thyroid hormone signalling pathway)에 영향을 미치거나 또는 ERK (extracellular signal-regulated kinase)을 활성화시키거나 또는 pAkt 키나제 및/또는 COX 저해제를 저해하는 약물로 조절가능하게 되어 결국 CMT 및 관련 장애의 새로운 치료학적 접근법의 설계를 가능하게 한다. 이러한 경로들은 가능한 가장 탁월한 치료학적 효과를 달성하기 위하여 독립적으로 또는 조합하여 조절될 수 있다.

일반적으로, PMP22 유전자의 발현을 정상화하는 약물 조합의 형태는 CMT 또는 관련 장애의 치료학적 치료법을 위해 하기와 같이 제시한다:

(I) PMP22 유전자 및 이의 단백질의 기능과 관련된 동일한 세포성 경로에 영향을 미치는 약물들의 조합,

( II ) PMP22 유전자 및 이의 단백질의 기능으로 수렴되는, 서로 상이한 신호 전달 경로를 조절하는 약물들과의 조합,

( III )- PMP22 유전자 및 이의 단백질 산물의 기능을 조절하는 서로 상이한 신호 전달 경로를 조절하는 약물들과의 조합.

이러한 조합들은 PMP22 유전자의 전사과정에 상가 또는 상승 효과를 발휘하므로 선택된 약물들의 유효치료 용량을 유의적으로 감소시키거나 이들의 바람직하지 않은 부작용을 최소화하도록 허용되어야 한다.

본 발명에 따른 바람직한 약물 조합은:

(1) 스테로이드 호르몬 수용체 길항제 및 무스카린성 수용체 작용제 (muscarinic receptor agonist), GABA-B 수용체 작용제, ERK 활성화제(activator), pAkt 키나제 저해제(kinase inhibitor), 갑상선 호르몬 신호 전달계 영향 약물 (a drug affecting thyroid hormone signalling), 소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, COX 저해제로부터 선택된 하나의 화합물;

(2) 무스카린성 수용체 작용제 및 GABA-B 수용체 작용제(agonist), ERK 활성화제(activator), pAkt 키나제 저해제(kinase inhibitor), 갑상선 호르몬 신호 전달계 영향 약물 (a drug affecting thyroid hormone signalling), 소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, COX 저해제로부터 선택된 하나의 화합물;

(3) GABA-B 수용체 작용제 및 ERK 활성화제(activator), pAkt 키나제 저해제(kinase inhibitor), 갑상선 호르몬 신호 전달계 영향 약물 (a drug affecting thyroid hormone signalling), 소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, 및 COX 저해제로부터 선택된 하나의 화합물;

(4) ERK 활성화제 및 pAkt 키나제 저해제(kinase inhibitor), 갑상선 호르몬 신호 전달계 영향 약물 (a drug affecting thyroid hormone signalling), 소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, 및 COX 저해제로부터 선택된 하나의 화합물;

(5) pAkt 키나제 저해제 및 갑상선 호르몬 신호 전달계 영향 약물 (a drug affecting thyroid hormone signalling), 소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, 및 COX 저해제로부터 선택된 하나의 화합물;

(6) 갑상선 호르몬 신호 전달계 영향 약물 및 D-소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, 및 COX 저해제로부터 선택된 하나의 화합물;

(7) 소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, 및 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, 또는 COX 저해제;

(8) 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, 및 COX 저해제로부터 선택된 약물 조합으로부터 선택되는 것이다.

본 발명의 바람직한 약물 조합의 예는:

- 스테로이드 호르몬 수용체 길항제 및 무스카린성 수용제 작용제;

- 스테로이드 호르몬 수용체 길항제 및 GABA-B 수용체 작용제;

- 스테로이드 호르몬 수용체 길항제 및 ERK 활성화제;

- 스테로이드 호르몬 수용체 길항제 및 pAkt 키나제 저해제;

- 스테로이드 호르몬 수용체 길항제 및 갑상선 호르몬 신호 전달 저해제;

- 스테로이드 호르몬 수용체 길항제 및 COX 저해제;

- 무스카린성 수용체 작용제 및 GABA-B 수용체 작용제;

- 무스카린성 수용체 작용제 및 ERK 활성화제;

- 무스카린성 수용체 작용제 및 pAkt 키나제 저해제;

- 무스카린성 수용체 작용제 및 갑상선 호르몬 신호 전달계 저해제;

- 무스카린성 수용체 작용제 및 COX 저해제;

- GABA-B 수용체 작용제 및 ERK 활성화제;

- GABA-B 수용체 작용제 및 pAkt 키나제 저해제;

- GABA-B 수용체 작용제 및 갑상선 호르몬 신호 전달계 저해제;

- GABA-B 수용체 작용제 및 COX 저해제;

또는

- ERK 활성화제 및 pAkt 키나제 저해제;

- ERK 활성화제 및 갑상선 호르몬 신호 전달계 저해제;

- ERK 활성화제 및 COX 저해제;

또는

- 갑상선 호르몬 신호 전달계 저해제 및 COX 저해제로부터 선택되는 것이다.

본 발명의 바람직한 구현예로서, 상기 스테로이드 호르몬 수용체 길항제는 화합물 F이고, 상기 무스카린성 수용체 작용제는 화합물 A 또는 화합물 C이고, 상기 GABA-B 수용체 작용제는 화합물 B 또는 화합물 E이고, 상기 pAkt 키나제 저해제는 화합물 D이고, 상기 ERK 활성화제는 화합물 A인 것이다.

본 발명의 바람직한 특정의 구현예로서, 본 발명은 CMT 또는 관련 장애를 치료하기 위한, 화합물 A 및 스테로이드 호르몬 수용체 길항제, 무스카린성 수용체 작용제 (muscarinic receptor agonist), GABA-B 수용체 작용제, ERK 활성화제(activator), pAkt 키나제 저해제(kinase inhibitor), 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, COX 저해제 및 갑상선 호르몬 신호 전달계 저해제로부터 선택된 적어도 제 2차 화합물을 포함하는 조합치료(combination theraphy)를 제공하는 것이다.

본 발명의 바람직한 특정의 구현예로서, 본 발명은 CMT 또는 관련 장애를 치료하기 위한, 화합물 B 및 스테로이드 호르몬 수용체 길항제, 무스카린성 수용체 작용제 (muscarinic receptor agonist), ERK 활성화제(activator), pAkt 키나제 저해제(kinase inhibitor), 소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, COX 저해제 및 갑상선 호르몬 신호 전달계 저해제로부터 선택된 적어도 제 2차 화합물을 포함하는 조합치료(combination theraphy)를 제공하는 것이다.

본 발명의 바람직한 특정의 구현예로서, 본 발명은 CMT 또는 관련 장애를 치료하기 위한, 화합물 C 및 스테로이드 호르몬 수용체 길항제, GABA-B 수용체 작용제, ERK 활성화제(activator), pAkt 키나제 저해제(kinase inhibitor), 소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, COX 저해제 및 갑상선 호르몬 신호 전달계 저해제로부터 선택된 적어도 제 2차 화합물을 포함하는 조합치료(combination theraphy)를 제공하는 것이다.

본 발명의 바람직한 특정의 구현예로서, 본 발명은 CMT 또는 관련 장애를 치료하기 위한, 화합물 D 및 스테로이드 호르몬 수용체 길항제, 무스카린성 수용체 작용제 (muscarinic receptor agonist), GABA-B 수용체 작용제, 소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, ERK 활성화제(activator), COX 저해제 및 갑상선 호르몬 신호 전달계 저해제로부터 선택된 적어도 제 2차 화합물을 포함하는 조합치료(combination theraphy)를 제공하는 것이다.

본 발명의 바람직한 특정의 구현예로서, 본 발명은 CMT 또는 관련 장애를 치료하기 위한, 화합물 E 및 스테로이드 호르몬 수용체 길항제, 무스카린성 수용체 작용제 (muscarinic receptor agonist), 소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, ERK 활성화제(activator), pAkt 키나제 저해제(kinase inhibitor), 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, COX 저해제 및 갑상선 호르몬 신호 전달계 저해제로부터 선택된 적어도 제 2차 화합물을 포함하는 조합치료(combination theraphy)를 제공하는 것이다.

본 발명의 바람직한 특정의 구현예로서, 본 발명은 CMT 또는 관련 장애를 치료하기 위한, 화합물 F 및 무스카린성 수용체 작용제 (muscarinic receptor agonist), GABA-B 수용체 작용제, ERK 활성화제(activator), pAkt 키나제 저해제(kinase inhibitor), 소르비톨(sorbitol) 신호 전달계 영향 약물, 오피오이드(opioid) 수용체 길항제, COX 저해제 및 갑상선 호르몬 신호 전달계 저해제로부터 선택된 적어도 제 2차 화합물을 포함하는 조합치료(combination theraphy)를 제공하는 것이다.

본 발명의 약물 조합의 구체적이고 바람직한 실시예로서, 본 발명은 활성 물질로서 적어도:

(I) 화합물 F 및 화합물 E

( II ) 화합물 C 및 화합물 B

( III ) 화합물 F 및 화합물 C

화합물 F 및 화합물 B

화합물 F 및 화합물 A

화합물 F 및 화합물 D

화합물 C 및 화합물 A

화합물 C 및 화합물 D

화합물 B 및 화합물 A

화합물 B 및 화합물 D

화합물 A 및 화합물 D

화합물 G 및 화합물 D 조합을 포함하는 것이다.

본 발명에 따른 치료법은 임의의 기타 치료법과의 연계하고/연계하거나 약물 조합 또는 단독으로서 수행가능하다. 이는 의사가 가깝게 치료 효과를 관찰하고 필요한 어떠한 추가 처치도 가능하도록 가정, 병원, 임상병원, 병원외 환자 병동 또는 병원에서 수행가능하다.

본 치료법의 기간은 치료할 병의 위중 정도, 환자의 나이 및 상태, 치료에 대한 환자의 반응정도에 의존한다.

추가적으로, 추가적인 신경병 장애로 진행할 위험성이 큰 개인 (예를 들어, 유전적으로 예를 들어, 당뇨병이 예정되거나 앓고 있거나, 발암 상태 치료요법 하에 있는 사람)은 궁극적으로 신경병성 반응의 유발을 경감시키거나 또는 지연시키기 위한 예방학적 치료법을 수용할 수도 있다.

상기 조합의 개개 구성요소의 투여용량, 빈도 및 투여경로는 각각 독립적으로 조절가능하다. 예를 들어, 제 2차 약물이 근육 내로 투여되는 반면에 제 1차 약물은 경구 투여될 수도 있다. 상기 조합 치료법은 환자 신체가 예기치 못한 부작용으로부터 회복될 기회를 주기 위하여 휴식 기간을 포함시키는 것과 같은 단속적 주기가 부여될 수도 있다. 상기 약물은 또한 한 번의 약물 투여가 모두의 약물을 전달하도록 같이 포함시켜 제형화될 수 있다.

약학 조성물의 제형화

상기 조합 치료법에서 개개 약물의 투여는 기타 구성요소와 조합하여 말초신경에 미치는 PMP22의 상승된 발현에 의한 효과를 교정할 수 있는 정도의 약물 농도가 될 수 있는, 어떠한 적합한 수단으로도 가능하다.

상기 조합의 활성 성분이 순수 화학물질 형태로서 투여되도록 함도 가능하지만, 본원에서 약학 제형(pharmaceutical formulation)으로도 지칭되는 약학조성물(pharmaceutical composition) 형태로서 투여됨이 바람직하다.

가능한 조성물로는 경구투여(oral), 직장투여(rectal), 국소투여(topical) (경피투여, 구강투여 및 설하투여 포함), 또는 비경구투여 (parenteral) (피하 투여, 근육내 투여, 정맥내 투여 및 피내투여) 에 적합한 조성물을 포함하는 것이다.

보다 통상적으로, 이러한 제형들은 단일 패키지(single package), 대개, 블리스터 팩(blister pack)으로 간격있는 치료 기간동안 사용하기 위한 계량 투여단위 용량으로 투여하기 위한 몇몇 투여 단위 또는 기타 수단을 포함하는 “환자용 팩(patient packs)” 형태로 환자에게 처방된다. 환자용 팩은 통상적으로 종래처방법으로는 분실할 수 있는 처방을 혼자용 팩에 포함된 패키지 삽입물 (package insert)로의 접근이 쉽도록 한 점에서 약사가 환자에게 대용량을 소분하는 기존 종래 처방법보다 우수한 장점을 갖는다. 패키지 삽입물의 내포물은 의사 지시에 따른 환자의 순응도를 개선시키는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 본 발명은 본원에서 전술한 바대로, 상기 제형에 적합한 포장 재료와 조합한 약학제형을 추가로 포함한다. 이러한 환자용 팩에서, 조합 치료법을 위한 의도된 사용은 치료에 가장 적합한 제형을 이용하여 도움을 주기 위한 지시내용, 사용법, 규정, 적용법 및/또는 기타 수단에 의하여 추론될 수 있을 것이다. 이러한 척도들은 환자용 팩을 본 발명의 조합에 의한 치료 용도에 구체적으로 적합하고 적용되도록 할 수 있게 한다.

본 약물은 임의의 적당한 양의 임의의 적합한 단체 물질을 포함할 수 있으며 상기 조성물 총 중량의 1-99% 함량으로 존재할 수 있다. 상기 조성물은 경구투여(oral), 비경구투여(parenteral) (예를 들어 정맥내 투여(intravenously), 근육내 투여(intramuscularly)), 직장투여(rectal), 경피투여 (cutaneous), 비강투여 (nasal), 질내투여 (vaginal), 흡입투여(inhalant), 피부투여(skin; 패취형(patch)), 또는 안구내 투여 (ocular administration) 경로 투여용으로 적합한 투여 형태로 제공될 수 있다. 따라서, 상기 조성물은 예를 들어, 정제(tablets), 캡슐제 (capsules), 환제 (pills), 산제(powders), 과립제 (granulates), 현탁제(suspensions), 에멀젼제(emulsions), 액제 (solutions), 히드로겔(hydrogels) 포함 겔제(gels), 반죽형(pastes), 연고(ointments), 크림(creams), 반창고 (plasters), 드렌치형(drenches), 삼투성 전달 기구 (osmotic delivery devices), 좌제 (suppositories), 관장제 (enemas), 주사제(injectables), 임플란트제 (implants), 스프레이제 (sprays), 또는 에어로졸제(aerosols)의 형태일 수 있다.

상기 약학 조성물은 고전적인 약학 기법에 따른 제형화가 가능하다 (예를 들어, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th Ed.), ed. A. R. Gennaro, Lippincott Williams & Wilkins, 2000 and Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York 참고).

본 발명에 따른 약학 조성물은 실질적으로 투여 즉시 또는 투여 후 임의의 예정된 시간 또는 투여 후 방출 계획 시점에서 방출되도록 제형화가 가능하다.

본 발명의 서방형 제형으로는 (i) 신체 내에서 초과 기간 또는 연장된 기간 동안 실질적으로 고정된 약물 농도를 창제하는 제형; (ii) 예정된 지체된 시간 이후에, 신체 내에서 초과 기간 또는 연장된 기간 동안 실질적으로 고정된 약물 농도를 창제하는 제형; (iii) 약물 활성 물질의 혈장 농도상의 변동에 수반되는 바람직하지 않은 부작용의 최소화 목적으로 신체 내에서 상대적으로 고정되고 유효한 약물 농도를 유지함으로서 예정된 기간 동안 약물 작용을 유지시키는 제형; (iv) 예를 들어, 병든 조직 또는 기관 내 또는 이들에 인접한 장소로의 서방성 조성물을 공간상 위치시키는 것과 같이 약물 작용을 국소화시키는 제형; 및 (V) 약물의 특정 목표 세포 유형으로 전달하기 위하여 담체 또는 화학적 유도체를 이용함으로서 약물 작용을 목표화하는 제형을 포함하는 것이다.

서방형 형태의 약물 투여는 특히 바람직하게는 약물이 단독 또는 조합하여 (i) 좁은 치료 지수 (therapeutic index) (즉, 위해한 부작용 또는 독 작용을 초래하는 혈장 농도 및 치료학적 효과를 초래하는 혈장 농도간의 차이가 작은 것으로; 대개, 치료 지수 (therapeutic index, TI),는 중간 유효량(median effective dose, ED50)에 대한 중간 치사량 (median lethal dose, LD50)의 비율로 정의된다); (ii) 위장관에서의 좁은 흡수 창(absorption window); 또는 (iii) 일일 동안 투여 빈도가 치료학적 수준으로 혈장 농도가 유지되게 하기 위하여 요구되도록 매우 단기간의 생물학적 반감기를 갖는 것이다.

방출 속도가 문제의 약물의 농도 대사율을 초과한 서방성 방출을 위하여 수많은 방법이 모색가능하다. 서방형 방출은 예를 들어, 다양한 형태의 서방성 조성물 및 코팅법을 포함하는, 다양한 제형 매개변수 및 성분을 적절하게 선택함으로서 수득가능하다. 따라서, 본 약물은 투여시 약물을 조절가능하게 (단일 또는 복수 단위 정제 또는 캡슐제 (capsule) 조성물, 오일 액제(oil solutions), 현탁제(suspensions), 에멀젼 (emulsions), 미세캡슐제(microcapsules), 미세구(microspheres), 나노입자(nanoparticles), 패취(patches), 및 리포좀 (liposomes)) 방출할 수 있도록 적절한 부형제로 약학 조성물로 제형화가 가능하다.

경구 투여용 고체상 투여 형태

경구용 제형은 비독성의 약학적으로 허용가능한 부형제와 함께 혼합된 활성 성분(들)을 포함하는 정제를 포함한다. 이러한 부형제 (excipients)로는 예를 들어, 무활성 희석제(diluents) 또는 충진제 (fillers) (예를 들어, 수크로스(sucrose), 미세결정성 셀룰로오스 (microcrystalline cellulose), 감자 전분을 포함하는 전분(starches), 탄산 칼슘 (calcium carbonate), 염화 나트륨 (sodium chloride), 인산 칼슘 (calcium phosphate), 황산 칼슘 (calcium sulfate), 또는 인산 나트륨 (sodium phosphate)); 과립화제 (granulating) 및 붕해제 (disintegrating agents) (예를 들어, 미세결정성 셀룰로오스를 포함한 셀룰로오스 유도체 (cellulose derivatives), 감자 전분을 포함한 전분(starches), 크로스카멜로오스 나트륨 (croscarmellose sodium), 알지네이트 (alginates), 또는 알긴 산 (alginic acid)); 결합제 (binding agents) (예를 들어, 아카시아(acacia), 알긴 산 (alginic acid), 알긴산 나트륨 (sodium alginate), 젤라틴 (gelatin), 전분(starch), 전호화분 녹말 (pregelatinized starch), 미세결정성 셀룰로오스(microcrystalline cellulose), 카복시메틸셀룰로오스 (carboxymethylcellulose sodium), 메틸셀룰로오스 (methylcellulose), 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 (hydroxypropyl methylcellulose), 에틸 셀룰로오스 (ethylcellulose), 폴리비닐피롤리돈 (polyvinylpyrrolidone), 또는 폴리에틸렌 글리콜 (polyethylene glycol)); 및 윤활제(lubricating agents), 활택제(glidants), 및 항점착제(antiadhesives) (예를 들어, 스테아린 산(stearic acid), 실리카(silicas), 또는 탈크(talc))일 수 있다. 기타 약학적으로 허용가능한 부형제로는 착색제(colorants), 착향제 (flavoring agents), 가소제(plasticizers), 가습제(humectants), 완충제(buffering agents), 및 유사체가 있다.

상기 정제는 코팅되지 않을 수도 있으며 또한 임의적으로, 위장관에서의 붕해 작용 및 흡수작용을 지연시켜 보다 장기간 지연된 작용을 발휘할 수 있도록 당업계에 잘 알려진 기술로 코팅될 수 있다. 상기 코팅은 예정된 양상(예를 들어, 서방성 제형을 달성하기 위하여)으로 약물 활성 성분을 방출하도록 적용가능하고 또는 위장관 통과 후까지(장용성 코팅) 약물 활성 성분이 방출되지 않도록 적용가능하다. 상기 코팅은 당 코팅(sugar coating), 필름 코팅(film coating) (예를 들어, 히드록시프로필 메틸 셀룰로오스 (hydroxypropyl methylcellulose), 메틸셀룰로오스 (methylcellulose), 메틸히드록시에틸셀룰로오스 (methyl hydroxyethylcellulose), 히드록시프로필셀룰로오스 (hydroxypropylcellulose), 카복시메틸셀룰로오스 (carboxymethylcellulose), 아크릴레이트 공중합체 (acrylate copolymers), 폴리에틸렌 글리콜 (polyethylene glycols) 및/또는 폴리비닐피롤리돈 (polyvinylpyrrolidone) 소재의), 장용성 코팅(enteric coating) (예를 들어, 메타크릴 산 공중합체 (methacrylic acid copolymer), 셀룰로오스 프탈레이트 (cellulose acetate phthalate), 히드록시프로필 메틸셀룰로오스프탈레이트 (hydroxypropyl methylcellulosephthalate), 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 아세테이트 숙시네이트 (hydroxypropyl methylcellulose acetate succinate), 폴리비닐 아세테이트 프탈레이트 (polyvinyl acetate phthalate), 쉘락 (shellac) 및/또는 에틸셀룰로오스(ethylcellulose) 소재의)일 수가 있다. 예를 들어 글리세릴 모노스테아레이트 (glyceryl monostearate) 또는 글리세릴 디스테아레이트 (glyceryl distearate)와 같은 시간 지연용 소재가 적용가능하다.

고체상 정제 조성물은 조성물이 원치 않는 화학적 변화 (예를 들어, 약물 활성 성분의 방출 전에 화학적 분해)가 발생하지 않도록 보호하도록 적용된 코팅을 포함할 수 있다. 상기 코팅은 저서 (Encyclopedia of Pharmaceutical Technology)에 개시된 바와 유사하게 고체상 투여 형태로 적용될 수 있다.

2개 약물은 정제 내에서 상호 혼합되거나 분배될 수도 있다. 예를 들어, 제 1차 약물은 정제 내면에 포함되고, 제 2차 약물은 제 1차 약물이 방출되기 전에 제 2차 약물의 실질적 부분이 방출되도록 정제 외부에 포함시킬 수도 있다.

또한 경구용 제형은 활성 성분이 비활성 고체상 희석제 (예를 들어, 감자전분, 미세결정성 셀룰로오스, 탄산 칼슘, 인산 칼슘 또는 카올린(kaolin)과 혼합된 저작성 정제(chewable tablets), 또는 경질 젤라틴 캡슐 (hard gelatin capsules); 또는 활성 성분이 물 또는 오일상 매체, 예를 들어, 액상 파라핀 (liquid paraffin), 또는 올리브 오일(olive oil)과 혼합된 연질 젤라틴 캡슐 (soft gelatin capsules)의 형태로 제공될 수 있다. 산제 및 과립제는 고전적 방법으로 상술하 성분을 정제 및 캡슐제 하부에 이용하여 제조가능하다.

경구용 서방성 조성물은 예를 들어, 약물 활성 물질의 용해 및/또는 확산을 조절함으로서 활성 약물을 방출하도록 설계할 수도 있다.

용해 또는 확산 조절용 방출은 약물의 정제, 캡슐제, 펠렛 (pellet) 또는 과립화 제형을 적절하게 코팅시키거나 약물을 적절한 매트릭스(matrix)에 혼입시켜 달성가능하다. 서방성 코팅제는 상술한 하나 이상의 코팅용 물질 및/또는 예를 들어, 쉘락(shellac), 밀납(beeswax), 글리코왁스 (glycowax), 케스터왁스 (castor wax), 카나우바 왁스 (carnauba wax), 스테아릴 알콜 (stearyl alcohol), 글리세릴 모노스테아레이트 (glyceryl monostearate), 글리세릴 디스테아레이트 (glyceryl distearate), 글리세릴 팔미토스테아레이트 (glycerol palmitostearate), 에틸셀룰로오스 (ethylcellulose), 아크릴성 수지 (acrylic resins), dl-폴리락트 산(polylactic acid), 셀룰로오스 아세테이트 부티레이트 (cellulose acetate butyrate), 폴리비닐 클로리드 (polyvinyl chloride), 폴리비닐 아세테이트 (polyvinyl acetate), 비닐 피롤리돈 (vinyl pyrrolidone), 폴리에틸렌 (polyethylene), 폴리메타크릴레이트 (polymethacrylate), 메틸메타크릴레이트 (methylmethacrylate), 2-히드록시메타크릴레이트 (hydroxymethacrylate), 메타크릴레이트 히드로겔 (methacrylate hydrogels), 1,3- 부틸렌 글리콜 (butylene glycol), 에틸렌 글리콜 메타크릴레이트 (ethylene glycol methacrylate), 및/또는 폴리에틸렌 글리콜 (polyethylene glycols)을 포함할 수 있다. 서방성 방출 매트릭스 제형(controlled release matrix formulation)에서, 상기 메트릭스 소재로는 에를 들어, 함수 메틸셀룰로오스 (hydrated metylcellulose), 카나우바 왁스 (carnauba wax) 및 스테아릴 알콜 (stearyl alcohol), 카보폴 (carbopol) 934, 실리콘 (silicone), 글리세릴 트리스테아레이트 (glyceryl tristearate), 메틸 아크렐레이트(methyl acrylate)-메틸 메타크릴레이트 (methyl methacrylate), 폴리비닐 클로리드 (polyvinyl chloride), 폴리에틸렌 (polyethylene), 및/또는 할로겐화 플로오로카본 (halogenated fluorocarbon)을 포함할 수 있다.

청구된 조합의 하나 이상의 약물을 함유한 서방성 조성물은 또한 부유성 정제 (buoyant tablet) 또는 캡슐제 (capsule) (즉, 경구 투여시, 특정한 기간 동안 위 내용물 상단에 부유하는 정제 또는 캡슐제)의 형태일 수 있다. 상기 약물의 부유성 정제 제형은 약물 혼합물을 부형제 및 20-75% w/w 함량의 ; 히드록시에틸셀룰로오스 (hydroxyethylcellulose), 히드록시프로필셀룰로오스 (hydroxypropylcellulose), 또는 히드록시프로필메틸셀룰로오스 (hydroxypropylmethylcellulose)과 같은 히드로콜로이드(hydrocolloids)로 과립화하여 제조가능하다. 상기 수득된 과립을 정제로 압축가능하다. 위액과 접촉시에, 상기 정제는 그 표면 주위에 실질적으로 수-불투과성 겔 방어벽(water-impermeable gel barrier)을 형성한다. 이러한 겔 방어벽은 정제가 위액에서 부유성을 유지하도록, 1 이하의 밀도를 유지시키는 작용을 갖는다.

경구투여용 액제

수첨가에 의한 액상 현탁액의 제조에 적당한 산제 (Powders), 분산성 산제 (dispersible powders), 또는 과립제(granules)가 경구 투여용으로 간편한 투여 형태이다. 현탁제로서의 제형은 활성 성분에 분산제(dispersing) 또는 습윤제(wetting agent), 현탁화제 (suspending agent), 및 하나 이상의 방부제(preservatives)와 혼합하여 제조한다. 적당한 현탁화제로는 예를 들어, 소듐 카복시메틸셀룰로오스 (sodium carboxymethylcellulose), 메틸셀룰로오스 (methylcellulose), 소듐 알지네이트 (sodium alginate) 등을 들 수 있다.

비경구용 조성물

또한 약학 조성물은 통상적인, 비독성 약학적으로 허용가능한 담체(carriers) 및 보체(adjuvants)를 함유하는 투여 형태, 제형 또는 적절한 전달 기구 또는 임플란트(implants)를 통하여 주사제(injection), 정맥내 주사(infusion) 또는 피하주입(implantation) (정맥내(intravenous), 근육내(intramuscular), 피하주사(subcutaneous) 등)에 의해 비경구적으로 투여 가능하다. 상기 조성물의 제형 및 제제는 약학 제형의 당업계에 종사하는 자에게 잘 알려져 있다.

비경구용 조성물이 몇 가지 용량을 함유하고 적절한 방부제가 첨가 가능한 단위 투여 용량 형태 (예를 들어 단일-용량 앰플 (single-dose ampules)), 또는 바이알(vials) 형태로 제공가능하다 (하기 참조). 상기 조성물은 액제 (solution), 현탁제 (suspension), 에멀젼 (emulsion), 피하주입용 정맥내 주사 기구 또는 전달 기구의 형태일 수 있거나 사용전 수분 또는 기타 적당한 운반체 (vehicle)로 재조립될 건조 산제 형태로 제공될 수 있다. 활성 약물(들)과 별개로, 상기 조성물은 적당한 비경구적으로 수용가능한 담체 및/또는 부형제를 포함할 수 있다. 상기 활성 약물(들)은 방출 조절을 위하여 미세구 (microspheres), 미세캡슐 (microcapsules), 나노입자 (nanoparticles), 리포좀 (liposomes), 등에 혼입가능하다. 상기 조성물은 현탁화제 (suspending), 가용화제 (solubilizing), 안정화제(stabilizing), pH-조절제 (adjusting agents), 및/또는 분산제 (dispersing agents)를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 멸균 주사용에 적합한 형태일 수 있다. 이러한 조성물을 제조하기 위하여, 적당한 활성 약물 (active drug(s))을 비경구용으로 수용 가능한 운반체로 용해 또는 현탁가능하다. 수분을 적용가능한 수용가능한 운반체 및 용매 중에서, 수분은 적당량의 염산, 수산화 나트륨 또는 적당한 완충액, 1,3-부탄디올(butanediol), 링거액 (Ringer's solution), 및 등장용 염화 나트륨 용액을 첨가함으로서 적당한 pH로 적정한다. 상기 수성 제형은 하나 이상의 방부제 (예를 들어, 메틸, 에틸 또는 n-프로필 p-히드록시벤조에이트)를 함유할 수도 있다. 상기 약물중 하나가 물에 매우 적게 또는 약간만 용해되는 경우에, 용해 증진제 또는 가용화제를 첨가가능하고 상기 용매는 10-60% w/w의 폴리에틸렌 글리콜 등을 함유할 수 있다.

서방성 비경구적 조성물은 수성 현탁액 (aqueous suspensions), 미세구 (microspheres), 미세캡슐 (microcapsules), 자기적 미세구 (magnetic microspheres), 오일 용액 (oil solutions), 오일 현탁액 (oil suspensions), 또는 현탁액 (emulsions)의 형태일 수 있다. 호환적으로, 상기 활성 약물은 생분해성 담체 (biocompatible carriers), 리포좀 (liposomes), 나노입자(nanoparticles), 임플란트 (implants), 또는 정맥 주사 기구 (infusion devices)로 혼입가능하다. 미세구 및/또는 미세캡슐 제조에 사용하기 위한 소재로는 예를 들어, 폴리갈락탄 (polygalactin), 폴리(poly)-(이소부틸 시아노아크릴레이트(isobutyl cyanoacrylate)), 폴리(poly)(2-히드록시에틸(hydroxyethyl)-L-글루타민(glutamnine))와 같은 생분해성(biodegradable)/생체흡수성(bioerodible) 중합체를 사용가능하다. 서방성 비경구적 제형을 제형화시 사용가능한 생분해성 담체로는 탄수화물 (carbohydrates) (예를 들어, 덱스트란(dextrans)), 단백질(proteins) (예를 들어, 알부민(albumin)), 지질단백질(lipoproteins), 또는 항체(antibodies)를 들 수 있다. 임플란트에 사용하기 위한 소재로는 비-생분해성 (non-biodegradable) (예를 들어, 폴리디메틸 실록산(polydimethyl siloxane)) 또는 생분해성 (biodegradable) (예를 들어, 폴리(카프로락톤)(poly(caprolactone)), 폴리(글리콜산)(poly(glycolic acid)) 또는 폴리(오르쏘 에스테르)(poly(ortho esters))일 수 있다.

직장투여용 조성물

직장투여을 위하여, 조성물을 위한 적당한 투여 형태로는 좌제 (에멀젼 또는 현탁제 형태), 및 직장용 젤라틴 캡슐 (rectal gelatin capsules) (액제 또는 현탁제)을 포함한다. 전형적인 좌제 제형으로서, 활성 약물(들)은 코코아 버터(cocoa butter), 에스테르화 지방산 (esterified fatty acids), 글리세린화 젤라틴 (glycerinated gelatin)과 같은 적절한 약학적으로 수용가능한 좌제 기제 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 다양한 수용성 또는 분산용 기제와 조합된다. 다양한 첨가제, 개선제 또는 계면활성제가 혼입될 수 있다.

경피 및 국소용 조성물

또한 약학 조성물은 미세구 및 리포좀을 포함하는 통상적인 비-독성 약학적으로 허용가능한 담체 및 부형제를 함유하는 투여 형태 또는 제형으로 경피투여 흡수를 위하여 피부에 국소적으로 투여가능하다. 상기 제형은 크림제 (creams), 연고제 (ointments), 로션제 (lotions), 리니멘트제 (liniments), 겔제 (gels), 히드로겔제(hydrogels), 액제 (solutions), 현탁제(suspensions), 스틱제 (sticks), 스프레이제(sprays), 페이스트제 (pastes), 플라스터제 (plasters) 및 기타 경피 약물 전달 시스템(transdermal drug delivery systems)을 포함한다. 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제로는 유화제 (emulsifying agents), 항산화제 (antioxidants), 완충화제 (buffering agents), 방부제 (preservatives), 습윤제 (humectants), 투과 증진제 (penetration enhancers), 킬레이트화제 (chelating agents), 겔-형성화제 (gel-forming agents), 연고 기제(ointment bases), 방향제 (perfumes), 및 피부보호제 (skin protective agents)를 포함가능하다.

유화제는 자연 발생적 검(예를 들어 아카시아 검 또는 트라가칸트 검)일 수 있다.

방부제, 습윤제, 투과 증진제로는 메틸 또는 프로필 p-히드록시벤조에이트(hydroxybenzoate)와 같은 파라벤류(parabens), 및 벤잘코니움 클로리드 (benzalkonium chloride), 글리세린 (glycerin), 프로필렌 글리콜 (propylene glycol), 요소 (urea) 등일 수 있다.

피부상의 국소 투여를 위한 상기한 약학 조성물은 또한 치료할 신체 또는 신체일부와 근접한 곳에 국소 투여하는 데 사용가능하다. 상기 조성물은 직접 적용하거나 또는 드레싱제(dressings)과 같은 특수 약물 전달 기구 또는 호환적으로, 플라스터제 (plasters), 패드(pads), 스폰지(sponges), 스트립(strips), 또는 기타 적당한 탄성 물질로의 적용을 위해 적용가능하다.

서방형 제형

화합물들은 서방형 제제로 사용가능하고, 및/또는 조직 분배 또는 생물학적 이용가능성을 변화시키는 시약과 같이 제형화가능하다. 보다 구체적으로, 본 발명의 바람직한 구현예로서, 2개 이상의 화합물의 조합은 조직 분배 및 생물학적 이용가능성을 변화시키기 위하여, 경구용, 비경구용 또는 척추강내 투여용으로 약물 용출 중합체 (drug eluting polymer), 또는 생분자 (biomolecules) 또는 미셀(micelle) 또는 리포좀-형성 지질(liposome-forming lipids) 또는 수중유(o/w) 에멀젼, 또는 PEG화(pegylated) 또는 고체상 나노입자로 제형화되는 것이다.

결합체

본 발명의 조합치료법에서, 상기 화합물은 서로 상이한 방법으로 약학 조성물과 관련될 수 있다. 이들은 분리된 개체로서 혼합가능하다. 이들은 개별적으로 제형화가 가능하다. 이들은 링커(linker)가 존재하거나 없이 공유결합성 또는 비공유결합성으로 결합될 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예로서, 적어도 2개 이상의 화합물들이 바람직하게는, 절단가능하거나 또는 절단이 불가능한 링커를 통하여 결합되는 것이다.

치료용량 및 치료 기간

상기 조합의 약물들은 동일 또는 상이한 약학 제형으로 동시에 또는 연속적으로 투여가능함도 인지되어야 할 것이다. 만일 연속적 투여라면, 제 2차 (또는 추가적) 활성 성분의 투여 지연은 상기 활성 성분의 조합상의 이로운 효과를 소실하지 않아야 한다. 본 발명에 따른 최소한의 요건은 상기 조합이 상기 활성 성분의 조합상의 이로운 효과를 갖는 조합된 용도를 위해 의도되어야 하는 것이다.

본 발명의 조합의 의도된 용도는 본 발명의 따른 조합을 이용하는 것에 도움을 주는 설비, 규정, 적용 및/또는 기타 수단에 의하여 추론 가능하다.

본 발명의 주제인 치료학적으로 효과적인 양의 2개 이상의 약물들은 PMP22 유전자의 상승된 발현을 감소시키고, CMT1A 질환으로 발전할 위험성을 예방하거나 감소시키며, 일단 CMT1A 질환이 임상적으로 명백한 경우는 CMT1A 질환 진행을 중지시키거나 약화시키고, 신경병증 최초 또는 연속된 발병의 위험성을 예방 또는 감소시키기 위해 유용한 약제 제조를 위하여 같이 사용될 수 있다.

본 발명의 활성 약물을 예를 들어, 1일 2회 또는 3회의 분할된 용량으로 투여가능함에도 불구하고, 조합된 개개 약물을 1일 1회 투여함이 바람직하고, 단일 약학 조성물 (단위 투여 형태)의 1일 1회 투여하는 것이 가장 바람직하다.

투여 기간은 수일 동안 1회 또는 수회 투여가능하고, 심지어 환자가 일생동안 투여가능하다. 만성 또는 적어도 주기적으로 반복적인 장기간 투여가 대부분 고지될 것이다.

본원에서 용어 “단일 투여 형태 (unit dosage form)”는 인간 객체를 위한 단일 투여량에 적합가능한 물리적으로 구분된 단위(예를 들어, 캡슐제, 정제 또는 적재된 주사 실린더 형태)를 의미하고, 개개 단위는 요구되는 약학 담체와 함께, 원하는 치료학적 효과를 달성하기 위하여 활성 물질 또는 계산된 활성 물질의 예정된 양을 포함하는 것이다.

단위 투여량을 위하여 바람직한 상기 조합의 개개 약물의 양은 치료할 개인의 전반적인 건강 상태를 고려하여, 투여 방법, 환자의 체중 및 연령, CMT1A 질환으로 야기된 신경병증성 손상의 심각도 또는 잠재적 부작용 위험성에 따라 좌우될 것이다.

추가적으로, 특정 환자에 대한 약제유전체학 (치료의 약물동력학, 약력학적 또는 유효성 양태의 유전자형 효과) 은 사용된 투여 용량에 영향을 미칠 수 있다.

보다 고용량의 투여가 요구되는 특히 손상된 CMT 질환 상황에 반응하는 경우 또는 보다 저용량이 선택되어야 하는 소아 치료 경우를 제외하고, 상기 조합의 개개 약물의 바람직한 투여용량은 장기간 치료요법 또는 임상 3상 시험에서 입증된 당업계에 통상적으로 처방되는 용량을 초과하지 않는 범위 이내이어야 할 것이다.

예를 들어,

(1) 화합물 F는 경구투여시, 약 2 내지 약 100 mg /일 범위내이다. 특정 용량은 국소적으로 투여시에 선별되어야 할 것이다.

(2) 화합물 D는 경구투여시, 약 1 내지 약 20 mg /일 범위내이다.

(3) 화합물 B는 경구투여시, 약 2 내지 약 20 mg /일 범위내이다. 나노입자 또는 이와 유사한 제형으로 투여시에는 상이한 용량이 적합할 것이다.

(4) 화합물 E는 경구투여시, 약 125 내지 약 500 mg /일 범위내이다.

(5) 화합물 C는 경구투여시, 약 1 내지 약 20 mg /일 범위내이다.

(6) 화합물 A는 경구투여시, 약 1 내지 약 50 g /일 범위내이다. 특정 용량은 주사투여시에 선별되어야 할 것이다.

가장 바람직한 투여용량은 장기간 유지 치료에 통상적으로 처방되는 용량의 1% 내지 10% 에 상응하는 양이다.

실제 투여되는 약물의 양은 병적 상태를 포함한 관련 상황 또는 치료할 대상의 상태, 투여될 정확한 조성물, 개개 환자의 연령, 체중 및 반응도, 환자 증상의 심각도, 및 투여 선택경로를 감안하여 의사에 의하여 결정되는 것으로 이해되어야 할 것이다. 결국, 상기 투여 용량 범위는 본원에서의 전반적인 지침 및 교시하고 있는 근거를 제공하도록 의도된 것이나, 본 발명의 범위는 이에 제한되지는 않는다.

본 발명은 샤르코-마리-투스 질환(Charcot-Marie-Tooth disease) 및 관련 장애를 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것으로, 본 발명은 CMT 또는 관련 장애의 치료 및 예방에 유용하다.

본 발명의 상기한 목적들 및 장점들은 하기한 발명의 상세한 설명뿐만 아니라, 명세서 전반에 걸친 설시되는 일부들을 의미하는 참고 기호 및 이에 제한되지 않은 첨부되는 하기 도에 대한 설명란을 고려한다면 보다 명확히 설명될 것이다.
도 1은 PMP22 mRNA 발현 수준에 대한 선택 약물들의 효과를 나타낸 도이며;
도 2은 PMP22 mRNA 발현 수준에 대한 선택 약물들의 효과를 나타낸 도이며;
도 3은 PMP22 mRNA 발현 수준에 대한 다양한 용량의 선택 약물들의 효과를 나타낸 도이며;
도 4은 PMP22 mRNA 발현 수준에 대한 선택 약물들의 효과를 나타낸 도이며;
도 5은 PMP22 mRNA 발현 수준에 대한 필로카핀 및 날트렉손 약물조합의 효과를 나타낸 도이며;
도 6은 동향(trends) 형태로 제시된 치료 연구를 통한 막대시험법 (Bar-test)에서 웅성 래트의 운동 측정 시험 결과이며 (A: 메티마졸(Methimazole) ; B: 필로카핀(Pilocarpine)을 의미함).
도 7은 16주 치료 후, 본 실험에서 기록된 평균-막대-시험법 시험 결과이며 (A: 메티마졸(Methimazole) ; B: 필로카핀(Pilocarpine)을 의미함);
도 8은 20주 동안 약물 치료된 CMT 래트에서 치료 후, 감각 신경 잠재 강도 (sensitive nerve potential amplitude)의 전기생리학적 측정 시험 결과이다 (A: 메티마졸(Methimazole) ; B: 필로카핀(Pilocarpine)을 의미함);

하기의 예에 있어서, 본 발명을 구체적으로 설명하지만, 이 실시예는 결코 본 발명의 범위를 한정하고자 함이 아닌 것으로 간주되어야 한다.

실시예 1. 세포배양

1.1. 상업적으로 입수가능한 래트 일차성 슈완세포(Commercially available rat primary Schwann cells)

래트 슈완세포(SC) 일차성 배양물 (Sciencell # R1700) 바이알을 해동한 후, 폴리(poly)-L-리신으로 미리 코팅된 75cm² 플라스크 속 배양액("Sciencell Schwann cell medium", Sciencell # R1701의 기본 배지)에서 10000 cells/cm² 밀도로 접종하였다. 상기 배양물은 증식을 촉진시키기 위하여 기초 배지에 5% 우태아혈청 (3H-Biomedical AB #1701-0025), 1% 슈완세포 성장 보조제 (3H Biomedical AB #1701-1752), 1% 겐타마이신 (시그마사 #G1397) 및 10μM 포르스콜린(Forskolin, 시그마사 # F6886)으로 구성되었다.

충만도에 도달 후 (세포 배치(batch)에 따라 4 내지 10 일), 슈완세포를 95% 이상 순도를 갖는 배양물을 제조하기 위하여, 부착된 섬유아세포로부터 SC 분리할 수 있는 부드러운 교반법 또는 면역패닝법(thy1.1 immunopanning)으로 정제하였다. 그리고 SC를 판독하고(염색법: Tryptan blue 방법), 동일한 SC 배양물에서 폴리(poly)-L-리신으로 미리 코팅된 75cm² 플라스크에서 접종하였다. 충만도에 도달시, 세포를 세척, 트립신처리(트립신-EDTA 1x 희석, Invitrogen #1540054), 칼슘 및 마그네슘 없이 PBS로 희석), 판독 및 5% FBS, 1% 세포 성장 보조제 (CGS), 40㎍/ml 겐타마이신 및 4μM 포르스콜린으로 처리된 슈완세포배지 (Sciencell Schwann cell)에서 12 웰-디쉬(well-dishes, 140세포/웰)로 플레이팅시켰다.

1.2 통상 방법으로 제조한 일차성 슈완세포 ( Custom -made rat primary Schwann cells)

일차성 슈완세포 배양물 (SC)을 스프라그-도울리 신생 래트 좌골 신경 (Sprague-Dawley newborn rats, P0 내지 P2)로부터 확립되었다. 모든 신생 래트를 희생시키고 페트리 디쉬(Petri dish)에서 분리하였다. 절편화는 멸균 조건하에서 수행하였다.

등 부위 피부를 뒷발 및 몸통 하부로부터 제거하였다. 좌골 신경을 분리하고 1% 페니실린/스트렙토마이신 용액 각각(50UI/ml 및 50㎍/ml; Invitrogen #15070) 및 1% 우 태아 알부민 (BSA, Sigma A6003)을 첨가한 빙냉 배지(Leibovitz, L15, Invitogen #11415) 함유 배양 디쉬에 이동하였다. 래트당 모든 신경을 빙냉 L15을 함유한 15ml 튜브에 옮겼다. 그리고 L15 배지를 제거하고 10mg/ml 콜라게나아제 (Sigma #A6003)를 첨가한 2.4ml DMEM (Invitrogen #21969035)으로 갈아 주었다. 신경을 37℃에서 30분간 배지에 배양하였다. 상기 배지를 제거하고 모든 신경들을 37℃에서 20분간 칼슘 및 마그네슘을 제거한 PBS (Invitrogen # 2007-03)로 희석한 트립신 (10% trypsin EDTA 10x, Invitrogen #15400054)으로 분해시켰다. 상기 반응을 DNase I (II 급, 0.1mg/ml Roche diagnostic #104159) 및 우 태아 혈청 (FCS 10%, Invitrogen #10270)을 포함한 DMEM을 첨가하여 정지시켰다. 세포 현탁액을 10ml 피펫으로 적정하였고 50ml 튜브 (Swinnex 13mm filter units, Millipore, 20㎛ nylon-mesh filters, Fisher)속 필터를 통하여 통과시켰다. 세포 현탁액을 상온에서 10분간 원심분리(350g)하였고 펠렛을 10% FCS 및 1% 페니실린/스트렙토마이신을 첨가한 DMEM에서 현탁시켰다. 세포를 계수하고 (트립탄 블루 법: Tryptan blue method), 5x.10⁵ 내지 10⁶ 세포/디쉬(dish)의 밀도에서 배양 플레이트(Falcon 100mm Primaria tissue culture plates)에 접종시켰다.

하룻밤 배양후, 배지를 DMEM, 10% FCS, 1% 페니실린/스트렙토마이신 및 10μM 시토신 b-D-아라비노퓨라노시드 (cytosine b-D-arabinofuranoside, Sigma #C1768)으로 갈았다. 48시간 후에, 배지를 제거하고 세포를 DMEM으로 3회 세척하였다. DMEM, 10% FCS, 1% 페니실린/스트렙토마이신, 2μM 포르스콜린(Forskolin, Sigma #F6886), 10㎍/ml 우 피질 추출물 (bovine pituitary extract, PEX, Invitrogen #13028)로 구성된 SC 성장 배지를 첨가하였다. 상기 배지를 2-3일마다 갈아 주었다.

배양 8일후 (세포 배치(batch)에 따라 4 내지 10일), 슈완세포는 충만도(confluency)에 도달하고, 다수의 오염된 섬유아세포를 포함하는 배양물을 면역패닝법(thy1.1 immunopanning)으로 정제하였다. 정제후, 세포들을 폴리(poly)-L-리신으로 미리 코팅된 75cm² 플라스크에서 10000 cells/cm² 의 밀도로 성장 배지에서 현탁시켰다. 충만도에 도달시, 세포를 세척, 트립신처리(트립신-EDTA), 판독 및 12 웰-디쉬 (100 000 cells/well)에 플리이팅시켰다.

1.3: 약물 배양

세포들을 12 웰-디쉬에서 플레이팅한 후에, 베지를 1% N2 보조제 (Invitrogen # 17502), 1% L-글루타민 (Invitrogen #25030024) 2.5% FBS (Sciencell #0025), 0.02 ㎍/ml 코르티코스테론(corticosterone, Sigma # C2505), 4μM 포르스콜린 및 50㎍/ml 겐타마이신을 보충한 DMEM-F12 (Invitrogen # 21331020) 혼합물로 구성된 정제된 배지로 대체하였다. SC 분화를 촉진시키기 위하여 성장 인자는 상기 배지에 첨가하지 않았다.

24 시간 후, 배지를 1% 인슐린트랜스페린셀레늄 (Insulin-Transferrin-Selenium) X (ITS, Invitrogen # 51300), 16㎍/ml 푸트레신 (Putrescine, Sigma # P5780), 0.02㎍/ml 코르티코스테론 및 50㎍/ml 겐타마이신을 보충한 정제된 배지(DMEM-F12) 로 대체하였다. 이 단계에서, 배지에는 프로게스테론 또는 포르스콜린도 넣지 않았다.

하루 후, 슈완세포를 24시간 (3 wells/condition) 동안 약물들의 조합 또는 단독 약물로 자극시켰다. 개개 약물의 준비는 세포 배양 배지에 약물 첨가 전에 수행하였다.

약물을 1% 인슐린트랜스페린셀레늄 (Insulin-Transferrin-Selenium) X (ITS, Invitrogen # 51300), 16㎍/ml 푸트레신, 0.02㎍/ml 코르티코스테론, 10nM 프로게스테론 및 50㎍/ml 겐타마이신으로 구성된 정제된 배지(DMEM-F12)에 첨가하였다. 약물 자극 동안에 포르스콜린을 제거하여 아데닐 시클라제 포화현상(adenylate cyclase saturation)을 회피할 수 있다.

실시예 2. 면역패닝법(thy1.1 immunopanning)으로 정제한 슈완 세포

섬유아세포 배양 오염을 방지하기 위하여, 슈완 세포를 클론(clone) Thy1.1 (ATCC TIB-103^TM) 면역패닝법 프로토콜을 이용하여 정제하였다.

항체 전-코팅된 100mm 박테리아 페트리 디쉬를 하기와 같이 제조하였다: 이러한 디쉬들을 PBS로 3회 세척하고, 4℃에서 하룻밤동안 20ml Tris HCl 용액 (50 mM, pH 9.5), 및 10㎍/ml 염소 항-마우스 IgM MU 항체 (Jackson ImmunoResearch #115-005-020)로 처리하고 ; PBS로 3회 세척하고, 0.02% BSA을 넣은 PBS 용액 및 상온에서 2시간 동안 항체 (Thy1.1 IgM antibody)를 포함하는 배양물 (T11D7e2 hybridoma culture, ATCC #TIB-103) 로부터 얻은 상등액으로 처리하였다. 최종적으로, 플레이트들을 세포 현탁물을 첨가 전에 PBS로 3회 세척하였다.

SC 를 트립신 EDTA로 탈착시켰다. 대다수 세포를 현탁이 되자마자, 상기 트립신을 DMEM-10% FBS으로 중화시키고 세포를 원심분리하였다. 분해된 세포 펠렛을 ml 당 0.66x10⁶ cells의 밀도 (최대치)에서 0.02% BSA를 넣은 15ml 배지에서 재현탁시키고, 페트리 디쉬 (약 6.6 백만 세포/10ml/100mm 디쉬)로 옮겼다.

세포 현탁물을 비특이적인 결합을 방지하고자 매일 15분간 37℃에서 45분간 부드럽게 교반하면서 디쉬 (Thy 1.1 코팅 페트리 디쉬)에서 배양하였다. Thy1.1을 발현하는 다수의 섬유아세포를 디쉬에 부착시킨다. 배양 종료시에, 세포 현탁물을 회수하고 원심분리하였다. 이러한 세포 현탁물은 이론상으로 슈완 세포만 포함한다. 세포를 원심분리하고 세포 펠렛을 폴리-L-리신 처리된 T75cm² 플라스크에서 16 세포/cm² 밀도로 10μM 포르스콜린을 넣은 성장 배지에서 현탁시켰다.

실시예 3. 정량적 역전사 중합 연쇄 반응 (Q- RT - PCR )

정량적 RT-PCR을 래트 슈완 세포 일차성 배양물에서의 하우스키핑(housekeeping) Ribosomal L13A mRNA와 관련한, 약물 자극 후의 PMP22 mRNA 수준을 비교하는 데 사용하였다.

차갑게 멸균된 PBS로 세척한 후에, 세포 시료로부터 총 RNA를 추출하고 키트(Qiagen RNeasy micro kit, Qiagen #74004)를 이용하여 SC로부터 정제하였다. 핵산은 1㎕ RNA 시료를 이용하여 기기(Nanodrop spectrophotometer)로 정량하였다. RNA 보전성(integrity)은 기기 (BioAnalyzer, Agilent)로 측정하였다.

RNAs를 표준 프로토콜에 따라 cDNA로 역전사시켰다. PCR 증폭을 위한 cDNA 주형을 20㎕의 최종 부피로, oligo(dT) 존재하에 42℃에서 60분간 역전사 효소 (SuperScript II reverse-transcriptase, Invitrogen # 18064-014)를 이용하여 200ng의 총 RNA로부터 합성하였다.

cDNA를 시스템 (LightCycler®480; Roche Molecular Systems Inc.)을 이용하여 PCR 증폭을 수행하였다. 개개 cDNA를 PCR 증폭에 사용하기 전에 5배 희석하였다. 이러한 2.5㎕ cDNA을 PCR 반응용액에 넣었다 (최종 부피: 10㎕). 예비실험 결과는 정량화가 약쪽 서열에 대한 증폭 과정의 증식기에 완료되고 참고용 유전자의 발현이 서로 상이한 배양 조건에서 일정함을 확인하였다.

PCR 반응을 래트 PMP22 (NM_017037), 5-GGAAACGCGAATGAGGC-3 의 500nM 정방향 프라이머(forward primer) 및 500nM 5-GTTCTGTTTGGTTTGGCTT-3 (148-bp의 증폭)의 500nM 역방향 프라이머(forward primer)의 증폭으로 수행하였다. RPL13A ribosomal (NM_173340) RNA의 152-bp 단편(fragment)을 500nM 정방향 프라이머 5-CTGCCCTCAAGGTTGTG-3, 및 500nM 역방향 프라이머 5-CTTCTTCTTCCGGTAATGGAT-3을 이용하여, 결과 정상화를 위하여 분리된 반응을 평행하게 증폭시켰다.

본 발명자들은 RT-Q-PCR 분석법 수행을 위하여 FRET 화학법을 사용하였다. FRET 프로브(probe)들은 이들의 3’-말단이 공여 형광 염색제(donor fluorophore dye, Fluorescein)로 표지된, 0.3μM Pmp22-FL-5-GCTCTGAGCGTGCATAGGGTAC 또는 Rpl13A-FL-5-TCGGGTGGAAGTACCAGCC으로 구성되었다. 0.15μM Red640 브로브들은 하기와 같이 정의된다: 이들의 3’-말단이 수용 형광 염색제(acceptor fluorophore dye, Rhodamine Red 640)로 표지된, Pmp22-red-5'-AGGGAGGGAGGAAGGAAACCAGAAA- 또는 Rpl13A-red-5'-TGACAGCTACTCTGGAGGAGAAACGGAA.

개개 PCR 반응은 10㎕의 키트(master mix kit, Roche #04-887301001) 최종농도에서 2.5㎕ cDNA 주형을 포함시켰다.

PCR 조건은 하기와 같다: 95℃에서 10초, 63℃에서 10초 및 72℃에서 12초 및 40℃에서 30초 (40회 증폭 순환). PMP22 유전자 발현의 상대적인 수준은 목표 유전자 PMP22 및 내인성 내부 표준 RPL13A로부터 발생한 산물들 간의 비를 측정하여 확인하였다.

실시예 4. 유세포 분석법( FACS )에 의한 PMP22 단백질 발현 분석법

약물 배양 8시간, 24시간 및 48시간 후에, 상등액을 회수하고, 원심분리하고, 냉동시켰다. SC를 트립신-EDTA으로 탈착하였다. 대다수 세포가 현탁되자마자, 트립신을 10% FCS을 첨가한 DMEM을 이용하여 중화시켰다.

세포가 있는 상등액을 회수하고 원심분리하였다. 세포 펠렛을 미세 뷰브로 옮기고, PBS로 1회 세척하고 특수 용액 (AbCys #Reagent A BUF09B)으로 고정화하였다. 10 분후, 세포를 PBS로 1회 세척하고 4℃로 유지하였다.

세포 고정화 5일째, 서로 상이한 배양 기간을 갖는 모든 세포 시료들을 하기한 프로토콜을 이용하여 표지화하였다.

세포를 5분간 7000 rpm에서 원심분리하고 펠렛을 투과용 용액 (AbCys #Reagent B BUF09B)으로 현탁하고 상온에서 1시간동안 1차 PMP22 항체 (Abcam #ab61220, 1/50) 로 표지화하였다. 그리고 세포를 5분간 7000 rpm에서 원심분리하고 세포 펠렛을 PBS로 1회 세척하였다. 2차 항체를 첨가하고, 상온에서 1시간 동안 Alexa Fluor 488 (goat anti-rabbit IgG, Molecular Probes #A11008, 1/100)로 결합시켰다. 그리고 세포를 5분간 7000 rpm에서 원심분리하고 세포 펠렛을 PBS로 1회 세척하였다. Alexa Fluor 488 (chicken anti-goat IgG, Molecular Probes #A21467, 1/100)으로 결합된 3차 항체를 첨가하여 표지를 증가시켰다. 그리고 세포를 PBS로 1회 세척하였다. 항체가 없는 대조군 (비표지된 세포; unlabelled cells)은 자가형광도(autofluorescence) 수준을 측정하고 광증폭기 (photomultiplicators) 민감도를 적용하기 위하여 사용하였다. 1차 항체는 없이 2차 항체 및 3차 항체를 넣은 대조군을 항체의 비-특이적인 결합을 측정하기 위하여 수행하였다.

데이타 습득 및 분석은 5000개 세포에서 분석기(FACS Array cytometer) 및 프로그램(FACS Array software, Becton Dickinson)으로 수행하였다. 세포 내부 복잡도에 따른 (granularity) 세포 부피(크기) 및 측면 산란 검출도 (Side Scatter, SSC)와 관련된 산란 검출도 (Forward Scatter, FSC)를 분석하였다. PMP22의 발현을 위하여, 총 세포 내에서 분석을 수행하고 양성 세포 백분율을 계산하였다. 양성 세포는 2차 항체를 갖는 대조군보다 높은 형광 강도를 갖는 세포이다.

SC 수를 정량화하기 위하여, 대조군 배지중 세포를 항체 항-S100 단백질을 이용하여 분석하였다.

세포를 하기 프로토콜에 따라 제조하였다: 슈완 세포를 상온에서 1시간동안 항체 항-S100 단백질 (antibody anti-S100 Protein, Dako #S0311, 1/100)으로 염색하였다. 본 항체를 3차 항체로 배양하지 않고 면역염색(PMP22 immunostaining)을 위하여 상기한 프로토콜에 따라 표지하였다.

실시예 5. 약물 배양 및 활성

약물을 아데닐 시클라제 포화현상(adenylate cyclase stimulation saturation)을 방지하고자, 10nM 프로게스테론은 존재하나 포르스콜린은 없이 상기한 바(3 wells/condition)와 동일하게 24시간 또는 48시간동안 배양하였다. 약물 배양 후에, 상등액을 회수하고 슈완세포를 RT-Q-PCR 분석을 위하여 냉동시켰다.

본 발명자들은 PMP22 발현에 대한 약물활성이 대조군에 비하여 PMP22 수준이 유의적으로 감소시에 측정하였다. 하기 표 1은 PMP22 발현 감소를 야기하는 20개 약물에 대한 결과를 요약하였다.

화합물	mRNA	단백질
바클로펜(baclofen)	+
메티마졸 (methimazole)	+	+
미페프리스톤 (Mifepristone)	+
날트렉손 (Naltrexone)	+
필로카핀 (pilocarpine)	+	+
소르비톨 (Sorbitol)	+
디설피람 (Disulfiram)	+
페노피브레이트 (Fenofibrate)	+
할로페리돌 (Haloperidol)	+
인도메타신 (Indomethacin)	+
몬테류카스트 (Montelukast)	+
심바스타틴 (Simbastatin)	+
트릴로스탄 (Trilostane)	+
에스트라디올 (Estradiol)-d	+
이소프로테레놀 (Isoproterenol)	+
디클로페낙 (Diclofenac)	+	+
플루비프로펜 (Flubiprofen)	+	+
인도메타신 (Indomethacin)	+	+
케토프로펜 (ketoprofen)	+	+
멜록시캄 (meloxicam)	+	+

18개 약물에 대한 데이터는 24시간 배양 후에 PMP22 mRNA 발현상의 유의적인 감소를 나타냈고 결과는 도 1-3에 나타냈다. 이러한 데이터는 심지어 매우 적은 투여용량에서도 PMP22 mRNA 수준상의 실질적인 감소를 나타낸다.

실시예 6. 24시간 배양후 PMP22 단백질 수준

본 발명자는 PMP22 단백질 발현 (FACS 분석법)을 억제하는 몇 개 약물의 억제능을 시험하였다. 도 4는 6개 약물의 결과를 나타내고 이들이 세포 배양물에 첨가된 후 24시간에 유의적으로 PMP22 발현을 감소시킬 수 있음을 나타낸다. PMP22 단백질 수준에 대한 몇몇 개별 약물들의 작용도 또한 도 1에 나타냈다.

도 5에서, 배양 24시간 후 PMP22 단백질 발현에 대한 필로카핀 및 날트렉손과의 조합 효과를 나타냈다. 단백질 발현의 수준을 처치하지 않은 대조군과 비교하였다. 이러한 상이성은 통계학적으로 유의성이 있는 것으로 나타났다.

표 2에 PMP22 단백질 발현상에 미치는 다양한 농도의 다양한 약물 조합의 효과에 대한 결과를 요약한다. 이러한 결과는 통계학적으로 유의적이고 제시된 약물 조합의 장점 및 유리한 효과를 입증하는 것이다.

조합	%PMP22 FACS	% sd	편차	p 값
소르비톨 1mM +메티마졸 1μM	75	8	-25%	p<0.001
소르비톨 100μM +메티마졸 10μM	74	7	-26%	p<0.001
소르비톨 100μM +메티마졸 1μM	74	7	-26%	p<0.001
필로카핀 10nM +날트렉손 1μM	63	6	-37%	p<0.0001
필로카핀 10nM +날트렉손 100nM	68	5	-32%	p<0.0001
소르비톨 1mM +날트렉손 1μM	67	10	-33%	p<0.0001
소르비톨 1mM +날트렉손 100nM	70	10	-30%	p<0.0001
소르비톨 100μM +날트렉손 1μM	70	12	-30%	p<0.001
소르비톨 100μM +날트렉손 100nM	62	14	-38%	p<0.0001

실시예 7. CMT 동물 실험에서 생체내 시험

본 발명자들은 CMT 형질전환 래트 모델에서의 치료효과를 시험하였다. (마우스 PMP22 유전자의 3개의 추가적인 복사 유전자를 갖는 반접합체성 PMP22 형질전환 래트; Sereda et al., 1996; Grandis et al., 2004). 이러한 CMT 래트 모델은 임상적 관점에서 인간 CMT1A 질환의 우수한 유사시험 모델이다. 성인 CMT 래트는 CMT1A 환자의 운동 신경 전도 속도 감소와 유사한 수치, 즉, 50% 이하를 갖는다. 좌골 신경 자극 후에, 복합 근활동전위은 감소된 강도 및 비동기화를 나타낸다. 조직학적 및 전기생리학적 변화가 운동 신경 손상의 명백한 임상 증상 이전에 나타난다 (Sereda et al., 1996, 2003). 조직학적으로 근 위축증으로 확인되는 축삭 손상은 인간 CMT1A 증상과 일치한다.

4 주령 형질전환 PMP22 래트를 본 시험에 사용하였다. 본 시험 설계의 측면에서 (확률화, 다중비교법상 통계, 시료 크기 등), 생의학적 연구의 실험 설계 및 통계학 분야에서 통용되는 문헌 (4^thissue of 43^rd volume of ILAR Journal, (2002))에 제공된 내용과 일치하도록 검사하였다.

실험군은 암수 모두의 절은 래트들로 각각 구성하였다. 상기 래트들을 체중을 토대로 한 하기 확률화 계획에 따라 할당하였다. 몇몇 실험에서, 상기 확률화는 막대시험법(bar-test)에서의 래트 행동에 기초하여 수행하였다.

모든 암수 래트들은 치료군과 숫적으로 동일하거나 큰 분리된 대조군으로 제시된다.

래트를 10-20주간 개개 약물의 생체이용률에 따라 약물로 정기적으로 강제 사료 투입 또는 펌프(Alzet 삼투압 경피 펌프, DURECT Corporation Cupertino, CA)에 의한 주사로 처치하였다.

성장하는 체중에 따라 투여량을 조정하기 위하여 주당 2회씩 동물 체중을 측정하였다. 만일 상기 삼투압 펌프가 치료적 투여법으로 위하여 선택되는 경우에는, 상기 약물의 투여량은 펌프 지속기간(6주)를 초과하는 연령으로 예측되는 계산된 평균 동물 체중을 근거로 하여 계산되었다. 상기 펌프는 적절한 마취 프로토콜에 따라 필요시 재-장착된다.

행동 시험( Behavioural tests )

개개 3주 또는 4주째, 상기 동물을 행동시험에 사용하였다. 각 시험은 동일한 시간대에 동일한 연구원에 의하여 수행되었다: 이러한 일치성은 전체 실험과정 내내 유지되었다. 모든 처치법은 연구원에게 맹검하에 수행되었다. "막대 시험법(Bar test)" 및 "악력 시험법(Grip strength)"을 주로 시험에 사용하였다. 막대시험법의 시험계획은 예를 들어 기억력에 기인한 오차를 방지하고자 동물 성장에 따라 변화가능하다.

악력 시험법은 근력 (muscle force), 민감도 상태(sensitivity status) (예를 들어, 통증감각은 힘의 특정치를 변화시킬 수 있다) 및 행동 요소 (behavioural component, "동기화(motivation)")로 구성되는, 악력 수행상의 미묘한 차이를 탐지할 수 있게 한다. 그 수치는 앞발 및 뒷발 간에 차이를 나타내고 동물 연령에 크게 좌우된다.

본 악력 시험법은 동물이 앞발 또는 뒷발로 봉을 쥐는 행동을 지속하는 힘을 각각 측정하는 시험이다. 악력계를 힘을 측정하기 위해 그립(grip)에 설치한다 (Force Gauge FG-5000A). 래트를 앞발 또는 뒷발로 그립을 잡고 그립을 놓을 때까지 뒤로 래트를 부드럽게 잡아당기도록 실험자가 지속하였다. 동물이 그립을 놓을 때 측정된 힘을 기록하였다.

동물 당 앞발 힘을 측정하는 2번의 연속적인 시험 및 뒷발 힘을 측정하는 2번의 연속적인 시험을 수행하였고 최대 수치(앞발에 대해 한번 및 뒷발에 대해 한번)만을 기록하였다(N 중).

막대시험법(Bar Test)은 고정된 막대를 붙잡는 래트의 능력을 평가한다. 근육 약화를 나타내는 Pmp22 래트는 본 시험법에서 행동 결함을 나타낸다 (Sereda et al, 1996). 이 래트는 막대 (직경 : 2.5 cm, 길이 50 cm; 탁자위 30 cm) 중간에 네발로 위치하게 한다. 시험은 연속적으로 수행하고, 본 실험에서 시험 횟수 및 지속기간은 동물의 배취(batch)에 좌우된다. 본 실험의 가변성은 실험중 CMT 래트에서의 운동성 결함을 가장 잘 감지하기에 적합한 계획을 결정하기 위하여 도입된다.

개개 세션(session)에서 기록된 수행 지수(Performance indices):

(1) 막대에서 60초간(또는 배취 1, 세션 1 및 2에 대해서 30초) 붙잡는데 필요한 도전수 (or 30 sec for batch 1, session 1 and 2).

(2) 개개 도전 및 세션 평균에서 막대에서 소요된 시간(즉, 떨어지는 지연시간). 본 실험 과정중, 래트들이 막대에서 측정 한계 시간(cut-off time), 즉 30초 또는 60초 동안 머문후 세션이 종료되는 경우는 상기 측정 한계 시간(cut-off time, 즉 30초 또는 60초)은 도전이 완료되지 않는 것으로 간주함 (에를 들어, 도전(trial) 1, 2 및 3에서 10초 이하, 그리고 도전 4, 및 5에서 60초간의 머무름을 갖는 배취 8은 도전 6 내지 10으로 간주함).

(3) 떨어진 횟수.

전반적 건강 측정

동물의 체중, 명백한 신호 (털모양, 자세, 걸음걸이, 진전 등의 현상)을 실허내내 조사하였다. 등급 크기는 기록을 위해 사용되었다: 0= 정상, 1= 비정상.

추가 실험

적절한 경우, 래트를 전기생리학적 평가 및 조직학적 측정을 수행하였다.

결과

비교군으로만 사용한 화합물 PXT25가 어떠한 개선효과도 나타내지 않은반면에, 메티마졸(Methimazole)은 처치 과정 내내 막대 시험 행동을 개선시켰다 (도 6)

유사하게, 필로카핀은 처치 과정 내내 막대시험 행동을 개선시켰다 (도 6).

운동성 시험(motor performances)은 야생형(Wild type, WT) 군과 비교하여, 플라세보(placebo)로 처치한 서로 상이한 CMT 래트군에서 평균 3배 이하의 성공률을 나타냈다. 메티마졸 또는 필로카핀으로 처치한 처치군은 본 실험에서 동물의 개선효과를 나타냈는데, 이는 강제-사료 주입 8주 후 초기에 통계학적으로 유의적인 것으로 나타났다. 이러한 효과는 처치 16주에 매우 뚜렷하다 (도 7). 상기 동물은 플라세보군에 비교하여 유의적으로 보다 활동적으로 나타났고 WT 플라세보 군과 달리 더 이상 유의적으로 상이하지 않는 수준으로 회복하였다.

꼬리의 원접 부위에서 측정된 전위 강도는 TG 플라세보 군에서 유의적으로 약화되는 것으로 나타났으며 이는 탈수초화로 기인하는 중요한 축삭돌기 소실을 반영한다. 이러한 전기생리학적 매개변수는 신경전도속도 (nerve conduction velocity, (NCV)가 유의적으로 영향을 받지 않는 데 반하여 메티마졸 처치에 의하여 유의적으로 개선되는 것으로 밝혀 졌다 (도 8).

이러한 결과는 말초 신경의 미엘린화(myelination) 상태가 그다지 개선되지 않더라도 메티마졸의 작용이 축삭돌기 소실을 억제할 수 있음을 나타낸다. 필로카핀의 효과는, 그룹간 가변성 때문에 플라세보 군 매개변수의 상이성이 통계학적으로 유의성에 도달하지 못함에도 불구하고 필수적으로 동일한 효과를 나타내는 것으로 보인다. CMT1A에서, 감각신경활동전위(sensory nerve action potential, SNAP) 강도는 보다 감소하고 SNAP 지속시간은 CMT2보다 연장되었다. CMT1A에서의 복합 근활동전위 (CMAP) 및 감각신경활동전위 강도의 감소현상은 아마도 탈수초화 및 축삭돌기 기능부전의 조합된 효과인 것으로 보인다.

시험 말기에 형태계측학적 분석을 수행하였다. 뒷다리 측정에서 플라세보를 처치한 CMT 웅성 래트에서 좌골 신경 및 가자미근이 대조군 WT 래트와 비교시에 우의적으로 약화됨을 발견하였다. 이러한 결함은 메티마졸 처치로 인하여 완전하게 치료되는 것으로 밝혀졌고, 메티마졸 군에서의 전체 체중이 플라세보 군에 비교하여 약간 감소하였는 데 반하여 (데이타는 표시안함), 상기 근육 및 신경의 절대적 중량은 대조군 WT 래트에 비하여 보다 증가하였다.

이러한 시험결과는 생체 내에서 본 발명의 화합물이 CMT의 효과적인 치료법을 제공함을 나타낸다. 게다가, 개개 약물에 대해서 활성을 나타낸 것으로 나타난 초기 투여량이 표준 처방으로 인간에게 사용되는 용량과 균등한 용량의 1/4(메티마졸) 및 1/2(필로카핀)임에 주목하여야 할 것이다.

실시예 8. 치료 개요, 투여법 및 투여경로

인간에서의 2개 조합(투여경로가 상이)에 대한 투여법은 하기와 같다:

(1) 화합물 F 및 화합물 D

1 단일 약학 조성물로서 경구 투여시: 몇 개월 동안 매일 경우로 약 0.1 내지 약 20 mg 화합물 D 및 약 0.2 내지 약 50 mg 화합물 F 투여, 가장 바람직한 투여법은 조성물 중 2개 약물 조합을 단위당 0.1 내지 5 mg (매일) 투여함.

2 몇 개월간 동시에 경구투여시: 화합물 F는 주당 1회 약 5 내지 약 200mg 투여 (가장 바람직한 투여법은 주당 50mg 이하), 화합물 D는 매일 약 0.1 내지 약 20 mg 투여 (본 약물의 가장 바람직한 투여법은 매일 0.1 내지 5 mg 투여함).

3 몇 개월간 동시에 경구투여시: 화합물 D는 경구로 매일 약 0.1 내지 약 20 mg 투여 (본 약물의 가장 바람직한 투여법은 매일 0.1 내지 5 mg 투여함), 및 약물 방출용 피부 패취용으로서 화합물 F은 매일 약 0.2 내지 약 2mg의 속도로 방출하는 투여법.

(2)화합물 A 및 화합물 F.

1 캡슐형 또는 드링크(drink) 형태(바람직하게는 우유에)로 용해되어야 하는 드롭(drop)형태의 단일 약학 조성물로서 정기적으로, 경구로, 일일 2회 또는 3회 투여: 화합물 F의 바람직한 총 매일 투여량은 약 0.1 내지 약 5 mg 이고 화합물 A 는 약 1 내지 약 50 g임.

2 몇 개월간 동시 투여시: 주당 1회 화합물 F는 약 5 내지 약 200 mg 투여 (가장 바람직한 투여량은 주당 50 mg 이하), 및 화합물 A는 드링크형으로 일일 2회, 화합물 A의 총 투여량은 약 1 내지 약 50 g임.

3 장기간 연속적 및 동시 투여시: 간헐적 투여를 위하여 경구로 먼저 화합물 F( 200 내지 600 mg)의 단일 볼러스(bolus)로 투여후 동시에 조합으로 약물 방출형 피부 패취형**을 화합물 F (아마도 가장 바람직하게는 매일 약 0.2 내지 약 2 mg의 방출속도로) 및 드링크 물(drink water)로서 7일간 매일 2회 화합물 A 투여후 14일간 화합물 A 투여하지 않고, 드링크 물(drink water)로서 7일간 매일 2회 화합물 A 투여(가장 바람직한 화합물 A의 총 매일 투여량은 약 1 내지 약 50 g임) 등.

* 본원에 개시된 어떠한 약물 조합에서의 약물 투여량은 남성 또는 여성 환자의 치료를 위하여 제시된 제형에서 유의적으로 서로 상이할 수 있다.

** 피부 패취 대신에 화합물 F 및 화합물 A (3)과 동일한 치료학적 개요로서, 화합물 F의 저용량의 직장/질내 투여법도 사용가능하다.

참고문헌

Amici SA, Dunn WA Jr, Murphy AJ, Adams NC, Gale NW, Valenzuela DM, Yancopoulos GD, Notterpek L. Peripheral myelin protein 22 is in complex with alpha6beta4 integrin, and its absence alters the Schwann cell basal lamina. J Neurosci. 2006; 26(4):1179-1189.

Amici SA, Dunn WA Jr, Notterpek L. Developmental abnormalities in the nerves of peripheral myelin protein 22-deficient mice. J Neurosci Res. 2007; 85(2): 238-249.

Atanasoski S, Scherer SS, Nave K-A, Suter U.Proliferation of Schwann Cells and Regulation of Cyclin D1 Expression in an Animal Model of Charcot-Marie-Tooth Disease Type 1A. J Neurosci Res. 2002; 67(4):443-449.

Basta-Kaim A, Budziszewska B, Jaworska-Feil L, Tetich M, LeM, Kubera M, LasoW. Chlorpromazine inhibits the glucocorticoid receptor-mediated gene transcription in a calcium-dependent manner. Neuropharmacology. 2002;43(6):1035-1043

Batty IH, Fleming IN, Downes CP. Muscarinic-receptor-mediated inhibition of insulin-like growth factor-1 receptor-stimulated phosphoinositide 3-kinase signalling in 1321N1 astrocytoma cells. Biochem J. 2004; 379(Pt 3):641-651.

Bogoyevitch MA, Ketterman AJ, Sugden PH. Cellular stresses differentially activate c-Jun N-terminal protein kinases and extracellular signal-regulated protein kinases in cultured ventricular myocytes. J Biol Chem. 1995;270(50):29710-29717.

Brancolini C, Marzinotto S, Edomi P, Agostoni E, Fiorentini C, Muller HW, Schneider C.Rho-dependent regulation of cell spreading by the tetraspan membrane protein Gas3/PMP22. Mol. Biol. Cell 1999; 10: 2441-2459.

Castellone MD, Teramoto H, Gutkind JS. Cyclooxygenase-2 and Colorectal Cancer Chemoprevention: The β-Catenin Connection. Cancer Res. 2006; 66(23):11085-11088.

Chen XR, Besson VC, Palmier B, Garcia Y, Plotkine M, Marchand-Leroux C. Neurological recovery-promoting, anti-inflammatory, and anti-oxidative effects afforded by fenofibrate, a PPAR alpha agonist, in traumatic brain injury. J Neurotrauma 2007; 24 (7): 1119-1131.

Chies R, Nobbio L, Edomi P, Schenone A, Schneider C, Brancolini C. Alterations in the Arf6-regulated plasma membrane endosomal recycling pathway in cells overexpressing the tetraspan protein Gas3/PMP22. J Cell Sci. 2003; 116(Pt 6): 987-999.

Constable AL, Armati PJ. DMSO induction of the leukotriene LTC4 by Lewis rat Schwann cells. J Neurol Sci 1999; 162(2): 120-126.

Devaux JJ, Scherer SS. Altered ion channels in an animal model of Charcot-Marie-Tooth disease type IA. J Neurosci. 2005; 25(6): 1470-1480.

Diep QN, Benkirane K, Amiri F, Cohn JS, Endemann D, Schiffrin EL. PPAR alpha activator fenofibrate inhibits myocardial inflammation and fibrosis in angiotensin II-infused rats. J Mol Cell Cardiol. 2004; 36 (2): 295-304.

Dracheva S, Davis KL, Chin B, Woo DA, Schmeidler J, Haroutunian V. Myelin-associated mRNA and protein expression deficits in the anterior cingulate cortex and hippocampus in elderly schizophrenia patients. Neurobiol Dis. 2006 Mar;21(3):531-540.

D'Urso D, Ehrhardt P, Muller HW. Peripheral myelin protein 22 and protein zero: a novel association in peripheral nervous system myelin. J Neurosci. 1999; 19(9):3396-3403.

Fortun J, Dunn WA Jr, Joy S, Li J, Notterpek L. Emerging role for autophagy in the removal of aggresomes in Schwann cells. J Neurosci. 2003; 23(33): 10672-10680.

Fortun J, Li J, Go J, Fenstermaker A, Fletcher BS, Notterpek L. Impaired proteasome activity and accumulation of ubiquitinated substrates in a hereditary neuropathy model. J Neurochem 2005; 92:1531-1541.

Fortun J, Go JC, Li J, Amici SA, Dunn WA Jr, Notterpek L. Alterations in degradative pathways and protein aggregation in a neuropathy model based on PMP22 overexpression. Neurobiol Dis. 2006; 22(1):153-164.

Fortun J, Verrier JD, Go JC, Madorsky I, Dunn WA, Notterpek L. The formation of peripheral myelin protein 22 aggregates is hindered by the enhancement of autophagy and expression of cytoplasmic chaperones. Neurobiol Dis. 2007; 25(2): 252-265.

Galvez AS, Ulloa JA, Chiong M, Criollo A, Eisner V, Barros LF, Lavandero S. Aldose reductase induced by hyperosmotic stress mediates cardiomyocyte apoptosis: differential effects of sorbitol and mannitol. J Biol Chem. 2003;278(40):38484-38494.

Groyer G, Eychenne B, Girard C, Rajkowski K, Schumacher M, Cadepond F. Expression and functional state of the corticosteroid receptors and 11 beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 2 in Schwann cells. Endocrinology. 2006; 147(9):4339-4350.

Kantamneni S, Correa SA, Hodgkinson GK, Meyer G, Vinh NN,Henley JM, Nishimune A. GISP: a novel brain-specific protein that promotes surface expression and function of GABA(B) receptors. J Neurochem. 2007;100(4):1003-17.

Khajavi M, Shiga K, Wiszniewski W, He F, Shaw CA, Yan J, Wensel TG, Snipes GJ, Lupski JR. Oral curcumin mitigates the clinical and neuropathologic phenotype of the Trembler-J mouse: a potential therapy for inherited neuropathy. Am J Hum Genet. 2007; 81(3): 438-453.

Kobsar I, Hasenpusch-Theil K, Wessig C, Muller HW, Martini R. Evidence for Macrophage-Mediated Myelin Disruption in an Animal Model for Charcot-Marie-Tooth Neuropathy Type 1A. J. Neurosci Res 2005; 81:857-864.

Lange CA, Shen T et al. Phosphorylation of human progesterone receptors at serine-294 by mitogen-activated protein kinase signals their degradation by the 26S proteasome. PNAS USA. 2000; 97: 1032-1037.

Le-Niculescu H, Kurian SM, Yehyawi N, Dike C, Patel SD, Edenberg HJ, Tsuang MT, Salomon DR, Nurnberger JI Jr, Niculescu AB. Identifying blood biomarkers for mood disorders using convergent functional genomics. Mol Psychiatry. 2008 Feb 26. [Epub ahead of print].

Li WW, Le Goascogne C, Ramauge M, Schumacher M, Pierre M, Courtin F. Induction of type 3 iodothyronine deiodinase by nerve injury in the rat peripheral nervous system. Endocrinology. 2001; 142(12):5190-5197.

Lupski JR, Wise CA, Kuwano A, Pentao L, Parke JT, Glaze DG, Ledbetter DH, Greenberg F, Patel PI. Gene dosage is a mechanism for Charcot-Marie-Tooth disease type 1A. Nat Genet. 1992 ;1(1): 29-33.

Maurer M, Kobsar I, Berghoff M, Schmid CD, Carenini S, Martini R.Role of immune cells in animal models for inherited neuropathies: facts and visions. J Anat. 2002; 200(4): 405-414.

Melcangi RC, Cavarretta IT, Ballabio M, Leonelli E, Schenone A, Azcoitia I, Miguel Garcia-Segura L, Magnaghi V. Peripheral nerves: a target for the action of neuroactive steroids. Brain Res Rev. 2005; 48(2): 328-338.

Mercier G, Turque N, Schumacher M. Rapid effects of triiodothyronine on immediate-early gene expression in Schwann cells. Glia. 2001; 35(2):81-89.

Meyer Zu Horste G., Nave K-A. Animal models of inherited neuropathies. Curr. Opin. Neurol. 2006; 19(5): 464-473.

Meyer zu Horste G, Prukop T, Liebetanz D, Mobius W, Nave KA, Sereda MW. Antiprogesterone therapy uncouples axonal loss from demyelination in a transgenic rat model of CMT1A neuropathy. Ann Neurol. 2007; 61 (1): 61-72.

Miller AL, Garza AS, Johnson BH, Thompson EB. Pathway interactions between MAPKs, mTOR, PKA, and the glucocorticoid receptor in lymphoid cells. Cancer Cell Int. 2007; 28:7:3

Muja N, Blackman SC, Le Breton GC, DeVries GH. Identification and functional characterization of thromboxane A2 receptors in Schwann cells. J Neurochem. 2001; 78(3):446-456.

Muller DL, Unterwald EM. In Vivo Regulation of Extracellular Signal-Regulated Protein Kinase (ERK) and Protein Kinase B (Akt) Phosphorylation by Acute and Chronic Morphine. JPET 2004; 310:774-782.

Nambu H, Kubo E, Takamura Y, Tsuzuki S, Tamura M, Akagi Y. Attenuation of aldose reductase gene suppresses high-glucose-induced apoptosis and oxidative stress in rat lens epithelial cells. Diabetes Res Clin Pract. 2008; 82(1):18-24.

Nave KA, Sereda MW, Ehrenreich H. Mechanisms of disease: inherited demyelinating neuropathies--from basic to clinical research. Nat Clin Pract Neurol. 2007; 3(8): 453-464.

Niemann S., Sereda M.W., Rossner M., Stewart H., Suter U., Meinck H.M., Griffiths I.R., Nave K-A. The "CMT rat": peripheral neuropathy and dysmyelination caused by transgenic overexpression of PMP22. Ann. N.- Y. Acad. Sci. 1999; 883:254-261.

Notterpek L, Shooter EM, Snipes GJ. Upregulation of the endosomal-lysosomal pathway in the trembler-J neuropathy. J Neurosci. 1997;17(11): 4190-4200.

Obrietan K, van den Pol AN. GABAB receptor-mediated inhibition of GABAA receptor calcium elevations in developing hypothalamic neurons. J Neurophysiol. 1998; 79(3):1360-1370.

Ogata T, Iijima S, Hoshikawa S, Miura T, Yamamoto S, Oda H, Nakamura K, Tanaka S Opposing extracellular signal-regulated kinase and Akt pathways control Schwann cell myelination. J Neurosci. 2004; 24(30):6724-6732.

Ohsawa Y, Murakami T, Miyazaki Y, Shirabe T, Sunada Y. Peripheral myelin protein 22 is expressed in human central nervous system. J Neurol Sci. 2006; 247(1):11-15.

Passage E, Norreel JC, Noack-Fraissignes P, Sanguedolce V, Pizant J, Thirion X, Robaglia-Schlupp A, Pellissier JF, Fontes M. Ascorbic acid treatment corrects the phenotype of a mouse model of Charcot-Marie-Tooth disease. Nature Med. 2004; 10(4): 396-401.

Perea J, Robertson A, Tolmachova T, Muddle J, King RH, Ponsford S, Thomas PK, Huxley C. Induced myelination and demyelination in a conditional mouse model of Charcot-Marie-Tooth disease type 1A. Hum Mol Genet. 2001; 10(10):1007-1018.

Roa BB, Garcia CA, Suter U, Kulpa DA, Wise CA, Mueller J, Welcher AA, Snipes GJ, Shooter EM, Patel PI, Lupski JR. Charcot-Marie-Tooth disease type 1A. Association with a spontaneous point mutation in the PMP22 gene. N Engl J Med. 1993; 329(2): 96-101.

Robaglia-Schlupp A, Pizant J, Norreel JC, Passage E, Saberan-Djoneidi D, Ansaldi JL, Vinay L, Figarella-Branger D, Levy N, Clarac F, Cau P, Pellissier JF, Fontes M. PMP22 overexpression causes dysmyelination in mice. Brain 2002; 125(Pt 10): 2213-2221.

Robert F, Guennoun R, Desarnaud F, Do-Thi A, Benmessahel Y, Baulieu EE, Schumacher M. Synthesis of progesterone in Schwann cells: regulation by sensory neurons. Eur J Neurosci. 2001; 13(5): 916-924.

Roux KJ, Amici SA, Notterpek L. The temporospatial expression of peripheral myelin protein 22 at the developing blood-nerve and blood-brain barriers. J Comp Neurol. 2004; 474(4):578-588.

Sancho S, Young P, Suter U. Regulation of Schwann cell proliferation and apoptosis in PMP22-deficient mice and mouse models of Charcot-Marie-Tooth disease type 1A. Brain 2001; 124(Pt 11): 2177-2187.

Schumacher M, Guennoun R, Mercier G, Desarnaud F, Lacor P, Benavides J, Ferzaz B, Robert F, Baulieu EE. Progesterone synthesis and myelin formation in peripheral nerves. Brain Res Rev. 2001; 37(1-3): 343-359.

Sereda MW, Meyer zu Horste G, Suter U, et al. Therapeutic administration of progesterone antagonist in a model of Charcot-Marie-Tooth disease (CMT-1A). Nat Med 2003; 9: 1533-1537.

Sereda MW, Nave KA. Animal models of Charcot-Marie-Tooth disease type 1A (CMT1A). Neuromol Med 2006; 8: 205-215.

Stirnweiss J, Valkova C, ZiescheE, Drube S, Liebmann C. Muscarinic M2 receptors mediate transactivation of EGF receptor through Fyn kinase and without matrix metalloproteases. Cell Signal. 2006; 18(8):1338-1349.

Suter U, Scherer SS. Disease mechanisms in inherited neuropathies. Nat. Rev. Neurosci. 2003; 4: 714-726.

Suter U, Welcher AA, Ozcelik T, Snipes GJ, Kosaras B, Francke U, Billings-Gagliardi S, Sidman RL, Shooter EM. Trembler mouse carries a point mutation in a myelin gene. Nature. 1992; 356(6366): 241-244.

Thomas PK, Marques W Jr, Davis MB, Sweeney MG, King RH, Bradley JL, Muddle JR, Tyson J, Malcolm S, Harding AE. The phenotypic manifestations of chromosome 17p11.2 duplication. Brain 1997; 120 ( Pt 3): 465-478.

Tobler AR, Liu N, Mueller L, Shooter EM. Differential aggregation of the Trembler and Trembler J mutants of peripheral myelin protein 22. PNAS U S A. 2002; 99(1):483-488.

Tu H, Rondard P, Xu C, Bertaso F, Cao F, Zhang X, Pin JP, Liu J. Dominant role of GABAB2 and Gbetagamma for GABAB receptor-mediated-ERK1/2/CREB pathway in cerebellar neurons. Cell Signal. 2007; 19(9):1996-2002.

Uht RM, Anderson CM, Webb P, Kushner PJ. Transcriptional activities of estrogen and glucocorticoid receptors are functionally integrated at the AP-1 response element. Endocrinology. 1997 Jul;138(7):2900-2908.

Ulzheimer JC, Peles E, Levinson SR, Martini R. Altered expression of ion channel isoforms at the node of Ranvier in P0-deficient myelin mutants. Mol Cell Neurosci. 2004; 25(1): 83-94.

Vallat JM, Sindou P, Preux PM, Tabaraud F, Milor AM, Couratier P, LeGuern E, Brice A. Ultrastructural PMP22 expression in inherited demyelinating neuropathies. Ann Neurol. 1996; 39(6): 813-817.

Walter IB. Nuclear triiodothyronine receptor expression is regulated by axon-Schwann cell contact. Neuroreport. 1993; 5(2):137-140.

Walter IB, Deruaz JP, de Tribolet N. Differential expression of triiodothyronine receptors in schwannoma and neurofibroma: role of Schwann cell-axon interaction. Acta Neuropathol (Berl). 1995; 90(2):142-149.

Welch WJ, Brown CR. Influence of molecular and chemical chaperones on protein folding. Cell Stress Chaperones. 1996;1(2):109-115.

Woodhams PL, MacDonald RE, Collins SD, Chessell IP, Day NC. Localisation and modulation of prostanoid receptors EP1 and EP4 in the rat chronic constriction injury model of neuropathic pain. Eur J Pain. 2007; 11(6):605-613.

Claims

동시적, 개별적 또는 연속적인 투여법으로 샤르코-마리-투스 질환 또는 관련 장애를 치료하기 위한, D-소르비톨, 바클로펜, 필로카핀, 날트렉손, 메티마졸, 미페프리스톤 및 케토프로펜, 이의 염 또는 이의 전구체 또는 이의 작용제로부터 선택된 2개 이상의 화합물을 함유하는 약학조성물.
샤르코-마리-투스 질환 또는 관련 장애를 치료하기 위한 약제 제조를 위한, D-소르비톨, 바클로펜, 필로카핀, 날트렉손, 메티마졸, 미페프리스톤 및 케토프로펜, 이의 염 또는 이의 전구체로부터 선택된 2개 이상의 화합물 조합의 용도.
제 1항 또는 제 2항에 있어서,
상기 질환은 CMT, 바람직하게는 CMT1A인 조성물 또는 용도.
D-소르비톨, 바클로펜, 필로카핀, 날트렉손, 메티마졸, 미페프리스톤 및 케토프로펜, 이의 염 또는 이의 전구체 또는 이의 작용제로부터 선택된 2개 이상의 화합물 조합 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 함유하는 약학 조성물.
제 4항에 있어서,
추가적으로 추가적인 활성 화합물을 포함하는 약학 조성물.
제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조합은 (1) 미페프리스톤 및 메티마졸; (2) 필로카핀 및 바클로펜; (3) 미페프리스톤 및 필로카핀; (4) 미페프리스톤 및 바클로펜; (5) 미페프리스톤 및 케토프로펜; (6) 미페프리스톤 및 날트렉손; (7) 필로카핀 및 케토프로펜; (8) 필로카핀 및 날트렉손; (9) 바클로펜 및 케토프로펜; (10) 바클로펜 및 날트렉손; 또는 (11) 케토프로펜 및 메티마졸 조합 또는 이의 염 또는 전구체 또는 작용제를 포함하는 조성물 또는 용도.
GABA-B 수용체 작용제, 무스카린성 수용체 작용제, 스테로이드 호르몬 수용체 길항제, 소르비톨 신호 전달계 영향 약물, 오피오이드 수용체 길항제 또는 부분 작용제, 갑상선 호르몬 신호 전달 저해제, 세포외 신호-조절 키나제 활성화제, pAkt 키나제 저해제, COX 저해제, 갑상선 호르몬 신호전달 저해제로부터 선택된 2개 이상의 화합물, 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 함유하는 약학 조성물.
제 7항에 있어서,
1개 이상의 상기 화합물이 이들의 항체 또는 단편 또는 유도체, 단백질 또는 펩티드인 조성물.
동시적, 개별적 또는 연속적인 투여법으로 샤르코-마리-투스 질환 또는 관련 장애를 치료하기 위한, 아세타졸아미드 (Acetazolamide), 아미노글루테티미드 (Aminoglutethimide), 아즈트레오남 (Aztreonam), 발살라지드 (Balsalazide), 비칼루타미드 (Bicalutamide), 브로모크립틴 (Bromocriptine), 부메타니드 (Bumetanide), 바클로펜 (Baclofen), 부스피론 (Buspirone), 시프로플록사신 (Ciprofloxacin), 클로니딘 (Clonidine), 시클로스포린 (Cyclosporine) A, D-소르비톨 (Sorbitol), 디설피람 (Disulfiram), 엑세메스탄 (Exemestane), 펠바메이트 (Felbamate), 페노피브레이트 (Fenofibrate), 피나스테리드 (Finasteride), 플루마제닐 (Flumazenil), 플루니트라제팜 (Flunitrazepam), 퓨로세미드 (Furosemide), 가바펜틴 (Gabapentin), 갈란타민 (Galantamine), 할로페리돌 (Haloperidol), 이부프로펜 (Ibuprofen), 이소프로테레놀 (Isoproterenol), L-카르니틴 (carnitine), 케토프로펜 (Ketoprofen); 리오티로닌 (Liothyronine; T3), 로사르탄 (Losartan), 록사핀 (Loxapine), 미페프리스톤 (Mifepristone), 메타프로테레놀 (Metaproterenol), 메타라미놀 (Metaraminol), 메트포르민 (Metformin), 메티마졸 (Methimazole), 메틸에르고노빈 (Methylergonovine), 메토피론 (Metopirone), 메토프롤롤 (Metoprolol), 몬테류카스트 (Montelukast), 나돌롤 (Nadolol), 날록손 (Naloxone), 날트렉손 (Naltrexone), 노르플록사신 (Norfloxacin), 펜타조신 (Pentazocine), 페녹시벤즈아민 (Phenoxybenzamine), 페닐부티레이트 (Phenylbutyrate), 피오글리타존 (Pioglitazone), 필로카핀 (Pilocarpine), 프라조신 (Prazosin), 랄록시펜 (Raloxifene), 리팜핀 (Rifampin), 심바스타틴 (Simvastatin), 스피로노락톤 (Spironolactone), 타목시펜 (Tamoxifen), 트릴로스탄 (Trilostane), 발프론 산 (Valproic acid) 카바마제핀 (Carbamazepine), 플루비프로펜 (Flurbiprofen), 디클로페낙 (Diclofenac), 멜록시캄 (Meloxicam), 타클로리무스 (Tacrolimus), 디아제팜 (Diazepam), 두타스테리드 (Dutasteride), 인도메타신 (Indomethacin), 디노프로스톤 (Dinoprostone), 카바콜 (Carbachol), 에스트라디올 (Estradiol), 쿠르쿠민 (Curcumin), 리튬 (Lithium), 라파마이신 (Rapamycin), 베타인 (Betaine), 트레할로스 (Trehalose), 아밀로리드 (Amiloride), 및 알부테롤 (Albuterol), 또는 이의 염, 이의 전구체로부터 선택된 2개 이상의 화합물들의 조합을 함유하는 조성물.
샤르코-마리-투스 질환 또는 관련 장애를 치료하기 위한 약제 제조를 위한, 아세타졸아미드 (Acetazolamide), 아미노글루테티미드 (Aminoglutethimide), 아즈트레오남 (Aztreonam), 발살라지드 (Balsalazide), 비칼루타미드 (Bicalutamide), 브로모크립틴 (Bromocriptine), 부메타니드 (Bumetanide), 바클로펜 (Baclofen), 부스피론 (Buspirone), 시프로플록사신 (Ciprofloxacin), 클로니딘 (Clonidine), 시클로스포린 (Cyclosporine) A, D-소르비톨 (Sorbitol), 디설피람 (Disulfiram), 엑세메스탄 (Exemestane), 펠바메이트 (Felbamate), 페노피브레이트 (Fenofibrate), 피나스테리드 (Finasteride), 플루마제닐 (Flumazenil), 플루니트라제팜 (Flunitrazepam), 퓨로세미드 (Furosemide), 가바펜틴 (Gabapentin), 갈란타민 (Galantamine), 할로페리돌 (Haloperidol), 이부프로펜 (Ibuprofen), 이소프로테레놀 (Isoproterenol), L-카르니틴 (carnitine), 케토프로펜 (Ketoprofen); 리오티로닌 (Liothyronine; T3), 로사르탄 (Losartan), 록사핀 (Loxapine), 미페프리스톤 (Mifepristone), 메타프로테레놀 (Metaproterenol), 메타라미놀 (Metaraminol), 메트포르민 (Metformin), 메티마졸 (Methimazole), 메틸에르고노빈 (Methylergonovine), 메토피론 (Metopirone), 메토프롤롤 (Metoprolol), 몬테류카스트 (Montelukast), 나돌롤 (Nadolol), 날록손 (Naloxone), 날트렉손 (Naltrexone), 노르플록사신 (Norfloxacin), 펜타조신 (Pentazocine), 페녹시벤즈아민 (Phenoxybenzamine), 페닐부티레이트 (Phenylbutyrate), 피오글리타존 (Pioglitazone), 필로카핀 (Pilocarpine), 프라조신 (Prazosin), 랄록시펜 (Raloxifene), 리팜핀 (Rifampin), 심바스타틴 (Simvastatin), 스피로노락톤 (Spironolactone), 타목시펜 (Tamoxifen), 트릴로스탄 (Trilostane), 발프론 산 (Valproic acid) 카바마제핀 (Carbamazepine), 플루비프로펜 (Flurbiprofen), 디클로페낙 (Diclofenac), 멜록시캄 (Meloxicam), 타클로리무스 (Tacrolimus), 디아제팜 (Diazepam), 두타스테리드 (Dutasteride), 인도메타신 (Indomethacin), 디노프로스톤 (Dinoprostone), 카바콜 (Carbachol), 에스트라디올 (Estradiol), 쿠르쿠민 (Curcumin), 리튬 (Lithium), 라파마이신 (Rapamycin), 베타인 (Betaine), 트레할로스 (Trehalose), 아밀로리드 (Amiloride), 및 알부테롤 (Albuterol), 또는 이의 염, 이의 전구체로부터 선택된 2개 이상의 화합물들의 조합의 용도.
제 7항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물들은 그룹화(grouped), 또는 개별적 투여, 동시적, 또는 연속적인 투여를 위해 조합된 것인 조성물 또는 용도.
아세타졸아미드 (Acetazolamide), 아미노글루테티미드 (Aminoglutethimide), 아즈트레오남 (Aztreonam), 바클로펜 (Baclofen), 발살라지드 (Balsalazide), 비칼루타미드 (Bicalutamide), 브로모크립틴 (Bromocriptine), 부메타니드 (Bumetanide), 부스피론 (Buspirone), 시프로플록사신 (Ciprofloxacin), 클로니딘 (Clonidine), 시클로스포린 (Cyclosporine) A, D-소르비톨 (Sorbitol), 엑세메스탄 (Exemestane), 펠바메이트 (Felbamate), 페노피브레이트 (Fenofibrate), 피나스테리드 (Finasteride), 플루마제닐 (Flumazenil), 플루니트라제팜 (Flunitrazepam), 퓨로세미드 (Furosemide), 가바펜틴 (Gabapentin), 갈란타민 (Galantamine), 할로페리돌 (Haloperidol), 이부프로펜 (Ibuprofen), 이소프로테레놀 (Isoproterenol), 케토프로펜 (Ketoprofen); L-카르니틴 (carnitine), 리오티로닌 (Liothyronine; T3), 로사르탄 (Losartan), 록사핀 (Loxapine), 메타프로테레놀 (Metaproterenol), 메타라미놀 (Metaraminol), 메트포르민 (Metformin), 메티마졸 (Methimazole), 메틸에르고노빈 (Methylergonovine), 메토피론 (Metopirone), 메토프롤롤 (Metoprolol), 미페프리스톤 (Mifepristone), 몬테류카스트 (Montelukast), 나돌롤 (Nadolol), 날록손 (Naloxone), 날트렉손 (Naltrexone), 노르플록사신 (Norfloxacin), 펜타조신 (Pentazocine), 페녹시벤즈아민 (Phenoxybenzamine), 페닐부티레이트 (Phenylbutyrate), 피오글리타존 (Pioglitazone), 필로카핀 (Pilocarpine), 프라조신 (Prazosin), 랄록시펜 (Raloxifene), 리팜핀 (Rifampin), 심바스타틴 (Simvastatin), 스피로노락톤 (Spironolactone), 타목시펜 (Tamoxifen), 트릴로스탄 (Trilostane), 발프론 산 (Valproic acid), 카바마제핀 (Carbamazepine), 플루비프로펜 (Flurbiprofen), 디클로페낙 (Diclofenac), 멜록시캄 (Meloxicam), 타클로리무스 (Tacrolimus), 디아제팜 (Diazepam), 두타스테리드 (Dutasteride), 인도메타신 (Indomethacin), 디노프로스톤 (Dinoprostone), 카바콜 (Carbachol), 에스트라디올 (Estradiol), 쿠르쿠민 (Curcumin), 리튬 (Lithium), 라파마이신 (Rapamycin), 베타인 (Betaine), 트레할로스 (Trehalose), 아밀로리드 (Amiloride), 및 알부테롤 (Albuterol), 또는 이의 염, 이의 전구체로부터 선택된 2개 이상의 화합물 조합 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 함유하는 약학 조성물.
제 1항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 2개 이상의 화합물은 링커(linker)가 존재하거나 없이 공유결합성 또는 비공유결합성으로 결합되는 조성물 또는 용도.
제 13항에 있어서,
상기 화합물들은 절단가능하거나 또는 절단이 불가능한 링커를 통하여 결합되는 조성물 또는 용도.
제 1항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 2개 이상의 화합물들은 조직 분배 및 생물학적 이용가능성을 변화시키기 위하여, 경구용, 비경구용 또는 척추강내 투여용으로 약물 용출 중합체 (drug eluting polymer), 또는 생분자 (biomolecules) 또는 미셀(micelle) 또는 리포좀-형성 지질(liposome-forming lipids) 또는 수중유(o/w) 에멀젼, 또는 PEG화(pegylated) 또는 고체상 나노입자로 제형화되는 것인 조성물 또는 용도.
제 2항, 6항, 9항 또는 10항 중 어느 한 항에 있어서,
CMT 또는 관련 장애를 갖거나 발전할 위험성이 있는 환자를 진단하는 단계를 추가로 포함하는 용도.