KR20100082709A

KR20100082709A - Ａｂｈ 항원을 이용한 염증질환 개선용 조성물

Info

Publication number: KR20100082709A
Application number: KR1020090119140A
Authority: KR
Inventors: 오장희; 정지용; 이동훈; 이세라; 김연경; 이현경; 신정은; 정진호
Original assignee: 서울대학교산학협력단
Priority date: 2009-01-09
Filing date: 2009-12-03
Publication date: 2010-07-19
Also published as: US8545851B2; KR101098581B1; WO2010079978A2; EP2377558A2; JP2012514634A; CN102355910B; WO2010079978A3; US20110274707A1; CN102355910A; EP2377558A4; US20140037773A1

Abstract

본 발명은 염증질환 개선용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 피부와 같은 상피 조직에서의 염증반응 및 장벽기능 개선과 항노화, 피부 탄력 강화 및 노화를 예방 또는 치료할 수 있는 염증질환 개선용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, ABH 항원의 발현 조절 및 활성 조절을 통해 염증반응을 제어할 수 있으므로, 본 발명의 조성물은 ABH 항원이 발현되는 피부를 비롯한 인체 조직에서의 염증반응이 원인이 되는 질환의 진정이나 치료 및 치료보조를 목적으로 하는 치료제의 개발 표적으로 활용할 수 있고, 또한 각질형성세포의 분화 및 피부장벽기능의 조절을 통한 피부의 정상기능 회복 및 보습, 주름개선, 미백, 탄력 회복 등을 목적으로 하는 외용제 및 외용제 성분을 포함하는 화장품의 개발에 사용될 수 있다.

혈액형, ABH 항원, 피부, 염증성 질환, 피부장벽기능

Description

ＡＢＨ 항원을 이용한 염증질환 개선용 조성물{Composition for Improving Inflammatory Disorder Using ABH Antigen}

본 발명은 염증질환 개선용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 피부 등의 염증반응 및 장벽기능 개선과 항노화, 피부 탄력 강화 및 노화를 예방 또는 치료할 수 있는 피부를 포함하는 상피 세포에서의 염증질환 개선용 조성물에 관한 것이다.

ABH 항원은 ABO식 혈액형을 결정하는 항원으로서, ABO식 혈액형은 특정한 구조의 당질화 말단이 ABO 유전자의 활성 차이에 따라 결정된다. 이러한 ABH 항원은 적혈구의 표면에 다량으로 발현되어 있으므로 혈액형이 다른 혈액의 수혈시 거부 반응을 일으키는 주요 원인으로 작용한다. ABH 항원은 적혈구 외에도 혈관, 침샘, 땀샘, 소장, 대장, 췌장 등 매우 다양한 조직에서 발현되는 것으로 알려져 있으며, 정상 피부에서는 각질형성세포의 분화정도에 따라 가장 분화가 많이 일어난 과립층과 과립층 직전의 세포들에서 발현이 관찰되며, 유극층, 기저층에서는 거의 발현이 관찰되지 않는다(Ravn et al ., APMIS 108:1-28(2000); Lloyd, Glycoconjugate J 17:531-541(2000); Greenwell, Glycoconjugate J 14:159-173(1997); Dabelsteen et al., J Invest dermatol 82:13-17(1984)).

ABH 항원은 ABO 유전자의 다양성에 따라 단백질이나 지질의 당질화 말단의 구조가 푸코오스-갈락토오스 말단에 N-아세틸갈락토사민이 결합하면 A 항원(A형)이 되고, 갈락토오스가 결합하면 B 항원(B형)이 되며, 두 종류가 공존하면 AB형이 되고, 아무것도 결합하지 않으면 H 항원(O형)이 된다(도 1 참조). 따라서, 공통적으로 존재하는 푸코오스-갈락토오스 말단의 합성을 조절하는 푸코오실트랜스퍼라제(fucosyl transferase) 1 또는 2 (FUT1 또는 FUT2)의 발현에 따라 조직학적인 발현 상태가 조절된다.

한편, 지금까지 혈액형의 종류에 따른 수혈시의 거부반응 이외에 ABH 항원의 발현과 다양한 질환들의 발병률과의 상관관계를 찾기 위한 노력들이 계속 있어 왔으나, 이에 대해서는 아직까지 보고된 바가 없으며, ABH 항원의 기능 자체도 명확하게 밝혀진 바가 없다.

본 발명은 ABH 항원 또는 상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 유효성분으로 함유하는 염증질환 개선용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 ABH 항원 또는 상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 유효성분으로 함유하는 염증질환 개선용 조성물을 제공한다. 본 발명에 있어서, 상기 염증질환은 염증성 피부질환 및 위장, 식도, 소장, 요도, 결막 등과 같은 조직의 염증성 질환이 제한없이 포함될 수 있으나, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명의 조성물은 약학적 조성물 또는 화장료 조성물의 형태인 것이 바람직하지만, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.

본 명세서에 있어서, 상기 "ABH 항원"은 ABH 항원뿐만 아니라 ABH 항원의 유사체 및 ABH 항원과 ABH 항원 유사체의 접합체를 모두 포함하는 의미로 사용된다. 또한, 상기 "ABH 항원 유사체"란 ABH 항체와 반응성을 갖는 당질 구조를 포함하는 물질이거나, 이와 유사한 구조를 가지면서 ABH 항원의 생리적인 기능을 모사하거나 억제할 수 있는 물질, 또는 이러한 유사체를 특정한 캐리어 분자에 고정시켜 접합체를 만들어 첨가하는 경우를 포함한다. 예를 들면, ABH 항원 유사체는 ABH 항원에 하나 이상의 다른 화합물, 예컨대 단당류, 아미노산 등이 추가로 결합되어 있는 물질로서 ABH 항원 본래의 기능과 동일한 기능을 하는 물질을 의미한다. 또한, ABH 항원으로는 항원을 이루는 단당류, 예컨대 푸코오스, 갈락토오스, 글루코오스, N-아세틸갈락토사민, N-아세틸글루코사민, 또는 상기 단당류가 조합된 형태의 혼합물, 예컨대 FG(Fucose:Galactose = 1:1, H-antigen 조성), FGG(Fucose:Galactose = 1:2, B-antigen 조성) 또는 FGGN(Fucose:Galactose:N-acetylgalactosamine = 1:1:1, A-antigen 조성) 등도 제한없이 사용될 수 있으며, 상기 FG, FGG 또는 FGGN에 있어서, 혼합물을 구성하는 각각의 단당류의 비는 상기와 다소 상이해도 무방하다.

또한, 본 명세서에 있어서 "ABH 항원의 발현을 조절하는 물질"은 ABH 항원의 발현을 증가시키거나 감소시키는 물질을 모두 포함하는 의미로 사용된다. ABH 항원의 발현을 증가시키는 물질은 ABH 항원의 생합성, 예컨대, ABO, FUT1, FUT2 등을 포함하는 ABH 항원의 단계별 당질화 효소들의 발현 증가 또는 활성 증대, ABH 항원이 결합되어 있는 단백질, 지질, 당질 등의 발현 증대 등을 통해 ABH 항원의 생합성을 증가시키는 물질이라면 그 종류에 관계없이 모두 포함될 수 있다. ABH 항원의 생합성을 증가시키는 물질로는 ABO, FUT1, FUT2 등을 포함하는 ABH 항원을 합성하는 단계별 당질화 효소들을 코딩하는 유전자 또는 그 유전자를 포함하는 벡터일 수 있다. 상기 유전자 또는 벡터가 피부에 가해지면, ABH 항원의 발현이 증가되어 피부의 분화가 정상화됨으로써 면역을 강화시키고, 면역체계의 균형을 바로잡으며, 피부장벽기능을 강화시킴으로써 건강한 피부를 만들 수 있다. 상기 벡터는 당업계에 널리 알려진 방법들 중 어느 하나에 의해서 제작되거나, 또는 시중에서 용이하게 구입할 수 있다. 또한, 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 ABH 항원의 발현을 증가시키는 물질은 버드나무 추출물 또는 황금 추출물일 수 있다(도 6의 B 참조).

이와 마찬가지로, ABH 항원의 발현을 감소시키는 물질은 ABH 항원의 생합성, 예컨대, ABO, FUT1, FUT2 등을 포함하는 ABH 항원의 단계별 당질화 효소들의 발현 감소 또는 활성 감소, ABH 항원이 결합되어있는 단백질, 지질, 당질등의 발현 감소 등을 통해, ABH 항원의 생합성을 감소시키는 물질이라면 그 종류에 관계없이 모두 포함될 수 있다. ABH 항원의 생합성을 감소시키는 물질은 ABO, FUT1, FUT2 등을 포함하는 ABH 항원을 합성하는 단계별 당질화 효소들의 발현을 억제하는 siRNA나 shRNA, 또는 siRNA나 shRNA, 안티센스 코딩 서열을 포함하는 벡터일 수 있다. 상기 유전자 또는 벡터가 피부에 가해지면, ABH 항원의 발현이 감소되어 Th1 염증 반응을 억제시키고, 과다한 염증 반응을 일시적으로 진정시킴으로써 염증질환의 증상을 완화시킬 수 있다. 상기 벡터는 당업계에 널리 알려진 방법들 중 어느 하나에 의해서 제작되거나, 또는 시중에서 용이하게 구입할 수 있다. 또한, 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 ABH 항원의 발현을 감소시키는 물질은 가시오가피 추출물, 엉겅퀴 추출물, 표고버섯 추출물, 인삼 추출물 또는 에키나시아 추출물일 수 있다(도 6의 A 참조).

본 발명의 조성물에 있어서, ABH 항원 또는 상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질은 전체 조성물 중에서 0.001 내지 10 중량%의 양으로 함유되는 것이 바람직하다. 0.001 중량% 미만이면 염증질환 개선 효과가 미미하며, 10 중량%를 초과하면 다른 성분과의 혼화성과 제형 안정성이 떨어진다. 이러한 관점에서, 상기 ABH 항원 또는 상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질은 0.01 내지 5 중량%를 함유 하는 것이 더 바람직하다.

본 발명에 적용가능한 염증질환은 염증성 피부질환 및 위장, 식도, 소장, 요도, 결막 등과 같은 조직의 염증성 질환이 제한없이 포함될 수 있다. 상기 피부질환으로는 건선, 아토피, 어린선, 천포창, 여드름, 홍반성 루푸스, 피부노화, 피부주름 등의 질환이 포함되지만, 반드시 이에 한정되는 것은 아니며, 피부에서의 염증반응으로 인해 초래될 수 있는 임의의 질환이 모두 본 발명의 피부질환의 범위에 포함될 수 있다.

본 발명의 조성물의 제형으로는 특별히 한정되는 것은 아니지만 피부 외용제의 제형인 것이 바람직하며, 상기 피부 외용제 제형의 한 바람직한 형태로는 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤 또는 피부 점착타입 화장료의 제형을 갖는 화장료 조성물을 들 수 있고, 다른 바람직한 형태로는 로션, 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제와 같은 경피 투여형의 제형을 들 수 있다. 또한, 각 제형의 외용제 조성물에 있어서, 상기한 필수 성분 이외의 다른 성분들은 기타 외용제의 제형 또는 사용목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.

본 발명의 조성물을 화장품에 적용할 경우, 바람직하게는 화장품학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀) 및/또는 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소적용 또는 전신적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있으며, 이들 조성물은 당해 분야의 통상적 방법에 따라 제조될 수 있다.

본 발명의 조성물을 화장품에 적용할 경우, 상기 화장료 조성물은 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 이들 보조제는 화장품학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.

본 발명의 조성물을 의약품에 적용할 경우, 본 발명의 조성물은 ABH 항원 또는 상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 유효성분으로 하며, 임상투여 시에 경구 또는 비경구로 투여가 가능하고, 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다. 즉, 본 발명의 염증질환 개선용 조성물은 실제 임상투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용 하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 ABH 항원 또는 상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여(주사, 경피 투여 또는 외용도포)를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있으나, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, 상기 유효성분은 상법에 따라 용이하게 제제화할 수 있으며, 이때 계면활성제, 부형제, 착색료, 향신료, 보존료, 안정제, 완충제, 현탁제, 기타 상용하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물의 유효성분인 ABH 항원 또는 상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질의 투여량은 염증질환의 개선이 필요한 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 수 있다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 주사제를 제외한 제제에 대해서는 국소 부위에 외용도포하는 식으로 당업자의 수준에서 적용할 수 있고, 주사제의 경우에는 진피와 피하지방에 국소적으로 주사할 수 있으나, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다. 일반적으로 투여량은 대략 0.001 ㎎/㎏/일 내지 2,000 ㎎/㎏/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 1 ㎍/㎏/일 내지 100 ㎍/㎏/일이다. 투약 단위는, 예를 들면 개별 투약량의 1, 2, 3 또는 4배로, 또는 1/2, 1/3 또는 1/4배로 함유할 수 있다. 개별 투약량은 유효성분이 1회에 투여되는 양을 함유하며, 이는 통상 1일 투여량의 전부, 1/2, 1/3 또는 1/4배에 해당한다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 다양한 유전적 환경적 요인에 의해 피부에 이상 염증 반응이나 면역체계의 불균형 및 비정상적 각질형성세포의 분화가 동반되는 건선, 아토피, 어린선, 천포창 등의 염증성 피부 질환의 경우를 조사하였을 때, 과립층에서의 ABH 항원의 발현이 소실되거나, 각질형성세포층의 이상분화에 따라 비정상위치에서 ABH 항원의 비정상적인 발현 등의 이상 현상이 관찰된다(도 4 및 도 5 참조). 이러한 여러 가지 피부 질환들에서 나타나는 각질형성세포의 불완전한 과립층으로의 분화가 환자들의 피부장벽기능에 문제를 야기하는 주요 원인이 될 수 있다. 또한, 개체별 최소 염증 유도 세기의 2배의 자외선을 정상 피부에 조사하였을 때에도, 과립층에서의 ABH 항원의 발현이 3일 뒤에 대부분 소실되는 것으로 나타났다(도 3 참조).

본 발명의 다른 구현예에 따르면, 다양한 종류의 천연물 추출물을 각질형성 세포에 처리할 경우, 가시오가피, 엉겅퀴, 표고버섯, 인삼 및 에키나시아 추출물 등은 세포에서 혈액형 항원의 발현을 감소시키고, 버드나무 및 황금 추출물 등은 혈액형 항원의 발현을 증가시키는 효과가 나타났다(도 6 참조). 상기와 같이, 혈액형 항원의 발현을 증가시키는 물질의 경우에는 개체의 면역력을 증가시키는 효과를 얻을 수 있고, 혈액형 항원의 발현을 감소시키는 물질의 경우에는 과다 염증반응을 억제시키는데 효과적으로 사용될 수 있다. 또한, ABH 항원 또는 상기 ABH 항원을 구성하는 단당류의 투여가 혈액형 항원의 발현에 미치는 영향 살펴본 결과, ABH 항원 또는 상기 ABH 항원을 구성하는 물질들을 처리하면, 세포 및 피부에서의 혈액형 당의 발현이 증가하는 것으로 나타났다(도 7 내지 도 9 참조). 따라서, 이러한 관찰결과 등을 바탕으로 할 때, ABH 항원의 발현이, 각질형성세포의 분화과정은 물론, 피부에서 발생하는 염증 반응의 상태와 밀접한 상관관계가 있음을 알 수 있다.

또한, 본 발명의 다른 바람직한 구현예에 따르면, ABH 항원의 발현을 조절하는 실험을 통해 ABH 항원의 발현이 인위적으로 제거되었을 경우, 인터페론 감마에 의한 Th1 면역반응이 억제되는 것을 관찰하였다(도 10 내지 도 12 참조). 또한, ABH 항원의 발현을 억제한 후 TNF-α 및 IL-1β를 처리한 경우에 대조군에서 강하게 유도되는 BD-2 유전자의 발현이 보다 적게 유도되었으며(도 13 참조), 또 다른 구현예에서 ABH 항원의 발현을 억제시킨 경우에는 각질형성세포의 이동 속도가 느려지는 것이 관찰되었다(도 14 참조). 이는 특히 아토피 피부염의 진행단계를 고려할 때, 염증 반응을 조절하는 사이토카인(cytokine)의 불균형으로 생각되는, 초 기 단계의 원인을 알 수 없는 Th1 염증 반응의 저하 단계를 거친 뒤, 정확한 항원이 불분명한 면역글로불린 E (IgE) 레벨의 증가를 수반하는 급격한 Th2 면역 반응의 증폭 반응이 이어지는 과정에서, 다양한 원인에 의한 과립층의 ABH 항원의 발현 감소가, 초기의 Th1 염증 반응의 감소 원인 중 한 가지로 작용할 수 있으며, 이를 개선함으로써 아토피 피부염과 같은 피부 질환의 예방 및 치료에 도움을 줄 수 있을 것이다. 또한, 정상인의 피부가 다양한 종류의 피부 자극에 의해 야기되는 지속적인 염증 반응에 노출되면 피부 조직이 활성산소에 지속적으로 노출되며, 그에 따라 피부조직의 손상, 주름 및 피부 노화가 촉진될 수 있으므로, 적절한 피부 염증반응의 진정과 제어를 통해 활성산소의 발생을 줄임으로써 피부의 손상, 주름 및 피부 노화를 예방할 수 있게 된다.

즉, 여러 가지 염증성 피부질환에서 ABH 항원이 소실되면 비정상적인 염증반응을 일으키게 되어, 정상적인 피부의 분화는 물론 피부 고유의 방어기전에 좋지 않은 파급효과를 가져오며, 따라서 외부에서 ABH 항원을 넣어주거나, ABH 항원의 발현을 증가시켜 주는 유용한 물질을 첨가해 주게 되면 정상적인 면역반응을 강화시킬 수 있다. 따라서, 과립층에서의 ABH 항원의 발현을 증가시키면, 피부에서의 면역반응을 강화시킴으로 인해 일시적이거나 유전적인 ABH 항원의 발현 감소를 보완하여 정상적인 피부 면역체계를 유지하는 것을 보조함으로써, 비정상적인 피부 면역체계의 불균형에 의해 야기되는 각종 피부 질환을 치료 및 예방할 수 있으며, 피부 장벽 기능의 강화를 통해 건강한 피부를 유지하는데도 도움이 된다.

또한, 본 발명은 후보물질들로부터 시험관내(in vitro) 또는 생체내(in vivo)에서 표피의 각질형성세포의 분화를 촉진하여 ABH 항원의 발현을 증가시키거나 감소시키는 물질을 선별하는 것을 포함하는 피부 유용 물질의 스크리닝 방법을 제공한다. 예컨대, 후보물질들을 세포에 동일한 조건에서 동량씩 처리한 후 세포를 배양하고, 웨스턴 블롯 방법 등을 이용하여 ABH 항원의 양을 측정함으로써 유용한 물질들을 선별할 수 있다. 그 외에도 후보물질들로부터 유용한 단백질을 스크리닝하는 당업계에 공지된 방법들 중 어느 방법도 적용가능하다.

또한, 본 발명은 정상 피부 및 손상된 피부의 과립층에서 정상적인 ABH 항원의 발현량을 증대시킴으로써 내인성 면역 반응을 강화시키고, 피부장벽기능 개선과 항균펩티드의 발현을 촉진하는 것을 포함하는 피부 미용 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 지속적으로 염증 반응이 일어난 피부에서의 ABH 항원의 발현량을 일시적으로 감소시켜 Th1 염증 반응에 관련된 인자들의 발현을 약화시킴으로써, 과다한 염증반응이 원인이 되는 피부 질환들의 증상을 완화시키는 것을 포함하는 피부 염증 진정 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 면역기능이 약화된 피부에서 과립층에서의 정상적인 ABH 항원의 발현량을 증대시켜 면역 반응을 정상화시킴으로써, 비정상적인 염증반응과 각질형성세포의 불완전한 분화를 억제하는 것을 포함하는 피부에서의 면역기능을 회복시키는 방법을 제공한다.

본 발명의 조성물은 피부를 비롯한 다양한 조직에서 염증 반응을 수반하는 염증질환의 증상을 개선하거나 보조하는 효과가 있으며, 피부장벽기능 개선과 항균 펩티드의 발현 촉진을 통해 건강한 피부 유지와 피부질환으로 인해 손상된 약한 피부의 회복에 도움을 줄 수 있다. 또한, 지속적인 염증 반응 억제를 통해 노화를 예방 또는 개선하고 피부 탄력을 강화시키며 피부주름을 예방 또는 개선할 수 있는 효과가 있으며, 염증성 피부 질환 및 노화를 개선할 수 있는 유용물질의 스크리닝에 유용하게 사용될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실험예 1. 여러 가지 인체 조직에서의 ABH 항원의 발현 조사

인체의 다양한 부위의 조직을 생검하여 얻은 후, ABH 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여, 면역조직화학 염색법으로 각 조직에서의 ABH 항원의 발현 여부를 조사하였다. 구체적으로, 생검한 조직을 10% 포르말린에 넣어 하룻밤 동안 고정시킨 후 포르말린을 제거하고 조직을 탈수를 시켜 파라핀 안에 굳혀 블록을 만들었다. 이후, 4 ㎛ 두께로 조직을 잘라 슬라이드에 붙여서 건조기(dry oven)에서 58℃로 1시간 동안 파라핀을 녹였다. 자일렌(xylene)에 5분씩 4번 처리해서 파라핀을 완전히 제거하고, 100% 에탄올에 1분씩 2회, 95% 에탄올에 1분, 80% 에탄올, 70% 에탄올 1분씩 담궈서 단계적으로 조직을 재수화시킨 후, 흐르는 수돗물에 5분 세척하고, 다시 증류수로 5분간 세척한 후, pH 6.0 TRS(Dako)에 담은 채로 120℃에 서 10분간 오토클레이브(autoclave)시켰다. 중탕으로 10분간 조직을 식힌 후, 증류수로 5분씩 2회 세척한 다음, PBS로 5분간 씻어낸 후 PBS로 희석한 3% 과산화수소수용액에 10분간 담가놓았다. 그 뒤, 조직을 PBS에 10분씩 3회 세척한 후 조직 주변에 PAP 펜으로 테두리를 그리고, 블록킹 용액(Zymed)을 조직에 30분간 처리하였다. A형 또는 B형 항원을 인지하는 1차 항체(SantaCruz)를 처리한 후 16시간동안 4℃에 방치하였고, 이후 PBS에 10분씩 3회 세척한 후 HRP(horseradish peroxidase)가 결합된 2차 항체(SantaCruz)를 15분간 처리하고, PBS에 10분씩 2회, 증류수에 10분씩 2회 세척하였다. AEC 발색제(Zymed)를 이용하여 발색한 후 흐르는 물에 5분간, 다시 증류수로 5분간 세척하고, Hematoxylin(Dako)으로 핵을 염색하여 흐르는 물에 10분간 세척한 뒤, 조직 주변의 물기만 제거한 후 수성 마운팅 용액(aqueous mounting solution)(Dako)으로 마운팅해서, 현미경으로 관찰하였고, 조직사진을 얻었다.

그 결과, ABH 항원은 적혈구뿐만 아니라 개인의 혈액형에 따라 위장(A형), 식도(A형), 소장(B형), 요도(A형), 결막(A형), 피부(A형) 등의 조직에서도 발현되고 있음을 확인하였다(도 2). 혈액형이 A형인 사람의 조직은 A 항원을 인지하는 항체에만 염색이 가능하였고 B 항원을 인지하는 항체로는 염색되지 않았으며, B형인 사람은 B 항원을 인지하는 항체에 의해서만 염색이 가능하였고, AB형인 사람은 2가지 항체 모두 염색이 가능했으며, O형인 사람은 두 가지 모두 염색이 되지 않았다.

실험예 2. 자외선 조사에 따른 ABH 항원의 발현 감소

정상피부조직에서 A형인 사람은 A 항원을 인지하는 항체로만 염색이 되며 주로 표피의 과립층에서 염색이 된다(Dabelsteen et al., J Invest dermatol 82:13-17(1984)). 개인별로 피부에 자외선을 조사했을 때 홍반이 발생하는 최소 홍반 세기(minimal erythema dose, MED)를 측정하고, 2 MED의 세기로 자외선을 조사한 후, 0, 24, 48, 72시간에 피부 조직을 생검하여 실험예 1과 동일한 방식으로 면역조직화학 염색법을 통해 ABH 항원의 발현을 조사하였다.

그 결과, 24시간까지는 ABH 항원이 정상적으로 발현되었지만, 48, 72 시간이 되면서 ABH 항원의 발현이 점차 소실되는 것을 확인하였다(도 3).

실험예 3. 여러 가지 피부질환에서의 ABH 항원의 발현 감소

염증이 유도되는 강한 세기의 자외선 조사에 의해 ABH 항원의 발현이 소실된다는 점에 기초하여, 염증반응의 이상 조절에 의해 증상이 주로 나타나는 것으로 생각되는 다양한 피부 질환에서의 ABH 항원의 발현 정도를 조사하였다. 이를 위하여, 건선(A형), 아토피(A형), 어린선(A형), 봉와직염(A형), 원판상 홍반성 루푸스(A형), 여드름(B형) 등의 피부 질환의 환자들로부터 조직을 생검하여, 실험예 1과 동일한 방식으로 면역조직화학 염색법으로 ABH 항원의 발현을 조사하였다.

그 결과, 대부분의 병리조직에서 과립층에서의 정상적인 ABH 항원의 발현이 소실되었으며, 환자에 따라 비정상적으로 유극층이나 기저층에서도 ABH 항원이 발현되는 현상을 보였다(도 4 및 도 5). 이는 과립층의 불완전한 분화 및/또는 유극 층이나 기저층의 비정상적인 분화를 시사한다.

실험예 4. 천연물 추출물이 ABH 항원의 발현에 미치는 영향 조사

다양한 종류의 천연물 추출물이 ABH 항원의 발현에 미치는 영향을 조사하였다. 이를 위하여, 가시오가피, 엉겅퀴, 표고버섯, 인삼, 에키나시아, 황금 및 버드나무 추출물 원액(각각 바이오스펙트럼(주)로부터 구입함)을 각각 0.1%(v/v), 1%(v/v) 및 2%(v/v)의 농도로 HaCaT 세포에 처리한 후, 48시간 동안 배양하였다. 이후, 웨스턴 블롯 실험에 의해 B형 항원의 발현을 조사하였다. 대조군으로는 알파-튜불린 또는 STAT1 알파 단백질을 사용하였다.

그 결과, 가시오가피, 엉겅퀴, 표고버섯, 인삼 및 에키나시아 추출물은 HaCaT 세포에서 B형 항원의 발현을 감소시키고, 버드나무 및 황금 추출물은 B형 항원의 발현을 증가시키는 효과가 있음을 확인하였다(도 6).

실험예 5. ABH 항원이 혈액형 항원의 발현에 미치는 영향 조사

A, B, H 항원(Dextra Laboratories에서 구입함)을 B 항원을 보유하고 있는 HaCaT 세포에 100 nM의 농도로 24시간 동안 처리한 후, 웨스턴 블롯 분석에 의해 B 항원의 발현 여부를 관찰하였다. 그 결과, B, H 항원에 의해 각각 B형 항원의 발현이 증가되었으며, A 항원은 24시간에는 B형 항원의 발현을 증가시키지 않았다(도 7-0). 또한, A, B 항원을 각각 100 nM 또는 200 nM의 농도로 HaCaT 세포에 48시간 동안 처리한 경우에는, A, B 항원 모두 B형 항원의 발현을 증가시켰다(도 7). 상 기 결과로부터, A, B, H 항원 모두 HaCaT 세포의 B형 항원의 발현을 증가시킨다는 것을 확인하였다.

실험예 6. ABH 항원을 구성하는 단당류의 투여가 혈액형 항원의 발현에 미치는 영향 조사 (1)

일반적으로 아토피피부염이 있는 환자의 엉덩이 피부에는 육안으로 구분되는 병변은 없지만, 혈액형 항원의 발현은 정상인의 피부에 비해 감소해 있는 경우가 있다. 따라서, 이를 회복시켜 주는 효과를 확인하기 위하여, 100% 갈락토오스, FGG(Fucose:Galactose = 1:2, B-antigen 조성) 및 FGGN(Fucose:Galactose:N-acetylgalactosamine = 1:1:1, A-antigen 조성)의 조성을 갖고 있는 당의 혼합물을 폴리에틸렌 글리콜:에탄올:물=3.5:1.5:5로 배합한 용매에 0.5%(w/v)로 용해시켰다. 상기 용해물을 30세 남성 B형 아토피 환자(자원자)와 24세 남성 A형 아토피 환자(자원자)의 엉덩이 피부에 폐쇄적으로 붙여 48시간씩 2회(총 96시간) 처리한 후 생검조직을 얻었다. 생검된 조직은 ABH 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여, 실험예 1에 개시된 면역조직화학 염색법과 동일한 방식으로 각 조직에서의 ABH 항원의 발현 여부를 조사하였다.

그 결과, 혈액형 당을 구성하는 물질들을 처리하면, 30세 남성 B형 아토피 환자(자원자)(도 8의 A)와 24세 남성 A형 아토피 환자(자원자)(도 8의 B) 모두에서 세포 및 피부에서의 혈액형 당의 발현이 증가한다는 것을 확인하였다.

실험예 7. ABH 항원을 구성하는 단당류의 투여가 혈액형 항원의 발현에 미치는 영향 조사 (2)

상기 실험예 5에 개시된 것과 동일한 A, B, H 항원을 구성하는 FGG 및 FGGN 혼합물 및 FG(Fucose:Galactose = 1:1, H-antigen 조성) 혼합물과, 상기 A, B, H 항원을 구성하는 단당류인 글루코오스, 갈락토오스, 푸코오스, N-아세틸갈락토사민 및 N-아세틸글루코사민을 각각 0.1, 1, 10 μM의 농도로 B 항원을 보유하는 HaCaT 세포에 24시간동안 처리한 후, 웨스턴 블롯 분석에 의해 B 항원의 발현 여부를 관찰하였다. 그 결과, 이들 모두 B형 항원의 발현을 증가시킨다는 것을 확인하였다(도 9).

실험예 8. ABH 항원의 제거에 의한 ICAM -1, HLA - DR 발현의 감소

일반적으로 피부에서의 염증 과정에서 가장 중요한 역할을 하는 Th1 사이토카인인 인터페론 감마(IFNg)는 다양한 Th1 면역 반응을 매개하는 인자들의 발현을 증대시키는데, 그중에서도 특히 각질형성세포가 항원제공세포로서의 역할을 할 때 가장 중요한 분자로는 ICAM-1과 HLA-DR을 꼽을 수 있다(Barker et al ., Lancet 337:211-214 (1991)). B 항원을 보유하고 있는 각질형성세포주인 HaCaT 세포를 5% FBS(Fetal bovine serum, Hyclone)를 함유하는 DMEM(Dulbecco's modificastion of Eagle's medium, Welgene) 배지에서 배양하여 세포가 35 ㎜ 크기의 배양 접시에 70% 정도 자라도록 세포배양기에서 키운 뒤, Opti-MEM 배지(Invitrogen) 에서 2시간 인큐베이션하였다. 2.5 ㎕의 리포펙타민 2000(Invitrogen)을 이용하여, 음성대 조군으로 목표 유전자가 없는 RNA(Bioneer)와 FUT1 유전자를 표적으로 하는 siRNA(Bioneer, 서열번호 1)를 250 p㏖씩 트랜스펙션하였다. 다음날 배지를 FBS가 없는 DMEM으로 교체해주었고, 다시 하루 뒤에 인터페론 감마(Peprotech)를 10 ng/㎖의 농도로 처리한 후, 0, 12, 15, 18, 24, 36, 48시간 뒤에 각각 세포에서 단백질을 추출하여 FUT1의 siRNA에 의한 B형 항원의 발현 감소와, 항원제공세포의 주요기능인자인 ICAM-1, HLA-DR의 변화를 각각의 항체(Abcam, Dako)를 이용하여 웨스턴 블롯 실험을 수행하였다. 크게 변화하지 않는 대조군 단백질로는 알파 튜불린(alpha-tubulin, SantaCruz)을 사용하였다.

그 결과, 대조군의 경우 인터페론 감마에 의해 ICAM-1과 HLA-DR의 발현이 크게 증가되는데, HaCaT 세포에서 FUT1의 siRNA를 250 p㏖/㎖로 처리하여 B형 항원의 발현을 억제한 경우에는 인터페론 감마에 의한 ICAM-1의 발현의 증가가 상당 부분 억제되는 것을 확인하였고, HLA-DR의 경우에는 초기 18시간까지의 발현 증가가 억제되나 24시간 이후에는 회복되며 48시간에는 역전되는 것을 확인하였다(도 10).

실험예 9. ABH 항원의 제거에 의한 IL -8, GM - CSF , BD -2 발현의 감소

B 항원을 보유하고 있는 각질형성세포주인 HaCaT 세포에, 실험예 4와 동일한 방법으로 리포펙타민 2000만 처리한 대조군(CNT), 음성대조군으로 목표 유전자가 없는 RNA(NC)와 FUT1(siFUT1), ABO(siABO) 유전자를 표적으로 하는 siRNA(Bioneer)를 250 p㏖씩 트랜스펙션한 4 종류의 샘플에, 인터페론 감마를 처리하지 않거나, 10 ng/㎖의 농도로 처리한 후, 24시간 뒤에 세포에서 RNA를 추출하여, 36b4로 보정 한 IL-8, GM-CSF, BD-2(β-defensin 2)의 mRNA의 발현량을, 사이버그린(sybrgreen, Takara master mix)을 이용한 실시간(Realtime) RT-PCR 방법(Applied Biosystems, 7500 Real-Time PCR system)으로 확인하였다. 이때, FUT1 유전자의 siRNA 서열은 실험예 4와 동일하며, ABO 유전자의 siRNA 서열은 서열번호 2로 기재되는 염기서열을 사용하였다. 또한, 인간 IL-8 유전자의 프라이머로는 서열번호 3 및 서열번호 4로 기재되는 염기서열을 사용하였고, GM-CSF의 프라이머로는 서열번호 5 및 서열번호 6으로 기재되는 염기서열을 사용하였으며, BD-2의 프라이머로는 서열번호 7 및 서열번호 8로 기재되는 염기서열을 사용하였다.

그 결과, Th1 면역 반응을 매개하는 분자들 중에서 인터페론 감마에 의해 유도되는 IL-8, GM-CSF 의 발현이 B형 항원의 제거에 의해 감소하는 것을 확인하였으며, 피부의 항균 펩티드중 하나인 BD-2의 발현은 인터페론 감마에 증가되지 않지만, 그 발현이 B형 항원의 제거에 의해 감소하는 것을 확인하였다(도 11 및 도 12).

실험예 10. ABH 항원 제거 후 TNF -α 또는 IL -1β 처리에 의한 BD -2 발현의 유도 억제

FUT1 유전자의 shRNA를 과발현시킬 수 있는 렌티바이러스 벡터와 ABO 유전자의 shRNA를 과발현시킬 수 있는 렌티바이러스 벡터(SantaCruz에서 구입함)를 HaCaT 세포주에 감염시킨 후, 퓨로마이신(puromycin)으로 한달간 선택배양하여, 음성대조군 렌티바이러스 벡터에 비해 안정적으로 FUT1 또는 ABO의 발현이 억제되는 HaCaT 세포주를 제작하였다. 이 세포들에 TNFα와 IL-1β를 각각 24시간 동안 처리한 후, BD-2의 mRNA의 발현양을 36b4 유전자의 발현량으로 보정하여 상기 실험예 7과 동일한 실시간 RT-PCR 방법으로 비교하였다.

그 결과, 아무 처리도 하지 않은 경우 BD-2의 발현은 물론, 염증성 사이토카인인 TNF-α와 IL-1β를 처리하여 염증 반응을 유도한 경우의 증가된 BD-2의 발현도, FUT1 또는 ABO 단백질의 발현이 억제된 HaCaT 세포주에서 모두 일정 부분 감소되었다(도 13).

실험예 11. ABH 항원의 발현이 세포의 이동 속도에 미치는 영향

HaCaT 세포주에 siRNA를 처리하지 않거나, 실험예 4와 동일한 방법으로 음성대조군 siRNA(NC), FUT1 혹은 ABO의 siRNA를 리포펙타민 2000을 이용해서 트랜스펙션하여 배양접시에 가득찰 때 까지 배양한 후, 일정한 너비로 흠집(scratch)을 내서 세포가 없는 공간을 만들었다. 10% FBS가 포함된 DMEM 배지에서 배양하면서, 각각 0, 24, 48, 72 및 96시간에 사진을 찍어 세포의 이동을 확인하였다.

그 결과, siRNA를 처리하지 않거나 NC siRNA를 트랜스펙션한 경우에 비해, ABO나 FUT1의 siRNA를 트랜스펙션한 경우에는 흠집이 닫히는 속도가 현저히 감소하며, 또한 FUT1의 경우가 ABO의 경우에 비해 더 늦게 닫히는 경향을 보였다(도 14). 이는 피부에서의 상처 치유 과정에서의 각질형성세포의 이동 속도가 FUT1 및 ABO의 발현이 적을 경우, 즉 혈액형 항원의 발현이 적을 경우에 느려질 수 있다는 것을 의미한다.

상기에서 살펴본 바와 같이, 다양한 염증성 피부질환에서 ABH 항원의 발현이 감소해 있는 것에 착안하여 각질형성세포에서 강제로 ABH 항원의 발현을 제거해 본 결과, 인터페론 감마에 의해 유도되는 여러 가지 Th1 면역반응 인자들이 감소됨에 따라 면역시스템이 정상에 비해 약화되는 것을 확인하였다. 따라서 ABH 항원의 발현을 조절하는 것이 염증 반응의 정도를 조절하는 효과가 있음을 확인하였다.

제조예 1. 약학적 조성물의 제조

1.1. 시럽제의 제조

유효성분을 20%(중량/부피)로 함유하는 시럽을 다음과 같은 방법으로 제조하였다. 먼저, H형 항원, 사카린, 당을 온수 80 g에 용해시켰다. 상기 용액을 냉각시킨 후, 여기에 글리세린, 사카린, 향미료, 에탄올, 소르브산 및 증류수로 이루어진 용액을 제조하여 혼합하였다. 이 혼합물에 물을 첨가하여 100 ㎖가 되게 하였다.

상기 시럽제의 구성 성분은 다음과 같다.

H형 항원························ 20 g

사카린 ························ 0.8 g

당·························· 25.4 g

글리세린 ······················· 8.0 g

향미료························ 0.04 g

에탄올 ························ 4.0 g

소르브산 ······················· 0.4 g

증류수························· 정량

1.2. 정제의 제조

B형 항원 250 g을 락토오스 175.9 g, 감자전분 180 g 및 콜로이드성 규산 32 g과 혼합하였다. 상기 혼합물에 10% 젤라틴 용액을 첨가시킨 후, 분쇄해서 14 메쉬체를 통과시켰다. 이것을 건조시키고 여기에 감자전분 160 g, 활석 50 g 및 스테아린산 마그네슘 5 g을 첨가해서 얻은 혼합물을 정제로 만들었다.

상기 정제의 구성 성분은 다음과 같다.

B형 항원 ······················· 250 g

락토오스 ······················ 175.9 g

감자전분 ······················· 180 g

콜로이드성 규산 ···················· 32 g

10% 젤라틴 용액

감자전분 ······················· 160 g

활석·························· 50 g

스테아르산 마그네슘··················· 5 g

1.3. 주사액제의 제조

유효성분 10 ㎎을 함유하는 주사액제를 다음과 같은 방법으로 제조하였다.

A형 항원 1 g, 염화나트륨 0.6 g 및 아스코르브산 0.1 g을 증류수에 용해시 켜서 100 ㎖을 만들었다. 상기 용액을 병에 넣고 가열하여 멸균시켰다.

상기 주사액제의 구성 성분은 다음과 같다.

A형 항원 ······················· 1 g

염화나트륨 ······················ 0.6 g

아스코르브산 ····················· 0.1 g

증류수 ························ 정량

제조예 2. 화장료 조성물의 제조

2.1. 유화 제형의 화장품 제조

표 1에 기재된 조성으로 유화 제형의 화장품을 제조하였다. 제조 방법은 하기와 같다.

1) 1 내지 9의 원료를 혼합한 혼합물을 65～70℃로 가열하였다.

2) 10의 원료를 상기 단계 1)의 혼합물에 투입하였다.

3) 11 내지 13의 원료의 혼합물을 65～70℃로 가열하여 완전히 용해시켰다.

4) 상기 단계 3)을 거치면서, 상기 2)의 혼합물을 서서히 첨가하여 8,000 rpm에서 2～3분간 유화시켰다.

5) 14의 원료를 소량의 물에 용해시킨 후 상기 단계 4)의 혼합물에 첨가하고 2분간 더 유화시켰다.

6) 15 내지 17의 원료를 각각 평량한 후 상기 단계 5)의 혼합물에 넣고 30초간 더 유화시켰다.

7) 상기 단계 6)의 혼합물을 유화 후 탈기과정을 거쳐 25～35℃로 냉각시킴으로서 유화제형의 화장품을 제조하였다.

	조성	유화 제형 1	유화 제형 2	유화 제형 3
1	스테라인산	0.3	0.3	0.3
2	스테알리 알코올	0.2	0.2	0.2
3	글리세릴 모노스테아레이트	1.2	1.2	1.2
4	밀납	0.4	0.4	0.4
5	폴리옥시에틸렌솔비탄 모노라우린산 에스테르	2.2	2.2	2.2
6	파라옥시안식향산 메틸	0.1	0.1	0.1
7	파라옥시안식향산 프로필	0.05	0.05	0.05
8	세틸에틸헥사노에이트	5	5	5
9	트리글리세라이드	2	2	2
10	사이클로메티콘	3	3	3
11	증류수	to 100	to 100	to 100
12	진한 글리세린	5	5	5
13	트리에탄올아민	0.15	0.15	0.05
14	폴리아크릴산 중합체	0.12	0.12	0.12
15	색소	0.0001	0.0001	0.0001
16	향	0.10	0.10	0.10
17	A형 항원	0.0001	1	10

2.2 가용화 제형의 화장품 제조

표 2에 기재된 조성으로 가용화 제형의 화장품을 제조하였다. 제조 방법은 하기와 같다.

1) 2 내지 6의 원료를 1의 원료(정제수)에 넣고 아직믹서를 이용하여 용해시켰다.

2) 8 내지 11의 원료를 7의 원료(알코올)에 넣고 완전용해시켰다.

3) 상기 단계 2)의 혼합물을 상기 단계 1)의 혼합물에 서서히 첨가하면서 가용화시켰다.

	조성	가용화 제형 1	가용화 제형 2	가용화 제형 3
1	정제수	to 100	to 100	to 100
2	진한 글리세린	3	3	3
3	1,3-부틸렌글리콜	2	2	2
4	EDTA-2Na	0.01	0.01	0.01
5	색소	0.0001	0.0002	0.0002
6	B형 항원	0.1	5	5
7	알코올(95%)	8	8	8
8	파라옥시안식향산 메틸	0.1	0.1	0.1
9	폴리옥시에틸렌 하이드로제네이트디 에스테르	0.3	0.3	0.3
10	향	0.15	0.15	0.15
11	사이클로메티콘	-	-	0.2

도 1은 혈액형 당의 화학적 구조를 보여주는 개략도이다.

도 2는 정상 조직에서의 ABH 항원의 발현 양상을 보여주는 사진이다.

도 3은 자외선 조사에 따른 피부에서의 ABH 항원(B형 항원)의 발현 감소를 보여주는 사진이다.

도 4는 각종 피부질환 조직에서의 ABH 항원의 발현 양상을 보여주는 사진이다.

도 5는 각종 피부질환의 면역조직화학 염색 결과를 나타낸 것이다.

도 6은 다양한 천연물 추출물이 ABH 항원의 발현에 미치는 영향을 보여주는 전기영동 사진이다.

도 7은 ABH 항원의 처리가 혈액형 항원의 발현에 미치는 영향을 보여주는 전기영동 사진이다.

도 8은 ABH 항원을 구성하는 단당류의 투여가 혈액형 항원의 발현에 미치는 영향을 보여주는 면역조직화학 염색 사진이다.

도 9는 ABH 항원을 구성하는 단당류의 투여가 혈액형 항원의 발현에 미치는 영향을 보여주는 전기영동 사진이다.

도 10은 ABH 항원 제거에 의한 ICAM-1, HLA-DR의 발현 감소를 보여주는 웨스턴 블롯 사진이다.

도 11은 ABH 항원 제거에 의한 IL-8, GM-CSF 의 발현 감소를 보여주는 실시간 PCR 결과의 그래프이다.

도 12는 ABH 항원 제거에 의한 BD-2의 발현 감소를 보여주는 실시간 PCR 결과의 그래프이다.

도 13은 ABH 항원 제거 후 TNF-α 또는 IL-1β 처리에 의한 BD-2 발현의 유도 억제 여부를 보여주는 그래프이다.

도 14는 ABH 항원의 발현이 세포의 이동 속도에 미치는 영향을 보여주는 사진이다.

<110> SNU R&DB FOUNDATION <120> Composition for Improving Inflammatory Disorder Using ABH Antigen <130> 2009-dpa-0132 <160> 8 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA for FUT1 gene <400> 1 ccgugcucau ugcuaacca 19 <210> 2 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA for ABO gene <400> 2 gacauccuca acgagcagu 19 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer for IL-8 gene <400> 3 caggaattga atgggtttgc 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer for IL-8 gene <400> 4 aaaccaaggc acagtggaac 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer for GM-CSF gene <400> 5 cttcctgtgc aacccagatt 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer for GM-CSF gene <400> 6 cttggtccct ccaagatgac 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer for BD-2 gene <400> 7 ccagccatca gccatgaggg 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer for BD-2 gene <400> 8 ggagcccttt ctgaatccgc 20

Claims

ABH 항원 또는 상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 유효성분으로 함유하는 염증질환 개선용 조성물.
청구항 1에 있어서,

상기 염증질환은 염증성 피부질환 및 위장, 식도, 소장, 요도 및 결막으로 구성된 군으로부터 선택되는 조직의 염증성 질환으로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
청구항 1에 있어서,

상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질은 ABH 항원의 발현을 증가시키는 물질 또는 ABH 항원의 발현을 감소시키는 물질인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 3에 있어서,

상기 ABH 항원의 발현을 증가시키는 물질은 ABO, FUT1 및 FUT2로 구성된 군으로부터 선택되는 유전자 또는 상기 유전자를 포함하는 벡터인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 3에 있어서,

상기 ABH 항원의 발현을 감소시키는 물질은 ABO, FUT1 및 FUT2로 구성된 군으로부터 선택되는 유전자의 발현을 억제하는 siRNA, shRNA 및 상기 siRNA나 shRNA의 안티센스 코딩 서열을 포함하는 벡터로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 2에 있어서,

상기 염증성 피부질환은 건선, 아토피, 어린선, 천포창, 여드름, 홍반성 루푸스, 피부노화 및 피부주름으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서,

상기 ABH 항원 또는 상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질은 전체 조성물 중에 0.001 내지 10 중량%의 양으로 함유되는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1 내지 청구항 7 중 어느 한 항에 있어서,

상기 조성물은 약학적 조성물 또는 화장료 조성물의 형태인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 8에 있어서,

상기 조성물의 제형은 피부 외용제 제형인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 8에 있어서,

상기 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤, 피부 점착타입의 화장료 제형, 로션, 연고, 크림, 패취 및 분무제로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
청구항 8에 있어서,

상기 약학적 조성물은 고체, 반고체 및 액상으로 구성된 군으로부터 선택되는 경구 또는 비경구 투여제 형태인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서,

상기 ABH 항원은 단백질이나 지질의 당질화 말단의 구조가 푸코오스-갈락토오스 말단에 N-아세틸갈락토사민이 결합한 A 항원, 푸코오스-갈락토오스 말단에 갈락토오스가 결합한 B 항원, 푸코오스-갈락토오스 말단에 N-아세틸갈락토사민과 갈락토오스가 모두 결합한 AB 항원, 푸코오스-갈락토오스 말단에 아무것도 결합하지 않은 H 항원으로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
청구항 1항 또는 청구항 11에 있어서,

상기 ABH 항원은 푸코오스, 갈락토오스, 글루코오스, N-아세틸갈락토사민, N-아세틸글루코사민, FG(Fucose:Galactose = 1:1, H-antigen 조성), FGG(Fucose:Galactose = 1:2, B-antigen 조성) 및 FGGN(Fucose:Galactose:N-acetylgalactosamine = 1:1:1, A-antigen 조성)으로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
청구항 3에 있어서,

상기 ABH 항원의 발현을 증가시키는 물질은 버드나무 추출물 또는 황금 추출물인 조성물.
청구항 3에 있어서,

상기 ABH 항원의 발현을 감소시키는 물질은 가시오가피 추출물, 엉겅퀴 추출물, 표고버섯 추출물, 인삼 추출물 및 에키나시아 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.