KR20100051041A - 이중-가닥 봉쇄형 핵산 조성물 - Google Patents

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Abstract

하나 이상의 봉쇄형 핵산(LNA) 뉴클레오시드를 가진 핵산을 포함하는 면역자극제가 제공된다. 핵산은 CpG 모티프를 더 포함할 수 있다. 핵산은 이중-가닥일 수 있으며, dsRNA를 포함할 수 있다.
Figure 112009060567771-PCT00072
LNA, CpG 모티프, 면역반응, 면역자극, 핵산, TLR3, TLR9

Description

이중-가닥 봉쇄형 핵산 조성물{DOUBLE-STRANDED LOCKED NUCLEIC ACID COMPOSITIONS}
본 출원은 미국 가 출원 제60/905,461호 및 제60/950,271호의 이익을 주장하며, 이들은 모두 본원에 그 전체가 참고자료로 포함된다.
기술분야
본 발명은 면역학 및 면역자극제의 분야에 관한 것이다. 더 구체적으로, 본 발명은 이중-가닥 봉쇄형 핵산 조성물에 관한 것이다. 핵산은 dsRNA를 포함할 수 있다.
선천성 면역시스템은 병원균의 침입에 대한 방어의 '제1선'으로서의 역할을 하며, 또한 후천성 면역반응을 지원하는 역할을 한다. 톨-유사 수용체(Toll-like receptor: TLR)는 선천성 면역반응과 후천성 면역반응의 개시에 있어서 중요한 역할을 담당하는 수용체의 한 일족이다. TLR은 다양한 감염원 특징에 개별적으로 반응하는데, 예를 들어 TLR4는 특히 리포다당류에 반응하고, TLR9는 CpG 모티프를 포함하는 핵산과 같은 메틸화된 핵산에 우선적으로 반응하며, dsRNA는 TLR3의 바람직한 아고니스트이다.
이중-가닥 RNA(dsRNA)는 바이러스성 감염의 공통된 복제 중간체이다. 숙주 에서 바이러스 복제가 발생하거나, 또는 숙주가 폴리IC 이중-가닥 RNA와 같은 바이러스 복제 의태체에 노출되었을 때 TLR3가 비-특이적 선천성 면역반응을 개시한다. TLR3의 자극은 NF-κB의 활성화 및 인터페론을 포함하는 염증성 사이토카인의 후속 생성을 야기하며, 이것은 차례로 MHC I형 및 II형의 증가된 발현을 자극하여 후천성 면역반응을 증진시킨다.
dsRNA의 면역자극성 특징은 암 치료제의 개발과 관련하여 관심의 대상이다. 애쥬번트로서 치료제와 조합하여 사용되는 폴리IC의 사용이 잘 공지되어 있다. 더욱이, 폴리IC dsRNA는 안정성의 개선을 위하여 다른 제제와도 조합된다. 미국특허 제4,346,538호는 비교적 고 분자량의 폴리I:C, 13-35 kDa 분자량 범위의 폴리-L-리신(폴리양이온성 폴리펩티드) 및 카르복시메틸셀룰로오스를 포함하는 폴리IC 복합체("폴리ICLC"), 및 이러한 조성물의 제조 및 사용 방법을 설명한다. 또한, 일부 암, HIV 또는 에볼라와 같은 일부 바이러스 질환, 및 다발성 경화증의 치료를 위한 치료제로서 폴리ICLC의 사용이 제안되었다(US 공보 2006/0223742).
또한, 다른 dsRNA가 암 치료제로서 어떤 가능성을 갖는 것으로 증명되었다. 예를 들어, 림포카인과 조합된 dsRNA는 흑색종의 치료에서 치료제로서 상승 효과를 가진다고 설명되었다(EP 0281380). 또한, 개선된 암 치료법에서 사용하기 위한 폴리IC 및 폴리AU를 포함하는 TLR3 아고니스트가 설명되었다(US 2006/0110746).
Zhu 등(J. Translational Medicine 2007 5:10 doi:10.1186/1479-5876-5-10)은 CNS 신경교종을 지닌 마우스를 위한 효과적인 치료로서 폴리ICLC(근육내 투여)와 특이적 종양 면역원(IFA와 함께 피하 투여)의 조합을 설명한다.
어떤 폴리I:C 조성물은 만성피로 증후군의 치료에 사용되었고, HIV 감염 변이체의 치료에서는 항바이러스제와 조합하여 사용되었다(Thompson et al., Eur. J. Clin. Microbiol Infect Dis. 1996 Jul;15(7):580-7; Gillespie et al., In Vivo. 1994 May-Jun;8(3):375-81; Strayer et al., Clin. Infect Dis. 1994 Jan;18 Suppl 1:S88-95).
CpG 디뉴클레오티드와 같은 다른 특이적 올리고뉴클레오티드 모티프가 면역자극성 효과를 갖는 것으로 확인되었다. DNA에 있는 어떤 메틸화되지 않은 CpG 모티프가 TLR9 아고니스트이며 암 치료제로서 제안되었다(Krieg A.M., 2007 J. Clin. Invest. 117:1184-94). US 7,148,191은 작은(6-20개 아미노산) 항원과 조합 사용하기 위한, 폴리양이온성 펩티드 및 이노신과 시토신을 포함하는 핵산을 포함하는 항원 조성물을 설명한다. WO 01/93905는 CpG가 배제된 면역자극성 올리고데옥시뉴클레오티드를 설명하는데, 높은 전신성 TNF-알파 및 특이성 결여와 같은 부작용이 언급되었다.
RNA를 포함하는 치료적 핵산은 선천성 바이러스 방어반응의 일부로서 이들이 자극하는 면역반응에 의해 분해될 수 있다. US 6,194,388(및 그 참고문헌들)은 핵산 조성물에서 데옥시리보스 뉴클레오시드를 리보스 뉴클레오시드로 치환하는 것이 안정성 증가에 효과적이지 않으며, 면역 활성화에는 특이적 형태의 리보스 당이 필요한 것 같다고 교시한다. 독성이 용량-의존적이므로, 용량 증가로는 안정성 문제를 피하지 못한다.
적어도 하나의 치료제, 예를 들어, 제한되는 것은 아니지만 바이러스 면역원 과 조합하여 병용-투여하기에 적합하며, 바이러스 면역원의 면역자극성 활성을 증진시킬 수 있는 안정성이 개선된 애쥬번트가 바람직하다.
발명의 개요
본 발명은 면역자극제에 관한 것으로서, 이중-가닥 봉쇄형 핵산(LNA) 조성물을 제공한다. 핵산은 dsRNA를 포함할 수 있다.
본 발명의 추가의 목적은 개선된 dsRNA 함유 화합물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명은 하기 식 II의 화합물을 제공한다:
Figure 112009060567771-PCT00001
상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- V, W, Z 및 Q는 어떤 뉴클레오시드이고;
- m은 1 내지 500, 또는 1 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수이고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고; 그리고
- V, S, W, Z, D 및 Q 중 하나 이상은 하나 이상의 봉쇄형 핵산(LNA) 모노머를 포함한다.
또한, 본 발명은 B가 이노신이고 D가 시토신인 상기 정의된 화합물을 제공한다.
본 발명은 상기 정의된 화합물, 폴리양이온성 폴리펩티드, 예를 들어 폴리리신, 폴리아르기닌, 폴리오르니틴 및 카르복시메틸셀룰로오스를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 상기 정의된 화합물 중 어느 것과 면역원, 예를 들어 HspE7을 포함하는 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 하기 식 IIa의 화합물을 제공한다:
Figure 112009060567771-PCT00002
상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- V, W, Z 및 Q는 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있으며, 여기서 V와 Z가 결합할 수 있고, W와 Q가 결합할 수 있으며;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
- k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 저미널 뉴클레오시드에 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있거나, 또는 R은 부재할 수 있으며, 어떤 구체예에서, 예를 들어, 제 1 가닥의 5' R 리보뉴클레오시드는 제 2 가닥의 3' R 리보뉴클레오시드와 결합할 수 있고; 그리고
- V, S, D, Z, Q, R 및 W 중 하나 이상은 하나 이상의 LNA 모노머를 포함한다.
식 IIa는 5', 3', 또는 5'와 3'의 오버행 염기를 가지며, 제 1 가닥 Rk-Vn-(Sm)-Wp-Rk 및 제 2 가닥 Rk-Zn-(Dm)-Qp-Rk을 가진 이중-가닥 RNA 분자를 나타내며, 여기서 상보성 뉴클레오시드 간의 결합은 단일 수평선으로 표시된다. 제 1 가닥은 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시되고, 제 2 가닥은 제 1 가닥과 역-평행 방향(좌측에서 우측으로 읽었을 때 3'-5'로 나타남)으로 표시된다.
또한, 본 발명은 암, 또는 세균성 또는 바이러스성 병원균과 관련된 질환 또는 장애를 가진 대상을 치료하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 하기 식 II에 따른 화합물을 대상에게 투여하는 것을 포함한다:
Figure 112009060567771-PCT00003
상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- V, W, Z 및 Q는 어떤 뉴클레오시드이고;
- m은 1 내지 500, 또는 1 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수이고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고; 그리고
- V, W, S, Z, D 및 Q 중 하나 이상은 하나 이상의 봉쇄형 핵산(LNA) 모노머를 포함한다.
또한, 본 발명은 S가 이노신이고 D가 시토신인 상기 방법에 관한 것이다. 더욱이, 화합물은 면역원, 예를 들어 HspE7과 함께 투여될 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따라서, 면역원에 대한 대상의 면역반응을 증진시키는 방법이 제공되며, 상기 방법은 LNA를 포함하는 dsRNA와 면역원을 포함하는 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함한다. 면역원은 죽은 전-유기체, 단백질, 펩티드, 융합 단백질, 융합 펩티드, 재조합 단백질 또는 재조합 펩티드일 수 있다. 면역원은 HspE7일 수 있다. LNA를 포함하는 dsRNA의 예는, 제한되는 것은 아니지만 본 발명의 식 II-VII를 포함한다.
본 발명의 분자를 포함하는 dsRNA는 하나 이상의 LNA를 함유한다. 이들 LNA 함유 dsRNA는 dsRNA 활성을 보유하면서 증가된 안정성의 특성을 나타낸다. LNA는 단일-가닥 및 이중-가닥 핵산과 핵염기(nucleobase) 특이적 듀플렉스 및 트리플렉스를 형성할 수 있다. 이들 복합체는 통상의 핵산으로 형성된 대응하는 복합체보다 높은 열안정성을 나타낸다.
또한, 본 발명은 하기 식 IVa의 화합물을 제공한다:
Vn-(Sm)-Wp 식 IVa
상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- V 및 W는 어떤 뉴클레오시드, 리보뉴클레오시드, 데옥시리보뉴클레오시드, 뉴클레오시드 유사체, 리보뉴클레오시드 유사체, 또는 데옥시리보뉴클레오시드 유사체이고;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수이고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고; 그리고
- V, S 및 W 중 하나 이상은 하나 이상의 봉쇄형 핵산(LNA) 모노머를 포함한다.
또한, 본 발명은 하기 식 IVb의 화합물을 제공한다:
Qp-(Dm)-Zn 식 IVb
상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- Z 및 Q는 어떤 뉴클레오시드, 리보뉴클레오시드, 데옥시리보뉴클레오시드, 뉴클레오시드 유사체, 리보뉴클레오시드 유사체, 또는 데옥시리보뉴클레오시드 유사체이고;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고; 그리고
- Z, D 및 Q 중 하나 이상은 하나 이상의 봉쇄형 핵산(LNA) 모노머를 포함한다.
또한, 본 발명은 하기 식 II의 화합물의 제조 방법을 제공하며,
Figure 112009060567771-PCT00004
(상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- V, W, Z 및 Q는 어떤 뉴클레오시드이고;
- m은 1 내지 500, 또는 1 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수이고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고; 그리고
- V, S, W, Z, D 및 Q 중 하나 이상은 하나 이상의 LNA 모노머를 포함한다)
상기 방법은 식 Vn-(Sm)-Wp의 화합물에 따른 제 1 올리고머와 식 Qp-(Dm)-Zn의 화합물에 따른 제 2 올리고머를 약 0.5-1.0 내지 약 1.0-0.5의 몰비로 혼합하는 단계, 및 상기 제 1 및 제 2 올리고머를 아닐링하여 이중-가닥 핵산을 형성하는 단계를 포함한다.
본 발명은 하기 식 IVc의 화합물을 제공한다:
Rk1-Vn-(Sm)-Wp-Rk2 식 IVc
상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- V 및 W는 어떤 뉴클레오시드, 리보뉴클레오시드, 데옥시리보뉴클레오시드, 뉴클레오시드 유사체, 리보뉴클레오시드 유사체, 또는 데옥시리보뉴클레오시드 유사체이고;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수이고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- k1 및 k2는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 저미널 뉴클레오시드에 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있거나, 또는 R은 부재할 수 있으며, 어떤 구체예에서, 예를 들어, 제 1 가닥의 5' R 리보뉴클레오시드는 제 2 가닥의 3' R 리보뉴클레오시드와 결합할 수 있고; 그리고
- V, S, R 및 W 중 하나 이상은 하나 이상의 봉쇄형 핵산(LNA) 모노머를 포함한다.
본 발명은 하기 식 IVd의 화합물을 제공한다:
Rk4-Qp-(Dm)-Zn-Rk3 식 IVd
상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- Z 및 Q는 어떤 뉴클레오시드, 리보뉴클레오시드, 데옥시리보뉴클레오시드, 뉴클레오시드 유사체, 리보뉴클레오시드 유사체, 또는 데옥시리보뉴클레오시드 유사체이고;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
- k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 저미널 뉴클레오시드에 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있거나, 또는 R은 부재할 수 있으며, 어떤 구체예에서, 예를 들어, 제 1 가닥의 5' R 리보뉴클레오시드는 제 2 가닥의 3' R 리보뉴클레오시드와 결합할 수 있고; 그리고
- R, Z, D 및 Q 중 하나 이상은 하나 이상의 봉쇄형 핵산(LNA) 모노머를 포함한다.
본 발명은 하기 식 IIa의 화합물의 제조 방법을 제공하며,
Figure 112009060567771-PCT00005
(상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- V, W, Z 및 Q는 어떤 뉴클레오시드이고;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
- k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 저미널 뉴클레오시드에 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있거나, 또는 R은 부재할 수 있다)
상기 방법은 식 Rk-Vn-(Sm)-Wp-Rk의 화합물에 따른 제 1 올리고머와 식 Rk-Qp -(Dm)-Zn-Rk의 화합물에 따른 제 2 올리고머를 약 0.5-1.0 내지 약 1.0-0.5의 몰비로 혼합하는 단계, 및 상기 제 1 및 제 2 올리고머를 아닐링하여 이중-가닥 핵산을 형성하는 단계를 포함한다.
본 발명은 하기 식의 화합물을 제공한다:
Figure 112009060567771-PCT00006
상기 식에서,
- ELNA는 CpG 또는 CpG 모티프이며, 여기서 CpG 또는 CpG 모티프를 이루는 뉴클레오시드, C, G 중 하나 이상은 LNA이고;
- FLNA는 CpG 또는 CpG 모티프이며, 여기서 CpG 또는 CpG 모티프를 이루는 뉴클레오시드, C, G 중 하나 이상은 LNA이고;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수이고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
- k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있다.
또한, 본 발명은 하기 식 중 어느 하나의 화합물을 제공한다:
Figure 112009060567771-PCT00007
상기 식에서,
- ELNA는 CpG 또는 CpG 모티프이며, 여기서 CpG 또는 CpG 모티프를 이루는 뉴클레오시드, C, G 중 하나 이상은 LNA이고;
- FLNA는 CpG 또는 CpG 모티프이며, 여기서 CpG 또는 CpG 모티프를 이루는 뉴클레오시드, C, G 중 하나 이상은 LNA이고;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수이고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
- k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있다.
본 발명의 어떤 양태에 따라서,
- ELNA는 SEQ ID NO:23이고,
- FLNA는 SEQ ID NO:24이다.
본 발명은 하기 식 중 어느 하나의 화합물을 제공한다:
Figure 112009060567771-PCT00008
상기 식에서,
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수이고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
- k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있다.
본 발명은 하기 식 중 어느 하나의 화합물을 제공한다:
Figure 112009060567771-PCT00009
상기 식에서,
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수이고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
- k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있다.
본 발명은 하기 식 VIe의 화합물의 제조 방법(A)을 제공하며,
Figure 112009060567771-PCT00010
(상기 식에서,
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수이고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
- k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있다)
상기 방법은 하기 식 VIi
Figure 112009060567771-PCT00011
에 따른 제 1 올리고머와 하기 식 VIj
Figure 112009060567771-PCT00012
에 따른 제 2 올리고머를 약 0.5:1.0 내지 약 1.0:0.5의 몰비로 혼합하는 단계, 및 상기 제 1 및 제 2 올리고머를 아닐링하여 이중-가닥 핵산을 형성하는 단계를 포함한다.
본 발명은 하기 식 VIf의 화합물의 제조 방법(B)을 제공하며,
Figure 112009060567771-PCT00013
(상기 식에서,
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수이고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
- k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있다)
상기 방법은 하기 식 VIk
Figure 112009060567771-PCT00014
의 화합물에 따른 제 1 올리고머와 하기 식 VIl
Figure 112009060567771-PCT00015
의 화합물에 따른 제 2 올리고머를 약 0.5:1.0 내지 약 1.0:0.5의 몰비로 혼합하는 단계, 및 상기 제 1 및 제 2 올리고머를 아닐링하여 이중-가닥 핵산을 형성하는 단계를 포함한다.
본 발명은 하기 식 VIg의 화합물의 제조 방법(C)을 제공하며,
Figure 112009060567771-PCT00016
(상기 식에서,
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수이고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
- k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있다)
상기 방법은 하기 식 VIm
Figure 112009060567771-PCT00017
의 화합물에 따른 제 1 올리고머와 하기 식 VIn
Figure 112009060567771-PCT00018
의 화합물에 따른 제 2 올리고머를 약 0.5:1.0 내지 약 1.0:0.5의 몰비로 혼합하는 단계, 및 상기 제 1 및 제 2 올리고머를 아닐링하여 이중-가닥 핵산을 형성하는 단계를 포함한다.
본 발명은 하기 식 VIh의 화합물의 제조 방법(D)을 제공하며,
Figure 112009060567771-PCT00019
(상기 식에서,
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수이고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
- k는 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있다)
상기 방법은 하기 식 VIo
Figure 112009060567771-PCT00020
의 화합물에 따른 제 1 올리고머와 하기 식 VIp
Figure 112009060567771-PCT00021
의 화합물에 따른 제 2 올리고머를 약 0.5:1.0 내지 약 1.0:0.5의 몰비로 혼합하는 단계, 및 상기 제 1 및 제 2 올리고머를 아닐링하여 이중-가닥 핵산을 형성하는 단계를 포함한다.
또한, 본 발명은 하기 식 IIIa에 따른 화합물을 제공한다:
Figure 112009060567771-PCT00022
또한, 본 발명은 식 IIIa에 따른 화합물의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은 각기 SEQ ID NO:1과 SEQ ID NO:2의 올리고머를 조합하는 단계, 및 올리고머들을 아닐링하여 식 IIIa의 이중-가닥 화합물을 제공하는 단계를 포함한다.
또한, 본 발명은 하기 식에 따른 화합물을 제공한다:
Figure 112009060567771-PCT00023
또한, 본 발명은 식 Va, Vb, 및 Vc에 따른 화합물의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은 SEQ ID NO:3과 SEQ ID NO:4, 또는 SEQ ID NO:5와 SEQ ID NO:6, 또는 SEQ ID NO:7과 SEQ ID NO:8에 따른 올리고머를 조합하는 단계, 및 올리고머들을 아닐링하여 식 Va, Vb, 및 Vc로 각기 나타낸 이중-가닥 핵산 화합물을 생성하는 단계를 포함한다.
Figure 112009060567771-PCT00024
또한, 본 발명은 3' 미결합 단부(unpaired end)를 가진 이중-가닥 올리고머를 제공한다. 또한, 본 발명은 3' 미결합 단부를 가진 이중-가닥 올리고머의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은 SEQ ID NO:9와 SEQ ID NO:10, 또는 SEQ ID NO:11과 SEQ ID NO:12, 또는 SEQ ID NO:11과 SEQ ID NO:25에 따른 올리고머를 조합하는 단계, 및 올리고머들을 아닐링하여 식 Vd 및 Ve로 각기 나타낸 이중-가닥 핵산 화합물을 생성하는 단계를 포함한다.
Figure 112009060567771-PCT00025
또한, 본 발명은 CpG 모티프를 포함하는 이중-가닥 올리고머를 제공한다. 또한, 본 발명은 SEQ ID NO:13과 SEQ ID NO:14, 또는 SEQ ID NO:15와 SEQ ID NO:16, 또는 SEQ ID NO:17과 SEQ ID NO:18, 또는 SEQ ID NO:19와 SEQ ID NO:20, 또는 SEQ ID NO:21과 SEQ ID NO:22에 따른 올리고머를 조합하는 단계, 및 올리고머들을 아닐링하여 식 VIg, VIh, VIi, VIj, 및 VIk에 따른 dsRNA 화합물을 생성하는 단계를 포함하는, 이중-가닥 올리고머의 제조 방법을 제공한다.
Figure 112009060567771-PCT00026
상기 설명된 본 발명의 화합물은 하나 이상의 LNA를 포함하는 CpG 모티프를 함유한다. 이들 LNA 함유 핵산은 CpG-관련 활성을 보유하면서 증가된 안정성의 특성을 나타낸다. LNA은 단일-가닥 및 이중-가닥 핵산과 핵염기 특이적 듀플렉스 및 트리플렉스를 형성할 수 있다. 이들 복합체는 통상의 핵산으로 형성된 대응하는 복합체보다 높은 열안정성을 나타낸다.
본 발명의 어떤 양태에 따라서, 식 VIa 내지 식 VId, 식 VIIa 내지 식 VIIh, 또는 식 VIIIa 내지 식 VIIIh 중 어느 하나로서 정의된 화합물에서,
- ELNA는 SEQ ID NO:23이고,
- FLNA는 SEQ ID NO:24이다.
본 발명의 어떤 양태에 따라서, 식 II, 식 IIa 내지 식 IIe, 식 IVa 내지 식 IVd, 식 VIa 내지 식 VId, 식 VIe 내지 식 VIh, 식 VIi 내지 식 VIp, 식 VIIa 내지 식 VIIh, 식 VIIIa 내지 식 VIIIh 중 어느 하나로서 정의된 화합물에서, 상기 정의된 화합물에서 S는 이노신이고, D는 시토신이다.
본 발명의 어떤 양태에 따라, 식 II, 식 IIa 내지 식 IIe, 식 III, 식 IIIa 내지 식 IIId, 식 IVa 내지 식 IVd, 식 Va 내지 식 Vc, 식 VIa 내지 식 VId, 식 VIe 내지 식 VIh, 식 VIi 내지 식 VIp, 식 VIIa 내지 식 VIIh, 식 VIIIa 내지 식 VIIIh 중 어느 것으로서 상기 정의된 화합물은 폴리리신, 폴리아르기닌, 폴리오르니틴을 포함하여, 폴리양이온성 폴리펩티드를 더 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 정의된 화합물(식 II, 식 IIa 내지 식 IIe, 식 III, 식 IIIa 내지 식 IIId, 식 IVa 내지 식 IVd, 식 Va 내지 식 Vc, 식 VIa 내지 식 VId, 식 VIe 내지 식 VIh, 식 VIi 내지 식 VIp, 식 VIIa 내지 식 VIIh, 식 VIIIa 내지 식 VIIIh)과 면역원, 예를 들어 HspE7을 포함하는 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 이 조성물의 제약학적 허용량을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 대상을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 양태에 따라서, 면역원에 대한 대상의 면역반응을 증진시키는 방법이 제공되며, 상기 방법은 식 II, 식 IIa 내지 식 IIe, 식 III, 식 IIIa 내지 식 IIId, 식 IVa 내지 식 IVd, 식 Va 내지 식 Vc, 식 VIa 내지 식 VId, 식 VIe 내지 식 VIh, 식 VIi 내지 식 VIp, 식 VIIa 내지 식 VIIh, 식 VIIIa 내지 식 VIIIh 중 어느 하나로서 상기 정의된 화합물과 면역원을 포함하는 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함한다. 면역원은 죽은 전-유기체, 단백질, 펩티드, 융합 단백질, 융합 펩티드, 재조합 단백질 또는 재조합 펩티드일 수 있다. 면역원은 HspE7일 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따라서, 1 내지 500개 이노신, 시토신 또는 이노신과 시토신의 조합 리보뉴클레오티드 및 1 내지 10개 봉쇄형 핵산 잔기를 포함하는 제 1 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머; 및 1 내지 500개 이노신, 시토신 또는 이노신과 시토신의 조합 리보뉴클레오티드 및 1 내지 10개 봉쇄형 핵산 잔기를 포함하는 제 2 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머를 포함하는 화합물이 제공되며; 여기서 제 1 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머와 제 2 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머는 수소 결합하여 이중-가닥 핵산을 형성하고, 이중-가닥 핵산은 이중-가닥 폴리IC 영역 및 봉쇄형 핵산 잔기를 포함하는 이중-가닥 영역을 포함한다.
또한, 본 발명은 1 내지 500개 이노신, 시토신 또는 이노신과 시토신의 조합 리보뉴클레오티드 및 SEQ ID NO:23에 따른 핵산 서열을 포함하는 제 1 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머; 및 1 내지 500개 이노신, 시토신 또는 이노신과 시토신의 조합 리보뉴클레오티드 및 SEQ ID NO:24에 따른 핵산 서열을 포함하는 제 2 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머를 포함하는 화합물을 제공하며; 여기서 제 1 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머와 제 2 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머는 수소 결합하여 이중-가닥 핵산을 형성하고, 이중-가닥 핵산은 이중-가닥 폴리IC 영역 및 봉쇄형 핵산 잔기를 포함하는 이중-가닥 영역을 포함한다.
또한, 본 발명은 1 내지 500개 이노신, 시토신 또는 이노신과 시토신의 조합 리보뉴클레오티드 및 SEQ ID NO:23에 따른 핵산 서열을 포함하는 제 1 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머; 및 1 내지 500개 이노신, 시토신 또는 이노신과 시토신의 조합 리보뉴클레오티드 및 SEQ ID NO:24에 따른 핵산 서열을 포함하는 제 2 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머를 포함하는 애쥬번트 또는 애쥬번트 조성물을 제공하며; 여기서 제 1 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머와 제 2 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머는 수소 결합하여 이중-가닥 핵산을 형성하고, 이중-가닥 핵산은 이중-가닥 폴리IC 영역 및 봉쇄형 핵산 잔기를 포함하는 이중-가닥 영역을 포함한다.
또한, 본 발명은 1 내지 500개 이노신, 시토신 또는 이노신과 시토신의 조합 리보뉴클레오티드 및 1 내지 10개 봉쇄형 핵산 잔기를 포함하는 제 1 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머; 및 1 내지 500개 이노신, 시토신 또는 이노신과 시토신의 조합 리보뉴클레오티드 및 1 내지 10개 봉쇄형 핵산 잔기를 포함하는 제 2 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머를 포함하는 애쥬번트 또는 애쥬번트 조성물을 제공하며; 여기서 제 1 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머와 제 2 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머는 수소 결합하여 이중-가닥 핵산을 형성하고, 이중-가닥 핵산은 이중-가닥 폴리IC 영역 및 봉쇄형 핵산 잔기를 포함하는 이중-가닥 영역을 포함한다.
추가로, 본 발명은 TLR3 및 TLR9 수용체에 대한 이중-수용체 아고니스트 활성을 갖는 애쥬번트 또는 애쥬번트 조성물을 제공하며, 이 애쥬번트 또는 애쥬번트 조성물은 1 내지 500개 이노신, 시토신 또는 이노신과 시토신의 조합 리보뉴클레오티드 및 SEQ ID NO:23에 따른 핵산 서열을 포함하는 제 1 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머; 및 1 내지 500개 이노신, 시토신 또는 이노신과 시토신의 조합 리보뉴클레오티드 및 SEQ ID NO:24에 따른 핵산 서열을 포함하는 제 2 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머를 포함하고; 여기서 제 1 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머와 제 2 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머는 수소 결합하여 이중-가닥 핵산을 형성하고, 이중-가닥 핵산은 이중-가닥 폴리IC 영역 및 봉쇄형 핵산 잔기를 포함하는 이중-가닥 영역을 포함한다.
본 발명의 개요가 반드시 본 발명의 모든 특징을 설명하는 것은 아니다. 본 발명의 다른 양태 및 특징들은 하기 본 발명의 상세한 구체예의 설명을 검토할 때 당업자에게 분명해질 것이다.
도면의 간단한 설명
본 발명의 이들 특징 및 다른 특징들이 첨부된 도면을 참조하여 하기 설명으로부터 더욱 분명해질 것이다.
도 1은 본 발명의 구체예에 따른, 식 Vd 및 Ve에 따른 이중-가닥 핵산 화합물을 나타낸다.
도 2는 본 발명의 구체예에 따른, 식 VIg 내지 식 VIk에 따른 이중-가닥 핵산을 나타낸다.
도 3은 본 발명의 구체예에 따른, 폴리A 및 폴리U 영역을 포함하는 이중-가닥 핵산을 나타낸다.
상세한 설명
본 발명은 면역자극제에 관한 것이며, 이중-가닥 봉쇄형 핵산(LNA) 조성물을 제공한다. 핵산은 dsRNA를 포함할 수 있다.
용어의 예를 포함하여 본 명세서에서 예의 사용은 단지 예시의 목적이며, 본원 발명의 구체예의 범위 및 의미를 제한하려는 의도는 아니다.
본 발명은 폴리I 및 폴리C, 또는 폴리A 및 폴리U 올리고뉴클레오티드 폴리머를 포함하는 조성물을 제공하며, 이때 각 올리고뉴클레오티드 폴리머는 적어도 하나의 봉쇄형 핵산(LNA) 잔기를 포함한다. dsRNA는 약 등몰량의 폴리I와 폴리C 올리고뉴클레오티드 폴리머(폴리I:C), 또는 약 등몰량의 폴리A와 폴리U 올리고뉴클레오티드 폴리머(폴리A:U)로 이루어질 수 있다.
또한, 본 발명은, I(이노신)와 C(시토신) 뉴클레오시드의 혼합물을 각각 포함하는, 한 쌍의 올리고뉴클레오티드 폴리머를 포함하는 조성물을 제공하며, 올리고뉴클레오티드 폴리머 쌍에서 I 및 C 뉴클레오시드는 올리고뉴클레오티드 폴리머 쌍이 혼성화되어 이중-가닥 분자가 형성될 수 있도록 배열된다.
또한, 본 발명은 폴리I 및 폴리C, 또는 폴리A 및 폴리U 올리고뉴클레오티드 폴리머를 포함하는 조성물을 제공하며, 이때 각 올리고뉴클레오티드 폴리머는 적어도 하나의 CpG 모티프 및 적어도 하나의 봉쇄형 핵산(LNA) 잔기를 포함한다. CpG 모티프는 적어도 하나의 LNA 잔기를 포함할 수 있다. dsRNA는 약 등몰량의 폴리I와 폴리C 올리고뉴클레오티드 폴리머(폴리I:C), 또는 약 등몰량의 폴리A와 폴리U 올리고뉴클레오티드 폴리머(폴리A:U)로 이루어질 수 있다.
또한, 본 발명은 적어도 하나의 CpG 모티프와 적어도 하나의 LNA 잔기, 및 I와 C 잔기의 조합, 또는 A와 U 잔기의 조합을 포함하는 올리고뉴클레오티드 폴리머를 포함하는 조성물을 제공한다. 올리고뉴클레오티드 폴리머는 혼성화되어 이중-가닥 분자, 예를 들어 이중-가닥 RNA(dsRNA)를 형성할 수 있다. 예를 들어, CpG 모티프 및 하나 이상의 LNA를 포함하는 dsRNA는 하나 이상의 LNA를 포함하는 폴리I:C 화합물일 수 있다. dsRNA는 약 등몰량의 폴리I와 폴리C 올리고뉴클레오티드 폴리머(폴리I:C) 또는 약 등몰량의 폴리A와 폴리U 올리고뉴클레오티드 폴리머(폴리A:U)로 이루어질 수 있다. 또 다른 예에서, 올리고뉴클레오티드 폴리머는 하나 이상의 LNA를 포함하는 CpG 모티프, 및 I와 C 뉴클레오시드의 혼합물, 또는 A와 U 뉴클레오시드의 혼합물을 포함할 수 있으며, 올리고뉴클레오티드 쌍에서 각 올리고뉴클레오티드의 CpG 모티프 및 I 및 C 뉴클레오시드는 혼성화되어 이중-가닥 분자가 형성될 수 있도록 배열된다.
적어도 하나의 CpG 모티프 및 하나 이상의 LNA를 포함하는 본 발명의 dsRNA는 다양한 목적을 위해 사용될 수 있으며, 예를 들어, 제한되는 것은 아니지만 애쥬번트, 면역자극제, 또는 치료제로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 적어도 하나의 CpG 모티프 및 하나 이상의 LNA를 포함하는 dsRNA는 하나 이상의 LNA를 포함하는 폴리I:C 화합물일 수 있다.
면역자극제는 면역반응을 개시하거나, 또는 면역반응의 개시에 촉매 효과를 제공하는 화합물 또는 조성물이다. 면역반응은 오로지 선천성(또는 비-후천성) 면역반응일 수 있으며, 선천성 면역반응은, 예를 들어 사이토카인(예를 들어, 인터페론, 인터류킨, 콜로니 자극인자 등)의 생성 및 분비를 유도하고, 이것은 차례로 포식세포로 하여금 이동하여 외부 면역원을 비특이적으로 섭취하고, 후천성 면역시스템에 의해 인식되는 면역원을 제시하도록 자극한다. 또는 달리, 면역반응은 특정 면역원(항원-제시 세포라고도 하는 포식세포에 의해 제시되는 것들과 같은)의 존재에 반응하는 후천성 면역반응일 수 있다.
용어 "한"의 사용은 단수와 복수를 모두 포함한다.
애쥬번트는 스스로는 특이적인 면역원성 효과를 갖지 않지만, 면역시스템을 자극하여 특이적 면역원, 또는 면역원 그룹에 대한 반응을 증진시키는 면역자극제이다. 선천성 또는 후천성 면역시스템의 반응을 유도하는 면역원의 능력을 면역원의 "생물학적 활성"이라고 한다. 애쥬번트는 면역원의 생물학적 활성을 매개, 증대 또는 자극할 수 있다. 어떤 예에서, 면역원은 애쥬번트의 부재하에서 아주 적거나 무시할만한 생물학적 활성을 가질 수 있다.
면역원의 생물학적 활성은 본 분야에 공지된 몇몇 분석법 중 어느 것에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, 항원-특이적 CD8-양성 T 림프구의 유도는 ELISPOT 분석법을 사용하여 정량될 수 있다(Asai et al., 2000 Clin. Diag. Lab. Immunol. 7: 145-154). 다른 사이토카인에 대해서는 ELISPOT 분석법의 다른 변형이 사용될 수 있으며, 예를 들어 Kalyzhny et al., 2005 Methods Mol. Biol. 302:15-31; Ott et al., J. Immunol. Methods 2004 February 15; 285(2):223-35; Forsthuber et al., Science 271:1728-1730을 참조한다. 면역원에 대한 반응을 모니터링하는데 유용할 수 있는 다른 T-세포 분석법은 세포내 사이토카인 유세포분석, 증식 분석법, 항체 마이크로어레이 등을 포함한다. 예를 들어, Nagorsen et al., 2004 Expert. Opin. Biol. Ther. 4:1677-84, 또는 Handbook of Experimental Immunology, Vols. 1-IV, D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds., 1986 Blackwell Scientific Publications를 참조한다. 인터페론-α 및 인터페론-β는 인터페론 ELISA 키트를 사용하여 정량될 수 있다(Kim et al., 2004 Nature Biotechnology 22:321-325). 다중 분석법, 예를 들어 비드-기반 시스템(Luminex, Panomics 등)에 의해서는 복수의 사이토카인의 동시 정량이 가능하다. 사이토카인의 예는 IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12(p70), IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, IFNα, IFNβ, IFNγ, GM-CSF, TNFα, G-CSF, MIP-1α, MIP-1β, MCP-1, EOTAXIN, RANTES, FGF-베이직, VEGF 등을 포함한다. 명확히 하기 위하여, 용어 "사이토카인"은 림포카인, 인터류킨, 또는 케모카인과 같은 대안의 명칭을 포함한다.
용어 "대상" 및 "환자"는 상호 교환하여 사용될 수 있다. "대상"은 동물 또는 포유류를 말하며, 제한되는 것은 아니지만 마우스, 래트, 개, 고양이, 돼지 또는 영장류, 제한되는 것은 아니지만 원숭이, 침팬지 또는 사람을 포함한다. 대상은 특정 면역원 또는 면역원 그룹과 관련하여 면역학적 비경험자일 수 있거나, 또는 대상은 특정 면역원 또는 면역원 그룹에 이전에 노출된 적이 있을 수 있다. 선행 노출은, 예를 들어 특정 면역원 또는 면역원 그룹을 사용한 계획적 면역화, 특정 면역원 또는 면역원 그룹을 포함하는 감염원에의 노출, 또는 2차 면역원 또는 면역원 그룹에 대한 면역반응을 허용하는 1차 면역원 또는 면역원 그룹에의 교차-반응 노출의 결과였을 수 있다. 2차 면역원 또는 면역원 그룹은 1차 면역원 또는 면역원 그룹과 유사하거나, 동일하거나, 또는 상이할 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "LNA-변형 올리고뉴클레오티드"는 하나 이상의 LNA 모노머로 완전히 또는 부분적으로 변형된 어떤 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 따라서, LNA-변형 올리고뉴클레오티드는 전체적으로 LNA 모노머로 이루어질 수도 있고, 또는 LNA-변형 올리고뉴클레오티드는 하나의 LNA 모노머를 포함할 수도 있다.
용어 "DNA 모노머"는 질소성 염기에 결합된 데옥시리보스 당을 말하고, 용어 "RNA 모노머"는 질소성 염기에 결합된 리보스 당을 말한다. 본 발명의 여러 구체예에 따른 조성물을 포함할 수 있는 DNA 모노머의 예는 제한되는 것은 아니지만 데옥시아데노신, 데옥시구아노신, 데옥시티미딘, 데옥시우리딘, 데옥시시티딘, 데옥시이노신 등을 포함한다. 본 발명의 여러 구체예에 따른 조성물을 포함할 수 있는 RNA 모노머의 예는 제한되는 것은 아니지만 아데노신, 구아노신, 5-메틸우리딘, 우리딘, 시티딘, 이노신 등을 포함한다. 본 발명의 여러 구체예에 따른 다른 DNA 및 RNA 모노머는 본 분야에 공지된 대로 다른 질소성 염기를 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "LNA 모노머"는 전형적으로 US 6,268,490, US 6,794, 499, US 7,034,133(각각 본원에 참고자료로 포함된다)에 설명된 2'-4' 환형 연결을 가진 뉴클레오시드를 말한다. 2-환형 뉴클레오시드(하기 참조)는 올리고뉴클레오티드에 입체구조적 제약을 제공할 수 있으며, 미변형 올리고뉴클레오티드에 비하여 다양한 혼성화 또는 안정성 프로파일을 제공할 수 있다.
용어 "뉴클레오시드"는 당 고리의 탄소-1을 통해 질소성 염기에 결합된 리보스 또는 데옥시리보스 분자를 말한다. 질소성 염기의 예는 아데닌, 구아닌, 6-티오구아닌, 하이포크산틴, 크산틴과 같은 퓨린, 및 시토신, 티민 및 우라실과 같은 피리미딘을 포함한다. 퓨린 뉴클레오시드의 예는 아데노신(A), 구아노신(G), 이노신(I), 2'-O-메틸-이노신, 2'-O-메틸-아데노신, 2'-O-메틸-구아닌, 2-클로로데옥시아데노신, 7-할로-7-데아자-아데노신, 7-할로-7-데아자-구아닌, 7-프로핀-7-데아자아데노신, 7-프로핀-7-데아자-구아닌, 2-아미노-아데노신, 7-데아자이노신, 7-티아-7,9-디데아자이노신, 포르미신 B, 8-아자이노신, 9-데아자이노신, 알로퓨리놀 리보시드, 8-브로모-이노신, 8-클로로이노신, 7-데아자-2-데옥시-크산토신, 7-데아자-8-아자-아데노신, 7-데아자-8-아자-구아노신, 7-데아자-8-아자-데옥시아데노신, 7-데아자-8-아자-데옥시구아노신, 7-데아자-아데노신, 7-데아자-구아노신, 7-데아자-데옥시아데노신, 7-데아자-데옥시구아노신, 8-아미노-아데노신, 8-아미노-데옥시아데노신, 8-아미노-구아노신, 8-아미노-데옥시구아노신, 3-데아자-데옥시아데노신, 3-데아자-아데노신, 6-티오-데옥시구아노신, N6-이소펜테닐아데노신, 1-메틸아데노신, 1-메틸슈도우리딘, 1-메틸구아노신, 1-메틸이노신, 2,2-디메틸구아노신, 2-메틸아데노신, 2-메틸구아노신, N6-메틸아데노신, 7-메틸구아노신, 2-메틸티오N6-이소펜테닐아데노신, N-((9-베타-D-리보푸라노실-2-메틸티오퓨린-6-일)카르바모일)트레오닌, N-((9-베타-D-리보퓨라노실퓨린-6-일)N-메틸카르바모일)트레오닌, N-((9-베타-D-리보푸라노실퓨린-6-일)카르바모일)트레오닌, 와이부토신, 와이부톡소신 등, 및 본원에 참고자료로 포함되는 Freier 등의 문헌(1997 Nucleic Acids Res. 25:4429-4443)에 개시된 다른 퓨린 뉴클레오시드들을 포함한다.
피리미딘 뉴클레오시드의 예는 데옥시우리딘(dU), 우리딘(U), 시티딘(C), 데옥시시티딘(dC), 티미딘(T), 데옥시티미딘(dT), 5-플루오로-우라실, 5-브로모-우라실, 2'-O-메틸-우리딘, 2'-O-메틸-시티딘, 5-요도-우라실, 5-메톡시-에톡시-메틸-우라실, 5-프로피닐-데옥시우리딘, 슈도이소시티딘, 5-아자시티딘, 5-(1-프로피닐)시티딘, 2'-데옥시슈도우리딘, 4-티오-데옥시티미딘, 4-티오-데옥시우리딘, 4-아세틸시티딘, 5-(카르복시히드록시메틸)우리딘, 2'-O-메틸시티딘, 5-카르복시메틸아미노메틸우리딘, 디히드로우리딘, 2'-O-메틸슈도우리딘, 3-메틸시티딘, 5-메틸시티딘, 5-메틸아미노메틸우리딘, 5-메톡시아미노메틸-2-티오우리딘, 5-메톡시카르보닐메틸-2-티오우리딘, 5-메톡시카르보닐메틸우리딘, 5-메톡시우리딘, 우리딘-5-옥시아세트산-메틸에스테르, 우리딘-5-옥시아세트산, 슈도우리딘, 2-티오시티딘, 5-메틸-2-티오우리딘, 2-티오우리딘, 4-티오우리딘, 5-메틸우리딘, 2'-O-메틸-5-메틸우리딘, 2'-O-메틸우리딘, 3-(3-아미노-3-카르복시-프로필)우리딘 등, 및 Freier 등의 문헌(1997 Nucleic Acids Res. 25:4429-4443)에 개시된 다른 치환된 피리미딘들을 포함한다.
또한, 퓨린 또는 피리미딘 뉴클레오시드는 표준 방법을 이용한 올리고뉴클레오티드 합성에 사용되는 포스포라미다이트 유도체를 포함한다.
또한, 용어 "뉴클레오시드"는 하기 식 I에 따른 2-환형 뉴클레오시드 유사체를 포함하며, 이것은 예를 들어 US 6,268,490(본원에 참고자료로 포함된다)에 설명된다:
Figure 112009060567771-PCT00027
상기 식에서,
- B는 어떤 질소성 염기, 예를 들어 피리미딘 또는 퓨린 핵산 염기, 또는 그 유사체일 수 있고;
- X 및 Y는 동일할 수도 상이할 수도 있으며, 어떤 뉴클레오시드 간 연결기일 수 있다.
이러한 2-환형 뉴클레오시드 유사체는 달리 말하자면 "봉쇄형 핵산 모노머" 또는 "봉쇄형 뉴클레오시드 모노머" 또는 "LNA 모노머" 또는 "LNA 잔기"라고 할 수 있다. LNA 모노머를 포함하는 핵산 폴리머의 합성 및 중합 방법은, 예를 들어 WO 99/14226, WO 00/56746, WO 00/56748, WO 01/25248, WO 0148190, WO 02/28875, WO 03/006475, WO 03/09547, WO 2004/083430, US 6,268,490, US 6,794,499, US 7,034, 133(각각 본원에 참고자료로 포함된다)에 설명된다.
WO 01/048190(본원에 참고자료로 포함된다)에 개시된 뉴클레오시드 유사체의 다른 예는 비-LNA 2-환형 뉴클레오시드를 포함하며, 예를 들어, 제한되는 것은 아니지만 하기의 것들이 있다:
- 추가의 C-3',C-5'-에탄 브릿지를 가진 바이시클로[3.3.0]뉴클레오시드;
- 추가의 C-1',C-6'- 또는 C-6',C-4'-메탄 브릿지를 가진 바이카르보시클로 [3.1.0]뉴클레오시드;
- 미변형 뉴클레오시드를 가진 다이머로서 합성된 추가의 C-2',C-3'-디옥살란 고리를 함유하는 바이시클로[3.3.0]- 및 [4.3.0]-뉴클레오시드, 여기서 추가의 고리는 천연 포스포르디에스테르 연결을 대신하는 뉴클레오시드 간 연결의 일부이다;
- 아미드- 및 술폰아미드-타입 뉴클레오시드 간 연결의 일부로서 C-2',C-3'-메탄 브릿지를 가진 바이시클로[3.1.0]뉴클레오시드를 함유하는 다이머;
- 포름아세탈 뉴클레오시드 간 연결을 통해 트라이머의 중간에 편입된 바이시클로[3.3.0]-글루코오스 유도체화된 뉴클레오시드 유사체;
- 2개의 5원 고리와 1개의 3원 고리가 백본을 구성하는 트라이시클로-DNA;
- 1,5-안히드로헥시톨 핵산; 및
- 추가의 C-2',C-3'-연결된 6원 및 5원 고리를 가진 바이시클릭[4.3.0]- 및 [3.3.0]-뉴클레오시드.
또한, "뉴클레오시드"는 치환된 리보스 당(2-환형 또는 다른 방식의)을 가진 뉴클레오시드를 포함한다. 치환된 리보스 당의 예는, 예를 들어 본원에 참고자료로 포함되는 Freier의 문헌(1997 Nucleic Acids Res. 25:4429-4443)에 설명된다.
"뉴클레오티드"는 당 고리의 탄소-5를 통해 결합된 뉴클레오시드 간 연결기를 가진 뉴클레오시드를 말한다. 올리고뉴클레오티드 "백본"은, 예를 들어, 자연 발생 핵산에서, 뉴클레오티드 집단의 중합에 의해서 형성된, 연속하는 당의 탄소-5 및 탄소-3을 통해 공유 결합된 리보스/포스페이트가 교대하는 사슬을 말한다. 이것은 본 분야에 공지된 합성화학 방법을 수반할 수 있다. 예를 들어, Gait, pp. 1-22; Atkinson et al., pp. 35-81; Sproat et al., pp. 83-115; 및 Wu et al., pp. 135-151, in Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, M.J. Gait, ed., 1984, IRL Press, Oxford; 또는 Molecular Cloning: a Laboratory Manual 3rd edition. Sambrook and Russell. CSHL Press, Cold Spring Harbour, New York을 참조한다(모두 본원에 참고자료로 포함된다).
또한, 중합은 효소에 의해 일어날 수 있다. 또한, LNA 뉴클레오시드 트리포스페이트가 본 발명의 어떤 구체예에 따른 핵산 화합물 또는 조성물의 효소 중합의 기질로서 사용될 수 있다. LNA 뉴클레오시드는 PCR 반응 또는 프라이머 연장 분석법에서 폴리머라제, 예를 들어 DNA 또는 RNA 폴리머라제에 의해 연장된 핵산 폴리머에 편입될 수 있다. 적합한 폴리머라제의 예는 제한되는 것은 아니지만 Phusion™ High Fidelity DNA 폴리머라제(Finnzymes), 또는 9°Nm™ DNA 폴리머라제를 포함한다. LNA 뉴클레오시드의 효소 편입 방법은, 예를 들어 Veedu R.N. et al., 2007 Nucleic Acids Symposium 51:29-30 및 Veedu R.N. et al., 2007. ChemBioChem 8:490-492 및 Veedu et al., 2007 Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids 26:1207-1210에 설명되며, 이들 각각은 본원에 참고자료로 포함된다.
뉴클레오시드 간 연결기는 올리고뉴클레오티드 백본의 일부로서 2개의 뉴클레오시드를 연결할 수 있는 기를 말한다. 뉴클레오시드 간 연결기의 예는 Praseuth 등의 문헌(Biochimica et Biophysica Acta 1489:181-206, 본원에 참고자료로 포함된다)에 설명되며, 포스포디에스테르(PO4-), 포스포로티오에이트(PO3S-), 포스포라미데이트(N3'-P5')(PO3NH) 및 메틸포스포네이트(PO3CH3), 펩티드 연결("PNA") 등을 포함한다.
용어 "뉴클레오티드 폴리머", "올리고뉴클레오티드", "올리고뉴클레오티드 폴리머", "올리고뉴클레오티드", "핵산", "올리고머" 또는 "핵산 폴리머"는 상호 교환하여 사용되며, 적어도 2개의 뉴클레오티드를 포함하는 폴리머를 말한다. 뉴클레오티드 폴리머는 단일 종의 DNA 모노머, RNA 모노머를 포함할 수도 있고, 또는 둘 이상의 종의 DNA 모노머, RNA 모노머를 어떤 조합으로 포함할 수도 있다. 핵산은 단일-가닥 또는 이중-가닥일 수 있으며, 예를 들어, 이중-가닥 핵산 분자는 상보성 염기의 염기 쌍을 통해 혼성화된 2개의 단일-가닥 핵산을 포함할 수 있다.
"폴리I" 올리고뉴클레오티드는 대부분 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 또는 이들의 조합을 포함한다. 이노신-유사체 뉴클레오시드는, 예를 들어 7-데아자이노신, 2'-O-메틸-이노신, 7-티아-7,9-디데아자이노신, 포르미신 B, 8-아자이노신, 9-데아자이노신, 알로퓨리놀 리보시드, 8-브로모이노신, 8-클로로이노신 등을 포함한다.
"폴리C" 올리고뉴클레오티드는 대부분 시티딘, 시티딘-유사체 뉴클레오시드, 또는 이들의 조합을 포함한다. 시티딘-유사체 뉴클레오시드는, 예를 들어 5-메틸시티딘, 2'-O-메틸-시티딘, 5-(1-프로피닐)시티딘 등을 포함한다.
"폴리A" 올리고뉴클레오티드는 대부분 아데노신, 아데노신-유사체 뉴클레오시드, 또는 이들의 조합을 포함한다. 아데노신-유사체 뉴클레오시드는, 예를 들어 2-아미노-아데노신, 2'-O-메틸-아데노신, 2-아미노-데옥시아데노신, 7-데아자-2'-아데노신, 7-데아자-2'-데옥시아데노신 등을 포함한다.
"폴리U" 올리고뉴클레오티드는 대부분 우리딘, 우리딘-유사체 뉴클레오시드, 또는 이들의 조합을 포함한다. 우리딘-유사체 뉴클레오시드는, 예를 들어 데옥시우리딘(dU), 시티딘(C), 데옥시시티딘(dC), 티미딘(T), 데옥시티미딘(dT), 5-플루오로우라실, 5-브로모우라실, 2'-O-메틸-우리딘, 5-요도우라실, 5-메틸-에톡시-메틸-우라실, 5-프로피닐-데옥시우리딘 등을 포함한다.
"CpG 모티프" 또는 "CpG 요소" 또는 "CpG 자리"는 핵산에서 구아닌 뉴클레오시드에 인접하여 있는 시토신 뉴클레오시드를 포함하는 뉴클레오티드 모티프를 말한다. 뉴클레오시드 C 및 G는 종래의 5'-3' 뉴클레오시드 연결 형태로 이 둘을 함께 연결하는 포스페이트에 의해 분리된다. CpG 모티프는 일반적으로 XnCpGXn으로서 설명될 수 있으며, 여기서 X는 어떤 뉴클레오시드이고, n은 1 내지 약 500의 어떤 수, 또는 그 사이의 어떤 수, 예를 들어 약 1 내지 약 300 또는 그 사이의 어떤 수, 약 1 내지 약 250 또는 그 사이의 어떤 수, 약 1 내지 약 200 또는 그 사이의 어떤 수, 약 1 내지 약 150 또는 그 사이의 어떤 수, 또는 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 250, 275, 400, 425, 250, 475, 500 또는 그 사이의 어떤 수이다. 본원에 설명된 대로, CpG 모티프 중의 뉴클레오시드, C, G 중 하나 이상은 LNA이다.
dsRNA를 포함하여, 이중-가닥 핵산 분자의 가닥들은 "왓슨-크릭" 염기쌍이라고도 하는 수소 결합을 통해서 질서 정연한 방식으로 상호작용한다. 또한, 후그스틴 염기쌍을 포함하는 변형 염기쌍이 비-규칙적 수소 결합을 통해서 발생할 수 있다. 어떤 열역학적, 이온 또는 pH 조건 하에서, 특히 리보핵산과 함께 3중 나선이 발생할 수 있다. 이들 및 다른 변형 수소 결합 또는 염기쌍은 본 분야에 공지되어 있으며, 예를 들어 Lehninger-Principles of Biochemistry, 3rd edition(Nelson and Cox, eds. Worth Publishers, New York)(본원에 참고자료로 포함된다)에서 찾아볼 수 있다.
본 발명의 여러 구체예에 따른 폴리I 및 폴리C, 또는 폴리A 및 폴리U 올리고뉴클레오티드는 적합한 온도, 이온 및 pH 조건 하에서 왓슨-크릭 수소 결합을 통해 이중-가닥 복합체를 형성할 수 있다. 이러한 복합체 형성에 적합한 특정 온도, 이온 및 pH 조건을 당업자는 알아낼 수 있다 - 이러한 조건을 알아내기 위한 방법, 계산, 기술 등의 예는, 예를 들어 본원에 참고자료로 포함되는 Freier의 문헌(1997 Nucleic Acids Res. 25:4429-4443)에서 찾아볼 수 있다. 이러한 이중-가닥 복합체의 형성은 달리 말하자면 "혼성화"라고 할 수 있다.
적어도 하나의 LNA를 함유하는 본 발명의 여러 구체예에 따른 이중-가닥 RNA (dsRNA) 분자는 일반적으로 하기 식 II로 설명된다:
Figure 112009060567771-PCT00028
식 II는 제 1 가닥 Vn-(Sm)-Wp 및 제 2 가닥 Zn-(Dm)-Qp를 가진 이중-가닥 RNA 분자를 나타내며, 여기서 상보성 뉴클레오시드 간의 결합은 단일 수평선으로 표시된다. 제 1 가닥은 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시되고, 제 2 가닥은 제 1 가닥과 역-평행 방향(좌측에서 우측으로 읽었을 때 3'-5'로 나타남)으로 표시된다.
상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- V, W, Z 및 Q는 어떤 뉴클레오시드, 리보뉴클레오시드, 데옥시리보뉴클레오시드, 뉴클레오시드 유사체, 리보뉴클레오시드 유사체, 또는 데옥시리보뉴클레오시드 유사체이고;
- m은 1 내지 500, 또는 1 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고; 그리고
- V, S, W, Z, D 및 Q 중 하나 이상은 하나 이상의 봉쇄형 핵산(LNA) 모노머를 포함한다.
적어도 하나의 LNA를 함유하고, 또한 R을 포함하는 본 발명의 여러 구체예에 따른 이중-가닥 RNA(dsRNA) 분자는 일반적으로 하기 식 IIa로 설명된다:
Figure 112009060567771-PCT00029
식 IIa는 5', 3', 또는 5'와 3'의 오버행 염기를 가지며, 제 1 가닥 Rk1-Vn-(Sm)-Wp-Rk2 및 제 2 가닥 Rk3-Zn-(Dm)-Qp-Rk4를 가진 이중-가닥 RNA 분자를 나타내며, 여기서 상보성 뉴클레오시드 간의 결합은 단일 수평선으로 표시된다. 제 1 가닥은 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시되고, 제 2 가닥은 제 1 가닥과 역-평행 방향(좌측에서 우측으로 읽었을 때 3'-5'로 나타남)으로 표시된다.
상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- V, W, Z 및 Q는 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있으며, 여기서 V와 Z가 결합할 수 있고, W와 Q가 결합할 수 있으며;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
- k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 저미널 뉴클레오시드에 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있거나, 또는 R은 부재할 수 있으며, 어떤 구체예에서, 예를 들어, 제 1 가닥의 5' R 리보뉴클레오시드는 제 2 가닥의 3' R 리보뉴클레오시드와 결합할 수 있고; 그리고
- R, V, S, W, Z, D 및 Q 중 하나 이상은 하나 이상의 LNA 모노머를 포함한다.
폴리 I:C를 포함하는 핵산
또한, 본 발명은 하기 정의된 S 및 D가 I 및 C인 식 II의 dsRNA 화합물을 제공한다(식 IIb):
Figure 112009060567771-PCT00030
식 IIb는 제 1 가닥 Vn-(Im)-Wp 및 제 2 가닥 Zn-(Cm)-Qp를 가진 이중-가닥 RNA 분자를 나타내며, 여기서 상보성 뉴클레오시드 간의 결합은 단일 수평선으로 표시된다. 제 1 가닥은 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시되고, 제 2 가닥은 제 1 가닥과 역-평행 방향(좌측에서 우측으로 읽었을 때 3'-5'로 나타남)으로 표시된다.
상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- V, W, Z 및 Q는 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 뉴클레오시드일 수 있으며, 여기서 V와 Z가 결합할 수 있고, W와 Q가 결합할 수 있으며;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- I는 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 V, W 및 저미널 이노신 또는 이노신-유사체 뉴클레오시드에 연결된 이노신, 또는 이노신-유사체 뉴클레오시드이고;
- C는 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 V, W 및 저미널 시토신 또는 어떤 시토신-유사체 뉴클레오시드에 연결된 시토신, 또는 어떤 시토신-유사체 뉴클레오시드이고; 그리고
- V, I, W, Z, C 및 Q 중 하나 이상은 하나 이상의 LNA 모노머를 포함한다.
본 발명의 다른 dsRNA 분자는 하기 정의된 S 및 D가 I 및 C이고, 또한 R을 포함하는 식 II의 화합물을 포함한다(식 IIc):
Figure 112009060567771-PCT00031
식 IIc는 5', 3', 또는 5'와 3'의 오버행 염기를 가지며, 제 1 가닥 Rk-Vn-(Im)-Wp-Rk 및 제 2 가닥 Rk-Zn-(Cm)-Qp-Rk를 가진 이중-가닥 RNA 분자를 나타내며, 여기서 상보성 뉴클레오시드 간의 결합은 단일 수평선으로 표시된다. 제 1 가닥은 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시되고, 제 2 가닥은 제 1 가닥과 역-평행 방향(좌측에서 우측으로 읽었을 때 3'-5'로 나타남)으로 표시된다.
상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- V, W, Z 및 Q는 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있으며, 여기서 V와 Z가 결합할 수 있고, W와 Q가 결합할 수 있으며;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- I는 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 V, W 및 저미널 이노신 또는 이노신-유사체에 연결된 이노신, 또는 어떤 이노신-유사체 뉴클레오시드일 수 있고;
- C는 뉴클레오시드 간 연결기에 의해 V, W 및 저미널 시토신 또는 어떤 시토신 유사체에 연결된 시토신, 또는 어떤 시토신-유사체 리보뉴클레오시드일 수 있고;
- k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 저미널 뉴클레오시드에 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있거나, 또는 R은 부재할 수 있으며, 어떤 구체예에서, 예를 들어, 제 1 가닥의 5' R 리보뉴클레오시드는 제 2 가닥의 3' R 리보뉴클레오시드와 결합할 수 있고; 그리고
- R, V, I, W, Z, C 및 Q 중 하나 이상은 하나 이상의 LNA 모노머를 포함한다.
적어도 하나의 LNA를 함유하는 이중-가닥 RNA(dsRNA) 분자는 하기 정의된 S 및 D가 A 및 U인 식 II의 화합물을 포함하며, 이것은 일반적으로 하기 식 IId로 설명된다(식 IId):
Figure 112009060567771-PCT00032
식 IId는 제 1 가닥 Vn-(Am)-Wp 및 제 2 가닥 Zn-(Um)-Qp를 가진 이중-가닥 RNA 분자를 나타내며, 여기서 상보성 뉴클레오시드 간의 결합은 단일 수평선으로 표시된다. 제 1 가닥은 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시되고, 제 2 가닥은 제 1 가닥과 역-평행 방향(좌측에서 우측으로 읽었을 때 3'-5'로 나타남)으로 표시된다.
상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- V, W, Z 및 Q는 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 뉴클레오시드일 수 있으며, 여기서 V와 Z가 결합할 수 있고, W와 Q가 결합할 수 있으며;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- A는 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 V, W 및 저미널 아데노신 또는 아데노신-유사체에 연결된 아데노신, 또는 어떤 아데노신-유사체 뉴클레오시드일 수 있고;
- U는 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 V, W 및 저미널 우리딘 또는 어떤 우리딘-유사체에 연결된 우리딘, 또는 어떤 우리딘-유사체 뉴클레오시드일 수 있고; 그리고
- R, V, A, W, Z, U 및 Q 중 하나 이상은 하나 이상의 LNA 모노머를 포함한다.
본 발명의 다른 dsRNA 분자는 하기 정의된 S 및 D가 A 및 U이고, 또한 R을 포함하는 식 II의 화합물을 포함하며, 여기서 dsRNA의 적어도 하나의 뉴클레오시드는 LNA이다(식 IIe):
Figure 112009060567771-PCT00033
식 IIe는 5', 3', 또는 5'와 3'의 오버행 염기를 가지며, 제 1 가닥 Rk1-Vn-(Am)-Wp-Rk2 및 제 2 가닥 Rk4-Zn-(Um)-Qp-Rk3를 가진 이중-가닥 RNA 분자를 나타내며, 여기서 상보성 뉴클레오시드 간의 결합은 단일 수평선으로 표시된다. 제 1 가닥은 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시되고, 제 2 가닥은 제 1 가닥과 역-평행 방향(좌측에서 우측으로 읽었을 때 3'-5'로 나타남)으로 표시된다.
상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- V, W, Z 및 Q는 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 뉴클레오시드일 수 있으며, 여기서 V와 Z가 결합할 수 있고, W와 Q가 결합할 수 있으며;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- A는 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 V, W 및 저미널 아데노신 또는 아데노신-유사체에 연결된 아데노신, 또는 어떤 아데노신-유사체 뉴클레오시드일 수 있고;
- U는 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 V, W 및 저미널 우리딘 또는 어떤 우리딘-유사체에 연결된 우리딘, 또는 어떤 우리딘-유사체 뉴클레오시드일 수 있고;
- k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 저미널 뉴클레오시드에 연결된 어떤 뉴클레오시드일 수 있거나, 또는 R은 부재할 수 있으며, 어떤 구체예에서, 예를 들어, 제 1 가닥의 5' R 뉴클레오시드는 제 2 가닥의 3' R 뉴클레오시드와 결합할 수 있고; 그리고
- R, V, A, W, Z, U 및 Q 중 하나 이상은 하나 이상의 LNA 모노머를 포함한다.
식 II, IIa, IIb, IIc, IId, IIe에 따른 화합물은 R, V, W, Z, Q 중 하나 이상에 하나 이상의 LNA 분자를 포함할 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 LNA 분자는 식 II, IIa, IIb, IIc, IId, 또는 IIe의 5' 단부에서 V, Q, 또는 V와 Q 내에 위치될 수 있거나, 하나 이상의 LNA 분자는 식 II, IIa, IIb, IIc, IId, 또는 IIe의 3' 단부에서 Z, W, 또는 Z와 W 내에 위치될 수 있거나, 또는 하나 이상의 LNA 분자는 식 II, IIa, IIb, IIc, IId, 또는 IIe의 5' 및 3' 단부에서 V, W, Z, Q, 또는 이들의 조합 내에 위치될 수 있다.
또한, 본 발명은 식 II, IIa, IIb, IIc, IId, 또는 IIe에 따른 화합물을 제공하며, 여기서 V 및 W가 LNA 뉴클레오시드(각기 VLNA, WLNA)이고, Z 및 Q가 LNA 뉴클레오시드(각기 ZLNA, QLNA)이고, I가 이노신이고, C가 시티딘이고, n 및 p가 2이고, m이 상기 정의된 바와 같이, 약 1 내지 약 500 또는 그 사이의 어떤 수일 수 있고, 예를 들어 m이 약 10 내지 약 50 또는 그 사이의 어떤 수이고, 예를 들어 m이 약 1, 2, 5, 7, 10, 12, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 32, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80 90, 100 또는 그 사이의 어떤 수이고, 예를 들어 m이 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25일 수 있고, 그 사이의 뉴클레오시드 간 연결기가 포스포디에스테르이다. 이 화합물의 비제한적 예가 하기 식 III으로 표시된다:
Figure 112009060567771-PCT00034
본 발명의 dsRNA의 비제한적 예는 하기 식 IIIa, IIIb, IIIc, 또는 IIId 중 어느 하나로 표시될 수 있으며, 여기서 G는 구아노신 뉴클레오시드이고, C는 시티딘 뉴클레오시드이고, m은 22이다:
Figure 112009060567771-PCT00035
적어도 하나의 LNA를 포함하는 본 발명의 여러 구체예에 따른 단일-가닥 핵산 분자, 또는 단일-가닥 RNA(ssRNA) 분자는 일반적으로 하기 식 IVa로 설명된다:
Vn-(Sm)-Wp 식 IVa
식 VIa는 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시된 구조 Vn-(Sm)-Wp를 가진 단일-가닥 핵산 분자를 나타낸다.
상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- V 및 W는 어떤 뉴클레오시드, 리보뉴클레오시드, 데옥시리보뉴클레오시드, 뉴클레오시드 유사체, 리보뉴클레오시드 유사체, 또는 데옥시리보뉴클레오시드 유사체이고;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고; 그리고
- V, S 및 W 중 하나 이상은 하나 이상의 봉쇄형 핵산(LNA) 모노머를 포함한다.
적어도 하나의 LNA를 포함하는 본 발명의 여러 구체예에 따른 단일-가닥 핵산 분자, 또는 단일-가닥 RNA(ssRNA) 분자는 일반적으로 하기 식 IVb로 설명된다:
Qp-(Dm)-Zn 식 IVb
식 VIb는 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시된 제 1 가닥 Qp-(Dm)-Zn을 가진 단일-가닥 RNA 분자를 나타낸다.
상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- Z 및 Q는 어떤 뉴클레오시드, 리보뉴클레오시드, 데옥시리보뉴클레오시드, 뉴클레오시드 유사체, 리보뉴클레오시드 유사체, 또는 데옥시리보뉴클레오시드 유사체이고;
- m은 1 내지 500의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고; 그리고
- Z, D 및 Q 중 하나 이상은 하나 이상의 봉쇄형 핵산(LNA) 모노머를 포함한다.
본 발명의 어떤 구체예에서, 조성물은 식 IVa 또는 식 IVb, 또는 식 IVa와 식 IVb에 따른 단일-가닥 RNA 분자를 다양한 몰비로 포함할 수 있다. 예를 들어, 어떤 구체예에서, 식 IVa 및 식 IVb에 따른 단일-가닥 RNA 분자가 약 등몰비로 조합될 수 있다. 식 IVa 및 식 IVb에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 IVa 및 식 IVb에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 IVa에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 IVb에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 IVa 또는 식 IVb에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 IVa 또는 식 IVb에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 IVb에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 IVa에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 IVa 또는 식 IVb에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 IVa 또는 식 IVb에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
적어도 하나의 LNA를 포함하는 본 발명의 여러 구체예에 따른 단일-가닥 핵산 분자, 또는 단일-가닥 RNA(ssRNA) 분자는 일반적으로 하기 식 IVc로 설명된다:
Rk1-Vn-(Sm)-Wp-Rk2 식 IVc
식 VIc는 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시된 구조 Rk1-Vn-(Sm)-Wp-Rk2를 가진 단일-가닥 핵산 분자를 나타낸다.
상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- V 및 W는 어떤 뉴클레오시드, 리보뉴클레오시드, 데옥시리보뉴클레오시드, 뉴클레오시드 유사체, 리보뉴클레오시드 유사체, 또는 데옥시리보뉴클레오시드 유사체이고;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- k1 및 k2는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 저미널 뉴클레오시드에 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있거나, 또는 R은 부재할 수 있으며, 어떤 구체예에서, 예를 들어, 제 1 가닥의 5' R 리보뉴클레오시드는 제 2 가닥의 3' R 리보뉴클레오시드와 결합할 수 있고; 그리고
- V, S, R 및 W 중 하나 이상은 하나 이상의 봉쇄형 핵산(LNA) 모노머를 포함한다.
적어도 하나의 LNA를 포함하는 본 발명의 여러 구체예에 따른 단일-가닥 핵산 분자, 또는 단일-가닥 RNA(ssRNA) 분자는 일반적으로 하기 식 IVd로 설명된다:
Rk3-Qp-(Dm)-Zn-Rk4 식 IVd
식 VId는 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시된 구조 Rk3-Qp-(Dm)-Zn-Rk4를 가진 단일-가닥 핵산 분자를 나타낸다.
상기 식에서,
- n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
- Z 및 Q는 어떤 뉴클레오시드, 리보뉴클레오시드, 데옥시리보뉴클레오시드, 뉴클레오시드 유사체, 리보뉴클레오시드 유사체, 또는 데옥시리보뉴클레오시드 유사체이고;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
- k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 저미널 뉴클레오시드에 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있거나, 또는 R은 부재할 수 있으며, 어떤 구체예에서, 예를 들어, 제 1 가닥의 5' R 리보뉴클레오시드는 제 2 가닥의 3' R 리보뉴클레오시드와 결합할 수 있고; 그리고
- R, Z, D 및 Q 중 하나 이상은 하나 이상의 봉쇄형 핵산(LNA) 모노머를 포함한다.
본 발명의 어떤 구체예에서, 조성물은 식 IVc 또는 식 IVd, 또는 식 IVc와 식 IVd에 따른 단일-가닥 RNA 분자를 다양한 몰비로 포함할 수 있다. 예를 들어, 어떤 구체예에서, 식 IVc 및 식 IVd에 따른 단일-가닥 RNA 분자가 약 등몰비로 조합될 수 있다. 식 IVc 및 식 IVd에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 IVc 및 식 IVd에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 IVc에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 IVd에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 IVc 또는 식 IVd에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 IVc 또는 식 IVd에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 IVd에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 IVc에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 IVc 또는 식 IVd에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 IVc 또는 식 IVd에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
본 발명의 단일-가닥 핵산의 비제한적 예는 하기 식 IVe, IVf, IVg, IVh, IVi, 또는 IVj(5'-3' 방향으로 나타냄, 좌측에서 우측) 중 어느 하나로 나타낼 수 있으며, 여기서 I는 2'-O-메틸-이노신 뉴클레오시드이고, C는 2'-O-메틸-시토신 뉴클레오시드이고, G는 2'-O-메틸-구아노신 뉴클레오시드이고, T는 2'-O-메틸-티미딘 뉴클레오시드이고, A는 2'-O-메틸-아데노신 뉴클레오시드이고, U는 2'-O-메틸-우리딘 뉴클레오시드이고, TLNA는 LNA 리보스를 가진 티미딘 뉴클레오시드이고, GLNA는 LNA 리보스를 가진 구아노신 뉴클레오시드이고, CLNA는 LNA 리보스를 가진 시토신 뉴클레오시드이고, ALNA는 LNA 리보스를 가진 아데노신 뉴클레오시드이고, m은 15이다:
Figure 112009060567771-PCT00036
본 발명의 어떤 구체예에서, 조성물은 식 IVe 또는 식 IVf, 또는 식 IVe와 식 IVf에 따른 단일-가닥 RNA 분자를 다양한 몰비로 포함할 수 있다. 예를 들어, 어떤 구체예에서, 식 IVe 및 식 IVf에 따른 단일-가닥 RNA 분자가 약 등몰비로 조합될 수 있다. 식 IVe 및 식 IVf에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 IVe 및 식 IVf에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 IVe에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 IVf에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 IVe 또는 식 IVf에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 IVe 또는 식 IVf에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 IVf에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 IVe에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 IVe 또는 식 IVf에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 IVe 또는 식 IVf에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
본 발명의 어떤 구체예에서, 조성물은 식 IVg 또는 식 IVh, 또는 식 IVg와 식 IVh에 따른 단일-가닥 RNA 분자를 다양한 몰비로 포함할 수 있다. 예를 들어, 어떤 구체예에서, 식 IVg 및 식 IVh에 따른 단일-가닥 RNA 분자가 약 등몰비로 조합될 수 있다. 식 IVg 및 식 IVh에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 IVg 및 식 IVh에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 IVg에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 IVh에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 IVg 또는 식 IVh에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 IVg 또는 식 IVh에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 IVh에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 IVg에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 IVg 또는 식 IVh에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 IVg 또는 식 IVh에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
본 발명의 어떤 구체예에서, 조성물은 식 IVi 또는 식 IVj, 또는 식 IVi와 식 IVj에 따른 단일-가닥 RNA 분자를 다양한 몰비로 포함할 수 있다. 예를 들어, 어떤 구체예에서, 식 IVi 및 식 IVj에 따른 단일-가닥 RNA 분자가 약 등몰비로 조합될 수 있다. 식 IVi 및 식 IVj에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 IVi 및 식 IVj에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 IVi에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 IVj에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 IVi 또는 식 IVj에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 IVi 또는 식 IVj에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 IVj에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 IVi에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 IVi 또는 식 IVj에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 IVi 또는 식 IVj에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
어떤 구체예에서, 단일-가닥 핵산 쌍들, 예를 들어 식 IVe와 IVf, 또는 식 IVg와 IVh, 또는 식 IVi와 IVj는 어떤 열역학적, 이온 또는 pH 조건 하에서 혼성화 및/또는 쇄상체화(concatemerize)될 수 있다.
CpG 모티프를 포함하는 핵산
적어도 하나의 LNA를 포함하는 CpG 모티프를 포함하는 본 발명의 여러 구체예에 따른 이중-가닥 핵산 분자는 일반적으로 하기 식 VIa-VId로 설명된다:
Figure 112009060567771-PCT00037
식 VIa는 제 1 가닥 Rk1-(Sm)-(ELNA)-(Dm)-Rk2 및 제 2 가닥 Rk3-(Dm)-(FLNA)-(Sm)-Rk4를 가진 이중-가닥 핵산 분자를 나타내며, 여기서 상보성 뉴클레오시드 간의 결합은 단일 수평선으로 표시된다. 제 1 가닥은 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시되고, 제 2 가닥은 제 1 가닥과 역-평행 방향(좌측에서 우측으로 읽었을 때 3'-5'로 나타남)으로 표시된다.
Figure 112009060567771-PCT00038
식 VIb는 제 1 가닥 Rk1-(Dm)-(ELNA)-(Sm)-Rk2 및 제 2 가닥 Rk3-(Sm)-(FLNA)-(Dm)-Rk4를 가진 이중-가닥 핵산 분자를 나타내며, 여기서 상보성 뉴클레오시드 간의 결합은 단일 수평선으로 표시된다. 제 1 가닥은 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시되고, 제 2 가닥은 제 1 가닥과 역-평행 방향(좌측에서 우측으로 읽었을 때 3'-5'로 나타남)으로 표시된다.
Figure 112009060567771-PCT00039
식 VIc는 제 1 가닥 Rk1-(Sm)-(ELNA)-(Sm)-Rk2 및 제 2 가닥 Rk3-(Dm)-(FLNA)-(Dm)-Rk4를 가진 이중-가닥 핵산 분자를 나타내며, 여기서 상보성 뉴클레오시드 간의 결합은 단일 수평선으로 표시된다. 제 1 가닥은 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시되고, 제 2 가닥은 제 1 가닥과 역-평행 방향(좌측에서 우측으로 읽었을 때 3'-5'로 나타남)으로 표시된다.
Figure 112009060567771-PCT00040
식 VId는 제 1 가닥 Rk1-(Dm)-(ELNA)-(Dm)-Rk2 및 제 2 가닥 Rk3-(Sm)-(FLNA)-(Sm)-Rk4를 가진 이중-가닥 핵산 분자를 나타내며, 여기서 상보성 뉴클레오시드 간의 결합은 단일 수평선으로 표시된다. 제 1 가닥은 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시되고, 제 2 가닥은 제 1 가닥과 역-평행 방향(좌측에서 우측으로 읽었을 때 3'-5'로 나타남)으로 표시된다.
식 VIa-d 각각에서,
- ELNA는 CpG 또는 CpG 모티프이며, 여기서 CpG 또는 CpG 모티프를 이루는 뉴클레오시드, C, G 중 하나 이상은 LNA이고;
- FLNA는 CpG 또는 CpG 모티프이며, 여기서 CpG 또는 CpG 모티프를 이루는 뉴클레오시드, C, G 중 하나 이상은 LNA이고;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수이고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
- k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있다.
어떤 식으로도 제한되지 않는 본 발명의 어떤 구체예에서, CpG 모티프는 하기 2개의 LNA 뉴클레오시드 헥사머 서열을 포함할 수 있다:
Figure 112009060567771-PCT00041
이러한 서열의 비제한적 예는 일반적으로 하기 식 VIe 내지 VIh로 설명된다:
Figure 112009060567771-PCT00042
식 VIe는 제 1 가닥
Figure 112009060567771-PCT00043
및 제 2 가닥
Figure 112009060567771-PCT00044
을 가진 이중-가닥 핵산 분자를 나타내며, 여기서 상보성 뉴클레오시드 간의 결합은 단일 수평선으로 표시된다. 제 1 가닥은 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시되고, 제 2 가닥은 제 1 가닥과 역-평행 방향(좌측에서 우측으로 읽었을 때 3'-5'로 나타남)으로 표시된다.
Figure 112009060567771-PCT00045
식 VIf는 제 1 가닥
Figure 112009060567771-PCT00046
및 제 2 가닥
Figure 112009060567771-PCT00047
을 가진 이중-가닥 핵산 분자를 나타내며, 여기서 상보성 뉴클레오시드 간의 결합은 단일 수평선으로 표시된다. 제 1 가닥은 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시되고, 제 2 가닥은 제 1 가닥과 역-평행 방향(좌측에서 우측으로 읽었을 때 3'-5'로 나타남)으로 표시된다.
Figure 112009060567771-PCT00048
식 VIg는 제 1 가닥
Figure 112009060567771-PCT00049
및 제 2 가닥
Figure 112009060567771-PCT00050
을 가진 이중-가닥 핵산 분자를 나타내며, 여기서 상보성 뉴클레오시드 간의 결합은 단일 수평선으로 표시된다. 제 1 가닥은 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시되고, 제 2 가닥은 제 1 가닥과 역-평행 방향(좌측에서 우측으로 읽었을 때 3'-5'로 나타남)으로 표시된다.
Figure 112009060567771-PCT00051
식 VIh는 제 1 가닥
Figure 112009060567771-PCT00052
및 제 2 가닥
Figure 112009060567771-PCT00053
을 가진 이중-가닥 핵산 분자를 나타내며, 여기서 상보성 뉴클레오시드 간의 결합은 단일 수평선으로 표시된다. 제 1 가닥은 5'에서 3' 방향(좌측에서 우측)으로 표시되고, 제 2 가닥은 제 1 가닥과 역-평행 방향(좌측에서 우측으로 읽었을 때 3'-5'로 나타남)으로 표시된다.
식 VIe-VIh 및 VIi-VIp 각각에서,
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수이고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
- k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있다.
쇄상체 조합
본 발명의 어떤 구체예에서, 적어도 하나의 LNA 뉴클레오시드를 포함하는 적어도 하나의 CpG 모티프를 포함하는 이중-가닥 핵산은 "스틱키 단부"(sticky-end)를 형성하는 미결합(unpaired) 뉴클레오시드를 포함할 수 있으며, 쇄상체를 형성할 수 있다. 식 VIIa-VIIh(5'-3' 방향으로 하기 나타냄, 좌측에서 우측으로 읽음)는 서열 상보성에 따라서 혼성화되어 이중-가닥 핵산, 예를 들어 식 VIa 내지 VIh로서 상기 설명된 것들을 형성하는 단일-가닥 핵산을 나타낸다. 또한, "스틱키 단부"를 포함하는 이중-가닥 핵산은 본 발명의 어떤 구체예에 따르면 쇄상체 폴리머의 모노머로서 언급될 수도 있다. 아래에 식 VIIa 내지 VIIh를 나타내며, 이어서 식 VIIa 내지 VIIh를 포함하는 핵산 조합의 예들을 나타낸다.
Figure 112009060567771-PCT00054
식 VIIa-VIIh 각각에서,
- ELNA는 CpG 또는 CpG 모티프이며, 여기서 CpG 또는 CpG 모티프를 이루는 뉴클레오시드, C, G 중 하나 이상은 LNA이고;
- FLNA는 CpG 또는 CpG 모티프이며, 여기서 CpG 또는 CpG 모티프를 이루는 뉴클레오시드, C, G 중 하나 이상은 LNA이고;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
- k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있다.
본 발명의 어떤 구체예에서, 조성물은 식 VIIa 내지 식 VIIh의 하나 이상의 핵산, 또는 식 VIIa 내지 VIIh의 적어도 2개 이상의 핵산의 조합에 따른 단일-가닥 RNA 분자를 다양한 몰비로 포함할 수 있다. 예를 들어, 어떤 구체예에서, 식 VIIa 및 VIIb에 따른 단일-가닥 RNA 분자가 약 등몰비로 조합될 수 있다. 식 VIIc, 식 VIId, 식 VIIe, 식 VIIf, 식 VIIg, 또는 식 VIIh에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 VIIc, 식 VIId, 식 VIIe, 식 VIIf, 식 VIIg, 또는 식 VIIh에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 VIIa에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 VIIb에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 VIIa 또는 식 VIIb에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 VIIa 또는 식 VIIb에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 VIIc에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 VIId에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 VIIc 또는 식 VIId에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 VIIc 또는 식 VIId에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 VIIe에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 VIIf에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 VIIe 또는 식 VIIf에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 VIIe 또는 식 VIIf에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 VIIg에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 VIIh에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 VIIg 또는 식 VIIh에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 VIIg 또는 식 VIIh에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 VIIg에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 VIId에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 VIIg 또는 식 VIId에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 VIIg 또는 식 VIId에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 VIIa에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 VIIf에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 VIIa 또는 식 VIIf에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 VIIa 또는 식 VIIf에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 VIIe에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 VIIb에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 VIIe 또는 식 VIIb에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 VIIe 또는 식 VIIb에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 VIIc에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 VIIh에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 VIIc 또는 식 VIIh에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 VIIc 또는 식 VIIh에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
예시를 위한 염기쌍 배열이 아래에 예시된다. 본 발명의 여러 구체예에 따른 이중-가닥 핵산의 다른 쌍 및 배열도당업자에게 분명할 것이다. 아래 예시된 예시를 위한 각 쌍에서, 본 분야의 관례에 따라 좌측에서 우측으로 읽었을 때, 제 1 가닥은 5'-3' 방향으로 제공되고, 제 2 가닥은 3'-5' 방향으로 제공된다.
Figure 112009060567771-PCT00055
식 VIIa-VIIh의 또 다른 쌍들, 여기서 k1 ,2,3,4 = 0:
Figure 112009060567771-PCT00056
이러한 모노머들은 쇄상체를 이루어 더 긴 또는 환상의 이중-가닥 핵산 폴리머를 형성할 수 있다.
본 발명의 어떤 구체예에서, 식 VIIa-h에 따른 단일-가닥 핵산 분자는 "블런트 단부"(blunt-end) 이중-가닥 핵산 분자를 형성하는 염기쌍일 수 있다. 예시를 위한 염기쌍 배열이 아래에 예시된다.
Figure 112009060567771-PCT00057
상기 예에서, k1 ,2,3,4는 1 내지 10의 정수이고(0은 아니다), R은 상기 설명된 어떤 뉴클레오시드 또는 뉴클레오시드 그룹일 수 있으며, 여기서 제 1 가닥 및 제 2 가닥 각각으로부터 적어도 하나의 뉴클레오시드가 수소-결합 염기쌍을 형성한다.
어떤 구체예에서, 단일-가닥 핵산 쌍들, 예를 들어 식 VIIa와 VIIb, 또는 식 VIIc와 VIId, 또는 식 VIIe와 VIIf, 또는 식 VIIg와 VIIh, 또는 식 VIIg와 VIId, 또는 식 VIIa와 VIIf, 또는 식 VIIe와 VIIb, 또는 식 VIIc와 VIIh는 어떤 열역학적, 이온 또는 pH 조건 하에서 쇄상체를 이룰 수 있다.
본 발명의 어떤 구체예에서, 적어도 하나의 LNA 뉴클레오시드를 포함하는 적어도 하나의 CpG 모티프를 포함하는 이중-가닥 핵산은 "스틱키 단부"를 형성하는 미결합(unpaired) 뉴클레오시드를 포함할 수 있으며, 쇄상체를 형성할 수 있다. 식 VIIIa-VIIIh(5'-3' 방향으로 하기 나타냄, 좌측에서 우측으로 읽음)는, 식 VIIa 내지 VIIh에 대해 상기 설명된 대로, 서열 상보성에 따라서 혼성화되어 이중-가닥 핵산, 예를 들어 식 VIa 내지 VIh로서 상기 설명된 것들을 형성하는 단일-가닥 핵산을 나타낸다. 또한, "스틱키 단부"를 포함하는 이중-가닥 핵산은 본 발명의 어떤 구체예에 따르면 쇄상체 폴리머의 모노머로서 언급될 수도 있다. 아래에 식 VIIIa 내지 VIIIh를 나타내며, 이어서 식 VIIIa 내지 VIIIh를 포함하는 핵산 조합의 예들을 나타낸다.
Figure 112009060567771-PCT00058
식 VIIIa-VIIIh 각각에서,
- ELNA는 CpG 또는 CpG 모티프이며, 여기서 CpG 또는 CpG 모티프를 이루는 뉴클레오시드, C, G 중 하나 이상은 LNA이고;
- FLNA는 CpG 또는 CpG 모티프이며, 여기서 CpG 또는 CpG 모티프를 이루는 뉴클레오시드, C, G 중 하나 이상은 LNA이고;
- m은 1 내지 500, 또는 10 내지 50의 어떤 정수, 또는 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100을 포함하는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
- D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
- k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
- R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있다.
본 발명의 어떤 구체예에서, 조성물은 식 VIIIa 내지 식 VIIIh의 하나 이상의 핵산, 또는 식 VIIIa 내지 VIIIh의 적어도 2개 이상의 핵산의 조합에 따른 단일-가닥 RNA 분자를 다양한 몰비로 포함할 수 있다. 예를 들어, 어떤 구체예에서, 식 VIIIa 및 VIIIb에 따른 단일-가닥 RNA 분자가 약 등몰비로 조합될 수 있다. 식 VIIIc, 식 VIIId, 식 VIIIe, 식 VIIIf, 식 VIIIg, 또는 식 VIIIh에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 VIIIc, 식 VIIId, 식 VIIIe, 식 VIIIf, 식 VIIIg, 또는 식 VIIIh에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 VIIIa에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 VIIIb에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 VIIIa 또는 식 VIIIb에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 VIIIa 또는 식 VIIIb에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 VIIIc에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 VIIId에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 VIIIc 또는 식 VIIId에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 VIIIc 또는 식 VIIId에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 VIIIe에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 VIIIf에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 VIIIe 또는 식 VIIIf에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 VIIIe 또는 식 VIIIf에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 VIIIg에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 VIIIh에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 VIIIg 또는 식 VIIIh에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 VIIIg 또는 식 VIIIh에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 VIIIg에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 VIIId에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 VIIIg 또는 식 VIIId에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 VIIIg 또는 식 VIIId에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 VIIIa에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 VIIIf에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 VIIIa 또는 식 VIIIf에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 VIIIa 또는 식 VIIIf에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 VIIIe에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 VIIIb에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 VIIIe 또는 식 VIIIb에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 VIIIe 또는 식 VIIIb에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
다른 구체예에서, 식 VIIIc에 따른 단일-가닥 RNA 분자는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 초과하는 몰수로, 또는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배를 초과하는 배수로 식 VIIIh에 따른 단일-가닥 RNA 분자와 조성물 중에서 조합될 수 있다. 식 VIIIc 또는 식 VIIIh에 따른 단일-가닥 RNA 분자의 일부 또는 전부가 다른 상보성 단일-가닥 RNA 분자와 혼성화되어 이중-가닥 RNA 분자를 형성할 수도 있고, 또는 식 VIIIc 또는 식 VIIIh에 따른 단일-가닥 RNA 분자 중 어느 것도 이중-가닥 RNA 분자를 형성하지 않을 수 있다.
예시를 위한 염기쌍 배열이 아래에 예시된다. 본 발명의 여러 구체예에 따른 이중-가닥 핵산의 다른 쌍 및 배열도 당업자에게 분명할 것이다. 아래 예시된 예시를 위한 각 쌍에서, 본 분야의 관례에 따라 좌측에서 우측으로 읽었을 때, 제 1 가닥은 5'-3' 방향으로 제공되고, 제 2 가닥은 3'-5' 방향으로 제공된다.
Figure 112009060567771-PCT00059
식 VIIIa-VIIIh의 또 다른 쌍들:
Figure 112009060567771-PCT00060
이러한 모노머들은 쇄상체를 이루어 더 긴 또는 환상의 이중-가닥 핵산 폴리머를 형성할 수 있다.
본 발명의 어떤 구체예에서, 식 VIIIa-h에 따른 단일-가닥 핵산 분자는 "블런트 단부" 이중-가닥 핵산 분자를 형성하는 염기쌍일 수 있다. 예시를 위한 염기쌍 배열이 아래에 예시된다.
Figure 112009060567771-PCT00061
상기 예에서, k1 ,2,3,4는 0 내지 10의 정수일 수 있고, R은 상기 설명된 어떤 뉴클레오시드 또는 뉴클레오시드 그룹일 수 있다. k가 0을 초과하는 어떤 구체예에서, 제 1 가닥 및 제 2 가닥 각각으로부터 R의 적어도 하나의 뉴클레오시드가 수소-결합 염기쌍을 형성한다.
어떤 구체예에서, 단일-가닥 핵산 쌍들, 예를 들어 식 VIIIa와 VIIIb, 또는 식 VIIIc와 VIIId, 또는 식 VIIIe와 VIIIf, 또는 식 VIIIg와 VIIIh, 또는 식 VIIIg와 VIIId, 또는 식 VIIIa와 VIIIf, 또는 식 VIIIe와 VIIIb, 또는 식 VIIIc와 VIIIh는 어떤 열역학적, 이온 또는 pH 조건 하에서 쇄상체를 이룰 수 있다.
본 발명의 여러 구체예에 따른 애쥬번트 또는 애쥬번트 조성물은 본원에 설명된 하나 이상의 핵산 종을 포함한다. 핵산 종은 단일-가닥 또는 이중-가닥일 수 있다. 단일-가닥 종과 이중-가닥 종의 조합이 애쥬번트 또는 애쥬번트 조성물에 존재할 수 있다.
애쥬번트 또는 애쥬번트 조성물은 TLR3 또는 TLR9에 대한 선택적 아고니스트일 수 있다. 본 발명의 어떤 구체예에서, 애쥬번트 또는 애쥬번트 조성물은 TLR3와 TLR9 모두에 대한 아고니스트이다. TLR3와 TLR9를 모두 포함하는 이중-가닥 핵산의 예는 식 VIIa-h 또는 식 VIIIa-h, 또는 식 VIIa-h 및 식 VIIIa-h 중 둘 이상을 포함하는 것들을 포함한다.
본 발명의 어떤 구체예에 따른 이중-가닥 핵산, 예를 들어 식 VIIa-h 또는 식 VIIIa-h 중 둘 이상을 포함하는 것들이 애쥬번트 또는 애쥬번트 조성물에 포함될 수 있으며, 이로써 TLR3와 TLR9 아고니스트 활성을 모두 포함하는 애쥬번트 또는 애쥬번트 조성물이 제공된다. TLR3 및 TLR9 아고니스트 활성은 단일 종의 이중-가닥 핵산에 의해 제공될 수 있다.
IP-10 분석법을 사용하여 TLR-3 아고니스트 활성을 제공하는 애쥬번트 조성물의 능력을 평가할 수 있다. 사람 HT29 세포는 TLR-3 아고니스트에 의한 자극의 결과로서 배양 상청액에 IP-10을 분비한다. 배양 상청액 중의 IP-10은, 예를 들어 ELISA에 의해 정량될 수 있다. 다른 예로서, 말초혈 단핵세포(PBMC)가 TLR-3 아고니스트에 의한 자극의 결과로서 상청액에 사이토카인을 분비한다. 분비된 사이토카인, 예를 들어 인터페론-알파, -베타 및/또는 -감마는, 예를 들어 ELISA에 의해 정량될 수 있다. 다른 예로서, 수지상 세포와 같은 면역 이펙터 세포의 성숙이 평가될 수 있다.
시험관내 분석법을 사용하여 TLR9 아고니스트 활성을 제공하는 애쥬번트 조성물의 능력을 평가할 수 있다. 예를 들어, 이중-가닥 핵산 조성물의 활성은 B-세포 증식 분석법 또는 대식세포나 수지상 세포에 의한 사이토카인 생성에 의해 평가될 수 있다. 이러한 분석법의 예들이, 예를 들어 Jiang W. et al., 2006 Methods Mol. Med. 127:55-70에 설명된다.
애쥬번트 조성물을 포함하는 본 발명의 여러 구체예에 따른 조성물은 약 0.1 ug/kg 내지 약 20 mg/kg의 핵산(대상의 질량을 기준으로)의 용량, 또는 그 사이의 어떤 양, 예를 들어 약 1 ug 내지 약 2000 ug/ml의 핵산 또는 그 사이의 어떤 양, 약 10 ug 내지 약 1000 ug의 핵산 또는 그 사이의 어떤 양, 또는 약 30 ug 내지 약 1000 ug의 핵산 또는 그 사이의 어떤 양으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 약 0.1, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0, 10.0, 15.0, 20.0, 25.0, 30.0, 35.0, 40.0, 50.0, 60.0, 70.0, 80.0, 90.0, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 5000, 10000, 20000 ug의 핵산의 용량, 또는 그 사이의 어떤 양이 사용될 수 있다.
본원에서 사용된 애쥬번트의 "유효량"은 생물학적 활성을 나타내는 면역원과 함께 병용-투여되었을 때 면역자극성 효과를 가지는데 필요한 애쥬번트의 양을 말한다. 면역원은 약 0.1 ug/ml 내지 약 20 mg/ml의 양 또는 그 사이의 어떤 양, 또는 약 1 ug/ml 내지 약 2000 ug/ml 또는 그 사이의 어떤 양으로 존재할 수 있다. 애쥬번트는 약 0.1 ug/ml 내지 약 20 mg/ml의 양 또는 그 사이의 어떤 양, 또는 약 1 ug/ml 내지 약 2000 ug/ml 또는 그 사이의 어떤 양으로 존재할 수 있다. 면역원은 죽은 전-유기체, 단백질, 펩티드, 융합 단백질, 융합 펩티드, 재조합 단백질 또는 재조합 펩티드일 수 있다. 면역원은 HspE7일 수 있다.
본 발명의 여러 구체예에 따른 애쥬번트는, 주로 주사용수, 링거 락테이트, 등장성 식염수 등과 같은 수성 비히클 중에서 다양한 제약학적으로 허용되는 부형제 중 어느 것과 함께 조제될 수 있다. 제약학적으로 허용되는 부형제는, 예를 들어 염, 버퍼, 항산화제, 복합체화제, 장성조절제, 냉동보호제, 동결건조보호제, 현탁제, 유화제, 항균제, 보존제, 킬레이트화제, 결합제, 계면활성제, 습윤제, 비-수성 비히클, 예를 들어 고정유, 또는 지속 또는 제어 방출을 위한 폴리머를 포함한다. 예를 들어, Berge 등의 문헌(1977. J. Pharm, Sci. 66:1-19), 또는 Remington - The Science and Practice of Pharmacy, 21st edition. Gennaro et al., editors. Lippincott Williams & Wilkins Philadelphia(모두 본원에 참고자료로 포함된다)를 참조한다.
또한, 부형제는 카르복시메틸셀룰로오스 또는 폴리양이온성 폴리머일 수 있다. 폴리양이온성 폴리머의 예는, 제한되는 것은 아니지만 폴리-L-리신, 폴리아르기닌, 폴리오르니틴, 또는 대부분 양이온성 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 이러한 부형제의 분자량, 농도 및 제조 방법은, 예를 들어 US 4,349,538에서 찾아볼 수 있다(본원에 참고자료로 포함된다).
본 발명의 여러 구체예에 따른 애쥬번트를 포함하는 조성물은 몇 가지 경로 중 어느 것에 의해 투여될 수 있으며, 예를 들어 피하 주사, 복강내 주사, 근육내 주사, 정맥내 주사, 표피 또는 경피 주사, 점막 투여, 경우, 비강, 직장, 또는 질 경로를 포함한다. 예를 들어, Remington - The Science and Practice of Pharmacy, 21st edition. Gennaro et al., editors. Lippincott Williams & Wilkins Philadelphia를 참조한다. 담체 제제는 투여 경로에 따라서 선택되거나 변경될 수 있다.
본 발명의 여러 구체예에 따른 조성물은 단위 제형으로, 또는 사용 시점에서 제제화 또는 희석하는데 적합한 벌크 형태로 제공될 수 있다.
본 발명의 여러 구체예에 따른 조성물은 단일-용량으로, 또는 경시적으로 투여되는 몇 차례의 용량으로 대상에게 투여될 수 있다. 투약 일정은, 예를 들어 대상의 상태, 나이, 성별, 체중, 투여 경로, 제제, 또는 일반적인 건강에 의존할 수 있다. 투약 일정은 대상에서의 흡수, 분포, 대사, 분비 및 독성의 측정치로부터 계산될 수 있거나, 또는 사람 대상에서의 사용을 위하여, 래트나 마우스와 같은 실험 동물에 대한 측정치로부터 추정될 수 있다. 투약 및 치료 섭생의 최적화는, 예를 들어 Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 11th edition. 2006 L.L. Brunton, editor. McGraw-Hill, New York 또는 Remington - The Science and Practice of Pharmacy, 21st edition. Gennaro et al., editors. Lippincott Williams & Wilkins Philadelphia에 논의된다.
본 발명과 관련하여, 본원에서 사용된 용어 "치료", "치료하는", "치료적 사용" 또는 "치료 섭생"은 상호 교환하여 사용될 수 있으며, 본 발명의 조성물의 예방적, 완화적, 및 치료적 투여 양식을 포괄하여 의미하며, 염증-기반 병원균, 암, 감염성 질환, 알레르기 반응, 과다면역반응에 의해 야기된 질환 상태, 이상, 증상, 징후, 또는 장애, 또는 치료될 다른 질환 또는 장애를 치료하거나, 또는 이와 관련된 증상, 징후, 이상, 또는 장애를 예방, 억제, 지연, 또는 퇴행시키는 당해 청구된 화합물의 어떤 용도 및 모든 용도를 포함한다. 따라서, 염증-기반 병원균과 관련된 바람직하지 않은 질환 상태, 증상, 이상, 징후, 또는 장애, 또는 신체의 면역반응의 자극이 유리한 다른 질환 또는 장애의 어떤 예방, 개선, 완화, 퇴행, 또는 완전한 제거가 본 발명에 포함된다. 치료는 본원에 설명된 조성물의 유효량을 단독으로 또는 면역원과 조합하여 투여하는 것을 포함할 수 있다.
본 발명의 여러 구체예에 따른 조성물은 하나 이상의 면역원, 예를 들어 바이러스성 또는 세균성("병원성") 면역원을 더 포함할 수 있다. 면역원은 죽은 전-유기체("사 백신")로부터 제조될 수도 있고, 또는 그 병원균의 특이적 단백질, 펩티드 또는 다른 하위구조로부터 제조될 수 있다. 또는 달리, 면역원은 다른 비-병원성 단백질 또는 펩티드, 예를 들어 "His-Tag" 또는 면역원의 정제에 유용한 다른 부분과 융합된, 병원균으로부터의 전체 또는 부분 단백질 또는 펩티드를 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 특이적 단백질 또는 펩티드는 분자생물학 기술 또는 방법을 사용하여 제조될 수 있다("재조합" 단백질 또는 펩티드). 재조합 분자생물학에 사용되는 종래의 기술 또는 방법은, 예를 들어 Molecular Cloning: a Laboratory Manual, 3rd edition. Sambrook and Russell. CSHL Press, Cold Spring Harbour, New York; Current Protocols in Molecular Biology, 2007 Ausubel et al., editors. Wiley InterScience, New York; Current Protocols in Immunology, 2006 Coligan et al., editors. Wiley InterScience, New York에 설명된다.
면역원의 예는, 제한되는 것은 아니지만 열 충격 단백질을 포함하는 단백질, 세균, 진균 또는 바이러스로부터의 항원, 또는 세균성 또는 바이러스성 병원균으로부터의 항원을 포함하는 열 충격 융합 단백질, 예를 들어, 제한되는 것은 아니지만 HspE7(WO 99/07860, US 7,157,089, 모두 본원에 참고자료로 포함된다)을 포함한다. 세균성, 진균성 또는 바이러스성 병원균의 예는, 제한되는 것은 아니지만 다음 질환들의 원인물질을 포함한다: 유두종, 생식기 혹, 인플루엔자, A형 간염, B형 간염, C형 간염, D형 간염, E형 간염, G형 간염, 시토메갈로바이러스, 엡슈타인 바르 바이러스, AIDS, AIDS 관련 복합체, 수두(바리셀라), 감기, 시토메갈로바이러스 감염, 콜로라도 진드기 열 - 뎅그열, 에볼라 출혈열 - 손, 발 및 구강 질환, 간염, 단순 헤르페스, 띠 헤르페스, HPV, 인플루엔자(플루), 라사열, 홍역, 말버그 출혈열, 감염성 단핵세포증, 유행성 이하선염, 급성 회백수염, 진행성 다초점 백색질뇌증, 광견병, 풍진, SARS, 천연두(바리올라), 바이러스성 뇌염, 바이러스성 위장염, 바이러스성 수막염, 바이러스성 폐렴, 웨스트나일병, 황열병, 탄저병, 세균성 수막염, 보툴리누스 중독, 브루셀라증, 캄필로박테리아증, 묘소병, 콜레라, 디프테리아, 발진 티푸스, 임질, 농가진, 레지오넬라증, 나병(한센병), 렙토스피라증, 리스테리아증, 라임병, 유비저, MRSA 감염, 노카르디아증, 백일해(후핑 커프), 페스트, 폐렴구균성 폐렴, 앵무병, Q-열병, 록키산 홍반열(RMSF), 살모넬라증, 성홍열, 세균성 이질, 매독, 파상풍, 트라코마, 결핵, 야토병, 장티푸스열, 티푸스, 요도관 감염, 아스페르길루스증, 바시디오볼루스 진균증, 칸디다증, 효모균증, 콕시디오이데스진균증, 피부 사상균증, 백선, 히스토플라스마증, 진균혈증, 파라콕시디오이데스 진균증, 폐포자충 폐렴 등. 재조합 면역원은 재조합 발현 시스템, 예를 들어 세균, 효모, 배큘로바이러스, 포유류 세포 또는 식물 발현 시스템을 사용하여 발현될 수 있다.
본 발명의 어떤 구체예에서, 본 발명의 여러 구체예에 따른 조성물은 세균성 또는 바이러스성 병원균과 관련된 질환 또는 장애의 치료에 사용될 수 있다. 세균성 또는 바이러스성 병원균과 관련된 질환 또는 장애는, 제한되는 것은 아니지만 세균성 또는 바이러스성 병원균에 의한 활성 감염 또는 잠복 감염, 세균성 또는 바이러스성 병원균에 의한 활성 감염 또는 잠복 감염과 동시에, 또는 그에 이어서 발생하는 자가면역반응, 세균성 또는 바이러스성 병원균에 의한 활성 감염 또는 잠복 감염과 동시에, 또는 그에 이어서 발생하는 부작용을 포함한다.
본 발명의 어떤 구체예에서, 면역원은 종양 항원, 또는 암과 관련하여 발견되는 항원일 수 있다.
용어 "암"은 많은 정의를 가진다. 미국 암학회에 따르면, 암은 비정상 세포의 통제 불가능한 성장(때로는 전파)을 특징으로 하는 일군의 질환이다. 이것은 주로 단일 상태로서 간주되지만, 실제는 200개를 넘는 상이한 질환으로 구성된다. 암성 성장물은 사람을 죽일 수 있는데, 이러한 세포는 생명 기관의 정상적인 기능을 방해하거나, 또는 신체 전체로 전파되어 필수 시스템을 손상시킨다. 본 발명의 조성물은 동물 또는 대상에서 감수성 있는 신생물을 치료하는데 사용될 수 있으며, 그 방법은 그것을 필요로 하는 동물 또는 대상에 본 발명의 화합물 또는 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 화합물이 치료제로서 효과적일 수 있는 상이한 타입의 암들의 비제한적 예는 암종, 예를 들어 다형성 교아세포종, 성상세포종, 핍지교종, 뇌실 맥락막종 종양, 송과체 종양, 신경 종양, 수아세포종, 신경초종, 수막종, 및 뇌수막 육종을 포함하는 중추신경계의 신생물; 눈의 신생물, 기저세포 암종, 편평세포 암종, 흑색종, 평활근육종, 및 망막아세포종을 포함하는 눈의 신생물; 뇌하수체 신생물, 갑상선 신생물, 부신피질 신생물, 신경내분비계 신생물, 위장관췌장 내분비계 신생물, 및 생식선 신생물을 포함하는 내분비선의 신생물; 두경부암, 구강, 인두 및 후두의 신생물, 및 치원성 종양을 포함하는 두경부 신생물; 대세포 폐암종, 소세포 폐암종, 비-소세포 폐암종, 악성 중피종, 흉선종, 흉부의 원발성 배세포 종양을 포함하는 흉부의 신생물; 식도, 위, 간, 담낭, 외분비 췌장, 소장, 충수, 및 복막의 신생물, 결직장의 선암종, 및 항문 신생물을 포함하는 소화관의 신생물; 신장세포 암종, 신우, 수뇨관, 방광, 요도, 전립선, 음경, 고환의 신생물을 포함하는 비뇨생식관의 신생물; 및 외음부와 질, 자궁경부의 신생물, 자궁체부의 선암종, 난소암, 부인과 육종, 및 유방의 신생물을 포함하는 여성 생식기관의 신생물; 기저세포 암종, 편평세포 암종, 융기성 피부섬유육종, 메켈 세포 종양, 및 악성 흑색종을 포함하는 피부의 신생물; 골육종, 악성 섬유성 조직구종, 연골육종, 유잉씨 육종, 원시 신경외배엽 종양, 및 혈관육종을 포함하는 뼈와 연조직의 신생물; 골수이형성 증후군, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, HTLV-1 및 5, T-세포 백혈병/림프종, 만성 림프구성 백혈병, 모양세포 백혈병, 호지킨병, 비-호지킨 림프종, 및 비만세포 백혈병을 포함하는 조혈계의 신생물; 및 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수모구성 백혈병, 신경모세포종, 뼈 종양, 평활근육종, 림프종, 신장 종양 등을 포함하는 소아의 신생물을 포함한다.
본 발명의 어떤 구체예에서, 면역원은 알레르겐일 수 있다. 알레르겐은 알레르겐에 노출시 대상에서 알레르기 반응을 유도하는 원인제이다. 흡입된 알레르겐으로 인한 알레르기 및 천식 장애에서 관찰되는 만성 염증은 호산구의 국소 조직 침윤, 및 알레르겐에 대한 조직의 과다반응에 크게 지배된다. 염증은 코르티코스테로이드 및/또는 기관지확장제의 사용에 의해 감소될 수 있지만, 이들은 근본 원인을 치료하지는 못한다. WO 99/07860에 논의된 대로, 알레르겐-특이적 T-림프구가 이러한 과다반응 조직 내에 선택적으로 부화되며, 이러한 민감성은 소아나 유아에서의 초기 항원 노출에 의존할 수 있다.
흡입된 항원에 대한 개체의 면역반응에서 특이적 Th1- 대 Th2-유사 기억세포의 선택이 공기전달 기도로 이어진 국소 림프절에서 발생한다. 이런 선택은 항원 특이적 CD4+ 및 CD8+ T-세포에 의해 생성된 여러 사이토카인에 의해 조절될 수 있다. 이 T-세포 선택 과정은 감염원에 의해 영향받을 수 있다. 기도 점막의 감염이 국소 조직(치조) 대식세포를 동원하여 활성화할 수 있으며, 이것이 국소 림프절로 이동하여 IL-12 및 알파-인터페론과 같은 Th2 억제성 사이토카인을 분비한다. 게다가, 이들은 자연살상 세포의 활성화를 통해서 그 주위의 감마-인터페론 수준을 더할 수 있다. 최종 결과는 CTL(이것은 CD8+ 세포가 지배적이다)의 생성이다. 감마-인터페론은 Th2 세포의 생성을 억제함으로써 체액성(IgE) 및 세포성(호산구, 호염기성 세포 및 비만세포) 알레르기 반응의 발생에 중요한 사이토카인인 IL-4 및 IL-5를 생성한다(Anderson G.P. and Coyle A.J., Trends Pharmacol. Sci. 15:324-332 (1995); Stam W.B., van Oosterhout A.J. and Nijkamp F.P., Life Sci, 53: 1921-1934 (1993)).
포유류에서 스트레스 단백질이 체액성 면역반응뿐만 아니라 세포성 면역반응을 유도한다고 밝혀졌다. 스트레스 단백질과 혼합되거나, 화학적으로 콘쥬게이트되거나, 또는 융합된 가용성 항원이 포유류에 투여된 경우, 세포-매개 세포용해성 면역반응이 실질적으로 증진된다. 이런 반응은 대부분 CD8+ T 세포로 인한 것이다. 따라서, 스트레스 단백질과 혼합되거다 결합된 것들과 항원 단독에 대한 CD4+ 반응의 비교는 예상된 프로파일을 제공한다: 스트레스 단백질과 혼합되거나 연결된 가용성 항원은 앞서 설명된 Th1 경로의 자극의 척도인 CTL(주로 CD8+ T 세포)을 높은 비율로 산출하며, 이것은 이들 CTL이 Th1 타입의 항원 특이적 T 세포 유도의 결과로서 발생하기 때문이다. 이들 Th1 세포는 Th2 세포를 억제하는 감마-인터페론을 생성한다. 따라서, Th2 사이토카인 IL-4 및 IL-5는 IgE 및 호산구의 생성을 지원하는데 더 이상 이용될 수 없다. IgE의 역가가 감소함에 따라 대식세포와 호염기성 세포의 직접적 항원 자극도 감소할 것이다. 게다가, 감소된 IL-5 생성은 호산구의 감소된 생성, 분화 및 활성화를 초래할 것이다. 이런 패턴은 연루된 조직의 염증을 감소시킬 것이며, 과다반응(천식) 사건을 줄일 것이다.
따라서, 식 II, IIa-e, 식 III, IIIa-d, 식 IVa-j, 식 IVa-j, 식 Va 내지 식 Vc, 식 VIa 내지 식 VIh, 식 VIj 내지 식 VIo, 식 VIIa 내지 VIIh, 식 VIIIa 내지 식 VIIIh 중 적어도 2개의 조합에 따른 제제와 다양한 몰비로 조합된 공지된 알레르겐성 항원(알레르겐), 또는 스트레스 단백질 또는 스트레스 단백질과 화학적으로 연결되거나 융합된 알레르겐을 포함하는 조성물의 혼합물의 투여는 아토피 환자에서 Th1 대 Th2 비에 영향을 미칠 수 있으며, 이로써 더욱 정상적인 균형이 회복되고, 알레르기 또는 천식 반응이 감소될 수 있다.
따라서, 본 발명은 TLR3 아고니스트 또는 TLR9 아고니스트 또는 TLR3과 TLR9의 아고니스트인 조성물, 그리고 TLR3 아고니스트 또는 TLR9 아고니스트 또는 TLR3과 TLR9의 아고니스트인 조성물을 포함하는 애쥬번트 또는 애쥬번트 조성물을 제공한다.
본 발명의 어떤 구체예에서, 면역원은 HspE7을 포함한다. HspE7 융합 단백질을 생성하는 방법은 본원에 참고자료로 포함되는 WO 99/07860 및 US 60/803,606에 설명된다.
서열
SEQ ID NO:1에 따른 서열에서, 잔기 G1, G2, G25 및 G26이 LNA 잔기이고, 잔기 3에서 24는 이노신 리보뉴클레오티드이다.
SEQ ID NO:2에 따른 서열에서, 잔기 C1, C2, C25 및 C26이 LNA 잔기이고, 잔기 C3에서 C24는 리보뉴클레오티드이다.
SEQ ID NO:3에 따른 서열에서, 잔기 T17, G18, T20, T22 및 G23이 LNA 잔기이고, 잔기 1에서 15는 이노신 리보뉴클레오티드이고, 잔기 G16, A19 및 A21은 리보뉴클레오티드 또는 데옥시리보뉴클레오티드일 수 있다.
SEQ ID NO:4에 따른 서열에서, 잔기 C16, T18, T20, A22 및 C23이 LNA 잔기이고, 잔기 C1에서 C15는 리보뉴클레오티드이고, 잔기 A17, A19 및 C21은 리보뉴클레오티드 또는 데옥시리보뉴클레오티드일 수 있다.
SEQ ID NO:5에 따른 서열에서, 잔기 G1, T18, T19, T21 및 T23이 LNA 잔기이고, 잔기 1에서 17은 이노신 리보뉴클레오티드이고, 잔기 G17, A20 및 a22는 리보뉴클레오티드 또는 데옥시리보뉴클레오티드일 수 있다.
SEQ ID NO:6에 따른 서열에서, 잔기 C1, C17, T19, C22 및 C23이 LNA 잔기이고, 잔기 C2에서 C16은 리보뉴클레오티드이고, 잔기 A18, A20 및 U21은 리보뉴클레오티드 또는 데옥시리보뉴클레오티드일 수 있다.
SEQ ID NO:7에 따른 서열에서, 잔기 T1, T2, T18, T19, T21 및 A22가 LNA 잔기이고, 잔기 3에서 17은 이노신 리보뉴클레오티드이고, 잔기 A19 및 A21은 리보뉴클레오티드 또는 데옥시리보뉴클레오티드일 수 있다.
SEQ ID NO:8에 따른 서열에서, 잔기 A1, C2, C18, T20, T22 및 C23이 LNA 잔기이고, 잔기 C3에서 C17은 리보뉴클레오티드이고, 잔기 A19 및 A21은 리보뉴클레오티드 또는 데옥시리보뉴클레오티드일 수 있다.
SEQ ID NO:9에 따른 서열에서, 잔기 G1과 G2가 LNA 잔기이고, 잔기 2에서 17은 이노신 리보뉴클레오티드이고, 잔기 A18에서 A32는 리보뉴클레오티드이다.
SEQ ID NO:10에 따른 서열에서, 잔기 C16 및 C17이 LNA 잔기이고, 잔기 C1에서 C15 및 U18에서 U32는 리보뉴클레오티드이다.
SEQ ID NO:11에 따른 서열에서, 잔기 G1 및 G2가 LNA 잔기이고, 잔기 3에서 12는 이노신 리보뉴클레오티드이고, 잔기 A13에서 A22는 리보뉴클레오티드이다.
SEQ ID NO:12에 따른 서열에서, C11과 C12가 LNA 잔기이고, 잔기 U1에서 U1O 및 C13에서 C22는 리보뉴클레오티드이다.
SEQ ID NO:13에 따른 서열에서 잔기 G1, G2, G18, T19, C20, G21, T11, T23, G39 및 G40이 LNA 잔기이고; 잔기 3에서 17 및 24에서 38은 이노신 리보뉴클레오티드이다.
SEQ ID NO:14에 따른 서열에서 잔기 C1, C2, A18, A19, C20, G21, A22, C23, C39, C40 및 C23이 LNA 잔기이고, 잔기 C3에서 C17 및 C24에서 C38은 리보뉴클레오티드이다.
SEQ ID NO:15에 따른 서열에서, 잔기 G1, G2, G18, T19, C20, G21, T22 및 T23이 LNA 잔기이고, 잔기 3에서 17은 이노신 리보뉴클레오티드이다.
SEQ ID NO:16에 따른 서열에서, 잔기 A1, A2, C3, G4, A5, C6, C22 및 C23이 LNA 잔기이고, 잔기 C7에서 C21은 리보뉴클레오티드이다.
SEQ ID NO:17에 따른 서열에서, 잔기 G16, T17, C18, G19, T20 및 T21이 LNA 잔기이고, 잔기 1에서 15는 이노신 리보뉴클레오티드이다.
SEQ ID NO:18에 따른 서열에서, 잔기 A16, A17, C18, G19, A20 및 C21이 LNA 잔기이고, 잔기 C1에서 C15는 리보뉴클레오티드이다.
SEQ ID NO:19에 따른 서열에서, 잔기 G1, G17, T18, C19, G20, T21 및 T22가 LNA 잔기이고, 잔기 2에서 16은 이노신 리보뉴클레오티드이다.
SEQ ID NO:20에 따른 서열에서, 잔기 C1, A17, A18, C19, G20, A21 및 C22가 LNA 잔기이고, 잔기 C2에서 C16은 리보뉴클레오티드이다.
SEQ ID NO:21에 따른 서열에서, 잔기 C1, G2, G18, T19, C20, G21, T22 및 T23이 LNA 잔기이고, 잔기 3에서 17은 이노신 리보뉴클레오티드이다.
SEQ ID NO:22에 따른 서열에서, 잔기 G1, C2, A18, A19, C20, G21, A22 및 C23이 LNA 잔기이고, 잔기 C3에서 C17은 리보뉴클레오티드이다.
SEQ ID NO:23에 따른 서열에서, 6개 잔기 모두가 LNA 잔기이다.
SEQ ID NO:24에 따른 서열에서, 6개 잔기 모두가 LNA 잔기이다.
SEQ ID NO:25에 따른 서열에서, 잔기 C2와 C3이 LNA 잔기이고, 잔기 C1에서 C1O 및 U13에서 U23은 리보뉴클레오티드이다.
SEQ ID NO:26에 따른 서열에서, 잔기 G1과 G2가 봉쇄형 핵산 잔기이고, C3, G4, T5, C6, G7, T8, T9, A1O, T26, G27, T28, C29, G30, T31, T32, G33은 데옥시리보뉴클레오티드이고, A11에서 A25는 리보뉴클레오티드이다.
SEQ ID NO:27에 따른 서열에서 잔기 U1에서 U15는 리보뉴클레오티드이고, 잔기 T16, A17, A18, C19, G20, A21, C22, G23, C26, A27, A28, C29, G30, A31, C32 및 A33은 데옥시리보뉴클레오티드이고, C24 및 C25가 봉쇄형 핵산 잔기이다.
한문자 염기 표시(A, C, G, T, U, I)와 조합된 하첨자 "LNA"는 관련 뉴클레오티드가 상기 설명된 2'-4'를 포함하는 봉쇄형 핵산 잔기임을 표시한다.
실시예 1
이중-가닥 올리고머의 제조: GCLNA - 폴리IC - GCLNA
제조자(Glen Research, Sterling VA)의 프로토콜에 따라, 표준 기술에 따라서 2'-OMe-I-CE 포스포라미다이트, 2'-OMe-C-CE 포스포라미다이트, 5-Me-Bz-C-LNA- CE 포스포라미다이트 및 dmf-G-LNA-CE 포스포라미다이트를 사용하여 SEQ ID NO:1과 SEQ ID NO:2에 따른 올리고머를 합성하였다.
Figure 112009060567771-PCT00062
제 1 올리고머와 제 2 올리고머를 각각 등몰량으로 조합하고, 아닐링하여 식 IIIa에 나타낸 dsRNA 화합물 GCLNA-폴리IC-GCLNA를 생성하였다.
Figure 112009060567771-PCT00063
실시예 2
3' 미결합 단부를 가진 이중-가닥 올리고머의 제조
제조자(Glen Research, Sterling VA)의 프로토콜에 따라, 표준 기술에 따라서 5-Me-Bz-C-LNA-CE포스포라미다이트, Bz-A-LNA-CE 포스포라미다이트, dmf-G-LNA-CE 포스포라미다이트, T-LNA-CE 포스포라미다이트, 2'-OMe-I-CE 포스포라미다이트, 2'-OMe-C-CE 포스포라미다이트, 2'-OMe-A-CE 포스포라미다이트, 2'-OMe-G-CE 포스포라미다이트 및 2'-0Me-U-CE 포스포라미다이트를 사용하여 SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 및 SEQ ID NO:8에 따른 올리고머를 합성할 수 있다.
Figure 112009060567771-PCT00064
SEQ ID NO:3과 SEQ ID NO:4, 또는 SEQ ID NO:5와 SEQ ID NO:6, 또는 SEQ ID NO:7과 SEQ ID NO:8을 각각 등몰량으로 조합하고, 아닐링하여 식 Va, Vb, 및 Vc에 각각 나타낸 이중-가닥 핵산 화합물을 생성할 수 있다.
Figure 112009060567771-PCT00065
실시예 3
3' 미결합 단부를 가진 이중-가닥 올리고머의 제조
제조자(Glen Research, Sterling VA)의 프로토콜에 따라, 표준 기술에 따라 서 5-Me-Bz-C-LNA-CE포스포라미다이트, Bz-A-LNA-CE 포스포라미다이트, dmf-G-LNA-CE 포스포라미다이트, T-LNA-CE 포스포라미다이트, 2'-OMe-I-CE 포스포라미다이트, 2'-OMe-C-CE 포스포라미다이트, 2'-OMe-A-CE 포스포라미다이트, 2'-OMe-G-CE 포스포라미다이트 및 2'-0Me-U-CE 포스포라미다이트를 사용하여 SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11 및 SEQ ID NO:12에 따른 올리고머를 합성할 수 있다.
Figure 112009060567771-PCT00066
SEQ ID NO:9와 SEQ ID NO:10, 또는 SEQ ID NO:11과 SEQ ID NO:12, 또는 SEQ ID NO:11과 SEQ ID NO:25를 각각 등몰량으로 조합하고, 아닐링하여 식 Vd 및 Ve에 각각 나타낸 이중-가닥 핵산 화합물을 생성할 수 있다(도 1).
실시예 4
면역원과 조합된 dsRNA 의 시험관내 생물학적 활성
US 60/803,606(본원에 참고자료로 포함됨)의 방법에 따라서 생성된 HspE7 및 상기 실시예 1에 따라서 생성된 GCLNA-폴리IC-GCLNA을 포함하는 조성물이 시험관내 생물학적 활성에 대해 시험될 수 있다.
GCLNA-폴리IC-GCLNA의 존재하에서 (전형적인 항바이러스 치료 접근법으로서) E7-특이적 CD8-양성 T 림프구를 유도하는 HspE7의 능력의 증대가 측정될 수 있다. 미경험 C57B1/6 마우스에 HspE7을 단독으로 피하 주사하거나, 또는 HspE7과 GCLNA- 폴리IC-GCLNA를 함께 피하 주사할 수 있다. 시간이 지난 후, 예를 들어 5일 후에, 마우스로부터 비장을 제거하고, ELISPOT에 의해, 예를 들어 리콜 항원으로서 E7-특이적 I형 MHC 결합 펩티드 E749-57(RAHYNIVTF; Dalton Chemical Laboratories), 또는 대조군 펩티드 HBCAg93-100(MGLKFRQL; Dalton Chemical Laboratories)을 사용해서 E7-특이적 비장세포의 수를 측정할 수 있다.
실시예 5
면역원과 조합된 dsRNA 의 시험관내 생물학적 활성
PCT 공보 WO 2007/137427(본원에 참고자료로 포함됨)의 방법에 따라서 생성된 HspE7 및 상기 실시예 1에 따라서 생성된 GCLNA-폴리IC-GCLNA를 포함하는 조성물이 시험관내 생물학적 활성에 대해 시험될 수 있다.
암 치료법의 전형적인 방법에서, 먼저 미경험 C57B1/6 마우스에 TC-1 종양을 확립한다. 마우스의 옆구리에 6x104 TC-1 종양 세포를 주사했다. 제7일에, 확립된 TC-1 종양을 지닌 마우스의 목덜미에 희석제, 정제 HspE7 단독, 또는 상이한 용량의 GCLNA-폴리IC-GCLNA와 혼합된 정제 HspE7의 등급화된 용량을 피하 주사할 수 있다. 추가의 시간 동안, 예를 들어 42일 동안 마우스를 종양 성장에 대해 추적조사한다 - 이 예에서, 종양 이식 후 49일째에 종양이 없는 마우스는 종양이 없는 것으로 간주될 수 있다.
실시예 6
CpG 모티프를 포함하는 이중-가닥 올리고머의 제조
제조자(Glen Research, Sterling VA)의 프로토콜에 따라, 표준 방법에 따라서 2'-OMe-I-CE 포스포라미다이트, 2'-OMe-C-CE 포스포라미다이트, 5-Me-Bz-C-LNA-CE 포스포라미다이트 및 dmf-G-LNA-CE 포스포라미다이트를 사용하여 SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21 및 SEQ ID NO:22에 따른 올리고머를 합성하였다.
Figure 112009060567771-PCT00067
SEQ ID NO:13과 SEQ ID NO:14, 또는 SEQ ID NO:15와 SEQ ID NO:16, 또는 SEQ ID NO:17과 SEQ ID NO:18, 또는 SEQ ID NO:19와 SEQ ID NO:20, 또는 SEQ ID NO:21과 SEQ ID NO:22를 각각 등몰량으로 조합하고, 아닐링하여 식 VIg, VIh, VIi, VIj, 및 VIk에 따른 dsRNA 화합물을 생성하였다(도 2).
실시예 7
CpG 및 폴리 A:U 모티프를 포함하는 이중-가닥 올리고머의 제조
제조자(Eurogentec North America)의 프로토콜에 따라, 표준 방법에 따라서 2'-OMe-A-CE 포스포라미다이트, 2'-OMe-U-CE 포스포라미다이트, DMT-dA-포스포라미다이트, DMT-dC-포스포라미다이트, DMT-dG-포스포라미다이트, DMT-dT-포스포라미다이트, 5-Me-Bz-C-LNA-CE 포스포라미다이트 및 dmf-G-LNA-CE 포스포라미다이트를 사용하여 SEQ ID NO:26과 SEQ ID NO:27에 따른 올리고머를 합성하였다.
Figure 112009060567771-PCT00068
SEQ ID NO:26과 SEQ ID NO:27을 각각 등몰량으로 조합하고, 아닐링하여 도 3에 나타낸 한쪽 단부에 미결합 뉴클레오시드 부분을 가진 이중-가닥 핵산 화합물을 생성할 수 있다.
모든 인용문헌은 본원에 참고자료로 포함된다.
하나 이상의 현재 바람직한 구체예가 예로서 설명되었다. 청구항에 한정된 본 발명의 범위를 벗어나지 않는 많은 변화 및 변형이 이루어질 수 있음이 당업자에게 자명할 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> Nventa Biopharmaceuticals Corporation Emtage, Peter <120> DOUBLE-STRANDED LOCKED NUCLEIC ACID COMPOSITIONS <130> V81019WO <150> 60/905,461 <151> 2007-03-07 <150> 60/950,271 <151> 2007-07-17 <160> 27 <170> PatentIn version 3.4 <210> 1 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(2) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (3)..(24) <223> I <220> <221> modified_base <222> (25)..(26) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 1 ggaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaagg 26 <210> 2 <211> 26 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> olionucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(2) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (25)..(26) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 2 cccccccccc cccccccccc cccccc 26 <210> 3 <211> 23 <212> DNA <213> artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(15) <223> I <220> <221> modified_base <222> (17)..(18) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> 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<210> 6 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(1) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (17)..(17) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (19)..(19) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (22)..(23) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 6 cccccccccc cccccccata uca 23 <210> 7 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(2) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (3)..(17) <223> I <220> <221> modified_base <222> (18)..(19) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (21)..(22) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 7 tgaaaaaaaa aaaaaaatta ta 22 <210> 8 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(2) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (18)..(18) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (20)..(20) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (22)..(23) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 8 accccccccc ccccccccat atc 23 <210> 9 <211> 32 <212> RNA <213> Artifiical <220> <221> modified_base <222> (1)..(2) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (3)..(17) <223> I <400> 9 ggaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa 32 <210> 10 <211> 32 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (16)..(17) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 10 cccccccccc cccccccuuu uuuuuuuuuu uu 32 <210> 11 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(2) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (3)..(13) <223> I <400> 11 ggaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa 22 <210> 12 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (11)..(12) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 12 uuuuuuuuuu cccccccccc cc 22 <210> 13 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(2) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (3)..(17) <223> I <220> <221> modified_base <222> (18)..(23) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (24)..(38) <223> I <220> <221> modified_base <222> (39)..(40) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 13 ggaaaaaaaa aaaaaaagtc gttaaaaaaa aaaaaaaagg 40 <210> 14 <211> 40 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(2) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (18)..(23) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (39)..(40) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 14 cccccccccc cccccccaac gacccccccc cccccccccc 40 <210> 15 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(2) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (3)..(17) <223> I <220> <221> modified_base <222> (18)..(23) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 15 ggaaaaaaaa aaaaaaagtc gtt 23 <210> 16 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(6) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (22)..(23) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 16 aacgaccccc cccccccccc ccc 23 <210> 17 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(15) <223> I <220> <221> modified_base <222> (16)..(21) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 17 aaaaaaaaaa aaaaagtcgt t 21 <210> 18 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (16)..(21) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 18 cccccccccc cccccaacga c 21 <210> 19 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(1) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (2)..(16) <223> I <220> <221> modified_base <222> (17)..(22) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 19 gaaaaaaaaa aaaaaagtcg tt 22 <210> 20 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(1) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (17)..(22) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 20 cccccccccc ccccccaacg ac 22 <210> 21 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(2) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (3)..(17) <223> I <220> <221> modified_base <222> (18)..(23) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 21 cgaaaaaaaa aaaaaaagtc gtt 23 <210> 22 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(2) <223> 2'-4' cyclic linkage <220> <221> modified_base <222> (18)..(23) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 22 gccccccccc cccccccaac gac 23 <210> 23 <211> 6 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(6) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 23 gtcgtt 6 <210> 24 <211> 6 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(6) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 24 aacgac 6 <210> 25 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (11)..(12) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 25 cccccccccc ccuuuuuuuu uu 22 <210> 26 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 26 ggcgtcgtta aaaaaaaaaa aaaaatgtcg ttg 33 <210> 27 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (24)..(25) <223> 2'-4' cyclic linkage <400> 27 uuuuuuuuuu uuuuutaacg acgcccaacg aca 33

Claims (15)

  1. 하기 식 IIa의 화합물.
    Figure 112009060567771-PCT00069
    상기 식에서,
    - n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
    - p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
    - V, Z, Q 및 W는 어떤 뉴클레오시드, 리보뉴클레오시드, 데옥시리보뉴클레오시드, 뉴클레오시드 유사체, 리보뉴클레오시드 유사체, 또는 데옥시리보뉴클레오시드 유사체이고;
    - m은 1 내지 500의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이고;
    - S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
    - D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
    - k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
    - R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 저미널 뉴클레오시드에 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있거나, 또는 R은 부재할 수 있고; 그리고
    - V, S, D, Z, Q, R 및 W 중 하나 이상은 하나 이상의 봉쇄형 핵산(LNA) 모노머를 포함한다.
  2. 하기 식 IVc의 화합물.
    Rk1-Vn-(Sm)-Wp-Rk2 식 IVc
    상기 식에서,
    - n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
    - p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
    - V 및 W는 어떤 뉴클레오시드, 리보뉴클레오시드, 데옥시리보뉴클레오시드, 뉴클레오시드 유사체, 리보뉴클레오시드 유사체, 또는 데옥시리보뉴클레오시드 유사체이고;
    - m은 1 내지 500의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이고;
    - S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
    - k1 및 k2는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
    - R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 저미널 뉴클레오시드에 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있거나, 또는 R은 부재할 수 있고; 그리고
    - V, S, R 및 W 중 하나 이상은 하나 이상의 봉쇄형 핵산(LNA) 모노머를 포함한다.
  3. 하기 식 IVd의 화합물.
    Rk4-Qp-(Dm)-Zn-Rk3 식 IVd
    상기 식에서,
    - n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
    - p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
    - Z 및 Q는 어떤 뉴클레오시드, 리보뉴클레오시드, 데옥시리보뉴클레오시드, 뉴클레오시드 유사체, 리보뉴클레오시드 유사체, 또는 데옥시리보뉴클레오시드 유사체이고;
    - m은 1 내지 500의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이고;
    - D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴 클레오시드이고;
    - k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
    - R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 저미널 뉴클레오시드에 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있거나, 또는 R은 부재할 수 있으며, 어떤 구체예에서, 예를 들어, 제 1 가닥의 5' R 리보뉴클레오시드는 제 2 가닥의 3' R 리보뉴클레오시드와 결합할 수 있고; 그리고
    - R, Z, D 및 Q 중 하나 이상은 하나 이상의 봉쇄형 핵산(LNA) 모노머를 포함한다.
  4. 제 2 항의 화합물에 따른 올리고머와 제 3 항의 화합물에 따른 올리고머를 약 0.5-1.0 내지 약 1.0-0.5의 몰비로 혼합하는 단계, 및 상기 제 1 및 제 2 올리고머를 아닐링하여 이중-가닥 화합물을 형성하는 단계
    를 포함하는, 하기 식 IIa의 화합물의 제조 방법.
    Figure 112009060567771-PCT00070
    상기 식에서,
    - n은 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 n = 0이면, p = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
    - p는 0 내지 10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이며, 단 p = 0이면, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
    - V, W, Z 및 Q는 어떤 뉴클레오시드이고;
    - m은 1 내지 500의 어떤 정수이고;
    - S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
    - D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
    - k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
    - R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 저미널 뉴클레오시드에 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있거나, 또는 R은 부재할 수 있으며, 어떤 구체예에서, 예를 들어, 제 1 가닥의 5' R 리보뉴클레오시드는 제 2 가닥의 3' R 리보뉴클레오시드와 결합할 수 있고; 그리고
    - V, S, W, Z, D 및 Q 중 하나 이상은 하나 이상의 LNA 모노머를 포함한다.
  5. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, S는 이노신이고, D는 시토신인 것을 특징으로 하는 화합물.
  6. 제 5 항의 화합물, 폴리-L-리신 및 카르복시메틸셀룰로오스를 포함하는 조성물.
  7. 제 5 항의 화합물 및 면역원을 포함하는 조성물.
  8. 하기 식의 화합물.
    Figure 112009060567771-PCT00071
    상기 식에서,
    - ELNA는 CpG 또는 CpG 모티프이며, 여기서 CpG 또는 CpG 모티프를 이루는 뉴클레오시드, C, G 중 하나 이상은 LNA이고;
    - FLNA는 CpG 또는 CpG 모티프이며, 여기서 CpG 또는 CpG 모티프를 이루는 뉴클레오시드, C, G 중 하나 이상은 LNA이고;
    - m은 1 내지 500의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 수이고;
    - S는 이노신, 이노신-유사체 뉴클레오시드, 아데닌, 또는 아데닌-유사체 뉴클레오시드이고;
    - D는 시토신, 시토신-유사체 뉴클레오시드, 우라실, 또는 우라실-유사체 뉴클레오시드이고;
    - k1, k2, k3 및 k4는 독립적으로 0과 10을 포함하는 0-10의 어떤 정수, 또는 그 사이의 어떤 정수일 수 있고;
    - R은 독립적으로 뉴클레오시드 간 연결기에 의해서 연결된 어떤 리보뉴클레오시드일 수 있다.
  9. 제 8 항에 있어서, S가 이노신이고, D가 시토신인 식 VIa, VIb, VIc, 또는 VId에 따른 화합물.
  10. 제 9 항의 화합물 및 면역원을 포함하는 조성물.
  11. 1 내지 500개 이노신, 시토신, 또는 이노신과 시토신 조합의 리보뉴클레오티드 및 1 내지 10개 봉쇄형 핵산 잔기를 포함하는 제 1 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머; 및
    1 내지 500개 이노신, 시토신, 또는 이노신과 시토신 조합의 리보뉴클레오티 드 및 1 내지 10개 봉쇄형 핵산 잔기를 포함하는 제 2 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머
    를 포함하는 화합물로서, 여기서
    제 1 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머와 제 2 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머가 수소 결합하여 이중-가닥 핵산을 형성하고, 이중-가닥 핵산은 이중-가닥 폴리IC 영역 및 봉쇄형 핵산 잔기를 포함하는 이중-가닥 영역을 포함하는 화합물.
  12. 1 내지 500개 이노신, 시토신, 또는 이노신과 시토신 조합의 리보뉴클레오티드 및 SEQ ID NO:23에 따른 핵산 서열을 포함하는 제 1 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머; 및
    1 내지 500개 이노신, 시토신, 또는 이노신과 시토신 조합의 리보뉴클레오티드 및 SEQ ID NO:24에 따른 핵산 서열을 포함하는 제 2 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머
    를 포함하는 화합물로서, 여기서
    제 1 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머와 제 2 단일-가닥 뉴클레오티드 폴리머가 수소 결합하여 이중-가닥 핵산을 형성하고, 이중-가닥 핵산은 이중-가닥 폴리IC 영역 및 봉쇄형 핵산 잔기를 포함하는 이중-가닥 영역을 포함하는 화합물.
  13. 제 11 항의 화합물을 포함하는 애쥬번트 조성물.
  14. 제 12 항의 화합물을 포함하는 애쥬번트 조성물.
  15. 제 12 항의 화합물을 포함하는 TLR3 및 TLR9 아고니스트.
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