KR20100032553A - 잠분 추출물을 함유하는 아토피 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 아토피 피부염 치료를 위한 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 누에의 배설물인 잠분의 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 치료용 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 잠분 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 치료용 조성물은 세포독성이 없어 부작용이 없고 안전하면서도 아토피 치료 효과가 우수할 뿐 아니라, 우수한 효능을 갖고 있음에도 불구하고 이용가치가 낮게 평가되어 있는 잠분의 부가가치가 높은 활용방안을 제공한다.

잠분, 아토피, 천연물, 추출물

Description

잠분 추출물을 함유하는 아토피 치료용 조성물{A composition containing silkworm excreta extracts for treatment of atopic dermatitis}

본 발명은 아토피 피부염 치료를 위한 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 아토피 치료의 효능이 우수하고 세포독성이 없어 부작용 없이 안전하게 사용할 수 있는 천연물 소재의 아토피 치료용 조성물에 관한 것이다.

아토피(Atopy) 피부염은 피부건조, 습진 등의 다양한 증상을 나타내는 소양감이 심한 재발성의 만성 피부염으로, 유전적 환경적 면역학적인 원인으로 인해 피부 가장 바깥에 있는 피부 보호벽인 각질층에 이상이 생긴 것으로 건조한 기후에서 더욱 심해지는 알레르기 질환이다. 아토피 피부염은 다양한 원인이 복잡하게 뒤엉켜 발병하고 완화와 재발을 반복한다. 아토피 소인에 의한 알레르기 질환으로 알레르기 피부염, 알레르기성비염, 천식, 알레르기성 결막염, 아토피성 두드러기 등이 있으며 이들 질환은 단독으로 또는 여러 질환이 동시에 나타날 수 있다. 알레르기 반응은 거의 대부분 비만세포를 매개로 일어나는데, 히스타민, 프로스타글란 딘, 종양괴사인자(TNF)를 포함한 화학 전달물질들이 알레르기 반응의 초기에 볼 수 있는 여러 가지 임상증상을 유발하는 원인물질들이다.

아토피 피부염은 상당히 많은 사람들이 앓고 있는데, 전 인구의 0.5~1%, 어린이의 경우 5~10%가 아토피 피부염으로 고통을 받고 있다. 환자의 50%는 두 돌 이내에 치유되나 25%는 청소년기까지 가며, 나머지 25%는 성인이 되어도 아토피 피부염이 없어지지 않고 계속된다.

아토피 피부염의 주요증상은 심한 가려움증, 피부건조, 발진, 진물, 부스럼딱지, 비늘 같은 껍질이 있는 피부(인비늘)등이다. 그 중 무엇보다도 심한 가려움증이 특징이다.

아토피 체질을 근본적으로 고칠 수 없으므로 아토피 피부염은 완치를 목표로 하기보다는 유발 인자를 피하고 적절한 치료를 통해 조절해나가는 질병이라고 할 수 있다. 아토피 피부염에 대한 처방은 스테로이드제, 항히스타민제, 항생제 등과 같은 약물요법이 주로 이루어지고 있다. 스테로이드제(부신피질호르몬제)는 크게 소염작용과 면역억제 작용이 있으며 효과가 우수하지만, 장기간 바르면 피부약화, 전신 호르몬증상, 중독성 등의 부작용이 나타날 수 있다. 항히스타민제는 비만세포에서 히스타민이 유리되지 못하도록 하여 가려운 증상을 경감시키나 임시방편으로 사용하는 것으로 장기간 복용 시 불면, 불안, 식욕감퇴 등의 부작용이 있을 수 있다. 항생제는 최근 슈퍼 박테리아의 출현으로 남용으로 인한 폐해가 심각하게 대두되고 있다. 따라서 아토피 피부염에 효과가 있으면서도 부작용이 없는 새로운 개념의 아토피 피부염 치료 조성물이 요구되고 있다.

잠분은 누에의 배설물로 유기산 84%, 회분 9~16% 그리고 총 질소량 2~4%를 함유하는 것으로 밝혀졌고, 또 아미노산에는 히스티딘, 류신, 라이신, 베타시토스테롤 및 콜레스테롤 등의 스테롤류가 많고 그 외에 요산, 인산, 칼륨, 칼슘, 비타민 A, B군, 식물성장 호르몬 및 엽록소 등이 함유되어 있다. 잠분은 성분이 따뜻하고 독성이 없으며 여러 가지 영양이 풍부하기 때문에 가축의 사료로 많이 이용될 뿐 아니라 한방의 민간약으로 이용되는 경우도 많았다. 또한 진정, 진통 및 진경 등에 사용하며 당뇨, 류마티스, 두통, 관절통, 신경통, 요부 냉통, 중풍으로 인한 반신불수증 및 옴에도 효과가 있다고 전한다. 중국에서는 잠분 베개를 베고 자면 두통이나 류머티즘, 신경통, 불면증, 노인의 시력감퇴를 막아주고 숙면을 할 수 있으며, 노안을 회복시키는데 대단히 좋은 효력을 갖고 있다고 전해지고 있다. 최근에는 잠분으로부터 폴피린이라는 물질을 분리하여 광과민성 암 치료제로 이용하는 연구가 매우 활발하게 진행되고 있다. 그러나 잠분은 누에나 뽕잎과는 달리, 이용가치가 낮게 평가되어 있으며, 아토피에 관한 효능 역시 아직 알려져 있지 않다.

본 발명은 상기와 같은 종래기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로, 부작용이 없고 안전하면서도 아토피 치료효과가 우수한 아토피 치료용 조성물을 제공하고자 하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 다른 목적은 현재 이용가치가 낮게 평가되어 있는 천연물인 잠분의 보다 부가가치가 높은 활용방안을 제공하는 것이다.

전술한 목적을 달성하기 위한 본 발명은 잠분 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 치료용 조성물인 것을 특징으로 한다.

본 발명의 실시 예에서는 80% MeOH을 사용한 추출물에 대해서만 그 결과를 기재하였으나, C1~C3의 저급 알콜의 수용액을 사용하여 얻은 추출물도 유사한 결과를 얻을 수 있었다. C1~C3의 저급 알콜로는 메탄올, 에탄올, 프로파놀 및 이소프로파놀을 들 수 있다. 알콜 수용액 중 알콜의 부피비는 50~90%(v/v)인 것이 바람직하며, 사용한 알콜의 종류에 따라 혼합비를 가변하는 것은 당연하다.

본 발명에 의한 잠분 추출물의 아토피 피부염에 대한 효능을 간접적으로 측정하고 예측하기 위하여 in-vitro 시험을 실시하였다. 시험 결과에 의미를 부여할 수 있도록 인간비만세포(HMC-1)를 다른 처리 없이 배양한 군과 세포 활성을 위하여 PMA와 A23817을 처리하여 배양한 군, HMC-1에 PMA, A23187 및 조성물 또는 현재 전 세계적으로 가장 널리 쓰이는 면역억제제 약물인 Cyclosporin A(사이폴엔, 종근당) 주사액을 처리한 군을 상호 비교하였다. 상기 각 군의 배양액에서 알레르기 질환과 관련된 단백질을 정량하는 방법에 의해 in-vitro 시험을 진행하였다.

아토피 피부염은 알레르기 질환의 일종으로서, 알레르기 반응에 의해 종양괴사인자(Tumor Necrosis Factor; TNF-α)와 인터루킨(Interleukin; IL)과 같은 각종 사이토카인의 발현이 증대되므로, 본 발명에 의한 조성물의 처리에 따른 사이토카인의 발현량의 변화를 측정하였다.

하기 실시 예에서 확인할 수 있듯이, 잠분 추출물은 PMA와 A23817에 의해 활성화된 각종 사이토카인의 발현을 효과적으로 억제하여 본 발명의 잠분 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물이 아토피치료에 효과가 있음을 확인할 수 있었다. 잠분 추출물을 50㎍/㎖의 농도로 투여하였을 때 종래의 대표적인 치료제인 사이폴엔보다 우수한 치료 효과를 얻을 수 있었다. 특히, IL-6, MCP-1 및 MIP-1a의 억제효과가 탁월하였다.

본 발명에 의한 조성물의 안전성을 확인하기 위하여 in vitro에서 세포독성을 측정하였다. 잠분 추출물을 50㎍/㎖의 농도로 투여하는 경우에는 세포 독성이 관측되지 않았다.

본 발명에 의한 상기 추출물은 아토피 피부염 치료약제 및 치료·예방용 건강 기능식품으로 활용될 수 있으며 용법에 따라 연고나 로션, 크림, 세안제 등의 외용제 형태를 취할 수도 있고, 경구 투여용 약제, 기능성 식품 등의 내복제 형태를 취할 수도 있다.

본 발명의 추출물 및 그로부터 분리된 화합물이 치료용 약제 및 식품으로 이용되기 위해서는 약제학적 및 식품학적 분야에서 공지의 방법에 의하여 제조될 수 있으며, 그 자체 또는 약학적 또는 식품학적으로 허용되는 담체(carrier), 부형제(forming agent), 희석제 등과 혼합하여 분말, 과립, 정제, 캡슐제 또는 주사제 등의 제형으로 제조되어 사용될 수 있다. 또한, 이들을 경구 또는 비경구로 투여 용 제제와 같은 단위투여형 또는 수회투여형 제제로 제형화하여 아토피 치료 효과를 갖는 치료 및 예방제로 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 유효성분의 투여량은 통상적으로 10~200mg/kg/일(day)의 농도로 투여하는 것이 바람직하다. 그러나 실제투여량은 경구 투여 형태, 체내에서 활성성분의 흡수도, 물 활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증정도 등에 따라 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 하며, 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

이상과 같이 본 발명의 잠분 추출물에 의하면 부작용이 없고 안전하면서도 아토피 치료 효과가 우수하여 아토피 치료용 조성물로 이용될 수 있다.

또한 잠분은 우수한 효능을 갖고 있음에도 불구하고 이용가치가 낮게 평가되어 있는 천연물로서 본 반명의 아토피 치료용 조성물은 보다 부가가치가 높은 활용방안으로 잠업 농가의 수입에 도움이 될 수 있다.

이하 실시 예를 통하여 본 발명을 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시 예는 예시적인 목적일 뿐 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

실시예

실시예 1 : 추출물의 제조

1) 잠분 추출물의 제조

잠분 (농촌진흥청 농업과학기술원 농업생물부 잠사양봉소재과) 시료 500 g을 3 L 삼각 플라스크에 넣은 후, 80%(용매의 부피비) MeOH 수용액 2 L를 가하고, 실온에서 10시간 추출하였다. 추출액을 여과하고 남은 잔사를 다시 3 L 삼각 플라스크에 넣고 80% MeOH 2 L로 재추출하여 여과하였다. 1차 추출 여액과 2차 추출여액을 합한 후 40℃ 이하에서 회전농축기로 감압하에서 농축하여, 추출물 350 g을 얻었다.

실시예 2 : 세포배양액 중 사이토카인 농도 분석

시험관내에서 천연물의 아토피치료 효과를 확인하기 위하여, HMC-1 단독배양 (M), HMC와 PMA/A23187 공동배양 (PD) 및 HMC와 PMA/A23187 및 실시예 1에서 제조한 천연추출물을 공동 배양하였다. PMA(phorbol myristate acetate)와 A23187은 각각 50nM, 1μM의 농도로 사용하였다. 대조군으로 Cyclosporin (C)을 10nM의 농도로 HMC 및 PMA/A23187과 공동 배양하여 천연물이 나타내는 효과와 비교하였다. HMC-1의 배양은 10% FBS가 포함되지 않은 IMEM 배지에 CO₂를 5% 농도로 일정하게 유지하면서 37℃에서 8시간 동안 실시하였다.

배양된 각 실험군의 세포 배양액을 1500rpm에서 5분간 원심 분리하여 세포 상등액을 수거한 후 ELISA 방법에 의해 각종 사이토카인의 분비 농도를 측정하였 다. 억제율은 하기 수식 1에 의해 구하였다.

<수식 1>

1) TNF-α 분비량 측정

상기 방법에 의해 각 시험군별 배양액의 TNF-α의 분비량을 확인하고 그 결과를 표 1 및 도 1에 나타내었다.

잠분 추출물은 100㎍/㎖의 농도에서 98%의 억제율을 나타냈고, 1/4의 농도인 25㎍/㎖에서도 57%의 억제효과를 나타내었다.

2) RANTES 분비량 확인

각 시험군별 배양액의 RANTES의 분비량을 확인하고 그 결과를 표 2 및 도 2에 나타내었다.

잠분 추출물은 100㎍/㎖의 농도에서 78%의 억제율을 나타냈고, 1/4의 농도인 25㎍/㎖에서는 55%의 억제효과를 나타냈다.

3) IL-6 분비량 확인

각 시험군별 배양액의 IL-6 분비량을 확인하고 그 결과를 표 3 및 도 3에 나타내었다.

잠분 추출물은 100㎍/㎖의 농도에서 95%의 억제율을 나타냈고, 1/4의 농도인 25㎍/㎖에서는 78%의 높은 억제효과를 나타냈다.

4) MCP-1 분비량 확인

각 시험군별 배양액의 MCP-1 분비량을 확인하고 그 결과를 표 4 및 도 4에 나타내었다.

잠분 추출물은 100㎍/㎖의 농도에서 100% 이상의 억제율을 나타냈고, 1/4의 농도인 25㎍/㎖에서는 38%의 억제효과를 나타냈다.

5) MIP-1a 분비량 확인

각 시험군별 배양액의 MIP-1a 분비량을 확인하고 그 결과를 표 5 및 도 5에 나타내었다.

잠분 추출물은 100㎍/㎖의 농도에서 100% 의 억제율을 나타냈고, 1/4의 농도인 25㎍/㎖에서는 28%의 억제효과를 나타냈다.

6) IL-3 분비량 확인

각 시험군별 배양액의 IL-3 분비량을 확인하고 그 결과를 표 6 및 도 6에 나타내었다.

잠분 추출물은 100㎍/㎖의 농도에서 99%의 억제율을 나타냈고, 1/4의 농도인 25㎍/㎖에서는 73%의 억제효과를 나타냈다.

7) IL-10 분비량 확인

각 시험군별 배양액의 IL-10 분비량을 확인하고 그 결과를 표 7 및 도 7에 나타내었다.

잠분 추출물은 100㎍/㎖의 농도에서 84%의 억제율을 나타냈고, 1/4의 농도인 25㎍/㎖에서는 26%의 억제효과를 나타냈다.

실시예 3 : 세포 독성 분석

실험에 사용된 천연물의 세포 독성을 검사하기 위하여 실시예 2와 동일한 조건에서 배양한 후 CCK-8(Cell Counting Kit-8, Dojindo, Japan)을 이용하여 세포독성을 검사하였다. HMC-1 세포는 96well plate에 분주한 후, 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 잠분 추출물(최종농도 100, 50, 25㎍/㎖)을 8시간 각각 처리하였다. 각 well에 CCK-8 용액을 1/10의 비율로 처리하여 1시간 동안 배양하였다. 이 plate를 microplate reader (Bio-Rad, U.S.A.) 에서 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 상기 방법에 의한 세포독성 실험결과를 도 8에 도시하였다.

도 8에서 보는 것과 같이 잠분 추출물 100㎍/㎖ 농도의 경우 6%가 감소하는 것으로 나타났고, 50㎍/㎖와 25㎍/㎖ 농도의 경우에는 정상세포와 별다른 차이가 없는 것으로 확인되었다.

도 1은 본 발명에 의한 조성물이 처리된 HMC-1세포 배양액 중 TNF-α의 농도를 보여주는 그래프.

도 2는 본 발명에 의한 조성물이 처리된 HMC-1세포 배양액 중 RANTES의 농도를 보여주는 그래프.

도 3은 본 발명에 의한 조성물이 처리된 HMC-1세포 배양액 중 IL-6의 농도를 보여주는 그래프.

도 4는 본 발명에 의한 조성물이 처리된 HMC-1세포 배양액 중 MCP-1의 농도를 보여주는 그래프.

도 5는 본 발명에 의한 조성물이 처리된 HMC-1세포 배양액 중 MIP-1a의 농도를 보여주는 그래프.

도 6은 본 발명에 의한 조성물이 처리된 HMC-1세포 배양액 중 IL-3의 농도를 보여주는 그래프.

도 7은 본 발명에 의한 조성물이 처리된 HMC-1세포 배양액 중 IL-10의 농도를 보여주는 그래프.

도 8은 본 발명에 의한 조성물의 HMC-1세포에 대한 세포독성을 보여주는 그래프.

Claims (3)

1. 잠분 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 치료용 조성물.
2. 제 1 항에 있어서,

   상기 잠분 추출물은 잠분을 C1~C3의 저급 알콜의 수용액을 사용하여 추출한 것을 특징으로 하는 아토피 치료용 조성물.
3. 제 2 항에 있어서,

   상기 C1~C3의 저급 알콜의 수용액 중 알콜의 함량은 50~90%(v/v)생략인 것을 특징으로 하는 아토피 치료용 조성물.

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