KR20240097338A

KR20240097338A - 뱀딸기, 짚신나물 또는 부들의 활성분획물을 유효성분으로 포함하는 항아토피용 조성물 및 이를 포함하는 의약품 또는 화장품

Info

Publication number: KR20240097338A
Application number: KR1020220179295A
Authority: KR
Inventors: 박정호; 윤치영; 김상윤; 오은석
Original assignee: 국립한밭대학교 산학협력단
Priority date: 2022-12-20
Filing date: 2022-12-20
Publication date: 2024-06-27

Abstract

본 발명은 뱀딸기, 짚신나물 또는 부들로부터 분리한 활성분획물을 유효성분으로 포함하는 항아토피용 조성물에 관한 것으로, 이는 매우 경제적이며, 인체에 대한 독성을 나타내지 않고, 우수한 항아토피 효과를 나타내어 의약품 및 화장품에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

뱀딸기, 짚신나물 또는 부들의 활성분획물을 유효성분으로 포함하는 항아토피용 조성물 및 이를 포함하는 의약품 또는 화장품{Anti-atopic composition containing active fractions of Duchesnea chrysantha, Agrimonia pilosa or Typha orientalis as an active ingredient, and pharmaceuticals or cosmetics containing the same}

본 발명은 뱀딸기, 짚신나물 또는 부들의 활성분획물을 유효성분으로 포함하는 항아토피용 조성물 및 이를 포함하는 의약품 또는 화장품에 관한 것이다.

아토피 피부염은 유전적, 환경적, 면역학적인 요인으로 인하여 여러 면역세포들의 증식 및 이들이 분비하는 염증성 사이토카인에 의해 발생하는 질환으로, 피부 가장 바깥에 있는 피부 보호벽인 각질층에 이상이 생긴 것이다. 아토피 피부염은 건조한 기후에서 더욱 심해지는 알레르기 질환으로 완화와 재발을 반복하는 만성 재발성 질환이다.

아토피 피부염에 대한 병태생리는 아직까지 완전히 이해되고 있지 않으나, 유전적인 소인과 면역학적 또는 비면역학적 기전이 복합적으로 작용하고 있을 것으로 여겨지고 있다. 아토피 피부염의 대부분인 외인성 아토피 피부염은 특정 알레르겐에 대한 속발성 면역 반응이라기 보다는 T-세포 이상에 의한 원발성 면역반응으로 인한 것으로 면역 글로불린 E(IgE)와 연관된 면역기전에서 비롯된다고 판단된다.

현재 아토피 피부염의 치료는 일반적으로 면역억제제가 이용되는데, 대표적으로 스테로이드제, 칼시뉴린 억제제가 이용되고 있다. 또한 비만세포의 탈과립으로 분비되는 가려움증을 유발하는 히스타민의 조절을 위하여 항히스타민제가 함께 사용되고 있다.

상기 스테로이드제는 염증반응과 관련된 전사조절인자를 조절하며, 칼시뉴린 억제제는 T helper 세포의 활성 억제를 주요 기전으로 작용한다. 그러나 스테로이드는 쿠싱 증후근, 부종, 당뇨병, 골다공증, 소아의 성장장애 등 매우 다양한 부작용이 발생하며, 스테로이드제는 증상을 일시적으로 완화해 주는 효과는 뛰어나지만 장기간 사용한 환자들에게 있어서 피부가 얇아지는 현상을 일으킬 수 있고, 장기간 과량 사용시에는 결합수용체가 고갈되어 내성을 일으킬 수 있다. 항히스타민제는 일시적으로 가려운 증상을 경감시킬 수 있으나, 장기간 복용 시 불면, 불안, 식욕감퇴 등의 부작용이 나타날 수 있다. 또한 칼시뉴린 억제제는 T 세포에 대한 특이성이 없어 인체의 모든 세포에 영향을 미칠 수 있고, 따라서 신장과 간에 치명적인 부작용을 나타낼 수 있으며, 암을 유발할 수 있다고 알려져 있다. 또 다른 문제점은 상기의 의약품들은 매우 고가의 의약품으로 사용에 제약이 있을 수 있으며, 장기간 사용하기에 어려움이 따른다.

아토피 피부염의 주요증상은 심한 가려움증, 피부건조, 발진, 부스럼딱지, 비늘 같은 껍질이 있는 피부(인비늘) 등이다. 아토피 피부염을 근본적으로 고치는 것은 어려우므로 완치를 목표로 하기보다는 유발 인자를 피하고 지속적으로 적절한 치료를 하여 증상을 조절해 나가는 질병이라고 할 수 있다. 따라서 상기의 의약품들 외에 항균, 보습, 항염의 효과를 가진 부작용이 없고 비용이 저렴한 물질의 개발 및 이를 포함하는 의약품 또는 화장품 소재의 개발이 절실히 요구된다.

한국 공개특허 10-2007-0081293 한국 공개특허 10-2012-0126416

본 발명의 목적은 뱀딸기, 짚신나물 또는 부들을 물, 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물로부터 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 각각의 활성분획물에서 선택되는 하나 또는 둘 이상을 유효성분으로 포함하는 우수한 항아토피 효과를 나타내는 항아토피용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는 가격적으로 저렴하고 우수한 항아토피 효과를 나타내는 의약품 또는 화장품을 제공하는 것이다.

본 발명은 뱀딸기(Duchesnea chrysantha)를 물, C1-C4알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물로부터 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 활성분획물 A; 짚신나물(Agrimonia pilosa)을 물, C1-C4알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물로부터 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 활성분획물 B; 및 부들(Typha orientalis)을 물, C1-C4알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물로부터 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 활성분획물 C;에서 선택되는 하나 또는 둘 이상을 유효성분으로 함유하는 항아토피용 조성물을 제공한다.

상세하게 상기 항아토피용 조성물은 뱀딸기(Duchesnea chrysantha)를 물, C1-C4알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물로부터 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 활성분획물 A; 짚신나물(Agrimonia pilosa)을 물, C1-C4알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물로부터 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 활성분획물 B; 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 것일 수 있다.

상기 활성분획물 A는 메탄올 용매조건 하에서 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 6개 분획물 중 3번째 분획물이며; 상기 활성분획물 B는 메탄올 용매조건 하에서 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 4개 분획물 중 2번째 분획물일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 추출물은 뱀딸기, 짚신나물 또는 부들의 식물원료 : 용매가 1:3 내지 1:50의 중량비로 추출되는 것일 수 있으며, 상기 추출물은 조성물의 총 중량에 대하여 건조 중량으로 5 내지 30 중량% 함유하는 것을 특징으로 할 수 있다.

또한 본 발명의 일 실시예에 따른 항아토피용 조성물은 염증성 사이토카인의 발현 억제 효과를 나타내는 것일 수 있으며, 상기 염증성 사이토카인은 인터류킨-4, 인터류킨-6, 인터류킨-13, 인터류킨-31 및 TNFα에서 선택되는 하나 또는 둘 이상일 수 있다.

본 발명은 일 실시예에 따른 항아토피용 조성물을 포함하는 의약품 또는 화장품을 제공하며, 상기 화장품의 제형이 연고, 로션, 화장수, 팩 또는 에센스일 수 있다.

본 발명의 뱀딸기, 짚신나물 또는 부들을 물, 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물로부터 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 각각의 활성분획물에서 선택되는 하나 또는 둘 이상을 유효성분으로 포함하는 항아토피용 조성물은 염증, 소양증 및 알러지에 기인한 아토피 및 염증성 피부질환을 효과적으로 개선시킬 수 있다.

본 발명의 상기 항아토피용 조성물을 포함하는 의약품 또는 화장품은 우수한 항아토피 효과를 나타낼 수 있으며, 장기간 사용에도 부작용이 거의 없고, 가격적으로 저렴하여 매우 경제적일 수 있다.

도 1은 실시예 1의 각각의 분획물에 대한 RP-18-TLC 분석결과를 나타내는도이다.
도 2는 실시예 2의 각각의 분획물에 대한 RP-18-TLC 분석결과를 나타내는도이다.
도 3은 실시예 3의 각각의 분획물에 대한 RP-18-TLC 분석결과를 나타내는 도이다.

이하, 본 발명의 뱀딸기, 짚신나물 또는 부들로부터 분리한 활성분획물을 유효성분으로 포함하는 항아토피용 조성물 및 이를 포함하는 의약품 또는 화장품에 대하여 상세히 설명한다.

본 발명에서 사용되는 단수 형태는 문맥에서 특별한 지시가 없는 한 복수 형태도 포함하는 것으로 의도할 수 있다.

또한, 본 발명에서 사용되는 수치 범위는 하한치와 상한치와 그 범위 내에서의 모든 값, 정의되는 범위의 형태와 폭에서 논리적으로 유도되는 증분, 이중 한정된 모든 값 및 서로 다른 형태로 한정된 수치 범위의 상한 및 하한의 모든 가능한 조합을 포함한다. 본 발명의 명세서에서 특별한 정의가 없는 한 실험 오차 또는 값의 반올림으로 인해 발생할 가능성이 있는 수치범위 외의 값 역시 정의된 수치범위에 포함된다.

본 발명에 기재된, "포함한다"는 "구비한다", "함유한다", "가진다" 또는 "특징으로 한다" 등의 표현과 등가의 의미를 가지는 개방형 기재이며, 추가로 열거되어 있지 않은 요소, 재료 또는 공정을 배제하지 않는다.

이하, 본 발명에 대하여 구체적으로 설명한다. 이때, 사용되는 기술 용어 및 과학 용어에 있어서 다른 정의가 없다면, 이 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 통상적으로 이해하고 있는 의미를 가지며, 하기의 설명에서 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있는 공지 기능 및 구성에 대한 설명은 생략한다.

뱀딸기(Duchesnea chrysantha)는 한국, 중국 및 아시아 일부 지역에 야생하는 민간 약용 식물로 이용되어 온 다년초로서, 한방에서는 사매라고 불리며 월경불순, 염증, 해열, 중풍, 해독, 어혈 해소 등에 사용되어 왔다(이창복, 대한식물도감, 향문사, 서울, 1982, pp432). 뱀딸기 추출물 내에 포함되는 주요 생리활성 물질로는 리놀레산(linoleic acid), 베타-시토스테롤(β트리아콘타놀(triacontanol), 루페올(lupeol), 프리델린(friedelin), 베타-아미린(β쿼시트린(quercitrin) 및 엘라지 산 글리코시드(ellagic acid glycoside)인 두체시드 A(ducheside A) 및 B가 보고되어 있다. 기존의 연구 결과에서 뱀딸기 추출물은 살모넬라/마이크로좀 시스템(Salmonella/microsomal system)과 에임즈 테스트(Ames test) 상에서 돌연변이를 억제하는 항 돌연변이원성을 나타낸바 있었고(Lee와 Lin, Mutation Research, 204:229-234, 1988), 에테르 추출물에서 미생물에 대한 억제활성이 관찰되었으며(이인란, 한국생활과학연구원 논집 36:143-150, 1985), 물 추출물에서 분리된 렉틴은 면역 증강 활성을 나타내어 비장 세포 증식능을 향상시킨다고 보고된 바 있다(정가진, 충남대학교 약대 약학논문집 10:39-45, 1994). 또한, 80% 아세톤 추출물에서 분리된 페놀성 화합물은 인간 종양 세포주인 PC14와 MKN45에 대해서 세포 증식 억제 활성을 나타낸다고 보고된 바 있다(Lee, I. R. and Kim, Y.H., Arch. Pharm. Res., 9(1):1-4, 1986; Lee, I.R and Yang M.Y., Arch. Pharm. Res., 17(6):476-479, 1994A).

짚신나물(Agrimonia pilosa)은 다년생 숙근초로 장미과에 속하며 한국, 중국, 일본 등에서 서식한다. 우리나라의 경우에는 야산의 길가, 들판 등에 흔히 자라며, 선학초, 용아, 용아초, 황아초, 황용초, 지선초 등으로 부르기도 한다. 전통적으로 민간요법, 녹즙 등으로 널리 이용되어 왔고, 폐암, 간암, 식도암, 종양, 통증제거, 지형, 지사, 토혈, 혈토, 자궁출혈, 열기 등의 약용으로 널리 이용되어 왔다. 그 성분으로는 아그리모닌(agrimonin), 아그리모노라이드(agrimonolide), 탄닌(tannin), 스테롤(sterol), 유기산, 사포닌 등이 포함되어 있는 것으로 알려져 있다(정보섭 등, 향약대사전, 영림사, 636-637, 1998; Jung, M. et al., Molecules, 12(9), 2130-2139, 2007; Miyamoto, K. et al., Jpn. J. Pharmacol., 43(2), 187-195, 1987; Jung, C. H. et al., Immunol. Invest., 39(2), 159-170, 2010; Shin, W. J. et al., Microbiol. Immunol., 54(1), 11-19, 2010).

부들(Typha orientalis)은 부들과에 속하는 다년생 식물이다. 연못 가장자리 등 습지에서 잘 자란다. 높이는 1 내지 2.2 m로, 뿌리줄기가 옆으로 뻗으면서 퍼지고 원주형이며 털이 없고 밋밋하다. 열매이삭은 길이 10 내지 20 cm의 긴 타원형이며 적갈색이다. 부들은 단백질, 지방, 섬유소, 유리아미노산, 아스파라긴(asparagine), 시스틴(cystine), 아스파라긴산(aspratic acid), 글루탐산(glutamic aicd), 글루타민(glutamine) 등의 영양소를 함유하고 있으며 칼륨, 칼슘 등의 무기물도 들어있다.

상기 항아토피용 조성물은 뱀딸기(Duchesnea chrysantha)를 물, C1-C4알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물로부터 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 활성분획물 A; 짚신나물(Agrimonia pilosa)을 물, C1-C4알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물로부터 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 활성분획물 B; 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 항아토피용 조성물의 활성분획물 A는 메탄올 용매조건 하에서 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 6개 분획물 중 3번째 분획물이며; 상기 활성분획물 B는 메탄올 용매조건 하에서 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 4개 분획물 중 2번째 분획물일 수 있다.

또한 항아토피용 조성물의 활성분획물 C는 메탄올 용매조건 하에서 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 6개 분획물 중 3번째 분획물일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 추출물은 뱀딸기, 짚신나물 또는 부들의 식물원료 : 용매가 1:3 내지 1:50의 중량비로 추출되는 것일 수 있으며, 구체적으로 1:5 내지 1:30의 중량비, 보다 구체적으로 1:7 내지 1:20의 중량비로 추출되는 것일 수 있다.

일 실시예에 따른 항아토피용 조성물의 추출방법은 물, 메탄올, 에탄올 또는 이들의 혼합용매를 이용하는 것일 수 있고, 구체적으로 물 및 에탄올 혼합용매일 수 있다.

또한 상기 추출방법은 용매추출법, 초음파추출법, 여과법 및 환류추출법 등 당업계에 알려진 방법이라면 제한되지 않는다.

본 발명의 일 실시예에 따른 항아토피용 조성물의 컬럼 크로마토그래피에 이용되는 충진제는 실리카겔, RP-18 실리카겔, 이온교환수지 또는 Dianion HP-20 합성 흡착제가 이용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한 상기 컬럼 크로마토그래피에 이용되는 이동상은 헥산, 헵탄, 초산에틸, 에탄올, 메탄올, 디에틸에테르, 이소프로판올 또는 이들의 혼합용매가 이용될 수 있으며, 구체적으로 에탄올, 메탄올, 이소프로판올 또는 이들의 혼합용매, 보다 구체적으로 에탄올 또는 메탄올일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 실시예에 따른 뱀딸기, 짚신나물 또는 부들의 추출물을 컴럼 크로마토그래피를 이용하여 분리한 각각의 활성분획물에서 선택되는 하나 또는 둘 이상을 포함하는 항아토피용 조성물은 추출물을 세부 분획하여 추출물 전체에서 항아토피 효과와 상관없는 불필요하거나 상충효과가 있는 물질을 효과적으로 제거할 수 있어, 이의 항아토피 효과를 현저하게 향상시킬 수 있다.

상기 추출물은 조성물의 총 중량에 대하여 건조 중량으로 5 내지 30 중량% 함유하는 것을 특징으로 할 수 있으며, 구체적으로 7 내지 25 중량%, 보다 구체적으로 9 내지 20 중량%일 수 있다.

본 발명은 일 실시예에 따른 항아토피용 조성물을 포함하는 의약품 또는 화장품을 제공하며, 상기 항아토피용 조성물은 약학적으로 사용가능한 담체, 분산제, 현탁화제, 또는 안정화제 등을 더 포함할 수 있으며, 화장품, 목욕용품, 비누, 의약품 연고류, 동물 의약품 또는 팩 제품의 원료로 사용할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 항아토피용 조성물을 포함하는 의약품은 임상 투여시에 비경구 투여가 가능하며, 일반적인 의약품제제, 예를 들어 용액제, 현탁제, 스프레이제, 패취제, 패드제, 크림제, 연고제, 겔제, 정제 또는 환제의 형태로 사용될 수 있다.

상기 용액제는 유효 화합물 이외에 통상의 부형제, 예를 들면 용매, 가용화제 및 유화제, 예를 들면 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질알코올, 벤질벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 디메틸포름아미드, 오일, 특히 면실유, 낙화생유, 동백유, 알로에베라, 글리세린, 옥배유, 올리브 유, 피마자유, 아몬드유 및 참깨유, 글리세롤, 글리세롤포름알코올, 테트라히드로푸르푸릴알코올, 폴리에틸렌글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르, 또는 이들 물질의 혼합물을 포함할 수 있으며, 보존제로서 메틸- 또는 프로필-p-히드록시벤조에이트 또는 솔브산 등을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 현탁제는 유효 화합물 이외에 통상의 부형제, 예를 들면 액상 희석제(물, 에탄올, 프로필렌글리콜 및 폴리에틸렌글리콜), 현탁제(에톡실화 이소스테아릴알코올, 폴리옥시에틸렌소르비톨, 소르비탄에스테르, 셀룰로스유도체 및 수소화 식용유지), 미세결정성셀룰로오스, 알루미늄메타히드록시드, 벤토나이트, 한천, 트라가칸트 및 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 또는 이들 물질의 혼합물을 함유할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 연고제, 크림제 및 겔제는 유효 화합물 이외에 통상의 부형제, 예를 들면 동물성 및 식물성 지방, 왁스 파라핀, 전분, 타르가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 규산, 활석, 산화 아연 또는 이들의 혼합물을 함유할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한 본 발명의 일 실시예에 따른 투여방법은 일반적으로 환부에 도포하는 방법이 사용될 수 있으며, 제형에 따라 바람직한 투여방법을 선택할 수 있다. 본 발명의 조성물의 일일 투여량은 투여대상, 투여방법, 증상에 따라 결정될 수 있다. 투여회수는 1일 2회 이상이 바람직하나, 증상 정도에 따라 투여 회수 또한 조절될 수 있다. 즉, 상기 투여방법, 투여량 및 투여회수들은 특히 치료할 객체의 체질 특이성 및 체중, 질병의 종류 및 심도, 제형의 성질, 의약품 투여의 성질, 투여기간 또는 투여간격을 고려해서 변화시킬 수 있다.

아토피를 효과적으로 개선하기 위해서는 적합한 외용 제형을 선택하는 것이 중요하다. 아토피를 개선하기 위해 본 발명의 항아토피용 조성물을 적절히 희석하여 피부에 직접 도포할 수도 있으며, 환부에 효과적으로 적용될 수 있는 연고제로 도포할 수 있다.

본 발명의 연고제는 상기 항아토피용 조성물을 무기물질과 배합한 다음, 이를 지용성 기제로 코팅하여 제조한다. 상기 무기물질은 항균성, 소염효과, 표피재생 효과 등이 우수한 소재를 사용하는 것이 바람직하고, 이들의 구체적인 예로는 산화아연, 탄산아연, 산화철 등이 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 항아토피용 조성물을 포함하는 화장품의 제형은 특별히 한정되는 바가 없으며, 연고, 로션, 화장수, 팩 또는 에센스일 수 있으며, 예를 들어, 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤, 로션, 겔, 패취 또는 분무제와 같은 것일 수 있다.

이하, 구체적인 실시예를 통해 본 발명에 따른 뱀딸기, 짚신나물 또는 부들로부터 분리한 활성분획물을 유효성분으로 포함하는 항아토피용 조성물 및 이를 포함하는 의약품 또는 화장품에 대하여 더욱 상세히 설명한다.

다만 하기 실시예는 본 발명을 상세히 설명하기 위한 하나의 참조일 뿐 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니며, 여러 형태로 구현될 수 있다. 또한 본 발명에서 설명에 사용되는 용어는 단지 특정 실시예를 효과적으로 기술하기 위함이고, 본 발명을 제한하는 것으로 의도되지 않는다.

[실시예 1] 활성분획물 A의 제조

채취하여 건조한 뱀딸기(Duchesnea chrysantha)를 분쇄한 건조분말 100 g 및 80 % 에탄올 1L를 반응기에 넣고 상온에서 72 시간 동안 추출하였다. 감압여과 및 감압농축을 하여 추출물 A 10 g을 얻었다.

상기 추출물 A 10 g을 80 % 에탄올 30mL에 용해하여 메탄올 및 RP 18-silica로 충진된 open column에 로딩하였다. 메탄올을 이동상으로 하여 6개의 분획물을 수득하였으며, 각각의 분획물에 대한 RP-18-TLC 분석결과(전개용매 메탄올)를 도 1에 나타내었다. 상기 6개의 분획물 중 3번째의 분획물을 감압농축하여 0.4g의 활성분획물 중 A를 얻었다.

[실시예 2] 활성분획물 B의 제조

채취하여 건조한 짚신나물(Agrimonia pilosa)을 분쇄한 건조분말 100 g 및 80 % 에탄올 1L을 반응기에 넣고 상온에서 72 시간 동안 추출하였다. 감압여과 및 감압농축을 하여 추출물 B 10 g을 얻었다.

상기 추출물 B 10 g을 80 % 에탄올 30 mL에 용해하여 메탄올 및 RP 18-silica로 충진된 open column에 로딩하였다. 메탄올을 이동상으로 하여 4개의 분획물을 수득하였으며, 각각의 분획물에 대한 RP-18-TLC 분석결과(전개용매 메탄올)를 도 2에 나타내었다. 상기 4개의 분획물 중 2번째의 분획물을 감압농축하여 0.55 g의 활성분획물 중 B를 얻었다.

[실시예 3] 활성분획물 C의 제조

채취하여 건조한 부들(Typha orientalis)을 분쇄한 건조분말 100g 및 80 % 에탄올 1L을 반응기에 넣고 상온에서 72 시간 동안 추출하였다. 감압여과 및 감압농축을 하여 추출물 C 10 g을 얻었다.

상기 추출물 C 10 g을 80 % 에탄올 30 mL에 용해하여 메탄올 및 RP 18-silica로 충진된 open column에 로딩하였다. 메탄올을 이동상으로 하여 6개의 분획물을 수득하였으며, 각각의 분획물에 대한 RP-18-TLC 분석결과(전개용매 메탄올)를 도 3에 나타내었다. 상기 6개의 분획물 중 3번째의 분획물을 감압농축하여 1g의 활성분획물 중 C를 얻었다.

[비교예 1] 추출물 A의 제조

채취하여 건조한 뱀딸기(Duchesnea chrysantha)를 분쇄한 건조분말 100 g 및 80 % 에탄올 1L을 반응기에 넣고 상온에서 72 시간 동안 추출하였다. 감압여과 및 감압농축을 하여 추출물 A 10 g을 얻었다.

[비교예 2] 추출물 B의 제조

채취하여 건조한 짚신나물(Agrimonia pilosa)을 분쇄한 건조분말 100g 및 80 % 에탄올 1L을 반응기에 넣고 상온에서 72 시간 동안 추출하였다. 감압여과 및 감압농축을 하여 추출물 B 10 g을 얻었다.

[비교예 3] 추출물 C의 제조

[실험예 1] 활성분획물의 세포독성도 확인

상기 실시예 1 내지 5의 세포독성 여부를 확인하기 위하여 비만세포주인 HMC-1 세포에 무처리구, 실시예 1 내지 5를 1 μg/mL, 10 μg/mL 처리하여 72시간 후 세포독성도(MTT assay)를 확인하였다.

HMC-1 세포에 대한 시료의 세포독성을 측정하기 위하여 Blois(1958) 방법의 세포독성도(MTT assay)를 이용하였다. 상기 세포독성도(MTT assay)는 탈수소 효소작용에 의하여 노란색의 수용성 기질인 MTT 테트라졸리움을 청자색을 띄는 비수용성의 MTT 포마잔(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide)으로 환원시키는 미토콘드리아의 능력을 이용하는 검사법이다. MTT formazan의 흡광도는 550 nm의 파장에서 최대가 되며, 이 파장에서 측정된 흡광도는 살아있고 대사가 왕성한 세포의 농도를 반영한다.

각각 HMC-1 세포를 5.0 × 10⁴ cell/well 농도로 96웰 플레이트에 130 μL씩 분주하고, 일정농도(최종농도 1 μg/mL, 10 μg/mL)로 조정한 시료를 웰 플레이트에 14.5 μL씩 첨가한 다음 37 ℃, 5 % CO₂ 배양기에서 24 시간 동안 배양하였다. 배양 후 인산 생리식염수에 5 μg/mL 농도로 제조한 MTT 용액을 한 웰 당 14.5 μL씩 첨가하여 MTT가 생존 세포의 효소 작용에 의해 환원되도록 4 시간 더 배양하였다. 배양 후 각 웰 당 DMSO 108.5 μL를 첨가해 생성된 formazan 결정을 용해시키고 ELISA reader로 550 nm에서 흡광도를 측정하였다. Blank로서는 각 시료에 세포 대신에 배지만을 넣은 후 동일하게 실험하여 하기 식 1에 따라 세포독성을 분석하여 표 1에 나타내었다.

[식 1]

세포독성(%)=(1-(실험군흡광도-blank흡광도)/대조군흡광도) x 100

	대조군	실험군
농도(μg/mL)	0	1	10
실시예 1	100	99.3	98.4
실시예 2	100	99.7	97.8
실시예 3	100	100.1	98.0

상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1 내지 5의 세포독성도는 무처리구에 비하여 세포 생존율이 감소하지 않아, 본 발명의 처리농도에서 세포에 대한 독성을 나타내지 않는 것을 확인하였다.

[실험예 2] 사이토카인의 발현 억제 확인

HMC-1 세포에 본 발명의 실시예 1 내지 3 및 비교예 1 내지 3을 1.0 μg/mL로 처리한 후, 1시간 뒤 50 ng/mL PMA(phorbol 12-myristate 13-acetate) 및 CaI(Calcium ionophore A23187)를 24시간 동안 처리한 다음 ELISA를 이용하여 상층액에서 TNF-α, IL-4, IL-6, IL-13, IL-31의 양을 측정하였다.

PMA와 CaI로 자극된 HMC-1 세포에서 대조군과 비교하여 비교예 및 실시예에서 사이토카인의 발현이 억제되는 것을 확인하였으며, 특히 실시예가 비교예보다 50 내지 90 % 억제되는 결과를 나타내어, 본 발명의 실시예가 보다 우수한 사이토카인의 발현 억제 효과를 나타내는 것을 알 수 있다.

상기 결과로부터 본 발명의 항아토피용 조성물은 아토피와 관련된 사이토카인의 우수한 발현 억제 효과를 나타내는 것을 알 수 있으며, 컬럼 크로마토그래피 과정을 통하여 세부 분획화로 천연물 추출물로부터 불필요하거나 상충효과가 있는 물질을 효과적으로 제거하여 이의 효능이 현저하게 향상되는 것을 알 수 있다.

또한 본 발명의 항아토피용 조성물을 포함하는 의약품 또는 화장품은 부작용이 없고, 가격적으로 저렴하여 경제적이며, 항염 및 항소양 관련 인자의 활성 억제 효과가 우수하여, 가려움증 완화 및 개선이 뛰어난 항아토피용 의약품 또는 화장품으로 이용될 수 있다.

이상과 같이 본 발명에서는 특정된 사항들과 한정된 실시예 및 비교예에 의해 설명되었으나 이는 본 발명의 보다 전반적인 이해를 돕기 위해서 제공된 것일 뿐, 본 발명은 상기의 실시예에 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 이러한 기재로부터 다양한 수정 및 변형이 가능하다.

따라서, 본 발명의 사상은 설명된 실시예에 국한되어 정해져서는 아니되며, 후술하는 특허청구범위뿐 아니라 이 특허청구범위와 균등하거나 등가적 변형이 있는 모든 것들은 본 발명 사상의 범주에 속한다고 할 것이다.

Claims

뱀딸기(Duchesnea chrysantha)를 물, C1-C4알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물로부터 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 활성분획물 A;
짚신나물(Agrimonia pilosa)을 물, C1-C4알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물로부터 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 활성분획물 B; 및
부들(Typha orientalis)을 물, C1-C4알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물로부터 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 활성분획물 C;에서 선택되는 하나 또는 둘 이상을 유효성분으로 함유하는 항아토피용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 항아토피용 조성물은 뱀딸기(Duchesnea chrysantha)를 물, C1-C4알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물로부터 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 활성분획물 A;
짚신나물(Agrimonia pilosa)을 물, C1-C4알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물로부터 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 활성분획물 B; 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 것인, 항아토피용 조성물.
제2항에 있어서,
상기 활성분획물 A는 메탄올 용매조건 하에서 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 6개의 분획물 중 3번째 분획물이며;
상기 활성분획물 B는 메탄올 용매조건 하에서 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 수득한 4개의 분획물 중 2번째 분획물인, 항아토피용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 추출물은 뱀딸기, 짚신나물 또는 부들의 식물원료 : 용매가 1:3 내지 1:50의 중량비로 추출되는 것인, 항아토피용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 추출물은 조성물의 총 중량에 대하여 건조 중량으로 5 내지 30 중량% 함유하는 것을 특징으로 하는, 항아토피용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 항아토피용 조성물은 염증성 사이토카인의 발현 억제 효과를 나타내는 것인 항아토피용 조성물.
제6항에 있어서,
상기 염증성 사이토카인은 인터류킨-4, 인터류킨-6, 인터류킨-13, 인터류킨-31 및 TNFα에서 선택되는 하나 또는 둘 이상인, 항아토피용 조성물.
제1항 내지 제7항에서 선택되는 어느 한 항에 따른 항아토피용 조성물을 포함하는 의약품.
제1항 내지 제7항에서 선택되는 어느 한 항에 따른 항아토피용 조성물을 포함하는 화장품.
제9항에 있어서,
상기 화장품의 제형이 연고, 로션, 화장수, 팩 또는 에센스인 화장품.