MD4296C1 - Preparat din larve de Tenebrio molitor cu acţiune antioxidantă, procedeu de obţinere a acestuia şi produs farmaceutic pe baza lui - Google Patents

Abstract

Invenţia se referă la domeniul farmaceutic, şi anume la un preparat din larve de Tenebrio molitor cu acţiune antioxidantă, la un procedeu de obţinere a acestuia şi la un produs farmaceutic pe baza lui.Preparatul obţinut din biomasa larvelor de Tenebrio molitor, conform invenţiei, conţine: extract hidroalcoolic liofilizat - 45…80% şi ulei de vaselină - restul, şi manifestă activitate de inhibiţie a peroxidării lipoproteinelor CI50% de 16 mg/ml şi a radicalului oxidului nitric CI50% de 20 mg/ml.Procedeul de obţinere a preparatului, conform invenţiei, constă în aceea că se cresc larvele de Tenebrio molitor pe un mediu nutritiv artificial, apoi se colectează larvele de ultima vârstă, se spală, se dezinfectează cu raze UV, se congelează-decongelează şi se omogenizează. Biomasa omogenizată se extrage hidric timp de 60…90 min, apoi cu etanol de 70%, extractele se concentrează prin evaporare în vid, se combină, se liofilizează şi se amestecă cu ulei de vaselină.Produsul farmaceutic cu acţiune antioxidantă sub formă de supozitoare rectale conţine, pentru un supozitor cu masa de 2 g: preparat din larve de Tenebrio molitor în ulei de vaselină - 0,25 g şi gliceride semisintetice - 1,75 g.

Description

Invenţia se referă la domeniul farmaceutic, şi anume la un preparat din larve de Tenebrio molitor cu acţiune antioxidantă, la un procedeu de obţinere a acestuia şi la un produs farmaceutic pe baza lui.

Procedeele de obţinere a preparatelor entomologice care manifestă efect benefic în tratamentul hiperplaziei benigne de prostată includ mai multe etape, principalele fiind: selectarea materiei prime în corespundere cu scopul şi destinaţia preparatului; colectarea materiei prime destinate extragerii substanţelor bioactive; extragerea principiilor de valoare terapeutică din materia primă în condiţii care asigură păstrarea structurilor native şi a activităţii înalte a principiilor bioactive componente; fabricarea formelor farmaceutice corespunzătoare destinaţiei preparatului medicamentos.

Este cunoscut un preparat entomologic obţinut din pupe şi larve de ultima vârstă de Lymantria dispar şi procedeul de obţinere a compoziţiei farmaceutice sub formă de supozitoare sau ovule, pentru tratarea hemoroizilor, adenomului de prostată, fibromului uterin [1]. Conform sursei indicate, fabricarea compoziţiei farmaceutice include următoarele etape de lucru: colectarea pupelor şi larvelor de ultima vârstă ale omizii păroase a stejarului (Lymantria dispar) de pe tulpinile stejarilor şi ale plopilor afectaţi; spălarea materialului biologic şi resuspendarea lui în soluţie fiziologică; filtrarea şi esorarea materialului biologic; opţional - congelarea materialului până la utilizarea ulterioară; măcinarea materialului până la particule de 9…12 µm; filtrarea prin filtrul Bucker cu placă având 200 orificii pe cm2; atomizarea în vid a extractului obţinut la temperatura de 130…140°C la intrare şi 85…90°C la ieşire sau liofilizarea lui timp de 24…30 ore cu obţinerea substanţei active pentru producerea formei farmaceutice; fabricarea compoziţiei farmaceutice ce constă din 1% de substanţă biologic activă sub formă de extract de Lymantria dispar, 82% de unt de cacao, 10% de apă distilată, 2,68% de helix, 2% de laurat, 1,3% de 2-bromo-2-nitropropan, 1% de poligliceril-4 izostearat cetil PEG/PPG dimethicane 10/1 şi 0,02% de dial; condiţionarea acestei formule prin topirea şi omogenizarea amestecului obţinut cu temperatura de 60°C şi turnarea ei în forme de supozitoare sau ovule şi ambalarea lor.

Dezavantajul acestui procedeu constă în aceea că materialul biologic este obţinut prin colectare din natură, în aşa mod fiind imposibil controlul asupra componenţei substanţei active. Afară de aceasta, colectarea materialului biologic din natură nu permite de a planifica un anumit volum de producere, fiind dependent de condiţiile de mediu şi de fluctuaţiile numerice ale speciei Lymantria dispar.

Mai este cunoscut un preparat entomologic antiinflamator şi antioxidant, destinat tratamentului hiperplaziei benigne de prostată, şi procedeul de obţinere a lui [2]. Conform celor indicate, preparatul entomologic antiinflamator şi antioxidant obţinut din larve de insecte din ordinul Lepidoptera, genul Lymantria prin mărunţirea lor în soluţie fiziologică până la formarea unei mase omogene, filtrarea acesteia şi eliminarea apei prin liofilizare, conţine următoarele componente: proteine - 265,0…292,0 mg/g, lipide - 140,0 mg/g, colesterol - 0,1 mg/g, trigliceride - 90,0 mg/g, amilază - 5,1 UI/g, lipază - 100,0 mUI/g, antioxidanţi - 16,86 mg/g, aminoacizi esenţiali şi semiesenţiali - 379,7 mg/g. Acţiunea antioxidantă a preparatului este determinată de compuşii antioxidanţi hidrosolubili şi se manifestă prin inhibarea peroxidării lipidelor [2].

Dezavantajul acestui procedeu constă în faptul că nu este indicată procedura de cultivare a insectelor în scopul obţinerii biomasei de larve, substanţa activă este extrasă cu apă, de aceea preparatul conţine doar componente antioxidante hidrosolubile. De asemenea, nu este descrisă tehnologia de fabricare a formei medicamentoase finale, menţionându-se doar că forma finală farmaceutică este cea de supozitoare rectale.

Soluţia cea mai apropiată o constituie un preparat entomologic obţinut din biomasa larvelor de prima vârstă de Lymantria dispar prin extracţie hidroetanolică. Larvele de Lymantria sunt crescute în condiţii de laborator pe un mediu din făină de grâu, mălai, masă vegetală uscată, lapte praf, drojdii uscate, glicerol şi miere. Biomasa colectată de larve de Lymantria dispar de prima vârstă se spală cu 4 volume de apă distilată, repetând procedura de 4 ori. După aceasta biomasa se dispersează timp de 15 min într-o soluţie de NaCl, 0,9%. Larvele se congelează. Biomasa congelată se supune decongelării prin aducerea treptată la temperatura camerei. Utilizând un mojar cu cuţite de inox biomasa se amestecă cu viteza de 5000 rot/min şi se fărâmiţează până la particule cu dimensiuni de 9…12 µm. Masa obţinută este în continuare supusă extragerii principiilor bioactive cu soluţie hidroetanolică de 20%. Extragerea durează 60 min în condiţii de temperatură constantă (18…20°C) la agitaţie permanentă pe un agitator orbital cu viteza de rotaţie de 280 rot/min (alternativ 240…320 rot/min), extractul se separă de biomasă prin filtrare în vid, după care urmează liofilizarea lui. Produsul farmaceutic obţinut sub formă de supozitoare rectale conţine 60% extract liofilizat [3].

Dezavantajul complexului activ obţinut prin extragere hidroetanolică din larve de Lymantria constă în faptul că acesta are forma finală de extract liofilizat, procesarea ulterioară a căruia duce la modificarea esenţială a activităţii antioxidante a produsului final.

Dezavantajul procedeului constă în faptul că în calitate de materie primă pentru extragere se utilizează biomasa larvelor de prima vârstă de dimensiuni mici, ceea ce implică scumpirea tehnologiei finale; se efectuează o singură extracţie hidroetanolică cu o durată de 60 min, din care cauză rămân nevalorificate unele dintre componentele active ale biomasei; mediul utilizat pentru creşterea larvelor diferă de la o partidă la alta, în special din contul masei vegetale utilizate, iar substanţa activă este stocată sub formă de liofilizat.

Dezavantajul produsului farmaceutic constă în aceea că în componenţa lui intră o cantitate nejustificat de mare de extract liofilizat din larve de Lymantria, ceea ce ridică esenţial costul produsului final.

Problema pe care o rezolvă prezenta invenţie constă în elaborarea unui complex entomologic nou care să asigure o activitate antioxidantă specifică înaltă, a unui procedeu de obţinere a acestuia, care include realizarea succesivă a tuturor etapelor tehnologice: creşterea insectelor, obţinerea extractului total (hidric şi etanolic), obţinerea complexului entomologic activ, controlul cantităţii şi al calităţii biomasei obţinute prin utilizarea unui mediu nutritiv artificial standardizat şi obţinerea unui preparat farmaceutic în baza acestui extract cu proprietăţi antioxidante performante şi eficiente în tratamentul hiperplaziei benigne de prostată.

Esenţa invenţiei constă în aceea că se propune un preparat din larve de Tenebrio molitor cu acţiune antioxidantă, care conţine în % mas: extract hidroalcoolic liofilizat din larve de Tenebrio molitor - 45…80% şi ulei de vaselină - restul şi manifestă activitate de inhibiţie a peroxidării lipoproteinelor CI50% de 16 mg/ml şi a radicalului oxidului nitric CI50% de 20 mg/ml.

De asemenea, se mai revendică un procedeu de obţinere a preparatului din larve de Tenebrio molitor cu acţiune antioxidantă, care constă în aceea că se cresc larvele de Tenebrio molitor pe un mediu nutritiv standardizat cu următoarea componenţă, în g/kg:

extract din porumb galben 86,0…98,0 extract din porumb roşu 72,0…84,0 amidon 500,0…540,0 zaharoză 10,2…12,5 maltoză 8,0…8,5 gleadină 20,0…22,0 tocoferol acetat (vitamina E) 0,010…0,015 vitamina C 0,080…0,085 riboflavină (vitamina B2) 0,0010…0,0015 pantotenat de calciu (vitamina B5) 0,004…0,008 tiamină (vitamina B1) 0,001…0,003 piridoxină (vitamina B6) 0,005…0,008 biotină (vitamina B7) 0,001…0,003 niacină (vitamina B3) 0,0015…0,0020 NaNO3 0,6…0,8 KH2PO4 1,2…1,5 NaCl 1,3…1,7 CaCl2 0,01…0,02 MgSO4 .7H2O 0,005…0,010 ZnSO4 .7H2O 0,005…0,01 MnSO4 .5H2O 0,007…0,010 CuSO4 .5H2O 0,0007…0,0010 FeCl3 .6H2O 0,010…0,015 EDTA 0,006…0,007 apă purificată 300,0…230,0,

ulterior larvele de ultima vârstă se spală, se dezinfectează cu raze UV, se congelează la temperatura de -18°C, se decongelează până la nivelul temperaturii camerei, se omogenizează la viteza de 5000 rot/min până la obţinerea particulelor cu dimensiuni de 9…12 µm, se extrage biomasa cu apă distilată în raport masic de 100 g de biomasă uscată la 2,0…2,1 l de apă distilată timp de 60…90 min la temperatura de 18…20°C la agitare pe un agitator orbital cu viteza de rotaţie de 240…320 rot/min, se separă extractul prin filtrare în vid şi se concentrează prin evaporare în vid, biomasa se extrage repetat cu alcool etilic de 70% în raport de 1:5 respectiv în aceleaşi condiţii, se separă extractul prin filtrare în vid, se concentrează prin evaporare în vid la temperatura de 40°C, se combină ambele extracte, se liofilizează şi se amestecă cu ulei de vaselină.

Se mai revendică un produs farmaceutic din larve de Tenebrio molitor cu acţiune antioxidantă sub formă de supozitoare rectale, care conţine pentru un supozitor cu masa de 2 g:

preparat din larve de Tenebrio molitor cu acţiune antioxidantă 0,25 g gliceride semisintetice 1,75 g

Produsul farmaceutic în baza acestei invenţii va conţine de la 45 la 80% extract entomologic total, iar în calitate de bază pentru supozitoare poate fi utilizat orice alt tip de material acceptat pentru asemenea produse.

Produsul farmaceutic poate include, de asemenea, extracte vegetale cu proprietăţi farmaceutice: Serenoa repens, Cucurbita pepo, Pygeum africanum, Urtica dioica, Xanthium strumarium etc. şi/sau alte substanţe cu efect antioxidant şi antiinflamator ori cu acţiuni similare sau complementare, care nu modifică acţiunea componentelor active ale extractului entomologic.

Rezultatul tehnic al invenţiei, în comparaţie cu cea mai apropiată soluţie, constă în faptul că procedeul de obţinere a preparatului medicamentos permite controlul calităţii şi cantităţii biomasei entomologice obţinute, valorifică componenţa biochimică unicală a larvelor de Tenebrio molitor, iar aplicarea extracţiei hidrice şi etanolice şi combinarea extractelor asigură obţinerea substanţei active - extract entomologic total liofilizat transferat în ulei de vaselină, cu activitate antioxidantă înaltă (pentru a obţine inhibiţia oxidării lipoproteinelor cu densitatea joasă la nivel de 50% este suficient de a aplica produsul cu concentraţia de 16 mg/ml, iar pentru inhibarea a 50% din radicalii oxidului nitric este nevoie de 20 mg/ml).

Rezultatul tehnic obţinut se datorează faptului că procedeul include utilizarea biomasei larvelor de Tenebrio molitor, precum şi toate etapele tehnologice: creşterea insectelor, obţinerea extractului activ, prepararea substanţei active şi fabricarea preparatului medicamentos, ceea ce permite planificarea atât a cantităţii, cât şi a calităţii produsului farmaceutic finit. Datorită creşterii insectelor în condiţii controlate, partidele de materie primă se caracterizează prin omogenitate şi activitate antioxidantă stabilă şi reproductibilă. De asemenea rezultatul tehnic se mai datorează faptului că procedeul de extragere a substanţelor active din biomasa entomologică are loc în două etape, ceea ce asigură extragerea atât a compuşilor antioxidanţi hidrosolubili, cât şi a celor liposolubili, ceea ce sporeşte acţiunea antioxidantă a acestui produs.

Exemplu de realizare a invenţiei

Creşterea insectelor din specia Tenebrio molitor include următoarele etape:

1. Pregătirea condiţiilor pentru realizarea ciclului vital în crescătorie. Crescătoria de insecte prezintă camere cu suprafaţa de 15…20 m2. Pereţii sunt vopsiţi cu o răşina specială care oferă posibilitatea dezinfectării cu soluţii dezinfectante. Pe perimetrul camerei sunt amplasate rafturi cu cutii Rubbermaid obscure cu dimensiuni de 35 x 23 x 10 cm, care constau din două compartimente imbricate. Peretele inferior al compartimentului superior reprezintă un ecran de nailon standard nr. 20 (850 µm). Temperatura în crescătorie se menţine la 27°C, iar umiditatea la 75%. Se asigură condiţii de întuneric.

2. Creşterea insectelor. Insectele mature, în număr de 300…500 indivizi, sunt plasate în compartimentul superior al cutiilor Rubbermaid şi hrănite exclusiv cu tărâţe de grâu de calitate superioară. Apa este introdusă prin pulverizare de două ori pe săptămână (aproximativ câte 50 ml la o cutie). Odată cu începutul ecloziunii, larvele de prima vârstă trec pin orificiile ecranului şi nimeresc în compartimentul inferior al cutiei. Larvele tinere sunt colectate şi plasate în cutii Rubbermaid care se deosebesc de primele prin faptul că ecranul de nailon de separare a compartimentelor boxelor are nr. 35 (500 µm). Prin aceste orificii trec excrementele larvelor, acestea fiind păstrate în condiţii igienice bune. Larvele sunt crescute timp de 28 zile din momentul ecloziunii, perioadă în care sunt hrănite cu mediu nutritiv standardizat, cu următoarea componenţă, în g/kg:

extract din porumb galben 86,0 extract din porumb roşu 72,0 amidon 500,0 zaharoză 10,2 maltoză 8,0 gleadină 20,0 tocoferol acetat (vitamina E) 0,010 vitamina C 0,080 riboflavina (vitamina B2) 0, 0010 pantotenat de calciu (vitamina B5) 0,004 tiamină (vitamina B1) 0,001 piridoxină (vitamina B6) 0,005 biotină (vitamina B7) 0,001 niacină (vitamina B3) 0,0015 NaNO3 0,6 KH2PO4 1,2 NaCl 1,3 CaCl2 0,01 MgSO4 .7H2O 0,005 ZnSO4 .7H2O 0,005 MnSO4 .5H2O 0,007 CuSO4 .5H2O 0,0007 FeCl3 .6H2O 0,010 EDTA 0,006 apă purificată 300,0.

3. Obţinerea extractului pentru produsul farmaceutic din biomasa de larve de ultima vârstă de Tenebrio molitor. Biomasa colectată de larve de Tenebrio molitor de ultima vârstă se spală cu 4 volume de apă distilată, repetând procedura de 4 ori, apoi biomasa se dezinfectează cu raze UV. După aceasta biomasa se congelează la temperatura de -18°C. În această formă materia primă poate fi păstrată timp de 6 luni şi utilizată la necesitate. Decongelarea larvelor se face prin creşterea treptată a temperaturii până la cea a camerei. În continuare biomasa este supusă omogenizării într-un agitator cu cuţite de inox la o viteză de 5000 rot/min, astfel ca particulele obţinute să nu depăşească dimensiunile de 9…12 µm. Masa obţinută este supusă extragerii principiilor bioactive hidrosolubile cu apă distilată. Pentru aceasta la 100 g biomasă (recalcul la biomasa absolut uscată) se adaugă 2000 ml de apă distilată. Extragerea durează 60 min. Extractul se obţine în condiţii de temperatură constantă de 20°C la agitaţie permanentă pe un agitator orbital cu viteza de rotaţie de 280 rot/min, se separă de biomasă prin filtrare în vid, după care se produce concentrarea lui prin evaporare în vid până la volumul de 250 ml, apoi urmează extracţia cu alcool etilic de 70% a componentelor alcoolsolubile. Pentru extragere se utilizează biomasa rezultată din prima extracţie la care se adaugă 500 ml de alcool etilic de 70%. Extracţia se face timp de 60 min în condiţii de temperatură constantă de 20°C la agitaţie permanentă în vase închise pe un agitator orbital cu viteza de rotaţie de 250 rot/min. Extractul este separat de reziduul de biomasă prin filtrare în vid şi este concentrat până la obţinerea unui volum de 100 ml prin evaporare în vid. Extractul al doilea este adăugat la primul, iar pentru extractul comun sunt efectuate testele de determinare a activităţii antioxidante specifice. În cazul dat se aplică testul de inhibiţie a oxidării lipoproteinelor cu densitatea joasă şi cel de inhibiţie a radicalului oxidului nitric. Pentru inhibiţia oxidării lipoproteinelor la nivel de 50% este suficient de a aplica produsul în concentraţia de 16 mg/ml, iar pentru inhibarea a 50% din radicalii oxidului nitric este nevoie de 20 mg/ml. Apoi extractul comun este supus liofilizării cu obţinerea rezultatelor următoare: pentru testul de inhibiţie a oxidării LDL CI50%=0,15 mg/ml, iar pentru testul de inhibiţie a radicalului oxidului nitric CI50%=0,18 mg/m. Extractul total în continuare este liofilizat şi condiţionat sub formă de complex entomologic activ în ulei de vaselină cu următoarea componenţă: extract entomologic total - 60% şi ulei de vaselină - 40%.

4. Prepararea produsului farmaceutic sub formă de supozitoare rectale. Forma preferabilă a preparatului medicamentos în bază de extract entomologic, destinat tratamentului hiperplaziei benigne de prostată, este cea de supozitoare rectale. În calitate de bază pentru supozitoare s-au utilizat gliceridele semisintetice Suppocire. Raportul cantitativ în componenţa supozitoarelor al gliceridelor şi al substanţei active este de 0,25 g de complex entomologic activ în ulei de vaselină şi 1,75 g de Suppocire. Baza pentru supozitoare este topită pe baie de apă la temperatura de 32…34°C, după care în ea este încorporat complexul entomologic activ în ulei de vaselină prin adăugare treptată şi amestecare continuă. Masa de supozitoare obţinută este ambalată.

În calitate de ambalaj primar pentru supozitoare se utilizează blistere din folie de polivinilclorură termoformatată alveolar pentru supozitoare de marca PVC 100 alb/PE 30. În urma studiului de stabilitate desfăşurat s-a constatat că materialele şi modul de ambalare alese asigură stabilitatea produsului medicamentos pe parcursul a 24 luni.

Exemplu de aplicare in vivo a produsului farmaceutic sub formă de supozitoare

Pacientul C.B., 62 ani, diagnosticul stabilit în baza investigaţiilor complexe în conformitate cu algoritmul standard recomandat de Convenţia Internaţională pentru Hiperplazia Benignă de Prostată (HBP) (Paris, 1997) - hiperplazie benignă de prostată, gradul II. Tratament: monoterapie cu supozitoare rectale cu complex activ entomologic (250 mg), un supozitor pe zi timp de 3 luni. Rezultatele investigaţiilor efectuate iniţial, după o lună şi după 3 luni de tratament sunt prezentate în tabel. Pentru comparaţie sunt aduse rezultatele unui studiu analogic pe un grup constituit din 20 pacienţi cu vârsta între 54 şi 78 ani, diagnosticaţi cu HBP în lipsa prostatitei cronice, care au fost supuşi tratamentului cu supozitoare cu extract din Lymantria dispar în regim de monoterapie cu doza de 250 mg/zi, rectal [3].

Tabel

Dinamica simptomelor HBP la monoterapia cu complex entomologic activ timp de 3 luni

Parametrul monitorizat, unităţi de măsură Iniţial După prima lună de tratament După 3 luni de tratament % ameliorare Invenţia propusă IPSS (International Prostate Symptom Score), puncte 18 16 11 38,8 Volumul prostatei, cm3 56 41 35 37,5 Viteza maximală a jetului de urină, ml/s 8,4 12,0 14,5 72,6 Conform celei mai apropiate soluţii IPSS (International Prostate Symptom Score), puncte 17,8 14,7 12 32,5 Volumul prostatei, cm3 42,4 42,9 38,6 8,9 Viteza maximală a jetului de urină, ml/s 10,3 12,3 13,5 31,1

1. RO 122332 B1 2003.08.25

2. MD 2788 G2 2005.06.30

3. Ciuhrii V. Biotehnologia obţinerii formei medicamentoase pentru tratarea hiperplaziei benigne de prostată. Teza de doctor în biologie, Chişinău, 2010, 129 p.

Claims (3)

1. Preparat din larve de Tenebrio molitor cu acţiune antioxidantă, care conţine în % mas: extract hidroalcoolic liofilizat din larve de Tenebrio molitor - 45…80% şi ulei de vaselină - restul şi manifestă activitate de inhibiţie a peroxidării lipoproteinelor CI50% de 16 mg/ml şi a radicalului oxidului nitric CI50% de 20 mg/ml.

2. Procedeu de obţinere a preparatului din larve de Tenebrio molitor cu acţiune antioxidantă, definit în revendicarea 1, care constă în aceea că se cresc larvele de Tenebrio molitor pe un mediu nutritiv standardizat cu următoarea componenţă, în g/kg:

extract din porumb galben 86,0…98,0 extract din porumb roşu 72,0…84,0 amidon 500,0…540,0 zaharoză 10,2…12,5 maltoză 8,0…8,5 gleadină 20,0…22,0 tocoferol acetat (vitamina E) 0,010…0,015 vitamina C 0,080…0,085 riboflavină (vitamina B2) 0,0010…0,0015 pantotenat de calciu (vitamina B5) 0,004…0,008 tiamină (vitamina B1) 0,001…0,003 piridoxină (vitamina B6) 0,005…0,008 biotină (vitamina B7) 0,001…0,003 niacină (vitamina B3) 0,0015…0,0020 NaNO3 0,6…0,8 KH2PO4 1,2…1,5 NaCl 1,3…1,7 CaCl2 0,01…0,02 MgSO4٭7H2O 0,005…0,010 ZnSO4*7H2O 0,005…0,01 MnSO4*5H2O 0,007…0,010 CuSO4*5H2O 0,0007…0,0010 FeCl3*6H2O 0,010…0,015 EDTA 0,006…0,007 apă purificată 300,0…230,0, ulterior larvele de ultima vârstă se spală, se dezinfectează cu raze UV, se congelează la temperatura de -18°C, se decongelează până la nivelul temperaturii camerei, se omogenizează în omogenizator la viteza de 5000 rot/min până la obţinerea particulelor cu dimensiuni de 9…12 µm, se extrage biomasa cu apă distilată în raport masic de 100 g de biomasă uscată la 2,0…2,1 l de apă distilată timp de 60…90 min la temperatura de 18…20°C la agitare pe un agitator orbital cu viteza de rotaţie de 240…320 rot/min, se separă extractul prin filtrare în vid şi se concentrează prin evaporare în vid, biomasa se extrage repetat cu alcool etilic de 70% în raport de 1:5 respectiv în aceleaşi condiţii, se separă extractul prin filtrare în vid, se concentrează prin evaporare în vid la temperatura de 40°C, se combină ambele extracte, se liofilizează şi se amestecă cu ulei de vaselină.

3. Produs farmaceutic din larve de Tenebrio molitor cu acţiune antioxidantă sub formă de supozitoare rectale, care conţine pentru un supozitor cu masa de 2 g: preparat din larve de Tenebrio molitor cu acţiune

antioxidantă definit în revendicarea 1 0,25 g gliceride semisintetice 1,75 g