KR20100000922A - 정제 마유를 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 치료또는 예방용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 정제 마유를 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 정제 마유를 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 치료 또는 예방용 약학적 조성물 또는 화장료 조성물 및 상기 정제 마유의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 제조방법에 의하여 제조된 정제 마유는 아토피성 피부염을 치료 또는 예방하는 효과가 우수하므로 아토피성 피부염 치료 또는 예방용 약학적 조성물 또는 아토피성 피부염 개선 또는 예방용 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

정제, 마유, 아토피, 조성물

Description

정제 마유를 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 치료 또는 예방용 조성물{Composition for preventing or treating atopic dermatitis comprising purified horse oil as an effective component}

본 발명은 정제 마유를 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 정제 마유를 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 치료 또는 예방용 약학적 조성물 또는 화장료 조성물 및 상기 정제 마유의 제조방법에 관한 것이다.

마유는 말의 기름으로 예부터 비타민 E가 풍부해 잔주름이나 노화예방으로 유익한 것으로 알려져 있으며 민간요법으로 피부 미용에 오래전부터 사용되어 왔다.

예를 들어, 마유는 염증을 가라앉게 해주며 열을 제거하는 작용이 있어 화상에 매우 효과적인 것으로 알려져 있으며, 사람의 피부를 보호하는 피지의 주요성분으로 강력한 항균 작용을 하는 팔미톨레산이 다량 함유되어 있어 피부의 천연보호막을 형성시켜 피부의 고보습 효과를 주는 것으로 알려져 있다. 또한 혈액순환을 왕성하게 해 주는 비타민 E가 다량 함유되어 있어 기름 그 자체가 훌륭한 화장품 역할을 할 수 있어 피부 미용제에도 사용되고 있다. 뿐만 아니라 마유는 피지에 가장 가까운 성분으로, 지방산의 구성비, 유분, 수분의 밸런스도 거의 같기 때문에 인간의 피부와 친화성이 높으며 불포화지방산이 약 60% 이상 포함되어 있어 피부에 불포화지방산을 공급할 수 있는 물질로 알려져 있다.

한편 아토피성 피부염은 심한 소양감을 가지는 재발성의 만성 피부염으로 그 원인이 현재까지 명확하게 규명되지 않았으나, 세계 인구의 10 내지 20%가 이 피부염으로 고통받는 것으로 추정되고 있다. 또한, 환경오염 등에 의한 공기 매개성 알러지의 원인물질의 증가와 건조성 피부를 형성시키는 조건의 증가 등으로 인하여 최근 수십년 동안 아토피성 피부염에 대한 유병율이 계속 상승하고 있고, 우리나라도 아토피성 피부염 화자 수가 늘고 있는 추세에 있다.

아토피라는 말은 어원상 '이상한' 또는 '부적절한'이라는 의미를 가지는 임상적 과민증 상태 또는 알러지라는 사전적 의미를 가지고 있다. 아토피 원인을 가진 사람은 주변 환경에서 흔히 접하는 집먼지, 진드기, 동물 털, 꽃가루, 음식물 등과 같은 단백 항원에 대한 피부 반응 검사를 수행하였을 때 다수의 항원에 대한 두드러기 반응이 잘 나타나고, 이들 단백 항원에 신체가 노출될 때 수분 내지는 수 시간 내에 아나필락시성 쇼크(anaphylactic shock), 두드러기와 혈관 부종, 천명(喘鳴)과 호흡곤란, 코막힘, 콧물, 재채기, 결막 충혈 및 부종, 구토, 설사, 복통 등의 즉시형 반응을 피부, 호흡기, 눈 및 장 점막에 잘 일으키고, 이러한 이상하고 부적절한 반응은 가족적으로 나타나는 특징으로 가진다.

임상적으로 아토피성 피부염은 환자의 연령에 따라 비교적 특징적인 피부 병변과 분포 양상을 보여 이를 유아기, 소아기 및 사춘기와 성인기 등의 3가지 시기로 나눌 수 있다. 아토피성 피부염이 시작되는 생후 2개월 내지 3개월부터 2세까지의 유아기에는 아토피성 피부염 증상이 머리, 얼굴, 몸통 부위 등에 붉고, 습하고,기름지고, 가피(痂皮) 등을 형성하는 병변으로 나타난다.

상술한 바와 같은 아토피 피부염은 재발 위험성이 크고 평소에 각별한 피부관리가 요구되는 질환이다. 이를 위하여 종래에 다양한 형태의 피부 조성물들이 개발된 바 있다. 그러나 주로 화학물질이 주요 성분으로 이루어져 있을 뿐만 아니라 상기 아토피 피부염을 효과적으로 완화시키는 데에는 한계가 있었다.

이에 본 발명자들은 상기와 같이 유해한 아토피성 피부염을 치료하는 방법에 관하여 연구하던 중, 정제여과 마유를 제조하는 방법을 개발하고 이를 아토피성 피부염이 유발된 동물 모델에 적용한 결과 아토피성 피부염이 치료 또는 개선되는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 (a) 말의 지방육과 물을 혼합하고 가열하여 마유를 추출하는 단계; (b) 상기 (a) 단계에서 추출된 마유에 인산을 가하여 지방산을 제거하는 단계; (c) 상기 (b) 단계에서 지방산이 제거된 마유에 가성소다를 가하여 탈산하는 단계; (d) 상기 (c) 단계에서 탈산된 마유에 산성백토를 가하여 1차 정제하는 단계; (e) 상기 (d) 단계에서 1차 정제된 마유에 활성탄을 가하여 2차 정제하는 단계; (f) 상기 (e) 단계에서 2차 정제된 마유에 규조토를 가하여 3차 정제하는 단계; 및 (g) 상기 (f) 단계에서 3차 정제된 마유에 포함된 산성백토, 활성탄 및 규조토를 제거하는 여과 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 정제 마유의 제조방법을 제공하는 것이다.

또한 본 발명의 또 다른 목적은 상기 정제 마유를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 치료 또는 예방용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

또한 본 발명의 또 다른 목적은 상기 정제 마유를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 개선 또는 예방용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기와 같은 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 (a) 말의 지방육과 물을 혼합하고 가열하여 마유를 추출하는 단계; (b) 상기 (a) 단계에서 추출된 마유에 인산을 가하여 지방산을 제거하는 단계; (c) 상기 (b) 단계에서 지방산이 제거된 마유에 가성소다를 가하여 탈산하는 단계; (d) 상기 (c) 단계에서 탈산된 마유에 산성백토를 가하여 1차 정제하는 단계; (e) 상기 (d) 단계에서 1차 정제된 마유에 활성탄을 가하여 2차 정제하는 단계; (f) 상기 (e) 단계에서 2차 정제된 마유에 규조토를 가하여 3차 정제하는 단계; 및 (g) 상기 (f) 단계에서 3차 정제된 마유에 포함된 산성백토, 활성탄 및 규조토를 제거하는 여과 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 정제 마유의 제조방법을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 정제 마유를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 치료 또는 예방용 약학적 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 정제 마유를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 개선 또는 예방용 화장료 조성물을 제공한다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 정제 마유의 제조방법은 (a) 말의 지방육과 물을 혼합하고 가열하여 마유를 추출하는 단계; (b) 상기 (a) 단계에서 추출된 마유에 인산을 가하여 지 방산을 제거하는 단계; (c) 상기 (b) 단계에서 지방산이 제거된 마유에 가성소다를 가하여 탈산하는 단계; (d) 상기 (c) 단계에서 탈산된 마유에 산성백토를 가하여 1차 정제하는 단계; (e) 상기 (d) 단계에서 1차 정제된 마유에 활성탄을 가하여 2차 정제하는 단계; (f) 상기 (e) 단계에서 2차 정제된 마유에 규조토를 가하여 3차 정제하는 단계; 및 (g) 상기 (f) 단계에서 3차 정제된 마유에 포함된 산성백토, 활성탄 및 규조토를 제거하는 여과 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.

이하 각 단계별로 본 발명을 상세히 설명한다.

상기 (a) 단계에서 말의 지방육과 물을 혼합하고 가열하여 마유를 추출하는 것은 통상적으로 동물의 지방육에서 기름을 추출하는 방법이라면 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 도축된 말고기 지방육을 물과 50:50의 중량비로 하여 80∼120℃의 온도에서 가열하여, 지방육으로부터 액화된 원료 마유를 추출하는 것을 말한다(<실시예 1-1> 참조).

또한 상기 (b) 단계에서 상기 추출된 마유에 인산을 가하여 지방산을 제거하는 단계는 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 원료 마유에 함유되어 있는 점질물을 제거하기 위하여 원료 마유를 0.1% 농도의 인산으로 처리를 한 다음, 60∼70℃의 물로 수세하는 탈검하는 것을 말한다(<실시예 1-2> 참조).

또한 상기 (c) 단계에서 상기 지방산이 제거된 마유에 가성소다를 가하여 탈산하는 것은 이에 한정되지 않지만 지방산이 제거된 마유에 2.5%의 농도로 희석된 가성소다를 가하여 60∼70℃의 물로 수세함으로써 탈산하는 것을 의미한다(<실시예 1-2> 참조).

또한 상기 (d) 단계에서 상기 탈산된 마유에 산성백토를 가하여 1차 정제하는 단계는 이에 한정되지 않지만 상기 탈산된 마유에 5%중량의 규조토를 가한 다음, 110∼120℃로 가온하여 교반함으로써 탈색 및 탈취하고 정제하는 것을 말한다(<실시예 1-2> 참조).

상기 1차 정제된 마유는 향과 색에 있어 부족한 부분이 많아 최종 제품의 가치를 높이면서 아토피성 피부염을 치료하는 성분의 손실을 최소화하기 위해 하기와 같이 2차 및 3차 단계의 추가 정제 단계가 필요하다.

따라서 상기 (e) 단계에서 상기 1차 정제된 마유에 활성탄을 가하여 2차 정제하는 것은 1차 정제된 마유를 다시 탈색 및 탈취하여 정제하는 것을 말한다. 상기 활성탄은 정제에서 통상적으로 사용되는 것이라면 이에 한정되지 않지만 SK-BD 100, SK-BD 110, SK-BD 10%, SK-GA 10% 및 SK-SSD 10%로 이루어진 군에서 선택하거나 조합된 것을 사용할 수 있으며 본 발명의 일실시예에서는 SK-SSD 10%를 사용하였다(<실시예 1-2> 참조).

또한 상기 (f) 단계에서 상기 2차 정제된 마유에 규조토를 가하여 3차 정제하는 단계는 2차 정제된 마유를 다시 탈색 및 탈취하여 정제하는 것을 말한다. 상기 규조토는 정제에서 통상적으로 사용되는 것이라면 이에 한정되지 않지만, #200, #250 및 HD로 이루어진 군에서 선택되거나 조합된 것을 사용할 수 있으며 본 발명의 일실시예에서는 HD를 사용하였다(<실시예 1-2> 참조).

또한 상기 (g) 단계에서 상기 정제된 마유에 포함된 산성백토, 활성탄 및 규조토를 제거하기 위한 여과 단계는 이에 한정되지 않지만 필터프레스(Filter press)로 필터링함으로서 정제 중에 함유된 산성백토, 활성탄 및 규조토를 제거하여 여과하는 것을 말한다(<실시예 1-3> 참조).

본 발명의 제조방법에 의하여 제조된 정제 마유는 정제되지 않은 원료 마유보다 아토피성 피부염의 치료 및 개선 효과가 월등히 우수하다.

상기와 같은 효과를 확인하기 위하여 본 발명자들은 DNCB를 이용하여 감작 및 재감작 과정을 통하여 아토피 피부염이 유발된 동물 모델의 제조하였다(<실험예 1-1> 참조).

상기 제조된 동물 모델에 마유 또는 정제 마유를 도포한 결과, 정제 마유가 마유보다 피부의 충출혈 및 가피, 염증성 반응 등의 임상 증상이 현저히 완화됨을 알 수 있었다(<실험예 1-2> 참조). 또한 정제 마유가 마유보다 스크래칭 빈도가 현저히 감소하였으며(<실험예 1-3> 참조), 아토피성 피부염을 유발하는 혈장 내 IgE 수준을 현저히 감소시키고 IgG1 및 IgG2a의 비율을 감소시켜 T 세포 반응의 불균형을 회복시킬 수 있음을 알 수 있었다(<실험예 1-4> 참조). 또한 임파구 배양액 내 사이토카인(cytokine) 분비 수준을 살펴본 결과, 정제 마유가 마유보다 IL-4 및 IFN-γ 사이토카인 비율이 감소하여 Th2 면역반응을 약화시키고(<실험예 1-5> 참조), 염증성 단백질로 피부에서 나타나는 국소적인 염증 반응을 일으키는 COX-2 단백질의 비율을 감소킴을 알 수 있었다(<실험예 1-6> 참조).

본 발명의 제조방법에 의하여 제조된 정제 마유는 아토피성 피부염의 치료 및 개선 효과가 우수하므로 아토피성 피부염 치료 또는 예방용 약학적 조성물 또는 아토피성 피부염 개선 또는 예방용 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

따라서 본 발명의 아토피성 피부염 치료 또는 예방용 약학적 조성물은 상기 정제 마유를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양의 정제 마유를 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기에서 "약학적으로 유효한 양"이란 질환을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 말한다. 본 발명에 따른 정제 마유의 약학적으로 유효한 양으로는 1∼600mg/day/체중kg, 바람직하게는 1∼100mg/day/체중kg이다. 그러나 상기 약학적으로 유효한 양은 질환 및 이의 중증정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여 경로 및 치료기간 등에 따라 적절히 변화될 수 있다.

상기에서 "약학적으로 허용되는" 이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다. 상기 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

상기 약학 조성물은 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방 부제 등을 추가로 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 약학 조성물은 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 제형은 분말, 과립, 정제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 멸균 분말의 형태일 수 있다. 본 발명에 따른 약학 조성물은 피부에 도포하는 방식으로 투여될 수 있다. 활성 성분의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 환자의 중증도 등의 여러 인자에 따라 적절히 선택될 수 있다.

또한 본 발명의 아토피성 피부염 개선 또는 예방용 화장료 조성물은 상기 정제 마유를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 화장료 조성물은 본 발명의 정제 마유를 유효성분으로 함유하며 피부학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 기초 화장품 조성물(화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼 및 클렌징 워터와 같은 세안제, 팩, 보디오일), 색조 화장품 조성물(화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발 제품 조성물(샴푸, 린스, 헤어컨디 셔너, 헤어젤) 및 비누 등의 형태로 제조될 수 있다.

상기 부형제로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들어, 피부연화제, 피부 침투 증강제, 착색제, 방향제, 유화제, 농화제 및 용매를 포함할 수 있다. 또한, 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제 및 보습제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 물성개선을 목적으로 점증제, 무기염류, 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다.

예를 들면, 본 발명의 정제 마유를 포함하는 세안제 및 비누를 제조하는 경우에는 통상의 세안제 및 비누 베이스에 정제 마유를 첨가하여 용이하게 제조할 수 있다. 크림을 제조하는 경우에는 일반적인 수중유적형(O/W)의 크림베이스에 정제 마유를 첨가하여 제조할 수 있다. 여기에 향료, 킬레이트제, 색소, 산화방지제, 방부제 등과 물성개선을 목적으로 한 단백질, 미네랄, 비타민 등 합성 또는 천연소재를 추가로 첨가할 수 있다.

상기 본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 정제 마유의 함량은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 이에 한정되지 않지만 0.0001 내지100 중량% , 바람직하게는 0.01 내지 100 중량% 범위로 함유될 수 있다.

이상 살펴본 바와 같이, 본 발명의 제조방법에 의하여 제조된 정제 마유는 아토피성 피부염을 치료 또는 예방하는 효과가 우수하므로 아토피성 피부염 치료 또는 예방용 약학적 조성물 또는 아토피성 피부염 개선 또는 예방용 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1>

정제 마유의 제조

<1-1> 마유 추출단계

도축된 말고기로부터 지방 축적이 비교적 잘 되어 있는 부위(지방육)를 선별하고, 이를 세척하였다. 상기 세척된 지방육과 물을 50:50의 중량비로 개량하여 가열로에 담고, 100℃의 온도에서 약 5시간을 가열하여 지방질의 액화를 진행시켰다. 상기 용융과정(boiling process)을 거쳐 지방육으로 부터 액화된 마유를 추출하고 나면, 도체를 분리하여 원료 마유를 수득하였다.

<1-2> 정제 단계

상기 <실시예 1-1>에서 수득한 원료 마유에 함유되어 있는 인지질, 단백질 및 기타 점질물을 제거하기 위하여 원료 마유를 0.1%의 농도의 인산으로 처리한 다음, 이를 60∼70℃의 물로 수세하고 원료 마유의 지방산을 제거하기 위해 인산 처리된 상기 원료 마유에 2.5%의 농도로 희석된 가성소다를 다시 가하여 이를 60∼70℃의 물로 수세하였다. 상기 마유 중에 소량 존재하는 수분을 제거하고 탈색 및 탈취를 위해 5%중량의 산성백토를 가한 다음, 115℃로 가온하여 교반함으로써 1차 정제하고 5%중량의 활성탄(SK-SSD 10%)을 추가 투여하여 2차 정제한 후, 규조토(HD)를 추가하여 3차 정제하였다.

<1-3> 여과단계

상기 <실시예 1-2>에서 교반, 가열된 마유를 필터프레스(Filter press)로 옮겨 필터링함으로서 정제 중에 첨가된 산성백토, 활성탄 및 규조토를 제거하였다. 이를 통해 정제 마유를 수득하였다.

< 실험예 1>

정제 마유의 아토피 피부염 치료 활성

<1-1> 아토피 피부염이 유발된 동물 모델의 제조

6주령의 수컷 BALB/c 마우스에 아세톤과 올리브 오일을 4 : 1로 혼합한 것(AOO)을 용매로 한 1% DNCB(2,4-디니트로클로로벤젠)를 감작 과정에 이용하고, 0.2% DNCB를 재감작 과정에 이용하여 면역 기전적 아토피성 피부염 발현을 유도하였다. 구체적으로는 도 1에 기재된 실험 스케줄에 의하였으며 상기 마우스에 하기 표 1과 같이 시험물질을 투여하여 하기 실험을 진행하였다.

아토피 피부염이 유발된 동물 모델의 제조

Gruop	Sensitization	Challenge	Treatment
Sham군	AOO	0.2% DNCB	-
대조군	1% DNCB	0.2% DNCB	-
실험군 1	1% DNCB	0.2% DNCB	<실시예1-1>의 마유
실험군 2	1% DNCB	0.2% DNCB	<실시예1-3>의 정제 마유

<1-2> 임상증상에 대한 관찰

매일 일정한 간격으로 마우스의 등 피부를 관찰하여 충출혈 및 가피, 염증성 반응 등의 임상 증상을 확인한 결과 DNCB 용액의 재감작 이후(14 Day) 가피의 형성 및 탈락, 충출혈, 염증성 반응 등의 증상을 확인되었으나 상기 <실시예1-3>의 정제 마유를 3주 동안 도포한 경우 증상이 현저히 완화되었다(도 2 참조).

<1-3> 스크래칭 ( Scratching ) 빈도 조사

마지막 재감작 이후(14 Day)에 또는 실험이 종료한 다음 (35 Day) 각각 실험동물을 투명한 케이지 내에서 30분간 적응시킨 후 얼굴, 목, 등을 긁는 동작의 수 측정하여 그 결과를 도 3에 기재하였다.

상기 도 3에 기재된 바와 같이, DNCB 용액의 재감작 이후 대조군에서 Sham 군에 비해 스크래칭 빈도가 10배 이상 증가하였다. 실험 종료 후(After Treatment), 대조군에서 스크래칭 빈도수가 14 Day 보다 감소하였지만, Sham군에 비해 유의적인 증가를 보였으며 마유를 투여한 실험군의 경우 빈도수가 감소하였음을 알 수 있었다. 그러나 정제 마유를 투여한 경우 스크래칭 빈도가 현저히 감소하였음을 알 수 있었다.

<1-4> 혈장 내 항체 수준

감작전(0 Day)과 마지막 재감작 이후 (14 Day)에 안와 채혈법으로 혈액을 채취하고 또한 실험 종료 후(35 Day)에 복대정맥에서 혈액을 채취하였다. 상기 채취된 혈액을 3,000 rpm으로 15분간 원심 분리하여 혈장을 분리하였고, IgE 및 IgG1, IgG2a 수준을 Sandwich ELISA 법으로 측정하였다. 특히 아토피성 피부염의 면역반응에서 IgE의 급격히 증가한다는 것은 공지된 사실인 봐, IgE의 수준 변화를 측정하여 그 결과를 도 4에 기재하였다.

상기 도 4에 기재된 바와 같이, DNCB 용액의 마지막 재감작 이후(After Challenge), 대조군에서 Sham군에 비해 혈장 내 IgE 수준이 확연히 증가함을 확인하였다. 또한, 실험 종료 후(After Treatment), 혈장 내 IgE 수준이 대조군에서 Sham군에 비해 4배가량 증가하였고, 마유를 도포한 경우 혈장 내 IgE 수준이 감소하였으나 정제 마유를 도포한 경우 혈장 내 IgE 수준이 가장 현저히 감소함을 알 수 있었다.

또한 IgG1 및 IgG2a 항체는 각각 Th2, Th1 면역반응을 대표하므로 이들의 비율을 측정하여 그 결과를 도 5에 기재하였다.

상기 도 5에 기재된 바와 같이, 대조군에서 Sham군에 비해 그 비율이 증가하여 아토피성 피부염의 면역학적 특징인 Th2 면역반응이 우세함을 알 수 있으며 마유를 도포한 경우 비율이 감소하였으나 정제 마유를 도포한 경우 가장 현저히 감소함을 알 수 있었다. 따라서 정제 마유는 T 세포 반응의 불균형을 회복시킬 수 있음을 알 수 있다.

<1-5> 임파구 배양액 내 사이토카인( cytokine ) 분비 수준

실험 종료 후 (35 Day), 비장을 적출하여 비장세포를 분리하고 T임파구만을 활성화시키는 anti-mouse CD3e mAb로 코팅시킨 플레이트에서 40시간 동안 배양한 후, 배양액만을 취하여 IL-4, IFN-γ 분비 수준을 Sandwich ELISA 법으로 측정하였다. 상기 IL-4, IFN-γ 사이토카인은 각각 Th2, Th1 면역반응을 대표하므로 이들의 비율을 측정하고 그 결과를 도 6에 기재하였다.

상기 도 6에 기재된 바와 같이, 대조군에서 Sham군에 비해 증가하는 경향을 보여, Th2 면역반응이 우세하였음을 알 수 있었다. 그러나 상기 대조군 또는 마유를 도포한 경우보다 정제 마유를 도포한 경우 현저히 감소함을 알 수 있었다.

<1-6> 피부 조직에서의 COX -2 단백질 발현 관찰

실험 종료 후 (35 Day), 등 피부를 박피하여 무게를 측정하였고 무게의 5 배 부피의 homogenation buffer(320 mM sucrose, 5 mM Tris-HCl, 175 ㎍/㎖ PMSF, 25 ㎍/㎖ aprotinin, 10 ㎍/㎖ leupeptin)로 피부 조직을 균질화시켰다. 4℃, 800 g에서 15분간 원심 분리하여 상층액을 얻어 다시 10,000 g에서 20분간 원심 분리하여 상층액을 분리하였다. 피부 조직의 호모제네이트(homogenate)에서 COX-2 단백질의 발현을 western blot analysis로 확인하였다. COX-2는 염증성 단백질로 피부에서 나타나는 국소적인 염증 반응을 일으키므로 이를 특정하여 그 결과를 도 7에 기재하였다.

상기 도 7에 기재된 바와 같이 대조군에서 Sham군에 비해 COX-2 단백질이 증가하였고, 마유를 도포한 경우 감소하였으나 정제 마유를 투여한 경우 현저히 감소하였음을 알 수 있었다.

< 실험예 2>

정제 마유의 피부 안정성 실험

총 32명중에서 피험자 선정기준에 의해 본 실험에 적합하다고 판정된 30명을 대상으로 정제여과마유에 대한 안전성 평가를 수행하였다. 구체적으로 피험자 30명(평균연령 36세, 연령분포 20~53세)을 대상으로 finn chamber를 이용하여 상박에 피부 첩포시험(patch test)을 실시하였다. 단, 건선 (Psoriasis), 습진(Eczema), 기타 피부병변 보유자나 임신, 수유부 또는 피임제, 항히스타민제 등을 복용하고 있는 사람은 본 실험에서 제외하였다. 시험부위를 증류수(1차)로 닦아낸 뒤 건조시킨 다음 준비된 피험자 30명의 상박에 정제여과마유를 각각 25㎕씩 finn chamber에 적하시킨 후 시험부위인 상박 부위에 얹어 고정시켰다. 24시간 동안 피부에 첩포를 적용하였으며, 첩포를 제거한 후에는 marking pen으로 시험부위를 표시하여 각각 30분경과 후, 24시간 경과 후, 48시간 경과 후에 시험부위를 관찰하였다.

판정은 첩포 제거 30분경과 후, 24시간 경과 후, 48시간 경과 후에 행하며 피부반응은 국제 접촉피부염연구회(Iternational Contact Dermatitis Reserch Group : ICDRG)의 판정기준에 따라 자극 정도를 분류하였다. 또한 평균피부반응도 계산공식에 따라 평균 값를 산정한 후 피부첩포시험 (patch test) 결과 판정표에 따라 자극유무를 판정하였다.

그 결과, 정제 마유의 경우 패치 제거 후 30분경과 후, 24시간 경과 후, 48시간 경과 후에서 모두 반응을 관찰 할 수 없었다. 평균 피부반응도는 0.00으로써 판정기준에 따라 무자극으로 판정되었다.

본 발명의 제조방법에 의하여 제조된 정제 마유는 아토피성 피부염을 치료 또는 예방하는 효과가 우수하므로 아토피성 피부염 치료 또는 예방용 약학적 조성 물 또는 아토피성 피부염 개선 또는 예방용 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 아토피 피부염이 유발된 동물 모델을 제조하는 과정을 나타낸 그림이다.

도 2는 정제 마유를 투여한 경우 임상변화를 관찰한 그림이다(After Challenge: 실험 시작 이후 14일 째, After Treatment: 실험 시작 이후 35일 째).

도 3은 정제 마유를 투여한 경우 스크래칭 빈도가 현저히 감소함을 나타내는 그래프이다(After Challenge: 실험 시작 이후 14일 째, After Treatment: 실험 시작 이후 35일 째)

도 4는 정제 마유를 투여한 경우 IgE의 급격히 감소함을 나타내는 그래프이다.

도 5는 정제 마유를 투여한 경우 IgG1 및 IgG2a의 비율이 급격히 감소함을 나타내는 그래프이다.

도 6은 정제 마유를 투여한 경우 IL-4 및 IFN-γ 사이토카인의 비율이 급격히 감소함을 나타내는 그래프이다.

도 7은 정제 마유를 투여한 경우 피부 조직에서의 COX-2 단백질 발현이 급격히 감소함을 나타내는 그래프이다.

Claims (3)

1. (a) 말의 지방육과 물을 혼합하고 가열하여 마유를 추출하는 단계;

   (b) 상기 (a) 단계에서 추출된 마유에 인산을 가하여 지방산을 제거하는 단계;

   (c) 상기 (b) 단계에서 지방산이 제거된 마유에 가성소다를 가하여 탈산하는 단계;

   (d) 상기 (c) 단계에서 탈산된 마유에 산성백토를 가하여 1차 정제하는 단계;

   (e) 상기 (d) 단계에서 1차 정제된 마유에 활성탄을 가하여 2차 정제하는 단계;

   (f) 상기 (e) 단계에서 2차 정제된 마유에 규조토를 가하여 3차 정제하는 단계; 및

   (g) 상기 (f) 단계에서 3차 정제된 마유에 포함된 산성백토, 활성탄 및 규조토를 제거하는 여과 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 정제 마유의 제조방법.
2. 제1항의 정제 마유를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 치료 또는 예방용 약학적 조성물.
3. 제1항의 정제 마유를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 개선 또는 예방용 화장료 조성물.

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