KR20130016930A - 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 아토피 피부 및 민감 피부 개선 효능을 갖는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물 및 이의 혼합물을 포함함으로써 아토피성피부염, 자극감을 완화시키는 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 혼합 추출물은 각종 피부질환, 아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 건선 등과 같은 아토피성 피부염 또는 민감성 피부 질환과 같은 면역반응에 의한 증상을 개선하는 화장료 조성물로 이용될 수 있다.

Description

세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물{The cosmetic composition for alleviating atopy and contact dermatitis containing sage, Melissa officinalis, Gelidium amansii and Allium cepa}

본 발명은 아토피 개선 및 피부 자극 완화 효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.

아토피(atopy)는 1925년 코카(Coca)가 선천적으로 음식물과 흡입성 물질에 대한 알레르기 반응의 결과로 피부염이나 천식, 고초열이 나타나는 경향을 아토피라고 기술한 이후부터 쓰이게 된 피부질환으로서 아토피성 질환에는 아토피 피부염 이외에 천식, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염 등이 있다. 아토피는 알러지 반응을 수반하며 이 중 아토피 피부염은 만성 혹은 재발성 피부염으로, 피부 병변의 특징적인 모양 및 분포와 개인 혹은 가족의 아토피 병력을 가지는 즉, 아토피성 체질(유전적 소인)을 타고난 경우에 발생하는 매우 흔한 피부 질환이다. 대개 아토피 피부염은 영, 유아기, 특히 생후 2개월 전후에 시작되는데 이 중 약 50 %가 생후 2세 이전에 발생하고, 거의 5세 이전에 증상이 나타나는 반면 성인에서 처음 증상이 나타나는 예는 극히 드물다. 대부분 성장과 더불어 증상이 완화되거나 사라지며 유아기 발생 환자의 절반 이상이 2세 전에 호전된다.

그러나 1970년대 이후 급격한 산업화로 유발된 공해, 환경오염 등으로 인해 발생률이 해마다 증가하고 있으며, 증상이 청소년기 및 성인기까지 지속되며 점점 심해지거나 청소년기 이후에 새롭게 발병하는 경우도 현저히 증가하고 있다. 강한가려움증과 함께 피부염증을 동반하는 것이 증상의 특징이며, 히스타민의 과다 분비가 가려움증의 주요 원인이 된다. 가려움으로 인해 피부를 긁게 되면 홍반이나 습진성 병변이 나타나게 되고, 심할 경우 피부가 벗겨지거나 태선화(피부가 두꺼워지게 되는 현상)가 진행된다.

아토피성 피부염의 원인에 대해서는 최근까지 수많은 연구결과와 정보가 제시되었으나, 질환 자체의 복잡성과 서로 상충되는 연구 데이터들로 인해 정확한 병인과 유효한 치료법에 대해서 아직까지 명확한 이론이 확립되지 않은 상태이다. 기존의 아토피 피부염에 대한 치료제로 사용되는 스테로이드제제와 항히스타민제 등은 증상을 일시적으로 완화해주는 효과는 있으나 외용 스테로이드호르몬제의 장기 사용 환자들에 있어서 피부가 엷어지는 현상 및 골다공증의 유발, 어린이의 경우 성장 저해 등에 따른 국소 및 전신 부작용으로 인하여 임상적으로 문제가 된다.

한편, 최근에는 T 임파구의 활성 과다 및 IgE의 과다 분비로 인한 과민반응과 같이 비정상적으로 활성화된 면역 반응이 아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 건선 질환의 주된 원인 중 하나라는 사실이 밝혀짐에 따라, 과도한 면역 반응을 억제함으로써 이들 피부질환을 치료하려는 접근법이 관심을 모으고 있다. T 세포 매개성 면역반응을 제어하는 사이토카인에는 여러 종류가 있지만, 특히 아토피성 피부염의 병리에서 중요한 역할을 담당하고 있는 것이 인터루킨-2와 인터루킨-4이다. 인터루킨-2는 T 세포 활성화의 초기 단계에 생산되어 Th 세포를 자극함으로써 면역반응을 강력하게 촉발하는 사이토카인이다.

또한, 최근에 아토피성 피부염의 병인과 관련하여 커다란 관심을 모으고 있는 인터루킨-4는 T 세포 유형 중 특히 아토피성 피부염의 특징적인 병리현상인 Th2 세포의 불균형적인 활성증대를 유도한다는 사실이 밝혀져 있다. 동시에 인터루킨-4는 B 세포를 자극하여 IgE 생산을 증대시킴으로써 비만세포에 의한 히스타민 분비를 촉진하여 홍반, 발적, 가려움증 등의 아토피 반응을 유발하는 핵심 사이토카인이다. T 임파구의 활성 과다, IgE의 과다 분비로 인한 과민반응과 같은 면역반응이 아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 건선 질환과 관련이 있다는 사실을 기술하고 있는 문헌들이 알려지고 있다 (Leung D and Bieber T. Atopic Dermatitis. Lancet 2003, 361: 151-160)). 따라서, 인터루킨-2, 인터루킨-4의 생산 및 이들 사이토카인 반응의 최종 결과물인 T 세포의 과도한 증식을 동시에 억제할 수 있는 물질은 일반적인 면역억제 물질보다 아토피성 피부염의 치료에 더욱 적합한 효능을 제공할 수 있다는 것을 알 수 있다.

한편, 세이지는 클라리세이지(Clary sage)라고도 불리우는 허브로서, 살균 및 피부의 재생작용이 있으며 상처, 거친 피부에 사용하면 효과적이다. 세포 재생 작용으로 피부의 주름을 완화하는 효과와 두피의 과다한 피지 분비를 조절하여 지루성 비듬의 치유에 효과적이라고 알려져 있다.

또한, 레몬밤(Melissa Officinalis)은 지중해 연안이 원산지로 지중해 동부 지방과 서아시아, 흑해연안, 중부 유럽증지에서 자생하는 밀원식물 이다. 레몬과 유사한 향을 가지고 이 향은 감정을 편안하게 진정시켜주며 심장박동수를 낮춰 혈압을 낮춘다. 해독작용과 지사능, 진정, 건위, 강장, 신경 고양 등에 효능이 있으며 식용으로도 이용된다. 레몬밤은 해독작용, 진통효과가 있어 생리통을 억제하고 생리촉진에도 효과가 있다. 특히, 레몬밤 정유에는 생리활성 물질인 폴리페놀 화합물이 많이 함유되어 있다.

또한, 우뭇가사리는(Gelidium amansii)는 홍조식물 우뭇가사리과의 홍조류로 대부분이 섬유소와 한천으로 이루어져 있으며 천연색소와 미네랄, 비타민을 함유하고 있다. 대한민국 공개특허공보 제10-2003-0033480에는 생약성분을 함유하는 우뭇가사리 가공식품등에 대하여 개시된 바 있다.

또한, 양파(Allium cepa)는 외떡잎식물 백합목 백합과의 수해살이 풀이다. 양파의 품종은 비늘줄기가 둥근 모양과 납작하게 둥근 모양, 비늘줄기의 껍질이 붉은 빛인 것과 노란 것, 그리고 흰 것 등으로 나뉜다. 양파는 주로 비늘줄기를 식용으로 하는데, 비늘줄기에서 나는 독특한 냄새는 이황화프로필, 황화알릴 등의 화합물 때문인 것으로 알려져 있고, 이러한 화합물 등은 생리적으로 소화액 분비를 촉진하고 흥분, 발한 또는 이뇨 등의 효과가 있는 것으로 보고되어 있다. 또한 상기 양파 비늘줄기에는 폴리페놀이 풍부하며, 각종 비타민과 함께 칼슘, 인산 등의 무기질과 퀘르세틴과 같은 유효성분이 다량 함유되어 있어,

이에 본 발명자들은 피부에서 비정상적으로 활성화된 면역반응을 통제함으로써 아토피를 포함한 민감피부 개선에 효과적인 물질을 탐색하던 중, 생약 추출물의 조합이 T 임파구 매개성 면역반응의 핵심 사이토카인인 인터루킨-2(interleukin-2)와 IgE 생산을 자극하는 T 임파구 사이토카인인 인터루킨-4(interleukin-4)의 생산을 억제하는 효능을 갖고 있음을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

KR 10-2010-42616A, 초록 및 청구항 1항 KR 10-2008-79467A, 초록 KR 10-2006-106277A 청구항 1항

본 발명의 목적은 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부 개선용 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 목적은 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부 개선용 및 피부 자극 완화용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 목적은 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부 개선용 및 피부 자극 완화용 건강기능식품을 제공하는 것이다.

상기 목적을 해결하기 위하여, 본 발명의 일 구체예는 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부 개선용 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물을 제공한다.

본 명세서에서 사용되는, "피부 자극 완화"란, 피부 자극 물질에 의해 발생하여 피부에 나타나는 가려움, 따끔거림, 화끈거림 등의 자극감과 홍반 및 부종 등의 염증성 자극 반응을 예방, 완화 및 치료하는 것을 의미한다.

상기 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법, 즉, 통상적인 온도와 압력 조건하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있다. 본 발명의 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물 제조에 사용될 수 있는 추출용매로는 예를 들면, 물, 탄소수 C₁ 내지 C₃의 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3 부틸렌 글리콜 등의 추출용매를 단독으로 또는 혼합하여 사용 가능하다. 상기 추출 용매의 적합한 양은 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 또는 양파 추출물 건조 중량의 1 내지 15배 정도, 또는 5 내지 12배일 수 있으며, 10배일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 추출방법으로는 열 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등을 사용할 수 있으며, 1회 또는 다수 회 반복하여 추출시켜 사용할 수 있다. 또한, 추출온도는 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물의 유용성분의 유효활성이 제거되지 않을 정도의 온도이면, 특별히 제한되지 않으나, 바람직하게는 상온에서 침적시켜 추출한다.

상기 본 발명의 일 구체예에 따른 아토피 피부 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물은 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물을 각각 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10의 중량비율, 또는 2 ~ 8 : 2 ~ 8 : 2 ~ 8 : 2 ~ 8의 중량비율로 함유할 수 있으며, 4 ~ 6 : 4 ~ 6 : 4 ~ 6 : 4 ~ 6의 중량비율로 함유할 수 있다. 상기 함량비율은 제품의 특성에 따라 다양한 중량비로 혼합될 수 있다. 특히 상기 세이지, 레몬밤, 우뭇가사리 및 양파를 혼합하여 추출한 경우 각각의 추출물을 혼합한 것에 비하여 아토피 개선 효과가 증가하였으므로, 바람직하게는 각각의 건조 식물을 섞은 후 상기에서 기술한 추출방법으로 추출하여 이용할 수 있다.

상기 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물을 각각 단독으로 이용시에는 비교적 낮은 IL-4 및 IL-2의 생산 억제 효과를 보이나, 이를 혼합할 경우에는 IL-4 및 IL-2의 생산 억제 효능이 현저하게 상승하였음을 알 수 있다. 아토피 질환에서 IL-4와 IL-2가 불균형적으로 과다 생산되는 점을 할 때, 상기 혼합 추출물의 우수한 IL-4 및 IL-2 생산 억제 효능은 아토피 관련 증상 개선에 효과적일 수 있다(표 2 및 3, 및 도 1 및 2). 특히 인위적으로 아토피를 유발한 마우스 및 아토피 증상이 있는 인체를 대상으로 한 아토피 증상 개선 실험에서 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물의 혼합물이나(실시예 5), 세이지, 레몬밤, 우뭇가사리 및 양파의 혼합 추출물의 경우(실시예 10), 추출물 각각에 비하여 우수한 아토피 증상 개선 효과를 보인다(표 4 및 5, 도 3).

또한, 본 발명의 일 구체예는 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물의 혼합 추출물을 함유하는 아토피 피부 및 민감 피부 개선용화장품을 제공한다. 상기 본 발명에 따른 아토피 피부 및 민감 피부 개선용 화장품은 상기 혼합 추출물을 전체 중량비에서 1 내지 30 중량 %, 5 내지 20 중량 %로 함유할 수 있다.

상기 본 발명의 추출물을 포함하는 화장용 조성물은 상기 추출물 이외에 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있으며, 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 맛사지 크림, 에센스, 아이크림, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명의 일 구체예는 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부 개선용 및 피부 자극 완화용 약학적 조성물을 제공한다. 상기 혼합추출물을 전체 중량비에서 1 내지 30 중량%로 함유할 수 있으며, 5 내지 20 중량%로 함유할 수 있다.

상기 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물을 각각 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10의 중량비율로 함유될 수 있으며, 2 ~ 8 : 2 ~ 8 : 2 ~ 8 : 2 ~ 8의 중량비율로 함유되는 것이 바람직하다. 그러나, 함량비율은 제품의 특성에 따라 다양한 중량비로 혼합될 수 있다. 그러나, 상기와 같은 조성은 반듯이 이에 한정되는 것은 아니며, 환자의 상태 및 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.

상기 추출물을 함유하는 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 추출물을 함유하는 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 죄제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명의 추출물을 함유하는 조성물에 함유될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분 및 광물유 등이 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파리핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들어 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 0.0001 내지 100 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 10 mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

상기 약학조성물은 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경우, 직장 또는 정맥, 근육 및 피하내 주사 등에 의해 투여될 수 있다.

또한, 본 발명의 일 구체예는 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부 개선용 및 피부 자극 완화용 건강기능식품을 제공한다. 상기 혼합추출물을 전체 중량비에서 1 내지 30 중량%로 함유할 수 있으며, 5 내지 20 중량%로 함유할 수 있다.

이를 첨가할 수 있는 식품으로는, 각종 식품류, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽제, 음료, 껌, 차, 비타민 복합체, 건강기능성 식품류 등이 있다.

본 발명은 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물을 포함하는 조성물은, 각종 피부질환, 아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 건선 등과 같은 아토피성 피부염 또는 민감성 피부 질환과 같은 증상을 개선하는 화장료 조성물로 이용될 수 있다.

도 1은 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물 각각 및 이의 혼합물의 콘카나발린 A의 자극에 대한 IL-4의 생산 억제 효능을 그래프화 한 것이다.
도 2는 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물 각각 및 이의 혼합물의 콘카나발린 A의 자극에 대한 IL-2의 생산 억제 효능을 그래프화 한 것이다.
도 3은 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물 각각 및 이의 혼합물의 아토피 유발제인 compound 48/80의 자극에 마우스에서 자극완화 효능을 그래프화 한 것이다.

이하, 본 발명을 다음의 실시예 및 시험예에 의거하여 더욱 상세히 설명하나, 본 발명이 하기의 실시예나 시험예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1> 세이지 추출물의 제조

건조 세이지 1 kg에 3차 증류수 5 ℓ를 가하고 80 내지 85 ℃에서 3시간 동안 3회 가열하여 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고 0.45㎛의 필터로 여과하고, 이 여과액을 감압증류기(EYELA, JP/N-1000)를 이용하여 농축 후 동결 건조하여 세이지 추출물 85 g을 얻었다. 제조된 추출물을 60Co 감마선(10 kGy/H, 25 kGy)으로 조사 멸균하여 사용하였다. 상기 추출물을 20 ㎎/㎖의 농도로 3차 증류수에 녹인 후 실험에 사용하였다.

< 실시예 2> 레몬밤 추출물의 제조

건조된 레몬밤잎을 분쇄하고, 분쇄된 레몬밤잎 500 g을 3차 증류수 5 ℓ에 첨가하여, 75 ℃에서 24시간 동안 중탕가열을 하였다. 이를 종이 필터인 Watman #2로 여과하여 고형분을 제거한 후, 이 여과액을 감압증류기(EYELA, JP/N-1000)를 이용하여 감압 건조하여 레몬밤 추출물 43 g을 얻었다. 제조된 추출물을 60Co 감마선(10 kGy/H, 25 kGy)으로 조사 멸균하여 사용하였다. 상기 추출물을 20 ㎎/㎖의 농도로 3차 증류수에 녹인 후 실험에 사용하였다.

< 실시예 3> 우뭇가사리 추출물의 제조

건조 우뭇가사리 1 kg을 적절한 크기로 세절하고 추출조에 투입한 후, 증류수 5 ℓ를 가하고 70 내지 75 ℃에서 3시간 동안 가열하여 3회 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고 0.45 ㎛의 필터로 여과하고, 이 여과액을 감압증류기(EYELA, JP/N-1000)를 이용하여 농축 후 동결 건조하여 우뭇가사리 추출물 112 g을 얻었다. 제조된 추출물을 60Co 감마선(10 kGy/H, 25 kGy)으로 조사 멸균하여 사용하였다. 상기 추출물을 20 ㎎/㎖의 농도로 3차 증류수에 녹인 후 실험에 사용하였다.

< 실시예 4> 양파 추출물의 제조

음건하여 세절한 양파 1 kg에 5 ℓ를 가하고 90 ℃ 내지 95 ℃에서 3시간 동안 3회 추출하였다. 이를 종이 필터인 Watman #2로 여과하여 고형분을 제거한 후, 이 여과액을 감압증류기(EYELA, JP/N-1000)를 이용하여 농축 후 동결 건조하여 양파 열수 추출물 126 g을 얻었다. 제조된 추출물을 60Co 감마선(10 kGy/H, 25 kGy)으로 조사 멸균하여 사용하였다. 상기 추출물을 20 ㎎/㎖의 농도로 3차 증류수에 녹인 후 실험에 사용하였다.

< 실시예 5 내지 9> 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물, 및 양파 추출물의 혼합 추출물의 제조

실시예 1 내지 4에서 얻은 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물, 및 양파 추출물을 하기 표 1에 제시된 것과 같은 중량 비율로 혼합한 혼합 추출물을 얻었다.

혼합 추출물에 있어서의 각 추출물 성분의 중량 비율(%)

실시예	세이지 추출물	레몬밤 추출물	우뭇가사리 추출물	양파 추출물
5	25	25	25	25
6	40	20	20	20
7	20	40	20	20
8	20	20	40	20
9	20	20	20	40

< 실시예 10> 세이지, 레몬밤 , 우뭇가사리, 및 양파의 혼합 추출물의 제조

건조된 세이지 500 g, 건조된 레몬밤잎 250 g, 건조된 우뭇가사리 500 g, 건조된 양파 500 g에 증류수 5 ℓ를 가하고 80 내지 85 ℃에서 3시간 동안 가열하여 3회 추출한 후, 400메쉬 여과포로 여과하고 0.45 ㎛의 필터로 여과하고, 이 여과액을 감압증류기(EYELA, JP/N-1000)를 이용하여 농축 후 동결 건조하여, 세이지, 레몬밤잎, 우뭇가사리 및 양파의 혼합추출물 154 g을 얻었다. 제조된 추출물을 60Co 감마선(10 kGy/H, 25 kGy)으로 조사 멸균하여 사용하였다. 상기 추출물을 20 ㎎/㎖의 농도로 3차 증류수에 녹인 후 실험에 사용하였다.

< 시험예 1> 인터루킨-4 생산 억제 효과

BALB/C 생쥐의 비장세포에 T 임파구를 자극하여 반응을 일으키는 미토젠 (mitogen)인 콘카나발린 A(concanavalin A)를 가한 다음, 상기 실시예 1 내지 10에서 제조된 추출물을 각각 처리하여 인터루킨-4의 생산 억제 효과를 측정하였다. 구체적으로, 10 %의 우태아 혈청(Sigma-Aldrich, Seoul, Korea)이 함유된 RPMI 배지(Sigma-Aldrich, Seoul, Korea)가 함유된 96웰 평판배양기에 생쥐의 비장세포를 2 x 10⁵ cells/well이 되도록 넣고, 콘카나발린 A를 5 ㎍/㎖ 농도로 가하여 T 임파구를 활성화시켰다. 그 다음 실시예 1 내지 10의 추출물을 하기 표 2의 농도대로 처리하여 36시간 후에 배양액 중으로 유리된 인터루킨-4를 ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) 방법으로 정량하였다. 이때 콘카나발린 A만을 처리하고 조성물을 처리하지 않은 군을 대조군으로 하여 하기 수학식 1에 따라 인터루킨-4 생성 억제율을 계산하여 그 결과를 표 2에 나타내었다.

	농도 (%)	인터루킨-4 생성 억제율(%)
대조군	식염수	0
실시예1	0.01	24
실시예2	0.01	34
실시예3	0.01	28
실시예4	0.01	37
실시예5	0.01	65
실시예6	0.01	62
실시예7	0.01	71
실시예8	0.01	64
실시예9	0.01	63
실시예10	0.01	68

상기 표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명의 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물, 양파 추출물 및 그의 혼합추출물은 각각 0.01%의 낮은 농도에서 활성화된 T 임파구에 의한 인터루킨-4의 생산을 억제하는 효과를 갖고 있음을 확인할 수 있었다.

< 시험예 2> 인터루킨 -2 생산 억제 효과

BALB/C 생쥐의 비장세포에 T 임파구를 자극하여 반응을 일으키는 미토젠인 콘카나발린 A를 가한 다음, 상기 실시예 1 내지 10에서 제조된 추출물을 각각 처리하여 인터루킨-2의 생산 억제 효과를 측정하였다. 구체적으로, 10 %의 우태아 혈청이 함유된 RPMI 배지가 함유된 96웰 평판배양기에 생쥐의 비장세포를 2 x 10⁵ cells/well이 되도록 넣고, 콘카나발린 A를 5 ㎍/㎖ 농도로 가하여 T 임파구를 활성화시켰다. 그 다음 각 조성물을 하기 표 3의 농도대로 처리하여 24시간 후에 배양액 중으로 유리된 인터루킨-2를 ELISA 방법으로 정량하였다. 이때 콘카나발린 A만을 처리하고 조성물을 처리하지 않은 군을 대조군으로 하여 상기 수학식 1에 따라 인터루킨-2 생성 억제율을 계산하여 그 결과를 표 3에 나타내었다.

	농도 (%)	인터루킨-2 생성 억제율(%)
대조군	식염수	0
실시예1	0.01	28
실시예2	0.01	31
실시예3	0.01	26
실시예4	0.01	30
실시예5	0.01	67
실시예6	0.01	64
실시예7	0.01	62
실시예8	0.01	63
실시예9	0.01	72
실시예10	0.01	70

상기 표 3에 나타난 바와 같이, 본 발명의 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물, 양파 추출물 및 그의 혼합추출물은 각각 0.01%의 낮은 농도에서 활성화된 T 임파구에 의한 인터루킨-2의 생산을 억제하는 효과를 갖고 있음을 확인하였다.

< 시험예 3> 마우스 아토피 피부염 모델

본 발명에 따른 혼합추출물의 아토피 피부염 유발 억제효과를 확인하기 위하여 하기와 같은 실험을 진행하였다.

누드 마우스(BALB/C sic-nu/nu mouse(12-17g,♀)) 등쪽의 목부위 피부에 생리식염수(대조군 및 무처리군), 본 발명에 따른 실시예 1 내지 5 및 10에서 얻은 추출물(실험군)을 정제수를 이용하여 10분의 1로 희석시킨 후 각각 하루 2회 5일 동안 도포하였다. 이후, 대조군을 제외하고 실험군 및 무처리군에 compound 48/80(Sigama St. louis, MO, USA; 생리식염수에 녹여 1 ㎎/㎖로 제조하여 사용) 50 ㎕을 마우스 등쪽 목부위 진피내에 주사한 후, 챔버에 넣고 60분 동안 마우스의 행동을 관찰하고, 이를 비디오로 촬영하였다. 마우스가 목을 긁는 행동을 관찰하고, 이를 시간별로 그 횟수를 계산하여 소양증 정도를 판정하였다(Orito, et., 2004). 그 결과를 표 4 및 도 3에 나타내었다.

	10분	20분	30분	40분	50분	60분
대조군	0	0	0	0	0	0
무처리군	84	72	69	41	34	22
실시예1	62	54	48	30	23	14
실시예2	62	63	58	28	24	11
실시예3	58	62	54	31	23	9
실시예4	54	57	45	26	19	7
실시예5	21	34	28	12	5	3
실시예10	18	28	24	9	3	1

표 4 및 도 3에 나타난 바와 같이, 대조군의 경우 처음 10분간은 목을 긁는 행동의 정도가 심하게 나타났으며, 점차 줄어드는 양상을 보였다. 반면에, 본 발명의 실시예의 추출물을 도포한 그룹에서는 목을 긁는 행동이 줄어드는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물, 양파 추출물 각각에 비하여 이의 혼합물이 경우 긁는 양상을 현저히 감소시킴을 확인하였다. 따라서, 본 발명의 혼합추출물이 아토피에 의한 소양증의 감소시킬 수 있음을 확인하였다.

< 시험예 4> 인체에서 아토피 증상 개선 시험

본 발명의 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물, 양파 추출물에 의한 아토피 증상 개선 효과를 확인하기 위하여, 상기 실시예 5 및 10 에서 제조된 혼합 추출물을 패널들에게 적용하여 아토피성 피부염 개선 정도를 평가하였다.

비슷한 정도의 증상을 나타내는 아토피성 피부염 증상이 있다고 생각하는 패널 30명을 선발하여, 10명씩 3개조로 나누었다. 온도 24~26 ℃, 습도 60 % 조건에서, 식염수, 실시예 5 및 10 추출물을 매일 2회씩 6주간 안면에 도포하게 하였다. 시험을 끝난 후 시험 대상자들로 하여금 설문지를 작성하게 하여 주관적인 효능 평가를 실시하였다.

설문시, 아토피성 피부염의 증상인 “소양감”, “건조함”, “각질 발생”, “비듬”, “홍반”, “부어오름”, “피부균열”, “진물과 습진” 및 “태선화본”등의 증상을 기준으로 각각의 개선 정도를 평가한 후 이를 평균하여 아토피 증상 개선효과를 개인별로 평가하였다.그 결과를 표 5에 나타내었다.

	응답자 수 (인)
	현저히 개선	개선	변화없음	악화
식염수	0	2	8	0
실시예 5	2	5	3	0
실시예 10	3	6	2	0

상기 표 5로부터, 본 발명의 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물, 양파 추출물의 혼합물 및 세이지, 레몬밤, 우뭇가사리, 양파의 혼합추출물을 함유하는 조성물을 도포한 경우 아토피성 피부염 증상이 개선됨을 확인하였다. 또한, 실시예 5 및 10 모두 조성물에 의한 과민반응이나 부작용은 나타나지 않았다.

< 시험예 6> 추출물의 세포 독성 측정

인간 각질형성 세포주인 HaCaT 세포에 상기 실시예 1 내지 10에서 제조된 추출물을 처리하여 각 조성물의 세포독성을 측정하였다. 구체적으로, 10 %의 우태아 혈청이 함유된 DMEM 배지가 함유된 96웰 평판배양기에 HaCaT 세포를 5000 cells/well로 분주하고 세포가 부착되도록 24시간 동안 배양하였다. 여기에 상기 실시예 1 내지 10에서 제조된 추출물을 1 % 농도대로 처리하여 24시간 동안 배양한 다음, 50 ㎕/well의 테트라졸리움 염색약을 가하여 4시간 동안 추가 배양하였다.살아 있는 세포에 의해 생성된 포마잔을 150 ㎕/well의 디메틸설폭시드(dimethyl sulfoxide)에 용해시켜 570 nm에서 흡광도를 측정함으로써 정량하였다. 용해된 포마잔에 의한 흡광도는 살아 있는 세포 수에 비례한다. 이때 상기 추출물 대신 정제수를 처리한 군을 대조군으로 하여 상기 수학식 1에 따라 HaCaT 세포 활성 억제율을 계산하여 그 결과를 표 6에 나타내었다.

	HaCat 세포 활성 억제율(%)
대조군	0
실시예1	2
실시예2	3
실시예3	0
실시예4	4
실시예5	2
실시예6	2
실시예7	2
실시예8	1
실시예9	3
실시예10	1

상기 표 6으로부터, 본 발명의 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물, 양파 추출물의 혼합물 및 그의 혼합추출물을 함유하는 조성물은 세포 독성이 매우 낮은 안전한 조성물임을 확인하였다. 또한, 실시예 5 및 10 모두 조성물에 의한 과민반응이나 부작용은 나타나지 않았다.

< 제제예 1> 유연 화장수

정제수에 부틸렌 글리콜, 글리세린, 폴리옥시에틸렌 경화 피마지유, 베타인, 구연산, 구연산나트륨 및 방부제를 첨가하여 교반한 후 용해시킨 다음, 에탄올에 향료를 넣어 용해시킨 혼합물을 첨가하였다. 상기 실시예 9에 따른 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물, 양파 추출물을 가하여 충분히 교반한 후, 숙성시켜 상기 실시예 9에 따른 상기 혼합추출물을 함유한 유연 화장수를 제조하였다. 하기 표 7에 각 성분의 함량을 나타내었다.

성분	함량(중량%)
세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물	4.0
부틸렌 글리콜	3.5
글리세린	2.5
폴리옥시에틸렌 경화 피마자유	0.1
에탄올	2.5
베타인	1.0
구연산	0.01
구연산 나트륨	0.03
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

< 제제예 2> 영양 화장수

상기 실시예 9에 따른 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물, 양파 추출물, 부틸렌 글리콜, 글리세린, 카르복시비닐폴리머, 아르기닌, 방부제 및 정제수를 70 ℃ ~ 75 ℃에서 교반하면서 가열하였다. 여기에 75 ℃ ~ 80 ℃에서 교반하여 가열시킨 스쿠알란, 부틸렌글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트, 소르비탄스테아레이트, 포리소르베이트 60, 글리세릴 스테아레이트 및 스테아릴글리세레티네이트 혼합물을 가하여 유화시킨 후, 교반하면서 45℃정도로 냉각하면서 향료를 첨가하여 교반한 다음, 30 ℃까지 냉각한 후 숙성시켜 상기 실시예 9에 따른 상기 혼합추출물을 함유한 영양화장수를 제조하였다. 하기 표 8에 각 성분의 함량을 나타내었다.

성분	함량(중량%)
세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물	6.0
부틸렌 글리콜	8.0
글리세린	5.0
스쿠알란	4.0
부틸렌글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트	5.0
소르비탄스테아레이트	1.5
폴리소르베이트 60	1.0
글리세릴스테아레이트	0.5
스테아릴글리시레티네이트	0.2
카르복시비닐폴리머	0.1
아르기닌	0.1
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

< 제제예 3> 영양 에센스

시토 시테롤, 폴리글리세릴-2-올레이트, 세라마이드, 세테아레스-4 및 콜레스테롤을 교반하여 혼합한 다음, 상기 실시예 9에 따른 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물, 양파 추출물, 디세틸포스페이트, 농글리세린 및 정제수 혼합용액을 첨가하여 유화시킨 후, 교반하면서 45 ℃로 냉각되면 향료를 첨가하여 교반하고 30 ℃까지 냉각시켜 숙성시켰다. 여기에 카르복시비닐폴리머, 산탄검 및 방부제를 첨가하여 안정화시킨 후 숙성시켜 상기 실시예 9에 따른 상기 혼합추출물을 함유한 영양 에센스를 제조하였다. 하기 표 9에 각 성분의 함량을 나타내었다.

성분	함량(중량%)
세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물	7.0
시토 스테롤	1.7
폴리글리세릴-2-올레이트	1.5
세라마이드	0.5
세테아레스-4	1.2
콜레스테롤	1.5
디세틸포스페이트	0.4
농글리세린	5.0
카르복시비닐폴리머	0.2
산탄검	0.2
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

< 제제예 4> 영양 크림

1,3-부틸렌 글리콜, 글레세린, 하이드로제네이트드 레시진, 옥틸도데카놀, 트리옥타노인, 스테아릭에씨드, 폴리솔베이트 60, 및 소르비탄세스퀴올레이트을 교반하여 혼합한 다음, 상기 실시예 9에 따른 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물, 양파 추출물, 트리에탄올아민, 디메치콘, EDTA, 글리세린 및 정제수 혼합용액을 첨가하여 유화시킨 후, 교반하면서 45 ℃로 냉각되면 향료를 첨가하여 교반하고 30 ℃까지 냉각시켜 숙성시켰다. 여기에 산탄검 및 방부제를 첨가하여 안정화시킨 후 숙성시켜 상기 실시예 9에 따른 상기 혼합추출물을 함유한 영양 크림을 제조하였다. 하기 표 10에 각 성분의 함량을 나타내었다.

성분	함량(중량%)
세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물	10.0
1,3-부틸렌 글리콜	3.0
글리세린	3.0
하이드로제네이티드 레시친	1.0
옥틸도데카놀	3.0
트리옥타노인	2.0
스테아릭에씨드	1.5
세토스테아릴알콜	2.0
폴리솔베이트 60	1.5
소르비탄세스퀴올레이트	2.0
디메치콘	3.0
항산화제	0.3
산탄검	0.2
트리에탄올아민	0.1
EDTA	0.1
정제수	잔량

< 제제예 5> 팩

글리세린, 1,3-부틸렌 글리콜, 소듐하이루로네이트, 글리신, 및 폴리아크릴아마이드을 교반하여 혼합한 다음, 상기 실시예 9에 따른 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물, 양파 추출물, 스쿠알렌, 디메치콘, 트리에탄올아민, 및 EDTA 합용액을 첨가하여 유화시킨 후, 교반하면서 45 ℃로 냉각되면 향료를 첨가하여 교반하고 30 ℃까지 냉각시켜 숙성시켰다. 여기에 산탄검 및 방부제를 첨가하여 안정화시킨 후 숙성시킨후 부직포에 상기 실시예 9에 따른 상기 혼합추출물을 도포하여 팩을 제조하였다. 하기 표 11에 각 성분의 함량을 나타내었다.

성분	함량(중량%)
세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물	8.0
글리세린	7.0
1,3-부틸렌 글리콜	3.0
스쿠알렌	3.0
디메치콘	3.0
소듐하이루로네이트	0.1
글리신	2.0
폴리아크릴아마이드	5.0
항산화제	0.3
트리에탄올아민	0.1
EDTA	0.1
정제수	잔량

< 제제예 6> 산제의 제조

하기의 성분들을 혼합하고, 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다. 하기 표 12에 각 성분의 함량을 나타내었다.

성분	함량(중량%)
세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물, 양파 추출물(실시예 9)	10
유당	100
탈크	10

< 제제예 7> 액제의 제조

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고, 레몬향을 적정량 가한 다음 하기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다. 하기 표 13에 각 성분의 함량을 나타내었다.

성분	함량(중량%)
세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물, 양파 추출물(실시예 9)	5
이성화당	100
만티톨	50
정제수	적량

Claims (10)

1. 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부 개선용 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물을 각각 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10의 중량비율로 포함하는 아토피 피부 개선용 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물을 각각 4 ~ 6 : 4 ~ 6 : 4 ~ 6 : 4 ~ 6의 중량비율로 포함하는 아토피 피부 개선용 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물은 물, C₁ 내지 C₃의 알코올, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 용매로 추출된 것인 아토피 피부 개선용 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물.
5. 제4항에 있어서, 세이지, 레몬밤, 우뭇가사리 및 양파를 혼합한 다음 상기 용매로 추출하여 얻어진 혼합추출물을 포함하는 아토피 피부 개선용 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물.
6. 제1항 내지 제4항중 어느 한 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 크림, 유연화장수, 수렴화장수, 밀크 로션, 파운데이션, 비누 및 세안폼으로 구성된 군으로부터 선택된 제형으로 제제화된 것인 아토피 피부 개선용 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물.
7. 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부 개선용 및 피부 자극 완화용 약학적 조성물.
8. 제7항에 있어서, 상기 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물을 각각 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10의 중량비율로 포함하는 아토피 피부 개선용 및 피부 자극 완화용 약학적 조성물.
9. 제7항에 있어서, 상기 약학적 조성물은 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함하는 것인 약학적 조성물.
10. 세이지 추출물, 레몬밤 추출물, 우뭇가사리 추출물 및 양파 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부 개선용 및 피부 자극 완화용 건강기능식품.

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