KR20090008344A

KR20090008344A - 시클로프로필 융합된 인돌로벤즈아제핀 ｈｃｖｎｓ5ｂ 억제제

Info

Publication number: KR20090008344A
Application number: KR1020087027866A
Authority: KR
Inventors: 존 에이. 벤더; 민 딩; 로버트 지. 젠틀스; 피야세나 헤와와삼
Original assignee: 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
Priority date: 2006-05-17
Filing date: 2007-05-04
Publication date: 2009-01-21
Also published as: CY1111526T1; ATE501156T1; JP2009537557A; AR061008A1; MX2008014435A; HRP20110194T1; KR101417145B1; EA200802346A1; DE602007013036D1; IL195025A0; NO341663B1; EP2024375B1; CA2651690C; NO20084637L; SI2024375T1; PL2024375T3; PE20080070A1; US7456166B2; ZA200809548B; AU2007253998B2

Abstract

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 뿐만 아니라, 상기 화합물을 사용하는 조성물 및 방법을 포함한다. 상기 화합물은 C형 간염 바이러스 (HCV)에 대한 활성을 가지며 HCV 감염체를 치료하는데 있어서 유용하다.

<화학식 I>

C형 간염 바이러스, 인터페론, 항-HCV 활성

Description

시클로프로필 융합된 인돌로벤즈아제핀 ＨＣＶＮＳ5Ｂ 억제제 {CYCLOPROPYL FUSED INDOLOBENZAZEPINE HCV NS5B INHIBITORS}

<관련 출원에 대한 상호 참조>

본 출원은 2006년 5월 17일자로 출원된 미국 가출원 제60/801,125호; 2006년 5월 19일자로 출원된 미국 가출원 제60/802,005호; 2006년 10월 16일자로 출원된 미국 가출원 제60/852,084호; 및 2007년 3월 14일자로 출원된 미국 가출원 제60/894,757호의 이익을 청구한다.

C형 간염 바이러스 (HCV)는 전세계적으로 1억 7천만명 (제1형 인간 면역결핍 바이러스 감염자수의 대략 5배)으로 추정되는 인구를 감염시킨 주요한 인간 병원체이다. 이들 HCV 감염 개체의 대다수에서는 간경화증 및 간세포 암종을 비롯한 심각한 진행성 간 질환이 발병한다 (문헌 [Lauer, G. M.; Walker, B. D. N. Engl. J. Med. 2001, 345, 41-52]).

HCV는 양성-가닥 RNA 바이러스이다. 추론되는 아미노산 서열의 비교 및 5'-미번역 영역에서의 큰 유사성을 토대로, HCV는 플라비비리다에(Flaviviridae) 과 내의 별도의 속으로서 분류되어 왔다. 플라비비리다에 과의 모든 구성원은 중단되지 않는 단일 오픈 리딩 프레임 (ORF)의 번역을 통해 알려진 모든 바이러스-특이적 단백질을 코딩하는 양성-가닥 RNA 게놈을 함유하는 외피형 비리온을 가진다.

HCV 게놈에 대한 뉴클레오티드, 및 코딩된 아미노산 서열 내에서 상당한 이질성이 발견된다. 6개 이상의 주요 유전자형이 특성화되어 있고, 50개 초과의 아형이 개시되어 있다. HCV의 주요 유전자형은 전세계적으로 그의 분포가 상이하며, HCV의 유전적 이질성의 임상적 의미는 유전자형이 발병기전 및 치료법에 미칠 수 있는 영향에 대한 수많은 연구에도 불구하고 여전히 파악하기 어렵다.

단일 가닥 HCV RNA 게놈은 길이가 대략 9500개의 뉴클레오티드이고, 약 3000개 아미노산의 거대한 단일 다중단백질을 코딩하는 단일 오픈 리딩 프레임을 가진다. 감염된 세포에서, 그러한 다중단백질은 세포성 및 바이러스성 프로테아제에 의해 복수 개의 부위에서 절단되어 구조적 및 비-구조적(NS) 단백질을 생산한다. HCV의 경우, 성숙한 비-구조적 단백질 (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A 및 NS5B)의 발생은 2개의 바이러스성 프로테아제에 의해 영향을 받는다. 첫 번째 것은 메탈로프로테아제인 것으로 생각되고, NS2-NS3 접합부에서 절단하며; 두 번째 것은 NS3의 N-말단 영역 내에 함유된 세린 프로테아제 (NS3 프로테아제라고도 지칭됨)이고, NS3-NS4A 절단 부위에서는 시스 및 나머지 NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B 부위의 경우 트랜스로 NS3의 하류에서 모든 후속적인 절단을 매개한다. NS4A 단백질은, NS3 프로테아제에 대한 공동인자로서 작용하고 NS3 및 다른 바이러스성 레플리카제(replicase) 성분의 막 국지화를 보조할 수도 있는 복수 기능을 제공하는 것으로 여겨진다. NS3 단백질과 NS4A의 복합체 형성은 모든 부위에서 단백질분해 효능을 증진시키므로, 프로세싱 사건에 필수적인 것으로 사료된다. NS3 단백질은 또한 뉴클레오시드 트리포스파타제 및 RNA 헬리카제 활성을 나타낸다. NS5B (HCV 폴리머라제라고도 지칭됨)는 HCV의 복제에 관여하는 RNA-의존성 RNA 폴리머라제이다. HCV NS5B 단백질은 문헌 [Structural Analysis of the Hepatitis C Virus RNA Polymerase in Complex with Ribonucleotides, Bressanelli; S. et al., Journal of Virology 2002, 3482-3492]; 및 [Defrancesco and Rice, Clinics in Liver Disease 2003, 7, 211-242]에 기재되어 있다.

현재, 가장 효과적인 HCV 치료법은 환자의 40％에서 지속적인 효능을 초래하는, 알파-인터페론 및 리바비린의 조합을 사용한다 (문헌 [Poynard, T. et al. Lancet 1998, 352, 1426-1432]). 최근의 임상 결과는 PEG화된 알파-인터페론이 단일요법으로서의 비-변형된 알파-인터페론보다 우수함을 입증하였다 (문헌 [Zeuzem, S. et al. N. Engl. J. Med. 2000, 343, 1666-1672]). 그러나, 환자의 대다수는 PEG화된 알파-인터페론 및 리바비린의 조합을 수반한 실험적 치료 섭생법으로도 바이러스 로드가 지속적으로 감소되지 않는다. 따라서, HCV 감염의 치료를 위한 효과적인 치료법의 개발에 대한 필요성이 명확하며 중요하다.

본 발명의 한 측면은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.

식 중,

R¹은 CO₂R⁵ 또는 CONR⁶R⁷이고;

R²는

이고;

R³은 수소, 할로, 알킬, 알케닐, 히드록시, 벤질옥시, 알콕시 또는 할로알콕시이고;

R⁴는 시클로알킬이고;

R⁵는 수소 또는 알킬이고;

R⁶은 수소, 알킬, 알킬SO₂, 시클로알킬SO₂, 할로알킬SO₂, (R⁹)₂NSO₂ 또는 (R¹⁰)SO₂이고;

R⁷은 수소 또는 알킬이고;

R⁸은 수소, 알킬, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 알킬카르보닐, 시클로알킬 카르보닐, 할로알킬카르보닐, 알콕시카르보닐, 알킬SO₂, 시클로알킬SO₂, 할로알킬SO₂, 아미노카르보닐, (알킬아미노)카르보닐, (디알킬아미노)카르보닐, 벤질, 벤질옥시카르보닐 또는 피리디닐이고;

R⁹는 수소, 알킬 또는 시클로알킬이고;

R¹⁰은 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 호모피페리디닐 또는 호모모르폴리닐이며 0 내지 3개의 알킬 치환기로 치환된다.

본 발명의 또다른 측면은

R¹은 CO₂R⁵ 또는 CONR⁶R⁷이고;

R²는

이고;

R³은 수소, 할로, 알킬, 알케닐, 히드록시, 벤질옥시 또는 알콕시이고;

R⁴는 시클로알킬이고;

R⁵는 수소 또는 알킬이고;

R⁷은 수소 또는 알킬이고;

R⁸은 수소, 알킬, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 알킬카르보닐, 알콕시카르보닐, 벤질, 벤질옥시카르보닐 또는 피리디닐이고;

R⁹는 수소 또는 알킬이고;

R¹⁰은 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, N-(알킬)피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 호모피페리디닐 또는 호모모르폴리닐인

화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.

본 발명의 또다른 측면은 R¹은 CONR⁶R⁷이고; R⁶은 알킬SO₂, 시클로알킬SO₂, 할로알킬SO₂, (R⁹)₂NSO₂ 또는 (R¹⁰)SO₂이고; R⁷은 수소인 화학식 I의 화합물이다.

본 발명의 또다른 측면은 R³은 수소인 화학식 I의 화합물이다.

본 발명의 또다른 측면은 R³은 메톡시인 화학식 I의 화합물이다.

본 발명의 또다른 측면은 R⁴는 시클로헥실인 화학식 I의 화합물이다.

본 발명의 또다른 측면은 R⁶은 (R⁹)₂NSO₂ 또는 (R¹⁰)SO₂인 화학식 I의 화합물이다.

본 발명의 또다른 측면은 R⁶은 (디메틸아미노)SO₂인 화학식 I의 화합물이다.

본 발명의 또다른 측면은 R⁶은 알킬SO₂인 화학식 I의 화합물이다.

본 발명의 또다른 측면은 R⁶은 이소프로필SO₂인 화학식 I의 화합물이다.

본 발명의 또다른 측면은 하기 입체화학에 따르는 화학식 I의 화합물이다.

R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸, R⁹또는 R¹⁰을 포함하는 임의의 변수의 임의의 범주는 임의의 다른 경우의 변수의 범주와 독립적으로 사용될 수 있다.

달리 명시하지 않는 한, 이들 용어들은 다음 의미들을 갖는다. "알킬"은 1 내지 6개의 탄소로 이루어진 선형 또는 분지형 알킬기를 의미한다. "알케닐"은 1개 이상의 이중 결합을 갖는 2 내지 6개의 탄소로 이루어진 선형 또는 분지형 알킬기를 의미한다. "시클로알킬"은 3 내지 7개의 탄소로 이루어진 모노시클릭 고리계를 의미한다. "히드록시알킬", "알콕시" 및 치환된 알킬 잔기를 갖는 다른 용어는 알킬 잔기에 대해 1 내지 6개의 탄소 원자로 이루어진 선형 및 분지형 이성질체를 포함한다. "할로알킬" 및 "할로알콕시"는 모노할로 치환된 알킬 내지 퍼할로 치환 된 알킬의 할로겐화된 이성질체 전부를 포함한다. "아릴"은 카르보시클릭 및 헤테로시클릭 방향족 치환기를 포함한다. 삽입구 및 다중삽입구 용어는 당업자에게 결합 관계를 명료하게 하기 위한 것이다. 예를 들어, ((R)알킬)과 같은 용어는 치환기 R로 추가로 치환된 알킬 치환기를 의미한다.

본 발명은 본 발명의 화합물의 모든 제약상 허용되는 염 형태를 포함한다. 제약상 허용되는 염은 반대 이온이 화합물의 생리학적 활성 또는 독성에 유의하게 기여하지 않아, 약리학적 등가물로서 기능하는 것들이다. 이러한 염은 시판되는 시약을 사용하여 통상의 유기 기술에 따라 제조할 수 있다. 몇몇 음이온성 염 형태는 아세테이트, 아시스트레이트, 베실레이트, 브로마이드, 캄실레이트, 클로라이드, 시트레이트, 푸마레이트, 글루쿠로네이트, 히드로브로마이드, 히드로클로라이드, 히드로요오다이드, 요오다이드, 락테이트, 말레에이트, 메실레이트, 니트레이트, 파모에이트, 포스페이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 토실레이트 및 크시노포에이트를 포함한다. 몇몇 양이온성 염 형태는 암모늄, 알루미늄, 벤자틴, 비스무스, 칼슘, 콜린, 디에틸아민, 디에탄올아민, 리튬, 마그네슘, 메글루민, 4-페닐시클로헥실아민, 피페라진, 칼륨, 나트륨, 트로메타민 및 아연을 포함한다.

본 발명의 몇몇 화합물은 비대칭 탄소 원자를 갖는다 (예를 들어, 하기 구조 참조). 본 발명은 거울상이성질체 및 부분입체이성질체를 비롯한 모든 입체이성질체 형태, 및 라세미체와 같은 입체이성질체들의 혼합물을 포함한다. 몇몇 입체이성질체는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 화합물의 입체이성질체 혼합물 및 관련된 중간체는 당업계에 통상적으로 공지된 방법에 따라 개별 이성 질체로 분리할 수 있다. 하기 반응식 및 표에서 분자 구조를 묘사할 때 웨지 또는 해쉬의 사용은 단지 상대적인 입체화학을 나타내기 위한 것이며, 절대적인 입체화학 배열을 의미하는 것으로 해석되어서는 안된다.

합성 방법

화합물은 하기 기재된 것들을 비롯한 당업계에 공지된 방법으로 제조할 수 있다. 일부 시약 및 중간체는 당업계에 공지되어 있다. 그 외의 다른 시약 및 중간체는 손쉽게 입수가능한 물질을 사용하여 당업계에 공지된 방법으로 제조할 수 있다. 화합물의 합성을 기재하는데 사용되는 변수 (예를 들어, 번호가 적힌 "R" 치환기)는 단지 어떻게 제조하는지를 예시하기 위한 것이며, 특허청구범위 또는 명세서의 다른 부분에서 사용된 변수와 혼동해서는 안된다. 반응식 내에서 사용되는 약어는 통상적으로 당업계에서 사용되는 관례에 따른다.

메틸 2-브로모-3-시클로헥실-1H-인돌-6-카르복실레이트를 2-브로모-3-시클로헥실-1H-인돌-6-카르복실산으로 가수분해시킬 수 있다 (반응식 1 참조). 이 화합물은, 예를 들어 무수 THF 중 1,8-디아자바이시클로[5.4.0]운데크-7-엔과 함께 1,1'-카르보닐디이미다졸을 사용하여 다양한 술포닐 우레아와 축합시킬 수 있다. 생성된 아실 술파미드를, 예를 들어 스즈끼(Suzuki) 커플링 조건을 사용하여 여러 2-포르밀 보론산 또는 에스테르와의 공지된 커플링 반응에 적용하여 묘사된 유형의 시클릭 헤미아미날 중간체를 제공할 수 있다. 이들 화합물은 연속적인 마이클(Michael) 및 호르너 에몬스(Horner Emmons) 반응을 통해 DMF 중 탄산세슘의 영향하에 메틸 2-(디메톡시포스포릴)아크릴레이트로 처리함으로써 인돌로벤즈아제핀 유도체로 전환시킬 수 있다.

관련된 융합 시클로프로필 에스테르 유도체는, DMSO 중에서 강염기성 조건하에 트리메틸 술폭소늄 요오다이드로 인돌로벤즈아제핀 에스테르를 처리하는 것을 비롯한, 당업계에 공지된 방법에 의해 제조할 수 있다. 생성된 융합 시클로프로판 중 잔류 지방족 에스테르 잔기는 가수분해될 수 있고 생성물 산은 다양한 알킬-가교 피페라진과 축합될 수 있다. 예를 들면, DMSO 중 O-(1H-벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 및 디이소프로필 에틸 아민이 가교 피페라진 카르복스아미드를 제공할 수 있다.

N-보호된 피페라진은 또한 중간체 인돌로벤즈아제핀 산에 커플링될 수 있고 생성된 피페라진 카르복스아미드는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 탈보호시키고 다양한 합성 프로토콜을 사용하여 유도체화시킬 수 있으며, 그의 몇몇 예가 하기에 도시되어 있다 (반응식 2 참조).

본 발명의 몇몇 화합물의 합성에 유용한 중간체는 반응식 3에 도시된 tert-부틸 에스테르 인돌로벤즈아제핀의 제조를 포함한다.

이 방법론은 도시된 인돌 메틸 에스테르의 염기 촉매된 가수분해, 이어서 그의 티오닐 클로라이드 및 칼륨 3급 부톡사이드와의 반응, 또는 탄산은 및 3급 부틸 브로마이드로의 알킬화를 포함한다. 생성된 화합물은 앞서 설명한 것과 유사한 화학법을 사용하여 변형시켜 상기 도시한 혼합된 에스테르 인돌로벤즈아제핀을 제공할 수 있다.

이들 중간체는 반응식 4에 도시된 바와 같이, 아실술파미드 및 아실술폰아미드 알킬-가교 피페라진의 제조를 위해 이용될 수 있는 대안의 절차에서 유용하다. 중간체 t-부틸 에스테르 인돌로벤즈아제핀의 시클로프로판화 및 t-부틸 에스테르기의 후속 절단은 산을 생성할 수 있고, 이는 다양한 술폰아미드 및 술포닐우레아에 커플링될 수 있다. 후속 가수분해로 관련된 지방족 산을 얻고, 이는 다양한 알킬- 가교 피페라진과 커플링될 수 있다. 예를 들면, DMSO 중 O-(1H-벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 및 디이소프로필 에틸 아민은 알킬 가교된 피페라진 카르복스아미드를 제공할 수 있다.

몇몇 예는 입체이성질체 혼합물로서 존재한다. 본 발명은 화합물의 모든 입체이성질체를 포괄한다. 입체이성질체 혼합물을 분별하는 방법은 당업계에 널리 공지되어 있으며, 분취용 키랄 초임계 유체 크로마토그래피 (SFC) 및 키랄 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)가 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다. 이 접근법을 사용하는 예는 반응식 5에 도시되어 있다.

이러한 분리를 달성하는 추가의 방법은 당업계에 공지된 다양한 방법을 사용하여 분리될 수 있는 부분입체이성질체 혼합물의 제조를 포함한다. 이러한 접근법의 한 예가 하기 도시되어 있다 (반응식 6).

몇몇 부분입체이성질체 아미드는 역상 HPLC를 사용하여 분리할 수 있다. 가수분해 후에, 생성된 광학 활성 산을 가교된 피페라진 유도체와 커플링시킬 수 있다 (반응식 6). 예를 들면, DMSO 중 O-(1H-벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 및 디이소프로필 에틸 아민을 사용하여 알킬 가교된 피페라진 카르복스아미드를 제공할 수 있다. 다른 표준 산 아민 커플링 방법 또한 광학 활성 카르복스아미드를 제공하는데 사용될 수 있다.

<반응식 6>

반응식 7 내지 9는 중간체 및 화합물을 제조하는 다른 방법을 예시한다.

생물학적 방법

본 발명의 화합물은 하기 HCV RdRp 분석에서 측정된 바와 같이 HCV NS5B에 대한 활성이 입증되었다.

HCV NS5B RdRp 클로닝, 발현 및 정제

HCV (유전자형 1b)의 NS5B 단백질을 코딩하는 cDNA를 pET21a 발현 벡터로 클로닝하였다. 단백질은 18 아미노산 C-말단 절단형으로 발현되어 가용성이 증대되었다. 대장균 DNA 수용성 세포주 BL21(DE3)을 단백질의 발현을 위해 사용하였다. 배양물이 600 nm에서 2.0의 광학 밀도에 도달할 때까지, 배양물을 37℃에서 대략 4시간 동안 성장시켰다. 배양물을 20℃로 냉각시키고, 1 mM IPTG로 유도시켰다. 새로운 앰피실린을 50 ㎍/ml의 최종 농도까지 첨가하고, 세포를 밤새 20℃에서 성장시켰다.

세포 펠렛 (3 L)을 정제를 위해 용해시켜 15 내지 24 mg의 정제된 NS5B를 수득하였다. 용해 완충액은 20 mM 트리스(Tris)-HCl (pH 7.4), 500 mM NaCl, 0.5％ 트리톤 X-100, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 20％ 글리세롤, 0.5 mg/ml 리소자임, 10 mM MgCl₂, 15 ug/ml의 데옥시리보뉴클레아제 I 및 완전 TM 프로테아제 억제제 정제 (로슈(Roche))로 이루어졌다. 용해 완충액을 첨가한 후, 냉동된 세포 펠렛을 조직 균질화기를 사용하여 재현탁시켰다. 샘플의 점성을 감소시키기 위해, 브랜슨(Branson) 소니케이터에 부착된 마이크로팁을 사용하여 얼음 상에서 용해 분취물을 초음파처리하였다. 초음파처리된 용해물을 100,000 x g로 1시간 동안 4℃에서 원심분리하고, 0.2 μm 필터 유닛 (코닝(Corning))을 통해 여과하였다.

단백질을 헤파린(Heparin) 세파로스 CL-6B, 폴리U 세파로스 4B 및 히트랩(Hitrap) SP 세파로스 (파마시아(Pharmacia))의 3개의 연속 크로마토그래피 단계를 사용하여 정제하였다. 크로마토그래피 완충액은 리소자임, 데옥시리보뉴클레아제 I, MgCl₂ 또는 프로테아제 억제제를 함유하지 않은 것을 제외하고는 용해 완충액과 동일하였고, 단백질을 컬럼 상에 충전시키기 위한 요구조건에 따라 완충액의 NaCl 농도를 조정하였다. 컬럼 유형에 따라 길이가 5 내지 50 컬럼 부피로 다양한 각각의 컬럼을 NaCl 구배로 용리시켰다. 최종 크로마토그래피 단계 후, 생성된 효소의 순도는 SDS-PAGE 분석에 기초하여 90％ 초과였다. 효소를 분취하여 -80℃에서 보관하였다.

표준 HCV NS5B RdRp 효소 분석

HCV RdRp 유전자형 1b 분석은 96 웰 플레이트 (코스타(Costar) 3912)에서 60 ㎕의 최종 부피로 실행하였다. 분석 완충액은 20 mM 헤페스(Hepes) (pH 7.5), 2.5 mM KCl, 2.5 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 1.6 U RNAse 억제제 (프로메가(Promega) N2515), 0.1 mg/ml의 BSA (프로메가 R3961) 및 2％ 글리세롤로 구성되었다. 모든 화합물을 DMSO로 계열 희석하고 (3배), 추가로 물로 희석하여 분석시에 DMSO의 최종 농도가 2％가 되도록 하였다. HCV RdRp 유전자형 1b 효소를 28 nM의 최종 농도로 사용하였다. 폴리A 템플레이트는 6 nM로 사용하였고, 비오티닐화된 올리고-dT12 프라이머는 180 nM의 최종 농도로 사용하였다. 템플레이트는 상업적으로 입수하였다 (아머샴(Amersham) 27-4110). 비오티닐화된 프라이머는 시그마 제노시스(Sigma Genosys)에 의해 제조되었다. 3H-UTP는 0.6 μCi (0.29 μM의 총 UTP)로 사용하였다. 효소를 첨가하여 반응을 개시하고, 30℃에서 60분 동안 인큐베이션시키고, SPA 비드 (4 ㎍/㎕, 아머샴 RPNQ 0007)를 함유한 50 mM EDTA 25 ㎕를 첨가하여 중지시켰다. 실온에서 1시간 넘게 인큐베이션시킨 후, 플레이트를 팩커드 탑 카운트(Packard Top Count) NXT 상에서 판독하였다.

변형된 HCV NS5B RdRp 효소 분석

변형된 효소 분석은 하기를 제외하고는 본질적으로 표준 효소 분석에 대해 기재된 바와 같이 수행하였다: 분석 완충액 중에서 프라이머와 비드를 혼합하고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션시켜, 비오티닐화된 올리고 dT12 프라이머를 스트렙타비딘-코팅된 SPA 비드 상에 미리 포착시켰다. 원심분리한 후에 결합되지 않은 프라이머를 제거하였다. 프라이머-결합된 비드를 20 mM 헤페스 완충액 (pH 7.5)에 재현탁시키고, 20 nM 프라이머 및 0.67 ㎍/㎕ 비드의 최종 농도로 분석에 사용하였다. 분석에서의 첨가 순서는 다음과 같다: 효소 (14 nM)를 희석된 화합물에 첨가한 후에 템플레이트 (0.2 nM), 3H-UTP (0.6 μCi, 0.29 μM) 및 프라이머-결합된 비드의 혼합물을 첨가하여 반응을 개시하였다 (제시된 농도는 최종 농도임). 반응을 4시간 동안 30℃에서 진행시켰다.

화합물에 대한 IC₅₀ 값은 7개의 상이한 [I]를 사용하여 측정하였다. IC₅₀ 값은 식 y = A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))을 사용하여 억제율로부터 계산하였다.

FRET 분석 준비

HCV FRET 스크리닝 분석을 수행하기 위해, 96-웰 세포 배양 플레이트를 사용하였다. FRET 펩티드 (아나스펙, 인크.(Anaspec, Inc.)) (문헌 [Taliani et al., Anal. Biochem. 1996, 240, 60-67])는 펩티드의 한쪽 말단 근처에 형광 공여자인 EDANS를 함유하고 다른 쪽 말단 근처에는 수용자인 DABCYL을 함유한다. 펩티드의 형광은 공여자와 수용자 사이의 분자간 공명 에너지 전이 (RET)에 의해 소멸되지만, NS3 프로테아제가 펩티드를 절단할 때 생성물이 RET 소멸로부터 방출되어 공여자의 형광이 분명해진다. 분석 시약은 하기와 같이 제조하였다: 프로메가로부터의 5X 세포 루시페라제 세포 배양 용해 시약 (#E153A)을 dH₂O로 1X 희석하고, NaCl을 150 mM의 최종 농도로 첨가하고, FRET 펩티드를 2 mM 스톡으로부터 20 μM의 최종 농도로 희석함.

플레이트를 준비하기 위해, 레닐라(Renilla) 루시페라제 리포터 유전자가 존재하거나 존재하지 않는 HCV 레플리콘(replicon) 세포를 트립신화하여 96-웰 플레이트의 각각의 웰에 넣고, 적정된 시험 화합물은 컬럼 3에서 12까지 첨가하고; 컬럼 1 및 2에는 대조군 화합물 (HCV 프로테아제 억제제)이 함유되었고, 바닥 열에는 화합물 없이 세포가 함유되었다. 이어서 플레이트를 37℃의 CO₂ 인큐베이터에 넣었다.

분석

상기 (FRET 분석 준비) 기재된 시험 화합물의 첨가에 이어, 다양한 시점에서 플레이트를 제거하고, 알라마 블루(Alamar blue) 용액 (트렉 디아그노스틱스(Trek Diagnostics), #00-100)을 세포 독성 측정용으로 웰마다 첨가하였다. 사이토플라워(Cytoflour) 4000 기기 (피이 바이오시스템즈(PE Biosystems))에서 판독한 후, 플레이트를 PBS로 헹군 다음 상기 (FRET 분석 준비) 기재된 FRET 펩티드 분석 시약을 웰마다 30 ul씩 첨가하여 FRET 분석에 사용하였다. 이어서, 플레이트를 340 여기/490 방출, 20 주기 자동 모드, 및 동적 모드로의 플레이트 판독으로 설정된 사이토플라워 4000 기기에 넣었다. 통상적으로, 판독 후 종말점 분석을 사용하였을 때 노이즈에 비하여 신호는 3배 이상이었다. 별법으로, 알라마 블루 판독 후, 플레이트를 PBS로 헹구고, 페놀 레드 없이 50 ul의 DMEM (고 글루코스)을 첨가한 다음, 프로메가 듀얼-글로 루시페라제 분석 시스템(Promega Dual-Glo Luciferase Assay System)을 사용하는 루시페라제 분석에 플레이트를 사용하였다.

화합물 분석은 상대적인 HCV 레플리콘 억제 및 상대적인 세포독성 값의 정량화에 의해 측정하였다. 세포독성 값을 계산하기 위해, 대조군 웰로부터의 평균 알라마 블루 형광 신호를 100％ 무독성으로 설정하였다. 이어서, 화합물 시험 웰 각각의 개별 신호를 평균 대조군 신호로 나누고 100％를 곱하여 세포독성률을 측정하 였다. HCV 레플리콘 억제 값을 계산하기 위해서, 분석 기간 말기에 최대량의 HCV 프로테아제 억제제를 함유한 2개의 웰로부터 평균 백그라운드 값을 얻었다. 이들 수치는 나이브(naive) Huh-7 세포로부터 얻은 것과 유사하였다.

이어서, 백그라운드 수치를 대조군 웰로부터 얻은 평균 신호에서 빼고, 이 수치를 100％ 활성으로 사용하였다. 이어서, 화합물 시험 웰 각각의 개별적인 신호를 백그라운드를 뺀 후에 평균 대조군 값으로 나누고 100％를 곱하여 활성률을 측정하였다. 프로테아제 억제제 적정에 대한 EC_5O 값은 FRET 또는 루시페라제 활성에서 50％ 감소를 유발하는 농도로서 계산하였다. 화합물 플레이트로부터 생성된 2개의 수치, 세포독성률 및 활성률을 추가 분석에서 해당 화합물을 판단하는데 사용하였다.

화합물에 대한 대표적 데이터를 하기 표 1에 기록하였다.

제약 조성물 및 치료 방법

본 발명의 화합물은 HCV NS5B에 대한 활성이 입증되었고, HCV 및 HCV 감염을 치료하는데 유용할 수 있다. 따라서, 본 발명의 또다른 측면은 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물이다.

본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 화합물을 추가로 포함하는 조성물이다.

본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 화합물이 인터페론인 조성물이다. 본 발명의 또다른 측면은 인터페론이 인터페론 알파 2B, PEG화된 인터페론 알파, 컨센서스(consensus) 인터페론, 인터페론 알파 2A 및 림프아형 인터페론 타우로부터 선택되는 것이다.

본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 화합물이 시클로스포린인 조성물이다. 본 발명의 또다른 측면은 시클로스포린이 시클로스포린 A인 것이다.

본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 화합물이 인터류킨 2, 인터류킨 6, 인터류킨 12, 제1형 헬퍼 T 세포 반응의 발생을 증대시키는 화합물, 간섭 RNA, 안티센스 RNA, 이미퀴모드(Imiqimod), 리바비린, 이노신 5'-모노포스페이트 데히드로게나제 억제제, 아만타딘 및 리만타딘으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물이다.

본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 화합물이 HCV 메탈로프로테아제, HCV 세린 프로테아제, HCV 폴리머라제, HCV 헬리카제, HCV NS4B 단백질, HCV 유입, HCV 어셈블리, HCV 방출, HCV NS5A 단백질, IMPDH, 및 HCV 감염의 치료를 위한 뉴클레오시드 유사체로부터 선택되는 표적의 기능을 억제하는데 효과적인, 조성물이다.

본 발명의 또다른 측면은 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 제약상 허용되는 담체, 인터페론 및 리바비린을 포함하는 조성물이다.

본 발명의 또다른 측면은 HCV 레플리콘을 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함하는, HCV 레플리콘의 기능을 억제하는 방법이다.

본 발명의 또다른 측면은 HCV NS5B 단백질을 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함하는, HCV NS5B 단백질의 기능을 억제하는 방법이다.

본 발명의 또다른 측면은 치료적 유효량의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서의 HCV 감염을 치료하는 방법이다. 또다른 측면에서 상기 화합물은 HCV 레플리콘의 기능을 억제하는데 효과적이다. 또다른 측면에서 상기 화합물은 HCV NS5B 단백질의 기능을 억제하는데 효과적이다.

본 발명의 또다른 측면은 치료적 유효량의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 항-HCV 활성을 갖는 또다른 화합물과 함께 (이들보다 전에, 후에 또는 동시에) 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서의 HCV 감염을 치료하는 방법이다.

본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 다른 화합물이 인터페론인 방법이다.

본 발명의 또다른 측면은 인터페론이 인터페론 알파 2B, PEG화된 인터페론 알파, 컨센서스 인터페론, 인터페론 알파 2A 및 림프아형 인터페론 타우로부터 선택되는 것인 방법이다.

본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 다른 화합물이 시클로스포린인 방법이다.

본 발명의 또다른 측면은 시클로스포린이 시클로스포린 A인 방법이다.

본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 다른 화합물이 인터류킨 2, 인터류킨 6, 인터류킨 12, 제1형 헬퍼 T 세포 반응의 발생을 증대시키는 화합물, 간섭 RNA, 안티센스 RNA, 이미퀴모드, 리바비린, 이노신 5'-모노포스페이트 데히드로게나제 억제제, 아만타딘 및 리만타딘으로부터 선택되는 것인 방법이다.

본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 다른 화합물이 HCV 메탈로프로테아제, HCV 세린 프로테아제, HCV 폴리머라제, HCV 헬리카제, HCV NS4B 단백질, HCV 유입, HCV 어셈블리, HCV 방출, HCV NS5A 단백질, IMPDH, 및 HCV 감염의 치료를 위한 뉴클레오시드 유사체로 이루어진 군으로부터 선택되는 표적의 기능을 억제하는데 효과적인, 방법이다.

본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 다른 화합물이 HCV NS5B 단백질 이외의 다른 HCV 생활 주기에서의 표적의 기능을 억제하는데 효과적인 것인 방법이다.

"치료적 유효량"은 간염 및 HCV 감염 분야에서 진료의에 의해 이해된 바와 같이 의미있는 환자 이점을 제공하는데 필요한 작용제의 양을 의미한다.

"환자"는 간염 및 HCV 감염 분야에서 진료의에 의해 이해된 바와 같이 HCV 바이러스로 감염되고 치료법에 적합한 사람을 의미한다.

"치료", "치료법", "섭생법", "HCV 감염" 및 관련된 용어는 간염 및 HCV 감염 분야에서 진료의에 의해 이해된 바와 같이 사용된다.

본 발명의 화합물은 통상적으로, 치료적 유효량의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체로 구성되고 통상의 부형제를 함유할 수 있는 제약 조성물로서 제공된다. 치료적 유효량은 의미있는 환자 이점을 제공하는데 요구되는 양이다. 제약상 허용되는 담체는 허용가능한 안전성 프로파일을 갖는 통상적으로 공지된 담체이다. 조성물은 캡슐제, 정제, 로젠지제 및 분말제 뿐만 아니라 액체 현탁액제, 시럽제, 엘릭시르제 및 용액제를 비롯한 모든 통상의 고상 및 액상 형태를 포함한다. 조성물은 통상의 제형화 기술을 사용하여 제조되고, 통상의 부형제 (예컨대, 결합제 및 습윤제) 및 비히클 (예컨대, 물 및 알콜)이 조성물에 일반적으로 사용된다.

고상 조성물은 보통 단위 투여형으로 제형화되고, 투여 당 약 1 내지 1000 mg의 활성 성분을 제공하는 조성물이 바람직하다. 투여량의 몇몇 예는 1 mg, 10 mg, 100 mg, 250 mg, 500 mg 및 1000 mg이다. 일반적으로, 다른 작용제는 임상적으로 사용되는 부류의 작용제와 유사한 단위 범위로 제공될 것이다. 통상적으로는 0.25-1000 mg/단위이다.

액상 조성물은 보통 단위 투여량 범위로 존재한다. 일반적으로, 액상 조성물은 1-100 mg/mL의 단위 투여량 범위일 것이다. 투여량의 몇몇 예는 1 mg/mL, 10 mg/mL, 25 mg/mL, 50 mg/mL 및 100 mg/mL이다. 일반적으로, 다른 작용제는 임상적으로 사용되는 부류의 작용제와 유사한 단위 범위로 제공될 것이다. 통상적으로는 1-100 mg/mL이다.

본 발명은 모든 통상적인 투여 방식을 포함하며, 경구 및 비경구 방법이 바람직하다. 일반적으로, 투여 계획은 임상적으로 사용되는 다른 작용제와 유사할 것이다. 통상적으로, 일일 투여량은 매일 체중 kg 당 1 내지 100 mg일 것이다. 통상적으로, 경구로 투여되는 경우에 보다 많은 화합물이 필요하며 비경구로 투여되는 경우에는 덜 필요하다. 그러나, 특정한 투여 계획은 안전 의료 평가를 사용하여 내과의가 결정할 것이다.

본 발명은 또한, 화합물이 조합요법으로 제공되는 방법을 포함한다. 즉, 화합물은 간염 및 HCV 감염의 치료에 유용한 다른 작용제와 함께, 그러나 개별적으로 사용될 수 있다. 이러한 조합 방법의 경우, 화합물은 통상적으로 다른 작용제와 함께 매일 체중 kg 당 1 내지 100 mg의 일일 투여량으로 제공될 것이다. 다른 작용제는 통상적으로 치료적으로 사용되는 양으로 제공될 것이다. 그러나, 특정한 투여 계획은 안전 의료 평가를 사용하여 내과의가 결정할 것이다.

조성물 및 방법에 적합한 화합물의 몇몇 예가 하기 표 2에 열거된다.

특정 실시양태의 상세한 설명

달리 명시하지 않는 한, 하기 중간체 및 실시예에 대한 분석 LCMS 데이터는 하기 컬럼 및 조건을 사용하여 얻었다. 정지 시간: 구배 시간 + 1분; 시작 농도: 달리 언급하지 않는 한 0％ B; 용리액 A: 10 mM NH₄OAc를 함유한 5％ CH₃CN/95％ H₂O (컬럼 A, D 및 E의 경우); 0.1％ TFA를 함유한 10％ MeOH/90％ H₂O (컬럼 B 및 C의 경우); 용리액 B: 10 mM NH₄OAc를 함유한 95％ CH₃CN/5％ H₂O (컬럼 A, D 및 E의 경우); 0.1％ TFA를 함유한 90％ MeOH/10％ H₂O (컬럼 B 및 C의 경우); 컬럼 A: 페노메넥스(Phenomenex) 10 μ 4.6 x 50 mm C18; 컬럼 B: 페노메넥스 C18 10 μ 3.0 x 50 mm; 컬럼 C: 페노메넥스 4.6 x 50 mm C18 10 μ; 컬럼 D: 페노메넥스 리나(Phenomenex Lina) C18 5 μ 3.0 x 50 mm; 컬럼 E: 페노메넥스 5 μ 4.6 x 50 mm C18.

중간체 1

1H-인돌-6-카르복실산, 2-브로모-3-시클로헥실-, 메틸 에스테르. 새로 재결정화된 피리디늄 트리브로마이드 (가열된 AcOH (1 g 당 5 mL)로부터 재결정화하고, 냉각된 AcOH로 세정한 후에 KOH 상에서 고 진공하에 건조시킴)를, CHCl₃/THF (1:1, 1.25 L) 중 메틸 3-시클로헥실-1H-인돌-6-카르복실레이트 (60 g, 233 mmol) (WO 2004/065367에 개시된 절차를 사용하여 제조함)의 교반 용액에 2℃에서 나누어 첨가하였다 (10분에 걸쳐). 반응 용액을 0-5℃에서 2.5시간 동안 교반하고, 포화 수성 NaHSO₃ (1 L), 1 N HCl (1 L) 및 염수 (1 L)로 세척하였다. 유기층을 건조시키고 (MgSO₄) 농축시켰다. 생성된 적색 오일을 Et₂O로 희석시키고 농축시켰다. 생성된 핑크색 고체를 헥산 (300 mL)으로 처리한 Et₂O (200 mL)에 용해시키고 부분 농축시켰다. 고체를 여과에 의해 수집하고 헥산으로 세정하였다. 모액을 건고상태로 농축시키고 상기 절차를 반복하였다. 고체를 합쳐 1H-인돌-6-카르복실산, 2-브로모-3-시클로헥실-, 메틸 에스테르 (64 g, 190 mmol, 82％)를 솜털같은 핑크색 고체로서 얻고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.

중간체 2

1H-인돌-6-카르복실산, 2-브로모-3-시클로헥실-. MeOH/THF/H₂O (1:1:1, 300 mL) 중 메틸 2-브로모-3-시클로헥실-1H-인돌-6-카르복실레이트 (20 g, 60 mmol) 및 LiOH (3.8 g, 160 mmol)의 용액을 90℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 얼음/H₂O 조에서 냉각시키고, H₂O (250 mL)로 희석된 1 M HCl (대략 160 mL)로 중화시키고 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 침전물을 여과에 의해 수집하고 H₂O로 세정하고 건조시켜 1H-인돌-6-카르복실산, 2-브로모-3-시클로헥실- (정량적)을 얻고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.

1H-인돌-6-카르복실산, 2-브로모-3-시클로헥실-을 제공하는데 사용될 수 있는 대안의 절차가 하기 기재되어 있다:

MeOH/THF/H₂O (1:1:1, 1.8 L) 중 메틸 2-브로모-3-시클로헥실-1H-인돌-6-카르복실레이트 (117 g, 349 mmol) 및 LiOH.H₂O (26.4 g, 629 mmol)의 용액을 환류 온도에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 얼음/H₂O 조에서 대략 2℃로 냉각시키고, 1 M HCl (대략 650 mL) (온도가 5℃를 초과하지 않도록 하는 속도로 첨가함)로 중화시키고, H₂O (1 L)로 희석시키고 교반함과 동시에 주위 온도로 가온시켰다. 침전물을 여과에 의해 수집하고 H₂O로 세정하고 건조시켜, 1H-인돌-6-카르복실산, 2-브로모-3-시클로헥실- (135.5 g, 345 mmol, 99％)의 모노 THF 용매화물을 황색 고체로서 얻고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.

중간체 3

1H-인돌-6-카르복스아미드, 2-브로모-3-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-. 1,1'-카르보닐디이미다졸 (1.17 g, 7.2 mmol)을 THF (6 mL) 중 2-브로모-3-시클로헥실-1H-인돌-6-카르복실산 (2.03 g, 6.3 mmol)의 교반 용액에 22℃에서 첨가하였다. CO₂의 발생은 즉각적이며, 발생이 느려지면 용액을 50℃에서 1시간 동안 가열한 후에 22℃로 냉각시켰다. N,N-디메틸술파미드 (0.94 g, 7.56 mmol)를 첨가한 후 THF (4 mL) 중 DBU (1.34 g, 8.8 mmol)의 용액을 적가하였다. 24시간 동안 교반을 계속하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트와 묽은 HCl 사이에 분배하였다. 에틸 아세테이트 층을 물, 이어서 염수로 세척하고 Na₂SO₄ 상에서 건조시켰다. 추출물을 건고상태로 농축시켜 표제 생성물을 담황색의 부서지기 쉬운 발포체 (2.0 g, 74％, 순도 >90％, NMR로부터의 추정치)로서 남겼다.

1H-인돌-6-카르복스아미드, 2-브로모-3-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-을 제조하는 별법이 하기 기재되어 있다.

기계적 교반기, 온도 조절기, N₂ 유입구 및 응축기가 장치된 1 L 용량의 4-목 둥근 바닥 플라스크에, N₂ 하에서 2-브로모-3-시클로헥실-1H-인돌-6-카르복실산 (102.0 g, 0.259 mol) 및 무수 THF (300 mL)를 첨가하였다. 10분 동안 교반한 후에, CDI (50.3 g, 0.31 mol)를 나누어 첨가하였다. 그 후, 반응 혼합물을 50℃로 2시간 동안 가열하였다. 30℃로 냉각시킨 후에, N,N-디메틸아미노술폰아미드 (41.7 g, 0.336 mol)를 한번에 첨가하고, 이어서 DBU (54.1 mL, 0.362 mol)를 1시간에 걸쳐서 적가하였다. 그 후, 반응 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 제거하고 잔류물을 EtOAc와 1 N HCl (1:1, 2 L) 사이에 분배하였다. 유기층을 분리하고 수성층을 EtOAc (500 mL)로 추출하였다. 합친 유기층을 염수 (1.5 L)로 세척하고 MgSO₄ 상에서 건조시켰다. 용액을 여과하고 진공에서 농축시켜 조 생성물 (111.0 g)을 제공하였다. 조 생성물을 EtOAc (400 mL)에 60℃에서 현탁시켰다. 현탁액에 헵탄 (2 L)을 서서히 첨가하였다. 생성된 현탁액을 교반하고 0℃로 냉각시켰다. 그 후 여과하였다. 필터 케이크를 소량의 헵탄으로 세정하고 2일 동안 하우스 진공 공기 건조시켰다. 생성물을 백색 고체 (92.0 g, 83％)로서 수집하였다.

중간체 4

1H-인돌-6-카르복스아미드, 3-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-2-(2- 포르밀-4-메톡시페닐)-. 톨루엔 (30 mL) 중 2-브로모-3-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1H-인돌-6-카르복스아미드 (4.28 g, 0.01 mol), 4-메톡시-2-포르밀페닐 보론산 (2.7 g, 0.015 mol), 2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디메톡시-비페닐 (41 mg, 0.0001 mol), 팔라듐 아세테이트 (11.2 mg) 및 미분 탄산칼륨 (4.24 g, 0.02 mol)의 혼합물을 환류 및 질소하에 30분 동안 교반하며, 이때 LC/MS 분석은 반응이 완료되었음을 나타냈다. 그 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물로 희석시키고, 이어서 과량의 묽은 HCl로 산성화시켰다. 그 후, 에틸 아세테이트 층을 수집하고 묽은 HCl, 물 및 염수로 세척하였다. 그 후, 유기 용액을 건조시키고 (황산마그네슘), 여과하고 농축시켜, 검을 제공하였다. 검을 헥산 (250 ml) 및 에틸 아세테이트 (25 mL)로 희석시키고, 혼합물을 20시간 동안 22℃에서 교반하고, 그 동안 생성물은 밝은 황색 과립 고체 (4.8 g)로 변형되었고, 이를 추가 정제 없이 그대로 사용하였다.

1H-인돌-6-카르복스아미드, 3-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-2-(2-포르밀-4-메톡시페닐)-을 제조하는 대안의 절차가 하기 제공되어 있다:

EtOH/톨루엔 (1:1, 1 L) 중 2-브로모-3-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-인돌-6-카르복스아미드 (54.0 g, 126 mmol), 4-메톡시-2-포르밀페닐보론산 (29.5 g, 164 mmol) 및 LiCl (13.3 g, 315 mmol)의 슬러리화된 용액에 물 (380 mL) 중 Na₂CO₃ (40.1 g, 379 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반한 후에, Pd(PPh₃)₄ (11.3 g, 10.0 mmol)를 첨가하였다. 반응 용액을 질소로 플러싱하고 70℃ (내부 모니터링)에서 밤새 가열한 후 실온으로 냉각시켰다. 반응물을 EtOAc (1 L) 및 EtOH (100 mL)로 희석시키고, 1 N 수성 HCl (1 L) 및 염수 (500 mL)로 주의하여 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과한 다음 농축시켰다. 잔류 고체를 Et₂O (600 mL)와 함께 1시간 동안 교반하고 여과에 의해 수집하여 1H-인돌-6-카르복스아미드, 3-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-2-(2-포르밀-4-메톡시페닐)- (52.8 g, 109 mmol, 87％)을 황색 분말로서 얻었고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.

중간체 5

6H-이소인돌로[2,1-a]인돌-3-카르복스아미드, 11-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-6-에톡시-8-메톡시-. 온도 조절기, 응축기, N₂ 유입구 및 기계적 교반기가 장치된 5 L 용량의 4-목 둥근 바닥 플라스크에, 톨루엔 (900 mL), EtOH (900 mL), 2-브로모-3-시클로헥실-N-(N,N-디메틸술파모일)-1H-인돌-6-카르복스아미드 (90 g, 0.21 mol), 2-포르밀-4-메톡시페닐보론산 (49.2 g, 0.273 mol) 및 LiCl (22.1 g, 0.525 mol)을 충전하였다. 생성 용액을 N₂로 15분 동안 버블링하였다. H₂O (675 mL) 중 Na₂CO₃ (66.8 g, 0.63 mol)의 용액을 첨가하고 반응 혼합물을 N₂로 다시 (10분) 버블링하였다. Pd(PPh₃)₄ (7.0 g, 6.3 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 70℃로 20시간 동안 가열하였다. 35℃로 냉각시킨 후에, 1 N HCl (1.5 L) 용액을 서서히 첨가하였다. 생성 혼합물을 6 L 분별 깔때기로 옮겨 EtOAc (2 X 1.5 L)로 추출하였다. 합친 유기 추출물을 염수 (2 L)로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과한 다음 진공에서 농축시켜 황색 고체를 제공하였고, 이를 헥산 중 20％ EtOAc (450 mL, 50℃ → 0℃)로 분쇄하여 3-시클로헥실-N-(N,N-디메틸술파모일)-2-(2-포르밀-4-메톡시페닐)-1H-인돌-6-카르복스아미드 (65.9 g)를 황색 고체로서 제공하였다. HPLC 순도, 98％.

분쇄로부터의 모액을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 EtOH (50 mL)로 3시간 동안 환류시켰다. 그 후, 용액을 0℃로 냉각시켰다. 침전물을 여과하고 냉각된 TBME (5℃) (20 mL)로 세척하였다. 필터 케이크를 하우스 진공 공기 건조시켜 추가량의 표제 화합물을 백색 고체 (16.0 g)로서 제공하였다. HPLC 순도, 99％.

중간체 6

1H-인돌-6-카르복스아미드, 3-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-2-(2- 포르밀-4-메톡시페닐)-. 11-시클로헥실-N-(N,N-디메틸술파모일)-6-에톡시-8-메톡시-6H-이소인돌로[2,1-a]인돌-3-카르복스아미드를 THF (75 mL)에 용해시켰다. 용액에 2 N HCl (300 mL) 용액을 첨가하였다. 혼합물을 N₂ 하에 실온에서 16시간 동안 격렬하게 교반하였다. 생성 현탁액을 여과하고 냉각된 TBME (2 X 30 mL)로 세척하였다. 필터 케이크를 밤새 진공 공기 건조시켜 표제 화합물을 황색 고체로서 제공하였다. HPLC 순도, 99％.

중간체 7

7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6-카르복실산, 13-시클로헥실-10-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-3-메톡시-, 메틸 에스테르. DMF (28 mL) 중 3-시클로헥실-N-(N,N-디메틸술파모일)-2-(2-포르밀-4-메톡시페닐)-1H-인돌-6-카르복스아미드 (4.8 g, 0.01 mol), 메틸 2-(디메톡시포스포릴)아크릴레이트 (9.7 g, 0.02 mol) 및 탄산세슘 (7.1 g, 0.02 mol)의 혼합물을 20시간 동안 55℃의 오일조 온도에서 교반하였다. 혼합물을 얼음-물에 붓고 묽은 HCl로 산성화시켜 조 생성물을 침전시켰다. 고체를 수집하고, 건조시키고, SiO₂ (110 g) 상에서 2％ 아세트산을 함유하는 에틸 아세테이트 및 메틸렌 클로라이드 (1:10) 용액을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피하였다. 균질 분획을 합치고 증발시켜 표제 화합물을 담황색 고체 (3.9 g, 71％ 수율)로서 얻었다. MS: 552 (M=H+).

7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6-카르복실산, 13-시클로헥실-10-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-3-메톡시-, 메틸 에스테르를 제조하는 대안의 절차가 하기에 제공된다.

DMF (400 mL) 중 11-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-6-히드록시-8-메톡시-6H-이소인돌로[2,1-a]인돌-3-카르복스아미드 (시클릭 헤미아미날) (63.0 g, 130 mmol), 메틸 2-(디메톡시포스포릴)아크릴레이트 (60 g, 261 mmol), 탄산세슘 (106 g, 326 mmol)의 용액을 60℃ (조 온도)에서 4.5시간 동안 가열하였다. 추가의 메틸 2-(디메톡시포스포릴)아크릴레이트 (15 g, 65 mmol) 및 탄산세슘 (21.2 g, 65 mmol)을 첨가하고 반응물을 60℃에서 밤새 가열한 후 실온으로 냉각시켰다. 교반 반응 혼합물을 H₂O (1 L)로 희석시키고, 1 N 수성 HCl (800 mL)로 서서히 중화시키고, 3시간 교반한 후에, 침전물을 여과에 의해 수집하였다. 고체를 Et₂O (800 mL)로 분쇄하고 건조시켜 메틸 7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6-카르복실산, 13-시클로헥실-10-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-3-메톡시-, 메틸 에스테르 (70.2 g, 127 mmol, 98％)를 황색 고체로서 얻었고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.

중간체 8

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시-, 메틸 에스테르, (+/-)-. DMSO (5 mL)를 둥근 바닥 플라스크의 트리메틸술폭소늄 요오다이드 (199 mg, 0.906 mmol)와 NaH (60％ 오일 분산액 중 38 mg, 0.953 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 그 후, 7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6-카르복실산, 13-시클로헥실-10-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-3-(메톡시)-, 메틸 에스테르 (125 mg, 0.227 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 이어서 50℃에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 그 후, 반응물을 물로 켄칭시키고 1 N HCl 용액으로 산성화시켰다. 그 후, 조 생성물이 밝은 황색 고체로서 침전되었고, 이를 여과에 의해 수집하고 공기 건조시켰다 (106 mg, 83％ 수율). 그 후, 이 물질 6 mg을 분취용 HPLC로 정제하여 밝은 황색 고체 (1.8 mg)로서 표제 화합물을 얻었다. MS m/z 566(MH+), 체류 시간: 3.850분.

표제 화합물을 제조하는 대안의 절차가 하기 제공된다.

기계적 교반기, N₂ 유입구 및 온도계가 장치된, 불꽃 건조된 1 L 용량의 4-목 둥근 바닥 플라스크에, N₂ 하에 수소화나트륨 (95％) (3.09 g, 129.2 mmol) 및 무수 DMF (200 mL)를 충전하였다. 격렬하게 교반하면서, 트리메틸술폭소늄 요오다이드 (32.5 g, 147.3 mmol)를 나누어 첨가하였고, 그 동안 온도는 30℃로 상승하였다. 30분 동안 교반한 후에, 무수 DMF (70 mL) 중 7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6-카르복실산, 13-시클로헥실-10-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-3-(메톡시)-, 메틸 에스테르 (33.8 g, 61.3 mmol)의 용액을 신속히 첨가하였다. 반응 혼합물을 30℃ 미만에서 30분 동안 교반한 후에, H₂O (2 L) 중 1 N HCl (130 mL)의 얼음 냉각된 용액에 나누어 부었다. 생성된 현탁액을 1시간 동안 기계적으로 교반한 후에, 침전물을 여과하고, 필터 케이크를 H₂O (100 mL)로 세척하였다. 필터 케이크를 EtOAc와 0.5 N HCl (1:1, 4 L) 사이에 분배하였다. 유기상을 분리하고, H₂O (1 L) 및 염수 (1 L)로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과한 다음 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc (150 mL)에 용해시키고, 용액을 실리카 겔 패드 (헥산 중 300 g)를 통해 여과하고, 헥산 중 50％ EtOAc (5 L)로 세정하였다. 여과물을 진공에서 농축시켜 엷은 황색 고체를 제공하였고, 이를 TBME (220 mL) 중 10％ EtOAc로 50℃에서 0℃까지 분쇄하여 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시-, 메틸 에스테르, (+/-)-를 백색 고체로서 제공하였다 (26.1 g, 75％ 수율). HPLC 순도, 100％.

중간체 9

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시-, 메틸 에스테르, (-)-. (+/-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시-메틸 에스테르의 샘플을 EtOH/CH₃CN 1/1 + 0.5％ DEA에 50 mg/ml의 농도로 용해시켰다. [DEA의 첨가는 화합물이 주입 과정 동안 용액 중에 잔류하도록 한다]. 그 후, 이 용액을 하기 나타낸 조건하에서 타르(Thar) SFC-350 분취용 SFC에 주입하였다.

타르 SFC-350 상에서의 분취 조건: 컬럼: 키랄셀(Chiralcel) OJ-H 5 x 25 cm; 이동상: C0₂ 중 25％ MeOH/CH₃CN (1/1); 압력 (bar): 100; 유속 (ml/분): 240; 용액 농도 (mg/ml): 50; 주입량 (ml): 4.5-5; 사이클 시간 (분/주입): 6.5-7; 온도 (℃): 45; 처리량 (g/시간): 대략 2; 검출기 파장 (nm): 254.

라세미체 출발 물질 371.4 g으로부터, 대략 1 Meq의 디에틸아민을 함유하는, 총 177.3 g의 목적하는 제2 용리 (-) 이성질체를 수득하였다. 이 물질을 하기 절차를 사용하여 정제하였다. 디클로로메탄 (800 mL)에 용해된 혼합물 (24.7 g)을 순차적으로 0.5 N HCl (1 x 400 mL, 1 x 240 mL), H₂O (2 x 240 mL), 및 염수 (2 x 240 mL)로 세척하였다. 그 후, 유기층을 건조시키고 (무수 Na₂SO₄), 여과한 다음, 증발시켜, (시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시-, 메틸 에스테르, (-)- 22.33 g을 황색 고체 (92％ 회수율)로서 제공하였다. HPLC¹ > 99％ (Rt 2.38분); LC/MS (ES⁺) 566.51 (M+H, 100); [α]_D ^25C - 194.64°(c 1.03, MeOH). C₃₀H₃₅N₃O₆Sㆍ0.33H₂O의 분석 계산치: C, 63.04; H, 6.29; N, 7.35; S, 5.61; H₂O, 1.04. 실측치: C, 63.07; H, 6.01; N, 7.24; S, 5.58; H₂O, 1.03. NMR은 Et₂NH가 존재하지 않음을 나타냈다. 이 물질의 EE는 하기 분석용 HPLC 절차를 사용하여 > 99％인 것으로 측정되었다.

타르 분석용 SFC 상에서의 ee 측정의 분석 조건. 분석용 컬럼: 키랄셀 OJ (46 x 25 cm, 10 ㎕); BPR 압력: 100 bar; 온도: 35℃; 유속: 3.0 ml/분; 이동상: CO₂ 중 15％ MeOH/CH₃CN (1/1); 검출기 파장: 254 nm; 체류 시간 (분): 4, 6.5.

중간체 10

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시-, (-)-. MeOH (300 mL) 중 (-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)- 카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시-, 메틸 에스테르 (22.33 g, 39.5 mmol)의 용액에 1 N NaOH (120 mL)를 20분에 걸쳐서 서서히 첨가하고, 그 동안 반응 온도를 30℃ 미만으로 유지하였다. 혼합물을 실온에서 N₂ 하에 18시간 동안 교반하였다. HPLC는 반응이 완료되었음을 나타냈다. 반응 용액에 1 N HCl (130 mL)을 첨가하였다. 첨가를 완료한 후에, 반응 혼합물의 pH는 약 2였다. 반응 혼합물 중 메탄올을 증발시켰다. 물 (300 mL)을 혼합물에 첨가한 후, CH₂Cl₂ (1 x 600 mL, 1 x 200 mL)로 추출하였다. 합친 추출물을 H₂O (2 x 300 mL), 염수 (2 x 300 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄) 증발시켜 표제 화합물 20.82 g (96％ 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. HPLC 조건: 컬럼: 페노메녹스 시너지 폴라(Phenomenoex Synergi Polar)-RP 4 um 4.6 x 50 mm; UV: 220 nm; 구배 시간: 4분; 유속: 4 mL/분, 75 - 100％ B; 용매 A: 0.2％ H₃PO₄를 함유하는 10％ MeOH/90％ H₂O, 용매 B: 0.2％ H₃PO₄를 함유하는 90％ MeOH/10％ H₂O. HPLC > 99％ (Rt 1.80분) LC/MS (ES⁺) 552.25 (M+H, 100); [α]_D ^25C - 166.99° (c 1.00, MeOH). GC 분석: CH₂Cl₂ 4.94％; C₂₉H₃₃N₃O₆Sㆍ0.16H₂Oㆍ0.35CH₂Cl₂의 분석 계산치: C, 60.37; H, 5.87; N, 7.20; S, 5.49; H₂O, 0.49; CH₂Cl₂, 5.02. 실측치: C, 59.95; H, 5.89; N, 7.03; S, 5.38; H₂O, 0.47; CH₂Cl₂, 4.94.

중간체 11

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시-, (+/-)-. THF/메탄올 혼합물 (2.0 mL/2.0 mL) 중 (+/-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시-, 메틸 에스테르 (100 mg, 0.177 mmol)의 용액에 2 N NaOH 용액 (1.0 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 마이크로파 조건하에 5분 동안 가열하였다. 그 후, 농축시키고, 1 N HCl 용액으로 산성화시키고 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하였다. 유기층을 합치고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과한 다음 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 목적 생성물을 밝은 황색 고체로서 얻었다 (59 mg, 60％ 수율). MS m/z 552(MH⁺), 체류 시간: 3.850분.

중간체 12

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a,5(2H)-디카르복스아미드, 8-시클로헥실-N⁵-[(디메틸아미노)술포닐]-1,12b-디히드로-N^1a-[(2R,3S)-3-히드록시-4,7,7-트리메틸바이시클로[2.2.1]헵트-2-일]-11-메톡시-, (1aR)-[부분]-. TBTU (437 mg, 1.36 mmol) 및 DIPEA (0.95 mL, 5.436 mmol)를 DMSO (20.0 mL) 중 (+/-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5- [[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시- (500 mg, 0.906 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 그 후, (2S,3R)-3-아미노-1,7,7-트리메틸바이시클로[2.2.1]헵탄-2-올 (280 mg, 1.36 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고 1 N HCl 용액으로 산성화시켰다. 갈색 고체를 여과에 의해 수집하여 분리하였다. 그 후, 이 물질을 하기 조건하에서 분취용 HPLC에 의해 분별하였다. 컬럼: 워터스 선파이어(Waters Sunfire) 19 mm x 100 mm; 용매 A: 10％ CH₃CN-90％ H₂O-0.1％ TFA; 용매 B: 90％ CH₃CN-10％ H₂O-0.1％ TFA; 프로그램: 시작 65％ 용매 B, 초기 유지 시간 5분, 그 후 30분 동안 25 mL/분의 유속으로 90％ 용매 B로 서서히 증가; 로딩: 50-60 mg/전개.

상기 기재한 조건하에서의 HPLC에서 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a,5(2H)-디카르복스아미드, 8-시클로헥실-N⁵-[(디메틸아미노)술포닐]-1,12b-디히드로-N^1a-[(2R,3S)-3-히드록시-4,7,7-트리메틸바이시클로[2.2.1]헵트-2-일]-11-메톡시-, (1aR)-[부분]-이 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a,5(2H)-디카르복스아미드, 8-시클로헥실-N⁵-[(디메틸아미노)술포닐]-1,12b-디히드로-N^1a-[(2R,3S)-3-히드록시-4,7,7-트리메틸바이시클로[2.2.1]헵트-2-일]-11-메톡시-, (1aS)-[부분]-보다 먼저 용리되었다. 생성물이 밝은 황색 고체로서 수득되었다 (230 mg, 36％ 수율). MS m/ 703(MH⁺), 체류 시간: 3.936분.

중간체 13

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a,5(2H)-디카르복스아미드, 8-시클로헥실-N⁵-[(디메틸아미노)술포닐]-1,12b-디히드로-N^1a-[(2R,3S)-3-히드록시-4,7,7-트리메틸바이시클로[2.2.1]헵트-2-일]-11-메톡시-, (1aS)-[부분]-. TBTU (437 mg, 1.36 mmol) 및 DIPEA (0.95 mL, 5.436 mmol)를 DMSO (20.0 mL) 중 (+/-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5- [[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시- (500 mg, 0.906 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 그 후, (2S,3R)-3-아미노-1,7,7-트리메틸바이시클로[2.2.1]헵탄-2-올 (280 mg, 1.36 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시킨 후에 1 N HCl 용액으로 산성화시켰다. 갈색 고체를 여과에 의해 수집하여 분리하였다. 그 후, 이 물질을 하기 조건하에서의 분취용 HPLC에 의해 분별하였다. 컬럼: 워터스 선파이어 19 mm x 100 mm; 용매 A: 10％ CH₃CN-90％ H₂O-0.1％ TFA; 용매 B: 90％ CH₃CN-10％ H₂O-0.1％ TFA; 프로그램: 시작 65％ 용매 B, 초기 유지 시간 5분, 이어서 30분 동안 25 mL/분의 유속으로 90％ 용매 B로 서서히 증가; 로딩: 50-60 mg/전개.

상기 기재한 HPLC 조건하에서 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a,5(2H)-디카르복스아미드, 8-시클로헥실-N⁵-[(디메틸아미노)술포닐]-1,12b-디히드로-N^1a-[(2R,3S)-3-히드록시-4,7,7-트리메틸바이시클로[2.2.1]헵트-2-일]-11-메톡시-, (1aS)-[부분]-이 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a,5(2H)-디카르복스아미드, 8-시클로헥실-N⁵-[(디메틸아미노)술포닐]-1,12b-디히드로-N^1a-[(2R,3S)-3-히드록시-4,7,7-트리메틸바이시클로[2.2.1]헵트-2-일]-11-메톡시-, (1aR)-[부분]- 이후에 용리되었다. 생성물이 밝은 황색 고체로서 수득되었다 (215 mg, 34％ 수율). MS m/ 703(MH⁺), 체류 시간: 4.038분.

중간체 14

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시-, (-)-. 10 N NaOH (2.0 mL, 20 mmol) 용액 및 물 4 mL를 THF/MeOH (7 mL/7 mL) 중 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a,5(2H)-디카르복스아미드, 8-시클로헥실-N⁵-[(디메틸아미노)술포닐]-1,12b-디히드로-N^1a-[(2R,3S)-3-히드록시-4,7,7-트리메틸바이시클로[2.2.1]헵트-2-일]-11-메톡시-, (1aR)-[부분]- (160 mg, 0.228 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 마이크로파 조건하에 1시간 동안 가열하였다. 그 후 농축시키고, 진한 HCl 용액으로 산성화시키고, 에틸 아세테이트로 2회 (2 X 30 mL) 추출하였다. 유기층을 합치고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과한 다음 진공에서 오렌지색 오일로 농축시켰다. 그 후 조 생성물을 분취용 HPLC 컬럼에 의해 정제하여 생성물을 밝은 황색 고체를 얻었다 (80 mg, 64％ 수율). 평균 고유 회전각도 -130.85°; 용매 MeOH; 파장 589 nm; 50 cm 셀. MS m/ 552(MH⁺), 체류 시간: 3.760분.

중간체 15

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시-, (+)-. 10 N NaOH (1.8 mL, 18 mmol) 용액 및 물 4 mL를 bTHF/MeOH (7 mL/7 mL) 중 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a,5(2H)-디카르복스아미드, 8-시클로헥실-N⁵-[(디메틸아미노)술포닐]-1,12b-디히드로-N^1a-[(2R,3S)-3-히드록시-4,7,7-트리메틸바이시클로[2.2.1]헵트-2-일]-11-메톡시-, (1aS)-[부분]- (130 mg, 0.185 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 마이크로파 조건하에 1시간 동안 가열하였다. 농축시키고, 진한 HCl 용액으로 산성화시키고, 에틸 아세테이트로 2회 (2 X 30 mL) 추출하였다. 유기층을 합치고, 건조시키고 (MgSO₄), 여과하고 진공에서 농축시켜 오렌지색 오일을 제공하였다. 그 후, 조 생성물을 분취용 HPLC 컬럼에 의해 정제하여 생성물을 밝은 황색 고체로서 얻었다 (68 mg, 67％ 수율). 평균 고유 회전각도 +174.73°; 용매 MeOH; 파장 589 nm; 50 cm 셀. MS m/ 552(MH⁺), 체류 시간: 3.773분.

중간체 16

1H-인돌-6-카르복실산, 2-브로모-3-시클로헥실-, 1,1-디메틸에틸 에스테르. 무수 메틸렌 디클로라이드 (1.2 L) 및 THF (100 mL) 중 2-브로모-3-시클로헥실-1H-인돌-6-카르복실산 (80 g, 0.24 m)의 기계적 교반 용액에 활성화된 분자체 (4 A, 80 g) 및 탄산은 (275 g, 0.99 m)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고 t-부틸 브로마이드 (142 g, 1.04 m)를 적가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고 TLC (헥산-에틸 아세테이트 80:20, R_f (생성물) = 0.7)에 의해 모니터링하였다. 브로모 산이 전환되지 않은 채로 남아있다면 추가로 10％ 탄산은을 첨가하고 교반을 추가로 2 내지 4시간 동안 계속하였다. 완료되면, 반응 혼합물을 셀라이트 박층을 통해 여과하였다. 여과물을 메틸렌 디클로라이드 (500 mL)로 세척하였다. 합친 여과물을 진공에서 농축시키고, 그렇게 수득된 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다: (230 - 400 메쉬, 석유 에테르 중 에틸 아세테이트 0 - 2％의 구배로 용리). 균질 분획을 합치고 감압하에 증발시켜 표제 화합물 80 g (85％)을 제공하였다. HPLC: 90.1％ (RT = 6.56분), 컬럼: C18 BDS, (50 X 4.6 mm), 이동상: 수중 0.1％ TFA:ACN (30 → 100 → 30)의 구배, 유속 0.8 mL/분. LCMS: 99.8％ (RT = 4.44분), 컬럼: 제네이스(Geneis), C18 50 X 4.6 mm, 이동상: 수중 0.1％ 포름산:ACN (70 → 95 → 70)의 구배, 유속: 0.8 mL/분; M - 1 = 376.5;

중간체 17

1H-인돌-6-카르복실산, 3-시클로헥실-2-(2-포르밀-4-메톡시페닐)-, 1,1-디메틸에틸 에스테르. tert-부틸 2-브로모-3-시클로헥실-1H-인돌-6-카르복실레이트 (72 g, 0.19 m)를 톨루엔과 에탄올의 1:1 혼합물 (720 mL)에 용해시키고 탈기시켰다. 그 후 LiCl (23.9 g, 0.51 m)을 첨가하고, 이어서 탄산나트륨 (720 mL, 별도로 탈기된 1.0 M 용액) 및 Pd-테트라키스 (13.1 g, 0.011 m)를 첨가하였다. 0.25시간 동안 교반한 후에, 2-포르밀-4-메톡시페닐보론산 (41.1 g, 0.22 m)을 첨가하고 반응 혼합물을 85℃로 4시간 동안 가열하였다. 그 후 반응물을 TLC (헥산-에틸 아세테이트 80:20, R_f (생성물) = 0.55)에 의해 모니터링하였다. 완료되면, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 물 (1.0 L), 이어서 에틸 아세테이트 (1.0 L)를 첨가하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 건조시키고, 진공하에 농축시켜 표제 화합물을 황색 고체로서 얻었다. 수율 75 g (74％). HPLC: 99.7％ (RT = 6.30분), 컬럼: C18 BDS (4.6 X 50 mm), SC-307, 이동상: 수중 0.1％ TFA:ACN (30 → 100 → 30)의 구배, 유속 0.8 mL/분. LCMS: 98.0％ (RT = 5.28분), 컬럼: 제네이스, C18 (50 X 4.6 mm), 이동상: 수중 0.1％ 포름산:ACN (70 → 95 → 70)의 구배, 유속: 0.8 mL/분; M - 1 = 432.2;

중간체 18

7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6,10-디카르복실산, 13-시클로헥실-, 10- (1,1-디메틸에틸) 6-메틸 에스테르. tert-부틸 3-시클로헥실-2-(2-포르밀-4-메톡시페닐)-1H-인돌-6-카르복실레이트 (62.5 g, 0.144 m)를 무수 DMF (1.2 L)에 용해시키고 기계적으로 교반하였다. 탄산세슘 (84 g, 0.17 m) 및 메틸 2-(디메톡시포스포릴)아크릴레이트 (65 - 70％ GC 퓨어, 56.2 g, 0.18 m)를 이어서 첨가하고 반응 혼합물을 65℃로 4시간 동안 가열하고, 반응물을 TLC (헥산-에틸 아세테이트 80:20, R_f (생성물) = 0.7)에 의해 모니터링하였다. 완료되면, 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후에 물 (1.0 L)로 켄칭시켰다. 황색 고체가 침전되었고, 이를 여과에 의해 수집하여 공기 건조시켰다. 그 후 이 물질을 메탄올 중에서 슬러리화하고, 여과하고, 진공하에 건조시켜, 생성물을 황색 분말로서 제공하였다 (70 g, 90％). HPLC: 99.1％ (RT = 6.45분), 컬럼: C18 BDS (4.6 X 50 mm), 이동상: 수중 0.1％ TFA:ACN (30 → 100 → 30)의 구배, 유속 0.8 mL/분. LCMS: 100％ (RT = 7.00분), 컬럼: 제네이스, C18 (50 X 4.6 mm), 이동상: 수중 0.1％ 포름산:ACN (70 → 95 → 70)의 구배, 유속: 0.8 mL/분; M + 1 = 502.2;

중간체 19

2-프로펜산, 2-(디메톡시포스피닐)-, 메틸 에스테르. 기계적 교반기, 응축기, 온도 조절기 및 N₂ 유입구가 장치된 5 L 용량의 4-목 둥근 바닥 플라스크에 파라포름알데히드 (40.5 g, 1.35 mol), MeOH (2 L) 및 피페리딘 (2 mL)을 충전하였다. 반응 혼합물을 환류 온도로 N₂ 하에 3시간 동안 가열하였다. 50℃로 냉각시킨 후에, 2-(디메톡시포스포릴)아세테이트 (150 g, 0.824 mol)를 한번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 계속해서 18시간 동안 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응 용액을 진공에서 농축시켜 투명한 무색 오일을 제공하였다. 상기 오일을 온도 조절기, N₂ 유입구, 자석 교반기 및 딘-스타크(Dean-Stark) 장치가 장착된 3 L 용량의 4-목 둥근 바닥 플라스크에서 무수 톨루엔 (1 L) 중에 용해시켰다. 상기 용액에 TsOH.H₂O (5.2 g)를 첨가하였다. 그 후 반응 혼합물을 공비 환류시켜 메탄올을 18시간 동안 제거하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 용액을 진공에서 농축시켜 황색 오일을 제공하였고, 이를 150 - 155℃/0.2 mmHg에서 진공 증류시켜 생성물을 무색 오일 (135.0 g)로서 얻었다. 순도, ¹H NMR 상에서 90％.

중간체 20

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a,5(2H)-디카르복실산, 8-시클로헥실-1,12b-디히드로-1l-메톡시-, 5-(1,1-디메틸에틸) 1a-메틸 에스테르, (+/-). 수소화나트륨 (96 mg, 4 mmol)을 무수 DMSO (10 mL) 중 트리메틸술폭소늄 클로라이드 (567 mg, 4.4 mmol)의 교반 현탁액에 질소하에서 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 30-45분 동안 교반한 후에 순수 7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6, 10-디카르복실산, 13-시클로헥실-3-메톡시-, 10-(1,1-디메틸에틸) 6-메틸 에스테르 (1.0, 2 mmol)를 소량씩 나누어 첨가하였다. 현탁액을 DMSO (5 mL)로 희석시키고 50℃에서 3-4시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 물을 첨가하였다. 고체를 여과에 의해 수집하여 분리하고 물로 세척한 다음 밤새 공기 건조시켜 조 생성물 1.15 g을 얻었다. 이 물질을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (실리카 겔, DCM 중 3％ MeOH)에 의해 정제하여 순수한 표제 화합물 (0.96 g)을 제공하였다: LC/MS: 체류 시간 3.816분; m/e 516 (MH⁺). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): 생성물은 화합물의 NMR 스펙트럼으로부터 확인되는 것처럼, 상호-전환 회전이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다.

하기 절차는 라세미체 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a,5(2H)-디카르복실산, 8-시클로헥실-1,12b-디히드로-11-메톡시-, 5-(1,1-디메틸에틸) 1a-메틸 에스테르, (+/-)의 분해를 실시하는 방법의 한 예이다. 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a,5(2H)-디카르복실산, 8-시클로헥실-1,12b-디히드로-11-메톡시-, 5-(1,1-디메틸에틸) 1a-메틸 에스테르, (+/-)-의 샘플을 이소프로판올과 아세토니트릴의 혼합물 (8:2)에 용해시켜 20 mg/mL의 최종 농도를 제공하였다. 이 혼합물을 하기 조건을 사용하는 분취용 키랄 SFC 크로마토그래피 시스템에 주입하였다: 키랄셀 OJ-H 컬럼, 4.6 x 250 mm, 5 ㎛; 이동상: CO₂ 중 8％ MeOH; 온도: 35℃; 유속: 2 mL/분, 16분 동안; 260 nm에서 UV 모니터링; 주입량: IPA:ACN (8:2) 중 대략 20.0 mg/mL로 5 ㎕.

중간체 21

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a,5(2H)-디카르복실산, 8-시클로헥실-1,12b-디히드로-11-메톡시-, 1a-메틸 에스테르, (+/-)-. TFA (5 mL)를 무수 DCM (10 mL) 중 (+/-) 8-시클로헥실-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a- (메톡시카르보닐)-시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복실산, tert-부틸 에스테르 (515 mg, 1 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성 용액을 실온에서 대략 8 내지 12시간 동안 교반하였다. 그 후 반응물을 건고상태로 증발시켜 표제 화합물 (0.47 g, 100％)을 얻었다. LC/MS: 체류 시간 2.245분; m/e 460 (MH⁺). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): 화합물 NMR 스펙트럼으로부터, 생성물은 상호전환 회전이성질체의 혼합물로서 존재하는 것으로 관찰되었다.

중간체 22

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-1,12b-디히드로-11-메톡시-5-[[[(메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-, 메틸 에스테르. THF (3 mL) 중 8-시클로헥실-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(메톡시카르보닐)-시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복실산 (140 mg, 0.31 mmol) 및 CDI (64 mg, 0.40 mmol)의 용액을 1시간 동안 60℃에서 교반하였다. N-메틸술파미드 (68 mg, 0.62 mmol) 및 DBU (71.6 mg, 0.47 mmol)를 첨가하고 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하였다. 그 후 반응물을 냉수에 붓고, 묽은 염산으로 산성화시키고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출물을 묽은 염산 (0.1 N) 및 염수로 순차적으로 세척한 후, 건조시키고 (무수 황산나트륨), 여과한 다음 증발시켜 표제 화합물을 갈색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/e 552 (MH⁺). 이 물질을 추가 정제 없이 사용하였다.

중간체 23

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-1,12b-디히드로-11-메톡시-5-[[[(메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-. 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시-, 메틸 에스테르를 THF, MeOH 혼합물 (2 mL, 2 mL)에 용해시켰다. 2.5 M NaOH (수성) (1.2 mL, 3 mmol)를 이어서 첨가하고 반응물을 22℃에서 2시간 동안 진탕시켰다. 그 후 용액을 1 M HCl (수성) (3 mL)로 중화시키고 농축시켜 유기 용매를 제거하였다. 잔류물을 H₂O로 슬러리화하고 고체를 여과에 의해 수집하고, H₂O로 세척하고 건조시켜, 표제 화합물 (160 mg, 0.30 mmol)을 얻었다. ESI-MS m/e 538 (MH⁺). 이 물질을 추가 정제 없이 사용하였다.

중간체 24

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(벤질아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-(메톡시)-12-(메톡시)-, 메틸 에스테르, (+/-)-. THF (5 mL) 중 (+/-) 8-시클로헥실-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(메톡시카르보닐)-시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복실산 (200 mg, 0.44 mmol) 및 CDI (92 mg, 0.57 mmol)의 용액을 1시간 동안 60℃에서 교반하였다. 그 후 N-벤질술파미드 (164 mg, 0.88 mmol) 및 DBU (100 mg, 0.66 mmol)를 첨가하고 생성 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하였다. 그 후 반응물을 냉수에 붓고, 묽은 염산으로 산성화시키고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기상을 염산 (0.1 N), 염수로 세척하고 건조시키고 (황산나트륨), 진공에서 증발시켜 표제 화합물을 갈색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/e 628 (MH⁺).

중간체 25

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-1,12b-디히드로-11-메톡시-5-[[[[(페닐메틸)아미노]술포닐]아미노]카르보닐]-, (+/-)-. (+/-) 8-시클로헥실-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(메톡시카르보닐)-시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복실산으로부터 출발하여 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시-시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산에 대해 기재한 것과 유사한 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다.

중간체 26

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[(시클로프로필술포닐)아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-1l-메톡시-, (+/-)-. 무수 THF 중 (+/-) 8-시클로헥실-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(메톡시카르보닐)-시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복실산 (1 당량) 및 카르보닐디이미다졸 (1.5 당량)의 혼합물을 50℃에서 30분 동안 가열하고 실온으로 냉각시켰다. 그 후, 1 당량의 시클로프로판술폰아미드 및 1,8-디아자바이시클로[5.4.0]운데크-7-엔 (2 당량)을 연속적으로 첨가하였다. 생성 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 산성의 수성 후처리 후, 단리된 조 생성물을 분취용 HPLC에 의해 정제하였다. 그 후 중간체 에스테르를 THF-MeOH 중 1 N NaOH를 사용하여 가수분해시켜 표제 화합물을 얻었다. LC/MS: 체류 시간: 2.030분; m/e 549 (MH⁺). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): 생성물은 화합물의 NMR 스펙트럼으로부터 확인되는 것처럼, 상호-전환 회전이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다.

중간체 27

3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄, 3-메틸-8-(페닐메틸)-. 시스-1-벤질-2,5-비스(클로로메틸)피롤리딘 히드로클로라이드 (37.5 g, 0.13 mol) (공개 PCT 특허 출원 WO 200232902에 개시된 바와 같이 제조됨)를 기계적 교반기, 환류 응축기 및 온도계가 장착된 5 L 용량의 3-목 둥근 바닥 플라스크에서 CH₃CN (900 mL)에 현탁시켰다. 교반 현탁액을 50℃로 가온시키고, NaHCO₃ (97 g, 1.1 mol)를 첨가하고, 현탁액을 70℃로 가온시켰다. NaI (50 g, 0.33 mol)를 첨가하고 70℃에서 5분 동안 교반하였고, 이때 부가 깔때기를 응축기의 상단에 부착하였다. 부가 깔때기에 CH₃CN 850 mL 중 40％ 수성 MeNH₂ (0.55 mol) 48 mL를 첨가하고, 이 용액을 적가하였다 (첨가 속도는 10-15 ml/분으로 유지함). 75분 후에 첨가가 완료되었고, 이때 반응물을 실온으로 냉각시키고, 고체를 여과하고, 용매를 대략 800 mL로 농축시켰다. 반응물을 EtOAc (800 mL)에 붓고 1 N NaOH (2 x 100 mL)로 세척하였다. 수성상을 EtOAc (2 x 100 mL)로 재추출하고, 합친 유기상을 Na₂SO₄ 상에서 건조시키고 농축시켰다. 생성 잔류물을 실리카 겔 (62O g) 상에 도입하고 CHCl₃ 중 2.8％ MeOH/0.4％ 진한 NH₄OH (총 6 L)로 용리하였다. 순수한 분획을 2 L 내지 4 L 수집하였다. 농축시켜 표제 화합물 8.76 g (32％ 수율)을 갈색 오일로서 얻었다.

LC 방법: 용매 A = 10％ MeOH/90％ H₂O/0.1％ TFA, 용매 B = 90％ MeOH/10％ H₂O/0.1％ TFA, 시작 ％B = 0％, 최종 ％B = 100, 유속 = 4 ml/분, 구배 시간 = 2분, 전개 시간 = 3분, 컬럼: 페노메넥스-루나(Luna) 10 □m C18 50 mm x 3.0 mm, Rt = 0.23분; MS: (ES+) m/z (M+H)+ = 217.3. 추가로 혼합 분획 6.1 g을 컬럼으로부터 수득하였다 (¹H NMR 통합에 의해 순도 >80％).

중간체 28

3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄, 3-메틸-, 디히드로클로라이드. N-메틸-N-벤질바이시클로디아민 (14.22 g, 65.7 mMol)을 메탄올 650 ml에 용해시키고 12 M 수성 염산 17 ml를 첨가하였다. 용액을 2 L 용량의 파르(Parr) 보틀에 질소하에 두고 탄소상 20％ 수산화팔라듐 3.66 g을 반응물에 첨가하였다. 혼합물을 파르 진탕기에 60 psig의 수소하에 17시간 동안 두었다. 반응물은 TLC 분석 (클로로포름 90 부피부 중에 용해된 메탄올 중 2 M 암모니아의 용액 10 부피부로 용리한 실리카 겔 플레이트)에 의해 완료를 판단하였다. 반응물을 셀라이트 플러그를 통해 여과하고, 그 후에 물 및 메탄올로 순차적으로 세정하였다. 합친 여과물을 진공에서 농축시키고 메탄올 및 벤젠을 균질 용액이 수득될 때까지 첨가하였다. 그 후 디에틸 에테르 중 2.0 M 염산 75 mL를 첨가하였다. 휘발물질을 생성물 용액으로부터 진공에서 제거하였다. 메탄올/벤젠 혼합물을 사용하는 생성물 용액으로부터의 물의 반복된 공비제거에 의해 최종적으로 담황색 고체가 수득되었다. 고체 생성물, 3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄을 진공에서 밤새 건조시켜 흡습성 고체 11.98 g (91％)을 수득하였다. 생성물을 플라스크로부터 제거하고 그의 흡습성으로 인해 질소하에 글로브 백(glove bag)에 담았다.

중간체 29 및 30

3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-카르복실산, 페닐메틸 에스테르 및 3-(페닐메틸)-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄. 트리에틸아민 (1.44 mL, 10.363 mmol)을 CH₂Cl₂ (20 mL) 중 8-boc-3,8-디아자-바이시클로[3.2.1]옥탄 (2.0 g, 9.421 mmol)의 용액에 첨가하고, 벤질 클로로포르메이트 (1.46 mL, 10.363 mmol)를 0℃에서 적가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후에, 실온으로 가온시키고, 3일 동안 계속해서 교반하였다. 그 후 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고 1 N HCl 용액으로 산성화시켰다. 유기층을 분리하고, 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄) 농축시켜, 조 생성물로서 무색의 농후한 오일을 제공하였다. 그 후에 이 물질 70 mg을 1,2-디클로로에탄 (2 mL)에 용해시키고 TFA (0.5 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 그 후 용매 및 TFA를 증발시켜 무색의 농후한 오일로서 두 표제 화합물의 혼합물을 제공하였다.

중간체 31

술폰아미드의 일반적인 제조 절차. 무수 THF 중 산 (1 당량) 및 카르보닐디이미다졸 (1.5 당량)의 혼합물을 50℃에서 30분 동안 가열하고 실온으로 냉각시켰다. 그 후, 술파미드 (R = NR₂) 또는 술폰아미드 (R = 알킬 또는 아릴) 1 당량 및 DBU (2 당량)를 연속적으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 산성의 수성 후처리 후, 단리된 조 생성물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 표제 중간체를 얻었다.

중간체 32

산의 일반적인 제조 절차. THF-MeOH 중 1 N NaOH를 사용하여 메틸 에스테르를 가수분해하였다.

중간체 33

순수 CDI (0.049 g, 0.302 mmol)를 THF (1 ml) 중 산 (0.092 g, 0.200 mmol)의 교반된 용액에 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 30분 동안 가열한 후, 실온으로 냉각시켰다. 그 후, N-시클로프로필-N-메틸술파미드 (0.0451 g, 0.300 mmol) 및 DBU (0.060 ml, 0.400 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 혼합물을 1-2시간 동안 초음파 처리한 후, 밤새 실온에서 교반하였다. 반응을 MeOH (0.5 ml)로 켄칭시킨 후, 1 N HCl로 산성화시키고 EtOAc (2 X 25 mL)로 추출하고, 물, 염수로 세척하고 건조시켰다 (Na₂SO₄). 조 생성물 (0.123 g)을 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피 (DCM 중 5％ MeOH)에 의해 정제하여 목적 생성물을 회백색 고체 (0.101 g, 85％)로서 얻었다.

중간체 34

1 N NaOH (2 mL, 2.000 mmol)를 질소하에 THF-MeOH 중 메틸 에스테르 (0.098 g, 0.166 mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 1 N HCl (3 ml)로 산성화시키고, EtOAc (2 X 25 ml)로 추출하고, 물, 염수로 세척하고 건조시켰다 (MgSO₄). 용매를 증발시켜 산을 회백색 고체 (0.0942 g, 98％)로서 제공하였다. LC/MS: m/e 578 (MH+). LC/MS 방법: 시작 ％B: 0, 최종 ％B: 100; 구배 시간: 3분; 정지 시간: 4분; 유속: 4 ml/분; 파장: 220; 용매 A: 10％ MeOH/90％ H₂O/0.1％ 트리플루오로아세트산; 용매 B: 10％ H₂O/90％ MeOH/0.1％ 트리플루오로아세트산; 컬럼: 엑스브리지(XBridge) 4.6 x 50 mm S5.

중간체 35

t-부탄올 (1.35 mL, 14 mmol)을 0℃에서 CH₂Cl₂ (10 mL)의 CSI (1.24 mL, 14 mmol) 용액에 적가하였다. 생성된 용액을 2시간 동안 0℃에서 교반하였다. CH₂Cl₂ (3 ml) 중 N-메틸프로판-2-아민 (1.57 ml, 14.13 mmol) 및 TEA (2.167 ml, 15.54 mmol)의 용액을 적가하였다. 생성된 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고 냉각된 1 N HCl, 염수로 세척하고 건조시키고 (MgSO₄), 용매를 제거하고, 잔류물을 바이오타지(Biotage) 40 M 컬럼 (EtOAc-MeOH (90-10)/헥산 5％ → 100％)에 의해 정제하여 생성물을 무색 겔 (2.3 g, 65％)로서 얻었다.

중간체 36

tert-부틸 N-이소프로필-N-메틸술파모일카르바메이트 (2.3 g, 9.12 mmol)에 냉각된 HCl (6 mL, 24.00 mmol)을 첨가하고 실온에서 2시간 동안 교반하고, 용매를 제거하여 생성물을 밝은 황갈색의 고체 (1.38 g, 99％)로서 얻었다.

중간체 37

CDI 및 DBU를 사용하여 산 (0.25 g, 0.54 mmol) 및 아민으로부터 생성물 (0.261 g, 81％)을 제조하였다. LC-MS 체류 시간: 3.635분; MS m/z (M+H) 594. H NMR은 화합물이 회전 이성질체 (~4/3)로서 존재함을 나타내었다. LC/MS 방법: 시작 ％B: 0, 최종 ％B: 100; 구배 시간: 3분; 정지 시간: 4분; 유속: 4 ml/분; 파장: 220; 용매 A: 10％ MeOH/90％ H₂O/0.1％ 트리플루오로아세트산; 용매 B: 10％ H₂O/90％ MeOH/0.1％ 트리플루오로아세트산; 컬럼: 엑스브리지 4.6 x 50 mm S5.

중간체 38

THF/MeOH 중 NaOH를 사용하여 에스테르 (0.258 g, 0.435 mmol)로부터 산 (0.22 g, 87％)을 제조하였다. 산을 담황색 고체로서 단리하였다. LC-MS 체류 시간: 3.608분; MS m/z (M+H) 580. LC/MS 방법: 시작 ％B: 0, 최종 ％B: 100; 구배 시간: 3분; 정지 시간: 4분; 유속: 4 ml/분; 파장: 220; 용매 A: 10％ MeOH/90％ H₂O/0.1％ 트리플루오로아세트산; 용매 B: 10％ H₂O/90％ MeOH/0.1％ 트리플루오로아세트산; 컬럼: 엑스브리지 4.6 x 50 mm S5. 1H NMR에는 회전 이성질체 (~1/2)가 존재하였다. 주요 이성질체:

일부 실시예를 위한 아미드의 일반적인 제조 절차. 산 유도체 (1 당량)를 무수 DMF 중 상응하는 아민 (1.2 당량), 트리에틸아민 (2-3 당량) 및 TBTU (1.3 당량)와 조합하고, 아미드 커플링이 완료될 때까지 실온에서 1-2시간 동안 교반하였다. 단리된 조 생성물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 목적한 아미드를 제공하였다.

실시예 1

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-[(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐]-, (+/-)-. TBTU (43.7 mg, 0.136 mmol) 및 DIPEA (0.095 mL, 0.544 mmol)를 DMSO (2.0 mL) 중 (+/-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시- (50 mg, 0.0906 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 그 후, 3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄 디히드로클로라이드 {J ＆ W PharmLab, LLC Morrisville, PA 19067-3620} (27.1 mg, 0.136 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 그 후, 이것을 농축시키고 잔류물을 분취용 역상 HPLC에 의해 정제하여 최종 생성물을 황색 고체 (32 mg, 46％ 수율)로서 제공하였다. MS m/z 660 (MH⁺), 체류 시간: 2.445분.

실시예 2

3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실산, 3-[[8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-일]카르보닐]-, 1,1-디메틸에틸 에스테르, (+/-)-. TBTU (131 mg, 0.408 mmol) 및 DIPEA (0.237 mL, 1.36 mmol)를 DMSO (4.0 mL) 중 (+/-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시- (150 mg, 0.272 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 그 후, 8-Boc-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄 (86.7 mg, 0.408 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 그 후, 이것을 농축시키고 잔류물을 분취용 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 생성물을 밝은 황색 고체 (110 mg, 54％ 수율)로서 제공하였다. MS m/z 746 (MH⁺), 체류 시간: 3.040분.

실시예 3

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-1a-(3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-3-일카르보닐)-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-, (+/-)-. TFA (2 mL)를 1,2-디클로로에탄 (3 mL) 중 (+/-) 3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실산, 3-[[8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-일]카르보닐]-, 1,1-디메틸에틸 에스테르 (98 mg, 0.131 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 그 후, 이것을 농축시켜 목적 생성물을 갈색을 띤 고체 (100 mg, 100％ 수율)로서 제공하였다. MS m/ 646 (MH⁺), 체류 시간: 2.478분.

실시예 4

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-[(8-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-3-일)카르보닐]-, (+/-)-. 메탄올 (3 mL) 중 (+/-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-1a-(3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-3-일카르보닐)-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시- (54 mg, 0.071 mmol)의 용액에 파라포름알데히드 (6.4 mg, 0.213 mmol), ZnCl₂ (29 mg, 0.213 mmol) 및 Na(CN)BH₃ (13.4 mg, 0.213 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 가열한 후, 실온으로 냉각시켰다. 존재하는 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과물을 진공하에 농축시키고 잔류물을 분취용 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 밝은 황색 고체 (37 mg, 67％ 수율)로서 제공하였다. MS m/ 660 (MH⁺), 체류 시간: 2.495분.

실시예 5

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-[[8-(1-메틸에틸)-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-3-일]카르보닐]-, (+/-)-. 메탄올 (3 mL) 중 (+/-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-1a-(3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-3-일카르보닐)-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시- (40 mg, 0.071 mmol)의 용액에 아세톤 (1 mL), ZnCl₂ (29 mg, 0.213 mmol) 및 Na(CN)BH₃ (13.4 mg, 0.213 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 밤새 가열한 후, 실온으로 냉각시켰다. 존재하는 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과물을 진공하에 농축시키고 잔류물을 분취용 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 밝은 황색 고체 (29 mg, 69％ 수율)로서 제공하였다. MS m/ 688 (MH⁺), 체류 시간: 2.477분.

실시예 6

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-[(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐]-, (1aR,12bS)-. DMSO (8.0 mL) 중 (-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시- (204 mg, 0.37 mmol)의 용액에 TBTU (178 mg, 0.555 mmol) 및 DIPEA (0.39 mL, 2.22 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 그 후, 3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄 디히드로클로라이드 (111 mg, 0.555 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 그 후, 이것을 농축시키고 잔류물을 분취용 역상 HPLC에 의해 정제하여 황색 고체를 최종 TFA 염 (265 mg, 92％ 수율)으로서 제공하였다. 평균 고유 회전각도: -53.56° 용매, MeOH; 파장 589 nm; 50 cm 셀. MS m/z 660 (MH⁺), 체류 시간: 3.035분.

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-[(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐]-, (1aR,12bS)-rel-(-)-의 별법적인 합성 절차를 이하에 제공하였다. 무수 MeCN (300 mL) 중 (-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시- (25.2 g, 45.68 mmol) 및 3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄 디히드로클로라이드 (10.0 g, 50.22 mmol)의 혼합물에 N₂ 하에서 DIPEA (23.62 g, 182.72 mmol)를 첨가하였다. 15분 후, TBTU (16.12 g, 50.22 mmol)를 첨가하였다. 반응 용액을 N₂ 하에 30분 동안 교반하였다. HPLC는 출발 물질의 소실을 나타내었다. 용액 중의 용매를 증발시켜 발포체를 제공하였다. 이것을 EtOAc (2.5 L)에 용해시키고, H₂O (1.5 L), H₂O/염수 (8:2) (1.5 L), 염수 (1.5 L)로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고 증발시켜 조 생성물 28.8 g을 제공하였다. 이 고체를 5회의 별도 반응으로부터 얻은 물질 45.4 g과 합하여 총 74.2 g의 조 생성물을 얻었다. 이것을 MeOH/CH₂Cl₂ (2.5:97.5)로 용리시키면서 실리카 겔 패드 (E. Merck 230-400 메쉬, 1 kg)에 통과시켰다. 증발 후, 이것은 발포체를 제공하였고, 이를 EtOAc 및 헥산으로 처리하여 고체로 만들었다. 50℃에서 진공하에 7시간 동안 건조시킨 후, GC 분석은 이것이 EtOAc 및 헥산을 각각 1.4％ 보유함을 나타내었다. 61-64℃에서 추가로 건조시킨 후, GC 분석은 이것이 여전히 1.0％의 헥산 및 1.4％의 EtOAc를 보유함을 나타내었다. 생성물을 Et₂O에 용해시키고 진공에서 서서히 3회 증발시키고, 60℃에서 진공하에 3시간 동안 건조시켜 68.3 g을 제공하였다. 이것을 H₂O (900 mL)로 세척하고 68℃에서 진공하에 7시간 동안 재건조시켜 실시예 6의 화합물 67.1 g (77％ 수율)을 제공하였다. GC 분석은 이것이 0.97％의 Et₂O를 보유함을 나타내었다. HPLC는 컬럼: 카덴자(Cadenza) CD-C18 3 x 250 mm; UV: 257 및 220 nm; 25℃; 유속: 0.5 mL/분; 구배 시간: 38분, 0 - 80％ B (0 - 35분) 및 80％ B (35 - 38분); 용매 A: 물 중 pH 4.7에서의 25 nM CH₃COONH₄, 용매 B: MeCN을 조건으로 하였다. HPLC 순도 99.7％ (Rt 26.54분); 키랄 HPLC는 컬럼: 레지스(Regis) (S,S) 웰크(Whelk)-O1 250 x 4.6 mm; UV 258 nm; 35℃; 유속 2.0 mL/분; 이동상 CO₂/MeOH; 구배 시간 20분, 30％ MeOH (0 - 1분), 30 - 48％ MeOH (1 - 19분), 48％ MeOH (19 - 20분)를 조건으로 하였다. 키랄 HPLC 순도 ＞ 99.8％ (Rt 16.60분); LC/MS (ES⁺) 660.36 (M+H, 100); HRMS: 계산치 660.3220, 실측치 660.3197; [α]_D ^25C -79.66° (c 1.06, MeOH); C₃₆H₄₅N₅O₅S·0.6H₂O·0.09Et₂O에 대한 분석 계산치: C, 64.53; H, 7.00; N, 10.35; S, 4.74; H₂O, 1.51; Et₂O, 0.97. 실측치: C, 64.50; H, 7.12; N, 10.41; S, 5.14; H₂O, 1.52; Et₂O, 0.97. 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-[(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐]-, (1aR,12bS)-rel-(-)-의 절대 입체화학은 상기 도시한 바와 같고, (R)-캄포르술폰산 염 상에서 얻어진 x-선 결정 구조로부터 측정되었다.

또한, 하기 염을 제조하였다: 히드로클로라이드, 포스페이트, 아세테이트, 술페이트, 캄실레이트, 나트륨, 칼슘 및 마그네슘. 히드로클로라이드 염은 하기 특징을 가졌다. DSC: 25℃ → 75℃의 작고 광대역인 흡열, 및 253℃ 내지 258℃ 범위의 온도에서 피크를 갖는 잠재적 용융/분해 흡열; TGA: 0.003％ 내지 1.5％ 범위의 25℃ → 75℃에서의 초기 중량 손실, 및 대략 200℃에서 시작하는 분해 중량 손실.

실시예 7

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-(시클로프로필술포닐)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-[(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐]-, (+/-)-. (+/-) 8-시클로헥실-5-(시클로프로필술포닐카르바모일)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a-카르복실산 (1 당량)을 무수 DMF 중 3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄 (1.2 당량), 트리에틸아민 (3 당량) 및 TBTU (1.3 당량)와 조합하고 LCMS 분석에 의해 반응이 완료된 것으로 관찰될 때까지 실온에서 대략 2시간 동안 교반하였다. 그 후, 생성물을 분취용 역상 HPLC에 의해 단리하여 목적 표제 화합물의 모노 TFA 염을 베이지색 고체로서 제공하였다. LC/MS: 체류 시간: 2.986분; m/e 657 (MH⁺). 화합물은 하기 데이터에 의해 상호전환 회전 이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다:

실시예 8

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-[[3-(페닐메틸)-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일]카르보닐]-, (+/-)-. DMSO (1.0 mL) 중 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시- (40 mg, 0.0725 mmol)의 용액에 TBTU (35 mg, 0.109 mmol) 및 DIPEA (0.076 mL, 0.435 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 그 후, 상기 기재된 벤질 3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-카르복실레이트의 제법으로부터의 혼합물을 첨가하고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 그 후, 이것을 농축시키고 잔류물을 분취용 역상 HPLC에 의해 정제하여 생성물을 밝은 황색 고체 (12.5 mg, 20％ 수율)로서 제공하였다. MS m/z 736 (MH⁺), 체류 시간: 2.631분.

실시예 9

3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-카르복실산, 8-[[8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-일]카르보닐]-, 페닐메틸 에스테르, (+/-)-. DMSO (1.0 mL) 중 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시- (40 mg, 0.0725 mmol)의 용액에 TBTU (35 mg, 0.109 mmol) 및 DIPEA (0.076 mL, 0.435 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 그 후, 벤질 3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-카르복실레이트의 제법으로부터의 혼합물을 첨가하고 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 그 후, 생성된 혼합물을 진공에서 농축시키고 잔류물을 분취용 역상 HPLC에 의해 정제하여 생성물을 밝은 황색 고체 (42 mg, 74％ 수율)로서 제공하였다. MS m/z 780 (MH⁺), 체류 시간: 3.070분.

실시예 10

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-1a-(3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일카르보닐)-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-, (+/-)-. 메탄올/에틸 아세테이트 (20 mL/20 mL) 중 3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-카르복실산, 8-[[8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-일]카르보닐]-, 페닐메틸 에스테르 (360 mg, 0.462 mmol)의 용액에 탄소상 10％ Pd (40 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소 대기 (1 atm)하에서 밤새 교반하였다. 그 후, 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 메탄올 및 에틸 아세테이트로 세척하였다. 합친 여과물을 농축시켜 생성물을 황색 고체 (275 mg, 92％ 수율)로서 제공하였다. MS m/z 646 (MH⁺), 체류 시간: 2.983분.

실시예 11

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1a-[(3-에틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-, (+/-)-. 메탄올 (2 mL) 중 (+/-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐]- (30 mg, 0.0465 mmol)의 용액에 아세트알데히드 (0.013 mg, 0.232 mmol), ZnCl₂ (19 mg, 0.14 mmol) 및 Na(CN)BH₃ (8.8 mg, 0.14 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였고, 그 동안 침전물이 형성되었다. 이 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과물을 진공하에 농축시켰다. 그 후, 잔류물을 분취용 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물의 TFA 염을 밝은 황색 고체 (35 mg, 96％ 수율)로서 제공하였다. MS m/z 674 (MH⁺), 체류 시간: 3.013분.

실시예 12

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-[[3-(1-메틸에틸)-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일]카르보닐]-, (+/-)-. 메탄올 (2 mL) 중 (+/-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐]- (30 mg, 0.0465 mmol)의 용액에 아세톤 (0.010 mg, 0.14 mmol) 및 ZnCl₂ (19 mg, 0.14 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 가열하였다. 그 후, Na(CN)BH₃ (8.8 mg, 0.14 mmol)를 첨가하고, 반응물을 50℃에서 밤새 유지시켰고, 그 동안 침전물이 형성되었다. 이 물질을 여과에 의해 제거한 후, 여과물을 진공에서 농축시켰다. 그 후, 생성된 잔류물을 분취용 HPLC 컬럼에 의해 정제하여 표제 화합물의 TFA 염을 밝은 황색 고체 (35 mg, 94％ 수율)로서 제공하였다. MS m/z 688 (MH⁺), 체류 시간: 3.011분.

실시예 13

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-1a-[[3-(시클로프로필메틸)-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일]카르보닐]-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-, (+/-)-. 메탄올 (2 mL) 중 (+/-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐]- (20 mg, 0.031 mmol)의 용액에 시클로프로판카르복스알데히드 (0.007 mg, 0.093 mmol), ZnCl₂ (12.7 mg, 0.093 mmol) 및 Na(CN)BH₃ (5.8 mg, 0.093 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 불용성 고체를 여과에 의해 제거하였다. 여과물을 진공에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 분취용 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물의 TFA 염을 밝은 황색 고체 (10 mg, 40％ 수율)로서 제공하였다. MS m/z 700 (MH⁺), 체류 시간: 3.033분.

실시예 14

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 1a-[(3-아세틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐]-8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-, (+/-)-. TBTU (15 mg, 0.0465 mmol) 및 DIPEA (0.027 mL, 0.155 mmol)를 DMSO (1.0 mL) 중 아세트산 (3 mg, 0.0465 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 그 후, (+/-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐]- (20 mg, 0.031 mmol)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 그 후, 이것을 농축시키고, 잔류물을 분취용 HPLC 컬럼에 의해 정제하여 표제 화합물을 밝은 황색 고체 (7 mg, 33％ 수율)로서 제공하였다. MS m/z 688 (MH⁺), 체류 시간: 3.278분.

실시예 15

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-[[3-(2-피리디닐)-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일]카르보닐]-, (+/-)-. 마이크로파 반응 튜브 내에, (+/-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐]- (20 mg, 0.031 mmol), Pd₂(dba)₃ (0.6 mg, 2 mol％), 1,3-비스(디페닐포스피노)프로판 (0.5 mg, 4 mol％), 나트륨 t-부톡사이드 (8.9 mg, 0.093 mmol) 및 2-브로모피리딘 (0.006 mL, 0.062 mmol)을 질소하에서 첨가하였다. 그 후, 반응 튜브를 밀봉하고 디옥산 (1 mL)을 첨가한 후, 반응 혼합물을 오일조 내 70℃에서 밤새 가열하였다. 그 후, 반응물을 여과하고 농축시키고, 잔류물을 분취용 HPLC 컬럼에 의해 정제하여 표제 화합물의 TFA 염을 회백색 고체 (2.2 mg, 7.5％ 수율)로서 제공하였다. MS m/z 723 (MH⁺), 체류 시간: 3.048분.

실시예 16

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-1a-[(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐]-11-(페닐메톡시)-, (+/-)-. (+/-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-(페닐메톡시)- (496 mg, 0.79 mmol)를 DMF 7 ml에 용해시키고, TBTU (392 mg, 1.22 mmol)를 첨가하고 반응물을 질소하에 1시간 동안 실온에서 교반한 후, DMAP (525 mg, 4.29 mmol)에 이어 3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄 디히드로클로라이드 (196 mg, 0.98 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 질소 대기하에 17시간 동안 교반한 후, 물 100 ml에 부었다. 수성 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 물로 2회 세척한 후, 염수로 세척하고 황산마그네슘 상에서 건조시켰다. 진공에서 휘발물질을 제거하여 조 생성물 615 mg을 제공하였고, 이를 실리카 겔 1.5 g 상에서 흡착시키고, 디클로로메탄 중 3％ 메탄올로 용리시키면서 실리카 겔 18 g 상에서 크로마토그래피하였다. 순수한 생성물 분획을 합하고 휘발물질을 진공에서 제거하여 거의 무색의 무정형 고체 216 mg (37％)을 수득하였다.

실시예 17

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-히드록시-1a-[(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐]-, (+/-)-. (+/-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-1,1a,2,12b-테트라히드로-1a-[(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐]-11-(페닐메톡시)- (189 mg, 0.26 mmol)를 메탄올 5 ml 및 억제제 없는 THF 2 ml의 혼합물에 가열을 사용하여 용해시켰다. 냉각 시, 일부 물질이 침전되었다. 수성 1 N 염산 (0.3 ml, 0.3 mmol)을 첨가하여 용해를 보조하였다. 탄소상 20％ 수산화팔라듐 (46 mg)의 첨가 전에 반응물을 질소 대기하에 두었다. 실온 및 대기압 (벌룬)에서 수소하에 6.75시간 동안 반응을 진행시켰다. 반응물을 셀라이트 플러그를 통해 여과하였다. 여과물의 휘발물질을 진공에서 제거하여 생성물 161 mg (92％)을 담황색 고체로서 수득하였다.

실시예 18

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-N-[(메틸아미노)술포닐]-1a-[(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐]-, (-)-. DMF (1.5 mL) 중 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-메톡시- (158 mg, 0.29 mmol), 3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄 디히드로클로라이드 (59 mg, 0.29 mmol), 디이소프로필 에틸 아민 (0.15 mL) 및 TBTU (112 mg, 0.35 mmol)의 용액을 1시간 동안 22℃에서 교반하고 분취용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 담황색 고체 (150 mg, 80.1 ％)로서 제공하였다. ESI-MS m/e 646 (MH⁺).

실시예 19

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, 8-시클로헥실-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-[(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐]-N-[[(페닐메틸)아미노]술포닐]-, (+/-)-. (+/-) 8-시클로헥실-N-((벤질아미노)술포닐)-1a-((3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐)-11-(메틸옥시)-1,1a,2,12b-테트라히드로시클로프로파[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드를 (+/-) 시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a(2H)-카르복실산, 8-시클로헥실-5-[[[(벤질아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-1,12b-디히드로-11-(메톡시)-12-(메톡시)-, 메틸 에스테르로부터 출발하여, (-) 8-시클로헥실-N-((메틸아미노)술포닐)-1a-((3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐)-11-(메틸옥시)-1,1a,2,12b-테트라히드로시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드의 합성에 대해 기재한 것과 유사한 방식으로 제조하였다. ESI-MS m/e 722 (MH+).

실시예 20

시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드, N-(아미노술포닐)-8-시클로헥실-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-[(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐]-, (+/-)-. 탄소상 10％ 팔라듐 (40 mg, 0.038 mmol)을 EtOH (10 mL) 중 (+/-) 8-시클로헥실-N-((벤질아미노)술포닐)-1a-((3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐)-11-(메틸옥시)-1,1a,2,12b-테트라히드로시클로프로파[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드(+/-) (20 mg, 0.028 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 연속적으로 진공에 적용한 다음 질소로 3회 플러싱한 후, 수소 대기 (1 atm)하에 두었다. 반응 혼합물을 실온에서 2일 동안 교반한 후, 셀라이트 패드를 통해 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC (TFA 완충액을 함유하는 아세토니트릴/H₂O)에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 필름으로서 수득하였다. ESI-MS m/e 632 (MH⁺).

실시예 20 내지 31을 하기 LC/MS 방법에 의해 분석하였다: 분석 조건: 컬럼: 페노메넥스-루나 3.0 x 50 mm S10; 이동상: (A) 10:90 메탄올-물; (B) 90:10 메탄올-물; 완충액: 0.1％ TFA; 구배 범위: 0-100％ B; 구배 시간: 2분; 유속: 4 mL/분; 분석 시간: 3분; 검출: 검출기 1: 220 nm의 UV; 검출기 2: MS (ESI+).

실시예 21

(+/-)-8-시클로헥실-5-(모르폴리노술포닐카르바모일)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a-카르복실산. 생성물을 분취용 HPLC에 의해 정제하고 베이지색 고체로서 단리하였다. LC/MS: 체류 시간: 1.968분; m/e 460 (MH⁺). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): 화합물은 상호전환 회전 이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다.

실시예 22

(+/-)-8-시클로헥실-5-(4-메틸피페라진-1-일술포닐카르바모일)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-1a-카르복실산. 생성물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 모노 TFA 염 형태로 베이지색 고체로서 단리하였다. LC/MS: 체류 시간: 1.687분; m/e 607 (MH⁺). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): 화합물은 상호전환 회전 이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다.

실시예 23

(+/-)-8-시클로헥실-N-4-(모르폴리노술포닐)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-카르보닐)시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드. 생성물을 분취용 HPLC에 의해 정제하고 TFA 염으로서 단리하였다. LC/MS: 체류 시간: 1.770분; m/e 702 (MH⁺). 화합물은 하기 데이터에 의해 상호전환 회전 이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다:

실시예 24

(+/-)-8-시클로헥실-N-(피롤리딘-1-일술포닐)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-카르보닐)시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드. 생성물을 분취용 HPLC에 의해 정제하고 TFA 염으로서 단리하였다. LC/MS: 체류 시간: 2.873분; m/e 686 (MH⁺). 화합물은 하기 데이터에 의해 상호전환 회전 이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다:

실시예 25

(+/-)-8-시클로헥실-N-(피페리딘-1-일술포닐)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-카르보닐)시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드. 생성물을 분취용 HPLC에 의해 정제하고 TFA 염으로서 단리하였다. LC/MS: 체류 시간: 1.882분; m/e 700 (MH⁺). 화합물은 하기 데이터에 의해 상호전환 회전 이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다:

실시예 26

(+/-)-8-시클로헥실-N-((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노술포닐)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-카르보닐)시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드. 생성물을 분취용 HPLC에 의해 정제하고 TFA 염으로서 단리하였다. LC/MS: 체류 시간: 2.911분; m/e 730 (MH⁺). 화합물은 하기 데이터에 의해 상호전환 회전 이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다:

실시예 27

(+/-)-8-시클로헥실-N-4-(4-메틸피페라진-1-일술포닐)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-카르보닐)시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드. 생성물을 분취용 HPLC에 의해 정제하고 비스-TFA 염으로서 단리하였다. LC/MS: 체류 시간: 1.563분; m/e 715 (MH⁺). 화합물은 하기 데이터에 의해 상호전환 회전 이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다:

실시예 28

(+/-)-8-시클로헥실-N-(이소프로필술포닐)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-카르보닐)시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드. 생성물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 모노 TFA 염 형태로 베이지색 고체로서 단리하였다. LC/MS: 체류 시간: 1.818분; m/e 659 (MH⁺). 표제 화합물은 하기 데이터에 의해 상호전환 회전 이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다:

실시예 29

(+/-)-8-시클로헥실-N-(N,N-디메틸술파모일)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-디플루오로메톡시-1a-(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-카르보닐)시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드. 생성물을 상응하는 페놀성 유도체의 디플루오로메틸화 (ClCHF₂, 1 N NaOH, 아세톤-이소프로판올, 실온)에 의해 제조하고, 분취용 HPLC에 의해 정제하여 모노 TFA 염 형태로 베이지색 고체로서 단리하였다. LC/MS: 체류 시간: 1.798분; m/e 696 (MH⁺). 표제 화합물은 하기 데이터에 의해 상호전환 회전 이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다:

실시예 30

(+/-)-8-시클로헥실-N-(N,N-디메틸술파모일)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-카르보닐)시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-N-메틸-5-카르복스아미드. 생성물을 미쯔노부(Mitsunobu) 조건 (Ph₃P, DEAD, MeOH-THF, 0-23℃)하에서 (+/-)-8-시클로헥실-N-(N,N-디메틸술파모일)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-카르보닐)시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드의 N-메틸화에 의해 제조하고, 분취용 HPLC에 의해 정제하여 모노 TFA 염 형태로 베이지색 고체로서 단리하였다. LC/MS: 체류 시간: 1.828분; m/e 674 (MH⁺). 표제 화합물은 하기 데이터에 의해 상호전환 회전 이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다:

실시예 31

(+/-)-8-시클로헥실-N-(N-시클로프로필술파모일)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-카르보닐)시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-N-메틸-5-카르복스아미드. 생성물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 모노 TFA 염 형태로 베이지색 고체로서 단리하였다. LC/MS: 체류 시간: 2.751분; m/e 672 (MH⁺). 표제 화합물은 하기 데이터에 의해 상호전환 회전 이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다:

실시예 32 내지 36을 하기 LC/MS 방법에 의해 분석하였다: 시작 ％B: 0; 최종 ％B: 100; 구배 시간: 3분; 정지 시간: 4분; 유속: 4 ml/분; 파장: 220; 용매 A: 10％ MeOH/90％ H₂O/0.1％ 트리플루오로아세트산; 용매 B: 10％ H₂O/90％ MeOH/0.1％ 트리플루오로아세트산; 컬럼: 엑스브리지 4.6 x 50 mm S5.

실시예 32

(+/-)-8-시클로헥실-N-(메틸술포닐)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-카르보닐)시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드. THF (20 mL) 중 인돌 카르복실산-시클로프로필에스테르 (1.3 g, 2.83 mmol) 및 CDI (0.64 g, 3.97 mmol)의 혼합물을 50℃에서 0.5시간 동안 가열하고, 냉각시키고, 메틸술폰아미드 (0.4 g, 4.2 mmol) 및 DBU (0.264 mL, 1.77 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 20시간 동안 교반하고 EtOAc로 희석하고, 냉각된 1 N HCl (2x), 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 용매를 제거하고 플래쉬 (바이오타지 40 M)에 의해 정제하여 화합물 1-2 (1.28 g, 85％)를 담황색 고체로서 얻었다. LC-MS 체류 시간: 3.51; MS m/z 537 (M+H). 술폰아미드는 상호전환 회전 이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다. 주요 이성질체:

THF (5 mL) 및 MeOH (5 mL) 중 술폰아미드-에스테르 (1.28 g, 2.4 mmol)의 용액에 NaOH (1 N, 12 mL, 12 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 냉각된 1 N HCl, 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO₄), 진공에서 용매를 제거하여 산을 베이지색 고체 (1.20 g, 96％)로서 얻었다. LC-MS 체류 시간: 3.46; MS m/z 523 (M+H). 화합물 1-2는 ¹H NMR (400 MHz, 클로로포름-D)에 의해 상호전환 회전 이성질체 (~1/1)로서 존재하는 것으로 관찰되었다.

DMC (1.5 mL) 중 산 (0.060 g, 0.11 mmol) 및 3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄 비스염산 염 (0.034g, 0.17 mmol)의 혼합물에 Et₃N (0.096 mL, 0.69 mmol) 및 HBTU (0.065 g, 0.17 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하고, MeOH로 희석하고, 용매를 제거하였다. 잔류물을 메탄올에 용해시키고, 여과하고, 분취용 HPLC에 의해 정제하여 TFA 염으로 생성물 (0.0378 g, 82％)을 얻었다. LC-MS 체류 시간: 2.96; MS m/z 631 (M+H). 생성물은 상호전환 회전 이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다.

실시예 33

(+/-)-8-시클로헥실-N-(에틸술포닐)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a- (3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-카르보닐)시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드. 상기와 유사한 방식으로 생성물을 제조하였다: 술폰아미드 (0.47 g, 44％); LC-MS 체류 시간: 3.54; MS m/z 551 (M+H); 산 (0.43 g, 94％); LC-MS 체류 시간: 3.49; MS m/z 537 (M+H). 생성물의 TFA 염 (0.0378 g, 71％)을 제조하였다. LC-MS 체류 시간: 3.028; MS m/z 645 (M+H). 생성물은 상호전환 회전 이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다. 주요 이성질체:

실시예 34

(+/-)-8-시클로헥실-N-(아제티딘-1-일술포닐)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-카르보닐)시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드. 상기와 유사한 방식으로 생성물을 제조하였다: 술폰아미드 (0.96 g, 59％); LC-MS 체류 시간: 3.58; MS m/z 578 (M+H). 화합물은 상호전환 회전 이성질체 (3/4)로서 존재하는 것으로 관찰되었다. 주요 이성질체:

산 (0.93 g, 100％); LC-MS 체류 시간: 3.51; MS m/z 564 (M+H). 화합물은 상호전환 회전 이성질체 (~3/4)로서 존재하는 것으로 관찰되었다. 주요 이성질체:

생성물의 TFA 염을 제조하였다: LC-MS 체류 시간: 3.51; MS m/z 672 (M+H). 표제 화합물은 ¹H NMR (400 MHz, 클로로포름-D)에서 상호전환 회전 이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다:

실시예 35

(+/-)-8-시클로헥실-N-(N-에틸-N-메틸아미노술포닐)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-카르보닐)시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드. 상기 기재된 것과 유사한 방법으로 산으로부터 제조하였다. 술폰아미드 (0.109 g, 67％). LC-MS 체류 시간: 3.60; MS m/z 580 (M+H). 화합물은 상호전환 회전 이성질체 (~5/4)로서 존재하는 것으로 관찰되었다. 주요 이성질체:

산 (0.108 g, 100％). LC-MS 체류 시간: 3.55; MS m/z 566 (M+H). 생성물의 TFA 염 (0.0437 g, 54％)을 제조하였다. LC-MS 체류 시간: 3.10; MS m/z 674 (M+H).

실시예 36

(+/-)-8-시클로헥실-N-(N-에틸-N-메틸아미노술포닐)-1,1a,2,12b-테트라히드로-11-메톡시-1a-(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-카르보닐)시클로프로프[d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-5-카르복스아미드. 상기 기재된 것과 유사한 방법으로 산으로부터 제조하였다. 술폰아미드 (0.127 g, 67％); LC-MS 체류 시간: 3.64; MS m/z 594 (M+H). 화합물은 상호전환 회전 이성질체로서 존재하는 것으로 관찰되었다:

산: (0.126 g, 100％). LC-MS 체류 시간: 3.57; MS m/z 580 (M+H). 생성물의 TFA 염 (0.431 g, 52％)을 제조하였다. LC-MS 체류 시간: 3.18; MS m/z 688 (M+H).

실시예 37

순수 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (0.0535 g, 0.167 mmol)를 질소하에 DCM (2 ml) 중 화합물 1-4 (0.0774 g, 0.128 mmol), 3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄, 2HCl (0.0264 g, 0.128 mmol) 및 TEA (0.071 ml, 0.512 mmol)의 교반된 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고 MeOH (0.5 ml)로 켄칭시킨 후, 건고상태로 증발시키고, 역상 HPLC에 의해 정제하여 제공하고, 생성물의 모노 TFA 염 형태 (0.0613 g, 60％)를 베이지색 고체로서 단리하였다. LC/MS: m/e 686 (MH+). LC/MS 방법: 시작 ％B: 0, 최종 ％B: 100; 구배 시간: 3분; 정지 시간: 4분; 유속: 4 ml/분; 파장: 220; 용매 A: 10％ MeOH/90％ H₂O/0.1％ 트리플루오로아세트산; 용매 B: 10％ H₂O/90％ MeOH/0.1％ 트리플루오로아세트산; 컬럼: 엑스브리지 4.6 x 50 mm S5.

실시예 38

아미드의 TFA 염 (0.0465 g, 56％)을 메틸렌 클로라이드 중 HBTU 및 TEA를 사용하여 산 (0.060 g, 0.104 mmol) 및 아민으로부터 제조하였다. LC-MS 체류 시간: 3.146분; MS m/z (M+H) 688. LC/MS 방법: 시작 ％B: 0, 최종 ％B: 100; 구배 시간: 3분; 정지 시간: 4분; 유속: 4 ml/분; 파장: 220; 용매 A: 10％ MeOH/90％ H₂O/0.1％ 트리플루오로아세트산; 용매 B: 10％ H₂O/90％ MeOH/0.1％ 트리플루오로아세트산; 컬럼: 엑스브리지 4.6 x 50 mm S5. ¹H NMR에는 회전 이성질체가 존재하였다. 주요 형태:

Claims

하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.

<화학식 I>

식 중,

R¹은 CO₂R⁵ 또는 CONR⁶R⁷이고;

R²는
이고;

R³은 수소, 할로, 알킬, 알케닐, 히드록시, 벤질옥시, 알콕시 또는 할로알콕시이고;

R⁴는 시클로알킬이고;

R⁵는 수소 또는 알킬이고;

R⁶은 수소, 알킬, 알킬SO₂, 시클로알킬SO₂, 할로알킬SO₂, (R⁹)₂NSO₂ 또는 (R¹⁰)SO₂이고;

R⁷은 수소 또는 알킬이고;

R⁸은 수소, 알킬, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 알킬카르보닐, 시클로알킬카르보닐, 할로알킬카르보닐, 알콕시카르보닐, 알킬SO₂, 시클로알킬SO₂, 할로알킬SO₂, 아미노카르보닐, (알킬아미노)카르보닐, (디알킬아미노)카르보닐, 벤질, 벤질옥시카르보닐 또는 피리디닐이고;

R⁹는 수소, 알킬 또는 시클로알킬이고;

R¹⁰은 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 호모피페리디닐 또는 호모모르폴리닐이며 0 내지 3개의 알킬 치환기로 치환된다.
제1항에 있어서,

R³은 수소, 할로, 알킬, 알케닐, 히드록시, 벤질옥시 또는 알콕시이고;

R⁸은 수소, 알킬, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 알킬카르보닐, 알콕시카르보닐, 벤질, 벤질옥시카르보닐 또는 피리디닐이고;

R⁹는 수소 또는 알킬이고;

R¹⁰은 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, N-(알킬)피페라지 닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 호모피페리디닐 또는 호모모르폴리닐인 화합물.
제1항에 있어서, R¹은 CONR⁶R⁷이고; R⁶은 알킬SO₂, 시클로알킬SO₂, 할로알킬SO₂, (R⁹)₂NSO₂ 또는 (R¹⁰)SO₂이고; R⁷은 수소인 화합물.
제1항에 있어서, R³은 수소인 화합물.
제1항에 있어서, R³은 메톡시인 화합물.
제1항에 있어서, R⁴는 시클로헥실인 화합물.
제1항에 있어서, R⁶은 알킬SO₂, (R⁹)₂NSO₂ 또는 (R¹⁰)SO₂인 화합물.
제1항에 있어서, 하기 입체화학에 따르는 화합물.
제1항에 있어서, 하기 입체화학에 따르는 화합물.
제1항에 있어서,

로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항에 있어서, 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제11항에 있어서, 염이 히드로클로라이드인 화합물.
제1항에 있어서, 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물.
제14항에 있어서, HCV에 대한 치료학적 이점을 갖는 1종 이상의 추가의 화합물을 더 포함하며, 여기서 상기 화합물은 인터페론, 시클로스포린, 인터류킨, HCV 메탈로프로테아제 억제제, HCV 세린 프로테아제 억제제, HCV 폴리머라제 억제제, HCV 헬리카제 억제제, HCV NS4B 단백질 억제제, HCV 유입 억제제, HCV 어셈블리 억제제, HCV 방출 억제제, HCV NS5A 단백질 억제제, HCV NS5B 단백질 억제제 및 HCV 레플리콘 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
제14항에 있어서, 제1항의 화합물이 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 조성물.
제15항에 있어서, 제1항의 화합물이 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 조성물.
치료적 유효량의 제1항의 화합물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, C형 간염 감염의 치료 방법.
제18항에 있어서, HCV에 대한 치료학적 이점을 갖는 1종 이상의 추가의 화합물을 투여하는 것을 더 포함하며, 여기서 상기 화합물은 인터페론, 시클로스포린, 인터류킨, HCV 메탈로프로테아제 억제제, HCV 세린 프로테아제 억제제, HCV 폴리머라제 억제제, HCV 헬리카제 억제제, HCV NS4B 단백질 억제제, HCV 유입 억제제, HCV 어셈블리 억제제, HCV 방출 억제제, HCV NS5A 단백질 억제제, HCV NS5B 단백질 억제제 및 HCV 레플리콘 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제18항에 있어서, 제1항의 화합물이 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.
제19항에 있어서, 제1항의 화합물이 하기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.