KR20100134699A - 디옥솔란 및 디옥솔라논 융합된 인돌로벤자디아제핀 ｈｃｖ ｎｓ5ｂ 억제제 - Google Patents

디옥솔란 및 디옥솔라논 융합된 인돌로벤자디아제핀 ｈｃｖ ｎｓ5ｂ 억제제 Download PDF

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존 에이. 벤더
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존 에프. 캐도우
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브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
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Abstract

본 개시내용은 화학식 I의 화합물 및 그의 염, 및 조성물 및 상기 화합물을 사용하는 방법을 제공한다. 상기 화합물은 C형 간염 바이러스 (HCV)에 대해 활성을 갖고, HCV로 감염된 것들의 치료에 유용하다.

Description

디옥솔란 및 디옥솔라논 융합된 인돌로벤자디아제핀 ＨＣＶ ＮＳ5Ｂ 억제제 {DIOXOLANE AND DIOXOLANONE FUSED INDOLOBENZADIAZEPINE HCV NS5B INHIBITORS}
<관련 출원의 교차 참조>
본원은 2008년 3월 27일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 61/039967호의 이익을 청구한다.
본 개시내용은 일반적으로 C형 간염 바이러스 (HCV)에 대해 활성을 갖고 HCV로 감염된 것들의 치료에 유용한 신규한 화학식 I의 화합물 및 그의 염에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 조성물 및 이들 화합물의 사용 방법에 관한 것이다.
C형 간염 바이러스 (HCV)는 전세계적으로 대략 1억 7천만명 (인간 면역결핍 바이러스 1형에 의한 감염자수의 약 5배)을 감염시킨 주요한 인간 병원체이다. 대다수의 상기 HCV 감염 개체에서는 간경화 및 간세포 암종을 비롯한 심각한 진행성 간 질환이 발생한다 (문헌 [Lauer, G. M.; Walker, B. D. N. Engl. J. Med. 2001, 345, 41-52]).
HCV는 양성-가닥 RNA 바이러스이다. 추정되는 아미노산 서열의 비교 및 5'-미번역 영역에서의 광범위한 유사성의 비교를 기준으로, HCV는 플라비비리다에(Flaviviridae) 과 내의 별도의 속으로서 분류되어 있다. 플라비비리다에 과의 모든 구성원은, 중단되지 않는 단일 오픈 리딩 프레임 (ORF)의 번역을 통해, 공지된 모든 바이러스-특이적 단백질을 코딩하는 양성-가닥 RNA 게놈을 함유하는 외피형 비리온을 갖는다.
HCV 게놈 전체에 걸쳐 뉴클레오티드 및 코딩된 아미노산 서열 내에서 상당한 이종성이 발견된다. 6개 이상의 주요 유전자형이 특징규명되어 있고, 50개 초과의 하위유형이 기재되어 있다. HCV의 주요 유전자형은 전세계적으로 그의 분포가 상이하며, HCV의 유전적 이종성의 임상적 의미는 발병기전 및 치료법에 대한 유전자형의 가능한 영향에 대한 수많은 연구에도 불구하고 파악되지 못한 채로 남아있다.
단일 가닥 HCV RNA 게놈은 길이가 뉴클레오티드 대략 9500개이고, 약 3000개 아미노산의 거대한 단일 다중단백질을 코딩하는 단일 오픈 리딩 프레임 (ORF)을 갖는다. 감염된 세포에서, 이러한 다중단백질은 세포성 및 바이러스성 프로테아제에 의해 여러 부위에서 절단되어 구조적 및 비-구조적 (NS) 단백질을 생성한다. HCV의 경우, 성숙한 비-구조적 단백질 (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A 및 NS5B)의 발생은 2개의 바이러스성 프로테아제에 의해 영향을 받는다. 첫 번째 것은 메탈로프로테아제인 것으로 여겨지고, 이는 NS2-NS3 접합부를 절단하며; 두 번째 것은 NS3의 N-말단 영역 내에 함유된 세린 프로테아제 (NS3 프로테아제라고도 지칭됨)로서, 이는 NS3-NS4A 절단 부위에서는 시스로, 및 나머지 NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B 부위에 대해서는 트랜스로 NS3 하류에서의 모든 후속 절단을 매개한다. NS4A 단백질은, NS3 프로테아제에 대한 보조인자로서 작용하고 NS3 및 다른 바이러스성 레플리카제 성분의 막 국지화를 보조할 수 있는 복합 기능을 수행하는 것으로 여겨진다. NS3 단백질과 NS4A의 복합체 형성은 프로세싱 사건에 필수적인 것으로 여겨지고, 모든 부위에서 단백질분해 효능을 증진시킨다. NS3 단백질은 또한 뉴클레오시드 트리포스파타제 및 RNA 헬리카제 활성을 나타낸다. NS5B (HCV 폴리머라제라고도 지칭됨)는 HCV의 복제에 관여하는 RNA-의존성 RNA 폴리머라제이다. HCV NS5B 단백질은 문헌 ["Structural Analysis of the Hepatitis C Virus RNA Polymerase in Complex with Ribonucleotides (Bressanelli; S. et al., Journal of Virology 2002, 3482-3492]; 및 [Defrancesco and Rice, Clinics in Liver Disease 2003, 7, 211-242]에 기재되어 있다.
현재, 가장 효과적인 HCV 치료법은 환자의 40％에서 지속적인 효능을 초래하는, 알파-인터페론 및 리바비린의 조합을 사용한다 (문헌 [Poynard, T. et al. Lancet 1998, 352, 1426-1432]). 최근의 임상 결과는 peg화된 알파-인터페론이 단일요법으로서의 비-변형된 알파-인터페론보다 우수함을 입증한다 (문헌 [Zeuzem, S. et al. N. Engl. J. Med. 2000, 343, 1666-1672]). 그러나, peg화된 알파-인터페론 및 리바비린의 조합을 수반하는 실험적 치료 섭생법으로도, 대다수의 환자에서는 바이러스 부하가 지속적으로 감소되지는 않는다. 따라서, HCV 감염의 치료를 위한 더 효과적인 치료법의 개발에 대한 명확하고 중요한 필요성이 존재한다.
본 발명은, 예를 들어, 본 발명의 화합물이 신규하고 C형 간염에 대해 효과적이라는 기술적 이점을 제공한다. 추가적으로, 본 발명의 화합물은, 예를 들어, 이들의 활동 메카니즘, 결합, 억제 효능, 표적 선택성, 용해도, 안정성 프로파일 또는 생체이용률 중 하나 이상과 관련된, 제약 용도를 위한 이점을 제공한다.
HCV NS5B 억제제는 미국 특허 7,399,758호에 개시되어 있다.
본 발명은 화학식 I의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염, 및 조성물 및 이들 화합물을 사용하는 치료 방법을 포괄한다.
본 발명의 한 측면은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
<화학식 I>
Figure pct00001
상기 식 중,
R1은 CO2R8 또는 CONR9R10이고;
R2는 수소, 알킬, 아미노알킬, 알킬아미노알킬 또는 디알킬아미노알킬이고;
R3은 수소, 알킬, 아미노알킬, 알킬아미노알킬 또는 디알킬아미노알킬이거나;
또는 NR2R3은 함께 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, N-(알킬)피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 호모피페리디닐 또는 호모모르폴리닐이고, 0 내지 3개의 알킬 치환기로 치환되거나;
또는 NR2R3은 함께
Figure pct00002
이고;
R4는 수소 또는 알킬이고;
R5는 수소 또는 알킬이거나;
또는 R4 및 R5는 함께 옥소이고;
R6은 수소, 할로, 알킬, 알케닐, 히드록시, 벤질옥시 또는 알콕시이고;
R7은 시클로알킬이고;
R8은 수소 또는 알킬이고;
R9는 수소, 알킬, 알킬SO2, 시클로알킬SO2, 할로알킬SO2, (R11)(R12)NSO2 또는 (R13)SO2이고;
R10은 수소 또는 알킬이고;
R11은 수소 또는 알킬이고;
R12는 수소 또는 알킬이고;
R13은 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, N-(알킬)피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 호모피페리디닐 또는 호모모르폴리닐이고;
R14는 수소, 알킬, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 알킬카르보닐, 시클로알킬카르보닐, 할로알킬카르보닐, 알콕시카르보닐, 알킬SO2, 시클로알킬SO2, 할로알킬SO2, 아미노카르보닐, (알킬아미노)카르보닐, (디알킬아미노)카르보닐, 벤질, 벤질옥시카르보닐 또는 피리디닐이다.
본 발명의 또다른 측면은 R1이 CONR9R10이고; R2가 디알킬아미노알킬이고; R3이 알킬이거나; 또는 NR2R3이 함께 2개의 알킬 치환기로 치환된 모르폴리닐이거나, 또는 NR2R3이 함께
Figure pct00003
이고; R4가 수소 또는 알킬이고; R5가 수소 또는 알킬이거나; 또는 R4 및 R5가 함께 옥소이고; R6이 알콕시이고; R7이 시클로알킬이고; R9가 (R11)(R12)NSO2이고; R11이 알킬이고; R12가 알킬이고; R14가 알킬인 화학식 I의 화합물; 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
본 발명의 또다른 측면은 R1이 CONHSO2NMe2이고; R2가 디메틸아미노에틸이고; R3이 메틸이거나; 또는 NR2R3이 함께 3,5-디메틸모르폴리닐이거나, 또는 NR2R3이 함께 3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일이고; R4가 수소 또는 메틸이고; R5가 수소 또는 메틸이거나; 또는 R4 및 R5가 함께 옥소이고; R6이 메톡시이고; R7이 시클로헥실인 화학식 I의 화합물; 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
본 발명의 또다른 측면은 R1이 CONR9R10이고; R9가 알킬SO2, 시클로알킬SO2, 할로알킬SO2, (R11)(R12)NSO2 또는 (R13)SO2이고; R10이 수소인 화학식 I의 화합물이다.
본 발명의 또다른 측면은 R6이 수소인 화학식 I의 화합물이다.
본 발명의 또다른 측면은 R6이 메톡시인 화학식 I의 화합물이다.
본 발명의 또다른 측면은 R7이 시클로헥실인 화학식 I의 화합물이다.
본 발명의 또다른 측면은 R9가 (R11)(R12)NSO2 또는 (R13)SO2인 화학식 I의 화합물이다.
화학식 I의 화합물에 대하여, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13 및 R14를 비롯한 각종 치환기의 임의의 예의 범주는 각종 치환기의 임의의 다른 예의 범주와는 독립적으로 사용될 수 있다. 이와 같이, 본 발명은 상이한 측면의 조합을 포함한다.
달리 명시하지 않는 한, 이들 용어들은 다음 의미들을 갖는다. "알킬"은 1 내지 6개의 탄소로 구성된 직쇄형 또는 분지형 알킬기를 의미한다. "알케닐"은 1개 이상의 이중 결합을 갖는 2 내지 6개의 탄소로 구성된 직쇄형 또는 분지형 알킬기를 의미한다. "알키닐"은 1개 이상의 삼중 결합을 갖는 2 내지 6개의 탄소로 구성된 직쇄형 또는 분지형 알킬기를 의미한다. "시클로알킬"은 3 내지 7개의 탄소로 구성된 모노시클릭 고리계를 의미한다. "할로알킬" 및 "할로알콕시"는 모노할로부터 퍼할로까지의 할로겐화된 이성질체 모두를 포함한다. 탄화수소 잔기를 갖는 용어 (예를 들어, 알콕시)는 탄화수소 부분에 대해 직쇄형 및 분지형 이성질체를 포함한다. 괄호 및 다중괄호 용어는 당업자들에게 결합 관계를 명료하게 하기 위한 것이다. 예를 들어, ((R)알킬)과 같은 용어는 치환기 R로 더 치환된 알킬 치환기를 의미한다.
본 발명은 본 발명의 화합물의 모든 제약상 허용되는 염 형태를 포함한다. 제약상 허용되는 염은 반대이온이 화합물의 생리학적 활성 또는 독성에 유의하게 기여하지 않고 약리학적 등가물로서 기능하는 것들이다. 이러한 염은 시판되는 시약을 사용하여 통상의 유기 기술에 따라 제조할 수 있다. 일부 음이온성 염 형태는 아세테이트, 아시스트레이트, 베실레이트, 브로마이드, 클로라이드, 시트레이트, 푸마레이트, 글루코우로네이트, 히드로브로마이드, 히드로클로라이드, 히드로요오다이드, 요오다이드, 락테이트, 말레에이트, 메실레이트, 니트레이트, 파모에이트, 포스페이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 토실레이트 및 크시노포에이트를 포함한다. 일부 양이온성 염 형태는 암모늄, 알루미늄, 벤자틴, 비스무스, 칼슘, 콜린, 디에틸아민, 디에탄올아민, 리튬, 마그네슘, 메글루민, 4-페닐시클로헥실아민, 피페라진, 칼륨, 나트륨, 트로메타민 및 아연을 포함한다.
본 발명의 일부 화합물은 비대칭 탄소 원자를 보유한다 (예를 들어, 하기의 화합물 참조). 본 발명은 거울상이성질체 및 부분입체이성질체를 비롯한 모든 입체이성질체 형태, 및 또한 입체이성질체의 혼합물, 예컨대 라세미체를 포함한다. 일부 입체이성질체는 당업계에 공지된 방법을 이용하여 제조될 수 있다. 화합물 및 관련 중간체의 입체이성질체 혼합물은 당업계에 일반적으로 공지된 방법에 따라 개별 이성질체로 분리될 수 있다.
Figure pct00004
합성 방법
화합물은 하기에 기재된 것들을 포함하고 당업자들 내에서의 변형을 포함하여 당업계에 공지된 방법으로 제조될 수 있다. 일부 시약 및 중간체는 당업계에 공지되어 있다. 다른 시약 및 중간체는 용이하게 구입가능한 물질을 사용하여 당업계에 공지된 방법으로 제조될 수 있다. 화합물의 합성을 기재하기 위해 사용되는 변수 (예를 들어 넘버링된 "R" 치환기)는 어떻게 화합물을 제조하는지 예시하기 위한 것일 뿐, 청구범위 또는 명세서의 다른 섹션에 사용되는 변수와 혼동하지 않도록 한다. 하기의 방법은 예시 목적을 위한 것이고, 본 발명의 범주를 제한하려는 것은 아니다.
반응식에 사용되는 약어들은 일반적으로 당업계에 사용되는 관행을 따른다. 본 명세서 및 실시예에 사용된 화학물질 약어는 다음과 같이 정의된다: "NaHMDS" = 나트륨 비스(트리메틸실릴)아미드; "DMF" = N,N-디메틸포름아미드; "MeOH" = 메탄올; "NBS" = N-브로모숙신이미드; "Ar" = 아릴; "TFA" = 트리플루오로아세트산; "LAH" = 수소화리튬알루미늄; "BOC", "DMSO" = 디메틸술폭시드; "h" = 시간; "rt" = 실온 또는 체류 시간 (문맥에 따라 지시될 것임); "min" = 분; "EtOAc" = 에틸 아세테이트; "THF" = 테트라히드로푸란; "EDTA" = 에틸렌디아민테트라아세트산; "Et2O" = 디에틸 에테르; "DMAP" = 4-디메틸아미노피리딘; "DCE" = 1,2-디클로로에탄; "ACN" = 아세토니트릴; "DME" = 1,2-디메톡시에탄; "HOBt" = 1-히드록시벤조트리아졸 수화물; "DIEA" = 디이소프로필에틸아민, "Nf" = CF3(CF2)3SO2-; 및 "TMOF" = 트리메틸오르토포르메이트.
일부 화합물은 반응식 1에 설명된 방법으로 합성될 수 있다. 친핵성 수산화물을 사용한 공지된 5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀 에스테르의 가수분해는 상응하는 카르복실산을 생성할 수 있고, 이어서 이것을 다양한 1급 또는 2급 아민과 커플링시켜, 공지된 많은 표준 아미드화 조건 중 하나를 이용하여 상응하는 아미드를 형성할 수 있다. 생성된 불포화 아미드를, 전형적으로 촉매적 사산화오스뮴 또는 루테늄(III) 클로라이드를 화학량적 정량의 보조-산화제와 함께 사용하는 디히드록실화 조건에 적용하여 시스-디올 화합물을 형성할 수 있다. 이어서, 시스-디올을 고리화시켜 반응물로서의 케톤, 알데히드 또는 에놀 에테르를 사용하는 산 조건하에 1,3-디옥솔란 화합물을 형성할 수 있다. 별법으로, 1,3-디옥솔란 (또는 디옥솔라논) 화합물은 친핵성 공격을 받기 쉬운 동일한 탄소 상에 2개의 이탈기를 갖는 반응물을 사용하여 염기성 조건 하에 형성될 수 있다.
<반응식 1>
Figure pct00005
별법으로, 단계의 순서는 반응식 2 및 3에 나타낸 바와 같이 상기와 동일한 분자에 도달하도록 변경될 수 있다. 반응식 2는 공지된 5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀 에스테르로부터 출발하여, 카르복실산, 아미드 형성, 디히드록실화 및 디옥솔란 (디옥솔라논) 형성이 아실 술폰아미드/술파미드 잔기의 설치에 앞설 수 있다는 것을 입증한다. 아실 술폰아미드/술파미드는 에스테르를 가수분해시킨 다음, 적절한 커플링 시약, 예컨대 CDI 또는 EDC 및 술폰아미드/술파미드를 사용하여 커플링시킴으로써 설치시킬 수 있다. 반응식 3에 나타낸 경로는 TFA를 사용하는 5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀 디에스테르의 선택적인 가수분해에서 출발하고, 이것은 아릴 카르복실산을 생성할 수 있다. 상기 산은 술폰아미드/술파미드에 커플링될 수 있고, 생성된 아실 술폰아미드/술파미드를 상기 기재된 바와 같이 디히드록실화시키고 고리화시켜 디옥솔란 (또는 디옥솔라논) 화합물을 형성할 수 있다. 에스테르의 가수분해는 카르복실산을 형성할 수 있고, 이것을 최종 단계로서 아미드 커플링시킬 수 있다.
<반응식 2>
Figure pct00006
<반응식 3>
Figure pct00007
생물학적 방법
본 발명의 화합물은 하기의 HCV RdRp 검정에서 측정된 바와 같이 HCV NS5B에 대한 활성이 입증되었다.
HCV NS5B RdRp 클로닝 , 발현 및 정제.
HCV (유전자형 1b)의 NS5B 단백질을 코딩하는 cDNA를 pET21a 발현 벡터 내로 클로닝하였다. 상기 단백질은 18개 아미노산의 C-말단 절단형으로 발현되어 가용성이 증대되었다. 이. 콜라이(E. coli) 컴피턴트(competent) 세포주 BL21(DE3)을 단백질 발현에 사용하였다. 배양물이 600 nm에서 광학 밀도 2.0에 도달할 때까지, 배양물을 37℃에서 약 4시간 동안 성장시켰다. 배양물을 20℃로 냉각시키고, 1 mM IPTG로 유도시켰다. 새로운 앰피실린을 최종 농도 50 ㎍/ml로 첨가하고, 세포를 밤새 20℃에서 성장시켰다.
세포 펠렛 (3 L)을 정제를 위해 용균시켜 15 내지 24 mg의 정제된 NS5B를 수득하였다. 용균 완충액은 20 mM 트리스(Tris)-HCl (pH 7.4), 500 mM NaCl, 0.5％ 트리톤 X-100, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 20％ 글리세롤, 0.5 mg/ml 리소자임, 10 mM MgCl2, 15 ug/ml의 데옥시리보뉴클레아제 I 및 완전 TM 프로테아제 억제제 정제 (로슈(Roche))로 구성되어 있다. 용균 완충액을 첨가한 후, 냉동된 세포 펠렛을 조직 균질화기를 사용하여 재현탁시켰다. 샘플의 점성을 감소시키기 위해, 브랜슨(Branson) 소니케이터에 부착된 마이크로팁을 사용하여 용균물 분취액을 얼음 상에서 초음파처리하였다. 초음파처리된 용균물을 100,000×g에서 1시간 동안 4℃에서 원심분리하고, 0.2 ㎛ 필터 유닛 (코닝(Corning))을 통해 여과하였다.
헤파린(Heparin) 세파로스 CL-6B, 폴리U 세파로스 4B 및 하이트랩(Hitrap) SP 세파로스 (파마시아(Pharmacia))의 3개 연속 크로마토그래피 단계를 사용하여 단백질을 정제하였다. 크로마토그래피 완충액은 상기 용균 완충액과 동일하되, 리소자임, 데옥시리보뉴클레아제 I, MgCl2 또는 프로테아제 억제제를 함유하지 않았고, 단백질을 컬럼 상에 충전시키기 위한 요건에 따라 완충액의 NaCl 농도를 조정하였다. 컬럼 유형에 따라 길이가 5 내지 50 컬럼 부피로 다양한 각각의 컬럼을 NaCl 구배로 용리하였다. 최종 크로마토그래피 단계 후, 효소의 생성 순도는 SDS-PAGE 분석에 기초하여 >90％였다. 효소를 분취하여 -80℃에서 보관하였다.
표준 HCV NS5B RdRp 효소 검정.
HCV RdRp 유전자형 1b 검정은 96웰 플레이트 (코스타(Costar) 3912)에서 최종 부피 60 ㎕로 실행하였다. 검정 완충액은 20 mM 헤페스(Hepes) (pH 7.5), 2.5 mM KCl, 2.5 mM MgCl2, 1 mM DTT, 1.6 U RNAse 억제제 (프로메가(Promega) N2515), 0.1 mg/ml의 BSA (프로메가 R3961) 및 2％ 글리세롤로 구성되어 있다. 모든 화합물을 DMSO 중에 연속 희석하고 (3배), 물 중에 추가로 희석하여, 검정시에 DMSO의 최종 농도가 2％가 되도록 하였다. HCV RdRp 유전자형 1b 효소를 최종 농도 28 nM로 사용하였다. 폴리A 주형을 6 nM로 사용하였고, 바이오티닐화된 올리고-dT12 프라이머는 최종 농도 180 nM로 사용하였다. 주형은 상업적으로 구입하였다 (아머샴(Amersham) 27-4110). 바이오티닐화된 프라이머는 시그마 제노시스(Sigma Genosys)에 의해 제조되었다. 3H-UTP는 0.6 μCi (0.29 μM의 총 UTP)로 사용하였다. 효소를 첨가하여 반응을 개시하고, 30℃에서 60분 동안 인큐베이션하고, SPA 비드 (4 ㎍/㎕, 아머샴 RPNQ 0007)를 함유한 50 mM EDTA 25 ㎕를 첨가하여 반응을 중단시켰다. 실온에서 1시간 초과로 인큐베이션한 후, 플레이트를 팩커드 탑 카운트(Packard Top Count) NXT 상에서 판독하였다.
변형된 HCV NS5B RdRp 효소 검정.
변형된 효소 검정은 하기를 제외하고는 본질적으로 표준 효소 검정에 대해 기재된 바와 같이 수행하였다: 프라이머와 비드를 검정 완충액 중에 혼합하고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션함으로써, 바이오티닐화된 올리고 dT12 프라이머를 스트렙타비딘-코팅된 SPA 비드 상에 미리 포착시켰다. 원심분리한 후에 결합되지 않은 프라이머를 제거하였다. 프라이머-결합된 비드를 20 mM 헤페스 완충액 (pH 7.5) 중에 재현탁시키고, 최종 농도 20 nM의 프라이머 및 0.67 ㎍/㎕의 비드를 검정에서 사용하였다. 검정 시 첨가 순서는 다음과 같다: 효소 (14 nM)를 희석된 화합물에 첨가한 후에, 주형 (0.2 nM), 3H-UTP (0.6 μCi, 0.29 μM) 및 프라이머-결합된 비드의 혼합물을 첨가하여 반응을 개시하였다 (제시된 농도는 최종 농도임). 반응이 30℃에서 4시간 동안 진행되도록 하였다.
화합물에 대한 IC50 값은 7개의 상이한 [I]를 사용하여 측정하였다. IC50 값은 식
Figure pct00008
을 사용하여 억제율로부터 계산하였다.
FRET 검정 준비.
HCV FRET 스크리닝 검정을 수행하기 위해 96-웰 세포 배양 플레이트를 사용하였다. FRET 펩티드 (아나스펙, 인크.(Anaspec, Inc.)) (문헌 [Taliani et al., Anal. Biochem. 1996, 240, 60-67])는, 펩티드의 한쪽 말단 근처에는 형광 공여자인 EDANS를 함유하고, 다른쪽 말단 근처에는 수용자인 DABCYL을 함유한다. 펩티드의 형광은 공여자와 수용자 사이의 분자간 공명 에너지 전이 (RET)에 의해 소멸되지만, NS3 프로테아제가 펩티드를 절단하면, 그 생성물이 RET 소멸로부터 방출되어, 공여자의 형광이 분명해진다. 검정 시약은 하기와 같이 제조하였다: 프로메가로부터의 5X 세포 루시페라제 세포 배양 용균 시약 (#E153A)을 dH2O로 1X 희석하고, NaCl을 최종 농도 150 mM로 첨가하고, FRET 펩티드를 2 mM 원액으로부터 20 uM의 최종 농도로 희석하였다.
플레이트를 준비하기 위해, 레닐라(Renilla) 루시페라제 리포터 유전자가 존재하거나 존재하지 않는 HCV 레플리콘(replicon) 세포를 트립신처리하여 96-웰 플레이트의 각각의 웰에 넣고, 적정된 시험 화합물을 컬럼 3에서 12까지 첨가하고; 컬럼 1 및 2에는 대조군 화합물 (HCV 프로테아제 억제제)이 함유되었고, 바닥 열에는 화합물 없이 세포가 함유되었다. 이어서 플레이트를 37℃의 CO2 인큐베이터에 넣었다.
검정.
상기 (FRET 검정 준비)에 기재된 시험 화합물의 첨가 이후에, 다양한 시점에서 플레이트를 제거하고, 알라마 블루(Alamar blue) 용액 (트렉 디아그노스틱스(Trek Diagnostics), #00-100)을 세포 독성의 척도로서 웰 마다 첨가하였다. 사이토플라워(Cytoflour) 4000 기기 (피이 바이오시스템즈(PE Biosystems))에서 판독한 후, 플레이트를 PBS로 헹군 다음, 상기 (FRET 검정 준비)에 기재된 FRET 펩티드 검정 시약 30 ul를 웰마다 첨가하여 FRET 검정에 사용하였다. 그 후, 플레이트를 340 여기/490 방출, 20회 주기를 위한 자동 모드, 및 동적 모드에서의 플레이트 판독으로 설정된 사이토플라워 4000 기기에 넣었다. 통상적으로, 판독 후 종말점 분석을 사용하였을 때 신호 대 노이즈는 3배 이상이었다. 별법으로, 알라마 블루 판독 후, 플레이트를 PBS로 헹구고, 페놀 레드를 함유하지 않은 DMEM (고 글루코스) 50 ul를 첨가하고, 이 후 상기 플레이트를 프로메가 듀얼-글로 루시페라제 검정 시스템(Promega Dual-Glo Luciferase Assay System)을 이용하는 루시페라제 검정에 사용하였다.
화합물 분석은 상대적인 HCV 레플리콘 억제 및 상대적인 세포독성 값의 정량화에 의해 측정되었다. 세포독성 값을 계산하기 위해, 대조군 웰로부터의 평균 알라마 블루 형광 신호를 100％ 무독성으로 설정하였다. 그 후, 화합물 시험 웰 각각의 개별 신호를 평균 대조군 신호로 나누고 100％를 곱하여 세포독성률(％)을 측정하였다. HCV 레플리콘 억제값을 계산하기 위해서, 검정 기간 말기에 최고량의 HCV 프로테아제 억제제를 함유한 2개의 웰로부터 평균 백그라운드 값을 얻었다. 이들 수치는 나이브(naive) Huh-7 세포로부터 얻은 것과 유사하였다.
이어서, 백그라운드 수치를 대조군 웰로부터 얻은 평균 신호에서 빼고, 이 수치를 100％ 활성으로 사용하였다. 이어서, 화합물 시험 웰 각각의 개별 신호에서 백그라운드를 뺀 후에 평균 대조군 값으로 나누고 100％를 곱하여 활성률(％)을 측정하였다. 프로테아제 억제제 적정을 위한 EC50 값은 FRET 또는 루시페라제 활성에서 50％ 감소를 유발하는 농도로서 계산하였다. 화합물 플레이트에 대해 생성된 2개의 수치, 즉 세포독성률(％) 및 활성률(％)을 사용하여 추가 분석에서 해당 화합물을 판단하였다.
화합물에 대한 대표적 데이타를 하기 표 1에 기록하였다.
Figure pct00009
Figure pct00010
A>0.5 μM; B 0.02 μM 내지 0.5 μM; C<0.02 μM (그러나 정확한 값은 측정되지 않았음); IC50 값은 예비인큐베이션 프로토콜을 이용하여 측정하였다. EC50 값은 FRET 검정을 이용하여 측정하였다.
제약 조성물 및 치료 방법
본 발명의 화합물은 HCV NS5B에 대한 활성이 입증되고, HCV 및 HCV 감염을 치료하는데 유용할 수 있다. 따라서, 본 발명의 또다른 측면은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물이다.
본 발명의 또다른 측면은 C형 간염의 치료를 위한 의약 제조에 있어서의 화학식 I의 화합물의 용도이다.
본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 화합물을 추가로 포함하는 조성물이다.
본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 화합물이 인터페론인 조성물이다. 본 발명의 또다른 측면에서는 인터페론이 인터페론 알파 2B, peg화된 인터페론 알파, 컨센서스 인터페론, 인터페론 알파 2A 및 림프아형 인터페론 타우로부터 선택된다.
본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 화합물이 시클로스포린인 조성물이다. 본 발명의 또다른 측면에서는 시클로스포린이 시클로스포린 A이다.
본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 화합물이 인터류킨 2, 인터류킨 6, 인터류킨 12, 1형 헬퍼 T 세포 반응의 발생을 증대시키는 화합물, 간섭 RNA, 안티센스 RNA, 이미퀴모드, 리바비린, 이노신 5'-모노포스페이트 데히드로게나제 억제제, 아만타딘 및 리만타딘으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 조성물이다.
본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 화합물이 HCV 메탈로프로테아제, HCV 세린 프로테아제, HCV 폴리머라제, HCV 헬리카제, HCV NS4B 단백질, HCV 침투, HCV 어셈블리, HCV 방출, HCV NS5A 단백질, IMPDH, 및 HCV 감염의 치료를 위한 뉴클레오시드 유사체로부터 선택된 표적의 기능을 억제하는데 효과적인 것인 조성물이다.
본 발명의 또다른 측면은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 제약상 허용되는 담체, 및 인터페론 및 리바비린을 포함하는 조성물이다.
본 발명의 또다른 측면은 HCV 레플리콘을 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함하는, HCV 레플리콘의 기능을 억제하는 방법이다.
본 발명의 또다른 측면은 HCV NS5B 단백질을 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함하는, HCV NS5B 단백질의 기능을 억제하는 방법이다.
본 발명의 또다른 측면은 치료 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서 HCV 감염을 치료하는 방법이다. 또다른 실시양태에서 상기 화합물은 HCV 레플리콘의 기능을 억제하는데 효과적이다. 또다른 실시양태에서 상기 화합물은 HCV NS5B 단백질의 기능을 억제하는데 효과적이다.
본 발명의 또다른 측면은 치료 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 항-HCV 활성을 갖는 또다른 화합물과 함께 (이들 이전에, 이후에 또는 동시에) 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서 HCV 감염을 치료하는 방법이다.
본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 다른 화합물이 인터페론인 방법이다.
본 발명의 또다른 측면은 인터페론이 인터페론 알파 2B, peg화된 인터페론 알파, 컨센서스 인터페론, 인터페론 알파 2A 및 림프아형 인터페론 타우로부터 선택된 것인 방법이다.
본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 다른 화합물이 시클로스포린인 방법이다.
본 발명의 또다른 측면은 시클로스포린이 시클로스포린 A인 방법이다.
본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 다른 화합물이 인터류킨 2, 인터류킨 6, 인터류킨 12, 1형 헬퍼 T 세포 반응의 발생을 증대시키는 화합물, 간섭 RNA, 안티센스 RNA, 이미퀴모드, 리바비린, 이노신 5'-모노포스페이트 데히드로게나제 억제제, 아만타딘 및 리만타딘으로부터 선택된 것인 방법이다.
본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 다른 화합물이 HCV 메탈로프로테아제, HCV 세린 프로테아제, HCV 폴리머라제, HCV 헬리카제, HCV NS4B 단백질, HCV 침투, HCV 어셈블리, HCV 방출, HCV NS5A 단백질, IMPDH, 및 HCV 감염의 치료를 위한 뉴클레오시드 유사체로 이루어진 군으로부터 선택된 표적의 기능을 억제하는데 효과적인 방법이다.
본 발명의 또다른 측면은 항-HCV 활성을 갖는 다른 화합물이 HCV NS5B 단백질 이외의 다른 HCV 생명 주기에서의 표적의 기능을 억제하는데 효과적인 것인 방법이다.
"치료 유효량"은 간염 및 HCV 감염 분야에서 진료의에 의해 이해된 바와 같이 의미있는 환자 이점을 제공하는데 요구되는 작용제의 양을 의미한다.
"환자"는 HCV 바이러스로 감염되고 간염 및 HCV 감염 분야에서 진료의에 의해 이해된 바와 같은 치료법에 적합한 사람을 의미한다.
"치료", "치료법", "섭생법", "HCV 감염" 및 관련된 용어는 간염 및 HCV 감염 분야에서 진료의에 의해 이해된 바와 같이 사용된다.
본 발명의 화합물은 통상적으로, 치료 유효량의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체로 구성되고 통상의 부형제를 함유할 수 있는 제약 조성물로서 제공된다. 치료 유효량은 의미있는 환자 이점을 제공하는데 필요한 양이다. 제약상 허용되는 담체는 허용가능한 안전성 프로파일을 갖는 통상적으로 공지된 담체이다. 조성물은 캡슐제, 정제, 로젠지제 및 산제 뿐만 아니라 액상 현탁액제, 시럽제, 엘릭시르제 및 용액제를 비롯한 모든 통상의 고형 및 액상 형태를 포함한다. 조성물은 통상의 제제화 기술을 이용하여 제조되고, 통상의 부형제 (예컨대 결합제 및 습윤제) 및 비히클 (예컨대 물 및 알콜)이 조성물에 일반적으로 사용된다.
고형 조성물은 보통 투여 단위로 제제화되고, 투여 당 약 1 내지 1000 mg의 활성 성분을 제공하는 조성물이 바람직하다. 투여량의 일부 예는 1 mg, 10 mg, 100 mg, 250 mg, 500 mg 및 1000 mg이다. 일반적으로, 다른 작용제는 임상적으로 사용되는 부류의 작용제와 유사한 단위 범위로 제공될 것이다. 통상적으로 이것은 0.25 내지 1000 mg/단위이다.
액상 조성물은 보통 단위 투여량 범위로 존재한다. 일반적으로, 액상 조성물의 단위 투여량 범위는 1 내지 100 mg/mL일 것이다. 투여량의 일부 예는 1 mg/mL, 10 mg/mL, 25 mg/mL, 50 mg/mL 및 100 mg/mL이다. 일반적으로, 다른 작용제는 임상적으로 사용되는 부류의 작용제와 유사한 단위 범위로 제공될 것이다. 통상적으로 이것은 1 내지 100 mg/mL이다.
본 발명은 모든 통상적인 투여 방식을 포함하며, 경구 및 비경구 방법이 바람직하다. 일반적으로, 투여 섭생은 임상적으로 사용되는 다른 작용제와 유사할 것이다. 통상적으로, 일일 용량은 매일 체중 1 kg 당 1 내지 100 mg일 것이다. 통상적으로, 경구로 투여되는 경우에는 더 많은 양의 화합물이 필요하며, 비경구로 투여되는 경우에는 더 적은 양의 화합물이 필요하다. 그러나, 구체적인 투여 섭생은 안전한 의료적 판단에 따라 주치의가 결정할 것이다.
본 발명은 또한, 화합물이 조합 요법으로 제공되는 방법을 포함한다. 즉, 화합물은 간염 및 HCV 감염의 치료에 유용한 다른 작용제와 함께, 그러나 서로 개별적으로 사용될 수 있다. 이러한 조합 방법의 경우, 화합물은 통상적으로 다른 작용제와 함께 매일 체중 1 kg 당 1 내지 100 mg의 일일 투여량으로 제공될 것이다. 다른 작용제는 통상적으로 치료적으로 사용되는 양으로 제공될 것이다. 그러나, 구체적인 투여 섭생은 안전한 의료적 판단에 따라 주치의가 결정할 것이다.
조성물 및 방법에 적합한 화합물의 일부 예가 하기 표 2에 열거된다.
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
LCMS 데이타:
정지 시간: 구배 시간 + 1 분
출발 농도: 달리 언급되지 않는 한 0％ B
용리액 A: 5％ CH3CN/95％ H2O + 10 mM NH4OAc (컬럼 A, D , E 및 F에 대해)
10％ MeOH/90％ H2O + 0.1％ TFA (컬럼 B 및 C에 대해)
용리액 B: 95％ CH3CN/5％ H2O + 10 mM NH4OAc (컬럼 A, D , E 및 F에 대해)
90％ MeOH/10％ H2O + 0.1％ TFA (컬럼 B 및 C에 대해)
컬럼 A: 페노메넥스(Phenomenex) 10μ 4.6×50 mm C18
컬럼 B: 페노메넥스 C18 10μ 3.0×50 mm
컬럼 C: 페노메넥스 4.6×50 mm C18 10μ
컬럼 D: 페노메넥스 리나 C18 5μ 3.0×50 mm
컬럼 E: 페노메넥스 5μ 4.6×50 mm C18
컬럼 F: 페노메넥스 10μ C18 4.6×30 mm
정제용 HPLC 데이타:
구배: 달리 언급되지 않는 한 20 분에 걸쳐 선형
출발 농도: 달리 언급되지 않는 한 15％ B
종결 농도: 100％ B
용리액 A: 5％ CH3CN/95％ H2O + 10 mM NH4OAc
용리액 B: 95％ CH3CN/5％ H2O + 10 mM NH4OAc
컬럼: 선파이어(Sunfire) 정제용 C18 OBD 5μ 30×100 mm
하기의 출발 물질의 제조는 US 2007060565에서 찾을 수 있다.
1) 10-(1,1-디메틸에틸)-6-메틸-13-시클로헥실-3-(메틸옥시)-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6,10-디카르복실레이트
2) 7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6-카르복실산, 13-시클로헥실-10-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-3-메톡시-, 메틸 에스테르
하기의 출발 물질의 제조는 WO 2007033175에서 찾을 수 있다.
3) 7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6-카르복실산, 13-시클로헥실-10-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-3-메톡시-, 카르복실산
하기의 출발 물질의 제조는 US 2006166964에서 찾을 수 있다.
4) 13-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-6-(((2S,6R)-2,6-디메틸-4-모르폴리닐)카르보닐)-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-10-카르복스아미드
Figure pct00015
중간체 1
10-(1,1-디메틸에틸) 6-메틸 rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-5,6-디히드록시-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6,10-디카르복실레이트.
THF (5 mL) 중 10-(1,1-디메틸에틸)-6-메틸-13-시클로헥실-3-(메틸옥시)-7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6,10-디카르복실레이트 (400 mg, 0.80 mmol) 및 4-메틸모르폴린 N-옥시드 (234 mg, 2.0 mmol)의 슬러리에 H2O (0.20 mL) 및 OsO4 (t-BuOH 중 OsO4의 2.5％ w/w 용액 0.20 mL)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 포화 Na2S2O3 (수성) (약 5 mL)으로 켄칭하고, 1 시간 교반하였다. 층을 분리하고, 수성층을 THF (2×5 mL)로 추출하였다. 합한 유기물을 농축시키고, 잔류물을 DMF (2 mL) 중에 용해시키고, H2O (~4 mL)로 처리하였다. 고체를 여과에 의해 수집하여, 10-(1,1-디메틸에틸) 6-메틸 rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-5,6-디히드록시-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6,10-디카르복실레이트 (413 mg, 0.77 mmol, 96％)를 황색 고체로서 수득하고, 이것을 추가 정제없이 사용하였다.
Figure pct00016
Figure pct00017
중간체 2
7-(1,1-디메틸에틸) 3a-메틸 rac-(3aR,14bS)-10-시클로헥실-2,2-디메틸-13-(메틸옥시)-4H-[1,3]디옥솔로[4,5-d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-3a,7(14bH)-디카르복실레이트.
THF (1 mL) 중 10-(1,1-디메틸에틸) 6-메틸 rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-5,6-디히드록시-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6,10-디카르복실레이트 (30 mg, 0.056 mmol)의 용액에 2-메톡시프로펜 (0.2 mL) 및 이어서 TsOH 일수화물 (5 mg)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반한 다음, 농축 건조시켰다. 잔류물을 DMSO/MeOH 중에 용해시키고, 정제용 HPLC로 정제하여, 7-(1,1-디메틸에틸) 3a-메틸 rac-(3aR,14bS)-10-시클로헥실-2,2-디메틸-13-(메틸옥시)-4H-[1,3]디옥솔로[4,5-d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-3a,7(14bH)-디카르복실레이트 (17 mg, 0.030 mmol, 53％)를 황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00018
Figure pct00019
중간체 3
메틸 rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-10-((((디메틸아미노)술포닐)아미노)카르보닐)-5,6-디히드록시-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6-카르복실레이트.
THF (1 mL) 중 7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6-카르복실산, 13-시클로헥실-10-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-3-메톡시-, 메틸 에스테르 (70 mg, 0.13 mmol) 및 4-메틸모르폴린 N-옥시드 (37 mg, 0.32 mmol)의 용액에 H2O (0.10 mL) 및 OsO4 (t-BuOH 중 OsO4의 2.5％ w/w 용액 0.10 mL)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 포화 Na2S2O3 (수성) (~1.5 mL)으로 켄칭하고, 1 시간 교반하였다. 층을 분리하고, 수성층을 THF (2×2 mL)로 추출하였다. 합한 유기물을 농축시키고, 잔류물을 DMF/MeOH (1:2, 3 mL) 중에 용해시키고, 여과하고, 정제용 HPLC로 정제하여, 메틸 rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-10-((((디메틸아미노)술포닐)아미노)카르보닐)-5,6-디히드록시-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6-카르복실레이트 (62 mg, 0.11 mmol, 83％)를 연한 황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00020
Figure pct00021
중간체 4
rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-10-((((디메틸아미노)술포닐)아미노)카르보닐)-5,6-디히드록시-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6-카르복실산.
MeOH/THF (1:1, 2 mL) 중 메틸 rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-10-((((디메틸아미노)술포닐)아미노)카르보닐)-5,6-디히드록시-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6-카르복실레이트 (57 mg, 0.10 mmol)의 용액에 수성 1 M NaOH (0.5 mL)를 첨가하였다. 반응물을 밀봉하고, 80℃에서 20 분 동안 마이크로파 조사로 가열하였다. 반응물을 수성 1 N HCl (0.5 mL)로 켄칭하고, H2O로 희석하고, 농축시켜 유기 용매를 제거하였다. 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하고 진공하에 건조시켜, rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-10-((((디메틸아미노)술포닐)아미노)카르보닐)-5,6-디히드록시-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6-카르복실산 (42 mg, 0.074 mmol, 73％)을 황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00022
Figure pct00023
중간체 5
rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-6-(((2S,6R)-2,6-디메틸-4-모르폴리닐)카르보닐)-5,6-디히드록시-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-10-카르복스아미드.
THF/H2O (10:1, 5.5 mL) 중 13-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-6-(((2S,6R)-2,6-디메틸-4-모르폴리닐)카르보닐)-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-10-카르복스아미드 (500 mg, 0.79 mmol) 및 4-메틸모르폴린 N-옥시드 (231 mg, 1.97 mmol)의 용액에 OsO4 (t-BuOH 중 OsO4의 2.5％ w/w 용액 0.50 mL, 0.04 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 18 시간 동안 교반하고, 포화 Na2S2O3 (수성) (~10 mL)으로 켄칭하고, 6 시간 교반하였다. 층을 분리하고, 수성층을 THF (2×20 mL)로 추출하였다. 합한 유기물을 포화 Na2S2O3 (수성) (~30 mL) 및 염수 (30 mL)로 세척하고 농축시켰다. 잔류물을 DMF/MeOH (1:2, 15 mL) 중에 용해시키고, 여과하고, 정제용 HPLC로 정제하여, rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-6-(((2S,6R)-2,6-디메틸-4-모르폴리닐)카르보닐)-5,6-디히드록시-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-10-카르복스아미드 (230 mg, 0.34 mmol, 44％)를 오렌지색-황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00024
Figure pct00025
중간체 6
13-시클로헥실-N6-(2-(디메틸아미노)에틸)-N10-((디메틸아미노)술포닐)-N6-메틸-3-(메틸옥시)-7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6,10-디카르복스아미드.
7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6-카르복실산, 13-시클로헥실-10-[[[(디메틸아미노)술포닐]아미노]카르보닐]-3-메톡시-, 메틸 에스테르 (700 mg, 1.27 mmol)를 MeOH//THF (1:1, 14 mL) 중에 용해시키고, 1 M 수성 NaOH (3 mL)로 처리하였다. 반응 혼합물을 교반하고, 80℃에서 마이크로파 조사로 15 분 동안 가열하고, 실온으로 냉각시켰다. 투명 용액을 1 M 수성 HCl (3 mL)로 중성화시키고 농축시켜, 유기 용매를 제거하였다. 잔류물을 H2O (10 mL)와 함께 1 시간 동안 교반하고, 생성된 고체를 여과에 의해 수집하고, H2O로 세척하고, 진공하에 건조시켰다. DMF (5 mL) 중 이들 고체, N1,N1,N2-트리메틸에탄-1,2-디아민 (191 mg, 1.88 mmol) 및 트리에틸아민 (0.700 mL)의 용액에 HATU (620 mg, 1.63 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, H2O (25 mL) 및 1 M HCl (수성) (5 mL)로 희석시키고, 20 분 교반하였다. 침전물을 여과에 의해 수집하고, H2O로 세정하고 건조시켜, 불순물이 있는 생성물 (960 mg)을 황색 분말로서 수득하였다. 불순물이 있는 생성물의 조 샘플 (100 mg)을 MeOH/DMF (3:1, 4 mL) 중에 용해시키고, 여과하고, 정제용 HPLC (H2O/CH3CN + 10 mM NH4OAc 완충액)로 정제하여, 13-시클로헥실-N6-(2-(디메틸아미노)에틸)-N10-((디메틸아미노)술포닐)-3-메톡시-N6-메틸-7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6,10-디카르복스아미드 (78 mg, 0.13 mmol, 95％)를 황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00026
Figure pct00027
중간체 7
디올, 술파미드, 아미드 중간체
rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-N6-(2-(디메틸아미노)에틸)-N10-((디메틸아미노)술포닐)-5,6-디히드록시-N6-메틸-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6,10-디카르복스아미드.
THF/H2O (10:1, 3.3 mL) 중 13-시클로헥실-N6-(2-(디메틸아미노)에틸)-N10-((디메틸아미노)술포닐)-3-메톡시-N6-메틸-7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6,10-디카르복스아미드 (200 mg, 0.32 mmol) 및 4-메틸모르폴린 N-옥시드 (94 mg, 0.81 mmol)의 용액에 OsO4 (t-BuOH 중 OsO4의 2.5％ w/w 용액 0.15 mL, 0.014 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 추가의 OsO4 (t-BuOH 중 OsO4의 2.5％ w/w 용액 0.15 mL, 0.014 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 Na2S2O3 (수성) (~5 mL)으로 켄칭하고, 1 시간 교반하였다. 층을 분리하고, 수성층을 THF (2×4 mL)로 추출하였다. 합한 유기물을 농축시키고, 물로 슬러리화시키고, 고체를 여과에 의해 수집하여, rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-N6-(2-(디메틸아미노)에틸)-N10-((디메틸아미노)술포닐)-5,6-디히드록시-N6-메틸-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6,10-디카르복스아미드 (60 mg, 0.091 mmol, 28％)를 황색 고체로서 수득하고, 이것을 추가 정제없이 사용하였다. LCMS: m/e 654 (M-H)-, 체류 시간 2.09 분, 컬럼 A, 4 분 구배.
Figure pct00028
중간체 8
7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-10-카르복스아미드, 13-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-3-메톡시-6-[(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐].
DMF (1.0 mL) 중 13-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-3-메톡시-7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-10-카르복스아미드-6-카르복실산 (51 mg, 0.095 mmol), 3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥탄 디히드로클로라이드 (34 mg, 0.17 mmol) 및 트리에틸아민 (0.06 mL)의 교반 용액에 HATU (50 mg, 0.13 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, MeOH (~1 mL)로 희석하고, 여과하고, 정제용 HPLC (CH3CN/H2O + 10 mM NH4OAc)로 정제하여, 7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-10-카르복스아미드, 13-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-3-메톡시-6-[(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐] (52 mg, 0.08 mmol, 85％)을 황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00029
Figure pct00030
중간체 9
rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-6-((3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐)-5,6-디히드록시-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-10-카르복스아미드.
THF/H2O (10:1, 4.4 mL) 중 7H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-10-카르복스아미드, 13-시클로헥실-N-[(디메틸아미노)술포닐]-3-메톡시-6-[(3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐] (303 mg, 0.47 mmol) 및 4-메틸모르폴린 N-옥시드 (138 mg, 1.2 mmol)의 용액에 OsO4 (t-BuOH 중 OsO4의 2.5％ w/w 용액 0.45 mL, 0.04 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2 일 동안 교반하고, 1 M Na2S2O3 (수성) (5 mL)로 켄칭하고, 2 시간 교반하였다. 용액을 EtOAc (10 mL 및 이어서 5 mL)로 추출하였다. 합한 유기물을 1 M Na2S2O3 (수성)로 세척하고, 농축시키고, 정제용 HPLC (CH3CN/H2O + 10 mM NH4OAc)로 정제하여, rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-6-((3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐)-5,6-디히드록시-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-10-카르복스아미드 (57 mg, 0.08 mmol, 18％)를 황색 고체로서 수득하고, 이것을 추가 정제없이 사용하였다. LCMS: m/e 680 (M+H)+, 체류 시간 1.66 분, 컬럼 C, 2 분 구배.
Figure pct00031
실시예 1
rac-(3aR,14bS)-10-시클로헥실-N3a-(2-(디메틸아미노)에틸)-N7-((디메틸아미노)술포닐)-N3a,2,2-트리메틸-13-(메틸옥시)-4H-[1,3]디옥솔로[4,5-d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-3a,7(14bH)-디카르복스아미드.
2-메톡시프로펜 (0.1 mL, 1.0 mmol)을 DCE (1 mL) 중 rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-N6-(2-(디메틸아미노)에틸)-N10-((디메틸아미노)술포닐)-5,6-디히드록시-N6-메틸-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-6,10-디카르복스아미드 (30 mg, 0.045 mmol)의 슬러리에 첨가하였다. p-TsOH 일수화물 (1 mg, 0.005 mmol)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 메틸렌 클로라이드 (1 mL) 및 추가의 p-TsOH 일수화물 (10 mg, 0.05 mmol)을 첨가하고, 반응물을 2 시간 동안 교반하였다. 반응물을 1 N NaOH (수성) (1 mL)로 중성화시키고, 층을 분리하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 농축시키고, 정제용 HPLC (CH3CN/H2O + 10 nM NH4OAc)로 정제하여, rac-(3aR,14bS)-10-시클로헥실-N3a-(2-(디메틸아미노)에틸)-N7-((디메틸아미노)술포닐)-N3a,2,2-트리메틸-13-(메틸옥시)-4H-[1,3]디옥솔로[4,5-d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-3a,7(14bH)-디카르복스아미드 (16.7 mg, 0.024 mmol, 50％)를 회백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00032
Figure pct00033
실시예 2
rac-(3aR,14bS)-10-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-3a-(((2R,6S)-2,6-디메틸-4-모르폴리닐)카르보닐)-13-(메틸옥시)-2-옥소-3a,14b-디히드로-4H-[1,3]디옥솔로[4,5-d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-7-카르복스아미드.
THF (2 mL) 중 rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-6-(((2S,6R)-2,6-디메틸-4-모르폴리닐)카르보닐)-5,6-디히드록시-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-10-카르복스아미드 (35 mg, 0.052 mmol) 및 1,1'-카르보닐디이미다졸 (58 mg, 0.36 mmol)의 용액을 반응 용기 내로 밀봉하고, 75℃에서 마이크로파 조사로 20 분 동안 가열하였다 (약 50％ 전환). 가열을80℃에서 40 분 동안 계속하였다 (~80％ 전환). 반응물을 실온으로 냉각시키고, 농축 건조시키고, MeOH (~2 mL) 중에 용해시키고, 여과하고, 정제용 HPLC (CH3CN/H2O + 10 mM NH4OAc)로 정제하여, rac-(3aR,14bS)-10-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-3a-(((2R,6S)-2,6-디메틸-4-모르폴리닐)카르보닐)-13-(메틸옥시)-2-옥소-3a,14b-디히드로-4H-[1,3]디옥솔로[4,5-d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-7-카르복스아미드 (20.6 mg, 0.030, 57％)를 백색 분말로서 수득하였다.
Figure pct00034
Figure pct00035
실시예 3
rac-(3aR,14bS)-10-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-3a-(((2R,6S)-2,6-디메틸-4-모르폴리닐)카르보닐)-2,2-디메틸-13-(메틸옥시)-3a,14b-디히드로-4H-[1,3]디옥솔로[4,5-d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-7-카르복스아미드.
CH2Cl2 (3 mL) 중 rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-6-(((2S,6R)-2,6-디메틸-4-모르폴리닐)카르보닐)-5,6-디히드록시-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-10-카르복스아미드 (60 mg, 0.090 mmol)의 용액에 2-메톡시프로펜 (0.5 mL, 5.2 mmol) 및 TsOH·H2O (50 mg. 0.26 mmol)를 첨가하였다. 반응 용액을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, 농축 건조시키고, MeOH 중에 용해시키고, SPE 컬럼 (C18, 500 mg, MeOH)을 통해 여과하고, 농축시키고, 정제용 HPLC (CH3CN/H2O + 10 mM NH4OAc)로 정제하여, rac-(3aR,14bS)-10-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-3a-(((2R,6S)-2,6-디메틸-4-모르폴리닐)카르보닐)-2,2-디메틸-13-(메틸옥시)-3a,14b-디히드로-4H-[1,3]디옥솔로[4,5-d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-7-카르복스아미드 (15.5 mg, 0.022, 24％)를 연한 황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00036
Figure pct00037
실시예 4
rac-(3aR,14bS)-10-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-3a-((3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐)-13-(메틸옥시)-2-옥소-3a,14b-디히드로-4H-[1,3]디옥솔로[4,5-d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-7-카르복스아미드.
TEA (0.1 mL) 및 THF (1 mL) 중 rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-6-((3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐)-5,6-디히드록시-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-10-카르복스아미드 (31 mg, 0.045 mmol) 및 1,1'-카르보닐디이미다졸 (120 mg, 0.74 mmol)의 용액을 반응 용기 내에 밀봉하고, 90℃에서 마이크로파 조사로 2 시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 농축 건조시키고, MeOH 중에 용해시키고, 여과하고, 정제용 HPLC (CH3CN/H2O + 10 mM NH4OAc)로 정제하였다. 바람직한 생성물을 함유한 물질을 정제용 HPLC (MeOH/H2O + 10 mM TFA)로 재정제하여, rac-(3aR,14bS)-10-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-3a-((3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐)-13-(메틸옥시)-2-옥소-3a,14b-디히드로-4H-[1,3]디옥솔로[4,5-d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-7-카르복스아미드 (9.5 mg, 0.013 mmol, 30％)를 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00038
Figure pct00039
실시예 5
rac-(3aR,14bS)-10-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-2,2-디메틸-3a-((3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐)-13-(메틸옥시)-3a,14b-디히드로-4H-[1,3]디옥솔로[4,5-d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-7-카르복스아미드.
CH2Cl2 (0.5 mL) 중 rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-6-((3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐)-5,6-디히드록시-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-10-카르복스아미드 (42 mg, 0.062 mmol) 및 2-메톡시프로펜 (0.5 mL, 5.2 mmol)의 용액에 TsOH·H2O (5 mg. 0.026 mmol)를 첨가하였다. 반응 용액을 실온에서 밤새 교반하고, 농축 건조시키고, MeOH 중에 용해시키고, 여과하고, 정제용 HPLC (CH3CN/H2O + 10 mM NH4OAc)로 정제하여, rac-(3aR,14bS)-10-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-2,2-디메틸-3a-((3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐)-13-(메틸옥시)-3a,14b-디히드로-4H-[1,3]디옥솔로[4,5-d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-7-카르복스아미드 (6.7 mg, 0.1 mmol, 15％)를 회백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00040
Figure pct00041
실시예 6
rac-(3aR,14bS)-10-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-3a-((3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐)-13-(메틸옥시)-3a,14b-디히드로-4H-[1,3]디옥솔로[4,5-d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-7-카르복스아미드.
CH2Cl2 (1 mL) 및 CH2Br2 (1 mL) 중 rac-(5R,6S)-13-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-6-((3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐)-5,6-디히드록시-3-(메틸옥시)-6,7-디히드로-5H-인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-10-카르복스아미드 (47 mg, 0.069 mmol)의 용액에 nBu4N+I- (16 mg. 0.043 mmol) 및 5.5 N NaOH (수성) (0.6 mL)를 첨가하였다. 반응 용액을 실온에서 밤새 교반하고, 농축시켜 CH2Cl2를 제거하고, CH2Br2 (1 mL)로 희석하고, 밀봉 용기 내 50℃에서 밤새 교반하였다. 조 반응 혼합물을 농축 건조시키고, 정제용 HPLC (MeOH/H2O + 10 mM TFA)로 정제하여, rac-(3aR,14bS)-10-시클로헥실-N-((디메틸아미노)술포닐)-3a-((3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일)카르보닐)-13-(메틸옥시)-3a,14b-디히드로-4H-[1,3]디옥솔로[4,5-d]인돌로[2,1-a][2]벤즈아제핀-7-카르복스아미드 (14.5 mg, 0.21 mmol, 30％)를 밝은 황색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00042
본 개시내용은 상기 예시적인 실시예에 제한되지 않고, 그의 본질적인 취지에서 벗어나지 않는 한 다른 특정 형태로 실시될 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다. 따라서, 제한되지는 않지만 예시로서의 모든 측면에서 고려되는 실시예, 상기 실시예 이외의 첨부된 청구범위에 제시된 참조, 및 청구범위 등가의 의미 및 범위 내에 있는 모든 변화가, 따라서 그 안에 포함되는 것으로 의도되는 것이 바람직하다.

Claims (14)

  1. 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    <화학식 I>
    Figure pct00043

    상기 식 중,
    R1은 CO2R8 또는 CONR9R10이고;
    R2는 수소, 알킬, 아미노알킬, 알킬아미노알킬 또는 디알킬아미노알킬이고;
    R3은 수소, 알킬, 아미노알킬, 알킬아미노알킬 또는 디알킬아미노알킬이거나;
    또는 NR2R3은 함께 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, N-(알킬)피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 호모피페리디닐 또는 호모모르폴리닐이고, 0 내지 3개의 알킬 치환기로 치환되거나;
    또는 NR2R3은 함께
    Figure pct00044
    이고;
    R4는 수소 또는 알킬이고;
    R5는 수소 또는 알킬이거나;
    또는 R4 및 R5는 함께 옥소이고;
    R6은 수소, 할로, 알킬, 알케닐, 히드록시, 벤질옥시 또는 알콕시이고;
    R7은 시클로알킬이고;
    R8은 수소 또는 알킬이고;
    R9는 수소, 알킬, 알킬SO2, 시클로알킬SO2, 할로알킬SO2, (R11)(R12)NSO2 또는 (R13)SO2이고;
    R10은 수소 또는 알킬이고;
    R11은 수소 또는 알킬이고;
    R12는 수소 또는 알킬이고;
    R13은 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, N-(알킬)피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 호모피페리디닐 또는 호모모르폴리닐이고;
    R14는 수소, 알킬, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 알킬카르보닐, 시클로알킬카르보닐, 할로알킬카르보닐, 알콕시카르보닐, 알킬SO2, 시클로알킬SO2, 할로알킬SO2, 아미노카르보닐, (알킬아미노)카르보닐, (디알킬아미노)카르보닐, 벤질, 벤질옥시카르보닐 또는 피리디닐이다.
  2. 제1항에 있어서, R1이 CONR9R10이고; R2가 디알킬아미노알킬이고; R3이 알킬이거나; 또는 NR2R3이 함께 2개의 알킬 치환기로 치환된 모르폴리닐이거나, 또는 NR2R3이 함께
    Figure pct00045
    이고; R4가 수소 또는 알킬이고; R5가 수소 또는 알킬이거나; 또는 R4 및 R5가 함께 옥소이고; R6이 알콕시이고; R7이 시클로알킬이고; R9가 (R11)(R12)NSO2이고; R11이 알킬이고; R12가 알킬이고; R14가 알킬인 화합물; 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  3. 제2항에 있어서, R1이 CONHSO2NMe2이고; R2가 디메틸아미노에틸이고; R3이 메틸이거나; 또는 NR2R3이 함께 3,5-디메틸모르폴리닐이거나, 또는 NR2R3이 함께 3-메틸-3,8-디아자바이시클로[3.2.1]옥트-8-일이고; R4가 수소 또는 메틸이고; R5가 수소 또는 메틸이거나; 또는 R4 및 R5가 함께 옥소이고; R6이 메톡시이고; R7이 시클로헥실인 화합물; 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  4. 제1항에 있어서, R1이 CONR9R10이고; R9가 알킬SO2, 시클로알킬SO2, 할로알킬SO2, (R11)(R12)NSO2 또는 (R13)SO2이고; R10이 수소인 화합물.
  5. 제1항에 있어서, R6이 수소인 화합물.
  6. 제1항에 있어서, R6이 메톡시인 화합물.
  7. 제1항에 있어서, R7이 시클로헥실인 화합물.
  8. 제1항에 있어서, R9가 (R11)(R12)NSO2 또는 (R13)SO2인 화합물.
  9. 제1항에 있어서, 하기의 입체화학을 갖는 화합물.
    Figure pct00046
  10. 제1항에 있어서,
    Figure pct00047

    로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  11. 제1항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 인터페론, 시클로스포린, 인터류킨, HCV 메탈로프로테아제 억제제, HCV 세린 프로테아제 억제제, HCV 폴리머라제 억제제, HCV 헬리카제 억제제, HCV NS4B 단백질 억제제, HCV 침투 억제제, HCV 어셈블리 억제제, HCV 방출 억제제, HCV NS5A 단백질 억제제, HCV NS5B 단백질 억제제 및 HCV 레플리콘 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되는, HCV에 대해 치료학적 이점을 갖는 1종 이상의 추가 화합물을 더 포함하는 조성물.
  13. 치료 유효량의 제1항의 화합물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, C형 간염 감염의 치료 방법.
  14. 제13항에 있어서, 인터페론, 시클로스포린, 인터류킨, HCV 메탈로프로테아제 억제제, HCV 세린 프로테아제 억제제, HCV 폴리머라제 억제제, HCV 헬리카제 억제제, HCV NS4B 단백질 억제제, HCV 침투 억제제, HCV 어셈블리 억제제, HCV 방출 억제제, HCV NS5A 단백질 억제제, HCV NS5B 단백질 억제제 및 HCV 레플리콘 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되는, HCV에 대해 치료학적 이점을 갖는 1종 이상의 추가 화합물을 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
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