CN101981038A - 二氧戊环和二氧戊环酮稠合的吲哚并苯并二氮杂hcv ns5b抑制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明披露了式I化合物，包括它们的盐，以及组合物和使用所述化合物的方法。所述化合物具有抗丙型肝炎病毒(HCV)的活性，并且可用于治疗感染有HCV的那些患者。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求于2008年3月27日提交的美国临时专利申请61/039967的权益。
技术领域
本申请一般性地涉及新式I化合物，包括它们的盐，所述化合物具有抗丙型肝炎病毒(HCV)的活性，并且可用于治疗感染有HCV的那些患者。本申请还涉及含有这些化合物的组合物以及使用这些化合物的方法。
背景技术
丙型肝炎病毒(HCV)是主要的人类病原体，其在世界范围内感染估计一亿七千万人，大致是1型人类免疫缺陷病毒感染数量的5倍。这些HCV感染个体中相当大的部分发展成严重的进行性肝脏疾病，包括肝硬化和肝细胞癌(Lauer，G.M.；Walker，B.D.N.Engl.J.Med.2001，345，41-52)。
HCV是正链RNA病毒。基于对所推断氨基酸序列进行的比较和5’-非翻译区的广泛相似性，已经把HCV归类为黄病毒科中独立的属。黄病毒科的所有成员都具有包封的病毒体，其含有的正链RNA基因组通过翻译单一的连续的可读框而编码所有已知的病毒专属性蛋白质。
在整个HCV基因组的核苷酸和所编码的氨基酸序列中发现了相当程度的异质性。已经表征了至少6种主要的基因型，并且已经描述了多于50种的亚型。HCV的主要基因型在世界范围内的分布是不同的，并且HCV遗传异质性的临床重要性仍然是难以确定的，尽管对基因型对发病和治疗的可能影响行了大量的研究。
单链HCV RNA基因组的长度大约是9500个核苷酸，并且具有单一的可读框(ORF)，其编码由大约3000个氨基酸组成的单一的大的多蛋白。在被感染的细胞中，这种多蛋白在多个位点被细胞蛋白酶和病毒蛋白酶裂解，从而产生结构蛋白和非结构(NS)蛋白。就HCV来说，成熟的非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的产生受到两种病毒蛋白酶的影响。认为第一种病毒蛋白酶是金属蛋白酶，并且在NS2-NS3接合处进行裂解；第二种病毒蛋白酶是包含在NS3的N-末端区域内的丝氨酸蛋白酶(也称为NS3蛋白酶)，并且介导NS3下游的所有随后的裂解，既在NS3-NS4A裂解位点以顺式进行裂解，又在其余的NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位点以反式进行裂解。NS4A蛋白似乎具有多种功能，其充当NS3蛋白酶的辅因子，并且可能有助于NS3及其它病毒复制酶组分的膜定位。NS3蛋白与NS4A形成复合物，这似乎是在所有位点进行加工活动由此提高蛋白质水解效率所必需的。NS3蛋白还显示出三磷酸核苷酶和RNA解旋酶活性。NS5B(也称为HCV聚合酶)是依赖于RNA的RNA聚合酶，在HCV的复制中涉及所述酶。在“Structural Analysis of the Hepatitis C Virus RNA Polymerase in Complex with Ribonucleotides(Bressanelli；S.et al.，Journal of Virology 2002，3482-3492)和Defrancesco and Rice，Clinics in Liver Disease 2003，7，211-242中描述了HCV NS5B蛋白。
目前，最有效的HCV疗法使用α-干扰素和利巴韦林的组合，其在40％的患者中产生持续的效果(Poynard，T.et al.Lancet 1998，352，1426-1432)。最新的临床结果证明，作为单一疗法，PEG化的α-干扰素优于未修饰的α-干扰素(Zeuzem，S.et al.N.Engl.J.Med.2000，343，1666-1672)。然而，即使就涉及PEG化α-干扰素和利巴韦林组合的实验性治疗方案而言，相当多的患者也没有出现病毒载量的持续减少。因此，就开发用于治疗HCV感染的有效疗法而言，存在明显和迫切的需要。
本发明提供了下述技术益处，例如所述化合物是新化合物并且有效抗丙型肝炎。另外，所述化合物提供了对于药物用途的益处，例如在以下方面的一种或多种益处：它们的作用机理，结合效率、抑制效率、靶标选择性、溶解性、安全性能(safety profiles)或生物利用度。
HCV NS5B抑制剂已经披露于美国专利7,399,758中。
发明内容
本发明包括式I化合物，包括可药用盐，以及组合物和使用这些化合物的治疗方法。
本发明的一方面涉及式I化合物或其可药用盐
其中：
R1为CO2R8或CONR9R10；
R2为氢、烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基或二烷基氨基烷基；
R3为氢、烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基或二烷基氨基烷基；或
NR2R3一起为氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、N-(烷基)哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、高哌啶基或高吗啉基，并且所述基团被0-3个烷基取代基取代；或
NR2R3一起为
或
R4为氢或烷基；
R5为氢或烷基；
或，R4和R5一起为氧代；
R6为氢、卤素、烷基、烯基、羟基、苄氧基或烷氧基；
R7为环烷基；
R8为氢或烷基；
R9为氢、烷基、烷基SO2-、环烷基SO2-、卤代烷基SO2-、(R11)(R12)NSO2-或(R13)SO2-；
R10为氢或烷基；
R11为氢或烷基；
R12为氢或烷基；
R13为氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、N-(烷基)哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基(thiomorpholinyl)、高哌啶基(homopiperidinyl)或高吗啉基(homomorpholinyl)；以及
R14为氢、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、烷基羰基、环烷基羰基、卤代烷基羰基、烷氧基羰基、烷基SO2-、环烷基SO2-、卤代烷基SO2-、氨基羰基、(烷基氨基)羰基、(二烷基氨基)羰基、苄基、苄氧基羰基或吡啶基。
本发明的另一方面涉及式I化合物或其可药用盐，其中R1为CONR9R10；R2为二烷基氨基烷基；R3为烷基；或NR2R3一起为被2个烷基取代基取代的吗啉基或NR2R3一起为
R4为氢或烷基；R5为氢或烷基；或R4和R5一起为氧代；R6为烷氧基；R7为环烷基；R9为(R11)(R12)NSO2；R11为烷基；R12为烷基；以及R14为烷基。
本发明的另一方面涉及式I化合物或其可药用盐，其中R1为CONHSO2NMe2；R2为二甲基氨基乙基；R3为甲基；或NR2R3一起为3，5-二甲基吗啉基或NR2R3一起为3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基；R4为氢或甲基；R5为氢或甲基；或R4和R5一起为氧代；R6为甲氧基；R7为环己基。
本发明的另一方面涉及式I化合物，其中R1为CONR9R10；R9为烷基SO2-、环烷基SO2-、卤代烷基SO2-、(R11)(R12)NSO2-或(R13)SO2-；以及R10为氢。
本发明的另一方面涉及式I化合物，其中R6为氢。
本发明的另一方面涉及式I化合物，其中R6为甲氧基。
本发明的另一方面涉及式I化合物，其中R7为环己基。
本发明的另一方面涉及式I化合物，其中R9为(R11)(R12)NSO2-或(R13)SO2-。
对于式I化合物，取代基(包括R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13和R14)的任意实例的范围相对于取代基的其它实例的范围可以是独立使用的。如此，本发明包括这些不同方面的组合。
除非另有说明，这些术语具有下述意义。“烷基”是指由1至6个碳所组成的直链或支链烷基。“烯基”是指由2至6个碳所组成且具有至少一个双键的直链或支链烷基。“炔基”是指由2至6个碳所组成且具有至少一个三键的直链或支链烷基。“环烷基”是指由3至7个碳所组成的单环环系。“卤代烷基”与“卤代烷氧基”包括所有卤代异构体，从单卤素取代至全卤素取代。涉及烃部分(例如，烷氧基)的术语包括烃部分的直链和支链异构体。括号与多重括号术语意在向本领域技术人员阐明键合关系。例如，如((R)烷基)那样的术语指进一步被取代基R取代的烷基取代基。
本发明包括所述化合物的所有可药用盐形式。可药用盐为其中抗衡离子不会显著地助长化合物的生理活性或毒性且其本身作为药理等价物的那些可药用盐。这些盐可根据一般有机技术使用商购试剂来制备。一些阴离子盐形式包括醋酸盐、醋硬脂酸盐(acistrate)、苯磺酸盐、溴化物、氯化物、柠檬酸盐、富马酸盐、葡萄糖醛酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、碘化物、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐及昔萘酸盐(xinofoate)。一些阳离子盐形式包括铵盐、铝盐、苄星(benzathine)盐、铋盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺盐、锂盐、镁盐、葡甲胺盐、4-苯基环己胺盐、哌嗪盐、钾盐、钠盐、丁三醇胺(tromethamine)盐及锌盐。
本发明的一些化合物具有不对称碳原子(例如下文中的化合物)。本发明包括所有立体异构形式，包括对映异构体与非对映异构体以及立体异构体的混合物如外消旋体。一些立体异构体可使用本领域中已知的方法来制备。所述化合物的立体异构混合物与相关中间体的立体异构混合物可根据本领域中已知的方法来分离成单独的异构体。
合成方法
化合物可通过本领域已知的方法来制备，这些方法包括如下描述的那些方法以及包括本领域技术人员技能范围之内的那些变化形式。一些试剂和中间体是本领域已知的。其它试剂和中间体可通过本领域已知的方法使用容易获得的物质来制备。用于描述所述化合物合成的变量(例如，编号的R取代基)仅意在说明如何制备，而不应该与在权利要求书和说明书其它段落中使用的变量相混淆。下述方法仅用于示例的目的，而非意图限制本发明的范围。
方案中使用的缩写通常遵循本领域惯用的含义。说明书和实施例中使用的化学缩写的定义如下：“NaHMDS”表示二(三甲基甲硅基)氨基钠；″DMF″表示N，N-二甲基甲酰胺；“MeOH”表示甲醇；“NBS”表示N-溴代琥珀酰亚胺；“Ar”表示芳基；″TFA″表示三氟乙酸；“LAH”表示氢化铝锂；“BOC”表示叔丁氧基羰基；“DMSO”表示二甲基亚砜；“h”表示小时；“rt”表示室温或保留时间(由上下文决定)；“min”表示分钟；″EtOAc″表示乙酸乙酯；″THF″表示四氢呋喃；“EDTA”表示乙二胺四乙酸；“Et2O”表示乙醚；″DMAP″表示4-二甲基氨基吡啶；“DCE”表示1，2-二氯甲烷；“ACN”表示乙腈；“DME”表示1，2-二甲氧基乙烷；“HOBt”表示1-羟基苯并三唑水合物；“DIEA”表示二异丙基乙胺，“Nf”表示CF3(CF2)3SO2-；以及“TMOF”表示原甲酸三甲酯。
一些化合物可通过方案1中示出的方法合成。用亲核的氢氧化物对已知的5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
酯进行水解，这能够生成相应的羧酸，然后可以使用多种已知的标准酰胺化条件之一，使羧酸与各种伯胺或仲胺偶联，形成相应的酰胺。可对生成的不饱和酰胺进行脱羟基化处理，通常使用催化性的四氧化锇或三氯化钌(III)与化学计量量的共氧化剂(co-oxidant)，形成顺-二醇化合物。然后在酸性条件下，使用酮、醛或烯醇醚作为反应物，对所述顺-二醇进行环化，形成1，3-二氧戊环化合物。可供选择地，可在碱性条件下，使用在相同碳(所述碳原子容易受到亲核攻击)上具有两个离去基团的反应物，形成1，3-二氧戊环(或二氧戊环酮)化合物。
方案1.
可供选择地，为获得相同的分子，可以改变上述步骤的顺序，如方案2和3中所示。方案2显示了，可以在形成酰基氨磺酰/磺酰胺部分之前，从已知的5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
酯、羧酸开始，形成酰胺、进行二羟基化和形成二氧戊环(二氧戊环酮)。酰基氨磺酰/磺酰胺可如下形成：通过对所述酯进行水解，然后使用合适的偶联试剂，例如CDI或EDC和氨磺酰/磺酰胺，进行偶联。方案3中显示的路线由使用TFA，对5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
二酯进行选择性水解开始，这可生成芳基羧酸。所述芳基羧酸可与氨磺酰/磺酰胺偶联，然后如上所述对所生成的酰基氨磺酰/磺酰胺进行二羟基化和环化，形成二氧戊环(或二氧戊环酮)化合物。对所述酯进行水解，可形成羧酸，可在最后一步进行酰胺偶联。
方案2.
方案3.
生物学方法
当在以下HCV RdRp测定中测定时，本发明的化合物展现了对抗HCVNS5B的活性。
对HCV NS5B RdRp进行克隆、表达和纯化
将对HCV基因型1b的NS5B蛋白进行编码的cDNA克隆至pET21a表达载体中。为提高溶解度，对所述蛋白质进行表达，以使18氨基酸C-末端截断(18amino acid C-terminal truncation)。大肠杆菌感受态细胞系(E.coli competent cell line)BL21(DE3)用于所述蛋白质的表达。使培养物在37℃生长约4小时，直到培养物达到600纳米处的光密度为2.0。使培养物冷却至20℃，并用1mMIPTG进行诱导。加入新鲜的氨苄青霉素至最终浓度为50微克/毫升，并使细胞在20℃生长过夜。
使细胞沉淀(3升)溶解以供纯化，得到15-24毫克经纯化的NS5B。溶胞缓冲液由20mM Tris-HCl(pH 7.4)、500mM NaCl、0.5％Triton X-100、1mM DTT、1mM EDTA、20％甘油、0.5毫克/毫升溶菌酶、10mM MgCl2、15微克/毫升脱氧核糖核酸酶I和完全TM蛋白酶抑制剂药片(Roche)所组成。加入溶胞缓冲液后，使用组织匀浆器来使经冷冻的细胞沉淀重新悬浮。为了降低样品的粘度，使用与Branson超声波处理器相连的微尖头(microtip)来使溶胞产物的等分液在冰上接受超声波处理。经超声波处理的溶胞产物在4℃以100,000×g离心1小时，并过滤经过0.2微米滤器单元(Corning)。
使用三个连续的色谱步骤来纯化蛋白质：肝素琼脂糖CL-6B、PolyU琼脂糖4B和HiTrap SP琼脂糖(Pharmacia)。色谱缓冲液与溶胞缓冲液相同，但不含有溶菌酶、脱氧核糖核酸酶I、MgCl2或蛋白酶抑制剂，且缓冲液的NaCl浓度根据将蛋白质加载至色谱柱上的要求而调整。各色谱柱以NaCl梯度液洗脱，所述梯度液的长度在5至50个柱体积之间变化，这取决于色谱柱的类型。在最终色谱步骤后，所得到的酶纯度＞90％(基于SDS-PAGE分析)。将酶分成等分液，并贮存在-80℃。
标准HCV NS5B RdRp酶测定
在96孔板(Costar 3912)中在最终体积为60微升的情况下进行HCV RdRp基因型1b测定。测定缓冲液由20mM Hepes(pH 7.5)、2.5mM KCl、2.5mMMgCl2、1mM DTT、1.6单位RNAse抑制剂(PromegaN2515)、0.1毫克/毫升BSA(Promega R3961)和2％甘油所组成。所有化合物在DMSO中连续稀释(3倍)并在水中进一步稀释，以使DMSO在测定中的最终浓度为2％。HCV RdRp基因型1b酶以28nM的最终浓度使用。聚A(polyA)模板以6nM使用，且生物素化的寡dT12引物以180nM的最终浓度使用。模板是商购得到的(Amersham27-4110)。生物素化的引物由Sigma Genosys制备。3H-UTP在0.6μCi(0.29μM总UTP)时使用。通过加入酶来引发反应，在30℃孵育60分钟，并通过加入25微升含有SPA珠粒(4微克/微升，Amersham RPNQ 0007)的50mM EDTA来停止。在室温孵育＞1小时后，将板在Packard Top Count NXT上读取。
经修改的HCV NS5B RdRp酶测定
经修改的酶测定基本上按照关于标准酶测定所描述的那样来进行，不同的是，将生物素化的寡dT12引物预捕获在链霉抗生物素(streptavidin)涂覆的SPA珠粒上，其方式是将引物与珠粒在测定缓冲液中混合，并在室温孵育一小时。离心除去未结合的引物。使与引物结合的珠粒重新悬浮在20mM Hepes缓冲液(pH 7.5)中，并在引物的最终浓度为20nM以及珠粒的最终浓度为0.67微克/微升时用于测定。测定中的加入顺序如下：将酶(14nM)加到经稀释的化合物中，接着加入模板(0.2nM)、3H-UTP(0.6μCi，0.29μM)和与引物结合的珠粒的混合物，以引发反应，所给浓度为最终浓度。使反应在30℃进行4小时。
化合物的IC50值使用七种不同的[I]([I]为抑制浓度)来确定。使用方程式y＝A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))通过抑制作用来计算IC50值。
FRET测定制剂
为了进行HCV FRET筛选测定，使用96孔细胞培养板。FRET肽(Anaspec，Inc.)(Taliani et al.，Anal.Biochem.1996，240，60-67)在其一端附近含有荧光供体即EDANS，并且在另一端附近含有受体即DABCYL。通过供体与受体之间的分子间共振能量转移(RET)来使所述肽的荧光淬灭，但当NS3蛋白酶使所述肽裂解时，产物不再发生RET淬灭，且供体的荧光变得显而易见。测定试剂如下制备：将得自Promega(#E153A)的5×细胞荧光素酶细胞培养物溶胞试剂(cell Luciferase cell culture lysis reagent)用dH2O稀释至1×，加入NaCl至最终为150mM，并且将FRET肽自2mM储备液稀释至最终为20μM。
为了制备板，带有或不带有海紫罗兰属荧光素酶(Renilla luciferase)报告子基因的HCV复制子细胞用胰蛋白酶处理，并置于96孔板的各孔中，其中将经滴定的测试化合物加到第3列至第12列中；第1列和第2列含有对照化合物(HCV蛋白酶抑制剂)，且最底行含有不带有化合物的细胞。然后，将板置于37℃的CO2培养箱中。
测定
加入上述测试化合物(FRET测定制剂)后，在不同时间将板取出，且向每个孔中加入Alamar蓝色溶液(Trek Diagnostics，#00-100)，作为细胞毒性的测量方法。在Cytoflour 4000仪器(PE Biosystems)中读取后，将板以PBS冲洗，然后通过向每个孔中加入30微升上述FRET肽测定试剂(FRET测定制剂)而用于FRET测定。接着，将板置于Cytoflour 4000仪器中，其已被设定成激发波长为340nm/发射波长为490nm，以自动模式历时20次循环，且板在动态模式中读取。典型地，在读取后使用终点分析的信号对噪声为至少三倍。或者，在Alamar蓝色读取后，将板以PBS冲洗，加入不带有酚红的50微升DMEM(高葡萄糖)，然后使用Promega Dual-Glo Luciferase Assay System，将板用于荧光素酶测定。
通过对相对的HCV复制子抑制作用和相对的细胞毒性值进行定量而对化合物进行分析。为了计算细胞毒性值，将得自对照孔的平均Alamar蓝色荧光信号设定为100％无毒性。接着，将各化合物测试孔中的各个信号除以平均对照信号并乘以100％，以确定细胞毒性百分比。为了计算HCV复制子抑制值，平均背景值得自在测定结束时含有最高量HCV蛋白酶抑制剂的两个孔。这些值类似于得自天然Huh-7细胞的那些值。
然后，将背景值从得自对照孔的平均信号中扣除，且将此值用作100％活性。接着，将各化合物测试孔中的各个信号除以背景扣除后的平均对照值并乘以100％，以确定活性百分比。将蛋白酶抑制剂滴定的EC50值计算成可使FRET或荧光素酶活性降低50％的浓度。针对化合物板所得到的两个值即细胞毒性百分比与活性百分比用于确定有待进一步分析的重要化合物。
本发明化合物的代表性数据报道于表1中。
表1
A＞0.5μM；B 0.02μM-0.5μM；C＜0.02μM，但是没有测得确切值；IC50值使用预培育方案进行测量。EC50值使用FRET测定进行测量。
药物组合物和治疗方法
本发明化合物展现出对抗HCV NS5B的活性，且可用于治疗HCV与HCV感染。因此，本发明的另一个方面为一种组合物，其包含式I化合物或其可药用盐及可药用载体。
本发明的另一个方面为式I化合物在制备用于治疗丙型肝炎的药物中的用途。
本发明的另一个方面为一种组合物，其还包含具有抗HCV活性的化合物。
本发明的另一个方面为一种组合物，其中具有抗HCV活性的化合物为干扰素。在本发明的另一个方面，所述干扰素选自干扰素α2B、PEG化的(pegylated)干扰素α、同感干扰素(consensus interferon)、干扰素α2A及淋巴细胞样干扰素τ。
本发明的另一个方面为一种组合物，其中具有抗HCV活性的化合物为环孢菌素。在本发明的另一个方面，所述环孢菌素为环孢菌素A。
本发明的另一个方面为一种组合物，其中具有抗HCV活性的化合物选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、可提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、Imiqimod、利巴韦林、5’-单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、金刚烷胺及金刚乙胺。
本发明的另一个方面为一种组合物，其中具有抗HCV活性的化合物可有效抑制靶标的功能以治疗HCV感染，所述靶标选自HCV金属蛋白酶(HCVmetalloprotease)、HCV丝氨酸蛋白酶(HCV serine protease)、HCV聚合酶(HCVpolymerase)、HCV解螺旋酶(HCV helicase)、HCV NS4B蛋白(HCV NS4Bprotein)、HCV进入(HCV entry)、HCV组装(HCV assembly)、HCV释出(HCVegress)、HCV NS5A蛋白(HCV NS5A protein)、IMPDH及核苷类似物(nucleoside analog)。
本发明的另一个方面为一种组合物，其包含式I化合物或其可药用盐、可药用载体、干扰素及利巴韦林。
本发明的另一个方面为一种抑制HCV复制子(HCV replicon)功能的方法，其包括使HCV复制子与式I化合物或其可药用盐接触。
本发明的另一个方面为一种抑制HCV NS5B蛋白功能的方法，其包括使HCV NS5B蛋白与式I化合物或其可药用盐接触。
本发明的另一个方面为治疗患者中HCV感染的方法，其包括向所述患者给予治疗有效量的式I化合物或其可药用盐。在另一个实施方案中，所述化合物可有效抑制HCV复制子的功能。在另一个实施方案中，所述化合物可有效抑制HCV NS5B蛋白的功能。
本发明的另一个方面为治疗患者中HCV感染的方法，其包括向所述患者给予治疗有效量的式I化合物或其可药用盐，并且给予(之前、之后或同时)另一种具有抗HCV活性的化合物。
本发明的另一个方面为其中其它具有抗HCV活性的化合物为干扰素的方法。
本发明的另一个方面为其中所述干扰素选自干扰素α2B、PEG化的干扰素α、同感干扰素、干扰素α2A及淋巴细胞样干扰素τ的方法。
本发明的另一个方面为其中其它具有抗HCV活性的化合物为环孢菌素的方法。
本发明的另一个方面为其中所述环孢菌素为环孢菌素A的方法。
本发明的另一个方面为其中其它具有抗HCV活性的化合物选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、可提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、Imiqimod、利巴韦林、5’-单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、金刚烷胺及金刚乙胺的方法。
本发明的另一个方面为其中其它具有抗HCV活性的化合物可有效抑制靶标功能以治疗HCV感染的方法，所述靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCV NS5A蛋白、IMPDH及核苷类似物。
本发明的另一个方面为其中其它具有抗HCV活性的化合物可有效抑制HCV生命循环中靶标的功能而非抑制HCVNS5B蛋白的功能的方法。
“治疗有效”是指提供有意义的患者益处所需要的药物量，如肝炎与HCV感染领域中的执业医师所理解的那样。
“患者”是指被HCV病毒感染且适于治疗的人们，如肝炎与HCV感染领域中的执业医师所理解的那样。
“治疗”、“疗法”、“给药方案”、“HCV感染”及相关术语如肝炎与HCV感染领域中的执业医师所理解的那样来使用。
本发明的化合物一般以药物组合物的形式来给予，所述组合物包含治疗有效量的化合物或其可药用盐及可药用载体，且可含有常规的赋形剂。治疗有效量为提供有意义的患者益处所需要的量。可药用载体为具有可接受安全性的常规已知载体。组合物涵盖所有常见的固体形式与液体形式，包括胶囊剂、片剂、锭剂与粉末剂以及液体混悬剂、糖浆剂、酏剂及溶液剂。组合物使用一般制剂技术来制备，且常规的赋形剂(诸如粘合剂与润湿剂)与介质(诸如水与醇)通常用于组合物。
固体组合物通常被配制成剂量单位，且每份剂量提供约1至1000毫克活性成份的组合物是优选的。剂量的一些实例为1毫克、10毫克、100毫克、250毫克、500毫克和1000毫克。一般而言，其它药物可按与临床上所使用的经典单位范围相似的单位范围存在。典型地，其为0.25-1000毫克/单位。
液体组合物通常在剂量单位范围内。一般而言，液体组合物的单位剂量范围可以是1-100毫克/毫升。剂量的一些实例为1毫克/毫升、10毫克/毫升、25毫克/毫升、50毫克/毫升及100毫克/毫升。一般而言，其它药物可按与临床上所使用的经典单位范围相似的单位范围存在。典型地，其为1-100毫克/毫升。
本发明涵盖所有常规的给药模式，且口服方法与肠胃外方法是优选的。一般而言，给药方案可类似于临床上所使用的其它药物。典型地，每日剂量可以是每日1-100毫克/公斤体重。一般而言，口服方式需要较多的化合物，而肠胃外方式需要较少的化合物。然而，具体的给药方案可由医师通过合理的医药判断来确定。
本发明也涵盖在组合疗法中给予所述化合物的方法。即所述化合物可与可用于治疗肝炎及HCV感染的其它药物一起使用，但所述化合物与所述其它药物分开使用。在这些组合方法中，化合物通常可搭配其它药物而以每日1-100毫克/公斤体重的每日剂量来给予。其它药物一般可按治疗上所使用的量来给予。然而，具体的给药方案可由医师通过合理的医药判断来确定。
适合用于组合物和方法的化合物的一些实例列于表2中。
表2.
具体实施方案
LCMS数据：
停止时间：梯度时间+1分钟
起始浓度：0％B，除非另有指出
洗脱液A：5％CH3CN/95％H2O，含有10mM NH4OAc(用于柱A、D、E和F)
10％MeOH/90％H2O，含有0.1％TFA(用于柱B和C)
洗脱液B：95％CH3CN/5％H2O，含有10mM NH4OAc(用于柱A、D、E和F)
90％MeOH/10％H2O，含有0.1％TFA(用于柱B和C)
柱A：Phenomenex 10μ4.6x50mm C18
柱B：Phenomenex C18 10μ3.0x50mm
柱C：Phenomenex 4.6x50mm C18 10μ
柱D：Phenomenex Lina C18 5μ3.0x50mm
柱E：Phenomenex 5μ4.6x50mm C18
柱F：Phenomenex 10μC18 4.6x30mm
制备性HPLC数据：
梯度：线性，历时20分钟，除非另有指出
起始浓度：15％B，除非另有指出
结束浓度：100％B
洗脱液A：5％CH3CN/95％H2O，含有10mM NH4OAc
洗脱液B：95％CH3CN/5％H2O，含有10mM NH4OAc
柱：Sunfire Prep C18 OBD 5μ30x100mm
下述起始物质的制备可见于US 2007060565中。
1)13-环己基-3-(甲氧基)-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-6，10-二羧酸10-(1，1-二甲基乙基)酯·6-甲基酯
2)13-环己基-10-[[[(二甲基氨基)磺酰基]氨基]羰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-6-羧酸甲基酯
下述起始物质的制备可见于WO 2007033175中。
3)13-环己基-10-[[[(二甲基氨基)磺酰基]氨基]羰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-6-羧酸
下述起始物质的制备可见于US 2006166964中。
4)13-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-6-(((2S，6R)-2，6-二甲基-吗啉-4-基)羰基)-3-(甲氧基)-6，7-二氢-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-10-甲酰胺
中间体1
rac-(5R，6S)-13-环己基-5，6-二羟基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-6，10-二羧酸10-(1，1-二甲基乙基)酯·6-甲基酯。向13-环己基-3-(甲氧基)-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-6，10-二羧酸10-(1，1-二甲基乙基)酯·6-甲基酯(400mg，0.80mmol)和4-甲基吗啉N-氧化物(234mg，2.0mmol)在THF(5mL)中的浆液中，加入H2O(0.20mL)和OsO4(0.20mL，2.5％w/w的OsO4的t-BuOH溶液)。将反应混合物在室温搅拌2h，用饱和Na2S2O3(水溶液)(～5mL)猝灭，然后搅拌1小时。分离各层，水层用THF(2x5mL)萃取。将合并的有机层浓缩，并且将残余物溶于DMF(2mL)中，用H2O(～4mL)处理。过滤收集固体，生成rac-(5R，6S)-13-环己基-5，6-二羟基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-6，10-二羧酸10-(1，1-二甲基乙基)酯·6-甲基酯(413mg，0.77mmol，96％)，为黄色固体，使用该产物而没有进一步纯化。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ1.22-2.19(m，10H)，1.65(s，9H)，2.87-3.12(m，2H)，3.53(d，J＝15.0Hz，1H)，3.68(s，3H)，3.93(s，3H)，4.63(d，J＝15.0Hz，1H)，7.05(dd，J＝8.4，2.9Hz，1H)，7.36-7.43(m，2H)，7.65(dd，J＝8.4，1.1Hz，1H)，7.84(d，J＝8.4Hz，1H)，7.91(br s，1H).LCMS：m/e 536(M+H)+，保留时间3.11分钟，柱D，4分钟梯度。
中间体2
rac-(3aR，14bS)-10-环己基-2，2-二甲基-13-(甲氧基)-4H-[1，3]二氧戊环并[4，5-d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-3a，7(14bH)-二羧酸7-(1，1-二甲基乙基)酯·3a-甲基酯。向rac-(5R，6S)-13-环己基-5，6-二羟基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-6，10-二羧酸10-(1，1-二甲基乙基)酯·6-甲基酯(30mg，0.056mmol)于THF(1mL)中的溶液中，加入2-甲氧基丙烯(0.2mL)，然后加入TsOH一水合物(5mg)。将反应混合物搅拌过夜，然后浓缩干燥。将残余物溶于DMSO/MeOH中，经制备性HPLC纯化，得到rac-(3aR，14bS)-10-环己基-2，2-二甲基-13-(甲氧基)-4H-[1，3]二氧戊环并[4，5-d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-3a，7(14bH)-二羧酸7-(1，1-二甲基乙基)酯·3a-甲基酯(17mg，0.030mmol，53％)，为黄色固体。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ0.32(s，3H)，0.80-2.16(m，10H)，1.33(s，3H)，1.60(s，9H)，2.83-2.95(m，1H)，3.85(s，3H)，3.87(s，3H)，4.00(d，J＝14.8Hz，1H)，4.46(d，J＝14.8Hz，1H)，5.21(s，1H)，7.00(d，J＝2.6Hz，1H)，7.04(dd，J＝8.4，2.6Hz，1H)，7.40(d，J＝8.4Hz，1H)，7.67(dd，J＝8.4，1.1Hz，1H)，7.77(d，J＝8.4Hz，1H)，7.98(br s，1H).LCMS：m/e 576(M+H)+，保留时间4.28分钟，柱A，4分钟梯度。
中间体3
rac-(5R，6S)-13-环己基-10-((((二甲基氨基)磺酰基)氨基)羰基)-5，6-二羟基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-6-羧酸甲基酯。向13-环己基-10-[[[(二甲基氨基)磺酰基]氨基]羰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-6-羧酸甲基酯(70mg，0.13mmol)和4-甲基吗啉N-氧化物(37mg，0.32mmol)于THF(1mL)中的溶液中，加入H2O(0.10mL)和OsO4(0.10mL，2.5％w/w的OsO4的t-BuOH溶液)。将反应混合物在室温搅拌2h，用饱和Na2S2O3(水溶液)(～1.5mL)猝灭，然后搅拌1h。分离各层，水层用THF(2x2mL)萃取。将合并的有机层浓缩，并且将残余物溶于DMF/MeOH(1∶2，3mL)中，过滤，并且经制备性HPLC纯化，得到rac-(5R，6S)-13-环己基-10-((((二甲基氨基)磺酰基)氨基)羰基)-5，6-二羟基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-6-羧酸甲基酯(62mg，0.11mmol，83％)，为淡黄色固体。1HNMR(300MHz，d6-DMSO)δ1.07-2.10(m，10H)，2.80-2.92(m，1H)，2.90(s，6H)，3.31-3.39(m，1H)，3.57(s，3H)，3.86(s，3H)，4.65-4.74(m，2H)，5.56-5.60(m，1H)，5.74-5.80(m，1H)，7.07(dd，J＝8.4，2.9Hz，1H)，7.26(d，J＝2.9Hz，1H)，7.36(d，J＝8.4Hz，1H)，7.63(dd，J＝8.4，1.3Hz，1H)，7.87(d，J＝8.4Hz，1H)，8.36(br s，1H)，11.38(s，1H).LCMS：m/e 584(M-H)-，保留时间1.86分钟，柱A，4分钟梯度。
中间体4
rac-(5R，6S)-13-环己基-10-((((二甲基氨基)磺酰基)氨基)羰基)-5，6-二羟基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-6-羧酸。向rac-(5R，6S)-13-环己基-10-((((二甲基氨基)磺酰基)氨基)羰基)-5，6-二羟基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-6-羧酸甲基酯(57mg，0.10mmol)于MeOH/THF(1∶1，2mL)中的溶液中，加入1M NaOH水溶液(0.5mL)。将反应混合物密封，并且在80℃用微波辐射加热20分钟。反应用1NHCl水溶液(0.5mL)猝灭，用H2O稀释，并且浓缩，除去有机溶剂。过滤收集生成的沉淀物，并且真空干燥，得到rac-(5R，6S)-13-环己基-10-((((二甲基氨基)磺酰基)氨基)羰基)-5，6-二羟基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-6-羧酸(42mg，0.074mmol，73％)，为黄色固体。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ0.73-2.20(m，10H)，2.92-3.05(m，1H)，3.02(s，6H)，3.54(d，J＝14.8Hz，1H)，3.93(s，3H)，4.71(d，J＝14.8Hz，1H)，4.94(s，1H)，7.05(dd，J＝8.4，2.6Hz，1H)，7.40(d，J＝2.6Hz，1H)，7.40(d，J＝8.4Hz，1H)，7.59(dd，J＝8.4，1.5Hz，1H)，7.89(d，J＝8.4Hz，1H)，8.05(d，J＝1.5Hz，1H).LCMS：m/e 572(M+H)+，保留时间3.34分钟，柱B，4分钟梯度。
中间体5
rac-(5R，6S)-13-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-6-(((2S，6R)-2，6-二甲基-吗啉-4-基)羰基)-5，6-二羟基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-10-甲酰胺。向13-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-6-(((2S，6R)-2，6-二甲基-吗啉-4-基)羰基)-3-(甲氧基)-6，7-二氢-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-10-甲酰胺(500mg，0.79mmol)和4-甲基吗啉N-氧化物(231mg，1.97mmol)于THF/H2O(10∶1，5.5mL)中的溶液中，加入OsO4(0.50mL，2.5％w/w的OsO4的t-BuOH溶液，0.04mmol)。将反应混合物在室温搅拌18h，用饱和Na2S2O3(水溶液)(～10mL)猝灭，并且搅拌6h。分离各层，水层用THF(2x 20mL)萃取。合并的有机层用饱和Na2S2O3(水溶液)(～30mL)和盐水(30mL)洗涤，并且浓缩。将残余物溶于DMF/MeOH(1∶2，15mL)，过滤并且经制备性HPLC纯化，得到rac-(5R，6S)-13-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-6-(((2S，6R)-2，6-二甲基-吗啉-4-基)羰基)-5，6-二羟基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-10-甲酰胺(230mg，0.34mmol，44％)，为橙黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.99-2.02(m，20H)，2.83-2.96(m，1H)，3.02(s，6H)，3.63-3.73(m，2H)，3.89(s，3H)，4.20-4.38(m，1H)，4.60-4.71(m，1H)，5.14-5.26(m，1H)，7.04(dd，J＝8.4，2.6Hz，1H)，7.38(d，J＝8.4Hz，1H)，7.45(br s，1H)，7.55(d，J＝8.4Hz，1H)，7.79-7.97(m，2H).LCMS：m/e 667(M-H)-，保留时间1.98分钟，柱A，4分钟梯度。
中间体6
13-环己基-N6-(2-(二甲基氨基)乙基)-N10-((二甲基氨基)磺酰基)-N6-甲基-3-(甲氧基)-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-6，10-二甲酰胺。将13-环己基-10-[[[(二甲基氨基)磺酰基]氨基]羰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-6-羧酸甲基酯(700mg，1.27mmol)溶于MeOH//THF(1∶1，14mL)中，并且用1M NaOH水溶液(3mL)处理。对反应混合物进行搅拌，并且用微波辐射在80℃加热15分钟，然后冷却至室温。澄清的溶液用1M HCl水溶液(3mL)中和，然后浓缩以除去有机溶剂。将残余物与H2O(10mL)搅拌1h，然后过滤收集所生成的固体，用H2O洗涤，然后真空干燥。向这些固体，即N1，N1，N2-三甲基乙烷-1，2-二胺(191mg，1.88mmol)和三乙胺(0.700mL)于DMF(5mL)中的溶液中，加入HATU(620mg，1.63mmol)。将反应混合物在室温搅拌10h，然后用H2O(25mL)和1M HCl(水溶液)(5mL)稀释，并且搅拌20min。过滤收集沉淀物，用H2O洗涤，然后干燥，生成带杂质的产物(960mg)，为黄色粉末。将带杂质的产物的粗试样(100mg)溶于MeOH/DMF(3∶1，4mL)中，过滤并且经制备性HPLC(H2O/CH3CN，含有10mM NH4OAc缓冲液)纯化，得到13-环己基-N6-(2-(二甲基氨基)乙基)-N10-((二甲基氨基)磺酰基)-3-甲氧基-N6-甲基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-6，10-二甲酰胺(78mg，0.13mmol，95％)，为黄色固体。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.11-3.07(m，24H)，2.99(s，6H)，3.50-3.76(m，2H)，3.93(s，3H)，4.27-4.44(m，1H)，5.05-5.25(m，1H)，7.05(s，1H)7.08(d，J＝2.6Hz，1H)，7.16(dd，J＝8.8，2.6Hz，1H)，7.56(d，J＝8.4Hz，1H)，7.64(dd，J＝8.8，1.5Hz，1H)，7.88(d，J＝8.4Hz，1H)，8.16(br s，1H).4Hz，1H)，8.16(br s，1H).LCMS：m/e 620(M-H)-，保留时间2.32分钟，柱A，4分钟梯度。
中间体7
二醇、磺酰胺、酰胺中间体
rac-(5R，6S)-13-环己基-N6-(2-(二甲基氨基)乙基)-N10-((二甲基氨基)磺酰基)-5，6-二羟基-N6-甲基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-6，10-二甲酰胺。向13-环己基-N6-(2-(二甲基氨基)乙基)-N10-((二甲基氨基)磺酰基)-3-甲氧基-N6-甲基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-6，10-二甲酰胺(200mg，0.32mmol)和4-甲基吗啉N-氧化物(94mg，0.81mmol)于THF/H2O(10∶1，3.3mL)中的溶液中，加入OsO4(0.15mL，2.5％w/w的OsO4的t-BuOH溶液0.014mmol)。将反应混合物在室温搅拌2h，然后加入额外的OsO4(0.15mL，2.5％w/w的OsO4的t-BuOH溶液，0.014mmol)，接着使反应混合物在室温搅拌过夜。反应混合物用饱和Na2S2O3(水溶液)(～5mL)猝灭，然后搅拌1h。分离各层，水层用THF(2x4mL)萃取。将合并的有机层浓缩，用水浆化，然后过滤收集固体，生成rac-(5R，6S)-13-环己基-N6-(2-(二甲基氨基)乙基)-N10-((二甲基氨基)磺酰基)-5，6-二羟基-N6-甲基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-6，10-二甲酰胺(60mg，0.091mmol，28％)，为黄色固体，使用该产物，而没有进一步纯化。LCMS：m/e 654(M-H)-，保留时间2.09分钟，柱A，4分钟梯度。
中间体8
13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-6-[(3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基]-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-10-甲酰胺。向13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-10-甲酰胺-6-羧酸(51mg，0.095mmol)、3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷二盐酸盐(34mg，0.17mmol)和三乙胺(0.06mL)于DMF(1.0mL)中的搅拌溶液中，加入HATU(50mg，0.13mmol)。将反应混合物在室温搅拌2h，用MeOH(～1mL)稀释，然后过滤，并且经制备性HPLC(CH3CN/H2O，含有10mMNH4OAc)纯化，得到13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-6-[(3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基]-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-10-甲酰胺(52mg，0.08mmol，85％)，为黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.31(s，1H)，7.83(d，J＝8.4Hz，1H)，7.59(br d，J＝8.4Hz，1H)，7.45(d，J＝8.8Hz，1H)，7.02(dd，J＝8.8，2.6Hz，1H)，6.91-6.86(m，2H)，5.35-5.16(m，1H)，4.34-4.16(m，1H)，3.87(s，3H)，3.01(s，6H)，2.85-1.03(m，24H).LCMS：m/e 644(M-H)-，保留时间2.89分钟，柱A，4分钟梯度。
中间体9
rac-(5R，6S)-13-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-6-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-5，6-二羟基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酰胺。向13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-6-[(3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基]-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酰胺(303mg，0.47mmol)和4-甲基吗啉N-氧化物(138mg，1.2mmol)于THF/H2O(10∶1，4.4mL)中的溶液中，加入OsO4(0.45mL，2.5％w/w的OsO4的t-BuOH溶液，0.04mmol)。将反应混合物在室温搅拌2天，然后用1M Na2S2O3(水溶液)(5mL)猝灭，接着搅拌2h。溶液用EtOAc萃取(先10mL，接着5mL的EtOAc)。合并的有机层用1M Na2S2O3(水溶液)洗涤，在浓缩后，经制备性HPLC(CH3CN/H2O，含有10mM NH4OAc)纯化，得到rac-(5R，6S)-13-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-6-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-5，6-二羟基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-10-甲酰胺(57mg，0.08mmol，18％)，为黄色固体，该产物直接使用，而没有进一步纯化。LCMS：m/e 680(M+H)+，保留时间1.66分钟，柱C，2分钟梯度。
实施例1
rac-(3aR，14bS)-10-环己基-N3a-(2-(二甲基氨基)乙基)-N7-((二甲基氨基)磺酰基)-N3a，2，2-三甲基-13-(甲氧基)-4H-[1，3]二氧戊环并[4，5-d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-3a，7(14bH)-二甲酰胺。将2-甲氧基丙烯(0.1mL，1.0mmol)加至rac-(5R，6S)-13-环己基-N6-(2-(二甲基氨基)乙基)-N10-((二甲基氨基)磺酰基)-5，6-二羟基-N6-甲基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-6，10-二甲酰胺(30mg，0.045mmol)于DCE(1mL)中的浆液中。加入p-TsOH一水合物(1mg，0.005mmol)，并且将反应混合物在室温搅拌过夜。加入二氯甲烷(1mL)和额外的p-TsOH一水合物(10mg，0.05mmol)，然后将反应混合物搅拌2h。反应混合物用1N NaOH(水溶液)(1mL)中和，然后分离各层。有机层用盐水洗涤，然后浓缩，并且经制备性HPLC(CH3CN/H2O，含有10nM NH4OAc)纯化，得到rac-(3aR，14bS)-10-环己基-N3a(2-(二甲基氨基)乙基)-N7-((二甲基氨基)磺酰基)-N3a，2，2-三甲基-13-(甲氧基)-4H-[1，3]二氧戊环并[4，5-d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-3a，7(14bH)-二甲酰胺(16.7mg，0.024mmol，50％)，为灰白色固体。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ0.31(s，3H)，1.20-2.20(m，13H)，2.54(s，3H)，2.58(s，3H)，2.97(s，6H)，2.72-3.11(m，5H)，3.50-3.89(m，4H)，3.94(s，3H)，4.40-4.63(m，1H)，5.47-5.52(m，1H)，7.10-7.17(m，1H)，7.21-7.27(m，1H)，7.33-7.47(m，H)，7.61-7.67(m，1H)，7.76-7.86(m，1H)，8.03-8.09(m，1H).LCMS：m/e 696(M+H)+，保留时间3.19分钟，柱B，4分钟梯度。
实施例2
rac-(3aR，14bS)-10-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-3a-(((2R，6S)-2，6-二甲基-吗啉-4-基)羰基)-13-(甲氧基)-2-氧代-3a，14b-二氢-4H-[1，3]二氧戊环并[4，5-d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-7-甲酰胺。将rac-(5R，6S)-13-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-6-(((2S，6R)-2，6-二甲基-吗啉-4-基)羰基)-5，6-二羟基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-10-甲酰胺(35mg，0.052mmol)和1，1’-羰基二咪唑(58mg，0.36mmol)于THF(2mL)中的溶液密封在反应容器中，然后经微波辐射在75℃加热20min(～50％转化率)。在80℃继续加热40min(～80％转化率)。将反应混合物冷却至室温，浓缩干燥，将残余物溶于MeOH(～2mL)中，过滤后，经制备性HPLC(CH3CN/H2O，含有10mM NH4OAc)纯化，得到rac-(3aR，14bS)-10-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-3a-(((2R，6S)-2，6-二甲基-吗啉-4-基)羰基)-13-(甲氧基)-2-氧代-3a，14b-二氢-4H-[1，3]二氧戊环并[4，5-d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-7-甲酰胺(20.6mg，0.030，57％)，为白色粉末。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.04-2.11(m，16H)，2.41-2.55(m，1H)，2.80-2.95(m，1H)，3.02(s，6H)，3.02-3.13(m，1H)，3.48-3.82(m，2H)，3.90(s，3H)，4.05-4.26(m，1H)，4.32-4.59(m，3H)，5.94(d，J＝14.3Hz，1H)，7.11(br d，J＝8.4Hz，1H)，7.20(d，J＝2.2Hz，1H)，7.30-7.39(m，1H)，7.43(d，J＝8.4Hz，1H)，7.78-7.91(m，2H).LCMS：m/e 693(M-H)-，保留时间2.77分钟，柱A，4分钟梯度。
实施例3
rac-(3aR，14bS)-10-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-3a-(((2R，6S)-2，6-二甲基-吗啉-4-基)羰基)-2，2-二甲基-13-(甲氧基)-3a，14b-二氢-4H-[1，3]二氧戊环并[4，5-d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-7-甲酰胺。向rac-(5R，6S)-13-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-6-(((2S，6R)-2，6-二甲基-吗啉-4-基)羰基)-5，6-二羟基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-10-甲酰胺(60mg，0.090mmol)于CH2Cl2(3mL)中的溶液中，加入2-甲氧基丙烯(0.5mL，5.2mmol)和TsOH·H2O(50mg.0.26mmol)。将反应溶液在室温搅拌2h，浓缩干燥后，溶于MeOH中，经SPE柱(C18，500mg，MeOH)过滤后，浓缩，然后经制备性HPLC(CH3CN/H2O，含有10mM NH4OAc)纯化，得到rac-(3aR，14bS)-10-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-3a-(((2R，6S)-2，6-二甲基-吗啉-4-基)羰基)-2，2-二甲基-13-(甲氧基)-3a，14b-二氢-4H-[1，3]二氧戊环并[4，5-d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-7-甲酰胺(15.5mg，0.022，24％)，为淡黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.28(s，3H)，0.88-2.12(m，19H)，2.36-2.49(m，1H)，2.85-3.01(m，2H)，3.03(s，6H)，3.48-3.80(m，2H)，3.88(s，3H)，3.89-4.04(m，1H)，4.22-4.50(m，2H)，4.76-4.96(m，1H)，5.52-5.59(m，1H)，7.01(dd，J＝8.4，2.6Hz，1H)，7.20-7.33(m，2H)，7.37(d，J＝8.4Hz，1H)，7.78-7.91(m，2H).LCMS：m/e 707(M-H)-，保留时间3.26分钟，柱A，4分钟梯度。
实施例4
rac-(3aR，14bS)-10-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-3a-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-13-(甲氧基)-2-氧代-3a，14b-二氢-4H-[1，3]二氧戊环并[4，5-d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-7-甲酰胺。将rac-(5R，6S)-13-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-6-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-5，6-二羟基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-10-甲酰胺(31mg，0.045mmol)和1，1’-羰基二咪唑(120mg，0.74mmol)于TEA(0.1mL)和THF(1mL)中的溶液密封在反应容器中，然后经微波辐射在90℃加热2h。将反应混合物冷却至室温，浓缩干燥后，溶于MeOH中，过滤后，经制备性HPLC(CH3CN/H2O，含有10mM NH4OAc)纯化。含有所需产物的物质再次经制备性HPLC(MeOH/H2O，含有10mM TFA)纯化，得到rac-(3aR，14bS)-10-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-3a-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-13-(甲氧基)-2-氧代-3a，14b-二氢-4H-[1，3]二氧戊环并[4，5-d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-7-甲酰胺(9.5mg，0.013mmol，30％)，为白色固体。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ1.20-2.33(m，14H)，2.87-3.02(m，5H)，3.04(s，6H)，3.35-4.52(m，3H)，3.96(s，3H)，4.23(br d，J＝14.6，1H)，4.75(br d，J＝14.6，1H)，4.95(br s，1H)，5.16(br s，1H)，6.11(br s，1H)，7.26-7.32(m，2H)，7.55(d，J＝8.8Hz，1H)，7.63(dd，J＝8.4，1.5Hz，1H)，7.94(d，J＝8.4Hz，1H)，7.99(br s，1H).LCMS：m/e 706(M+H)+，保留时间1.56分钟，柱C，2分钟梯度。
实施例5
rac-(3aR，14bS)-10-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-2，2-二甲基-3a-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-13-(甲氧基)-3a，14b-二氢-4H-[1，3]二氧戊环并[4，5-d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-7-甲酰胺。向rac-(5R，6S)-13-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-6-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-5，6-二羟基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-10-甲酰胺(42mg，0.062mmol)和2-甲氧基丙烯(0.5mL，5.2mmol)于CH2Cl2(0.5mL)中的溶液中，加入TsOH·H2O(5mg.0.026mmol)。将反应溶液在室温搅拌过夜，浓缩干燥后，溶于MeOH中，过滤后，经制备性HPLC(CH3CN/H2O，含有10mM NH4OAc)纯化，得到rac-(3aR，14bS)-10-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-2，2-二甲基-3a-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-13-(甲氧基)-3a，14b-二氢-4H-[1，3]二氧戊环并[4，5-d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-7-甲酰胺(6.7mg，0.1mmol，15％)，为灰白色固体。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ0.33(s，3H)，1.19-2.54(m，22H)，2.65-2.78(m，0.5H)，2.90-3.02(m，2H)，3.03(s，6H)，3.16-3.28(m，0.5H)，3.91(d，J＝15.0Hz，0.5H)，3.94(s，3H)，4.05(d，J＝15.0Hz，0.5H)，4.34(d，J＝15.0Hz，0.5H)，4.58(d，J＝15.0Hz，0.5H)，4.66-4.74(m，1H)，5.15-5.22(m，0.5H)，5.45-5.59(m，1.5H)，7.15(dd，J＝8.4，2.6Hz，1H)，7.22-7.29(m，1H)，7.45(dd，J＝8.4Hz，1H)，7.59(dd，J＝8.4，1.8Hz，1H)，7.86-7.93(m，2H).LCMS：m/e 718(M-H)-，保留时间1.60分钟，柱F，2分钟梯度。
实施例6
rac-(3aR，14bS)-10-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-3a-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-13-(甲氧基)-3a，14b-二氢-4H-[1，3]二氧戊环并[4，5-d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-7-甲酰胺。向rac-(5R，6S)-13-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-6-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-5，6-二羟基-3-(甲氧基)-6，7-二氢-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-10-甲酰胺(47mg，0.069mmol)于CH2Cl2(1mL)和CH2Br2(1mL)中的溶液中，加入nBu4N+I-(16mg.0.043mmol)和5.5N NaOH(水溶液)(0.6mL)。将反应溶液在室温搅拌过夜，浓缩除去CH2Cl2，用CH2Br2(1mL)稀释，并且在密封容器中于50℃搅拌过夜。将粗反应混合物浓缩干燥，经制备性HPLC(MeOH/H2O，含有10mMTFA)纯化，得到rac-(3aR，14bS)-10-环己基-N-((二甲基氨基)磺酰基)-3a-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-13-(甲氧基)-3a，14b-二氢-4H-[1，3]二氧戊环并[4，5-d]吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂
-7-甲酰胺(14.5mg，0.21mmol，30％)，为亮黄色固体。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.21-2.39(m，16H)，2.74，(s，3H)，2.84-2.97(m，2H)，3.02(s，6H)，3.44-3.54(m，1H)，3.87(d，J＝15.0，1H)，3.95(s，3H)，4.08-4.27(m，2H)，5.23-5.29(m，2H)，5.43-5.46(m，1H)，5.93(d，J＝7.7Hz，1H)，7.11-7.19(m，2H)，7.47(d，J＝8.1Hz，1H)，7.58(dd，J＝8.4，1.5Hz，1H)，7.94(d，J＝8.4Hz，1H)，7.99(br s，1H).LCMS：m/e 692(M+H)+，保留时间1.89分钟，柱C，2分钟梯度。
对本领域的技术人员明显的是，本发明不限于前面示例说明的实施例，且其可具体化为其它具体形式，而不偏离其本质属性。因此，理想的是，实施例从各方面将考虑为示例性的，当提及权利要求书时而非将权利要求书限制至上述实施例。因而，在权利要求书等价物的含义和范围内的各种变化也包括在本发明的范围内。
Claims (14)
1.式I化合物或其可药用盐
其中：
R1为CO2R8或CONR9R10；
R2为氢、烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基或二烷基氨基烷基；
R3为氢、烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基或二烷基氨基烷基；或
NR2R3一起为氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、N-(烷基)哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、高哌啶基或高吗啉基，并且所述基团被0-3个烷基取代基取代；或
NR2R3一起为
或
R4为氢或烷基；
R5为氢或烷基；或
R4和R5一起为氧代；
R6为氢、卤素、烷基、烯基、羟基、苄氧基或烷氧基；
R7为环烷基；
R8为氢或烷基；
R9为氢、烷基、烷基SO2-、环烷基SO2-、卤代烷基SO2-、(R11)(R12)NSO2-或(R13)SO2-；
R10为氢或烷基；
R11为氢或烷基；
R12为氢或烷基；
R13为氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、N-(烷基)哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、高哌啶基或高吗啉基；以及
R14为氢、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、烷基羰基、环烷基羰基、卤代烷基羰基、烷氧基羰基、烷基SO2-、环烷基SO2-、卤代烷基SO2-、氨基羰基、(烷基氨基)羰基、(二烷基氨基)羰基、苄基、苄氧基羰基或吡啶基。
2.权利要求1的化合物或其可药用盐，其中R1为CONR9R10；R2为二烷基氨基烷基；R3为烷基；或NR2R3一起为吗啉基，所述吗啉基被2个烷基取代基取代；或NR2R3一起为
R4为氢或烷基；R5为氢或烷基；或R4和R5一起为氧代；R6为烷氧基；R7为环烷基；R9为(R11)(R12)NSO2-；R11为烷基；R12为烷基；以及R14为烷基。
3.权利要求2的化合物或其可药用盐，其中R1为CONHSO2NMe2；R2为二甲基氨基乙基；R3为甲基；或NR2R3一起为3，5-二甲基吗啉基；或NR2R3一起为3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基；R4为氢或甲基；R5为氢或甲基；或R4和R5一起为氧代；R6为甲氧基；以及R7为环己基。
4.权利要求1的化合物，其中R1为CONR9R10；R9为烷基SO2-、环烷基SO2-、卤代烷基SO2-、(R11)(R12)NSO2-或(R13)SO2-；以及R10为氢。
5.权利要求1的化合物，其中R6为氢。
6.权利要求1的化合物，其中R6为甲氧基。
7.权利要求1的化合物，其中R7为环己基。
8.权利要求1的化合物，其中R9为(R11)(R12)NSO2-或(R13)SO2-。
9.权利要求1的化合物，其具有下述立体化学性质
10.权利要求1的化合物或其可药用盐，所述化合物选自：
11.一种组合物，其包含权利要求1所述的化合物或其可药用盐和可药用载体。
12.权利要求11所述的组合物，其还包含至少一种额外的对HCV具有治疗益处的化合物，其中所述化合物选自干扰素、环孢菌素、白细胞介素、HCV金属蛋白酶抑制剂、HCV丝氨酸蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV解螺旋酶抑制剂、HCV NS4B蛋白抑制剂、HCV进入抑制剂、HCV组装抑制剂、HCV释出抑制剂、HCV NS5A蛋白抑制剂、HCV NS5B蛋白抑制剂和HCV复制子抑制剂。
13.一种治疗丙型肝炎感染的方法，所述方法包括向患者给药治疗有效量的权利要求1的化合物。
14.权利要求13的方法，其还包括给药至少一种额外的对HCV具有治疗益处的化合物，其中所述化合物选自干扰素、环孢菌素、白细胞介素、HCV金属蛋白酶抑制剂、HCV丝氨酸蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV解螺旋酶抑制剂、HCV NS4B蛋白抑制剂、HCV进入抑制剂、HCV组装抑制剂、HCV释出抑制剂、HCV NS5A蛋白抑制剂、HCV NS5B蛋白抑制剂和HCV复制子抑制剂。
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