KR20080004593A

KR20080004593A - Ｎ-[1-(2-에톡시에틸)-5-(Ｎ-에틸-Ｎ-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1Ｈ-피라졸로[4,3-ｄ]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 무수 결정 형태

Info

Publication number: KR20080004593A
Application number: KR1020077026098A
Authority: KR
Inventors: 데이비드 앤드류 앤트위슬; 피터 발렌스 마샬; 스테판 콜린 존 테일러
Original assignee: 화이자 인코포레이티드
Priority date: 2005-05-12
Filing date: 2006-05-03
Publication date: 2008-01-09
Also published as: JP2006316058A; CA2608018A1; EA012577B1; CY1111171T1; HK1116485A1; US20120208830A1; NZ564187A; WO2006120552A3; JP2009137987A; US8227475B2; JP4996631B2; IL186693A; EP1881985A2; CR9505A; US8796287B2; IL186693A0; MX2007013215A; BRPI0609225A2; WO2006120552A2; AU2006245416A1

Abstract

본 발명은 (1) N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 무수 결정 형태, (2) 1종 이상의 상기 형태를 포함하는 제약 조성물, (3) 1종 이상의 상기 형태를 이용하여 포스포디에스테라제-5 매개 증상을 치료하는 방법, 및 (4) 상기 형태의 제조 방법에 관한 것이다. N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드는 하기 화학식 1을 갖는다.

<화학식 1>

무수 결정 형태, A형, B형, C형, PDE-5 매개 증상

Description

Ｎ-[1-(2-에톡시에틸)-5-(Ｎ-에틸-Ｎ-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1Ｈ-피라졸로[4,3-ｄ]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 무수 결정 형태{Anhydrous Crystalline Forms of N-[1-(2-ethoxyethyl)-5-(N-ethyl-N-methylamino)-7-(4-methylpyridin-2-yl-amino)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-3-carbonyl]methanesulfonamide}

<관련 출원의 상호 참조>

본 출원은 2005년 5월 12일에 출원한 미국 가출원 번호 제60/680,445호 및 2005년 5월 17일에 출원한 미국 가출원 번호 제60/681,711호를 우선권으로 주장하며, 이들의 전문은 본원에 참고로 포함된다.

본 발명은 전반적으로 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 결정 형태에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 (1) N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 무수 결정 형태, (2) 1종 이상의 상기 형태를 포함하는 제약 조성물, (3) 1종 이상의 상기 형태를 이용하여 포스포디에스테라제-5 매개 증상을 치료하는 방법, 및 (4) 상기 형태의 제조 방법에 관한 것이다.

화합물 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드는 하기 화학식 1을 갖는다.

N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 합성은 공개된 PCT 출원 WO 2005/049616호 ("화합물 출원")의 실시예 115에 기재되어 있다. 상기 화합물 출원은 또한 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드가 PDE-5 매개 증상, 예컨대 고혈압의 치료에 사용될 수 있는 포스포디에스테라제-5 ("PDE-5") 억제제임을 개시한다.

상이한 고상 형태의 제약학적 화합물은 상이한 물리적 특성을 가질 수 있다. 이러한 물리적 특성의 차이는 예를 들어 제약학적 화합물의 제조, 가공, 제제화 또는 투여 방법에 영향을 미칠 수 있다. 따라서, 화합물의 제조, 가공, 제제화 또는 투여에 있어서 다른 고상 형태에 비해 이점을 제공하는 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3- 카르보닐]메탄술폰아미드의 신규한 고상 형태의 확인이 요망된다. 하기 논의되는 바와 같이, N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 세 가지 신규한 무수 결정 형태가 확인되었다.

<발명의 요약>

한 실시양태에서, 본 발명은 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 무수 결정 형태에 관한 것이다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 A형 무수 결정 형태 ("A형")에 관한 것이다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 B형 무수 결정 형태 ("B형")에 관한 것이다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 C형 무수 결정 형태 ("C형")에 관한 것이다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 A형, B형 및 C형으로 이루어진 군으로부터 선택된 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 2종 이상의 형태를 포함하는 조성물에 관한 것이다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 A형, B형 및 C형으로 이루어진 군으로부터 선택된 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 1종 이상의 형태, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 A형, B형 및 C형으로 이루어진 군으로부터 선택된 치료 유효량의 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 1종 이상의 형태를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, PDE-5 매개 증상의 치료 방법에 관한 것이다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 A형, B형 및 C형의 제조 방법에 관한 것이다.

본 발명의 추가의 실시양태는 본 출원의 명세서 전반에서 논의된다.

도 1은 A형에 대한 예시적인 X-선 분말 회절 패턴을 도시한다.

도 2는 A형에 대한 계산된 X-선 분말 회절 패턴을 도시한다.

도 3은 B형에 대한 예시적인 X-선 분말 회절 패턴을 도시한다.

도 4는 C형에 대한 예시적인 X-선 분말 회절 패턴을 도시한다.

도 5는 A형에 대한 예시적인 DSC 열 분석도를 도시한다.

도 6은 B형에 대한 예시적인 DSC 열 분석도를 도시한다.

도 7은 C형에 대한 예시적인 DSC 열 분석도를 도시한다.

도 8은 A형에 대한 예시적인 FT-IR 스펙트럼을 도시한다.

도 9는 B형에 대한 예시적인 FT-IR 스펙트럼을 도시한다.

도 10은 C형에 대한 예시적인 FT-IR 스펙트럼을 도시한다.

도 11은 A형에 대한 예시적인 라만 스펙트럼을 도시한다.

도 12는 B형에 대한 예시적인 라만 스펙트럼을 도시한다.

도 13은 C형에 대한 예시적인 라만 스펙트럼을 도시한다.

도 14는 실시예 1에서 제조된 물질에 대한 X-선 분말 회절 패턴을 도시한다.

도 15는 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 제조를 위한 예시적인 대안적인 반응식을 도시한다

<바람직한 실시양태의 상세한 설명>

화합물의 고상 형태는 (1) 몰 부피, 밀도 및 흡습성과 같은 팩킹 특성, (2) 융점, 증기압 및 용해도와 같은 열역학적 특성, (3) 용해 속도 및 안정성 (예컨대, 주위 온도에서, 특히 수분 및 저장 조건에 대한 안정성)과 같은 동적 특성, (4) 표면적, 습윤성, 계면 장력 및 형태와 같은 표면 특성, (5) 경도, 인장 강도, 압축성, 취급성, 유동성 및 블렌드와 같은 기계적 특성, 또는 (6) 여과 특성을 비롯한 화합물의 물리적 특성에 상당한 영향을 미칠 수 있다. 고상 형태의 선택 및 조절은 약리학적 제제인 화합물의 경우 특히 중요하다. 고상 형태의 주의 깊은 선택 및 조절은 화합물과 관련된 합성, 가공, 제제화 또는 투여의 문제점을 감소시킬 수 있다.

화합물 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 세 가지 신규한 무수 결정 형태 (A형, B형 및 C형)가 확인되었다. 하기에 더욱 상세하게 설명되는 바와 같이, A형, B형 및 C형은 각각 서로 구별되는 물리적 특성을 갖는다.

본원에 사용된 바와 같이, "N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드" (뿐만 아니라 상응하는 "구조체 1")의 명명은 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 모든 호변 이성질체 형태를 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 두 가지 호변 이성질체는 호변 이성질체 (1) 및 호변 이성질체 (2) (하기 공명 구조에 의해 예시됨)로서 하기에 도시된다.

특정 이론에 구애되는 것은 아니지만, A형은 상기 호변 이성질체 (1)로서 결정화되고, B형 및 C형은 각각 상기 호변 이성질체 (2)로서 결정화되는 것으로 가정된다.

A. 약어 및 정의

¹H NMR과 관련하여 사용되는 기호 "δ"는 ¹H NMR 화학적 이동을 나타낸다.

¹H NMR과 관련하여 사용되는 약어 "br"는 넓은 ¹H NMR 신호를 나타낸다.

¹H NMR과 관련하여 사용되는 약어 "d"는 이중선 ¹H NMR 피크를 나타낸다.

약어 "m/z"는 질량 스펙트럼 피크를 나타낸다.

¹H NMR과 관련하여 사용되는 약어 "m"은 다중선 ¹H NMR 피크를 나타낸다.

¹H NMR과 관련하여 사용되는 약어 "q"는 4중선 ¹H NMR 피크를 나타낸다.

¹H NMR과 관련하여 사용되는 약어 "s"는 단일선 ¹H NMR 피크를 나타낸다.

¹H NMR과 관련하여 사용되는 약어 "t"는 삼중선 ¹H NMR 피크를 나타낸다.

용어 "DSC"는 시차 주사 열량계를 나타낸다.

용어 "HPLC"는 고압 액체 크로마토그래피를 나타낸다.

용어 "PXRD"는 X-선 분말 회절을 나타낸다.

용어 "PDE-5 매개 증상" 및 "포스포디에스테라제-5 매개 증상"은 PDE-5에 의한 직접적인 조절을 통해 또는 신호 전달 경로의 성분으로서 PDE-5에 의한 간접적인 조절을 통해 PDE-5에 의해 매개되는 임의의 증상을 나타낸다.

용어 "조성물"은 1종 이상의 요소 또는 성분을 혼합 또는 조합하여 얻은 제품을 나타낸다.

N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드와 관련하여 사용된 용어 "결정 형태"는 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드 분자가 (i) 구별되는 단위 셀을 포함하고, (ii) X-선 조사시에 회절 피크를 나타내는, 구별되는 결정 격자를 형성하도록 배열된 고상 형태를 나타낸다.

본원에 사용된 용어 "결정화"는 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드 출발 물질을 제조하기 위해 적용되는 상황에 따라 결정화 및/또는 재결정화를 나타낼 수 있다.

용어 "순도"는 전형적인 HPLC 검정에 따른 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 화학적 순도를 나타낸다.

용어 "상 순도"는 본원에 기재된 분석 방법에 의해 측정되는 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 특정 고상 형태와 관련된 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 고상 순도를 나타낸다.

용어 "제약상 허용되는 담체"는 조성물의 다른 성분들과 상용성이고 대상체에게 무해한 담체를 나타낸다. 이러한 담체는 화학적 제제를 담지하거나 수송하는 것과 관련된 제약상 허용되는 물질, 조성물 또는 비히클, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 용매 또는 캡슐화 물질일 수 있다. 바람직한 조성은 투여 방법에 따라 좌우된다.

용어 "예방하다," "예방" 또는 "예방하는"은 대상체에서 임상전 사건 증상의 개시를 모두 방지하거나, 증상의 임상전 사건 단계의 개시를 방지하는 것을 나타낸다. 예방은 증상의 발전 위험이 있는 대상체의 예방적 처치를 포함하나, 이로 한정되는 것은 아니다.

용어 "상대 강도"는 동일한 회절 패턴에서 가장 강한 회절 피크의 강도에 대한 개별 회절 피크 (또는 경우에 따라 스펩트럼 선)의 강도의 비를 나타낸다. 달리 말하면, 가장 강한 피크의 강도를 100으로 설정하고, 다른 모든 강도들은 그에 대한 비율로 결정된다.

용어 "치료 유효량"은 연구자 또는 임상의가 표적으로 하는 조직, 시스템 또는 동물의 생물학적 또는 의학적 반응을 이끌어내는 약물 또는 약제의 양을 나타낸다.

용어 "치료" (및 상응하는 용어 "치료하다" 및 "치료하는")은 대상체의 경감, 회복 및 예방적 처치를 나타낸다. 용어 "경감적 처치"는 대상체에서 증상을 치유하지 않고 증상의 효과 또는 강도를 덜어주거나 감소시키는 것을 나타낸다. 용어 "예방적 처치" (및 상응하는 용어 "예방 처치")는 대상체에서 증상의 발생을 방지하는 처치를 나타낸다. 용어 "회복적 처치"는 대상체에서 증상의 진행을 멈추거나, 증상의 병리학적 징후를 감소시키거나, 증상을 전체적으로 제거하는 처치를 나타낸다.

B. 결정 형태의 특징 분석

화합물의 결정 상태는 단일 결정 구조, X-선 분말 회절 패턴, 융점, 적외선 흡수 분광 패턴, 및 라만 분광 패턴을 비롯한 여러 가지 결정학적 파라미터에 의해 설명될 수 있다.

1. 단일 결정 X-선 분석

A형의 결정 구조는 단일 결정 X-선 회절 분석에 의해 결정될 수 있다. 이 분석에 사용된 단일 결정 X-선 회절 데이타를 브루커(Bruker) SMART APEX 단일 결정 X-선 회절기 및 Mo Kα 방사선 조사를 이용하여 실온에서 수집하였다. 30초의 노출 시간을 이용하여 ω에서 0.3° 커버하는 일련의 노출로부터 강도들을 통합하고 (SMART v5.622 (제어) 및 SAINT v6.02 (통합) 소프트웨어, 1994년, 미국 위스콘신주 매디슨 소재의 브루커 AXS 인크.(Bruker AXS Inc.)), 전체 데이타 집합은 헤미스피어 초과이었다. 멀티스캔 방법 (SADABS, 문헌 [Program for scaling and correction of area detector data, G. M. Sheldrick, University of Goettingen, 1997 (based on the Method of R. H. Blessing, Acta Cryst. 1995, A51, 33-38])을 이용하여 흡수에 대한 데이타를 보정하였다. 그 후, SHELXS-97 (문헌 [Program for crystal structure refinement. G. M. Sheldrick, University of Goettingen, Germany, 1997, release 97-2])을 이용하는 직접적인 방법에 의해 공간 군 P2 ₁/c에서 결정 구조를 해명하고, SHELXL-97을 이용하는 최소 자승 방법에 의해 정제하였다. 선택된 결정 구조 데이타를 표 1A에 요약하였다.

C형의 결정 구조 또한 노출 시간을 120초로 한 것을 제외하고는 A형에 대해 상기 기재된 것과 동일한 방식으로 단일 결정 X-선 회절 분석에 의해 결정하였다. SHELXS-97을 이용하는 직접적인 방법에 의해 공간 군 P-1에서 결정 구조를 해명하고, SHELXL-97을 이용하는 최소 자승 방법에 의해 정제하였다. C형에 대해 선택된 결정 구조 데이타를 표 1B에 요약하였다.

상기 언급된 바와 같이, A형은 호변 이성질체 (1)로서 결정화되고, C형은 호변 이성질체 (2)로서 결정화되는 것으로 가정된다. 단일 결정 X-선 분석은 상기 가정을 뒷받침한다.

2. X-선 분말 회절

A형, B형 및 C형의 결정 구조를 X-선 분말 회절 ("PXRD")을 이용하여 분석하였다. X-선 회절 데이타를 자동 샘플 교체기, θ-θ 측각기, 자동 빔 분기 슬릿, 2차 단색화 장치 및 섬광 계수기를 구비한 브루커 AXS D4 분말 X-선 회절기 (Cu Kα 방사선 조사)를 이용하여 실온에서 수집하였다. 실리콘 웨이퍼 시편 마운트로 절단된 12 mm 직경, 0.25 mm 깊이의 공동에 분말을 충전하여 분석을 위한 샘플을 제조하였다. 40 kV/40 mA에서 작동하는 X-선 관을 이용하여 Cu K-α₁ X-선 (파장 = 1.5406 Å)을 조사하면서 샘플을 회전시켰다. 2° 내지 55°의 2θ 범위에 걸쳐 5초 계수/0.02° 단계로 설정된 연속 방식으로 작동하는 측각기를 이용하여 분석을 수행하였다. A형에 대해 수득한 피크를 상기 단일 결정 구조에서 얻은 계산된 패턴에 대해 정렬하였다. B형 및 C형의 경우, 수득한 피크를 실리콘 참조 표준에 대해 정렬하였다.

A형의 경우, 2-θ 각, d 간격, 및 상대 강도를 아셀리스 머티리얼즈 스튜디오(Accelrys Materials Studio™) [버젼 2.2]의 "반사 분말 회절" 모듈을 이용하여 단일 결정 구조로부터 계산하였다. 관련 시뮬레이션 파라미터는 각각의 경우 다음과 같다: 파장 = 1.540562 Å (Cu K-α₁), 편광 인자 = 0.5; 및 수도-보이트(Pseudo-Voigt) 프로파일 (U = 0.01, V = -0.001, W = 0.002).

숙련된 결정학자에 의해 이해되는 바와 같이, 하기 표 및 도면에 기록된 다양한 피크의 상대 강도는 수많은 인자, 예컨대 X-선 빔에서 결정의 배향 효과, 분석되는 물질의 순도, 또는 샘플의 결정화 정도로 인해 달라질 수 있다. 피크 위치 또한 샘플 높이의 편차에 따라 이동할 수 있지만, 각각 A형, B형 및 C형에 대한 표 2A, 2C 및 2D에서 정의된 바와 같이 피크 위치는 실질적으로 유지될 것이다. 숙련된 결정학자는 또한 상이한 파장을 이용한 측정은 브래그(Bragg) 식 (nλ = 2d sinθ)에 따라 상이한 이동을 나타낼 것이라는 것을 이해할 것이다. 다른 파장을 사용하여 생성된 이러한 추가의 PXRD 패턴은 본 발명의 결정형 물질의 다른 대표적인 PXRD 패턴으로 여겨지며, 본 발명의 범위 내에 있다.

A형, B형 및 C형을 위한 예시적인 PXRD 패턴을 각각 도 1, 3 및 4에 도시하였다. 표 2A, 2C 및 2D는 각각 A형, B형 및 C형에 대해 2θ 값 및 강도로 나타낸 상응하는 주요 회절 피크를 열거한다. 표 2A는 25％ 초과의 상대 강도를 갖는 A형 피크를 열거한다. 표 2C는 2％ 초과의 상대 강도를 갖는 B형 피크를 열거한다. 표 2D는 10％ 초과의 상대 강도를 갖는 C형 피크를 열거한다.

또한, A형에 대해 계산된 PXRD 패턴을 도 2에 도시한다. 표 2B는 A형에 대해 2θ 값 및 강도로 나타낸 상응하는 계산된 주요 회절 피크를 열거한다. 표 2B는 10％ 초과의 상대 강도를 갖는 계산된 A형 피크를 열거한다.

A형 PXRD

A형은 8.5 ± 0.1, 9.0 ± 0.1, 16.9 ± 0.1, 20.0 ± 0.1, 및 22.5 ± 0.1° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 한 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하고, 또한 9.0 ± 0.1, 16.9 ± 0.1, 20.0 ± 0.1, 및 22.5 ± 0.1° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추가의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1, 9.0 ± 0.1, 및 16.9 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1, 9.0 ± 0.1, 16.9 ± 0.1, 20.0 ± 0.1, 및 22.5 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 상기 실시양태에서, 8.5 ± 0.1, 9.0 ± 0.1, 16.9 ± 0.1, 20.0 ± 0.1, 및 22.5 ± 0.1° 2θ에서 확인된 회절 피크는 전형적으로 약 10％ 이상의 상대 강도를 갖는다.

또다른 실시양태에서, A형은 (a) 8.5 ± 0.1, 9.0 ± 0.1, 16.9 ± 0.1, 20.0 ± 0.1, 및 22.5 ± 0.1° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 회절 피크를 포함하고, (b) 3.6 ± 0.1 및 7.2 ± 0.1° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 회절 피크는 포함하지 않는 PXRD 패턴을 갖는다.

B형 PXRD

B형은 3.6 ± 0.1, 7.2 ± 0.1, 10.1 ± 0.1, 14.4 ± 0.1, 및 23.8 ± 0.1° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 한 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하고, 또한 7.2 ± 0.1, 10.1 ± 0.1, 14.4 ± 0.1 및 23.8 ± 0.1° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추가의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1 및 7.2 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1, 7.2 ± 0.1, 및 23.8 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1, 7.2 ± 0.1, 10.1 ± 0.1, 14.4 ± 0.1, 및 23.8 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 상기 실시양태에서, 3.6 ± 0.1 및 7.2 ± 0.1° 2θ에서 확인된 회절 피크는 전형적으로 10％ 이상의 상대 강도를 갖는다.

또다른 실시양태에서, B형은 (a) 3.6 ± 0.1, 7.2 ± 0.1, 10.1 ± 0.1, 14.4 ± 0.1, 및 23.8 ± 0.1° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 회절 피크를 포함하고, (b) 8.5 ± 0.1, 6.7 ± 0.1, 및 22.5 ± 0.1° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 회절 피크는 포함하지 않는 PXRD 패턴을 갖는다.

C형 PXRD

C형은 6.7 ± 0.1, 10.6 ± 0.1, 14.0 ± 0.1, 17.7 ± 0.1, 및 20.2 ± 0.1° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 한 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 한 실시양태에서, C형은 10.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 한 실시양태에서, C형은 14.0 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 한 실시양태에서, C형은 17.7 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 한 실시양태에서, C형은 20.2 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하고, 또한 10.6 ± 0.1, 14.0 ± 0.1, 17.7 ± 0.1, 및 20.21 ± 0.1° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추가의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1 및 20.2 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1, 17.7 ± 0.1, 및 20.2 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1, 17.7 ± 0.1, 10.6 ± 0.1, 및 20.2 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1, 10.6 ± 0.1, 14.0 ± 0.1, 17.7 ± 0.1, 및 20.2 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 상기 실시양태에서, 6.7 ± 0.1, 10.6 ± 0.1, 14.0 ± 0.1, 17.7 ± 0.1, 및 20.2 ± 0.1° 2θ에서 확인된 회절 피크는 바람직하게는 약 10％ 이상의 상대 강도를 갖는다.

또다른 실시양태에서, C형은 (a) 6.7 ± 0.1, 10.6 ± 0.1, 14.0 ± 0.1, 17.7 ± 0.1, 및 20.2 ± 0.1° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 회절 피크를 포함하고, (b) 3.6 ± 0.1 및 9.0 ± 0.1° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 회절 피크는 포함하지 않는 PXRD 패턴을 갖는다.

3. 시차 주사 열량측정

A형, B형 및 C형 각각을 시차 주사 열량측정 (DSC)을 이용하여 분석하였다. TA 인스트루먼츠(TA Instruments) Q1000 시차 주사 열량계를 이용하여 각각의 분석을 수행하였다. 각 샘플을 질소 퍼지 가스하에 상단 뚜껑이 열린 알루미늄 팬에서 25℃에서 300℃까지 20℃/분으로 가열하였다. 용융 흡열 피크의 온도는 융점으로 기록하였다. DSC 분석으로부터 얻은 데이타는 여러 인자, 예컨대 가열 속도, 샘플의 순도, 결정 크기 및 샘플 크기에 따라 좌우된다. 따라서, 하기 융점은 하기 제조된 샘플의 대표예이다.

A형 DSC

A형 샘플 3.171 mg을 상기 기재된 바와 같이 DSC에 의해 분석하였다. A형의 샘플로부터 얻은 DSC 열 분석도를 도 5에 도시하였다. A형은 174℃ ± 3℃에서 제1 흡열 피크를 나타낸 후, 179℃ ± 3℃에서 발열 재결정화 사건 및 219℃ ± 3℃에서 제2 흡열 피크를 나타낸다. 174℃ ± 3℃에서의 피크는 A형의 융점에 상응한다. 179℃ ± 3℃에서의 발열 재결정화 사건은 B형으로서 용융된 화합물의 재결정화에 상응한다. 219℃ ± 3℃에서의 피크는 B형의 융점에 상응한다.

B형 DSC

B형 샘플 1.603 mg을 상기 기재된 바와 같이 DSC에 의해 분석하였다. B형 샘플로부터 얻은 DSC 열 분석도는 도 6에 도시하였다. B형은 218℃ ± 3℃에서 흡열 피크를 나타내고, 이는 B형의 융점에 상응한다.

C형 DSC

C형 샘플 4.405 mg을 상기 기재된 바와 같이 DSC에 의해 분석하였다. C형 샘플로부터 얻은 DSC 열 분석도는 도 7에 도시하였다. C형은 188℃ ± 3℃에서 제1 흡열 피크를 나타낸 후, 199℃ ± 3℃에서 발열 재결정화 사건 및 219℃ ± 3℃에서 제2 흡열을 나타낸다. 188℃ ± 3℃에서의 피크는 C형의 융점에 상응한다. 199℃ ± 3℃에서의 발열 재결정화 사건은 B형으로서 용융된 화합물에 상응한다. 219℃ ± 3℃에서의 피크는 B형의 융점에 상응한다.

4. 푸리에(Fourier)-변환 적외 분광법

A형, B형 및 C형의 결정 구조를 푸리에-변환 적외 ("FT-IR") 분광법에 의해 분석하였다. A형, B형 및 C형의 샘플에 대한 FT-IR 스펙트럼은 스마트 골든 게이트(Smart Golden Gate) 단일 반사 ATR 부품 (다이아몬드 탑-플레이트 및 셀렌화아연 렌즈)을 구비한 써모니콜렛 아바타(ThermoNicolet Avatar) 360 분광기를 이용하여 수득하였다. 2 cm^-1 분할, 128 스캔, 및 햅 겐젤 아포디제이션(Happ Genzel apodization)을 이용하여 측정치를 수집하였다. FT-IR 스펙트럼을 단일 반사 ATR을 이용하여 기록하였기 때문에, 샘플 제조는 불필요하였다. 그러나, ATR FT-IR의 사용에 의해 적외 밴드의 상대 강도가 KBr 디스크 FT-IR 스펙트럼에서 전형적으로 확인되는 것과는 상이하게 될 것이다. ATR FT-IR의 특성상, 밴드 강도는 일반적으로 고파수 영역에서 저파수 영역으로 감에 따라 증가한다. 달리 언급하지 않는다면 실험 오차는 ± 2 cm^-1이었다.

A형, B형 및 C형에 대한 예시적인 FT-IR 스펙트럼을 각각 도 8, 9 및 10에 도시하였다. 표 4A, 4B 및 4C는 각각 A형, B형 및 C형에 대한 상응하는 독특한 지정가능한 흡수 밴드를 열거한다.

A형 FT-IR

A형은 696 ± 2, 1085 ± 2, 1188 ± 2, 1540 ± 2, 및 3247 ± 3 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 한 실시양태에서, A형은 3247 ± 3 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 3247 ± 3 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하고, 또한 696 ± 2, 1085 ± 2, 1188 ± 2, 및 1540 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 3247 ± 3 및 696 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 696 ± 2, 1188 ± 2, 및 3247 ± 3 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 696 ± 2, 1188 ± 2, 1540 ± 2, 및 3247 ± 3 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 696 ± 2, 1085 ± 2, 1188 ± 2, 1540 ± 2, 및 3247 ± 3 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다.

또다른 실시양태에서, A형은 (a) 696 ± 2, 1085 ± 2, 1188± 2, 1540± 2, 및 3247 ± 3 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 흡수 밴드를 포함하고, (b) 1645 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드는 포함하지 않는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다.

B형 FT-IR

B형은 722 ± 2, 920 ± 2, 1211 ± 2, 1395 ± 2, 및 1452 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 1452 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 1452 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하고, 또한 722 ± 2, 920 ± 2, 1211 ± 2, 및 1395 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추가의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다.또다른 실시양태에서, B형은 1452 ± 2 및 1395 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 1211 ± 2, 1395 ± 2, 및 1452 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 722 ± 2, 1211 ± 2, 1395 ± 2, 및 1452 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 722 ± 2, 920 ± 2, 1211 ± 2, 1395 ± 2, 및 1452 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 IR 스펙트럼을 갖는다.

또다른 실시양태에서, B형은 (a) 722 ± 2, 920 ±2; 1211 ± 2, 1395 ± 2, 및 1452 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 흡수 밴드를 포함하고, (b) 962 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드는 포함하지 않는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다.

C형 FT-IR

C형은 661 ± 2, 703 ± 2, 797 ± 2, 881 ± 2, 909 ± 2, 및 1269 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 881 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 881 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하고, 또한 661 ± 2, 703 ± 2, 797 ± 2, 909 ± 2, 및 1269 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추가의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 881 ± 2 및 661 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 661 ± 2, 797 ± 2, 및 881 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 661 ± 2, 703 ± 2, 797 ± 2, 및 881 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 661 ± 2, 703 ± 2, 797 ± 2, 881 ± 2, 및 909 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 661 ± 2, 703 ± 2, 797 ± 2, 881 ± 2, 909 ± 2, 및 1269 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다.

또다른 실시양태에서, C형은 (a) 661 ± 2, 703 ± 2, 881 ± 2, 909 ± 2, 및 1269 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 흡수 밴드를 포함하고, (b) 688 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드는 포함하지 않는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 (a) 661 ± 2, 703 ± 2, 797 ± 2, 881 ± 2, 909 ± 2, 및 1269 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 흡수 밴드를 포함하고, (b) 696 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드는 포함하지 않는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 (a) 661 ± 2, 703 ± 2, 797 ± 2, 881 ± 2, 909 ± 2, 및 1269 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 흡수 밴드를 포함하고, (b) 688 ± 2 또는 696 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 흡수 밴드는 포함하지 않는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다.

상기 언급한 바와 같이, A형은 호변 이성질체 (1)로서 결정화되고, B형 및 C형은 각각 호변 이성질체 (2)로서 결정화되는 것으로 가정하였다. FT-IR 분석은 상기 가정을 뒷받침한다. 특히, C형 FT-IR 스펙트럼은 1644 ± 2 cm^-1에서의 중간-강한 흡수 밴드를 나타내고, B형 FT-IR 스펙트럼은 1646 ± 2 cm^-1에서의 강한 흡수 밴드를 나타낸다. 이들 밴드는 호변 이성질체 (2)와 일치하는 비환형(acyclic) C=N 스트레치 주파수에 상응하는 것으로 믿어진다. 반대로, A형 FT-IR 스펙트럼은 상응하는 주파수에서 흡수 밴드를 나타내지 않는다. A형은 호변 이성질체 (1)로서 결정화되었기 때문에 비환형 C=N 스트레치 주파수를 갖지 않는 것으로 믿어진다.

5. 푸리에-변환 라만 분광법

A형, B형 및 C형 각각을 푸리에-변환 라만 ("라만") 분광법을 이용하여 분석하였다. A형, B형 및 C형에 대한 라만 스펙트럼은 써모니콜렛(ThermoNicolet) 960 라만 분광기를 이용하여 얻었다. 각각의 샘플 (대략 5 mg)을 유리 바이알에 넣고, 여기를 위해 1064.5 nm Nd-YAG 레이저 전력에 노출시켰다. 2 cm^-1 분할에서 데이타를 수집하고, 라만 이동의 함수로서 라만 강도를 측정하였다. 데이타를 햅-겐젤 아포디제이션을 이용하여 푸리에 변환으로서 가공하였다. 달리 언급하지 않는 한, 실험 오차는 ± 2 cm^-1이었다.

A형 (측정 조건: 2000 스캔, 레이저 전력: 750 mW, 샘플에서의 레이저 전력: 400 mW), B형 (측정 조건: 4000 스캔, 레이저 전력: 600 mW, 샘플에서의 레이저 전력: 340 mW), 및 C형 (측정 조건: 960 스캔, 레이저 전력: 600 mW, 샘플에서의 레이저 전력: 340 mW)에 대한 예시적인 라만 스펙트럼을 각각 도 11, 12 및 13에 도시하였다. X-축은 라만 이동 (cm^-1)이고, Y-축은 강도이다. 강도는 스펙트럼에서 주요 흡수 밴드에 대해 지정된 강도이며, 기준선으로부터 측정한 절대 값을 기준으로 하지 않는다. 표 5A, 5B 및 5C는 각각 A형, B형 및 C형에 대한 상응하는 특징적인 라만 밴드를 열거한다.

A형 라만

A형은 993 ± 2, 1383 ± 2, 1473 ± 2, 1569 ± 2, 및 3255 ± 3 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 3255 ± 3 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 3255 ± 3 cm^-1에서의 밴드를 포함하고, 또한 993 ± 2, 1383 ± 2, 1473 ± 2, 및 1569 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추가의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 1569 ± 2 및 3255± 3 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 1473 ± 2, 1569 ± 2, 및 3255 ± 3 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 1383 ± 2, 1473 ± 2, 1569 ± 2, 및 3255 ± 3 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 993 ± 2, 1383 ± 2, 1473 ± 2, 1569 ± 2, 및 3255 ± 3 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다.

또다른 실시양태에서, A형은 (a) 993 ± 2, 1383 ± 2, 1473 ± 2, 1569 ± 2, 및 3255 ± 3 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 밴드를 포함하고, (b) 1652 ± 2 cm^-1에서의 밴드는 포함하지 않는 라만 스펙트럼을 갖는다.

B형 라만

B형은 689 ± 2, 1299 ± 2, 1456 ± 2, 및 1535 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 1299 ± 2 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 1299 ± 2 cm^-1에서의 밴드를 포함하고, 또한 689 ± 2, 1456 ± 2, 및 1535 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추가의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 689 ± 2 및 1299± 2 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 689 ± 2, 1299 ± 2, 및 1535 ± 2 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 689 ± 2, 1299 ± 2, 1456 ± 2, 및 1535 ± 2 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다.

또다른 실시양태에서, B형은 (a) 689 ± 2, 1299 ± 2, 1456 ± 2, 및 1535 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 밴드를 포함하고, (b) 1316 ± 2 cm^-1에서의 밴드는 포함하지 않는 라만 스펙트럼을 갖는다.

C형 라만

C형은 707 ± 2, 1447 ± 2, 및 2988 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 2988 ± 2 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 2988 ± 2 cm^-1에서의 유의한 밴드를 포함하고, 또한 707 ± 2 및 1447 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추가의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 707 ± 2 및 2988 ± 2 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 707 ± 2, 1447 ± 2, 및 2988 ± 2 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다.

또다른 실시양태에서, C형은 (a) 707 ± 2, 1447 ± 2, 및 2988 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 밴드를 포함하고, (b) 1417 ± 2 cm^-1에서의 밴드는 포함하지 않는 라만 스펙트럼을 갖는다.

상기 언급한 바와 같이, A형은 호변 이성질체 (1)로서 결정화되고, B형 및 C형은 각각 호변 이성질체 (2)로서 결정화되는 것으로 가정된다. FT-라만 분석은 상기 가정을 뒷받침한다. 특히, C형 FT-라만 스펙트럼은 1651 ± 2 cm^-1에서의 약한 라만 밴드를 나타내고, B형 FT-라만 스펙트럼은 1652 ± 2 cm^-1에서의 중간 라만 밴드를 나타낸다. 이들 밴드는 호변 이성질체 (2)와 일치하는 비환형 C=N 스트레치 주파수에 상응하는 것으로 믿어진다. 반대로, A형 FT-라만 스펙트럼은 상응하는 주파수에서 라만 밴드를 나타내지 않는다. A형은 호변 이성질체 (1)로서 결정화되었기 때문에, 비환형 C=N 스트레치 주파수를 갖지 않는 것으로 믿어진다.

C. A형, B형 및 C형의 특징

1. 열역학적 안정성

A형, B형 및 C형은 상이한 열역학적 안정성을 갖는다. B형은 주위 온도에서뿐 아니라 승온에서 A형에 비해 열역학적으로 더 안정하다 (하기 실시예 13 참조). 그러나, B형과 C형은 호변전이성(enantiotropic) 관계이다. B형 및 C형의 열역학적 안정성의 교차는 약 40℃ 내지 약 60℃에서 일어난다 (하기 실시예 14 참조). 또다른 실시양태에서, B형 및 C형의 열역학적 안정성의 교차는 약 40℃ 내지 약 50℃에서 일어난다. 상기 교차점을 초과하는 온도에서는 B형이 C형에 비해 열역학적으로 더 안정하다. 상기 교차점보다 낮은 온도 (주위 온도 포함)에서는 C형이 B형에 비해 열역학적으로 더 안정하다.

열역학적 안정성에 있어서의 이러한 차이는 실제로 중요하다. 결정의 열역학적 안정성은 상기 결정 형태를 포함하는 제제화된 제약학적 생성물의 잠재적인 저장 수명에 영향을 미친다. 일반적으로, 열역학적 안정성이 높을수록 제제화된 제약학적 생성물의 저장 수명이 길어진다. 또한, 열역학적 안정성의 차이는 (예를 들어, 화합물의 분쇄로 인해) 승온에서 가공되는 경우 또는 소정 온도 범위에 걸쳐 가공이 일어나는 경우 문제가 된다. 가공하는 동안 이러한 온도 변화는 잠재적으로 한 결정 형태에서 또다른 결정 형태로의 전환을 일으킬 수 있다. 생성된 결정 형태가 목적하는 형태가 아닌 경우에는, 가공 온도를 더욱 주의해서 조절할 필요가 있을 수 있다.

2. 형태학

A형 및 B형은 또한 상이한 결정 형태를 갖는다. 온도, 용매, 불순물 및 유체역학 (진동)과 같은 인자가 결정 형태에 영향을 미칠 수 있지만, A형 및 B형은 명백히 상이한 결정 형태를 갖는다. A형은 전형적으로 플레이트 형태를 나타낸다. B형은 전형적으로 니들 형태를 나타낸다. C형은 약 5 ㎛ 내지 약 350 ㎛, 전형적으로 50 내지 60 ㎛의 크기 (최대 치수)를 갖는 라스(lath), 플레이트 및 단편의 혼합물을 포함한다.

이러한 형태의 차이는 제제화된 제약학적 생성물을 제조하는데 있어서 화합물의 가공 편의성에 영향을 미칠 수 있다. 예를 들어, 니들 형태는 여과 및 가공을 더욱 어렵게 만든다. 이와 달리, 플레이트 형태는 대개 더욱 등차원적이어서 화합물의 개선된 유동 및 취급을 나타내며, 따라서 니들 형태에 비해 여과, 가공 및 정제 단계의 편의성이 개선된다.

3. 색상

A형, B형 및 C형은 또한 상이한 시각적인 외관을 갖는다. A형은 전형적으로 약간 황색 내지는 아이보리색을 나타낸다. B형은 전형적으로 황색을 갖는다. C형은 전형적으로 밝은 황색을 갖는다. 제제화된 제약학적 생성물에 대한 제품 명세서는 활성 성분의 화학적 순도 뿐만 아니라, 활성 성분의 상 순도를 명시한다. 활성 성분의 결정 형태의 배치(batch)에 따른 변이성은 일반적으로 바람직하지 않다. N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 경우, 배치의 색상은 품질 조절 목적으로 사용되어, 배치의 상 순도가 목적하는 상 순도 표준을 충족시키는지 여부를 평가하는 품질 수단을 제공한다. 또한, 생성물의 미학이 중요하며, 최종 제약학적 생성물의 색상이 균일한 것이 바람직하다. 결정의 색상 특성이 제제화된 생성물의 외관에 영향을 미치는 경우, 생성물의 색상 일관성을 유지하도록 생성물에 존재하는 결정 형태를 적절히 조절할 필요가 있을 것이다.

D. 추가의 실시양태

A형, B형 및 C형에 대한 추가의 실시양태가 하기에 기재된다:

A형의 추가의 실시양태

한 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 3247 ± 3 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 3247 ± 3 및 696 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1 및 9.0 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 3247 ± 3 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1 및 9.0 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 696 ± 2 cm^-1 및 3247 ± 3 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1, 9.0 ± 0.1, 및 16.9 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 696 ± 2, 1188± 2, 및 3247 ± 3 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다.

또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 3255 ± 3 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 1569 ± 2 및 3255 ± 3 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1 및 9.0 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 3255 ± 3 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1 및 9.0 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 1569 ± 2 및 3255 ± 3 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1, 9.0 ± 0.1, 및 16.9 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 1569 ± 2 및 3255 ± 3 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1, 9.0 ± 0.1, 및 16.9 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 1473 ± 2,1569 ± 2, 3255 ± 3 및 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다.

또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 174℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1 및 9.0 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 174℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1, 9.0 ± 0.1, 및 16.9 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 174℃ ± 3℃의 융점을 갖는다.

또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 3247 ± 3 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 및 174℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1 및 9.0 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 3247 ± 3 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 및 174℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1, 9.0 ± 0.1, 및 16.9 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 3247 ± 3 및 696 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 및 174℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1, 9.0 ± 0.1, 및 16.9 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 696 ± 2, 1188 ± 2, 및 3247 ± 3 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 및 174℃ ± 3℃의 융점을 갖는다.

또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 3247 ± 3 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 및 3255 ± 3 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1 및 9.0 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 696 ± 2 및 3247 ± 3 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 및 1569 ± 2 및 3255 ± 3 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1, 16.9 ± 0.1, 및 22.5 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 696 ± 2, 1188 ± 2 및 3247 ± 3 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 및 1569 ± 2 및 3255 ± 3 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다.

또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1 및 9.0 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 696 ± 2 및 3247 ± 3 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 1569 ± 2 및 3255 ± 3 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼, 및 174℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, A형은 8.5 ± 0.1, 16.9 ± 0.1, 및 22.5 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 696 ± 2, 1188 ± 2, 및 3247 ± 3 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 1569 ± 2 및 3255 ± 3 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼, 및 174℃ ± 3℃의 융점을 갖는다.

B형의 추가의 실시양태

한 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴 및 1452 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴 및 1395 ± 2 및 1452 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴 및 1211 ± 2, 1395 ± 2 및 1452 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴 및 722 ± 2, 920 ± 2, 1211 ± 2, 1395 ± 2 및 1452 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1 및 7.2 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴 및 1211 ± 2, 1395 ± 2, 및 1452 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다.

한 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 218℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1 및 7.2 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 218℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1, 7.2 ± 0.1, 및 23.8 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 218℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1, 7.2 ± 0.1, 10.1 ± 0.1, 14.4 ± 0.1에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 23.8 ± 0.1° 2θ, 및 218℃ ± 3℃의 융점을 갖는다.

또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 1452 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 및 218℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 1395 ± 2 cm^-1 및 1452 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 및 218℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1, 7.2 ± 0.1, 10.1 ± 0.1, 14.4 ± 0.1, 및 23.8 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 722 ± 2, 920 ± 2, 1211 ± 2, 1395 ± 2, 및 1452 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 및 218℃ ± 3℃의 융점을 갖는다.

또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 1299 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 689 ± 2 및 1299 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1° 2θ에서의 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 689 ± 2, 1299 ± 2, 및 1535 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 689 ± 2, 1299 ± 2, 1456 ± 2, 및 1535 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다.

또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 1452 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 및 1299 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 1395 ± 2 cm^-1 및 1452 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 및 1299 ± 2 및 689 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 1395 ± 2 cm^-1, 1452 ± 2, 및 1535 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 및 1299 ± 2 및 689 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다.

또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 1395 ± 2 cm^-1 및 1452 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 1299 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼, 및 218℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, B형은 3.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 1395 ± 2 cm^-1, 1452 ± 2, 및 1535 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 1299 ± 2 및 689 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼, 및 218℃ ± 3℃의 융점을 갖는다.

C형의 추가의 실시양태

또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 881 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 881 ± 2 cm^-1 및 661 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 881 ± 2, 797 ± 2, 703 ± 2, 및 661 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1 및 26.1 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 881 ± 2 cm^-1 및 661 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼을 갖는다.

또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 188℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1 및 26.1 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 188℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1, 20.2 ± 0.1, 및 17.7 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 188℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1, 10.6 ± 0.1, 14.0 ± 0.1, 17.7 ± 0.1, 및 20.2 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 188℃ ± 3℃의 융점을 갖는다.

또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 2988 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 707 ± 2 및 2988 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 707 ± 2, 1447 ± 2, 및 2988 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1 및 26.1 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 및 707 ± 2, 1447 ± 2, 및 2988 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는다.

또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 661 ± 2 cm^-1 및 881 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 및 188℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1 및 20.2 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 661 ± 2, 881 ± 2 및 797 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 및 188℃ ± 3℃의 융점을 갖는다.

또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 881 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 2988 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼, 및 188℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 661 ± 2 cm^-1 및 881 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 2988 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼, 및 188℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1 및 20.2 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 661 ± 2 cm^-1 및 881 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 707 ± 2 및 2988 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼, 및 188℃ ± 3℃의 융점을 갖는다. 또다른 실시양태에서, C형은 6.7 ± 0.1 및 20.2 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴, 881 ± 2, 797 ± 1, 703 ± 2, 및 661 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 FT-IR 스펙트럼, 707 ± 2, 1447 ± 2 및 2988 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼, 및 188℃ ± 3℃의 융점을 갖는다.

E. A형, B형 및 C형의 상 순수 형태 및 조합

각각의 A형, B형 및 C형은 실질적으로 상 순수 형태로서 수득될 수 있다. 대안적으로, 각각의 A형, B형 및 C형은 1종 이상의 다른 형태와 조합되어 존재할 수 있다.

한 실시양태에서, 본 발명은 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드를 포함하고, 상기 화합물의 약 50 중량％ 이상은 A형이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드를 포함하고, 상기 화합물의 약 20 중량％ 이상, 약 30 중량％ 이상, 또는 약 40 중량％ 이상은 A형이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드를 포함하고, 상기 화합물의 약 60 중량％ 이상, 약 70 중량％ 이상, 약 80 중량％ 이상, 약 85 중량％ 이상, 약 90 중량％ 이상, 약 95 중량％ 이상, 약 96 중량％ 이상, 약 97 중량％ 이상, 약 98 중량％ 이상, 또는 약 99 중량％ 이상은 A형이다. 또다른 실시양태에서, 본 발명은 실질적으로 상 순수한 A형인 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드를 포함한다.

한 실시양태에서, 본 발명은 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드를 포함하고, 상기 화합물의 약 50 중량％은 B형이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드를 포함하고, 상기 화합물의 약 20 중량％ 이상, 약 30 중량％ 이상, 또는 약 40 중량％ 이상은 B형이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드를 포함하고, 상기 화합물의 약 60 중량％ 이상, 약 70 중량％ 이상, 약 80 중량％ 이상, 약 85 중량％ 이상, 약 90 중량％ 이상, 약 95 중량％ 이상, 약 96 중량％ 이상, 약 97 중량％ 이상, 약 98 중량％ 이상, 또는 약 99 중량％ 이상은 B형이다. 또다른 실시양태에서, 본 발명은 실질적으로 상 순수한 B형인 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드를 포함한다.

한 실시양태에서, 본 발명은 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드를 포함하고, 상기 화합물의 약 50 중량％ 이상은 C형이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드를 포함하고, 상기 화합물의 약 20 중량％ 이상, 약 30 중량％ 이상, 또는 약 40 중량％ 이상은 C형이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드를 포함하고, 상기 화합물의 약 60 중량％ 이상, 약 70 중량％ 이상, 약 80 중량％ 이상, 약 85 중량％ 이상, 약 90 중량％ 이상, 약 95 중량％ 이상, 약 96 중량％ 이상, 약 97 중량％ 이상, 약 98 중량％ 이상, 또는 약 99 중량％ 이상은 C형이다. 또다른 실시양태에서, 본 발명은 실질적으로 상 순수한 C형인 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드를 포함한다.

F. A형, B형 및 C형의 제조 방법

본 발명은 또한 A형, B형 및 C형의 제조 방법을 기재한다. 대표적인 방법은 본원에 포함된 실시예에 개시된다.

본 발명은 또한 본원에 개시된 방법에 따라 제조된 각각의 A형, B형 및 C형을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 이러한 방법에 따라 제조된 A형을 포함한다. 또다른 실시양태에서, 본 발명은 이러한 방법에 따라 제조된 B형을 포함한다. 또다른 실시양태에서 본 발명은 이러한 방법에 따라 제조된 C형을 포함한다.

G. 제약 조성물

A형, B형 및 C형, 및 이들 형태의 조합물은 임의의 적합한 경로, 바람직하게는 이러한 경로에 적합한 제약 조성물의 형태로, 의도된 치료를 위한 유효량으로 투여될 수 있다. 따라서, 본 발명은 구체적으로 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 1종 이상의 무수 결정 형태를 1종 이상의 제약상 허용되는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물을 포함한다. 투여되는 A형, B형 및/또는 C형의 양, 및 A형, B형 및/또는 C형을 이용하여 증상 또는 질병을 치료하기 위한 투여 방식은 다양한 인자, 예컨대 대상체의 연령, 체중, 성별 및 의학적 상태, 질환의 중증도, 투여 경로 및 빈도, 및 사용되는 특정 화합물에 따라 달라지며, 따라서 매우 광범위할 수 있다. 제약 조성물은 A형, B형 및/또는 C형을 약 0.1 내지 2000 mg, 바람직하게는 약 0.5 내지 500 mg, 가장 바람직하게는 약 1 내지 200 mg의 양으로 포함한다. 약 0.01 내지 100 mg/kg 체중, 바람직하게는 약 0.5 및 내지 20 mg/kg 체중, 가장 바람직하게는 약 0.1 내지 10 mg/kg 체중의 1일 투여량이 적합할 수 있다. 1일 투여량은 1일 1 내지 4회로 투여될 수 있다.

한 실시양태에서, 제약 조성물은 A형 및 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 또다른 실시양태에서, 제약 조성물은 실질적으로 상 순수한 A형인 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드, 및 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 또다른 실시양태에서, 제약 조성물은 B형 및 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 또다른 실시양태에서, 제약 조성물은 실질적으로 상 순수한 B형인 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드, 및 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 또다른 실시양태에서, 제약 조성물은 C형 및 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 또다른 실시양태에서, 제약 조성물은 실질적으로 상 순수한 C형인 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드, 및 제약상 허용되는 담체를 포함한다.

또다른 실시양태에서, 제약 조성물은 A형, B형 및 C형으로 이루어진 군으로부터 선택된 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 2종 이상의 형태의 조합, 및 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 한 실시양태에서, 제1 형태 대 제2 형태의 중량비는 약 1:1 이상이다. 다른 실시양태에서, 상기 중량비는 약 3:2 이상, 약 7:3 이상, 약 4:1 이상, 약 9:1 이상, 약 95:5 이상, 약 96:4 이상, 약 97:3 이상, 약 98:2 이상 또는 약 99:1 이상이다. 또다른 실시양태에서, 제약 조성물은 A형, B형 및 C형으로 이루어진 군으로부터 선택된 세 가지 형태의 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드, 및 제약상 허용되는 담체를 포함한다.

H. 치료 방법

본 발명은 또한 치료 유효량의 상기 기재된 A형, B형, C형의 1종 이상의 화합물 또는 이들 형태의 조합물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 증상이 있거나 있는 것으로 의심되는 대상체에서 상기 증상을 치료하는 방법을 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 치료는 예방적 처치이다. 또다른 실시양태에서, 상기 치료는 경감적 처치이다. 또다른 실시양태에서, 상기 치료는 회복적 처치이다.

본 발명에 따라 치료될 수 있는 증상은 PDE-5 매개 증상이다. 이러한 증상으로는 심혈관 질환, 대사성 질환, 중추 신경계 질환, 폐 질환, 성기능 부전, 및 신장 장애가 있다.

한 실시양태에서, 상기 증상은 심혈관 질환, 특히 고혈압 (예컨대, 본태성 고혈압, 폐 고혈압, 속발성 고혈압, 고립성 수축기 고혈압, 당뇨병 관련 고혈압, 아테롬성경화증 관련 고혈압, 및 신혈관성 고혈압); 고혈압과 관련된 합병증 (예컨대, 혈관 기관 손상, 울혈성 심부전, 협심증, 졸중, 녹내장 및 신장 기능 손상); 판막 폐쇄부전증; 안정형, 불안정형 및 변형 (프린츠메탈(Prinzmetal)) 협심증; 말초 혈관 질환; 심근경색; 졸중; 혈전성 질환; 재협착증; 동맥경화증; 아테롬성경화증; 폐 동맥 고혈압; 바이패스 후 혈관신생; 혈관성형 (예컨대, 경피 통관 혈관성형, 또는 경피 통관 관상동맥 혈관성형); 고지혈증; 저산소성 혈관수축; 혈관염, 예컨대 가와사키(Kawasaki) 증후군; 심부전 (예컨대, 울혈성, 대상부전성, 수축기, 확장기 및 좌심실 심부전; 우심실 심부전; 및 좌심실 비대증); 레이노(Raynaud) 질환; 자간전증; 임신-유도된 고혈압; 심근증; 및 동맥 폐색성 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된 심혈관 질환이다.

또다른 실시양태에서, 상기 증상은 고혈압이다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 폐 동맥 고혈압이다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 심부전이다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 확장기 심부전이다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 수축기 심부전이다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 협심증이다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 혈전증이다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 졸중.

또다른 실시양태에서, 상기 증상은 대사성 질환, 특히 증후군 X; 인슐린 내성 또는 손상된 내당증; 당뇨병 (예컨대, 제I형 및 제II형 당뇨병); 인슐린 내성의 증후군 (예컨대, 인슐린 수용체 질환, 랍슨-멘덴홀(Rabson-Mendenhall) 증후군, 레프레코니즘(leprechaunism), 코벌링-더니간(Kobberling-Dunnigan) 증후군, 세이프(Seip) 증후군, 로렌스(Lawrence) 증후군, 쿠슁(Cushing) 증후군, 말단거대증, 갈색세포종, 글루카곤종, 원발성 알도스테론증, 소마토스타틴종, 지방위축성 당뇨병, β-세포 독소 유도된 당뇨병, 그레이브(Grave) 질환, 하시모토(Hashimoto) 갑상선염 및 특발성 애디슨(Addison) 질환); 당뇨병성 합병증 (예컨대, 당뇨병성 괴저, 당뇨병성 관절중, 당뇨병성 신장병, 당뇨병성 사구체 경화증, 당뇨병성 피부병, 당뇨병성 신경병, 말초 당뇨병성 신경병, 당뇨병성 백내장, 및 당뇨병성 망막병); 고혈당증; 및 비만으로 이루어진 군으로부터 선택된 대사성 질환이다.

또다른 실시양태에서, 상기 증상은 인슐린 내성이다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 신장병이다.

또다른 실시양태에서, 상기 증상은 중추 신경계 질환, 특히 혈관성 치매; 두뇌 외상; 뇌경색; 치매; 집중력 장애; 알츠하이머(Alzheimer) 질환; 파킨슨(Parkinson) 질환; 근위축성 측삭 경화증 (ALS); 헌팅톤(Huntington) 질환; 다발성 경화증; 크로이츠펠트-야곱(Creutzfeld-Jacob); 불안증; 우울증; 수면 장애; 및 편두통으로 이루어진 군으로부터 선택된 중추 신경계 질환이다. 한 실시양태에서, 상기 증상은 알츠하이머 질환이다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 파킨슨 질환이다. 한 실시양태에서, 상기 증상은 ALS이다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 집중력 장애이다.

한 실시양태에서, 상기 증상은 폐 질환, 특히 천식; 급성 호흡 장애; 낭성 섬유증; 만성 폐색성 폐 질환 (COPD); 기관지염; 및 만성 가역성 폐 폐색으로 이루어진 군으로부터 선택된 폐 질환이다.

한 실시양태에서, 상기 증상은 성기능 부전, 특히 발기불능 (기관성 또는 심인성); 남성 발기 부전; 음핵성 장애; 척수 손상후 성기능 부전; 여성 성적 흥분 장애; 여성 성적 오르가즘 장애; 여성 성적 통증 장애; 및 여성 성욕 감소 장애로 이루어진 군으로부터 선택된 성기능 부전이다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 발기 부전이다.

또다른 실시양태에서, 상기 증상은 신장 장애, 특히 급성 또는 만성 신부전; 신장병 (예컨대 당뇨병 신장병); 사구체병증; 및 신장염으로 이루어진 군으로부터 선택된 신장 장애이다.

또다른 실시양태에서, 상기 증상은 통증이다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 급성 통증이다. 급성 통증의 예로는 손상 또는 수술과 관련된 급성 통증이 있다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 만성 통증이다. 만성 통증의 예로는 신경병성 통증 (예컨대, 대상포진후 신경통, 및 말초, 암 또는 당뇨병성 신경병과 관련된 통증), 수근관 증후군, 요통 (예컨대, 헤르니아된 또는 파열된 추간판과 관련된 통증, 또는 요부 추간 관절, 천장골 관절, 척주기립근 또는 후수직 인대의 비정상), 두통, 암 통증 (예컨대, 종양 관련 통증, 예컨대 뼈 통증, 두통, 안면통 또는 내장통) 또는 암 치료와 관련된 통증 (예컨대, 화학요법후 증후군, 만성 수술후 통증 증후군, 방사선 조사후 증후군, 면역요법과 관련된 통증, 또는 호르몬 요법과 관련된 통증), 관절염 통증 (예컨대, 골관절염 및 류마티스성 관절염 통증), 만성 수술후 통증, 포진후 신경통, 삼차 신경통, HIV 신경병, 환상지 통증, 중추 졸중후 통증, 및 만성 알콜 중독, 갑상선 기능 저하증, 요독증, 다발성 경화증, 척수 손상, 파킨슨 질환, 간질 및 비타민 결핍증과 관련된 통증이 있다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 침해수용성 통증 (예컨대, 중추 신경계 외상, 염좌/접질림, 화상, 심근경색 및 급성 췌장염으로 인한 통증, 수술후 통증 (임의 유형의 수술 절차 이후의 통증), 외상후 통증, 신장 결장, 암 통증 및 요통)이다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 염증과 관련된 통증 (예컨대, 관절염 통증 (예컨대, 골관절염 및 류마티스성 질환 통증), 강직성 척추염, 내장통 (예컨대, 염증상 장 질환, 기능성 장 질환, 위-식도 역류, 소화불량, 과민성 장 증후군, 기능성 복통 증후군, 크론(Crohn) 질환, 회장염, 궤양성 대장염, 월경곤란증, 방광염, 췌장염 및 골반 통증)이다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 근골격 질환으로 인한 통증 (예컨대, 근통, 섬유근통, 척추염, 혈청-음성 (비-류미타스성) 관절증, 비-관절성 류마티즘, 디스트로핀 결손형 근이영양증, 글리코겐 분해, 다발성 근염 및 화농성 근염)이다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 심장 및 혈관 통증 (예컨대, 협심증, 심근경색, 승모판 협착증, 심막염, 레이노(Raynaud) 현상, 경화 부종 및 골격근 허혈에 의해 야기된 통증)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 두통 (예컨대, 편두통, 예컨대 전조가 있는 편두통 및 전조가 없는 편두통), 군발성 두통, 긴장성 두통 혼합 두통, 및 혈관 장애와 관련된 두통; 구강안면통, 예컨대 치통, 이통, 구강 작열감 증후군 및 턱관절 안면통)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

또다른 실시양태에서, 상기 증상은 방광 출구 폐색; 실금 및 양성 전립선 비대증으로 이루어진 군으로부터 선택된 비뇨기 증상이다.

또다른 실시양태에서, 상기 증상은 망막 질환; 반점형 변성 및 녹내장으로부터 선택된 안과 증상이다.

또다른 실시양태에서, 상기 증상은 세뇨관간질 질환; 열항; 탈모; 암성 악액질; 뇌졸중; 소화관 운동성의 장애; 장관 운동성 장애; 월경곤란증 (원발성 및 속발성); 녹내장; 반점형 변성; 항혈소판; 치핵; 실금; 과민성 장 증후군 (IBS); 종양 전이; 다발성 경화증; 신생물 형성; 니트레이트 불내성; 호두까기 식도증, 골다공증; 불임; 조산; 건선; 망막 질환; 피부 괴사; 및 두드러기로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또다른 실시양태에서, 상기 증상은 골다공증이다.

또다른 실시양태에서, 상기 증상은 내피 장애, 특히 아테롬성경화증 병변, 심근 허혈, 말초 허혈, 판막 폐쇄부전증, 폐 동맥 고혈압, 협심증, 혈관 바이패스후 혈관 합병증, 혈관 재투과화, 및 심장 이식으로 이루어진 군으로부터 선택된 증상과 관련이 있다.

본 발명의 방법 및 조성물은 예를 들어 포유동물 대상체, 예컨대 인간, 다른 영장류 (예를 들어, 원숭이, 침팬지), 반려 동물 (예를 들어, 개, 고양이, 말), 가축용 동물 (예를 들어, 염소, 양, 돼지, 소), 실험실용 동물 (예를 들어, 마우스, 래트), 및 야생 및 동물원 동물 (예를 들어, 늑대, 곰, 사슴)에 대해 사용하기에 적합하다. 또다른 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

I. 의약의 제조에 있어서의 용도

본 발명은 또한 A형, B형, C형 또는 이들 형태의 조합물을 1종 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 상기 기재된 증상의 치료에 사용되는 다른 활성 성분과 함께 포함하는 제약 조성물 (또는 "의약")의 제조 방법을 포함한다.

J. 실시예

실시예 1: N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘- 2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 제조

N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드를 다음과 같이 제조하였다:

단계 1

디메틸 1-(2-에톡시에틸)-4-니트로-1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트

디메틸 4-니트로-1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트 (2.0 g, 8.83 mmol, WO 00/24745, 48면, 제조예 2)를 N,N-디메틸포름아미드 (35 mL) 중 2-에톡시에틸 브로마이드 (1.18 mL, 10.45 mmol) 및 탄산칼륨 (1.32 g, 9.56 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 48시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고, 잔사를 에틸 아세테이트 (200 mL)와 물 (100 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 분리하고, 황산마그네슘 상에서 건조하고, 진공에서 농축하였다. 조 생성물을 펜탄:에틸 아세테이트 100:0 내지 70:30로 용출시키는 실리카 겔 상 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 생성물 1.63 g을 수득하였다.

단계 2

4-니트로-1-(2-에톡시에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복실산 3-메틸 에스테르

단계 1의 에스테르 (1.63 g, 5.4 mmol)를 메탄올 (20 mL) 중 수산화칼륨 (330 mg, 5.9 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고, 조 생성물을 물에 용해하고, 에테르로 세척하였다. 2M 염산을 이용하여 수성 상을 산성화하고, 디클로로메탄 (3x100 mL)으로 추출하였다. 유기 상들을 합하고, 황산마그네슘 상에서 건조하고, 진공에서 농축하여, 표제 생성물을 수득하였다.

단계 3

메틸 5-카르바모일-1-(2-에톡시에틸)-4-니트로-1H-피라졸-3-카르복실레이트

옥살릴 클로라이드 (1.2 mL, 13.76 mmol) 및 N,N-디메틸포름아미드 (39 ㎕)를 디클로로메탄 (20 mL) 중 단계 2의 카르복실산 (1.33 g, 4.63 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에 서 농축하고, 디클로로메탄 (3x50 mL)으로부터 공비시켰다. 생성물을 테트라히드로푸란 (50 mL)에 용해하고, 얼음 조에서 냉각하고, 0.88 암모니아 용액 (10 mL)으로 처리하고, 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축하고, 잔사를 디클로로메탄 (200 mL)과 물 (50 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기 상들을 황산마그네슘 상에서 건조하고, 진공에서 농축하여, 표제 생성물을 수득하였다.

단계 4

메틸 4-아미노-5-카르바모일-1-(2-에톡시에틸)-1H-피라졸-3-카르복실레이트

수산화팔라듐(II) (100 mg)을 메탄올 (20 mL) 중 단계 3의 니트로 화합물 (970 mg, 3.39 mmol)에 첨가하고, 혼합물을 환류하에 가온하였다. 포름산암모늄 (1.07 g, 16.97 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 환류하에 교반하였다. 아르보셀(Arbocel®)을 통해 여과하여 촉매를 제거하고, 반응 혼합물을 진공에서 농축하여, 표제 생성물을 수득하였다.

단계 5

메틸 1-(2-에톡시에틸)-5,7-디옥소-4,5,6,7-테트라히드로-1H-피라졸로[4,3- d]피리미딘-3-카르복실레이트

N,N-디메틸포름아미드 (30 mL) 중 단계 4의 아미드 (570 mg, 3.38 mmol)의 용액을 N,N'-카르보닐디이미다졸 (658 mg, 4.06 mmol)로 처리하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 90℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고, 조 생성물을 아세톤에 현탁하고, 30분 동안 초음파 처리하였다. 고체 생성물을 여과해 내고, 진공에서 건조하여, 표제 생성물을 수득하였다.

단계 6

메틸 5,7-디클로로-1-(2-에톡시에틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르복실레이트

옥시염화인 (934 ㎕, 10.0 mmol) 및 테트라에틸암모늄 클로라이드 (195 mg, 1.50 mmol)를 프로피오니트릴 (5 mL) 중 단계 5의 디온 (140 mg, 0.50 mmol)의 용 액에 첨가하고, 반응 혼합물을 18시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고, 조 생성물을 에틸 아세테이트 (50 mL)와 물 (50 mL) 사이에서 분배하였다. 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조하고, 진공에서 농축하였다. 조 생성물을 펜탄:에틸 아세테이트 100:0 내지 75:25로 용출시키는 실리카 겔 상 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 생성물을 수득하였다.

단계 7

메틸 5-클로로-1-(2-에톡시에틸)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르복실레이트

단계 6의 디클로로 화합물 (1.98 g, 6.20 mmol)을 디메틸 술폭시드 (10 mL)에 용해하고, 용액을 2-아미노-4-메틸피리딘 (1.34 g, 12.4 mmol)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄 (300 mL)과 물 (500 mL) 사이에서 분배하고, 디클로로메탄 층을 분리하였다. 유기 상을 물 (3x100 mL)로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조하고, 진공에서 농축하였다. 잔사를 디클로로메탄:메탄올 100:0 내지 98:2로 용출시키는 실리카 겔 상 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 조 생성물을 에테르 (50 mL)로 연화처리 하고, 여과하고, 진공에서 농축하여, 표제 생성물 1.2 g을 수득하였다.

단계 8

5-클로로-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1-(2-에톡시에틸)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르복실산

단계 7의 에스테르 (4.3 g, 11 mmol)를 디옥산 (50 mL)에 용해하고, 용액을 수산화나트륨의 1M 수용액 (22.0 mL, 22.0 mmol)으로 처리하였다. 그 후, 반응 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조하고, 잔사를 물 (100 mL)에 용해하고, 디클로로메탄 (50 mL)으로 세척하였다. 그 후, 1M 시트르산 용액을 이용하여 수성 상을 pH 4-5로 산성화시켰고, 황색 침전물이 형성되었다. 혼합물을 15분 동안 교반한 후, 여과하고, 고체 생성물을 진공에서 오산화인 상에서 건조하여, 표제 생성물 3.75 g을 수득하였다.

단계 9

N-[5-클로로-1-(2-에톡시에틸)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[ 4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드

단계 8의 카르복실산 (1.0 g, 2.70 mmol), 메탄술폰아미드 (330 mg, 3.5 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (660 mg, 3.5 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘 (390 mg, 3.5 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드 (10 mL)에 용해하고, 반응 혼합물을 실온에서 60시간 동안 교반하였다. 추가의 메탄술폰아미드 (165 mg, 1.7 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (330 mg, 1.7 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘 (195 mg, 1.7 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 추가 20분 동안 교반하였다. 추가의 메탄술폰아미드 (165 mg, 1.7 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (330 mg, 1.7 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘 (195 mg 1.7 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 마지막 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고, 잔사를 디클로로메탄 (25 mL)과 물 (25 mL) 사이에서 분배하였다. 유기 상을 분리하고, 물 (2x25 mL)로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조하고, 진공에서 농축하였다. 잔사를 디클로로메탄:메탄올:아세트산 100:0:0 내지 96:3.5:0.5로 용출시키는 실리카 겔 상 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 조 생성물을 따뜻한 에틸 아세테이트 (10 mL)로 연화처리하여, 표제 생성물 290 mg을 수득하였 다.

단계 10

N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드

단계 9의 클로로 화합물 (110 mg, 0.24 mmol), N-메틸-에틸아민 (79 mg, 1.2 mmol), N-에틸디이소프로필아민 (210 ㎕, 1.20 mmol) 및 불화세슘 (37 mg, 0.24 mmol)을 디메틸 술폭시드 (1 mL)에 용해하고, 반응 혼합물을 리엑티바이알(ReactiVial™)에서 5시간 동안 110℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (10 mL)와 물 (10 mL) 사이에서 분배하고, 유기 상을 분리하고, 물 (2x10 mL)로 세척하였다. 그 후, 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조하고, 진공에서 농축하였다. 잔사를 디클로로메탄:메탄올 99:1 내지 97:3로 용출시키는 실리카 겔 상 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 정제된 물질을 증발시키고, 건조하여, 담황색 고체 (66 mg)를 수득하였다. 상기 고체에 대한 PXRD 패턴은 도 14에 도시되었다.

실시예 2: N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 제조

N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 제조에 대한 대안적인 합성 반응식이 도 15에 도시되었다.

실시예 3: A형의 제조 (에틸 아세테이트로부터 재결정화)

N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 A형 결정 형태를 다음과 같이 제조하였다:

단계 1

디메틸 4-니트로-1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트 (WO 00/24745, 48면, 제조예 2) (2.0 g, 8.83 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (35 mL) 중 2-에톡시에틸 브로마이드 (1.18 mL, 10.45 mmol) 및 탄산칼륨 (1.32 g, 9.56 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 48시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농 축하고, 잔사를 에틸 아세테이트 (200 mL)와 물 (100 mL) 사이에서 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 황산마그네슘 상에서 건조하고, 진공에서 농축하였다. 조 생성물을 펜탄:에틸 아세테이트 100:0 내지 70:30로 용출시키는 실리카 겔 상 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 에스테르 생성물 1.63 g을 수득하였다.

단계 2

단계 1의 에스테르 (1.63 g, 5.4 mmol)를 메탄올 (20 mL) 중 수산화칼륨 (330 mg, 5.9 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고, 조 생성물을 물에 용해하고, 에테르로 세척하였다. 2M 염산을 이용하여 수성 상을 산성화하고, 디클로로메탄 (3x100 mL)으로 추출하였다. 유기 상들을 합하고, 황산마그네슘 상에서 건조하고, 진공에서 농축하여, 니트로 생성물을 수득하였다.

단계 3

옥살릴 클로라이드 (1.2 mL, 13.76 mmol) 및 N,N-디메틸포름아미드 (39 ㎕)를 디클로로메탄 (20 mL) 중 단계 2의 카르복실산 (1.33 g, 4.63 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고, 디클로로메탄 (3x50 mL)으로부터 공비시켰다. 생성물을 테트라히드로푸란 (50 mL)에 용해하고, 얼음 조에서 냉각하고, 0.88 암모니아 용액 (10 mL)으로 처리하고, 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축하고, 잔사를 디클로로메탄 (200 mL)과 물 (50 mL) 사이에서 분배하였다. 유기 상들을 황산마그네슘 상에서 건조하고, 진공에서 농축하여, 니트로 생성물을 수득하였다.

단계 4

수산화팔라듐 (II) (100 mg)을 메탄올 (20 mL) 중 단계 3의 니트로 화합물 (970 mg, 3.39 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 환류하에 가열하였다. 포름산암모늄 (1.07 g, 16.97 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 환류하에 2시간 동안 가온시켰다. 촉매를 아르보셀®을 통한 여과에 의해 제거하고, 반응 혼합물을 진공에서 농축하여, 아미드 생성물을 수득하였다.

단계 5

메틸 1-(2-에톡시에틸)-5,7-디옥소-4,5,6,7-테트라히드로-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르복실레이트

N,N-디메틸포름아미드 (30 mL) 중 단계 4의 아미드 (570 mg, 3.38 mmol)의 용액을 N,N'-카르보닐디이미다졸 (658 mg, 4.06 mmol)로 처리하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 90℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고, 조 생성물을 아세톤에 현탁하고, 30분 동안 초음파 처리하였다. 고체 생성물을 여과해 내고, 진공에서 건조하여, 디온 생성물을 수득하였다.

단계 6

옥시염화인 (934 ㎕, 10.0 mmol) 및 테트라에틸암모늄 클로라이드 (195 mg, 1.50 mmol)를 프로피오니트릴 (5 mL) 중 단계 5의 디온 (140 mg, 0.50 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 18시간 동안 환류하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고, 조 생성물을 에틸 아세테이트 (50 mL)와 물 (50 mL) 사이에서 분배하였다. 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조하고, 진공에서 농축하였다. 조 생성물을 펜탄:에틸 아세테이트 100:0 내지 75:25로 용출시키는 실리카 겔 상 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 디클로로 생성물을 수득하였다.

단계 7

단계 6의 디클로로 화합물 (1.98 g, 6.20 mmol)을 디메틸 술폭시드 (10 mL)에 용해하고, 용액을 2-아미노-4-메틸피리딘 (1.34 g, 12.4 mmol)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄 (300 mL)과 물 (500 mL) 사이에서 분배하고, 디클로로메탄 층을 분리하였다. 유기 상을 물 (3x100 mL)로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조하고, 진공에서 농축하였다. 잔사를 디클로로메탄:메탄올 100:0 내지 98:2로 용출시키는 실리카 겔 상 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 조 생성물을 에테르 (50 mL)로 연화처리하고, 여과하고, 진공에서 농축하여 모노클로로 생성물 1.2 g을 수득하였다.

단계 8

메틸 1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(6-에틸피리딘-2-일아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르복실레이트

N-메틸피롤리딘-2-온 (7 mL) 중 N-에틸메틸아민 (4.6 mL, 53.8 mmol)의 용액을 110℃에서 N-메틸피롤리딘-2-온 (28 mL) 중 단계 7의 모노클로로 화합물 (7.0 g, 17.93 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 가열하고, 완료 후 용액을 실온으로 냉각하고, 물 (25 mL)을 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 슬러리를 여과하고, 2 x 15 mL 물로 세척하였다. 고체를 22℃에서 진공에서 밤새 건조하여, 오렌지색 고체 (5.988 g, 15.0 mmol, 84％)를 수득하였다.

단계 9

1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(6-에틸피리딘-2-일아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르복실산

단계 8의 에스테르 (13.57 g, 32.83 mmol) 및 수산화나트륨의 1M 수용액 (90 mL)을 메탄올 (10 mL)에 용해하고, 반응 혼합물을 85℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 10％ 수성 시트르산 (90 mL)으로 산성화하였다. 수성 층을 디클로로메탄으로 2회 (36 mL 및 24 mL) 추출하였다. 수성 층을 10％ 수성 시트르산 (20 mL)으로 더 산성화시키고, 디클로로메탄 (24 mL)으로 추출하였다. 모든 디클로로메탄 추출액을 합하고, 에탄올 (13 mL)을 첨가하였다. 용액을 주위 압력에서 증류하고, 증류된 디클로로메탄을 에탄올 (52 mL)로 교체하였다. 물 (12 mL)을 첨가하고, 혼합물을 5℃로 냉각하고, 1시간 동안 교반하였다. 슬러리를 여과하고, 물 (24 mL)로 세척하고, 55℃에서 진공에서 건조하여, 황색 고체 (8.858 g, 22.2 mmol, 68％)를 수득하였다.

단계 10

N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드

단계 9의 카르복실산 (29.0 g, 72.6 mmol), 메탄술폰아미드 (8.28 g, 87 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (18.0 g, 94 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘 (10.59 g, 94 mmol)을 디클로로메탄 (385 mL)에 용해하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄 (1500 mL까지)으로 희석하고, 수성 시트르산 (200 mL 중 50 g)으로 2회 세척한 다음, 시트르산 및 수산화나트륨의 혼합물의 산성 용액으로 1회 세척하였다. 디클로로메탄 상을 황산마그네슘 상에서 건조하고, 진공에서 농축하였다. 고체 잔사를 이소프로판올 (1 L) 중에서 20분 동안 환류하고, 냉각하고, 생성된 고체를 여과해 내었다. 그 후, 단리된 황색 고체를 용액이 될 때까지 에틸 아세테이트 (2000 mL) 중에서 환류하였고, 이 때, 에틸 아세테이트의 부피가 1000 mL로 감소하였다. 생성된 용액을 여과하고, 실온으로 밤새 냉각한 다음, 얼음 조에 넣고, 1.5시간 동안 교반하였다. 생성된 고체를 여과해 내고, 에테르 (2x50 ml)로 세척하고, 여과기 패드 상에서 3시간 동안 건조한 다음, 오산화인 상에서 진공에서 건조하여, 백색 분말 (16.7 g)을 수득하였다. 분말의 PXRD 분석 결과, N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 A형 결정 형태임을 나타내었다.

실시예 4: A형의 제조 (이소프로필 알콜로부터 재결정화)

N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 A형 결정 형태를 다 음과 같이 제조하였다:

조 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드 (16.7 g) (실시예 1 참조)를 디클로로메탄 (20 mL) 및 이소프로필 알콜 (70 mL) 중에서 슬러리화하였다. 슬러리를 환류하에 (약 60℃) 가열하였고, 고체 물질이 실질적으로 용해되지 않은 채로 남았다. 추가량의 디클로로메탄 (40 mL)을 5 mL씩 증가하면서 슬러리에 첨가하였다. 생성된 용액을 약 1분 동안 환류하고, 가열을 중단하였다. 이 때, 고체가 용해되어 황색 용액이 수득되었다. 그 후, 용액을 결정화의 징후 없이 35℃로 냉각하였다 용액을 결정화의 징후 없이 소량의 (약 0.5 g 미만) 조 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드에 시딩하였다. 용액을 결정화의 징후 없이 실온으로 추가로 냉각하였다. 5℃로 냉각하였을 때, 용액이 슬러리가 되었다. 이 슬러리를 유사한 온도에서 교반한 다음, 여과하고, 여과기 상에서 수집된 물질을 50℃에서 건조하여, 고체 (7.7 g)를 수득하였다. 고체의 PXRD 분석 결과, N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 A형 결정 형태임을 나타내었다.

실시예 5: B형의 제조 (메탄올 환류)

N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 B형 결정 형태를 다음과 같이 제조하였다:

A형 결정 형태를 함유하는 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드 (13.9 g) (실시예 3 참조)를 환류중인 디클로로메탄 (160 mL) 및 메탄올 (200 mL)에 용해하였다. 디클로로메탄을 증류하였다 (대략 110 mL 중류액에 수집되었다). 혼합물을 실온으로 냉각하고, 30분 동안 과립화하고 여과하였다. 고체를 메탄올 (30 mL)로 세척하고, 진공에서 건조하여, 밝은 황색 고체 (10.8 g)를 수득하였다. 고체의 PXRD 분석 결과, N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 B형 결정 형태임을 나타내었다.

실시예 6: B형의 제조 (메탄올 환류)

N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 B형 결정 형태을 다음과 같이 제조하였다:

1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르복실산 (1.19 kg, 2.98 mol) (실시예 3, 단계 9 참조), 메탄술폰아미드 (344 g, 3.6 mol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (810.0 g, 4.21 mol), 및 4-디메틸아미노피리딘 (488.8 g, 4.01 mol)를 질소 대기하에 디클로로메탄 (12 L)에 용해하고, 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 3시간 후, 용액에 추가량의 4-디메틸아미노피리딘 (62.0 g, 총 551.7 g, 4.52 mol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 20시간 더 교반하였다. 반응 혼합물을 10％ 수성 시트르산 (12 L)으로 희석하고, 유기 상을 분리하고, 10％ 수성 시트르산 (12 L)으로 세척한 다음, 물로 세척하였다.

생성된 용액 (10 L)을 여과하고, 초기 부피의 대략 절반으로 대기압에서 증류하고, 메탄올 (총 14 L)을 일부씩 나누어 고온의 용액을 희석하였고, 그 동안 디클로로메탄이 증류에 의해 일부씩 증류되었다 (증류액 분획은 총 11 L이고, 55℃에서 환류하여 최종 부피가 13 L가 되었다). 황색 슬러리를 실온으로 냉각하고, 밤새 교반한 다음, 5℃로 냉각하였다. 그 후, 슬러리를 여과하고, 저온의 메탄올 (총 5.8 L)을 일부씩 나누어 세척하였다. 여과기 상에 수집된 물질을 진공에서 55℃에서 3일 동안 건조하여, 밝은 황색 고체로서 생성물 (1.038 kg, 73％ 수율)을 수득하였고, 이는 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 B형 결정 형태이었다.

실시예 7: B형의 제조 (탈산소화 및 메탄올 환류)

디클로로메탄 (260 mL)을 용기의 헤드 공간을 통해 질소를 유동시키면서 환류하고, 부피를 240 mL로 감소시킨 다음, 질소 대기하에 실온으로 냉각하였다. 1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(6-에틸피리딘-2-일아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르복실산 (24 g, 60 mmol) (실시예 3, 단계 9 참조), 메탄술폰아미드 (6.88 g, 72 mmol), 및 4-디메틸아미노피리딘 (10.98 g, 90 mmol)을 질소 대기하에 디클로로메탄 (240 mL)에 용해하였다. 용액을 30분 동안 교반한 다음, 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (16.13 g, 84 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 질소 대기하에 교반하였다. 반응 혼합물을 10％ 수성 시트르산 (240 mL)으로 희석하고, 유기 상을 분리하고, 10％ 수성 시트르산 (240 mL)으로 세척한 다음, 물 (240 mL)로 세척하였다.

생성된 용액을 초기 부피의 대략 절반 (대략 120 mL)이 되도록 대기압하에 증류하였다. 고온의 용액을 메탄올 (240 mL)로 천천히 희석한 다음, 혼합물을 대기압하에 대략 240 mL로 증류하였다. 고온의 혼합물을 다시 대기압하에 대략 240 mL이 되도록 메탄올 (120 mL)로 증류하였다. 고온의 혼합물을 다시 메탄올 (120 mL)로 희석하고, 대략 240 mL이 되도록 대기압하에서 다시 증류하였다. 혼합물을 실온으로 냉각하고, 1시간 동안 교반한 다음, 냉각하고, 0 내지 5℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 후, 생성된 황색 슬러리를 여과하고, 고체를 저온의 메탄올 (96 mL)로 세척하였다. 고체를 진공에서 밤새 55℃에서 세척하여, 밝은 황색 고체 (25.78 g, 90％ 수율)를 수득하였고, 이는 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 B형 결정 형태이었다.

실시예 8: B형의 제조 (이온 교환 수지 및 메탄올 환류)

N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드를 B형 결정 형태를 다음과 같이 제조하였다:

1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(6-에틸피리딘-2-일아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르복실산 (24 g, 60.1 mmol) (실시예 3, 단계 9 참조), 메탄술폰아미드 (6.88 g, 72.4 mmol), 및 4-디메틸아미노피리딘 (10.98 g, 90 mmol)을 질소 대기하에 디클로로메탄 (240 mL)에 용해하였다. 용액을 30분 동안 교반한 다음, 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (16.14 g, 84.1 mmol)를 첨가하고, 반응이 5시간 후에 본질적으로 완료되었다고 판단될 때까지, 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 10％ 수성 시트르산 (240 mL)으로 희석하고, 유기 상을 분리하고, 10％ 수성 시트르산 (240 mL)으로 세척한 다음, 물 (240 mL)로 세척하였다.

교반된 분리된 유기 상에 앰버라이트(Amberlite) IRN-78 (24 g) (염기성 이온 교환 수지)를 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 수지 비드를 여과해 내고, 여과 케이크를 디클로로메탄 (48 mL)으로 세척하고, 합한 여액을 10％ 수성 시트르산 (120 mL)으로 세척한 다음, 물 (240 mL)로 2회 세척하였다.

생성된 용액을 초기 부피의 대략 절반 (대략 120 mL)이 되도록 대기압하에 증류하였다 고온의 용액을 메탄올 (240 mL)로 천천히 희석하고, 황색 고체를 연화처리한 다음, 혼합물을 대략 240 mL가 되도록 대기압하에 증류하였다. 고온의 혼합물을 다시 메탄올 (240 mL)로 희석하고, 다시 대략 240 mL가 되도록 대기압하에 증류하였다. 황색 슬러리를 실온으로 냉각하고, 밤새 교반한 다음, 얼음 조에서 1시간 동안 (대략 0 내지 5℃)로 냉각하였다. 그 후, 생성된 슬러리를 여과하고, 고체를 메탄올 (96 mL)로 세척하였다 고체를 진공에서 밤새 50℃에서 건조하여, 밝은 황색 고체 (21.51 g, 75.1％ 수율)를 수득하였고, 이는 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 B형 결정 형태이었다.

실시예 9: B형의 제조 (슬러리 전환)

대략 25 mg의 A형 (실시예 3 참조)을 실온에서 메탄올 1 mL으로 슬러리화하였다. 10분 내에 슬러리의 황색이 급격히 증가하였다. 소량의 샘플을 슬러리부터 취하였다. 상기 샘플의 PXRD 분석 결과, N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 B형 결정 형태임을 나타내었다.

실시예 10: B형의 제조 (온도 전환)

A형의 샘플 (실시예 3 참조)을 DSC를 이용하여 180℃로 가열하였다. 샘플은 용융되어 B형으로서 재결정화되었다. 샘플을 실온으로 냉각하였다. A형이 잔류하 는지 및 B형으로의 전환이 완료되었는지를 확인하기 위해, 샘플을 다시 DSC에서 175℃로 가열하였다. 유의한 열 현상은 검출되지 않았다. 샘플을 실온으로 냉각하였다. 샘플을 다시 250℃로 가열하였다. B형의 용융물이 220℃에서 관찰되었다.

실시예 11: C형의 제조 (슬러리 전환)

N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 C형 결정 형태를 다음과 같이 제조하였다:

B형의 샘플 (실시예 5 내지 9 참조)을 4℃에서 THF/H₂O (50:50 부피/부피) 중에 슬러리화하였다. 16일 후, 소량의 샘플을 여과하고, 실온에서 건조하여, 밝은 황색 고체가 생성되었다. 상기 샘플의 DSC 분석 결과, C형과 일치하였다. 또다른 소량의 샘플을 슬러리로부터 습식 상태로 취하였다. 상기 샘플의 PXRD 분석 결과, C형과 일치하였다. 31일 동알 슬리러화한 후, 또다른 샘플을 슬러리로부터 습식 상태로 취하였다. 상기 샘플의 PXRD 분석 결과, C형과 일치하였다.

실시예 12: C형의 제조 (시딩)

B형의 샘플 (실시예 5 내지 9 참조) (129.6 g)을 23℃에서 질소 대기하에 아 세톤 (1300 ml) 중에서 교반하였다. C형의 시드 (20 mg)를 첨가하고, 주위 온도에서 13일 동안 계속 교반하였다. 여과에 의해 고체를 수집하고, 진공하에 20℃ 초과의 주위 온도에서 건조하여, 생성물 C형 (119.8 g)을 92.4％ 수율로 수득하였고, 이는 도 4에 도시된 분말 X-선 회절 패턴을 나타내었다.

실시예 13: A형 및 B형의 안정성

A형 및 B형의 열역학적 안정성을 하기 기재된 바와 같이 비교하였다. 먼저, 대략 25 mg의 A형을 대략 1 mL의 메탄올 중에 슬러리화하였다. 슬러리의 황색이 급속히 증가하였다. 소량의 샘플을 슬러리로부터 취하였다. PXRD 분석 결과, 상기 샘플이 B형임이 확인되었다. 둘째로, A형 및 B형을 DSC에 의해 분석하였고, A형 및 B형의 샘플에 대한 예시적인 데이타를 각각 도 5 및 6에 도시하였다. DSC 데이타는 B형의 융점이 A형보다 높다는 것을 나타내었다. 따라서, 슬러리 전환 분석 및 DSC 분석 둘 다의 결과로부터 B형이 A형보다 열역학적으로 더 안정하다는 것을 확인하였다.

실시예 14: B형 및 C형의 안정성

B형 및 C형의 상대적인 열역학적 안정성을 측정하기 위해 하기 용매 중에서 교차 연구를 수행하였다: (1) THF/H₂O (50:50 부피/부피), (2) 메틸 에틸 케톤 ("MEK"), (3) 메탄올, 및 (4) 메탄올/디클로로메탄 (DCM) (50:50 부피/부피). MEK 연구는 실온에서 수행하였으며, 다른 세 가지 용매계를 이용하는 연구들은 40℃ 및 60℃에서 수행하였다. 각 연구에서, 적절한 용매계 중의 B형의 현탁액을 제조하였 다. 그 후, 대략 10 mg의 C형을 각 현탁액에 첨가하였다. 그 후, 현탁액을 특정한 시간 동안 적절한 온도에서 슬러리화하였다. 각 연구에 대한 용매계, 용매계의 온도, 및 현탁액이 슬러리화되는 시간은 다음과 같다:

(1) 연구 A: 실온에서 MEK 중에서 3일 동안 슬러리화;

(2) 연구 B: 40℃에서 THF/H₂O (50:50) 중에서 3일 동안 슬러리화;

(3) 연구 C: 60℃에서 THF/H₂O (50:50) 중에서 3일 동안 슬러리화;

(4) 연구 D: 40℃에서 메탄올 중에서 21일 동안 슬러리화;

(5) 연구 E: 60℃에서 메탄올 중에서 21일 동안 슬러리화;

(6) 연구 F: 40℃에서 메탄올/DCM 중에서 5일 동안 슬러리화; 및

(7) 연구 G: 60℃에서 메탄올/DCM 중에서 21일 동안 슬러리화.

상기 명시된 시간이 끝난 후, 샘플을 각각의 슬러리로부터 취하여 PXRD에 의해 분석하였다. PXRD 분석 결과, 실온 및 40℃에서 제조된 모든 샘플이 C형이고, 60℃에서 제조된 모든 샘플이 B형이었다. 상기 논의된 바와 같이, 40℃ 내지 60℃에서 B형 및 C형의 열역학적 안정성은 교차된다 (즉, 상기 두 형태는 호변전이체이다). 상기 교차 온도 아래에서는 C형이 열역학적으로 가장 안정한 형태이다. 상기 교차 온도 위에서는 B형이 열역학적으로 가장 안정한 형태이다.

실시예 15: 생체외 검정

방법 A: 대동맥 환(aortic ring) 검정

이 프로토콜은 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리 딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드에 노출된 래트의 대동맥 환의 직접적인 이완을 측정하는 절차를 기재한다. 이 검정에서, PDE5 억제 화합물은 안정한 외인성 NO-공여자인 디에틸트리아민 NONO에이트 (디아젠-1-이움-1,2-디올레이트) ("DETA-NO")에 의해 발생된 cGMP 신호를 증가시킴으로써 대동맥 환의 이완을 유발한다. 화합물에 의해 유발된 이완에 대한 EC₅₀ (95％ 신뢰 구간)은 효능의 지표로서 계산된다. EC₅₀은 PDE5 억제 화합물에 대해서 가능한 최대의 효과적인 반응의 50％를 제공하는 PDE5 억제 화합물의 농도이다.

수컷 스프라구-돌리(Sprague-Dawley) 래트 (250-350 g)를 CO₂ 가스로 질식시키고, 이들의 흉부 대동맥을 주의해서 절개하고, 크렙스(Krebs) 완충액에 넣었다. 그 후, 대동맥을 주의해서 결합 조직이 없도록 해부하여, 길이가 각각 3 내지 4 mm인 8개의 단편으로 나누었다.

대동맥 환을 1 g의 기본 장력하에 물 자켓화 (37℃) 15 mL 조직 조에서 평행한 스테인리스 스틸 와이어 사이에 매달았다. 등척성 장력 변환기를 이용하여 장력을 측정하고, 포네마(Ponemah) 조직 플랫폼 시스템을 이용하여 기록하였다. 각각의 제조물은 약물 시험 적어도 60분 전에 평형화시켰다. 그 동안, 조직을 200 μM NG-모노메틸 L-아르기닌 ("L-NMMA")과 함께 인큐베이션하였고, 인큐베이션 배지는 매 15 내지 20분 마다 교체하였다(매 세척 후에, 각 조직 조에서 200 μM의 최종 농도를 유지하도록 L-NMMA를 첨가한다).

평형화 기간 후, 기준선 장력을 각 조직에 대해 기록하였다. 페닐에페린 (1 μM)에 대한 혈관 수축 반응을 평가하고, 페닐에페린에 대한 반응이 최대에 도달할 때, 후속적으로 아세틸콜린 (1 μM)의 시도에 의해 혈관 반응을 평가하였다. 또다른 세척 기간 후, 제2 기준선 값을 기록하고, 혈관 수축제 노르아드레날린 (25 nM)을 각 조에 첨가하고, 조직에 대해 안정한 톤을 달성하기에 충분한 시간 동안 (약 15 분) 조직을 인큐베이션하였다. 외인성 NO 유도제는 안정한 NO-공여자인 DETA-NO를 이용하여 공급하였다. DETA-NO의 농도를 적정하여 (하프-로그 증분으로 누적하여), 노르아드레날린에 의해 유발된 예비-수축의 대략 5 내지 15％ 이완을 달성하였다. 누적 농도-반응 곡선은 전형적으로 5 용량/환을 이용하여 15분 첨가 간격으로 단일 환에서 제작하였다.

방법 B: 대동맥 환 검정

방법 A의 프로토콜을 변형하여, PDE5 억제 화합물에 노출된 래트 대동맥 환의 이완을 측정하는 대안적인 프로토콜을 제공할 수 있다. 이 대안적인 방법은 하기 기재된 바와 같이 방법 A와 상이하다:

대안적인 방법의 경우, 환 (벗긴 환)을 제조하기 전에, 먼저 혈관의 루멘을 손가락 사이에서 부드럽게 문질러서 내피를 제거하였다. 기본 장력은 2 g으로 설정하고, 최대 농도의 페닐에페린 (1 μM)에 대한 혈관 수축 반응을 평가한 후, (세척 기간 후) 300 nM의 페닐에페린에 2회 더 노출시켰다. 노르아드레날린에 대한 농도-반응 관계를 0.1 내지 300 nM의 농도 범위에 걸쳐 각 조직에서 제작하였다. 또다른 세척 기간 후, 시험 화합물에 대한 노르아드레날린의 EC₉₀ 농도를 이용하여 각 조직을 수축시켰다.

실시예 16: 생체내 검정

방법 A: 쿨렉스(Culex™) 검정

전신 동맥 혈압을 강하시키는데 있어서 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 효능을 평가하기 위해 의식있는 캐뉼화 삽입 전의 선천성 고혈압 래트 (SHR) 모델을 이용하였다. 이 검정은 자동화 혈액 샘플러 ("ABS") 시스템을 이용하여 수행하였다. 쿨렉스™ ABS 시스템 (인디애나주 웨스트 라파예트 소재의 바이오어낼리틱 시스템, 인크.(Bioanalytical System, Inc.))은 랩탑 컴퓨터, 4개의 제어 장치 및 대사 케이지를 포함한다. 이 ABS 시스템은 동물에게 과도한 스트레스를 유발하지 않고 단일 래트로부터 여러 혈액 샘플을 수집할 수 있게 한다.

또한, ABS 시스템은 생체마커 확인을 위해 잠재적으로 사용될 수 있는 뇨 샘플의 수집을 가능하게 한다. 이러한 접근법을 통해, 의식있는 구속되지 않은 SHR 래트에서 효능 및 표준 약물동력학적 연구를 수행함과 동시에, 혈장 무함유 약물 농도 또는 잠재적인 생체 마커(들) 및 약물동력학적 효과 (평균 동맥 혈압의 감소) 사이의 관계를 정의하였다.

약 300 g의 12 내지 16주령의 SHR 래트에서 수술에 의해 경정맥 및 우측 경동맥에 캐뉼러를 삽입하였다. 수술 회복 후, 동물들을 쿨렉스™ 케이지에 넣고, 동물이 움직일 때 케이지 움직임을 제어하여 캐뉼러가 꼬이는 것을 방지하는 센서를 구비한 움직임-반응성 아암(arm)에 매어 놓았다. 혈액 샘플링을 위한 우측 경 정맥 카테터 및 쿨렉스™ 멸균 튜브 세트와 화합물 투여를 위한 좌측 경정맥을 연결하고, 우측 경동맥 카테터를 혈압을 모니터링하는 혈압 변환기에 연결하였다. 카테터의 효능을 유지하기 위해, 매 12분 마다 또는 샘플링 사이에 20 ㎕의 헤파린 염수 (10 유닛/mL)로 카테터를 플러싱하는 쿨렉스™의 "관리(tend)" 기능에 의해 우측 경정맥 캐뉼라를 유지하고, 좌측 경정맥 캐뉼라를 헤파린 염수 (20 유닛/mL)로 충전하였다. 헤파린 염수를 혈압이 기록되지 않을 때에는 연장된 튜브로 직접적으로 또는 혈압을 모니터링하는 도중에는 혈압 변환기를 통해 천천히 주입하여, 우측 경동맥 캐뉼라의 효능을 유지하였다. 화합물을 평가하기 적어도 2시간 전에 동물들을 순응시켰다. PDE5 억제 화합물은 정맥내로 또는 경구 가비지를 통해 투여될 수 있다. 혈액 샘플링 프로토콜 (샘플링 시간 및 부피)은 쿨렉스™ 소프트웨어를 이용하여 프로그래밍하였다. 각 동물로부터 채취한 혈액의 총량은 2주 내에 750 ㎕/24시 및 10 mL/kg을 넘지 않았다. 심박률, 혈압, 및 약물 농도를 모니터링하였다. 전신 동맥 혈압 및 심박률을 PONEMAH (오하이오주 밸리 뷰 소재의 굴드 인스트루먼트 시스템(Gould Instrument System), 실험 프로토콜을 기준으로 6 내지 24시간 동안 혈압 및 심박률을 기록하는 데이타 획득 시스템을 통한 압력 변환기)을 이용하여 기록하였다. 화합물의 효능을 평가하기 위해 평균 동맥 혈압 (1차 종점)을 분석하였다.

혈장 약물 농도를 측정하기 위해 또한 잠재적인 생체마커를 평가하기 위해 하기 기재된 LC/MS/MS 방법을 이용하여 혈액 샘플을 분석하였다.

LC/MS/MS 방법

샘플 제조: 혈장 샘플 (50 ㎕ 미지, 대조군 또는 블랭크)을 10 ㎕의 아세토니트릴:물 또는 PDE-5 억제 화합물 및 150 ㎕의 내부 표준 용액 (아세토니트릴 중 PDE-5 억제 화합물 100 ng/mL)의 표준 용액과 혼합하였다. 혼합물을 3000 rpm에서 5분 동안 원심분리하고, 상청액 125 ㎕를 96 웰 플레이트로 옮겼다. 질소 스트림하에 용매를 증발시키고, 잔사를 아세토니트릴/0.1％ 수성 포름산 (20:80 v/v) 80 ㎕으로 재구성하였다.

20 ㎕ 부피의 제조된 각 샘플을 페노메넥스 시너지(Phenomenex Synergi) 4 ㎛ MAX-RP 2.0 x 75 mm 컬럼에 주입하고, 0.1％ 수성 포름산 (이동상 A)에서부터 아세토니트릴 (이동상 B)로의 구배 용출을 이용하여 0.4 mL/min로 용출하였다. 구배 프로그램은 90％ 이동상 A의 초기 적용, 주입 후 0.2분에서 1.15분에 걸쳐 75％ 이동상 B으로의 선형 구배, 및 2.0분까지 75％ 이동상 B의 유지로 이루어졌다. 이동상을 2.00분에서 2.10분에 걸쳐 다시 90％ 이동상 A로 선형으로 변화시키고, 다음 주입은 3.00분에 수행하였다. m/z 454.00 (MH+ PDE-5 억제 화합물) → m/z 408.00, m/z 466.24 (MH+ PDE-5 억제 화합물) → 409.33 전이의 다중 반응을 모니터링하는 양이온 전기분무 (ESI)를 이용하는 질량 분광법에 의해 검출을 수행하였다. 이온 분무 전압은 5000으로 설정하였다. 보정 곡선은 내부 표준에 대한 분석물의 피크 면적 비율을 이용하여 제작하였다. 대상 농도는 상기 보정 곡선에 대한 피크 면적 비율로부터 역으로 예측하여 결정된다.

방법 B: 선천성 고혈압 래트에서 무선 송신기의 이식 및 원격측정에 의한 후속적인 혈압 스크리닝

선천성 고혈압 래트 (SHR)를 산소가 기계의 내부 챔버를 통과함에 따라 소정의 백분율 범위로 이소플루란을 전달하도록 보정된 이소플루란 마취 기계를 통해 이소플루란 가스로 마취시켰다. 동물을 유도 챔버에 넣고, 수술 단계의 마취에 도달하기 위해 4 내지 5％의 이소플루란을 투여하였다. 그 후, 수술대 상의 소형 이소플루란 마취기구를 통해 이소플루란을 전달하여 수술하는 동안 노즈콘을 통해 1 내지 2％로 유지하였다.

마취 후, 시판되는 멸균 무선-원격측정 장치 (미국 55113-1136 미네소타주 로즈빌 소재의 데이타 사이언시즈 인터내셔날(Data Sciences, International))를 이용하는 무균 절차에 따라 래트에게 송신기를 이식하였다. 수술하기 전에, 수술 부위를 면도하고, 다이알(Dial™) 브랜드 항미생물 용액 (4％ 클로르헥시딘 글루코네이트 및 4％ 이소프로필 알콜 함유)을 이용하여 스크러빙한 후, 요오드 (10％) 분무 용액을 도포하였다. 2.5 내지 3.0 cm의 개복술을 수행하고, 복부 대동맥에 삽입된 카테터 팁을 이용하여 무선-원격측정 장치를 복부에 이식하였다. 베이비 화이틀라너 리트랙터(Baby Weitlaner retractor)를 이용하여 연질 조직을 유지하였다. 복부 대동맥의 1 cm 단편을 일부 해부하고, 상기 단편을 간단히 교차 클램핑하여 21-게이지 니들로 천공하고, 송신기 카테터 팁을 상기 혈관에 도입하고, 단일 4.0 실크 봉합사를 이용하여 인접한 요근에 고정하였다. 그 후, 송신기 바디를 복부 내강에 삽입하고, 연속 4.0 실크 봉합사를 이용하여 봉합함과 동시에 복부 근육벽에 고정하였다. 표피층을 피하 연속 4.0 흡수성 봉합사를 이용하여 봉합하였다. 마르카인을 피하 (s.c.) 투여한 후, 봉합시에 봉합선 내로 및 그 둘레로 요오드를 국소 도포하였다. 수술 후 모든 래트에게 부프레노르핀 0.05 mg/kg을 피하 투여한 후, 의식을 회복시켰다. 0.300 kg 래트에 대한 전형적인 투여 부피는 0.050 ml일 것이다. 부프레노르핀을 투여하기 전에 래트는 수술 마취로부터 완전히 깨어나야 한다. 그 후, 래트가 수술후 통증을 견디는 것이 입증되지 않으면, 연속 2일 동안 동일한 투여량을 1일 1회 투여하였다.

수술 후, 래트를 케이지에 다시 옮기고, 종이를 깐 고체 바닥 케이지에 개별적으로 수용하였다. 실험 절차를 개시하기 전 회복을 위해 7일 이내의 시간이 주어졌다. 래트는 수술 후 수일 동안 전형적인 고혈압을 나타내고, 수술 후 대략 7일째에 "정상혈압" 수준으로 돌아오는 것으로 관찰되었다. 실험 기간에 걸쳐 이들에게 표준 래트 식사와 물을 임의로 제공하였다.

둥근 말단을 가진 스테인리스 스틸 2½ 인치 18 게이지 가비지 니들을 이용하여 화합물을 가비지를 통해 위내 (i.g.)로 투여하였다. 매일 단일 투여를 위한 표적 부피는 3.33 ml/kg (i.g.)이었다. 화합물이 투여되는 비히클은 화합물의 용해도에 따라 달라지겠지만, 물 중 메틸셀룰로스 (0.5％)가 주로 선택될 것이다.

혈압 데이타는 데이타 사이언시즈 인터내셔날의 데이타 획득 프로그램을 이용하여 얻었다. 혈압 샘플을 전체 연구에서 1일 24시간에 걸쳐 1.5 내지 3분 간격으로 5초 동안 기록하였다. 이 데이타는 데이타 사이언시즈의 데이타 분석 소프트웨어를 이용하여 목적하는 시간 간격의 평균으로 가공하였다. 모든 다른 데이타 환산은 마이크로소프트 엑셀(Microsoft Excel™) 스프레드시트에서 수행하였다.

방법 C: SHR 래트

이 실험 프로토콜은 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드에 의한 혈압 강하를 스크리닝하기 위해 고안되었다. 선청성 고혈압 래트 (SHR)의 경정맥 및 경동맥에 캐뉼라를 삽입하였고, 한쪽은 화합물의 투여를 위한 것이고, 다른 한쪽은 직접 혈압 측정을 위한 것이다. 수술 후 동물은 완전히 의식이 있었고, 모든 실험은 하루의 작업일 내에 수행하였다. 혈압 강하는 평가될 주요 파라미터이다. 그러나, 수축기 및 확장기 혈압 및 심박률 데이타 또한 수집하였다. 래트에게 상승 또는 누적 방식으로 투여하여 이 방법에 따른 반응을 관찰하였다. 이 특별한 방법은 동일한 동물을 이용하여 하루 안에 다중 투여를 스크리닝하게 한다.

방법:

마취: 래트를 5％ 이소플루란을 이용하여 마취하였다. 절개 부위를 면도하고, 수술을 위해 무균 상태로 준비하였다. 그 후, 래트를 가열 패드, 보충용 이소플루란을 구비하고 37℃로 유지되는 수술대로 옮기고, 수술 절차에 걸쳐 이소플루란으로 마취시켰다.

수술: 동맥 및 정맥 캐뉼라를 각각 경정맥 및 경동맥에 이식하였다. 캐뉼라를 피부를 통한 출구 부위인 목의 뒷부분에 피하로 삽입하였다. 스테인리스 스틸 스테이플을 이용하여 각 절개 부위를 봉합하였다. 그 후, 캐뉼라를 스파링-테터(spring-tether)를 통해 실험하는 동안 동물이 캐뉼라를 씹는 것으로부터 보호하는 스위블 장치에 연결하였다.

회복: 래트를 테터 및 스위블 장치의 중량을 지지하는 카운터 밸런스 아암이 장착된 불투명한 폴리카르보네이트 케이지에 넣었다. 케이지의 바닥에 종이를 깔았다. 이 시점에서 수술로부터 래트를 회복시키고, 회복 단계 동안 초기에 2 mL 부피를 공급하였다. 동물에게 음식은 제공하지 않았다.

본 발명의 요소 또는 그의 예시적인 실시양태(들)을 도입하는데 있어서, "하나", "그" 및 "상기"는 상기 요소가 하나 또는 그 이상임을 의미하는 것으로 의도된다. 용어 "포함하는", "함유하는" 및 "갖는"은 포괄적이며, 열거된 성분 이외의 추가 성분을 포함할 수 있는 것으로 의도된다. 본 발명이 구체적인 실시양태에 대하여 설명되었지만, 이들 실시양태의 상세한 내용이 제한적인 것으로 파악되어서는 않된다.

Claims

8.5 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 X-선 분말 회절 패턴을 갖는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제1항에 있어서, X-선 분말 회절 패턴이 9.0 ± 0.1, 16.9 ± 0.1, 20.0 ± 0.1 및 22.5 ± 0.1° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 회절 피크를 추가로 포함하는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제2항에 있어서, X-선 분말 회절 패턴이 3.6 ± 0.1 및 7.2 ± 0.1° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 회절 피크는 포함하지 않는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제1항에 있어서, 3247 ± 3 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 푸리에(Fourier) 변환 적외 스펙트럼을 갖는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르 보닐]메탄술폰아미드.
제1항에 있어서, 푸리에 변환 적외 스펙트럼이 696 ± 2, 1085 ± 2, 1188 ± 2 및 1540 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 흡수 밴드를 추가로 포함하는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제1항에 있어서, 푸리에 변환 적외 스펙트럼이 1645 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드는 포함하지 않는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제1항에 있어서, 3255 ± 3 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제1항에 있어서, 라만 스펙트럼이 993 ± 2, 1383 ± 2, 1473 ± 2 및 1569 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 밴드를 포함하는, 결정형 N- [1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제1항에 있어서, 라만 스펙트럼이 1652 ± 2 cm^-1에서의 밴드는 포함하지 않는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
치료 유효량의 제1항의 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
치료 유효량의 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하며, 상기 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 약 50 중량％ 이상이 제1항의 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드로서 존재하는 제약 조성물.
3.6 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 X-선 분말 회절 패턴을 갖는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제12항에 있어서, X-선 분말 회절 패턴이 7.2 ± 0.1, 10.1 ± 0.1, 14.4 ± 0.1 및 23.8 ± 0.1° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 회절 피크를 추가로 포함하는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제13항에 있어서, X-선 분말 회절 패턴이 8.5 ± 0.1, 20.2 ± 0.1 및 22.5 ± 0.1° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 회절 피크는 포함하지 않는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제12항에 있어서, 1452 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 푸리에 변환 적외 스펙트럼을 갖는 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제12항에 있어서, 푸리에 변환 적외 스펙트럼이 722 ± 2, 920 ± 2, 1211 ± 2 및 1395 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 흡수 밴드를 추가로 포함하는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제12항에 있어서, 푸리에 변환 적외 스펙트럼이 962 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드는 포함하지 않는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제12항에 있어서, 1299 ± 2 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제12항에 있어서, 라만 스펙트럼이 689 ± 2, 1456 ± 2, 및 1535 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 밴드를 추가로 포함하는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제12항에 있어서, 라만 스펙트럼이 1316 ± 2 cm^-1에서의 밴드는 포함하지 않는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
치료 유효량의 제1항의 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
치료 유효량의 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하고, 상기 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 약 50 중량％ 이상이 제12항의 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드로서 존재하는 제약 조성물.
6.7 ± 0.1° 2θ에서의 회절 피크를 포함하는 X-선 분말 회절 패턴을 갖는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제23항에 있어서, X-선 분말 회절 패턴이 10.6 ± 0.1, 14.0 ± 0.1, 17.7 ± 0.1 및 20.2 ± 0.1° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 회절 피크를 추가로 포함하는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제24항에 있어서, X-선 분말 회절 패턴이 3.6 ± 0.1 및 9.0 ± 0.1° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 회절 피크는 포함하지 않는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제23항에 있어서, 881 ± 2 cm^-1에서의 흡수 밴드를 포함하는 푸리에 변환 적외 스펙트럼을 갖는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제23항에 있어서, 푸리에 변환 적외 스펙트럼이 661 ± 2, 703 ± 2, 797 ± 2, 909 ± 2 및 1269 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 흡수 밴 드를 추가로 포함하는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제23항에 있어서, 푸리에 변환 적외 스펙트럼이 688± 2 및 696 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 흡수 밴드는 포함하지 않는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제23항에 있어서, 2988 ± 2 cm^-1에서의 밴드를 포함하는 라만 스펙트럼을 갖는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제23항에 있어서, 라만 스펙트럼이 707 ± 2 및 1447 ± 2 cm^-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 밴드를 추가로 포함하는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
제23항에 있어서, 라만 스펙트럼이 1417 ± 2 cm^-1에서의 밴드는 포함하지 않는, 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드.
치료 유효량의 제23항의 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
치료 유효량의 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하며, 상기 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드의 약 50 중량％ 이상이 제23항의 결정형 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드로서 존재하는 제약 조성물.
치료 유효량의 제1항의 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 PDE-5 매개 증상의 치료 방 법.
치료 유효량의 제12항의 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 PDE-5 매개 증상의 치료 방법.
치료 유효량의 제23항의 N-[1-(2-에톡시에틸)-5-(N-에틸-N-메틸아미노)-7-(4-메틸피리딘-2-일-아미노)-1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-3-카르보닐]메탄술폰아미드를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 PDE-5 매개 증상의 치료 방법.