KR20070033956A

KR20070033956A - 신규 펩타이드 계열의 조성물, 방법 및 용도

Info

Publication number: KR20070033956A
Application number: KR1020067017586A
Authority: KR
Inventors: 이 웨이 지앙
Original assignee: 더 텍사스 에이 앤드 엠 유니버시티 시스템
Priority date: 2004-01-30
Filing date: 2005-01-28
Publication date: 2007-03-27
Also published as: MXPA06008503A; EP1765374A4; AU2005209901A1; CN101217970A; CA2554634A1; WO2005074626A3; US7498404B2; WO2005074626A2; EA200601408A1; BRPI0507186A; EP1765374A2; IL177143A0; US20060228398A1; NO20063521L; ZA200606202B; JP2008508851A; US20090175981A1

Abstract

본 발명은 예를 들면, 항미생물제 또는 심지어 사료 첨가물로서 사용되는, 2종 이상의 D-아미노산을 갖는 분리 및 정제된, 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드를 포함하는, 브레비바실러스 종으로부터의 신규한 펩타이드 및 이에 관련된 펩타이드의 조성물 및 특성화 방법 및 용도를 포함한다.

사료 첨가물, 항미생물제, 펩타이드, 브레비바실러스 종, 브레비바실러스 텍사스포러스, D-아미노산, BT, 오페론

Description

신규 펩타이드 계열의 조성물, 방법 및 용도{Compositions, methods and uses for a novel family of peptides}

본 발명은 일반적으로 분리 및 정제된 신규한 펩타이드의 분야, 및 보다 특히, 새로이 발견된 생물체인 브레비바실러스 텍사스포러스(Brevibacillus texasporus)로부터의 신규 펩타이드 그룹의 동정, 특성화 및 용도에 관한 것이다.

본 출원은 본원에 참조로 인용된 관련 부분인, 2004년 1월 30일자로 출원된, 미국 가특허출원번호 제60/540,569호에 대한 우선권을 주장한다. 본 발명의 영역을 제한하지 않으면서, 이의 배경은 항생제 및 사료 첨가제와 관련되어 기술된다.

항생제 남용은 광범위한 세균 약물 내성을 초래하였다. 통상적인 항생제에 대한 세균 내성에 의해 유발된 감염과 맞서기 위해 신규한 항생제가 필요하다. 미생물이 경쟁 미생물에 대항하여 화학적 전투를 치르기 위해 매우 다양한 항생제를 생산함이 널리 공지되어 있다.

미생물 기원의 많은 펩타이드 항생제는 비(非)-리보솜성 펩타이드 신타제(NRPS)에 의해 합성되며 이들은 통상적이지 않은 아미노산을 포함한다. NRPS 효 소는 일반적으로 동선상(co-linear) 모듈 구조를 갖는다(문헌[참조: Mootz, et al., 2002]). 개별 모듈의 N-말단에서 C-말단으로의 순서 및 특이성은 당해 펩타이드 생성물의 아미노산 잔기의 순차적 순서 및 실체에 상응한다. 각각의 NRPS 모듈은 특이적 아미노산을 인식하고 단계별 축합을 촉진시켜 성장하는 펩타이드 쇄를 형성한다. 특정 모듈에 의해 인식된 아미노산의 실체는 공지된 특이성의 다른 모듈에 비교하여 예측할 수 있다(문헌[참조: Challis, et al., 2000]). 이러한 엄격한 상관관계 덕택에, 미코박테리움 튜버쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis)의 게놈 내의 미코박틴 생합성 오페론의 동정에 의해 입증된 바와 같이, 공지된 구조를 갖는 다수의 미생물 비-리보솜성 펩타이드에 대한 NRPS 요소를 암호화하는 유전자를 동정할 수 있게 되었다(문헌[참조: Quadri, et al., 1998]). 그럼에도 불구하고, 당해 분야는 신규한 항미생물제의 분리, 동정 및 특성화에 대한 지속적인 필요를 인식하고 있다.

사료 첨가제의 예는 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들면, Register에게 허여된 미국 특허 제6,682,762호는 이러한 가금류 및 가축 사료 첨가제를 개시한다. 간략히, 당해 특허는 음식물 전해질 균형을 증가시키기 위해 36중량% 전해질, 조질 식료(roughage) 및 광유를 함유시킨 가금류 및 가축 사료 첨가제 조성물을 교시한다. 전해질 첨가 조성물의 첨가는 계란 생산, 체중, 및 열 스트레스로 인한 폐사 감소와 같은 암탉 사육 성능을 개선한다. 이러한 식단으로 사육한 브로일러(Broiler) 닭은 가공률, 사료 전환 및 체중의 증가를 제공한다. 가금류 및 가축에 대한 이러한 음식물 전해질 사료의 제조 방법 또한 기술되어 있다.

사료 첨가물의 다른 예는 미국 특허 제6,503,544호에서 저자 Nagai 등에 의한 교시인데, 다음의 3가지 성분 (a, (b) 및 (c)로 이루어진 그룹 중에서 선택된 2종 이상의 성분을 포함하는 동물 사료 첨가물을 교시한다: (a) 파인니들(Pine Needle), 산사나무 열매(Hawthorn Fruit), 대두창출(Bighead Atractylodes Rhizome), 자운영 뿌리(Milkvetch Root), 골무꽃 뿌리(Skullcap Root), 탄제린 열매(Tangerine Fruit) 및 민트 시프팅(Mint Sifting); (b) 효모 세포벽 및 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) 및/또는 엔테로코쿠스 패시움(Enterococcus faecium)을 함유하는 살아있는 세균 제제로 구성된 살아있는 세균 혼합물; 및 (c) 유기산.

사료 첨가물은 또한 진균 및/또는 세균성 발효 부산물을 함유하는 반추동물을 위한 사료 첨가물에 대해 Julien에게 허여된 미국 특허 제5,863,574호에서 교시한 바와 같이 발효 및 기타 공정의 부산물을 포함할 수 있다. 반추동물의 사료 첨가물은 글루탐산 발효 가용물을 제공하는 무수 진균 및/또는 세균성 발효 부산물, 무수 옥수수 발효 가용물 또는 무수 글루탐산 발효 가용물 및 무수 옥수수 발효 가용물의 혼합물을 포함하며, 여기서, 무수 가용물은 약 80°F 이상 및 약 900°F 이하의 온도에서 30중량% 미만의 총 수분 함량으로 건조되어 있다.

발명의 요약

한 양태에서, 본 발명은 브레비바실러스 종(Brevibacillus sp .)으로부터 분리한 2종 이상의 D-아미노산을 포함하는 분리 및 정제된, 열 안정성의, 아미노 말 단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드를 포함하는 사료 첨가물이다. 당해 펩타이드의 C-말단 발린의 카복시 말단 -COOH 그룹은 -CH₂OH로 환원될 수 있으며, 펩타이드에 프로테아제 내성을 부여할 수 있다. 펩타이드 사료 첨가물은 pH 1.0, pH 13.0에서 안정할 수 있으며, 프로테아제 또는 이의 배합물에 내성을 가질 수 있다. 당해 펩타이드의 예는 서열 번호 1 내지 20 중 하나 이상에서 선택될 수 있다(BT 펩타이드로 총칭함). 상기 펩타이드는 그람 양성 세균, 그람 음성 세균, 진균, 원생생물 또는 이의 배합물을 사멸시키는 것으로 밝혀졌다. 당해 펩타이드는 브레비바실러스 텍사스포러스(ATCC PTA-5854)로부터 분리될 수 있으며 약 0.5 내지 약 100ppm으로 사료에 첨가할 수 있다. 한 가지 용법에서, 당해 펩타이드를 약 6 내지 약 12ppm으로 첨가하였고 통계적으로 유의한 성장 자극을 입증하였다.

첨가 펩타이드를 가금류, 가축, 양식 어류, 게, 새우 및 민물 거북이 중 하나 이상에 사용하기 위해 개질시킨 사료에 첨가할 수 있다. 예를 들면, 당해 펩타이드는 곡물류 동물 사료, 예를 들면, 보리, 콩, 밀, 라이밀(triticale), 호밀 및 옥수수 중에서 선택된 하나 이상의 곡물; 및 브레비바실러스 종으로부터 분리된 2종 이상의 D-아미노산을 포함하는 분리 및 정제된, 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드 중에 포함될 수 있다. 당해 펩타이드류 사료 첨가물은 약 1 내지 1000ppm의, 브레비바실러스 종으로부터 분리된 2종 이상의 D-아미노산을 갖는 분리 및 정제된, 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드를 포함할 수 있다. 사실, 본 발명은 임의의 매우 다양한 사료와 함께 사용할 수 있다.

본 발명은 또한 2종 이상의 D-아미노산을 가지며 카복시 말단이 환원된 pH 및 열 안정성의, 브레비바실러스 종으로부터 분리된 항미생물성 펩타이드를 포함한다. 예를 들면, 본 발명은 카복시-말단이 환원된, 열 안정성의, 아미노 말단이 메틸화된 펩타이드이며 2종 이상의 D-아미노산을 포함할 수 있는 항미생물성 펩타이드를 생성하는 미생물 브레비바실러스 텍사스포러스 수탁번호 제ATCC PTA-5854호의 생물학적 순수 배양물을 포함한다. 더욱이, 당해 사료 첨가물은 ATCC PTA-5854의 분리 및 정제된 미생물일 수 있다. 당해 첨가물을 대용유(milk replacer), 육성용 사료(grower feed), 비육용 사료(finish feed), 예비-포유용 사료(pre-starter feed) 및 포유용 사료(pre-starter feed)로 이루어진 그룹 중에서 선택된 가축용 사료와 혼합할 수 있다.

본 발명은 또한 동물 사료에 하나 이상의 BT 펩타이드를 성장 증가에 충분한 유효량으로 제공함으로써, 동물에서 체중 증가 효율 및 사료 효율을 증가시키는 방법을 포함한다. 동물 사료는 예를 들면, 소, 돼지, 닭, 말, 칠면조, 양, 염소, 양식 어류, 게, 새우 및 거북이로 이루어진 그룹 중에서 선택된 가축의 사료로 제공하기에 적합하게 개질되어 있다. 사료의 예로는 또한 예를 들면, 닭, 칠면조, 오리, 메추라기, 콘월 암탉(Cornish hen) 및 비둘기로 이루어진 그룹 중에서 선택된 조류의 사육용 사료가 포함된다. 이와 같이, 사료는 예를 들면, 곡물, 대두분, 분리대두단백, 분리대두유, 분리대두유지, 탈지유, 어분, 육분, 골분, 혈분, 혈장 단백질, 유장, 쌀겨, 밀겨, 감미료, 미네랄, 비타민, 염 및 목초로 이루어진 그룹 중에서 선택될 수 있다. 당해 펩타이드의 일일 용량은 동물의 체중 kg당 약 0.01 내 지 약 10그람의 범위이다.

다른 양태에서, 본 발명은 브레비밥실러스 종으로부터 분리된, 2종 이상의 D-아미노산을 가지며 카복시-말단 환원된, pH 및 열 안정성인 펩타이드를 포함하는 국소 사용을 위한 광범위(broad spectrum)의 항미생물 화합물이다. 예를 들면, 당해 펩타이드는 서열 Me₂Bmt-L-dO-I-V-V-dK-V-dL-K-dY-L-V-CH₂OH(서열 번호 1) 또는 서열 번호 1 내지 20 중 어느 하나를 가질 수 있다.

다른 양태는 2종 이상의 D-아미노산을 포함하는, 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드를 생성하는 BT 오페론(서열 번호 21)의 서열을 갖는 분리 및 정제된 핵산이다. 하나 이상의 효소를 포함하는 BT 오페론 단백질에 대한 하나 이상의 폴리펩타이드 서열(서열 번호 22 내지 28)을 암호화하는 분리 및 정제된 핵산을 사용하여 2종 이상의 D-아미노산을 포함하는, 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드를 제조한다. 본 발명은 또한 서열 번호 21에 대해 75% 이상의 상동성을 갖는 이들의 분리된 핵산을 포함한다. 보다 특이적으로, 핵산은 2종 이상의 D-아미노산을 포함하는 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드를 제조하는데 사용된 효소인, 펩타이드 합성 오페론 단백질에 대한 하나 이상의 폴리펩타이드 서열(서열 번호 22 내지 28)을 암호화할 수 있다. 하나 이상의 BT 오페론 폴리펩타이드는 서열 번호 21로부터 발현되며, 2종 이상의 D-아미노산을 포함하는 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드를 제조하는데 사용된 하나 이상의 효소를 포함한다.

본 발명에 사용하기 위한 분리된 세균 샘플은 브레비바실러스 텍사스포러스 E58의 분리된 세균 균주를 포함할 수 있다. 다른 양태는 스타필로코쿠스(Staphylococcus), 엔테로코쿠스(Enterococcus), 뉴모코쿠스(Pneumococcus), 바실리(Bacilli), 메타노코쿠스(Methanococcus), 해모필러스(Haemophilus), 아캐오글로버스(Archaeoglobus), 보렐리아(Borrelia), 시네드로십티스(Synedrocyptis), 미코박테리아(Mycobacteria), 슈도모나스(Pseudomonas) 및 이. 콜라이(E. coli)로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 세균의 성장을 억제하는, 브레비바실러스 종으로부터 분리된, 2종 이상의 D-아미노산을 갖는 분리 및 정제된, 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드이다. 세균을 2종 이상의 D-아미노산을 포함하는, 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드를 생성하는 BT 오페론의 서열(서열 번호 21)을 갖는 분리 및 정제된 핵산으로 형질전환시킬 수 있다. 당해 핵산으로부터 발현된 단백질은 하나 이상의 BT 오페론 단백질 또는 이와 관련된 것들을 포함할 수 있다. 2종 이상의 D-아미노산을 포함하는 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드를 생성하는 BT 오페론의 서열(서열 번호 21)을 갖는 분리 및 정제된 핵산을 포함하는 벡터를 변형 또는 분리할 수 있다. 하나 이상의 BT 오페론 단백질을 암호화하는 핵산으로부터 하나 이상의 단백질이 발현될 수 있다. 사료 첨가물은 또한 서열 번호 1 내지 20과 75% 초과의 서열 상동성을 갖는 분리 및 정제된, 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드를 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 통상적이지 않은 아미노산 및 기타 유형의 변형을 함유하는 펩타이드 및 이들 펩타이드를 합성하는 비-리보솜성 펩타이드 신타제에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이들 펩타이드를 제조하는 방법, 및 각종 세균성 감염 및 원생생물성 감염 및 이러한 감염에 관련된 장애; 종양 세포 증식, 성장 및 확산의 치료 및 예방에; 또는 면역 조절제로서 당해 펩타이드를 단독으로 또는 통상의 항생제와 함께 상승작용적으로 사용하는 방법을 포함한다.

본 발명의 특징 및 이점을 보다 완전히 이해하기 위해, 이제부터 본 발명의 상세한 기술과 첨부한 도면을 함께 참조하며, 도면은 다음과 같다:

도 1A는 펩타이드 BT의 정제를 나타내는 겔이다. BT의 트리신 겔 분리 및 관련 항생제 활성. 클로로포름 추출 펩타이드를 미리 성형한 16.5% 트리신 겔(제조사[BioRad]로부터 구입) 상에서 분리시켰다. 한 겔을 쿠마시 블루(coomassie blue)(왼쪽)으로 염색하여 펩타이드 밴드를 나타냈다. 다른 겔(오른쪽)은 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)와 함께 매봉한 아가 위에 놓았다. 세균 로온(lawn)에서 투명한 영역은 ~1500의 분자량을 갖는 단일 밴드로 붕괴된 종에 상응한다. 분자량 마커는 다음과 같다: 트리오세포스페이트 아이소머레이즈 26.6kD, 미오글로빈 17.0kD, 알파-락트알부민 14.4kD, 아프로티닌 6.5kD, 인슐린 b 쇄, 산화된 3.5kD 및 바시트라신 1.4kD.

도 1B는 클로로포름-추출 BT의 질량분광분석의 그래프이다. 클로로포름-추출 BT를 염화나트륨을 첨가하여 이온화시킨 후 질량분광 분석에 적용하였다. 5개 의 이온화된 BT 이성체 그룹(BT1555, BT1571, BT1583, BT1599 및 BT1613)을 검출 및 표지하였다.

도 1C는 정제된 BT1583의 질량분광분석의 그래프이다. C18 역상 HPLC의 분획 33을 질량분광 분석에 적용하였다. 오직 수소화된, 나트륨 및 칼륨 이온화된 BT1583만이 검출되었다.

도 2A는 BT1583 직렬 질량분광계 데이타의 그래프이다. 도 2B는 아미노산 조성물 및 MS/MS 실험으로부터 추론된 부분적 BT 1583 서열 구조이다(표 1 및 2)(완전한 모티프 및 서열은 각각 표 5 및 6을 참조한다).

도 3A 내지 3D는 BT NRPS 오페론의 지도이다. 도 3A는 짝쌍에 의해 연결된 2개의 콘티그(contig)로부터의 슈퍼콘티그(supercontig)의 구조도이다. 콘티그 1 및 콘티그 2는 클론으로부터 짝쌍을 공유한다. 콘티그를 순서화하고 정렬하여, 서열분석되지 않은 간극 영역에 의해 분리된 콘티그 1 및 콘티그 2의 서열을 포함하는 슈퍼콘티그를 형성하였다.

도 3B는 본 작업에서 서열분석된 영역 및 당해 영역에서 발견된 9개의 ORF의 지도이다. btA에서 btF까지의 6개의 ORF는 BT NRPS 아단위(BtA, BtB, BtC, BtD, BtE 및 BtF)를 암호화한다.

도 3C는 BT NRPS 아단위의 도메인 조직도이다. 각각의 모듈의 예측된 아미노산 기질 특이성이 각각의 A-도메인에 표시되어 있다.

도 3D는 표 3에 기술된 바와 같은 13개의 결합 포켓(pocket) 구성요소 모두의 다중 서열 정렬의 계통발생 나무이다. 추정의 특이성을 부분적 BT1583 서열을 사용하여 할당하였다. 이는 A-도메인의 이들 결합 포켓이 추정상 동일한 또는 유사한 기질 클러스터(cluster)를 함께 활성화시킴을 나타낸다.

도 3E는 BT 오페론의 핵산 서열이다(서열 번호 21).

도 3F는 BtA의 아미노산 서열이다(서열 번호 22).

도 3G는 BtB의 아미노산 서열이다(서열 번호 23).

도 3H는 BtC의 아미노산 서열이다(서열 번호 24).

도 3I는 BtD의 아미노산 서열이다(서열 번호 25).

도 3J는 BtE의 아미노산 서열이다(서열 번호 26).

도 3K는 BtF의 아미노산 서열이다(서열 번호 27).

도 3L는 BtG의 아미노산 서열이다(서열 번호 28).

도 4A 내지 4E는 각각 보존 모티프의 서열 정렬 및 BT NRPS 모듈로부터의 아데닐화, 축합, 티올화, 에피머화 및 리덕타제 도메인의 정렬이다. 보존 모티프는 문헌[참조: Marahiel, 1997])에 따라 확인하였다. 컨센서스(consensus)를 각각의 정렬 밑에 두었다. 컨센서스와 부합되는 잔기에 검은색 음영을 주었다. 12개 C-도메인 모두를 덜 보존되는 것으로 공지된 출발 C 도메인을 지시하는 ^* 기호와 함께 배열하였다.

도 5A 내지 5E는 각각 A) 내지 D)로 나열된 ATP-PPi 교환 검정으로부터 수득한 모듈 8, 5, 7, 4 및 2의 정제된 A-도메인 각각의 관련 기질 특이성에 대한 ATP-PPi 교환 검정이다. 최고 활성은 100%로 정의되었다. 20개 모두의 단백원성 아미노산 및 L-Orn을 각각의 검정에서 시험하였고, 배경수준은 통상 1% 이하였다. 특 이적 아미노산에 대한 A-도메인의 겉보기 Km을 아래에 나열하였다.

도 6A는 합성 BT 변이체의 요약이며, 도 6B는 BT 변이체와 상기한 바와 같은 항생제 활성 및 프로나제(Pronase) 내성에 대한 이들의 특성 사이의 상관관계이다.

본 발명의 각종 양태의 제조 및 사용이 아래에 상세히 논의되어 있지만, 본 발명은 매우 다양한 구체적 상황에서 구현될 수 있는 많은 적용가능한 발명적 개념을 제공함을 이해해야 한다. 본원에 논의된 특이적 양태는 단지 본 발명을 제조 및 사용하는 특이적 방법의 예시이며 본 발명의 영역을 제한하지 않는다.

본 발명의 이해를 돕기 위해, 다수의 용어를 아래에 정의하였다. 본원에서 정의된 용어는 본 발명에 관련된 영역의 통상적인 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 갖는다. 관사와 같은 용어는 단지 단수 자체만을 지칭하고자 하는 것은 아니며, 예시를 위해 사용할 수 있는 구체적 예의 일반적 부류를 포함한다. 본원의 술어는 본 발명의 특이적 양태를 기술하기 위해 사용되었지만, 이들의 사용은 청구항에 약술된 것을 제외하고는 본 발명을 제한하지 않는다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "가축 동물"은 예를 들면, 돼지, 소, 말, 염소, 양, 사슴, 개, 고양이 및 다수의 유용한 설치류 중 임의의 동물을 기술한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "가금류"는 예를 들면, 닭, 암탉, 메추라기, 칠면조, 뿔닭 등을 포함한다. 본원에 사용된 용어 "양식 어류"는 예를 들면, 잉어, 메기, 석조송어(rainbow trout), 아유(ayu)(은어), 장어, 틸라피아, 붕장어, 연어, 숭어, 붉은 돔, 방어(yellow tail), 가자미, 복어 등을 포함한다. 다수의 기타 동물(예를 들면, 새우 및 참새우) 또한 유용할 것으로 사료된다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "첨가물" 및 "사료 첨가물"은 가축, 가금류 및 어류의 건강 개선 및 현존하는 건강한 동물의 감소된 또는 낮은 체중 및/또는 증가된 성장률(예를 들면, 체중)로 인한 경제적 손실 감소를 초래하는 사료 첨가물로서 동물 사료와 함께 사용할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 사료 첨가물은 세균 분리물, 부분적 또는 전체적으로 분해된 세균으로부터 사용될 수 있으며, 세균으로부터 분리 및 정제되고/거나 전체 또는 부분적으로 합성적으로 합성될 수 있다. 가축 동물, 가금류 및 어류용 첨가물 또는 사료 첨가물은 분말, 낟알 또는 액상일 수 있으며 사육 조건 및 농장의 설치 및 사육 동물에 따라 사용될 것이다.

적합한 동물 사료에는 예를 들면, 녹색 사료, 사일리지(silage), 건조시킨 녹색 사료, 뿌리, 덩이줄기, 신선한 과일, 낟알 및 씨앗, 양조 낟알(brewer's grain), 즙을 짜낸 찌꺼기(promace), 양조 효모, 증류 폐기 낟알(distiller's spent grain), 제분 부산물, 당, 전분 및 오일 회수물의 생산의 부산물 및 각종 음식물 쓰레기가 포함된다. 본 발명의 사료 첨가물은 단독으로 또는 항산화제 또는 이러한 증강용 사료에 첨가할 수 있는 각종 물질의 혼합물(미네랄 혼합물, 비타민 혼합물)과 같은 기타 널리 공지된 사료 첨가물과 함께 사용할 수 있다. 특이적 사료는 또한 연령 및 발육 단계에 따라 특정한 동물 종에 맞게 개질시킬 수 있다.

본 발명의 펩타이드와 함께 사용하기에 적합한 기본 사료를 사료 제조 분야의 숙련가에게 널리 공지된 바와 같이 제조할 수 있다, 예를 들면, 본원에 참조로 인용된 관련 부분인 문헌[참조: Kirk-Othmer, Encyclopedia of Chemical Technology, 4th Ed. , vol. 10, pp. 288-300, Wiley, N. Y., 1993]에 기술된 바와 같은 것을 사용할 수 있다. 예를 들면, 기본 사료는 다음의 성분 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 옥수수, 수수, 보리, 밀, 콩, 땅콩, 캐놀라, 어분, 유제품, 유지, 비타민 및 미네랄.

본 발명자는 NRPS 오페론이 펩타이드 생성물의 특정한 구조 세부 사항을 습득케 하는 정보원일 수 있음을 인지하였다. BT NRPS 오페론의 동정은 BT1583 펩타이드 구조의 결정적 세분을 초래한다. 토양 미생물을 신규한 항생제를 생산하는 균주에 대하여 선별하였다. 바실러스 종 E58(ATCC PTA-5854)을 면역이 위태로운 환자에게서 생명을 위협하는 병원성 감염을 초래하는 스타필로코칼 아우레우스에 대항하는 항생제 BT를 생산하는 이의 능력에 대해 분리하였다. 당해 균주는 브레비바실러스 라테로스포러스(Brevibacillus laterosporus)에 대한 이의 관련성을 기초로 하여 브레비바실러스 텍사스포러스로 명명하였다.

NRPS의 모듈은 펩타이드 생성물을 형성하기 위한 아미노산 전구체의 인식, 활성화, 변형 또는 결합에서 각각 특이적 역할을 수행하는 소단위 또는 "도메인"으로 구성되어 있다. 한 유형의 도메인, 아데닐화(A-) 도메인은 NRPS의 특정 모듈에 의해 통합되는 아미노산의 선택적 인식 및 활성화를 담당한다. 기타 A-도메인의 서열 비교와 함께, 그라미디신(Gramicidin) S NRPS의 PheA 아단위의 A-도메인의 기질-결합 포켓의 분석을 통해 A-도메인에 대한 기질 특이성의 주요 결정인자인 10개의 잔기를 결정할 수 있었다(문헌[참조: Conti, et al., 1997; Stachelhaus, et al., 1999]). 10개의 잔기를 NRPS '코돈'으로 간주하였다. NRPS 코돈 수집은 계속 발견되는 신규한 NRPS 코돈으로 여전히 성장하고 있다. 본 발명은 분리 및 정제된 핵산 및 발린, 라이신, 오르니틴 및 타이로신에 대한 신규한 NRPS 코돈의 그룹에 대해 이에 의해 암호화된 단백질을 포함한다.

아미노산 활성화 단계는 ATP-의존성이며 아미노-아실 아데닐화의 일시적 형성을 포함한다. 활성화된 아미노산은 일반적으로 A-도메인에 인접하여 위치한 다른 유형의 도메인, 티올화(T-) 도메인을 통해 펩타이드 신타제에 공유 결합한다. T-도메인은 보존적 세린 잔기에 포스포판테테이닐 인공 팔의 공유 결합에 의해 해독 후 변형된다. 활성화된 아미노산 기질은 각각의 T-도메인의 포스포판테테이닐 인공 팔에 대한 티오에스테르 결합을 통해 NRPS 상에 고정된다. NRPS의 연속하는 단위에 결합한 아미노산은 다른 유형의 도메인, 축합(C-) 도메인에 의해 촉매화된 아미드 결합의 형성에 의해 연속적으로 서로 공유 결합된다. NRPS 모듈은 또한 때때로 보조 반응, 가장 통상적인 것은 L-형태로부터 D-형태로의 아미노산 기질의 에피머화를 수행하는 부가의 기능적 도메인을 포함할 수 있다. 당해 반응은 일반적으로 주어진 NRPS 모듈의 T-도메인에 인접하여 위치한 에피머화(E-) 도메인으로 지칭되는 도메인에 의해 촉매화된다. 따라서, 통상적인 NRPS 모듈은 다음의 도메인 조직: C-A-T-(E)을 갖는다.

NRPS에 의해 조립된 생성물은 3가지의 다른 상, 즉, 쇄 개시, 쇄 연장 및 쇄 종결을 포함한다(문헌[참조: Keating & Walsh, 1999]). 펩타이드 쇄 개시는 A-도메인 및 T-도메인을 포함하는 "출발자 모듈"로 지칭되는 특수화된 모듈에 의해 수행된다. 연장 모듈은 추가로, A-도메인의 상류에 위치해 있는 C-도메인을 갖는다. 이러한 연장 도메인은 C-도메인에 의한 간섭 때문에 펩타이드 결합 형성을 개시할 수 없음이 실험적으로 증명되었다(문헌[참조: Linne & Marahie, 2000]). 모든 성장 중인 펩타이드 중간체는 연장중인 일련의 아실-S-효소 중간체로서 전좌 중 NRPS에 공유 결합되어 있다. NRPS로부터 성숙한 펩타이드 생성물을 방출시키기 위해, 말단의 아실-S-효소 결합이 깨어져야만 한다. 이러한 과정은 쇄 종결 단계이며 일반적으로 C-말단 티오에스테라제(TE) 도메인에 의해 촉매화된다. NRPS로부터의 성숙한 펩타이드의 티오에스테라제-매개 방출은, 아실-O-TE 중간체의 일시적 형성을 수반하며, 상기 아실-O-TE 중간체는 후에 가수분해되거나 가수분해되고 동시에 환형화되어 성숙한 펩타이드를 방출한다(문헌[참조: Keating, et al., 2001]). 대안적인 종결안은 알콜성 C-말단 잔기를 갖는 펩타이드의 방출을 초래하는, 마지막 NRPS 모듈에 존재하는 리덕타제(R-) 도메인에 의한 결합된 C-말단 잔기의 환원을 포함한다(문헌[참조: Gaitatzis, et al., 2001; Kessler, et al., 2004]). 이러한 리덕타제-매개 종결/C-말단 변형은 BT 생합성 중에 발생하며 BT 펩타이드의 슈퍼 프로테아제 내성에 기여한다.

NRPS 오페론의 동정 및 분리는 펩타이드 항생제의 연구에 유용하였지만, 특이적 NRPS 오페론의 동정은 도전해야 할 과제로 남아 있다. NRPS 오페론의 동정은 전통적으로 공지된 NRPS 유전자로부터의 DNA 프로브를 사용하는 하이브리드화 또는 변성된 프라이머를 사용하는 게놈 DNA의 PCR에 의해 증폭된 유전자 단편에 의해 게놈 BAC 또는 코스미드 라이브러리에서 클론을 동정하면서 시작한다. NRPS의 아미노산 서열이 일반적으로 매우 작기 때문에, 이러한 방법은 성공적일 수 있지만, 프로브 또는 프라이머가 종종 불완전하기 때문에, 일부 NRPS 오페론을 잃을 수 있다. 게다가, 미생물은 흔히 다중 NRPS 오페론을 포함하기 때문에, 프로브 또는 프라이머는 일부 NRPS 오페론을 나타낼 수 있지만, 추구되는 것은 아니다. 이는 종종 부정확한 유전자에 대해 투여된 불행을 초래하는 결과를 초래한다(문헌[참조: Hopwood, 1997]). 신규한 실리카 내 방법에서 본원에 기술한 바와 같이 사용하여 빠르고 정확한 NRPS 오페론의 동정을 가능케 하였다.

물질 및 방법. BT의 부분적 정제, E58B. 텍사스포러스 세포를 3일 동안 37℃ 공기 교반기에서 LB 1 리터 중에서 배양하였다. 배양물을 15분 동안 3000rpm에서 임상용 원심분리기에서 회전시켰다. 상층액을 수집하고 황산암모늄 500그람을 첨가 및 용해시켰다. 샘플을 15분 동안 3000rpm에서 임상용 원심분리기에서 회전시켰다. 펠릿을 증류수 200ml에 용해시켰다. 이어서 용액을 50분 동안 끓인 후 얼음 위에서 냉각시켰다. 샘플을 0.2 마이크론 필터(제조사[Nalgen])로 여과하였다. 여액을 교반 막대를 사용하여 20분 동안 실온에서 클로로포름 0.2 리터와 혼합하였다. 혼합물을 15분 동안 3000rpm에서 임상용 원심분리기에서 원심분리하여 2개의 상으로 분리하였다. 유기상을 수집하고 진공 증발기에서 건조시켰다.

C18 역상 HPLC. 건조된 클로로포름 추출물을 멸균 증류수 2ml에 용해시켰다. 용액을 30% B 내지 55% 용제 B(용제 B는 아세토니트릴 중 0.075% TFA이며, 용제 A는 수중 0.1% TFA이다)의 구배로 C18 역상 HPLC 칼럼 상에서 분획시켰다. 수득된 분획을 건조시키고 멸균 증류수에 용해시키고 플레이트 투명 영역 검정으로 항-에스. 아우레우스 활성에 대해 분석하였다. 피크 분획(분획 33)을 아미노산 조성물, 질량 분광 분석, 직렬 질량 분광 분석 및 키랄성 분석에 적용하였다.

아미노산 조성. 텍사스주의 컬리지 스테이션에 소재하는 텍사스 A&M 대학의 단백질 화학 연구실에서 아미노산 분석을 수행하였다. 샘플을 내부 표준물과 혼합하고, 진공 응축기 내의 유리관에서 건조시키고 페놀의 존재 하에 아르곤 대기하에서 24시간 동안 110℃에서 6N HCl에 의한 증기 상 가수분해에 적용시켰다. 이어서 샘플을 붕산염에 용해시키고 자동 유도화 및 탑재를 위해 휴렛 팩카드 아미노퀀트 II(Hewlett Packard AminoQuant II) 시스템으로 옮겼다. 아미노퀀트는 o-프탈알데하이드(OPA) 및 9-플루오로메틸-클로로포르메이트(FMOC)를 사용하여 가수분해된 샘플의 전(前)-칼럼 유도화에 의해 펩타이드 및 단백질을 분석한다. 유도된 아미노산을 역상 HPLC로 분리하고 다이오드 정렬 검출기를 사용한 UV 흡광도 또는 일렬 형광 검출기를 사용하여 형광에 의해 검출하였다.

질량 분광분석 및 직렬 질량 분광분석. D-형 아미노산 잔기의 검출. BT 내의 아미노산 잔기의 키랄 분석은 버지니아주 리치몬드 소재의 Commonwealth Biotechnologies, Inc.에서 수행하였다. BT를 110℃에서 18시간 동안 진공 중에서 6N HCl에서 가수분해시켰다. 아미노산을 FMOC 아미노산으로 유도하였으며 HPLC 크로마토그래피로 분리하였다. 이어서 각각의 아미노산의 용출 특성을 키랄 칼럼 상에서 결정하였다. 크로마토그래피 칼럼의 유형 둘 다에 대해, 피크는 적합한 표준과 비교하여 확인하였다.

게놈 DNA 제조. 대수기의 E58 세포를 LB 배양액으로부터 수거하고 용해 완충액[10mM 트리스(pH8.0), 100mM EDTA, 0.5% SDS]로 용해시켰다. RNase A를 첨가하여 오염된 RNA를 분해하였다. 게놈 DNA는 페놀/클로로포름을 사용하여 추출한 후 에탄올로 침전시켰다. 건조된 DNA를 TE에 재현탁시키고 분취액을 정성 대조를 위해 0.5% 아가로스 겔에서 전개시켰다.

라이브러리 구축 및 게놈 서열화. E58 게놈 라이브러리 구축, 솟건(shot-gun) 서열화 및 조립은 기관[Agencourt Biosciences Corporation(메사츠세츠주 비벌리 소재)]에서 수행하였다. 간략히, 전체 게놈 라이브러리를 약 5kb의 평균 삽입 길이로 구축하였다. 이러한 클론 10,000개를 삽입물의 말단 둘 다로부터의 자동화 DNA 서열화에 적용시켰다. 16.901개의 연속적으로 서열화된 판독물을 수집하고 조립하였다.

뉴클레오타이드 서열 및 데이타 분석. E58 게놈에 대한 모든 BLAST 분석을 지역 컴퓨터에 설치된 WU BLAST 소프트웨어 팩키지(2.0판)를 사용하여 수행하였다(Gish, W. 1996-2003. http://blast.wustl.edu). 아미노산 서열 상동성 탐색은 기관[National Center for Biotechnology Information(메릴랜드주 베데스다 소재)]의 BLSAT 서버 및 디폴트 매개변수 수치를 갖는 비-중복성(nonredundant)의 단백질 서열 데이타베이스를 사용하여 수행하였다(문헌[참조: Altschul, et al., 1990]). 아미노산 서열 정렬은 기관[Institute of Biology and Chemistry of Proteins(프랑스 리옹 소재)]의 NPS@ 웹 서버에서 운용하는 CLUSTALW 프로그램을 사용하여 수행하였다(문헌[참조: Thompson, et al., 1994]).

BT NRPS 오페론. BT NRPS 오페론(슈퍼콘티그 3)은 46kb 이상의 영역에 고정되어 있는 11개의 콘티그를 포함하였다. 비서열화 영역, 단지 한번 서열화되었던 영역 및 불량한 서열화 질을 갖는 영역이 있었다. 또한, 13개 모듈의 카복실 영역은 슈퍼콘티그 3에 의해 포괄되지 않았다. 3회의 프라이머 연장 서열화 및 1회의 게놈 워킹(walking)을 수행하여 NRPS 오페론을 마무리하였다. 슈퍼콘티그 3 내의 모든 원형 서열화 판독물을 SeqMan(Lasergene, DNASTAR Inc.)을 사용하여 추출 및 재조립하였다. 디폴트 매개변수를 재조립을 위해 사용하였다. SeqMan이 채용한 고 엄격도는 재조립된 슈퍼콘티그 3이 16개의 비서열화 간극을 갖는 17개의 콘티그로 분해되게 하였다. 모든 콘티그는 추가로 단일 범위 및 저질 영역에 대해 수동으로 조사하였다. 프라이머는 간극 내로 서열화되고 단일 범위 및 저질 영역에서 추가의 판독물을 수득하도록 설계하였다. 새로운 서열화 판독물을 원형 판독물과 합하여 새로운 슈퍼콘티그를 형성하였다. 새로운 슈퍼콘티그를 간극, 단일 범위 및 저질 영역에 대해 다시 점검하였다. 3회의 이러한 프라이머 연장 및 조립 후, 추정의 BT NRPS 오페론을 48,997bp 길이의 단일 콘티그 내로 조립하였다. 조립된 서열을 입증하기 위해, EcoRI과 HindIII를 사용한 이중 분해를 전체 영역에 총체적으로 고정되어 있는 20개의 클론을 사용하여 수행하였다. 수득된 분해 패턴은 콘티그에 의해 예측된 제한 지도와 완벽히 일치하였다(데이타는 나타내지 않았음). 콘티그의 하류 영역을 서열화하기 위해, 게놈 워킹을 제조사[Clontech]의 GenomeWalker 킷트를 사용하는 E58 게놈 DNA로 성공적으로 수행하였다. 이러한 노력은 추정의 BT NRPS 오페론(Genbank 수탁번호 #________)을 포괄하는 50,674 bp의 DNA 서열을 도출하였다.

His10-태그된(tagged) BT A-도메인 단백질의 클로닝, 과발현 및 정제. BT NRPS 모듈 8, 5, 7, 4 및 2(Bt8A, Bt5A, Bt7A, Bt4A 및 Bt2A)의 A-도메인을 암호화하는 DNA 단편을 PCR-증폭시키고, PCR 생성물을 His10-태그 재조합 단백질 발현 벡터 pET16b(Novagen) 내로 삽입시켰다. A-도메인 경계를 문헌[참조: Konz, et al., 1999])에 정의된 바와 같이 결정하였다. 발현 구축물을 이.콜라이 BL21-AI 균주(Invitrogen) 내로 형질전환시켰다. 형질전환체를 37℃에서의 L-브로쓰에서 A600 0.6으로 배양한 후, 1mM IPTG(이소프로필-β-D-티오갈락토피라노시드)와 0.2% L-아라비노스를 사용하여 유도하였다. 세포를 수거하기 전 30℃에서 추가로 2시간 동안 배양하였다. His10-태그 재조합 단백질의 정제는 변형과 함께 편람에 권해진 조건 하에 TALON 금속 친화 수지(BD Bioscience)를 사용하여 달성하였다. 간략히, 이. 콜라이 세포를 초음파로 파쇄하였다. 세포 용해물을 25,000x g에서 1시간 동안 원심분리하여 정화하였다. 이어서 His-태그 재조합 단백질을 TALON 수지와 함께 항온처리하고, 세척하고, 500mM 이미다졸로 용출시켰다. 용출된 단백질을 완충액(50mM HEPES, pH 8.0, 100mM 염화나트륨, 10mM 염화마그네슘 및 1mM EDTA)에 대하여 투석한 후 SDS PAGE와 쿠마시 블루 염색으로 분석하였다. 재조합 단백질은 계산된 것과 양립할 수 있는 겉보기 분자량을 나타내었고, 이들은 균일하게 정제되는 것으로 보였다. 정제된 단백질의 농도는 A₂₈₀에 대한 계산된 몰흡광 계수를 사용하여 결정하였다.

ATP-PPi 교환 검정. ATP-PPI 교환 검정을 수행하여 A-도메인의 기질 특이성을 결정하였다. ATP-PPi 교환을 근소한 변형과 함께 상기한 바와 같이 검정하였다(문헌[참조: Stachelhaus, et al., 1998]). 검정 혼합물은 50mM HEPES(pH 8.0), 100mM NaCl, 10mM MgCl₂, 2mM ATP, 0.5mM 아미노산, 0.05mM PPi, 0.15μCi [³²P]파이로인산사나트륨을 함유하였다. 교환은 정제된 재조합 A-도메인 단백질을 0.1ml의 총 용적으로 첨가하여 개시시켰다. 단백질 농도는 모듈 4 및 모듈 5 A- 도메인에 대해 0.2μM이었던 반면, 모듈 7 및 모듈 8 A-도메인에 대해서는 2μM이었다. 37℃에서 15분 동안 항온처리 한 후, 종결 혼합물(100mM 파이로인산사나트륨, 3.5% HClO4 및 1.6% [w/v] 활성화 목탄) 0.5ml을 첨가하여 종결시켰다. 목탄은 원심분리하여 펠릿화하고, 40mM 파이로인산과 1.4% 과염소산으로 1차 세적한 후, 물로 세척하고 물 0.5ml에 재현탁시켰다. 목탄/물 현탁액을 섬광 유체 5.0ml을 함유하는 섬광 바이알에 첨가하고, 한계 방사능을 액체섬광계수법으로 결정하였다. 겉보기 Km 수치를 0.1 내지 10mM 범위의 기질 농도로 결정하였다.

MIC 측정 검정. 스타필로코칼 아우레우스를 LB에서 37℃에서 중간 대수기까지 배양하였고, 신선한 LB로 500배 희석하고 96-웰 미세 역가 플레이트에 분배하였다. 상이한 농도의 펩타이드를 첨가하고, 미세 역가 플레이트를 37℃에서 교반하면서 항온처리하였다. 최소 억제 농도(MIC)를 생육억제 웰을 생산한 최저 펩타이드 농도로 결정하였다. 모든 실험은 3회 수행하였고, 고도로 일치하는 MIC를 수득하였다.

BT 펩타이드의 동정. 스타필로코쿠스 아우레우스에 대한 신규한 항생제를 생산하는 토양 미생물을 찾고자 하는 노력으로 세균 균주 E58을 토양에서 분리하였다. E58이 16S rDNA 서열 상동성(98.5% 동일성)을 토대로 하여 브레비바실러스 라테로스포러스와 밀접하게 관련되어 있음이 밝혀졌다. E58을 브레비바실러스 텍사스포러스로 명명하였고 ATCC에 기탁하였다(카탈로그 번호 제PTA-5854호). E58에 의해 생산된 항생제를 BT라 명명하였고 이의 활성을 액체 E58 LB 배양액의 상층액에서 관측할 수 있었다. 따라서 무세포 배양 상층액은 BT 정제를 위한 출발 물질이었다. 항생제 활성물은 황산암모늄에 의해 침전되었는데, 이는 항생제가 단백질 또는 펩타이드임을 제안하는 것이었다(데이타는 나타내지 않았음). 추가로 활성물을 클로로포름으로 추출하였고, 이는 BT가 소분자로 이루어져 있음을 제시한다. 항생제 클로로포름 추출물을 진공 증발기에서 증발시켰고, 물에 용해시킨 후 SDS 트라이신 겔에서 전개시켰다. 각각의 반쪽에서 동일한 레인을 갖는 겔의 반쪽 2개를 단백질/펩타이드에 대해 염색하거나 BT-민감성 세균 바실러스 세레우스와 함께 매봉한 아가를 도포하여 항생제 활성에 대해 시험하였다(도 1A). 3개의 종이 염색 후에 가시화되었다:겔 적재 완충액으로부터 기원한 브로모페놀 블루 염료, 1.4kD 미만의 질량을 갖는 비공지 펩타이드 및 항생제 활성을 갖는 제3의 종. 이러한 제3의 종은 저 농도에서 ~1.5kD 밴드로서 전개하였고(원형 겔에서 분명히 가시화됨), 후에 관련 펩타이드 그룹으로 이루어진 것으로 나타났다(아래를 참조). 이들의 명확한 질량은 펩타이드가 고농도에서 응집됨을 제시하는 농도로 증가하였다. 항생제 활성은 고농도에서 펩타이드와 관련되는 것으로 보였으며, 따라서 당해 펩타이드가 BT 항생제 활성을 부여할 법하다고 결론지었다. 당해 펩타이드를 BT 펩타이드로 지칭하였다. BT 펩타이드는 분명히 당해 검정에서 저농도에서는 B. 세레우스에 대하여 유독하지 않았다. 최소의 검측가능한 BT 밴드가 ~1.5 kD에서 전개하였기 때문에, BT 펩타이드는 대략 13개의 잔기를 포함한다.

클로로포름-추출 BT를 질량분광분석 검정에 적용하였다. 펩타이드 그룹이 1550 내지 1650 달톤의 범위에서 관측되었다(도 1B). 주종은 1583의 분자량을 나타내었으며, 이를 BT1583으로 명명하였다. 다른 펩타이드는 후에 BT1583의 이성체인 것으로 밝혀졌다(표 5 및 6).

부분적 BT 서열 결정. 클로로포름-추출 BT를 추가로 C18 역상 HPLC로 정제하였다(보다 자세히는 물질 및 방법을 참조한다). BT1583은 C18 HPLC의 분획 33에서 균일하게 정제되었다(도 1C). BT1583(분획 33)의 아미노산 조성물 분석은 BT1583이 Tyr, Lys, Leu, Ile, Val 및 Orn의 잔기를 포함함을 나타냈다. BT1583은 N-말단 서열화를 어렵게 하였으며 아미노펩티다아제 M에 의한 분해에 저항성이 있는데, 이는 비-표준 N-말단 잔기를 제시하는 것이다. BT1583은 또한 카복시펩티다아제 Y에 의한 절단에 대한 저항력을 가졌는데, 이는 비-표준 C-말단 아미노산을 제시하는 것이다. 따라서 카복시-말단 서열화는 시도하지 않았다.

이어서 직렬 질량분광계(MS/MS)를 BT1583 펩타이드를 서열화하기 위해 선택하였다. MS/MS 데이타를 BT1583에 대해 수득하였고, 이들을 도 2A 및 표 2에 나타내었다. MS/MS 데이타는 BT1583이 아미노산 조성물과 상당히 관련되어 있는 13개의 아미노산 잔기를 포함함을 제시하였다. 기대한 바와 같이, 잔기 1 및 13의 질량은 임의의 표준 아미노산과 상응하지 않았다. 마지막 잔기는 103 달톤의 질량을 나타내었는데, 이는 카복실산에서 알콜로 환원된 이의 C-말단을 갖는 발린과 양립하는 것으로 보인다. C-말단 알콜성 발린의 존재는 추가로 BT NRPS의 13번째 발린-특이적 모듈 내의 리덕타제 도메인의 존재에 의해 확증되었다(아래를 참조). N-말단 잔기의 실체는 결정하기 더 어려웠다. 그럼에도 불구하고, 198의 질량을 갖는 N-말단 잔기는 Bmt {4-메틸-4-[(E)-2-부테닐]-4,N-메틸-트레오닌}의 N,N-메틸화된 형태와 양립할 수 있는 것으로 보였다(문헌[참조: Offenzeller, et al., 1996; Offenzeller, et al., 1993]).

BT1583 내의 오르니틴의 존재는 BT1583이 리보솜에 의해 합성될 수 없음을 나타낸다. D-아미노산의 존재는 이러한 생각을 뒷받침한다. 본 발명자는 BT1583 내의 가장 풍부한 잔기 중 2종의 키랄 특성을 측정하기 위해, Val 및 Leu를 선택하였다. 키랄 분석은 균일한 L-Val 잔기를 나타내었지만, L- 및 D-Leu 잔기 둘 다는 2:1의 비율임을 나타내었다.

상기한 생화학적 및 구조적 분석은 본 발명자에게 부분적 BT1583 펩타이드 서열을 제공할 수 있었다(표 2 및 도 2B 참조). N- 및 C-말단 잔기의 구조는 충분히 결정되지 않았다. 이소루이신 및 루이신은 구별할 수 없었다. D-형 Leu의 위치는 구체적으로 밝혀지지 않았다. 펩타이드의 기타 잔기의 키랄 특성은 결정되지 않았다.

E58 게놈의 솟건(shot-gun) 서열화. BT1583 펩타이드의 구조 및 생합성을 보다 잘 이해하기 위해, 본 발명자는 BT 생합성을 담당하는 유전자 또는 오페론을 동정하기로 결정하였다. 펩타이드 내의 비-단백원성 오르니틴 및 D-형 아미노산의 존재는 본 발명자가 BT1583이 생체 내에서 NRPS에 의해 합성되었다고 믿게 하였다)(문헌[참조: Marahiel, 1997]). 대부분의 NRPS 유전자는 NRPS 모듈과 펩타이드 생성물 내의 아미노산 잔기 사이의 엄격한 상관 관계를 반영하는 동선상이다. BT NRPS 오페론이 동선상인 경우, 이는 BT1583 펩타이드 내의 13개의 아미노산 잔기에 상응하는 13개의 모듈을 암호화할 것이다. 평균으로 가정하여, 각각의 모듈은 평균 3.5kb의 DNA 단편에 의해 암호화되며, 46kb 길이의 DNA 단편이 BT NRPS 오페론을 충당하기 위해 필요할 것이다. 상기한 바와 같이, NRPS 오페론을 동정하기 위한 통상의 방법은 일반적 프로브를 사용하여 코스미드 라이브러리를 프로빙하는 것을 포함한다. 불완전한 일반적 프로브는 표전 유전자를 놓칠 수 있고, 일반적으로 세균성 게놈에는 다중 NRPS 오페론이 있기 때문에, 이러한 방법은 빈번하게 조사자가 잘못된 NRPS 오페론을 추적하게 한다. 이러한 함정을 피하기 위해, 본 발명자는 게놈 내의 모든 NRPS 오페론의 편견 없는 실리카 내 개관을 제공하여 NRPS 오페론의 직접적인 비교를 가능케 하고 이에 따라 합리적인 후보 오페론을 선택할 수 있게 하는 게놈 방법을 개발하였다. 이러한 신규한 방법으로 BT NRPS 오페론을 빠르고 정확하게 동정하였다.

E58 게놈은 5 Mb인 것으로 판단되었다. E58 게놈 라이브러리는 평균 5kb의 삽입 크기로 구축하였다. 전체 게놈을 2배 범위에 대하여 서열화하였다. 서열 조립 후, E58 게놈은 700bp 내지 22.6kb 범위의 크기를 갖는 1919개의 콘티그 및 932의 단일체(singlet)로 대표되었다. 이러한 범위는 99.995%의 게놈이 클론에 의해 대표될 수 있게 할 것이다. 또한, 2개의 이웃하는 콘티그 사이의 간극의 평균 길이는 205bp 정도로 작아서 슈퍼콘티그가 구축될 수 있게 할 것이다(아래를 참조). 추가로, 이러한 분석의 슈퍼콘티그는 충분한 정보를 포함하여 정확한 실리카 내 NRPS 오페론 동정을 가능케 할 것이다.

BT NRPS 오페론의 실리카 내 동정. 후보 BT NRPS 오페론을 선택하기 위해 3단계의 과정을 사용하였다. 제1 단계, 모든 콘티그 및 단일체를 NRPS 모듈을 암호화하는 서열에 대하여 조사하였다. E58이 비. 서브틸리스와 관련되어 있기 때문에, 비. 서브틸리스로부터의 추정의 펩타이드 합성효소 PPS1을 집합된 E58 콘티그 모두를 포함하는 데이타베이스에 대한 BLAST 분석용 조회(query) 서열로 선택하였다. 128개의 콘티그는 0 내지 1로 정렬되는 P-수치를 갖는, PPS1에 대한 해독된 아미노산 서열 유사성을 나타내었다.

제2 단계, 슈퍼콘티그를 128개의 콘티그로부터 구축하였다. 동일한 삽입물의 말단으로부터의 2개의 서열화 판독물이 짝쌍을 형성한다. 슈퍼콘티그는 상이한 콘티그 내에 존재하는 짝쌍을 연결하는 콘티그의 집합이다. 짝쌍의 동정은 이웃하는 콘티그가 슈퍼콘티그를 형성하도록 배열 및 배향되게 하였다(도 3A). 31개의 슈퍼콘티그를 성공적으로 구축하여 전체 E58 NRPS 오페론 포트폴리오를 나타내었다.

후보 BT NRPS 오페론을 E58 NRPS 오페론 포트폴리오 중에서 선택하였다. 31개의 슈퍼콘티그를 BT NRPS 오페론의 내포 가능성에 대해 조사하였고, 슈퍼콘티그 3(마감된 서열을 토대로 한 이의 유전자 특성은 도 3B 및 3C에 나타내어져 있다)을 다음의 분석을 기초로 후보로서 선택하였다.

슈퍼콘티그 3은 잠정적으로 13개의 NRPS 모듈을 암호화하는 DNA 서열을 포함하였다. 슈퍼콘티그 3의 A-도메인 기질 특이성에 관한 사용가능한 정보는 부분적 BT1583 서열과의 호환성을 나타내었다. 기질 특이성-부여 아미노산 잔기의 완전한 세트를 11개의 모듈에 대해 확인할 수 있었다(모듈 2 및 13은 불완전한 DNA 서열로 인해 제외함). 모든 특이성을 예측할 수는 없었지만, 예측된 NRPS 아미노산 기질과 부분적 BT1583 서열 사이에 양호한 상관 관계가 성립되었다. 특이적으로, 모듈 4는 Ile를 포함하고 있는 것으로 예측되었으며, 모듈 9 및 12는 Leu를 포함하고 있는 것으로 예측되었다(표 3, 자세한 것은 아래를 참조). 부분적 BT1583 서열은 위치 4, 9 및 12에 Leu 또는 Ile를 가졌다. 11개 모듈의 기질 부여 아미노산의 계통발생학적 분석은 함께 그룹화된 동일하거나 매우 유사한 아미노산을 포함하고 있는 것으로 예상됨을 나타내었다(도 3D). 예를 들면, 모두 Val을 포함하고 있는 것으로 예측된 모듈 5, 6 및 8이 클러스터를 형성하였다. 모듈 7, 10 및 3은 다른 클러스터를 형성하는 유사한 양이온성 아미노산(각각, Lys 및 Orn)을 포함하고 있는 것으로 예측되었다.

슈퍼콘티그 3에 의해 암호화되는 NRPS 내의 E-도메인 위치는 부분적 BT1583 펩타이드 구조와의 호환성을 나타내었다. 4개의 E-도메인이 모듈 3, 7, 9 및 11에서 발견되었다(도 3C). 이들의 위치는 모든 L-형 Val 잔기 및 2:1 L- 대 D-형 Leu 잔기 비율의 상기한 BT1583 키랄 특성과 일치하였다.

따라서 슈퍼 콘티그 3은 BT NRPS 오페론에 대한 후보 유전자좌로서 확인되었다. 프라이머 연장 및 게놈 워킹을 수행하여 당해 유전자좌의 고질의 서열을 수득하였다. 이러한 노력은 추정의 BT NRPS 오페론을 포괄하는 51,821 bp의 콘티그를 도출하였다(Genbank 수탁번호#), 도 3F를 참조.

추정의 BT NRPS 아단위. 10개의 개방형 판독틀(ORF)을 해독 분석 및 blast 탐색을 통해 서열화된 영역에서 확인하였다(문헌[참조: Altschul, et al., 1997])(도 3B). 중간의 6개의 ORF(btA에서 btF로 명명)가 BT NRPS의 6개의 아단위(BtA에서 BtF)를 암호화하는 것으로 예측되었고, 이들의 좌표는 표 4에 나열되어 있다. 추정의 아단위의 서열 분석은 통상적인 동선상 NRPS의 모듈 구조를 확증하였다(도 3C). 각각 A-도메인 및 T-도메인을 포함하는 모듈은 C-도메인에 의해 연결되어 있다. 탑재 모듈 BtA는 T-도메인이 뒤를 따르는 A-도메인을 가졌다. 추정의 BT NRPS 아단위에 대한 2종의 주목할 만한 전반적인 특징이 있다. 첫째, 6개의 아단위 중 4개는 이중-모듈 구조를 나타낸다. 둘째, 모든 보조의 E-도메인은 추정의 NRPS 아단위의 중간에서 다소 말단 쪽에 존재한다. 보존 도메인의 서열 정렬은 도 4에 나타내어져 있다.

모듈 13 내의 리덕타제 도메인. 약 500개 아미노산의 도메인이 BtF 또는 모듈 13의 C-말단에서 확인되었다. BLAST 분석은 이것이 다른 NRPS 및 폴리케티드 합성효소로부터의 수개의 NADPH-의존성 리덕타제와의 높은 유사성을 가짐을 나타내었다. 에스. 아우란티아카의(S. aurantiaca) MxcG 및 에스. 세레비키애(S. cereviciae)의 Lys2로부터의 리덕타제 도메인과의 이의 정렬은 도 4E에 나타내어져 있다. 유사한 리덕타제 도메인 또한 그라미시딘 A NRPS 내에서 확인되었다(문헌[참조: Kessler, et al., 2004]). 모든 3가지의 리덕타제가 NADPH-의존성 반응에서 이들의 기질을 상응하는 알데하이드로 환원시킴이 실험적으로 입증되었다(문헌[참조: Gaitatzis, et al, 2001; Kessler, et al., 2004; Sagisaka & Shimura, 1959]). 믹소첼린(myxochelin) A 및 그라미디신 A에 대하여, 알데하이드는 추가로 알콜로 환원된다. 두번째 환원 단계에 대한 정확한 메커니즘은 확인되지 않았다. 이들 리덕타제 그 자체 또는 기타 단백질이 두번째 환원 단계를 수행하거나, 두번째 환원 단계는 자발적인 것이다. MS/MS 실험은 BT1583의 C-말단 잔기가 발린의 알콜성 형태일 수 있음을 제안하였다(도 2B). 마지막 추정의 BT NRPS 모듈의 A-도메인 특이성 예측 및 모듈 내의 리덕타제 도메인의 존재는 이러한 제안을 확증하였다.

btG는 ABC 운반자를 암호화한다. btG는 btF의 바로 하류에 있는 ORF이며, 다른 bt ORF와 동일한 방향으로 전사된다. 개시 코돈 ATG는 btF 종결 코돈의 61bp 하류에 위치해 있다. 해독된 아미노산 서열은 ATP-결합 카세트(ABC) 운반자 상위 계열의 일원에 대한 높은 유사성을 나타내었다(데이타는 나타내지 않았음). ABC 운반자 ORF는 통상적인 NRPS 오페론에서 발견된다. 이들의 역할은 세포 밖으로 펩타이드를 배출해 냄으로써 펩타이드 항생제 생성물에 대한 내성을 갖는 숙주를 제공하는 것으로 제안되어 왔다. 추정의 BtG ABC 운반자의 정확한 역할이 정립될 필요가 있다.

BT1583 펩타이드 서열 세분. 기질 특이성-부여 잔기(문헌[참조: Stachelhaus, et al., 1999])를 13개 A-도메인 모두로부터 추출하였고 공중 NRPS 코돈 데이타베이스 내에서 아미노산 결합 포켓 구성성분의 집합과 비교하였다(raynam.chm.jhu.edu/~nrps/index.html)(문헌[참조: Challis, et al., 2000]). 기질 특이성 예측은 서열 정렬을 토대로 하였고 이들은 표 3에 나열되어 있다. 제1 모듈의 아미노산-결합 포켓 구성성분은 트레오닌/디하이드로트레오닌에 대한 NRPS 코돈과의 완벽한 부합을 나타내었으며, 이는 모듈 1이 트레오닌 유도체를 포함하는 것으로 예측되었다. N,N-메틸화된 Bmt는 MS/MS 데이타에 따라 N-말단 아미노산 잔기인 것으로 제안되었다(도 2B 및 표2). 2개의 제안이 서로 100% 일치하지는 않지만, 둘 다 N-말단 아미노산 잔기로서 트레오닌 유도체를 필요로 한다.

상기한 바와 같이, NRPS 코돈 데이타베이스에 따라 모듈 4(Ile), 모듈 9(Leu) 및 모듈 12(Leu)에 대하여 3개의 명확한 특이성을 할당할 수 있었다. 이들 할당은 부분적 BT1583 서열과 호환가능하였으며, 따라서 BT1583 펩타이드의 위치 4, 9 및 12는 각각 Ile, Leu 및 Leu로 정의되었다. 오직 BT1583 펩타이드의 Ile만이 위치 4에 할당되었기 때문에, 잔여 Leu는 BT1583 펩타이드의 위치 2에 할당되었다. 따라서 모듈 2의 A-도메인 특이성은 Leu인 것으로 추론되었다. E-도메인 위치 정보와 함께 이들 할당은 본 발명자가 BT1583 펩타이드 서열을 (CH₃)₂-Bmt-Leu-_dOrn-Ile-Val-Val-_dLys-Val-_dLeu-Lys-_dTyr-Leu-Val-CH₂OH로 정의하게 하였다.

BT 생합성 중 신규한 NRPS 코돈. 모듈 5, 6 및 8의 아미노산-결합 포켓 구성성분은 동일하다. 이들은 모듈 13의 아미노산-결합 포켓 구성성분과 단 하나의 잔기만 다르다. NRPS 코돈 데이타베이스에서 아미노산-결합 포켓 구성성분의 이들 세트에 대하여 어떠한 양호한 부합성도 발견되지 않았다. 그러나, 이들은 당해 데이타베이스에서 특정한 Ile, Leu 또는 Val NRPS 코돈에 대한 유사성을 나타내었다. 부분적인 BT1583 펩타이드 서열이 위치 5, 6, 8 및 13에서 Val 잔기를 갖기 때문에, 모듈 5, 6, 8 및 13이 Val을 포함하는 것으로 추론되었다. 모듈 5, 6, 8 및 13의 아미노산-결합 포켓 구성성분은 Val에 대한 잠재적으로 신규한 NRPS 코돈을 나타낸다.

모듈 7 및 10의 아미노산-결합 포켓 구성성분은 동일하며 이들은 모듈 3의 아미노산-결합 포켓 구성성분과 단 하나의 잔기만 다르다. NRPS 코돈 데이타베이스에서 아미노산-결합 포켓 구성성분의 이들 세트에 대하여 어떠한 부합성도 발견되지 않았다. 부분적 BT1583 펩타이드 서열이 위치 7 및 10에 Lys 잔기를 갖기 때문에, 이들 모듈의 특이성은 Lys인 것으로 추론되었다. 마찬가지로 부분적 BT1583 펩타이드 서열은 위치 3에 Orn 잔기(구조상 Lys와 매우 유사한)를 가졌으며, 따라서 모듈 3의 특이성은 Orn인 것으로 추론되었다. 모듈 7 및 10의 아미노산-결합 포켓 구성성분은 잠재적으로 Lys에 대한 최초의 NRPS 코돈을 나타내며, 모듈 3의 아미노산-결합 포켓 구성성분은 Orn에 대한 잠재적으로 신규한 NRPS 코돈을 나타낸다.

NRPS 코돈 데이타베이스에 따른 모듈 11에 대한 특이성 예측은 매우 모호하였다. NRPS 코돈 데이타베이스에서 당해 세트의 아미노산-결합 포켓 구성성분에 대한 어떠한 양호한 부합성도 발견되지 않았다. 그러나, 당해 데이타베이스에서 특정한 Phe, Trp 또는 Tyr NRPS 코돈에 대한 유사성이 나타났다(데이타는 나타내지 않았음). 부분적 BT1583 펩타이드 서열이 위치 11에서 Tyr 잔기를 가졌기 때문에, 모듈 11의 A-도메인 특이성은 Tyr인 것으로 추론되었다. 모듈 11의 아미노산-결합 포켓 구성성분은 Tyr에 대한 잠재적으로 신규한 NRPS 코돈을 나타낸다.

BT NRPS 오페론의 실체 확인. BT 생합성이 신규한 NRPS 코돈을 포함하기 때문에, 신규한 코돈의 실험적 정립(특히, 신규한 발린 및 라이신 코돈)이 BT NRPS 오페론의 실체를 확인하는 데 결정적이다. 게다가, BT1583 내의 위치 4에서의 Ile의 배치가 3개의 Leu 잔기의 배치에 영향을 주기 때문에, 모듈 4 코돈 또한 검사할 필요가 있었다.

NRPS 모듈의 정제된 재조합 A-도메인이 ATP-PPi 교환 검정에서 NRPS 모듈의 동계 아미노산 기질을 선택적으로 그리고 효율적으로 활성화하기 때문에(문헌[참조: Konz, et al., 1999; Mootz & Marahiel, 1997]), ATP-PPi 교환 검정이 NRPS 모듈 특이성 및 신규한 NRPS 코돈을 실험적으로 정립하는 데 사용되어 왔다. BT NRPS의 모듈 8, 5, 7, 4 및 2의 재조합 A-도메인을 물질 및 방법에 기술된 바와 같이 정제하였다. 거의 완전한 가용성의 재조합 A-도메인 단백질을 수득하였다. A-도메인 특이성은 ATP-PPi 교환 및 Km 검정으로 결정하였고(물질 및 방법 참조), 결과는 도 5에 나타내어져 있다. 모든 20개의 단백원성 아미노산 및 L-Orn을 각각의 A-도메인 단백질에 대하여 시험하였고, 실험 중 배경 소음은 일반적으로 1% 이하였다.

모듈 8 A-도메인 단백질은 L-Lys(10%) 및 L-Ile(4%)를 최소 활성화하면서, L-Val(100%)를 활성화하는 것으로 보였다. 겉보기 Km은 L-Val에 대하여 2.75mM인 것으로 결정되었다. 이들 결과는 신규한 발린 NRPS 코돈을 확증하였다. 유사하게, 모듈 5 A-도메인 단백질이 L-Val(100%), L-Ile(23%) 및 L-Leu(17%)를 활성화하는 것으로 밝혀졌다. 겉보기 Km은 L-Val에 대하여 1.11mM 및 L-Ile에 대하여 2.78mM인 것으로 결정되었으며, 이는 L-Val이 모듈 5에 대한 바람직한 기질임을 분명하게 나타낸다.

L-Lys는 모듈 7 A-도메인 단백질에 의해 활성화된 유일한 아미노산이었다. 겉보기 Km 수치는 1.12mM인 것으로 결정되었다. 이들 결과는 최초 Lys NRPS 코돈을 정립하였다.

모듈 4 A-도메인 단백질은 L-Val(9%) 및 L-Leu(7%)를 최소 활성화하면서, L-Ile(100%)를 선택적으로 활성화하는 것으로 보였다. L-Ile에 대한 겉보기 Km 수치는 0.5mM로 측정되었다.

모듈 2 A-도메인 단백질은 매우 모호한 것으로 밝혀졌다. 이는 L-Val(67%)의 현저한 활성화 및 L-Ile(19%) 및 L-Phe(3.5%)의 약한 활성화와 함께, 거의 동일한 효율로 L-Leu(98%) 및 L-Met(100%)를 활성화하였다.

일반적으로, 모든 정제된 A-도메인 단백질은 ATP-PPi 교환 검정에서 예측된 아미노산 기질을 선택적으로 활성화하는 것으로 밝혀졌다. 이들 결과는 BT NRPS 오페론의 실체를 실험적으로 확증하였다.

합성 펩타이드. BT 펩타이드와 BT NRPS 오페론의 실체를 추가로 확인하기 위해, 합성 펩타이드 P81(도 6)을 제조하였고(제조사[Biomer Technology], 캘리포니아주 콩코드 소재), 이의 특성에 대해 검사하였다. Bmt가 시판되지 않기 때문에, 본 발명자는 정의된 BT1583 서열에 따라 펩타이드를 합성할 수 없었으며 지질펩타이드 P81을 합성하기 위해 옥탄산-변형 트레오닌을 사용하여 BT1583을 모방하였다. P81은 BT1583과 같은 총체적인 항생제 활성 및 프로나아제 내성을 나타내었다. 이들 결과는 정의된 BT1583 펩타이드 서열 및 BT NRPS 오페론의 실체에 대한 지지를 더하였다.

C-말단 알콜성 변형의 유의성을 조사하기 위해, P81(P59)의 아미드 형태를 합성하였다. P59는 항생제 활성을 나타내었지만, 프로나아제 내성은 나타내지 않았다. 이들 결과는 C-말단 알콜성 변형이 P81 및 아마도 BT1583에 대한 프로테아제 내성을 부여하는 핵심 역할을 수행함을 나타낸다.

최초 BT NRPS 모듈에 대한 코돈이 공지된 Thr NRPS 코돈과 완벽히 부합하기 때문에, 위치 1에 비변형 Thr을 갖는 활성 BT 이성체의 가능성을 조사할 필요가 있었다. 따라서 P81(P58)의 아미드 형태를 합성하였고, P58은 불량한 항생제 활성을 나타내었다. 이들 결과는 Thr 유도체(변형되지 않기 보다는)를 확증하였다. Thr은 항생제 활성을 부여하기 위해 위치 1에 있어야 할 필요가 있다.

L- 및 D-형 잔기는 위치 5(Val)를 제외하고 BT1583의 중간에서 교환된다. 교환 키랄성이 펩타이드 항생제 그라미디신 A에 대한 핵심 구조 특성이기 때문에, 본 발명자는 모듈 5에 대한 E-도메인의 암호화 서열을 잃었는지의 여부를 조사하기로 결정하였다. P59(P80)의 D/L 교환 버전을 합성하였다. P80은 항생제 활성을 나타내지 않았다. 상기한 결과는 단지 BT1583 펩타이드 구조(N-말단 잔기를 제외한) 뿐만 아니라, BT NRPS 오페론의 실체를 확증하였다.

BT1583 펩타이드 구조, BT NRPS 오페론 및 BT NRPS는 본 발명자가 BT1583의 이성체에 대한 축퇴성 변형을 제안하게 한다(표 5). 각각의 모듈의 상대적 기질 선택성을 기초로 하여, 유의미한 양으로 E58에 의해 생산되는 경향이 있는 BT 이성체를 예측하였으며 표 6에 나열하였다. 대부분의 예측된 BT 이성체는 MS/MS에 의해 실험적으로 확인되었다(데이타는 나타내지 않았음).

BT 펩타이드의 구조 및 생합성을 생화학, 생물리학 및 게놈학의 통합된 방법을 사용하여 결정하였다. 정제된 BT1583(주요 BT 이성체)을 사용한 아미노산 조성물 및 직렬 질량분광분석 실험은 부분적 펩타이드 구조를 산출하였다. 부분적 구조 내의 오르니틴 및 D-형 잔기의 존재는 펩타이드가 생체 내에서 비-리보솜성 펩타이드 합성효소에 의해 합성되었음을 나타내었다. BT NRPS 오페론을 신규한 실리카 내 유전자 수색안을 통해 신속하고 정확하게 동정하였다. BT NRPS 오페론의 서열 분석은 이것이 동선상 모듈 NRPS를 암호화함을 나타내었다. BT NRPS의 동선상 특성은 본 발명자가 BT 오페론 게놈 정보를 사용하고 BT1583 서열을 (CH₃)₂-Bmt-L-_dO-I-V-V-_dK-V-_dL-K-_dY-L-V-OH로 정의할 수 있게 하였다. 추가로, 발린, 라이신, 오르니틴 및 타이로신에 대한 신규한 NRPS 코돈이 발견되었고 본원에 기록되어 있다.

실리카 내 NRPS 오페론 동정. 통상적인 NRPS 유전자 동정은 일반적 프로브를 사용하여 게놈 코스미드 라이브러리를 프로빙하는 것을 포함한다. 이러한 방법은 연구자가 다중 NRPS 오페론을 갖는 게놈 내에서 잘못된 유전자를 추적하게끔 하는 유전된 결점을 갖는다. 본원에 나타낸 바와 같이, NRPS 유전자 동정은 최적의 적합성을 찾기 위해 동일한 시기에 비교한 경우, 게놈 내의 모든 NRPS 오페론에 대하여 개선된다. 다행히도, 서열화 비용이 현저히 감소하여 미생물 게놈의 통상적인 서열화를 가능케 하였다. 2배 범위는 정확한 NRPS 오페론 동정에 충분하였다. 실제 BT NRPS 오페론 선택에서, 다음의 두 세트의 정보를 산출하여 최적의 후보를 찾기 위해 비교하였다: 기질-결합 포켓 구성성분의 유사성에 따른 NRPS 모듈 군집(clustering) 패턴; 및 D-형 잔기의 위치와 같은 위치 정보. 신규한 NRPS 코돈을 포함하는 오페론(즉, BT NRPS 오페론의 모듈 5, 6 및 8의 경우에)의 후보자격 정립에는 모듈 군집 기법이 특히 강력하다. 실리카 내 전략은 게놈 내에 다수의 NRPS 오페론을 갖는 균주(E58과 같은) 내에서의 NRPS 오페론 동정에 특히 유용하다.

^* 정보는 BT1583 펩타이드 서열 세분을 위해 사용하였다.

^** 당해 위치의 Leu는 오직 Ile만이 위치 4에 할당되었다는 사실로부터 추론하였다.

번호는 아미노산 잔기 위치를 나타낸다.

사료 첨가물로서의 BT.(닭 성장 증진 실험에 BT1583보다는 반-정제된 BT 펩타이드를 사용하였다.)

BT 펩타이드의 구조 및 이의 생물학적 및 생화학적 특성을 토대로 하여, 본 연구자는 사료 첨가물로서의 이의 용도를 시험하기에 충분한 물질을 제조하였다. 요약하면, 사용된 펩타이드의 특성은 다음의, 수많은 잠재적 자연 변이체 또는 이성체(>8) 및 유도체(>30)를 갖는 13개의 아미노산 잔기와 같았다. 생물학적으로, BT 펩타이드가 그람(+) 세균에 의해 생산된 천연 생성물이었음이 밝혀졌다. BT 펩타이드 계열은 비-리보솜성 펩타이드 신타제(NRPS)에 의해 합성되며, 클로닝 및 특성화가 본원에 개시되어 있다. 이러한 펩타이드 중 하나, BT1583: Me₂Bmt-L-dO-I-V-V-dK-V-dL-K-dY-L-V-CH₂OH(서열 번호 1)를 추가의 연구를 위해 선택하였는데, 이것이 양이온성 및 아마도 양쪽성이기 때문이다. 이는 예외적인 아미노산 잔기를 포함하고/거나 다중 변형을 포함한다.

BT1583은 이의 높은 수준의 안정성 때문에 선택하였다. 당해 펩타이드에 대하여 관찰된 높은 안정성은 다음의 특성 중 하나 이상을 포함하였다: (1) 어떠한 공지된 효소도 이를 분해할 수 없다; (2) 이것은 마우스 또는 닭 GI 관에서 분해되지 않는다; (3) 이는 오토클레이빙될 수 있다; (4) 이는 사료 펠릿화 과정에서 생존할 수 있다; (5) 이는 극한 pH(pH1.0 및 pH13.0)를 견딜 수 있다; 및 (6) 이를 불활성화시키는 유일하게 공지된 시험관 내 방법은 pH 1.0과 100℃에 밤새 두는 것이다.

BT1583의 뚜렷한 안정성 외에, 그람 양성 세균에 대한 시험관 내 항세균 활성이 입증되었다, 예를 들면, 대부분의 그람(+):MIC = 1 마이크로그람/ml. 그람(-)에 대하여, 다음은 관측된 항미생물 활성이었다: 이. 콜라이: MIC > 20 마이크로그람/ml; 슈도모나스 및 살모넬라: MIC > 100 마이크로그람/ml. BT1583은 또한 항진균 활성을 나타낸다, 예를 들면, 에스. 세레비지애: MIC = 50 마이크로그람/ml. 항 원생생물 활성 또한 BT1583에서 관측되었다, 테트라하이메나: MIC = 25 마이크로그람/ml.

BT1583 생산을 위해 E58 균주를 선택하였는데, E58 균주가 빠른 성장 및 높은 펩타이드 생산자 균주이기 때문이었다. 추가로, 빠른 펩타이드 생합성 외에, 당해 균주는 또한 염가의 배지에서, 예를 들면, 0.4센트/L의 낮은 배지 가격 및 예를 들면, 0.5g/L의 수율로 성장한다. 성장은 일반적으로 공기 교반기에서 수행하였지만, 발효될 수도 있다. 추가로, 펩타이드 및 균주를 용이한, 일 단계 정제 공정을 위해 널리 공지된 과정의 광범위한 적용 없이 사용할 수 있다.

다음의 표 및 예는 브로일러 닭에서의, 예를 들면, 21일째 배터리(battery) 시험에서, BT1583 펩타이드의 성장 촉진 능력 및 특성을 나타낸다.

간략히, 펩타이드를 배터리(시험 2-1 및 2-2)에서 직접 사육한 20일생 브로일러의 성장 및 사료 전환을 연구하기 위해 펩타이드를 반 정제 형태로 사용하였다. 사료 대조군, 6ppm의 펩타이드 및 12ppm의 펩타이드에 대하여 2개의 양을 검사하였고, 우리 당 4마리의 조류를 사용하여 치료 당 12회를 반복하였다. 당해 연구에 사용된 식단은 다음과 같았다.

BT1583를 옥수수 분말 담체 200그람에 첨가하였다.

직접 사육한 3주생 브로일러의 성장 및 사료 전환에 대한 TAMUS BT1583을 평가하기 위해, 산업용 펠릿화된 포유용 사료를 제공하였다(배터리 중, 시험 3-1 및 3-2). 간략히, 다음의 6가지 처리 처방계획을 시험하였다: 대조군, 모넨신 90ppm, BMD 50 50ppm, BT1583 12ppm, 모넨신 + BMD 50, 모넨신 + BT1583 12ppm. 다시 우리 당 4마리의 조류로 처리당 8회의 연구 반복을 사용하였다.

BT1583을 옥수수 분말 200그람을 통해 첨가하였다.

바닥 우리(floor pen)에서 직접 사육한 42일생 브로일러의 성장 및 사료 전환에 대한 TAMUS BT1583을 평가하기 위한 보다 완전한 연구는 다음과 같을 수 있다: 여섯(6)개 그룹의 처리, 대조군, 모넨신 90ppm, BT1583 12ppm, 모넨신 + BMD 50ppm, 모넨신 + BT1583 12ppm 및 BMD 50ppm. 이번에는 우리 당 40마리의 조류로, 처리 당 10회의 연구 반복을 사용하여 사료 첨가물로서 BT1583 펩타이드의 사용 효과를 평가하였다.

식품-생산 동물에서 성장을 촉진하는 경우, BT1583 펩타이드는 사료 전환과 부가적인 체중 증가에서 약 10포인트를 제공한 것으로 밝혀졌다. 본 발명의 한가지 확실한 이점은 닭 GI관에서 전혀 또는 거의 흡수되지 않으며, 따라서 이를 광범위한 사용에 유용하게 한다는 것이다. 추가로, 통상적인 항생제와 달리, 본 발명은 세균막을 표적으로 할 수 있으며, 현재는 한두 가지의 돌연변이로 변형될 수 있는 약물 표적이 아니어서 약물 내성의 개발을 가능케 한다. 추가로, 가능한 숙주 면역 조절을 통한 성장 증진이 닭에 내재되어 있으며 약물 내성과 관계없음을 밝혔다. 대안적으로, 본 발명을 제한하지 않으면서, 본 발명은 세균 감염에 대한 동물용의 유일한 항생제로서 사용될 수 있다. 또한, 현재까지, 당해 펩타이드의 성장 촉진 활성의 감소는 관찰되지 않았다.

BT1583 단독으로 및 이를 널리 사용된 코키디오스태트 모넨신(MON)과 함께 사용하는 것으로서 당해 프로젝트를 위해 고안된 신규한 항-미생물제의 성능을 MON만을 단독으로 제공하는 것, 또한 널리 사용된 항미생물제 박티트라신 MD(BMD)과 함께 MON을 제공하는 것 및 BMD만 단독으로 제공하는 것과 비교하기 위한 브로일러 바닥 우리 시험.

다음 농도의 각각의 처리를 평가하였다:

1: 무첨가

2: 모넨신(MON) 99 ppm

3: BT1583 12 ppm

4: BT1583 12ppm + MON 99ppm

5: MON 99ppm + BMD 55ppm

6: BMD 55ppm

당해 연구는 처리 당 10개의 우리를 포함하였으며, 우리 당 40마리의 조류를 부화일에 수용하였다. 감소된 단백질(대략 23 내지 20%) 및 증가된 대사성 에너지(대략 1400 내지 1455kcal/lb)의 2종의 기본 옥수수-콩류 식단을 각각 0일 내지 21일째까지(포유용 사료) 및 22일째 내지 42일째까지(육성용 사료) 사용하였다. 처리 전혼합물을 측정하고 필요한 수준으로 식단에 혼합하였다. 0일 및 21일째 사이의 폐사율은 최적으로 성장하는 모든 조류에서 1% 미만이었으며 모든 그룹에서 우수한 건강 상태를 유지하였다.

연구 22일째에 시작하여, 당해 연구 감독자는 사육장 온도 및 기류를 조절하여 실험을 받은 적이 없는 무리 내의 대장균증 발발을 촉구하는 산업 조건을 모방하였다. 이는 당해 연구를 위한 자연 챌린지(challenge)를 자극하기 위해 수행하였다. 폐사율은 42일째에 대략 10%의 사육장 평균까지 상승하였다. 이들 주요 폐사는 BT1583 또는 MON을 받지 않은 그룹에서 발생하였다. 손상은 대장균증의 손상과 일치하였다(공기낭, 폐렴, 간주위염, 심주위염 및 극심한 이환률). 모든 폐사율을 문서화하였다(사망시 체중 및 부검 관측). 모든 조류 및 사료는 42일째에 칭량하였다. 모든 잔여 조류를 42일째에 질식시켜 안락사시켰으며, 동물 시체는 렌더링(rendering)용으로 제출되었다.

모든 데이타를 하기한 바와 같이 분석하였고 표 26에서 30에 걸쳐 나타내었다. 다음의 변수를 시험하였다: 반응 변수: 조류 당 증가, 증가 당 사료, 폐사율(%), 증가 당 조정 사료. 42일째에 0.05 수준의 유의도를 사용한, 하나의 차단 인자 = 위치를 사용하는 일원 분산분석(One Way ANOVA)로부터의 F 검정.

모든 반응 변수: ANOVA F 비율이 유의미한 경우, 0.05의 총 유의도 수준을 사용한, 유형 1 평균 오차와의 이원 비교를 위한 LSD T-검정 과정. 밑선 평균(아래의 표 30 참조)은 평균에서 유의미하지 않은 차이를 갖는 그룹을 지시한다.

조류 당 체중 증가(lb 단위)

처리	42일째 증가/조류
무첨가	3.900^d
모넨신(MON) 99ppm	4.111^bed
BT1583 12ppm	4.333^ab
MON 99ppm + BT1583 12ppm	4.385^a
MON 99ppm + BMD 55ppm	4.127^c
BMD 55ppm	3.971^cd

체중 증가는 MON + BMD 및 MON 그룹에 의해 제공된 것보다 MON + BT1583을 받은 그룹이 유의미하게 무거웠으며(p<0.05), 42일째에 측정한, BT1583을 부여받은 브로일러 2개 그룹이 가장 무거웠다.

사료/증가: 표 27은 MON + BT1583을 제공받은 브로일러가 BT1583만을 제공받은 그룹을 제외한 다른 모든 그룹보다 더 낮은(p<0.05) 사료/증가 수치를 가졌음을 나타낸다.

사료/증가

처리	42일째 사료/증가
무첨가	2.189^d
모넨신(MON) 99ppm	1.854^a
BT1583 12ppm	1.722^ab
MON 99ppm + BT1583 12ppm	1.689^a
MON 99ppm + BMD 55ppm	1.885^bc
BMD 55ppm	2.147^c

조정된 사료/증가: 각각의 우리에서의 폐사 동물의 총 체중을 최종적으로 살아 남은 동물의 체중에 더하여, 이 수치를 초기 체중을 감하여 감소시킨 후 총 사료 소비량으로 나누어 조정된 사료/증가를 계산하였다.

표 28은 사료/증가 수차에 대한 자연 챌린지의 효과를 입증한다. 심지어 폐사율에 대한 조정과 함께, MON + BT1583를 제공받은 브로일러는 다시 BT1583만을 제공받은 그룹을 제외한 다른 모든 그룹보다 유의미하게 낮은(p<0.05) 조정된 사료/증가 수치를 가졌다.

조정된 사료/증가

처리	42일째 조정된 사료/증가
무첨가	1.928^c
모넨신(MON) 99ppm	1.761^b
1583 12ppm	1.704^ab
MON 99ppm + BT1583 12ppm	1.654^a
MON 99ppm + BMD 55ppm	1.725^b
BMD 55ppm	1.838^bc

폐사율: 주요 폐사는 급성 및 만성 대장균증에 의해 유발되었다. BT1583 또는 모넨신만 제공받거나 이를 배합하여 제공받은 브로일러는 무첨가 대조군보다 낮은 폐사율을 가졌다.

급성 및 만성 대장균증에 의해 폐사율

처리	42일째 폐사율(%)
무첨가	17.50^c
모넨신(MON) 99ppm	8.00^a
1583 12ppm	2.75^a
MON 99ppm + BT1583 12ppm	3.50^a
MON 99ppm + BMD 55ppm	7.75^abc
BMD 55ppm	18.25^bc

모넨신은 승인된 폴리에테르 항생제이며 가금류 산업에서 항-원생생물제로 사용된다. 모넨신 및 그람 음성 세균에 대한 기타 폴리에테르 항생제에 의한 미미한 효능이 많은 조사자 및 가금류 산업자들에 의해 문서화되어 있다. BT1583 또한 그람 음성 세균에 대한 효능을 갖는다. 대장균은 보건학적으로나 경제학적으로나 식품 산업에서 주요한 문제가 되어 왔다. 당해 병원체에 대해 매우 효과적인 대부분의 생성물은 21일생 이상의 브로일러에 사용하기에는 너무 비싸거나 대중적인 건강 관심을 불러일으키는 사람 건강 상품과의 유사성 때문에 시장에서 밀려났다. 당해 연구는 BT1583이 모의 상업적 브로일러 조건 하에 사육된 3주 내지 4주생의 실험받은 적이 없는 닭에서 대장균증에 대하여 매우 효과적임을 입증하였다. 당해 시험에서 관찰된, 모넨신 및 BMD만을 그리고 이들을 배합하여 제공한 것 이상의 BT1583에 의해 획득된 20+ 포인트 체중 증가 이득 및 10+ 포인트 사료/증가 이득은 당해 생성물이 가금류 산업의 미래를 위한 매우 귀중한 도구일 수 있음을 강력히 제시한다.

본원에 기술한 특정 양태는 예시로서 나타내었으며 본 발명을 제한하지 않음을 이해할 것이다. 본 발명의 주요 특성은 본 발명의 영역을 벗어나지 않으면서 다양한 양태로 사용될 수 있다. 당해 분야의 숙련가는 본원에 기술된 특이적 과정에 대한 무수한 동등한 방법일 뿐인 통상적인 실험을 사용하여 인지 또는 확인할 수 있을 것이다. 이러한 동등한 방법은 본 발명의 영역 내에 있는 것으로 간주되며 본 청구항에 의해 포괄된다.

본 명세서에 언급한 모든 문헌 및 특허 출원은 본 발명이 관계된 분야의 숙련가의 기술 수준을 나타낸다. 모든 문헌 및 특허 출원은 각각의 개별 문헌 또는 특허 출원이 참조 인용되어 있음이 특별히 그리고 개별적으로 제시된 바와 같이, 동일한 정도로 본원에 참조 인용되어 있다.

본원에 개시 및 청구된 모든 조성물 및/또는 방법은 본원에 비추어 불필요한 실험 없이 제조 및 실행될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법이 바람직한 양태의 관점에서 기술된 반면, 당해 분야의 숙련가는 본 발명의 개념, 정신 및 영역을 벗어나지 않으면서 본원에 기술된 조성물 및/또는 방법 및 방법의 단계 또는 단계 순서에 변형을 가할 수 있음을 명확히 이해할 것이다. 보다 특히, 화학적 및 생리학적으로 관련된 특정 제제로 본원에 기술된 제제를 대체할 수 있으며, 동일하거나 유사한 결과가 달성될 것임이 명확해질 것이다. 당해 분야의 숙련가에게 명확한 이러한 유사한 치환 및 변형 모두 첨부된 청구항에 의해 정의된 바와 같이 본 발명의 정신, 영역 및 개념 내에 있는 것으로 사료된다.

참조 문헌

<110> The Texas A&M University System <120> COMPOSITIONS, METHODS AND USES FOR A NOVEL FAMILY OF PEPTIDES <130> TAMU 1007 <150> US 60/540,569 <151> 2004-01-30 <160> 28 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic oligonucleotide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> 4-methyl-4-[(E)-2-butenyl]-4,N-methyl-Threonine <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> D-form of Orn <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> D-form of lysine <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> D-Form of leucine <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-Form of tyrosine <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> C-terminal Alcoholic Valine <400> 1 Xaa Leu Xaa Ile Val Val Xaa Val Xaa Lys Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 2 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> artificial sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> 4-methyl-4-[(E)-2-butenyl]-4,N-methyl-Threonine <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> D-form of Ornithine <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> D-form of lysine <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> D-Form of leucine <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-Form of tyrosine <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> C-terminal Alcoholic Valine <400> 2 Xaa Met Xaa Ile Val Val Xaa Val Xaa Lys Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 3 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> artificial sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> 4-methyl-4-[(E)-2-butenyl]-4,N-methyl-Threonine <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> D-form of Ornithine <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> D-form of lysine <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> D-form of leucine <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-form of tyrosine <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> C-terminal Alcoholic Valine <400> 3 Xaa Val Xaa Ile Val Val Xaa Val Xaa Lys Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 4 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Artificial sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> 4-methyl-4-[(E)-2-butenyl]-4,N-methyl-Threonine <220> <221> 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MOD_RES <222> (1)..(1) <223> 4-methyl-4-[(E)-2-butenyl]-4,N-methyl-Threonine <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> D-form of Ornithine <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> D-form of lysine <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> D-form of leucine <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-form of tyrosine <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> C-terminal Alcoholic Valine <400> 6 Xaa Leu Xaa Ile Ile Val Xaa Val Xaa Lys Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 7 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Artificial sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> 4-methyl-4-[(E)-2-butenyl]-4,N-methyl-Threonine <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> D-form of Ornithine <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> D-form of lysine <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> D-form of leucine <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-form of tyrosine <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> C-terminal Alcoholic Valine <400> 7 Xaa Leu Xaa Ile Leu Val Xaa Val Xaa Lys Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 8 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Artificial sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> 4-methyl-4-[(E)-2-butenyl]-4,N-methyl-Threonine <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> D-form of Ornithine <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> D-form of lysine <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> D-form of leucine <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-form of tyrosine <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> C-terminal Alcoholic Valine <400> 8 Xaa Met Xaa Ile Ile Val Xaa Val Xaa Lys Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 9 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Artificial sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> 4-methyl-4-[(E)-2-butenyl]-4,N-methyl-Threonine <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> D-form of Ornithine <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> D-form of lysine <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> D-form of Ornithine lysine leucine <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-form of tyrosine <220> <221> MOD_RES <222> 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<220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-form of tyrosine <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> C-terminal Alcoholic Valine <400> 11 Xaa Val Xaa Ile Leu Val Xaa Val Xaa Lys Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 12 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Artificial sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> 4-methyl-4-[(E)-2-butenyl]-4,N-methyl-Threonine <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> D-form of Ornithine <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> D-form of lysine <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> D-form of leucine <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-form of tyrosine <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> C-terminal Alcoholic Valine <400> 12 Xaa Ile Xaa Ile Ile Val Xaa Val Xaa Lys Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 13 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Artificial sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> 4-methyl-4-[(E)-2-butenyl]-4,N-methyl-Threonine <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> D-form of Ornithine <220> <221> MOD_RES <222> 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4-methyl-4-[(E)-2-butenyl]-4,N-methyl-Threonine <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> D-form of Ornithine <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> D-form of lysine <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> D-form of leucine <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-form of tyrosine <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> C-terminal Alcoholic Valine <400> 15 Xaa Phe Xaa Ile Leu Val Xaa Val Xaa Lys Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 16 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Artificial sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> 4-methyl-4-[(E)-2-butenyl]-4,N-methyl-Threonine <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> D-form of Ornithine <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> D-form of lysine <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> D-form ofleucine <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-form of tyrosine <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> C-terminal Alcoholic Valine <400> 16 Xaa Leu Xaa Val Val Val Xaa Val Xaa Lys Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 17 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Artificial sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> 4-methyl-4-[(E)-2-butenyl]-4,N-methyl-Threonine <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> D-form of Ornithine <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> D-form of lysine <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> D-form of Ornithine lysine leucine <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-form of tyrosine <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> C-terminal Alcoholic Valine <400> 17 Xaa Met Xaa Val Val Val Xaa Val Xaa Lys Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 18 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Artificial sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> 4-methyl-4-[(E)-2-butenyl]-4,N-methyl-Threonine <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> D-form of Ornithine <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> D-form of lysine <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> D-form of leucine <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-form of tyrosine <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> C-terminal Alcoholic Valine <400> 18 Xaa Val Xaa Val Val Val Xaa Val Xaa Lys Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 19 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Artificial sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> 4-methyl-4-[(E)-2-butenyl]-4,N-methyl-Threonine <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> D-form of Ornithine <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> D-form of lysine <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> D-form of leucine <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-form of tyrosine <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> C-terminal Alcoholic Valine <400> 19 Xaa Ile Xaa Val Val Val Xaa Val Xaa Lys Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 20 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Artificial sequence <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> 4-methyl-4-[(E)-2-butenyl]-4,N-methyl-Threonine <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> D-form of Ornithine <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> D-form of lysine <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> D-form of leucine <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-form of tyrosine <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> C-terminal Alcoholic Valine <400> 20 Xaa Phe Xaa Val Val Val Xaa Val Xaa Lys Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 21 <211> 50674 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> artificial sequence <400> 21 attcgttgga tccagtgtgg tggaattcaa accctcagtg ggtaaagata ttgccagagt 60 cttgaaatgt accaaacagg gaaatgggta ccttgaaggc gacaaatatg tagtaacctg 120 ggcatttggc catctggtta cgctggctga tcctgaagcc tatggagaga catataaagc 180 ttggaagctg gaggatttac cactgttgcc gtctcgcctg caattaactg tcatcagaca 240 gagctccaag caatatcaga ttgtaaaaaa attattagcg cgtcaggata tttcagaagt 300 gattattgct actgatgctg gtcgtgaagg tgagctggtg gcgcgatgga ttttagaaaa 360 ggcacatgtg aaaaagccta ttaaacgact atggatttcc tctgtgactg ataaagcaat 420 cagtgatggc ttcagaaagc tgcgagatgg caaggaatac gagaatctct atgcttctgc 480 tgtagctcgc gctgaagctg actggtttgt cgggatcaat gccactcgtg ctcttacaac 540 gaagcataat gcccagctct cctgcgggcg tgtacaaact cctacagtgg caatgattgc 600 caaacgtgag gaggagattc aaaggttcgt tcctcgcccc tattatggtg ttcaagcgat 660 cacaggtaat ggattaaagc ttacgtggca ggatcagcaa accaaagata tgaagacgtt 720 taccaaggag aaggctgaga aaattgtcga aagcagtaaa aacaagcaag ctgaaattat 780 tgacatcaag aaggctgaca agaaaagctt cgccccagct ttatatgatc taactgagct 840 acaacgtgat gcgaataagc gttttggttt ttcggcaaag gaaaccctct ccattatgca 900 agggctatac gaaacacata aggtactcac atacccgcgg acagattctc gctatttgac 960 atcagatatt gtcgaaacat tacctgatcg attgagagcg atatctgtta agccatacac 1020 tccgtttgca gctaagctgt taaagcaacc gattcgagct ggtaaacatg tagtggataa 1080 tagcaaggta tctgatcacc atgcgattat tccaactgag caatctgtgc tgttaaataa 1140 gcttagcgat aaggaacgta aaatttatga ccttgtggtt aaacgctttc tggctgtgct 1200 atatccgcct tttgaatatg aacaaattag tattcgtgcc cgaattggca acgaggaatt 1260 tctagcaaaa gggaagacga taacgcatca gggctggaag gaaatttatg ataatcactt 1320 tgatgaagag gatcaaggag atggattaaa agaacagctt ttaccaacgc ttgtacaagg 1380 tgagcaacta tctgtacaaa ccgtttcttt tacaaaaggg gaaacaaaac ctccagagcc 1440 atttacggag gctacactcc tttcagctat ggagaatcct gtccgttata tgggacaggt 1500 tgataagcag ctagccaaaa cattaggtga gacaggtgga ttaggaactg ttgctactcg 1560 cgccgatatt attgaaaaat tgtttaatag cttcctcatt gaaaagcgca gcaagcatat 1620 tcatattact tctaaaggaa agcaattact tgagcttgta ccagaaggac ttcgctcacc 1680 ggctcttact gctgaatggg aagtgaagct tggagcgatc tcgaaaggaa gcctggctaa 1740 aaacagcttc atacaggaaa tgaagaagta tgcagagcaa atcgttcaac agatcaaatt 1800 tagtgagcaa aagtttcgtc atgacaatct gactcgctcc aaatgcccgg attgtggaaa 1860 gctgatgctt gaggtaaatg ggaaaaaagg aaaaatgtta gtttgtcagg atcgtgagtg 1920 tggtcaccgt aaggccgtat ccaaggttac aaatgccaga tgcccacaat gtcgaaagaa 1980 gatggagatg cgtggggaag gagaaggaaa gatattcgta tgcaaatgcg gacatcgtga 2040 aaaactgtcg acgtttaacg acagacgtag caaggagaaa cagacaaatg tttcgaaacg 2100 agatgtagcc cagtatatga aaaatcagca acgagatcaa gaaagcttag gtaatccagc 2160 cttgatggag gcattaaaga attttaagct agatcagtaa gtcattttat atagaaaaga 2220 taggctcgaa aataaggcgc ccgctctctt tattagctaa gagaaagggc gtctatttta 2280 gcttctcttt tctatatgga aaaaaggaat taacaaaatc tgaagaaaat ttcagaattt 2340 attattttta tgttaagaga ttttgaaaga agtgcatcta tttactttat ccataaatga 2400 aagcaaaaat gagattgtta tattccataa aatgtaaatg tttttatatc ttggaaaaca 2460 tagagtcgag aacgctgttc actatacaag aagactatag atacgagctt ttacggctat 2520 ttttacgatt tgataacgcc ttcttttttt agtctaataa aaaacagtaa cgaatcgaaa 2580 aaataacaat aatttgattg gtaaataaca ttgttactaa ttcacagaaa acaaaatcat 2640 tatttttaca taataaaaac ataataataa aatgtgatag aaaaatattg aagaaaatgt 2700 ccattattgg tagtattgaa aaataaacct gtaattttat gtattataat gcaattattt 2760 gtcgcatatt tactagcata aatgttagcg atgatgtgag caaatcgtta cctgttagaa 2820 ggaagatcag ctacatatga ttcaaaattt ttcgtttttt tattttaaaa gacaaagagg 2880 tggtcctgat ggatttatct acattaaatt ttttgggtga aacagaaaag cataagttat 2940 tgaatcaatt caatgatacg gacgctaatt ttcctcagga gatgaccatt catgggctgt 3000 ttgaaaagca agtccaagaa agaccgaatc aaactgcggt aatttttaat gaacaaagta 3060 tgacgtataa agaaatgaat gaacgagcca atcaagtagc acatagctta cggaagcatg 3120 gagctgctcc agatgagatc gttggaattc tagcagatcg caacatggac atgcttattt 3180 ccattctcgg cgtattaaag gctggagctg cttatatgcc tattgatcct acatacccta 3240 cagaacgtat tctttatatg atccatgata gccagaccaa aattgtctta gctgaacata 3300 gagagatggt tccggaaggc tgtaatgcag agctgatcct cttgcacgat agctcccttt 3360 taaacgaaga gacatctgat ctagagcatg taaataagcc tgaagatttg gcctatatta 3420 tctatacatc aggttctact ggtaaaccaa aaggggttat gattgaacat cgaaatgtca 3480 ttcgcttgct atttaatgac agaaacctat ttgattttac tagtgatgat gtctggaccg 3540 ttttccattc gttctgtttt gacttctctg tttgggagat gtatggggct ttactgtatg 3600 gaggaaaaat cgttctcgtc tcttttgaga tagctagaga tcctcaggcc ttccgagatt 3660 tacttcagga gcaaaaggtt acgattttaa atcaaacccc tacagctttt tatcagctct 3720 cgtctcaaga gatgcagcac tcagacagca atctatcgat tcgtaaaatc atttttggtg 3780 gagaagcgtt gacgccatca cagttgaaag catggaaaca aaaatatcca aatacagcct 3840 tgattaatat gtacggtatt acagaaacaa ctgttcatgt gacttataag gagtttcaat 3900 tacatgatat ggacagcaca gttagcaata tcggaaagcc tatcccaacg cttagaacct 3960 atgttttaga ttccaagaga aacctagctc caattggagt gaaaggtgaa ctgtatgtga 4020 gcggcaaggg agtagcccgc ggttatttaa acaaacctga attgacggaa gaacggttta 4080 tggataaccc gtttgttgct ggagaaagaa tgtatcgcac aggagaccta gctagatggc 4140 tacctgaagg agagctagaa tatctaggca ggattgacca tcaggtaaaa atcagaggct 4200 atcgcattga actcggagaa atagaagccg agctattgaa gcaaaaaggg attaaagaag 4260 cagtagtttt agttacaaat gataaagatg cacaaccaca attacatgcc tatttaacat 4320 ctaaggaaga tttggcagca gcagatcttc gtaatcaact tactacaaca ttaccctctt 4380 acatgattcc ggctcatttc atttttgtgt cgcaaatgcc tgttacgcca aatggaaaaa 4440 ttgataaaga atcacttcgt aaaatagaac catcacttca agaaagccct acagaagctt 4500 atgtagctcc acaaacacct acagaaaagc aattagtcca catatgggaa gaaaatattg 4560 gaatgcaacc gatcagcata gacgataatt attttgctct aggtggtgat tccatcaaag 4620 cgattaagct attgcatgct ataaataaag agtttcagat tagtttccaa attggagatt 4680 tgtataagca tggaaccatt agagaaatgg gacagcaaat cggtgaaaag ggcaagcaat 4740 ctagcaatca aaaactgttg aaacttcagg aattggaccg tttaaaagag aaaattttgg 4800 gaagtgagaa atagtcatgt cggataagct aagcaacgct aaagacctat ttccaatgag 4860 cgatatacag ctagggatgg tctaccattc gttaaaacat gtacacgaag ctgtatacca 4920 tgatcaattt gtttatcaag tagatgatga ttcatttgat gttcatgtgc tagagcaagc 4980 gatgagaatg atggttgata agcacgacat cttaaaaacc agctttcata ttgaggaatt 5040 ttccactcca gttcaagtag tgcaccagga ggtttctgtt cgaattgatg agacagacat 5100 tacgcatctg ggagaaaaac aaaaagagta tatccatcag tatttggcac aggatcgtca 5160 atcccctttt gatgtaacaa ccgctcctct atggagaatg agcgttttta aactgaatgc 5220 aagccaagtt gctttagtct ggatctttca tcatgctatt ttggatggat ggagtgttgc 5280 atcttttatt acggaattaa ttgatgttta tttcaaatta aagcacaaaa cttgcacttt 5340 ggagcatttg aacacgacct ataaggatta tgtgattgat cagatgctat tatctgagca 5400 aaatgagctg cgtgaatatt ggaaagaaga attaaaagat tacaaacggc tacagctccc 5460 agtaaaagtg gatgaaaatg gcggtgttca cgttaccgtt gttgagaagc tagaccctga 5520 cattataaat aaatgcagag aaattgcaca agctcatcac attccattaa agaccgtatg 5580 cctaacagcc tttctttcta tgatgcatat gatttcttat gagagagacc tgactgtggg 5640 attgattgag aacaaccgac caattataga agatgctgaa aaggtgttgg gatgttttct 5700 taactcagtt ccattccgcg ccattataaa gaaagatatg agctacagag agctattaga 5760 gcagacacag caaaagcttg ttgagattaa aacatatgga agactttcct ttgctaagat 5820 tattgaagta attggcgata cgggaagcga gcgtaatcca gtttttgact gtctttttaa 5880 ctttgtcgac ttccatgtat ttaaagggat aaaggatcat aaagtaaagt tttggttaga 5940 tggatatgaa aaaacaaaca ccatgtttga cttttctgtt tcgaccacaa tggatgacta 6000 ttttgttcgg gttgtatctg cactgccaga agaagatacg ataaaactaa ttaactatta 6060 tcaacgaatt ttagaaaaga ttgctcttca catagatgaa aaaatagata aacaagccaa 6120 tcttgatgaa aaggaaagcc acttgctgct agaggaatgg aatcaaacgt cagttgatta 6180 tccagacaag caaacattgc ataaacggtt tgaggagcaa gtagccaaaa atgaagatca 6240 ggtagcgctg gaatatgagg ataagcagct tacctatagg gaattgaacg ctaaagccaa 6300 tcaattggca cgtgttttac agaagcataa tacgctgcca actcaggtag ttggtctaat 6360 ggcagagcgt tcactagaga tgataatagg cattcttggg atattaaaag ccggcggagc 6420 ttatatgcct attgacccta cgtatcctgc ggagcgtatc caatatatgc tcgaagatag 6480 tcgatcctat ctcttacttg tacaaaaagc agaaatgatt ccagccaatt atcaggggga 6540 agtacttatc ctcacagagg aactttgggc agatgagaat acagagaacc tggaactagt 6600 caatcagccg caggatgttg ccaatatcat gtatacatct gggactacag gaaagccaaa 6660 aggtatcctg atcactcatc gaaacattat gactaccata atcaacaatg gctatctcga 6720 tattttttca acagatcgaa tattgcaaat atctaactat gcttttgatg gttctacctt 6780 tgatatatac agtgctttgc taaacggagc tactctcgtg ctagttccca agcaaacact 6840 catgaatacg accgatctgt tagcaatcat caaagatagc aatatcacgg tagctttaat 6900 gacaacctct ctattcaata cgttggttga tcttgatgta accagcttcc aacatacacg 6960 taaggtttta tttggcgggg aaaaggcttc atgtaagcat gtagaaaaag cattggatta 7020 tttgggtgaa gggcgcctag taaatggata tggtccgaca gaaacaacgg tgttcgctac 7080 tacctataca gtcgataaca cgattaaaaa gctgggaagt atcccgatcg gacgtccttt 7140 gagcaacact tcggtatata tttttggatt agatgatcaa ttacaaccac ttggagtacc 7200 aggggagtta tgtgtagcag gagaatgcat ttcgcctgga tatctgaatc gtcccgactt 7260 aacggcagac aaatttattg ataatccact taaaccaggt gagagaatgt accgtacagg 7320 tgacctagtt cgttggctgc ctgaaggtgt catggaatac atggggcgga ttgatgaaca 7380 agtcaagatt cgtggacatc gtatcgagct aggggagatt gaggcaaagc tgcttgagca 7440 tccttcgatt cgagaaacag tgctggtggc taaacaggat gcaaatggcc attctttttt 7500 aggtgcgtat cttgttacag acaacttctg ccctgtaacg gaattacgga attatctgat 7560 ggaaaccttg ccagaatata tggttccttc ttattttatc gagctggata gcctaccgct 7620 tacttcaaat ggaaaagtag ataagcgagc attgcccgaa ccggaatctc aggctttaca 7680 cgcatatacc atgccggaga atgagacgga agaaaaattg gttcagctat tccaggaagt 7740 gatggatgta gagcgtgttg gtactcaaga tagcttttat gaattaggcg gtcattcctt 7800 aaaagcaatg cttttggttt cacgaattca taaggatttt ggaataaaga taccgttgaa 7860 ggaagtattc agtcgtccga ccgtgaagga attggctgcc tatctgactg ggtcagaaga 7920 agcaaactat attgaaattg aagcagcaga agagaaacca tactatccag ttactgccgc 7980 ccaaaaacgg atgtatatcg cccagcaatg ggaggatggg gaagccacta gcagttatca 8040 catgccgttt atgatggaaa tcacagggcc tcttcaagta gaaaagctac aacaaacagt 8100 aaagagtctt gtcgcaaggc acgagtcgtt gcggacatca tttcacatga tcaatgaagt 8160 attgatgcaa aagatacatg cagatgtatt gtgggattta 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835 840 845 Arg Ile Asp Glu Gln Val Lys Ile Arg Gly Tyr Arg Ile Glu Leu Gly 850 855 860 Glu Ile Glu Thr Lys Leu Leu Glu His Pro Ser Ile Ser Glu Ala Leu 865 870 875 880 Val Val Ala Arg Asn Asp Glu Gln Gly Tyr Thr Tyr Leu Cys Ala Tyr 885 890 895 Val Val Ala Thr Gly Ala Trp Ser Val Ser Ser Leu Arg Glu His Leu 900 905 910 Ile Glu Thr Leu Pro Glu Tyr Met Ile Pro Ala Tyr Met Met Glu Val 915 920 925 Glu Lys Met Pro Leu Thr Ala Asn Gly Lys Ile Asp Lys Arg Ala Leu 930 935 940 Pro Val Pro Asp Arg Gln Arg Met Asn Glu Tyr Val Ala Pro Ala Thr 945 950 955 960 Glu Thr Glu Glu Lys Leu Val Leu Leu Phe Gln Glu Ile Leu Gly Leu 965 970 975 Glu Arg Ile Gly Thr Lys Asp His Phe Phe Glu Leu Gly Gly His Ser 980 985 990 Leu Lys Ala Met Met Leu Val Ser Arg Met His Lys Glu Leu Gly Val 995 1000 1005 Asp Val Gln Leu Asn Glu Met Phe Ala Arg Pro Thr Val Lys Asp 1010 1015 1020 Leu Ser Ala Tyr Ile Asp Gln Met Asn Gly Ser Ala Tyr Thr Ala 1025 1030 1035 Ile Gln Pro Val Glu Glu Gln Pro Tyr Tyr Pro Val Ser Phe Ala 1040 1045 1050 Gln Arg Arg Met Tyr Val Val Gln Gln Met Arg Asp Ser Glu Thr 1055 1060 1065 Thr Ser Tyr Asn Met Pro Phe Thr Phe Glu Leu Lys Gly Lys Leu 1070 1075 1080 His Leu Asp Lys Leu Arg Glu Ala Leu Gln Ile Leu Val Leu Arg 1085 1090 1095 His Glu Ser Leu Arg Thr Ser Phe His Met Ile Asp Glu Asn Leu 1100 1105 1110 Val Gln Lys Val Asn Lys Asp Ile Ser Trp Asp Leu Glu Val Ile 1115 1120 1125 Glu Ala Gln Glu Ser Glu Ile Glu Val Lys Leu Glu Glu Phe Ile 1130 1135 1140 Arg Pro Phe His Leu Ser Glu Ala Pro Leu Phe Arg Ala Arg Leu 1145 1150 1155 Ile Cys Leu Asn Pro Gln His His Leu Leu Ser Leu Asp Met His 1160 1165 1170 His Ile Ile Ser Asp Gly Val Ser Met Asn Leu Phe Leu Gln Glu 1175 1180 1185 Phe Met Thr Leu Tyr Gln Gly Glu Ala Leu Pro Ala Leu Ser Ile 1190 1195 1200 Gln Tyr Lys Asp Tyr Ala Val Trp Gln Gln Ser Asp Lys Gln Arg 1205 1210 1215 Ala Arg Leu Lys Glu Gln Glu Lys Tyr Trp Leu His His Phe Ser 1220 1225 1230 Gly Glu Leu Pro Thr Leu Glu Leu Pro Thr Asp Phe Pro Arg Pro 1235 1240 1245 Ala Ile Gln Gln Phe Asp Gly Asp Glu Trp Ala Phe Glu Met Asn 1250 1255 1260 Ala Asp Leu Leu Ala Lys Val Lys Gln Ile Cys Ser Ser Gln Gly 1265 1270 1275 Thr Thr Leu Tyr Met Thr Leu Leu Ala Ala Tyr Gln Val Phe Leu 1280 1285 1290 Ala Arg Tyr Thr Gly Gln Glu Asp Ile Ile Val Gly Ser Pro Ile 1295 1300 1305 Ala Gly Arg Ser His Ala Asp Leu Glu Asn Met Ile Gly Met Phe 1310 1315 1320 Val Asn Thr Leu Ala Leu Arg Gly Lys Pro Lys Ala Asp Gln Ser 1325 1330 1335 Phe Leu Ser Tyr Leu Lys Gln Val Lys Glu Thr Val Phe Gln Ala 1340 1345 1350 Tyr Ala Asn Ala Glu Tyr Pro Phe Glu Glu Leu Ile Glu Lys Leu 1355 1360 1365 Asp Leu Glu Arg Asp Met Ser Arg His Pro Leu Phe Asp Thr Leu 1370 1375 1380 Phe Ser Leu Gln Asn Met Glu Ile Ser Glu Phe Gln Met Asn Asn 1385 1390 1395 Leu Glu Ile Phe Pro Tyr Glu Thr Gly Gln Lys Asn Ala Lys Phe 1400 1405 1410 Ala Leu Ser Trp Leu Ile Ala Glu Gly Glu Ser Leu Tyr Val Thr 1415 1420 1425 Ile Glu Tyr Ser Thr Lys Cys Phe Lys Arg Glu Thr Ile Lys Arg 1430 1435 1440 Met Ala Ser His Phe Glu Gln Leu Leu Ala Gln Ile Val Glu Gln 1445 1450 1455 Pro Glu Ala Arg Ile Gly Gln Leu Glu Leu Val Ala Asp Ala Glu 1460 1465 1470 Arg Lys Met Leu Leu Glu Asp Phe Asn Leu Thr Lys Val Asp Tyr 1475 1480 1485 Pro Arg Glu Lys Thr Ile Gln Glu Leu Phe Glu Glu Gln Val Asp 1490 1495 1500 Lys Asn Pro Asp Gln Ile Ala Leu Ile Cys Gly Glu Gln Gln Phe 1505 1510 1515 Thr Tyr Glu Gln Leu Asn Val Lys Phe Asn Gln Leu Ala His Val 1520 1525 1530 Leu Arg Arg Glu Gly Val Gln Pro Asn Gln Val Ile Gly Leu Ile 1535 1540 1545 Thr Asp Arg Ser Leu Ser Met Ile Val Gly Ile Phe Gly Ile Ile 1550 1555 1560 Lys Ala Gly Gly Gly Tyr Leu Pro Ile Asp Pro Thr Tyr Pro Thr 1565 1570 1575 Glu Arg Ile Glu Tyr Met Leu Glu Asp Ser Gln Thr His Leu Leu 1580 1585 1590 Leu Val Gln His Arg Asp Met Val Pro Ala Gly Tyr Gln Gly Glu 1595 1600 1605 Val Leu Ile Ile Glu Asp Glu Ile Ser Arg Asp Glu Gln Val Ala 1610 1615 1620 Asn Ile Glu Leu Ile Asn Gln Pro Gln Asp Leu Ala Tyr Val Met 1625 1630 1635 Tyr Thr Ser Gly Ser Thr Gly Lys Pro Lys Gly Asn Leu Thr Thr 1640 1645 1650 His Arg Asn Ile Ile Lys Thr Val Cys Asn Asn Gly Tyr Ile Glu 1655 1660 1665 Ile Thr Thr Glu Asp Arg Leu Leu Gln Leu Ser Asn Tyr Ala Phe 1670 1675 1680 Asp Gly Ser Thr Phe Asp Ile Phe Ser Ser Leu Leu His Gly Ala 1685 1690 1695 Thr Leu Val Leu Val Pro Lys Glu Val Ile Leu Asn Pro Thr Asp 1700 1705 1710 Leu Ile Thr Leu Ile Arg Glu Gln Gln Ile Thr Val Ser Phe Met 1715 1720 1725 Thr Thr Ser Leu Phe Asn Ala Leu Val Glu Leu Asp Val Ser Ser 1730 1735 1740 Phe Gln Asn Met Arg Lys Ile Ala Phe Gly Gly Glu Lys Ala Ser 1745 1750 1755 Phe Lys His Val Glu Lys Ala Leu Asp Phe Leu Gly Asn Gly Arg 1760 1765 1770 Leu Val Asn Gly Tyr Gly Pro Thr Glu Thr Thr Val Phe Ala Thr 1775 1780 1785 Thr Tyr Thr Val Asp Glu Arg Ile Lys Glu Trp Gly Ile Ile Pro 1790 1795 1800 Ile Gly Arg Pro Leu His Asn Thr Thr Val His Ile Leu Ser Ala 1805 1810 1815 Asp Asp Lys Leu Gln Pro Ile Gly Val Ile Gly Glu Leu Cys Val 1820 1825 1830 Ser Gly Glu Gly Leu Ala Arg Gly Tyr Leu Asn Leu Pro Glu Leu 1835 1840 1845 Thr Met Glu Arg Phe Val Glu Asn Pro Phe Arg Pro Gly Glu Arg 1850 1855 1860 Met Tyr Arg Thr Gly Asp Leu Ala Arg Trp Leu Pro Asp Gly Val 1865 1870 1875 Leu Glu Tyr Val Gly Arg Lys Asp Glu Gln Val Lys Ile Arg Gly 1880 1885 1890 His Arg Ile Glu Leu Ser Glu Ile Glu Thr Arg Ile Leu Glu His 1895 1900 1905 Pro Ala Ile Ser Glu Thr Val Leu Leu Ala Lys Arg Asn Glu Gln 1910 1915 1920 Gly Ser Ser Tyr Leu Cys Ala Tyr Ile Val Ala His Gly Gln Trp 1925 1930 1935 Asn Ile Gln Glu Leu Arg Lys His Val Arg Asp Val Leu Pro Glu 1940 1945 1950 His Met Val Pro Ser Tyr Phe Ile Gly Leu Asp Lys Leu Pro Leu 1955 1960 1965 Thr Ser Asn Gly Lys Val Asp Lys Arg Ala Leu Pro Glu Pro Glu 1970 1975 1980 Gly Ser Leu Gln Leu Thr Arg Glu Ile Val Ala Pro Arg Asn Glu 1985 1990 1995 Ser Glu Lys Gln Leu Val Glu Ile Val Ala Glu Val Leu Gly Leu 2000 2005 2010 Glu Ala Ser Glu Ile Ser Ile Thr Asp Asn Leu Phe Glu Leu Gly 2015 2020 2025 Gly His Ser Leu Thr Ile Leu Arg Ile Leu Ala Lys Val His Thr 2030 2035 2040 Cys Asn Trp Lys Leu Glu Met Lys Asp Phe Tyr Asn Cys Lys Asn 2045 2050 2055 Leu Glu Glu Ile Ala Ser Lys Ala Thr Asp Met Gln Glu Asn Gln 2060 2065 2070 Asn Leu Ser Gly Ser Gly Ser Val Phe Lys Lys Gly Gly Lys Lys 2075 2080 2085 Ser Ile Pro Val Val Pro Val His Asp Arg Gln Lys Glu Met Glu 2090 2095 2100 His Val Leu Leu Leu Gly Ser Thr Gly Phe Leu Gly Ile His Leu 2105 2110 2115 Leu His Glu Leu Leu Gln Lys Thr Glu Ala Thr Ile Leu Cys Val 2120 2125 2130 Ile Arg Ala Glu Asn Asp Glu Ala Ala Met Gln Arg Leu Arg Lys 2135 2140 2145 Lys Ile Asp Phe Tyr Phe Thr Ser Gln Tyr Ser Ser Ser Gln Ile 2150 2155 2160 Asp Glu Trp Phe Thr Arg Ile Gln Ile Ile His Gly Asp Ile Thr 2165 2170 2175 Gln Ala Asn Phe Gly Leu Glu Ala Lys His Tyr Glu Ser Leu Gly 2180 2185 2190 Ala Ile Val Asp Thr Val Ile His Thr Ala Ala Leu Val Lys His 2195 2200 2205 Tyr Gly His Tyr Glu Glu Phe Glu Arg Ala Asn Val His Gly Thr 2210 2215 2220 Gln Gln Val Val Thr Phe Cys Leu Asn Asn Lys Leu Pro Met His 2225 2230 2235 Tyr Val Ser Thr Leu Ser Val Ser Gly Thr Thr Val Glu Glu Ala 2240 2245 2250 Thr Glu Leu Val Glu Phe Thr Glu Lys Asp Phe Tyr Val Gly Gln 2255 2260 2265 Asn Tyr Glu Ser Asn Val Tyr Leu Arg Ser Lys Phe Glu Ala Glu 2270 2275 2280 Ala Val Leu Val Gly Gly Met Glu Asn Gly Leu Asp Ala Arg Ile 2285 2290 2295 Tyr Arg Val Gly Asn Leu Thr Gly Arg Phe Gln Asp Gly Trp Phe 2300 2305 2310 Gln Glu Asn Ile Asn Glu Asn Met Phe Tyr Leu Leu Ser Lys Ala 2315 2320 2325 Phe Leu Glu Leu Gly Gly Phe Asp Gln Glu Ile Met Gln Gly Met 2330 2335 2340 Val Asp Leu Thr Pro Ile Asp Ile Cys Ala Gln Ala Ile Ile His 2345 2350 2355 Ile Ile Asn Ser Lys Gly Ile Glu Glu Arg Val Phe His Leu Gln 2360 2365 2370 Asn Pro His Leu Val Thr Tyr Asp Asp Met Tyr Arg Val Phe Glu 2375 2380 2385 Gly Leu Gly Phe Ser Arg Arg Val Gln Ser Arg Glu Asp Val Thr 2390 2395 2400 Arg Glu Leu Asp Val Met Met Ser Gln Gly Asn Glu Lys Leu Phe 2405 2410 2415 Leu Ala Gly Ile Leu Thr Thr Met Leu Asp Asp Val Glu Arg Ala 2420 2425 2430 Glu Gln Phe Asn Val Ala Val Asp Ser Ser Arg Thr Met Gln Leu 2435 2440 2445 Leu Glu Asp Thr Ser Phe Thr Tyr Pro Val Pro Asp Asp Glu Tyr 2450 2455 2460 Leu Arg Lys Leu Ala Met His Met Ile Lys Val Gly Phe Val Thr 2465 2470 2475 Pro Asn His Thr Val Ala Glu Lys Ile Gly Thr Ser Arg 2480 2485 2490 <210> 28 <211> 240 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> artificial sequence <400> 28 Met Ala Val Ile Glu Leu Lys Asn Leu Thr Lys Lys Tyr Asn Glu Val 1 5 10 15 Tyr Ala Val Asp His Leu Asn Ile Glu Val Pro Gln Gly His Ile Tyr 20 25 30 Ala Phe Leu Gly Ser Asn Gly Ala Gly Lys Thr Thr Thr Ile Lys Met 35 40 45 Met Thr Gly Gln Leu Asn Pro Ser Glu Gly Glu Val Leu Phe Leu Gly 50 55 60 Arg Asn Ile Trp Gln Asp Arg Glu Ala Arg Arg Ile Ala Gly Tyr Ala 65 70 75 80 Pro Asp Val Pro Leu Leu His Glu Gly Leu Thr Val Arg Glu Met Val 85 90 95 Arg Phe Val Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Asp Glu Asp Leu Asn Lys Arg 100 105 110 Val Asp Thr Leu Leu Glu His Phe Glu Leu Ala Asp Lys Ala Asp Gln 115 120 125 Leu Ile Lys Glu Tyr Ser Leu Gly Met Lys Arg Lys Val Ser Ile Ala 130 135 140 Cys Ala Leu Ile His Arg Pro Lys Ile Leu Leu Leu Asp Glu Val Thr 145 150 155 160 Asn Gly Leu Asp Pro Lys Ala Thr Arg Glu Val Lys Asn Tyr Ile Arg 165 170 175 His Phe Ala Lys Glu Glu Gly Gly Thr Val Phe Ile Thr Thr His Ile 180 185 190 Leu Asp Ile Val Glu Glu Leu Ala Asp Thr Ile Ser Ile Leu His Lys 195 200 205 Gly Lys Ile Lys Val Thr Gly Ser Met Glu Glu Leu Arg His Val Ala 210 215 220 Gly Asn Glu Glu Gly Arg Leu Glu Asp Ile Phe Leu Ser Ala Ile Glu 225 230 235 240

Claims

브레비바실러스 종(Brevibacillus sp .)으로부터 분리한 2종 이상의 D-아미노산을 포함하는 분리 및 정제된, 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드를 포함하는 사료 첨가물.
제1항에 있어서, C-말단 발린의 카복시-말단 -COOH 그룹이 -CH₂OH로 환원된 사료 첨가물.
제1항에 있어서, C-말단 발린의 카복시-말단 -COOH 그룹이 -CH₂OH로 환원되고 펩타이드에 대한 프로테아제 내성을 부여하는 사료 첨가물.
제1항에 있어서, 펩타이드가 pH 1.0, pH 13.0에서 안정적이고, 프로테아제 또는 이의 배합물에 내성을 갖는 사료 첨가물.
제1항에 있어서, 펩타이드가 서열 번호 1 내지 20 중 하나 이상에서 선택되는 사료 첨가물.
제1항에 있어서, 펩타이드가 그람 양성 세균, 그람 음성 세균, 진균, 원생생 물 또는 이의 배합물을 사멸시키는 사료 첨가물.
제1항에 있어서, 펩타이드가 브레비바실러스 텍사스포러스(Brevibacillus texasporous)로부터 분리된 사료 첨가물.
제1항에 있어서, 펩타이드를 약 0.5 내지 약 100ppm으로 첨가한 사료 첨가물.
제1항에 있어서, 펩타이드를 약 6 내지 약 12ppm으로 첨가한 사료 첨가물.
제1항에 있어서, 펩타이드를 가금류, 가축, 양식 어류, 게, 새우 및 민물 거북이 중 하나 이상에 사용하도록 개질시킨 사료에 첨가한 사료 첨가물.
보리, 콩, 밀, 라이밀(triticale), 호밀 및 옥수수 중에서 선택된 하나 이상의 곡물; 및

브레비바실러스 종으로부터 분리한 2종 이상의 D-아미노산을 포함하는 분리 및 정제된, 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드

를 포함하는 곡물류 동물 사료.
브레비바실러스 종으로부터 분리한 2종 이상의 D-아미노산을 포함하는 분리 및 정제된, 열 안정성의 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드 약 1 내지 1000ppm을 포함하는 펩타이드류 사료 첨가물.
2종 이상의 D-아미노산을 포함하며 카복시-말단 환원된, pH 및 열 안정성의, 브레비바실러스 종으로부터 분리한 항미생물 펩타이드.
열 안정성의, 카복시-말단 환원되고 아미노 말단 메틸화된 펩타이드이고 2종 이상의 D-아미노산을 포함하는 항미생물성 펩타이드를 생성하는 수탁번호 제ATCC PTA-5854호의 미생물 브레비바실러스 텍사스포러스(Brevibacillus texasporous)의 생물학적 순수 배양물.
제14항에 따르는 분리 및 정제된 미생물을 포함하는 사료 첨가물.
제15항에 있어서, 대용유(milk replacer), 육성용 사료(grower feed), 비육용 사료(finish feed), 예비-포유용 사료(pre-starter feed) 및 포유용 사료(pre-starter feed)로 이루어진 그룹 중에서 선택된 가축용 사료와 혼합한 사료 첨가물.
제1항에 따르는 조성물과 동물 사료를 혼합함을 포함하여 동물에서의 체중 증가 효율 및 사료 효율을 증가시키는 방법.
제17항에 있어서, 동물 사료를 소, 돼지, 닭, 말, 칠면조, 양, 염소, 양식용 어류, 게, 새우 및 거북이로 이루어진 그룹 중에서 선택된 가축의 사료용으로 개질시킨 방법.
제17항에 있어서, 동물 사료를 닭, 칠면조, 오리, 메추라기, 콘월 암탉(Cornish hen) 및 비둘기로 이루어진 그룹 중에서 선택된 조류의 사료용으로 개질시킨 방법.
제17항에 있어서, 사료가 곡물, 대두분, 분리대두단백, 분리대두유, 분리대두유지, 탈지유, 어분, 육분, 골분, 혈분, 혈장 단백질, 유장, 쌀겨, 밀겨, 감미료, 미네랄, 비타민, 염 및 목초로 이루어진 그룹 중에서 선택된 방법.
제17항에 있어서, 펩타이드의 일일 용량이 동물의 체중 kg당 약 1밀리그람 내지 약 10그람의 범위인 방법.
브레비바실러스 종으로부터 분리된, 2종 이상의 D-아미노산을 포함하는, 카복시-말단 환원된, pH 및 열 안정성의 펩타이드를 포함하는, 국소 용도용의 광범위(broad spectrum) 항미생물 화합물.
제22항에 있어서, 펩타이드가 서열 Me₂Bmt-L-dO-I-V-V-dK-V-dL-K-dY-L-V- CH₂OH(서열 번호 1)를 포함하는 항미생물 화합물.
2종 이상의 D-아미노산을 포함하는 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시 말단 환원된 펩타이드를 생성하는 단백질을 발현시키는, BT 오페론의 서열(서열 번호 21) 또는 이의 일부를 갖는 분리 및 정제된 핵산.
2종 이상의 D-아미노산을 포함하는 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시 말단 환원된 펩타이드를 제조하는데 사용된 하나 이상의 효소를 포함하는, BT 오페론 단백질에 대한 하나 이상의 폴리펩타이드 서열(서열 번호 22 내지 28)을 암호화하는 분리 및 정제된 핵산.
서열 번호 21에 75% 이상의 상동성을 갖는 분리된 핵산.
제26항에 있어서, 2종 이상의 D-아미노산을 포함하는 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드를 제조하는 데 사용된 효소인 펩타이드 합성 오페론 단백질에 대한 하나 이상의 폴리펩타이드 서열(서열 번호 22 내지 28)을 암호화하는 핵산.
제27항에 있어서, 하나 이상의 BT 오페론 폴리펩타이드가 서열 번호 21로부터 발현되고, 2종 이상의 D-아미노산을 포함하는 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화 되고 카복시 말단 환원된 펩타이드를 제조하는 데 사용된 하나 이상의 효소를 포함하는 핵산.
브레비바실러스 텍사스포러스 E58의 분리 세균주를 포함하는 분리된 세균 샘플.
스타필로코쿠스(Staphylococcus), 엔테로코쿠스(Enterococcus), 뉴모코쿠스(Pneumococcus), 바실리(Bacilli), 메타노코쿠스(Methanococcus), 해모필러스(Haemophilus), 아캐오글로버스(Archaeoglobus), 보렐리아(Borrelia), 시네드로십티스(Synedrocyptis), 미코박테리아(Mycobacteria), 슈도모나스(Pseudomonas) 및 이. 콜라이(E. coli)로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 세균의 성장을 억제하는, 브레비바실러스 종으로부터 분리된 2종 이상의 D-아미노산을 포함하는 분리 및 정제된, 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드.
2종 이상의 D-아미노산을 포함하는 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드를 생성하는 BT 오페론의 서열(서열 번호 21)을 갖는 분리 및 정제된 핵산으로 형질전환시킨 세균.
제31항에 있어서, 핵산으로부터 발현된 단백질이 하나 이상의 BT 오페론 단 백질을 포함하는 세균.
2종 이상의 D-아미노산을 포함하는 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드를 생성하는 BT 오페론의 서열(서열 번호 21)을 갖는 분리 및 정제된 핵산을 포함하는 벡터.
제33항에 있어서, 핵산으로부터 발현된 단백질이 하나 이상의 BT 오페론 단백질을 포함하는 벡터.
서열 번호 1 내지 20에 대한 75% 초과의 서열 상동성을 갖는 분리 및 정제된, 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드를 포함하는 사료 첨가물.
약제학적 유효량의, 브레비바실러스 종으로부터 분리된 2종 이상의 D-아미노산을 포함하는 분리 및 정제된, 열 안정성의, 아미노 말단-메틸화되고 카복시-말단 환원된 펩타이드를 치료가 필요한 동물에 제공함을 포함하여 대장균증을 치료하는 방법.