KR20060111494A - 심혈관 장애 치료용 산화질소 공여 유도체 - Google Patents

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죠 터커
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Abstract

공여가능 산화질소 부분 및 자유 라디칼 제거 부분을 포함하는, ApoA1 의 발현 유도용 화합물. 바람직하게는, 고콜레스테롤혈증, 혈관 산화 스트레스 및 내피 기능장애를 포함하는 질환을 앓는 환자를 치료하기 위하여, 스틸벤, 폴리페놀, 플라보노이드 및 이소플라보노이드의 산화질소 유도체 및 그들의 사용 방법이 제공된다.

Description

심혈관 장애 치료용 산화질소 공여 유도체 {NITRIC OXIDE DONATING DERIVATIVES FOR THE TREATMENT OF CARDIOVASCULAR DISORDERS}
본 발명은 식품, 약제, 건강기능식품에 혼입시키기에 적합한 플라보노이드 및 그의 유도체의 합성 및 투여 분야 및 그것을 사용하여 치료가 필요한 개체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
심혈관 질환은 고혈압, 관상동맥 질환, 뇌혈관 질환, 말초혈관 질환, 심부전, 류머티스성 심장 질환, 선천성 심장 질환 및 심근증을 포함하는, 심장 및 혈관 장애 군을 취급하는데 사용하는 일반 명칭이다. 심혈관 질환의 주된 원인은 동맥 벽에 지질 침적물이 축적되는 아테롬성 동맥경화증이다. 혈중 콜레스테롤 수치의 증가는 아테롬성 동맥경화증의 발병 위험성과 매우 관련이 깊어서, 혈중 콜레스테롤을 감소시키는 치료법의 개발에 상당한 의학적 연구를 쏟아왔다.
아테롬성 동맥경화증은 맥관구조 정렬의 정상적인 기능이 손상된 장애인 내피 기능장애와 연관되어 있고, 이것은 아테롬성 동맥경화증의 발명의 원인이 되며, 또한 다수의 기타 심혈관 장애 예컨대 협심증, 심근경색 및 뇌혈관 질환의 두드러진 위험 요소이다. 내피 기능장애의 특징에는 산화 혈관 스트레스의 증가 및 혈관수축, 뿐만 아니라 혈중 콜레스테롤 수치의 증가가 포함되고, 이들 모두는 서 로를 촉진시켜 심혈관 질환의 발병을 가속화시킨다. 질환의 발병을 가장 성공적으로 중단시키기 위해서는, 심혈관 질환의 원인이 되는 복합적인 위험 요소에 대한 치료 방법을 개선할 필요가 있다.
콜레스테롤 대사
콜레스테롤은, 그의 불용성에 기인하여, 지단백질이라고 칭하는 지질과 단백질의 복합체에 의해 혈액 내에서 수송된다. 저밀도 지단백질 (LDL) 은 신체 내에서 간으로부터 다른 조직으로 콜레스테롤을 수송하는 능력이 있다고 여겨져서, 일반적으로 "해로운(bad) 콜레스테롤" 이라고 칭한다. LDL 입자는 초저밀도 지단백질 (VLDL) 로부터 트리글리세리드를 제거하여 생성되는 중밀도 지단백질 (IDL) 로부터 전환된다. VLDL 은 트리글리세리드와 여러 가지 아포지단백질로부터 간에서 합성된 후, 거기서 혈류 속으로 직접 분비된다.
고밀도 지단백질 (HDL) 은 간장 밖의 조직으로부터 콜레스테롤을 간으로 수송하는 주요 담체 분자라고 여겨지며, 콜레스테롤 역수송 (RCT) 이라고 칭하는 프로세스로 간에서 이화(catabolize)된 후 소멸되어, HDL 에게는 "유익한(good) 콜레스테롤" 이라는 별칭이 붙는다. 간에서 일어나는 상기 소멸 프로세스에서, 콜레스테롤은 담즙산으로 전환된 후, 체외로 배설된다.
고지혈증의 현행 치료법
현재 승인된 콜레스테롤 저하 약물은 정상적인 콜레스테롤 대사 경로를 다수의 상이한 지점에서 공략하여 치료적 이득을 제공한다. 담즙산 결합 수지, 예컨대 콜레스티라민은 담즙산에 흡착되고 체외로 배설되어, 콜레스테롤의 담즙산으 로의 전환율을 증가시켜, 결과적으로 혈중 콜레스테롤을 저하시킨다. 상기 수지는 혈청 콜레스테롤을 최대 20% 만 감소시키고, 위장 부작용을 야기하며, 다른 약물치료와 공존할 수 없는데, 이는 그 수지가 그러한 다른 약물에 결합하여 그러한 다른 약물을 배설시킬 것이기 때문이다.
나이아신은 지단백질 합성을 저해하고, LDL 을 만드는데 필요한 VLDL 입자의 생성을 감소시킨다. HDL 수치를 증가시키는데 필요한 고농도로 투여하는 경우, 심각한 부작용 예컨대 홍조를 일으킨다.
피브레이트, 예컨대 클로피브레이트 및 페노피브레이트는 핵 호르몬 수용체의 페록시좀 증식자-활성화 수용체 (PPAR) 과에 속하는 전사 인자를 활성화시킨다고 여겨진다. 이들 전사 인자는 HDL 의 생성에 관여하는 유전자를 업-레귤레이트(up-regulate)시키고 LD 의 생성에 관여하는 유전자를 다운-레귤레이트(down-regulate)시킨다. 피브레이트는 VLDL 분획을 저하시켜 혈청 트리글리세리드를 감소시키기 때문에 고지혈증을 치료하는데 사용된다. 그러나, 이들은 만성 관상동맥 질환 환자에 있어서 지질 반응의 성질이 이종적이며, 그 환자들에게서 관찰되는 효능이 부족하기 때문에, 미국에서는 고콜레스테롤혈증 치료법으로서 승인받지 못했다. 게다가, 피브레이트의 사용은 심각한 부작용, 예컨대 위장암, 담낭 질환 및 비-관상 사망율 빈도의 증가와 연관된다.
HMG CoA 환원효소 저해제로도 알려진 스타틴은 간장 콜레스테롤 합성에서 속도-제한 효소를 차단시켜 VLDL, LDL 및 IDL 콜레스테롤을 감소시킨다. 스타틴은 HDL 수치를 약간만 증가시키고, 다수의 간 및 신장 기능장애 부작용이 이들 약 물의 사용과 연관된다.
이제티마이브는, 장에서의 콜레스테롤 흡수를 저해함으로써 기능하는, 새로운 부류의 심혈관 치료법에서 최초로 승인된 약물이다. 이제티마이브는 LDL 을 저하시키지만 HDL 수치를 뚜렷이 증가시키지는 않고, 체내에서 합성되는 콜레스테롤을 처리하지도 혈류 내에 순환하거나 동맥경화 플라크에 존재하는 콜레스테롤을 처리하지도 않는다. 콜레스테롤 흡수에 영향을 준다고도 밝혀진 다른 화합물에는 담즙산 결합제 콜레스티라민 식물 스테롤이 포함된다.
이러한 치료법들의 개발에도 불구하고, HDL 의 혈중 수치를 증가시키는데 있어서 얻은 것은 거의 없으며, 현재 승인된 모든 약물은 부작용 및 효능 면에서 그들의 치료적 유효성에 한계가 있다. 결과적으로, HDL 를 안전하게 증가시켜서 콜레스테롤 역수송 속도를 증가시켜 콜레스테롤의 혈중 수치를 감소시키도록 치료법을 개선할 필요가 있다.
내피 기능장애 및 아테롬성 동맥경화증
아테롬성 동맥경화증의 발생 초기에 내피기능 손상이 일어나고, 이것은 사실상 지질이 침적되기 전에 검출가능하다. 내피 기능장애는 그 징후가 혈관수축을 특징으로 하고, 고혈압을 야기하며, 이것은 뇌졸중 및 심근경색과 같은 기타 심혈관 장애에 대한 주지의 위험 요소이다. 혈관확장을 유도하는 신호전달 분자인 산화질소 (NO) 의 감소된 생체이용성에 대한, 아테롬성 동맥경화증 환자에서 감소된 내피 기능과 연관된 연구가 통상 행해진다.
NO 의 감소된 생체이용성은 또한 아테롬성 동맥경화증의 발병에 중요한 역할 을 하는 기타 기작을 활성화시킨다. 예를 들어, NO 는 아테롬성 동맥경화증의 특징인 지질 플라크 (plaque) 의 발생에서 필수 단계인 혈소판 응집을 저해하는 것으로 주지되어 있다. 게다가, NO 는 아테롬성 동맥경화증의 발병에서 주요한 단계이며, 아마도 고지혈증 환자에서 증가된 혈관 산화 스트레스의 결과인 백혈구 부착을 저해하는 중요한 내인성 매개체이다. 부착성 백혈구는 나아가 대량의 반응성 산소 종을 방출시켜 산화제 스트레스를 증가시킨다.
증가된 혈관 산화 스트레스 및 고콜레스테롤혈증은 개별적으로 NO 생체이용성의 감소 원인에 대한 기여자로서 확인되었다. 증가된 산화는 또한 아테롬성동맥경화 병소 형성의 또다른 유도자인, 자유 라디칼 매개 지질 과산화반응을 야기한다. 요약하자면, 이들 세 가지 주요 인자인, 고콜레스테롤혈증, 혈관 산화 스트레스 및 NO 의 감소된 생체이용성 각각이 나머지 인자의 정도 및 병리학적 심각성을 증가시키는, 양성 피드백 루프가 존재한다고 보여진다.
아테롬성 동맥경화증 - 내피 기능장애 치료법으로서의 산화질소
NO 를 공여한다고 알려진 화합물을 이용하는 치료 방식들을, 아테롬성 동맥경화증 - 내피 기능장애 사이클을 중단시키려는 시도로 임상적으로 이용해 왔으나 성공하지 못했다. NO-공여 약물에 의해 방출된 외인성 NO 는 NO 뿐만 아니라 강력한 산화제인 퍼옥시니트라이트 음이온도 생성하며, 이것은 나아가 산화 스트레스를 증가시킨다는 것이 입증되었다. NO-공여체에 의한 퍼옥시니트라이트의 생성 및 증가된 산화 스트레스에 의해 야기된 NO 에 대한 반응성의 연이은 하향 조절은 유기 니트레이트 에스테르로 임상적으로 치료받는 환자에서 발생하는, 문서상 충분히 입증된 내성의 근간이 될 수 있다. NO-공여 약물은 또한 NO 를 해리시키기 전에 티올 중간체를 통한 전환이 필요하다고 여겨지며, 산화 스트레스로 인한 질병에서 티올의 생체이용성은 상당히 감소된다.
항산화제 / 산화질소 병합 요법
NO-공여 약물에 의해 야기된 혈관 산화 스트레스의 악화를 완화시키기 위하여, 환자에게 항산화제를 NO-공여체와 함께 제공한다. 항산화제와 NO-공여체를 병용하면 고콜레스테롤혈증 대상체에서 내피-의존성 혈관확장이 상당히 증가한다는 것을 몇몇 연구가 입증하였다.
그러나, 이러한 결과는 아마도 충분한 세포내 투약을 달성하는데 있어서의 어려움에 기인하여 이런 치료법으로 내피-의존성 혈관확장을 증가시키지 못한 자들에 의해, 그리고 따라서 NO-공여체 치료가 아테롬성 동맥경화증 발병의 연기 및 아테롬성 동맥경화증이 진행 중인 환자에서 기대수명의 증가에 관련이 적다는 사실에 의해 의심받는다. 부가적으로, NO-공여체도 NO-공여체 / 항산화제 병합 요법도 아테롬성 동맥경화증 - 내피 기능장애 사이클의 고콜레스테롤혈증 측면을 직접 다루지는 못한다.
고콜레스테롤혈증 근원 아테롬성 동맥경화증을 치료하는 현존하는 치료법과 NO-공여 및 항산화제의 병용은 또한 차선책이며, 이는 현재 승인된 약물이 콜레스테롤을 체외로 효과적으로 수송하기 위한 HDL 증가 효과를 효과적으로 이용하지 않기 때문이다.
그러나, 바람직한 항산화제 및/또는 NO-공여체 병용은 항산화제 및 NO-공여 체가 체내에서 동일한 위치에 동시에 확실히 존재하도록 하여, 항산화제가 NO 의 잠재적인 산화 부작용을 가장 효과적으로 중화시킨다고 가정할 수 있다. 방출 속도 및 생체이용성이 다른 여러 가지 상이한 약물을 병용하여 이런 요구를 충족시키는데 있어서의 어려움은 공여체 분자로부터 일단 방출되는 세포 환경에서 NO 의 짧은 반감기로 인해 악화되기 쉽다.
항산화제로서의 스틸벤, 폴리페놀 및 플라보노이드
정상적인 세포 호흡에 의해 생길 수 있는 반응성 산소 종 (ROS) 은 체내에서 산화적 손상의 주요 원인이다. ROS 에 대항하는 가장 효과적인 방법은 ROS 에 결합하여 이들이 세포 내에서 결정적 단백질 (key proteins) 및 DNA 에 부적절하게 결합하지 못하도록 해 주는 항산화제 화합물을 제공하여 반응성 기를 "소탕" 하는 것이다. ROS 를 제거할 수 있는 매우 효과적인 항산화제 화합물은 종종 하나 이상의 페놀계 고리 구조를 포함한다. 페놀 고리는 ROS 가 그것과 공유 결합을 형성할 수 있어서, ROS 의 강력한 산화 반응을 제거할 수 있는 반응성 종이다. 스틸벤, 폴리페놀 및 플라보노이드는 모두 2 개 이상의 페놀계 고리 구조를 포함하여, 항산화제로서 잠재적으로 효능이 있다.
프로-아포지단백질 A1 작용제로서의 레스베라트롤, 기타 스틸벤 및 폴리페놀, 및 플라보노이드
스틸벤, 폴리페놀 및 플라보노이드는 그들의 항산화제 활성에 더하여 고콜레스테롤혈증의 치료에 유용한 활성도 가지는데, 예를 들어, 특정 식물에서 발견되는 천연 폴리페놀인 주지의 스틸벤인, 레스베라트롤 (3,4',5-트리히드록실 트랜스 스 틸벤) 은 "프렌치 파라독스(French Paradox)" 라 칭하는 역학적 소견 (epidemiological observation) 에 기초하여 제안된다. 이 파라독스는 비슷한 고지방식에도 불구하고 프랑스가 북미에 비해 심혈관 질환의 발병율이 1/3 이라는 소견을 가리킨다. 프렌치 파라독스는 북미에서 소비되는 레드 와인보다 프랑스에서 다량의 레드 와인을 소비하는 것과 관련이 있다. 레스베라트롤은 적포도 껍질에 매우 풍부하여 레드 와인에서 상당량이 발견되지만, 화이트 와인 또는 기타 알코올 음료에서는 거의 완전히 없다.
레스베라트롤이 심혈관 질환의 발병율을 감소시키는 기작은 여러 가지 가설에 의해 상당한 논쟁거리의 주제로 남아있다. 레스베라트롤은 LDL 입자의 과산화반응 수준을 저하시키고, 이어서 죽종형성을 저해하는 것으로 비치는 강력한 항산화제임이 입증되었다. 레스베라트롤은 또한 백혈구 부착 및 혈소판 응집 저해제로서 관련되어 있다. 또한, 레스베라트롤은 p21 및 p53 의 활성 수치를 조절하는 기재된 능력에 기인하여 잠재적인 항암 치료제로서 연구되고 있다.
레스베라트롤은 시클로옥시게나아제-1 효소의 저해 (US 특허 6,541,045; Jayatilake et al. J Nat Prod. 1993 Oct; 56(10):1805-10; US 특허 6,414,037) 및 단백질 키나아제 저해 (US 특허 출원 0030171429) 를 포함하는 제안된 기작을 갖는 항염증제로서 확인되었다. 결과적으로, 레스베라트롤은 관절염 장애, 천식 장애, 건선 장애, 위장 장애, 안과 장애, 폐 염증 장애, 암을 치료하기 위해 치료적으로 사용하기 위해, 진통제로서, 해열제로서, 또는 혈관 질환, 중추신경계 장애 및 박테리아, 진균 및 바이러스 감염과 관련된 염증의 치료를 위한 잠재성을 가질 수 있다.
레스베라트롤은 최근 시르투인-활성화 화합물로 기재되었고, SirT1 과 직접 상호작용을 통해 수명을 증가시켜, p53 을 다운-레귤레이션시키는 것으로 제안되었다. 레스베라트롤은 또한 아릴 탄화수소 수용체에 길항작용을 하며 에스트로겐 수용체에 작동한다고 알려져 있고, ERK 1/2 경로의 활성화 및 전사 인자 egr-1 의 활성을 증가시키는 것을 통해 작용을 매개한다고 설명된다.
더욱 최근에, 레스베라트롤은 추정적으로 ApoA-1 유전자의 프로모터 영역 내의 뉴클레오티드 서열인 S 부위를 통해 매개되는 아포지단백질 A1 의 전사 증가능이 있음을 밝혔다 (PCT/CA03/01220).
S 부위에서 발견되는 서열, AGCCCCCGC, 는 "Egr-1 반응 부분" 공통 서열로서 설명된다. 이 부분은 인간 APO AI 프로모터의 뉴클레오티드 스패닝 (spanning) -196 내지 -174 에 포함된다 (Kilbourne et al. 1995, JBC, 270(12):7004-10). 임의의 특정 이론에 구속되지 않고, S 부위에 포함되는 것으로 밝혀진 이 AGCCCCCGC 부분은 레스베라트롤이 그의 작용을 매개하는 것으로 제안되는 서열이지만, 기타 잠재적으로 필요한 부분을 배제하려는 것은 아니다.
S 부위 또는 AGCCCCCGC 부분의 대략 임의의 8 개의 인접 염기를 포함하는 뉴클레오티드 서열은 이종조직 프로모터에 작동적으로 연결되어 리포터 유전자의 발현을 조절하는 강화 부분으로서 작용한다.
스틸벤, 플라보노이드 및 기타 폴리페놀의 치료적 사용의 단점
불행하게도, 스틸벤, 예컨대 레스베라트롤, 및 기타 폴리페놀, 및 플라보노 이드를 치료제로서 사용하면 문제가 될 수 있다.
소비자에게 있어서 레스베라트롤의 가장 풍부한 이용가능 공급원인 레드 와인은, 알코올 과다 소비에 있어서 문헌상 확립된 다수의 해로운 효과 때문에, 매일 상당량을 소비할 수는 없다. 즉, 레스베라트롤의 활성은 알코올이 없을 때 더 양호하거나 더 안전할 수 있다.
자연적으로 합성되지 않고, 설명된 적 없거나 시험에 이용가능하도록 제조되지 않은, 잠재적으로 이로운 성질의, 많은 스틸벤, 폴리페놀 및 플라보노이드를 생성할 수 있다. 그러한 화합물은 인간 임상 연구에서 조사하기 전에 실험실에서 생성하고 적당한 시험관내 및 생체내 분석으로 시험하여 이로운 치료적 활성을 입증해야 한다.
생물학적 기원의 다수의 스틸벤, 폴리페놀 및 플라보노이드는, 이들이 종종 식물로부터 합성되기 때문에 알려져 있다. 다수의 이들 화합물은 이들의 공지의 시험관내 항산화제능, 이들의 추정적 항암 효능 및 심혈관 질환에 대한 이들의 명백한 이로운 효과와 같은 잠재적으로 이로운 성질에 대하여 조사하였다. 그러한 화합물에 대하여 몇몇 인간 연구를 수행하면서, 그에 따른 결과는 더욱 불명확해지고 종종 모순되었다. 예를 들어, 인간 임상 연구 결과는 일차적 임상 목표 예컨대 아테롬성 동맥경화 플라크 크기, 또는 심장 마비와 같은 심혈관 사건의 감소에 대한 이득의 명백한 증거를 아직 입증하지 못했다. 몇몇 경우에, 예를 들어, 토끼 또는 래트를 사용하는 동물 연구 결과는 인간 연구 결과와 관련이 없었다. 예를 들어, 인간 연구에서 나린게닌 (한 가지 예로서, 투여한 감귤류 즙에 서 발견한 많은 성분 중 플라보노이드) 을 투여하면 HDL 은 증가하지만, LDL 또는 트리글리세리드에 대해서는 효과가 없는 것이 관찰된 반면, 토끼에게 투여한 경우, 나린게닌은 LDL 은 감소시켰지만, HDL 에는 어떠한 효과도 없음을 알게 되었다.
부가적으로, 지금까지 어떠한 임상적 연구도 심혈관 장애의 치료에 있어서 인간 치유에 사용하기 위한 플라보노이드 예컨대 나린게닌, 또는 스틸벤 예컨대 레스베라트롤, 또는 기타 폴리페놀의 적당한 투약량을 설명하지 않았다.
보호기가 있는 화합물은 더 긴 혈청 반감기, 개선된 효능, 감소된 독성 및 개선된 치료 결과를 낼 수 있음
필요로 하는 개체에게 치료제로서 투여한 화합물은 전형적으로는 배설되기 전에 체내에서 다양한 대사산물로 대사된다. 그러한 대사산물은 종종 독성, 효능 및 혈청에서의 잔존 기간 면에서 모 화합물과 다르다. 다수의 화합물에 있어서, 대사산물은 모 화합물만큼 효과적이지 못하고, 더 독성일 수 있다.
외인적으로 투여된 치료적 화합물의 대사시, 다수의 상이한 변형이 일어날 수 있고, 예를 들어, 다양한 화학적 부분이 첨가되거나 결정적 기 (key groups) 가 제거된다. 생체내에서 일어나는 한 가지 대사 반응은 히드록실기의 제거이다. 본 발명의 화합물이 산화질소 공여 유도체에 포함되어 있는, 플라보노이드, 스틸벤, 및 기타 폴리페놀계 화합물의 핵심 구조를 가지는 화합물로부터 히드록실기를 제거하면, 그 화합물이 콜레스테롤 대사에 양성적으로 영향을 주는 능력을 상당히 감소시킬 수 있는데, 이는 상기언급한 히드록실기가 그러한 분자의 활성 부위의 필수 부분이기 때문이다. 따라서, 히드록실기를 보호하는데 어떤 기작을 이용하 여 대사율을 감소시켜 화합물이 체내에 남는 시간을 증가시키면, 유리하게는 본 발명의 화합물 투여의 이로운 효과가 개선된다.
실험실 화학 반응에 흔히 이용되는 한 가지 보호 기작은, 대형 분자의 쉽게 개질되고 불안정한 화학적 기에 결합되어 그 불안정한 기의 개질 또는 손실을 막는 보호기의 사용이다. 보호기는 전체 분자 내의 어떠한 공유 결합도 변형시키지 않으면서, 원래의 분자로 복구하기 위해 나중에 제거할 수 있다. 환자에게 투여하려는 화합물에 있어서 유사한 형태의 보호를 사용할 수 있고, 이때 활성 분자를 재구성하는 공지의 반응이 체내에서 일어나기 쉽다. 보호기가 분자로부터 방출되는 속도를 조절하여 약물이 방출되는 속도에 영향을 줄 수 있다. 체내에서 반감기가 연장되고/되거나 배설이 연기된 효능 있는 화합물을 제공하는 것이 본 발명의 목적이다.
개선된 심혈관 치료법이 필요함
상기에 따르면, 혈중 콜레스테롤을 안전하고 효과적으로 저하시키면서 동시에 내피 기능장애를 감소시키고 혈관 산화 스트레스를 감소시킬 수 있는 화합물 및 개선된 치료법의 개발이 필요하다는 것이 명백하다.
발명의 개요
동시에 그리고 같은 장소에 편중하여 자유 라디칼 제거 항산화제 분자를 방출하고 산화질소를 공여하는 능력이 있는 신규 화합물 부류, 및 그것을 이용하는 치료 방법을 제공하는 것이 본 발명의 관점이다. 이러한 신규 화합물은 ApoA1 의 발현 유도능을 동시에 갖기 때문에 HDL 의 혈중 수치를 증가시키고 콜레스테롤의 혈중 수치를 저하시킨다. 또한 이들 화합물은 HMG-CoA 환원효소 저해, PPAR 활성 증가, ACAT 저해, ABCA-1 활성 증가, 및 LDL 및 트리글리세리드의 혈중 수치 감소를 포함하는 다른 유익한 작용을 갖는다. 이들 화합물의 다변수의 합동 효과를 사용하여 내피 기능장애를 감소시키고, 혈관 산화 스트레스를 감소시키고 고지혈증을 감소시켜, 심혈관 장애 예컨대 아테롬성 동맥경화증, 고혈압, 관상동맥 질환, 뇌혈관 질환 등을 치료할 수 있다.
본 발명의 다양한 관점 및 원리에 따르면, 다음과 같은 화합물이 제공된다.
하기의 구조를 포함하는 스틸벤 화합물:
Figure 112006031849791-PCT00001
[식 중
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 은 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R10 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00002
을 의미하고
R 은 R11 또는 R12 이고
이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상이 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상이 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있고
이때 X 는 단일, 이중 또는 삼중 결합일 수 있다].
하기의 구조를 포함하는 플라보노이드 화합물:
Figure 112006031849791-PCT00003
[식 중
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R13 및 R14 는 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R10 또는 R13 또는 R14 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00004
을 의미하고
R 은 R11 또는 R12 이고
이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상이 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상이 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있고;
X 는 O, CR13 또는 NR13 일 수 있고;
Y 는 CO [6 원자 고리 구조를 계속 유지하는 케톤], CR14 또는 NR14 일 수 있고;
Z 는 단일 또는 이중 결합일 수 있다].
하기의 구조를 포함하는 이소플라보노이드 화합물:
Figure 112006031849791-PCT00005
[식 중
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R13 및 R14 는 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R10 또는 R13 또는 R14 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00006
을 의미하고
R 은 R11 또는 R12 이고
이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있고;
X 는 O, CR13 또는 NR13 일 수 있고;
Y 는 CO [6 원자 고리 구조를 계속 유지하는 케톤], CR14 또는 NR14 일 수 있고;
Z 는 단일 또는 이중 결합일 수 있다].
하기의 구조를 포함하는 칼콘 화합물:
Figure 112006031849791-PCT00007
[식 중
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 및 R13 은 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R10 또는 R13 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00008
을 의미하고
R 은 R11 또는 R12 이고
이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있고;
X 는 단일 또는 이중 결합일 수 있고;
Y 는 단일 또는 이중 결합일 수 있고;
Z 는 CO [케톤], CR13 또는 NR13 일 수 있고;
단, X 및 Y 가 둘 다 이중 결합은 아니고, Z 가 CO 이면 Y 는 이중 결합이 아니다].
하기의 구조를 포함하는 폴리페놀 화합물:
Figure 112006031849791-PCT00009
[식 중
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 은 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R10 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00010
을 의미하고
R 은 R11 또는 R12 이고
이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있고
X 는 C, S, (CO), SO, AKA 케톤, (SO2)N, (CO)C, (CO)N, (CO)O, C-N [단일 결합], C=N [이중 결합], C-O, N-O, N-N [단일 결합], 또는 N=N [이중 결합] 일 수 있다].
또한, 심혈관, 콜레스테롤 또는 지질 관련 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 상기 임의의 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 환자 치료 방법이 제공된다. 환자에게 항산화제 활성을 제공하면서 ApoA1 의 발현을 유도하는 또다른 바람직한 치료 방법은 상기 환자에게 상기 임의의 화합물을 투여하는 것을 포함한다. 환자의 혈청 콜레스테롤을 감소시키는 본 발명의 또다른 바람직한 방법은 상기 환자에게 상기 임의의 화합물을 투여하는 것을 포함한다.
또한, 알츠하이머 질환, 당뇨병, 비만, 허혈성 재관류 손상, 울혈성 심부전 및 관련 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 상기 임의의 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 치료 또는 예방 방법이 제공된다. HDL 의 낮은 혈청 수치는 알츠하이머 질환 (Suryadevara et al. 2003 J. Gerontol A Biol. Sci. Med. Sci. 58(9): M859-61) 의 위험성 증가와 관련되어 있다. 본 발명의 화합물이 PPAR 감마 활성을 조절한다는 것이 밝혀졌다; PPAR 감마 기능장애는 당뇨병, 비만, 허혈성 재관류 손상, 울혈성 심부전 및 관련 장애와 관련되어 있다 (Ferre et al. 2004 Diabetes 53 Suppl 1:S43-50; Yue 2003 Drugs Today (Barc) 39(12):949-60).
본 발명의 상세한 설명 및 최량의 형태
본 발명의 원리 및 관점에 따르면, 스틸벤, 폴리페놀 및 플라보노이드 및 그의 유도체의 NO-공여 유사체의 사용에 관하여 자세한, 잠재적 작용 기작을 특징으로 하는 설명과 함께 심혈관 장애 치료용 방법 및 화합물이 제공된다. 잠재적 작용 기작을 이해하면 치료적 이득이 더욱 강화된 또다른 유도체 및 유사체의 개발을 개선할 수 있으며, 이것 또한 본 발명의 범주에 속한다.
심혈관 장애의 발병에 영향을 주는 요소가 많음은 분명하다. 발병의 세 가지 주요 측면, 즉 혈관 산화 스트레스의 증가, 산화질소의 생체이용성의 감소 및 고콜레스테롤혈증을 동시에 치료하는 방법이 현대 의학에는 없다는 것도 명백하다. 결과적으로, 본 발명은 단일 신규 분자 항산화제 활성, 산화질소 방출 활성, 및 콜레스테롤 역수송 유도능을 제공하여 세 가지 모든 요소에 동시에 초점을 맞추는 방법론을 상술한다. 본 발명의 화합물 및 치료 방법은 산화질소의 방출시 항산화제능과 산화질소 공여가 동시에 일어난다는 사실로부터 더욱더 효능이 생기며, 따라서 특히 바람직하다. 본 발명은 유리하게는 스틸벤, 기타 폴리페놀 및 플라보노이드의 거의 모든 부분, 또는 항산화제성 및 아포지단백질 A1 전사 유도능을 갖거나 달리 콜레스테롤 역수송 증가 또는 혈청 콜레스테롤 감소 활성을 가지는 그러한 화합물의 임의의 유도체 또는 사실상 항산화제 및 혈청 콜레스테롤-감소능을 둘 다 포함하고도 본 발명에서 제공되는 활성을 갖는 임의의 화합물에도 결합되는 임의 유형의 NO-공여 부분을 제공하고 이것은 본 발명에 의해 기대되는 화합물의 형성한다.
본 발명에 의해 제공되는 화합물에는 환자에게 투여하였을 때 산화질소를 방출할 수 있는 부분이 결합된 레스베라트롤, 기타 스틸벤, 기타 폴리페놀, 및 플라보노이드의 유사체가 포함된다. 그러한 화합물에는 산화질소 공여 부분이 유기 니트레이트, 알콕시니트레이트, 디아제늄디올레이트, 티오니트록시, 등과 같은 부류의 화학 구조에 속하는 레스베라트롤, 기타 스틸벤, 기타 폴리페놀, 및 플라보노이드의 유사체가 포함되지만, 여기에 한정되지는 않는다.
본 발명을 실행하기 위하여 본 발명의 화합물이 변경되는 정확한 기작을 이해할 필요는 없다. 본원에 개시된 기작은 비-한정적이며 단지 본 발명을 더 잘 설명하기 위한 것이다. 이론에 국한되지 않고, 레스베라트롤은 그 분자 구조에 기인하여 앞서 기재한 효과를 야기한다고 여겨지고, 반응성 필수 핵심은 하나 이상의 방향족 고리 구조와 그 방향족 고리에 위치한 하나 이상의 히드록실기로 이루어진다. 천연 레스베라트롤 자체는 구체적으로 2 개의 방향족 고리로 이루어지고, 하나의 고리에는 3 및 5 위치에 2 개의 히드록실이 위치하며 나머지 고리에는 4' 위치에 1 개의 히드록실이 위치하고, 그 2 개의 방향족 고리는 2 개의 탄소 원자로 연결되고 그 사이에는 이중 결합이 있다. 이런 일반적인 부류 (상기 부류는 하나 이상의 방향족 고리 구조를 포함하며 그 고리에 하나 이상의 히드록실기가 위치하는 화합물임) 의 기타 화합물은 레스베라트롤에 대하여 나열한 것들과 동일한 능력을 보유하며 동일한 결과를 낸다고 여겨진다.
결과적으로, 2 개의 탄소 원자로 연결된 2 개의 방향족 고리를 포함하는 스틸벤, 기타 폴리페놀, 예컨대 1, 2 또는 3 개의 원자 (상기 원자는 독립적으로 질소, 탄소, 산소 및 황으로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 독립적으로 케톤 산소와 같은 측기로 치환될 수 있거나 그렇지 않음) 로 연결된 2 개 이상, 바람직하게는 2 개의 방향족 고리를 포함하는 것, 및 나린게닌, 퀘르세틴, 피세아타놀, 부테인, 피세틴, 이소리퀴리티게닌, 및 헤스페리틴과 같지만 여기에 한정되지는 않는 천연 플라보노이드와 같지만 여기에 한정되지는 않는 플라보노이드는 모두 레스베라트롤에 관하여 설명한 것들과 유사한 특성을 보유하는 화합물이다. 그 결과, 질환, 장애 또는 질병, 특히 콜레스테롤, 심혈관 질환, 고혈압, 산화적 손상, 이상지혈증, 아포지단백질 A1 또는 apoB 조절과 연관된 질환, 장애 또는 질병 (여기에 한정되지는 않음) 의 예방 또는 치료, 또는 HMG CoA 환원효소 저해, PPAR 활성 증가, ACAT 저해, ABCA-1 활성 증가, HDL 증가, 또는 LDL 또는 트리글리세리드의 감소와 같이 콜레스테롤 대사의 기타 측면들을 변형 또는 조절하는데 사용하는 경우, 임의의 이들 화합물이 레스베라트롤과 기능적으로 상호교환가능한 것으로 간주할 수 있음을 알게 되었다. 산화질소 공여 부분이 결합되지 않은 플라보노이드가 잠재적 혈청 콜레스테롤 감소 활성을 가진다는 것은, 예를 들어, US 특허 5,877,208, 6,455,577, 5,763,414, 5,792,461, 6,165,984, 및 6,133,241 에서 이미 교시하였다.
유사하게, 이런 부류의 임의의 스틸벤, 기타 폴리페놀 및 플라보노이드는, S 부위로부터, AGCCCCCGC 부분으로부터의 전사를 조절하는데 이용하거나, 백혈구 유착 또는 혈소판 응집을 저해하는데, 또는 COX-1 을 저해하는데 이용하는 경우, 레스베라트롤과 기능적으로 상호교환가능하다고 간주할 수 있다. 이는 모든 화합물이 이러한 각각의 기능 또는 능력, 또는 생체내 독성 또는 효능, 또는 생체이용성에 있어서의 활성 수준 면에서 동일함을 의미하는 것은 아니다. 이들 화합물은, 당업자에 의해 쉽게 수행되고 과도한 실험을 요하지 않는 간단한 시험을 거치는 동안, 일부는 나머지에 비하여 개선된 능력 또는 기능성을 제공하여, 나머지들 보다 치료제로서 바람직함을 입증한다.
게다가, 본 발명이 그것을 기반으로 하여 개선하고자 하는 베이스 화합물에서 발견되는 것들과 같은 페놀계 히드록실기가, 배설을 용이하게 하는 글루코로나이드화 및 술페이트화 반응하는 경향이 있음이 공지되어 있다. 페놀계 히드록실기를 또다른 화학기, 예컨대 질산 에스테르 (유기 니트레이트 또는 ONO2 라고도 칭함) 기, 알콕시 니트로옥시, 또는 역 에스테르 니트로옥시 (니트로옥시기는 니트로 옥시기라고도 칭함) 로 차단하여 이들 반응으로부터 보호하면 분자의 체내 반감기가 연장되고 배설이 연기된다.
예로서, 추측컨대 중요하고 치료적으로 활성인 히드록실기를 3 개 포함하는 레스베라트롤은, 히드록실기를 질산 에스테르 (니트레이트, 니트로옥시기, 또는 ONO2 로도 알려져 있고 종종 니트록시로도 칭하지만, NO2 와 혼동하면 안됨) 알콕시 니트로옥시기, 또는 역 에스테르 니트로옥시기로 치환하여 보호할 수 있고, 이것들은 체내에서 시간이 지나면 히드록실기로 치환되어 활성 화합물인 레스베라트롤을 재구성한다. 기간 동안 한 번에 하나씩 산화질소 공여기가 히드록실기로 치환되고, 1 또는 2 개의 산화질소 공여기를 포함하는 레스베라트롤 분자는 여전히 부분적으로는 활성이기 때문에, 레스베라트롤 활성의 체내 유효 반감기가 증가한다. 그러한 방법은 나아가 레스베라트롤의 히드록실화된 모 형태에 비하여 레스베라트롤의 니트레이트 형태의 더 적은 투약량을 사용하도록 해 주어, 환자에게 있어서 부작용을 줄여준다. 명백하게는, 그러한 방법은 또한 본 발명에 의해 기대되는 기타 스틸벤, 기타 폴리페놀, 및 플라보노이드에 있어서도 효과적인데, 이는 이들이 분자의 활성 부위의 필수 부분을 형성할 수 있는 하나 이상의 히드록실기를 포함할 것으로 예상되기 때문이다.
본 발명은 앞서 설명한 스틸벤, 폴리페놀 및 플라보노이드 이외의 화합물의 니트로옥시 유도체의 합성, 조성 및 치료 방법을 제공하고, 이때 그것으로부터 니트로옥시 유도체가 합성되는 상기 화합물은 방향족 또는 헤테로방향족 고리, 하나 이상의 히드록실기를 포함하며, 혈청 콜레스테롤 수치를 조절한다고 알려져 있다. 방향족 또는 헤테로방향족 고리, 하나 이상의 히드록실기를 포함하고, 혈청 콜레스테롤 수치를 조절한다고 알려진 한 가지 예시적 부류의 화합물은, 스타틴으로도 알려진, HMG CoA 환원효소 저해제를 포함한다. 그것의 니트로옥시 유도체가 본 발명에 제공되는 시판 스타틴에는 아토르바스타틴, 로바스타틴, 프라바스타틴, 심바스타틴, 플루바스타틴, 세리바스타틴, 및 로수바스타틴이 포함된다. 방향족 또는 헤테로방향족 고리, 하나 이상의 히드록실기를 포함하고, 혈청 콜레스테롤 수치를 조절한다고 알려진 사항을 만족시키는 두 가지 기타 화합물은 이제티마이브 및 나이아신이다. 따라서, 이제티마이브 및 나이아신의 니트로옥시 유도체도 본 발명에 제공된다.
스틸벤, 폴리페놀, 플라보노이드, 스타틴 및 이제티마이브의 산화질소 공여 유도체의 합성
유기 니트레이트 (니트로옥시, 질산 에스테르, ONO2 및 종종 "니트록시" 로도 칭하지만 NO2 와 혼동하지 않을 것) 기를, 니트로옥시기가 모 분자에 존재하는 히드록실기를 치환하는 Hakimelahi 법과 같은 공지의 방법을 사용하여 화합물에 첨가할 수 있다 (Hakimelahi et al. 1984. Helv. Chim. Acta. 67:906-915).
알콕시니트록시기를, 예를 들어, US 특허 5,861,426 에서 교시한 방법을 사용하여 화합물에 첨가할 수 있다. 예를 들어, US 특허 4,954,526, 5,039,705, 5,155,137, 5,405,919 및 6,232,336 (이들 모두는 본원에 참고로 전부 반영됨) 에서 교시한 방법을 포함하는 다양한 방법으로 디아제늄돌레이트를 합성할 수 있다.
유리하게는 본 발명에 기재되거나 제공된 바와 같은 스틸벤, 예컨대 레스베라트롤, 폴리페놀, 또는 플라보노이드, 예컨대 나린게닌, 또는 기타 화합물, 예컨대 스타틴, 또는 그의 유도체 또는 유사체 부류의 일원에 공유 또는 이온 결합을 통해 산화질소 공여 부분을 결합시킬 수 있다. 바람직하게는, 산화질소 공여 부분 또는 부분들은 하나 이상의 공유 결합에 의해 결합된다. 산화질소 공여 부분은 유리하게는 분자 중 임의의 부분에 결합될 수 있다. 한 구현예에서, 산화질소 공여 부분은 하나 이상의 히드록실기를 치환한다. 바람직한 구현예에서, 유기 니트레이트기가 히드록실기를 치환한다. 또다른 바람직한 구현예에서, 에스테르 또는 역 에스테르에 결합된 유기 니트레이트기가 히드록실기를 치환한다. 또다른 바람직한 구현예에서, 산화질소 공여 부분은 본 발명에 기재되거나 제공된 바와 같은 스틸벤, 예컨대 레스베라트롤, 폴리페놀, 또는 플라보노이드, 예컨대 나린게닌, 또는 기타 화합물, 예컨대 스타틴 부류의 임의의 일원의 히드록실기, 또는 그의 유사체 또는 유도체의 히드록실기 모두를 치환한다.
본 발명의 모든 화합물에 있어서, 플루오라이드 이온, 클로라이드 이온, 브로마이드 이온, CF3 기, CCl3 기, CBr3, 임의치환되고 임의분지형인, 탄소 원자가 1 내지 18 개인 알킬 사슬, 또는 임의치환되고 임의분지형인, 탄소 원자가 1 내지 18 개인 알콕시 사슬에 의한 히드록실기의 치환이 또한 기대되며 제공되는데, 이는 모 화합물에 대한 그러한 변형이 다반사이며, 작용 기작을 바꾸지 않고도 약물 안정성을 증가시킨다고 알려져 있고 당업자에 의해 손쉽게 수행되기 때문이다.
본 발명의 모든 화합물에 있어서, 그 화합물의 아세틸화된-유도체가 또한 기대되며 제공되는데, 이는 모 화합물에 대한 그러한 변형이 다반사이며, 작용 기작을 바꾸지 않고도 약물의 유익한 효과를 개선시킨다고 알려져 있고, 당업자에 의해 손쉽게 수행되기 때문이다. 아세틸화된 유도체에는 에스테르, 역 에스테르, 산화질소 공여 부분 (니트로옥시기를 포함하지만 여기에 한정되지는 않음) 이 결합된 에스테르, 및 산화질소 공여 부분 (니트로옥시기를 포함하지만 여기에 한정되지는 않음) 이 결합된 역 에스테르가 포함된다.
본 발명의 모든 화합물에 있어서, 그 화합물의 포스포릴화된-유도체가 또한 기대되며 제공되는데, 이는 모 화합물에 대한 그러한 변형이 다반사이며, 작용 기작을 바꾸지 않고도 약물의 유익한 효과를 개선시킨다고 알려져 있고, 당업자에 의해 손쉽게 수행되기 때문이다.
본 발명에 의해 기대되는 화합물의 글루코로나이드화된 유도체가 또한 본원에서 기대되는데, 이는 글루코로나이드화가 스틸벤, 기타 폴리페놀, 및 플라보노이드의 대사의 일부로서 체내에서 자연스럽게 일어나는 과정이기 때문이다. 본 발명의 많은 화합물은, 일단 환자에게 제공되면, 체내에서 개질되어 체내에서 글루코로나이드화된 형태로 존재한다. 따라서, 생체내 연구에 의해 측정한 바와 같이, 투여 전에 본 발명의 화합물에 글루코론산을 콘쥬게이션시켜도 그 화합물의 기능 및 치료적 효용성이 배제되지 않는다. 그 결과, 부가적 당 부분이 결합된 본 발명의 화합물은 기능적으로 모 화합물에 견줄만하다고 간주되어, 본 발명에서 제공된다. 본 발명에 의해 기대되는 임의의 스틸벤, 폴리페놀 또는 플라보노이드 유도체 화합물의 글루코로나이드화는, 예를 들어, Otake 법 (Otake et al. 2002. Drug Metab. Disp. 30(5):576-581) 에서와 같이 인간 간 마이크로솜을 사용하여 달성할 수 있다.
유사하게, 본 발명에 의해 기대되는 화합물의 술페이트화된 유도체가 또한 본원에서 기대되는데, 이는 술페이트화가 스틸벤, 기타 폴리페놀, 및 플라보노이드의 대사의 일부로서 체내에서 자연스럽게 일어나는 과정이기 때문이다. 본 발명의 일부 화합물은, 일단 환자에게 제공되면, 체내에서 개질되어 체내에서 술페이트화된 형태로 존재한다. 따라서, 생체내 연구에 의해 측정한 바와 같이, 술폰화시켜도 그 화합물의 기능 및 치료적 효용성이 배제되지 않는다. 그 결과, 술페이트화 반응을 행한 본 발명의 화합물은 기능적으로 모 화합물에 견줄만하다고 간주되어, 본 발명에서 제공된다. 본 발명에 의해 기대되는 임의의 스틸벤, 폴리페놀 또는 플라보노이드 유도체 화합물의 술페이트화는, 예를 들어, Varin 의 이온-공기 추출법 (Varin et al. 1987. Anal. Biochem. 161:176-180) 을 사용하여 달성할 수 있다.
약학적 제형에 바람직한 것들을 포함하여, 본원에 기재된 화합물의 염도 본 발명에 제공된다.
본 발명에 의해 기대되는 화합물
명확히 하기 위해서, 본 발명에서 제공되는 화합물을 예시적 화학식으로 나타내지만, 이는 본 발명의 범주를 하기에 나열하는 화합물로 한정하기 위함은 아니다. "니트로옥시" 라는 용어를 사용하는 경우, 그것이 의미하는 바는 질산 에스테르기 -ONO2 이다. "히드록실" 또는 "히드록시" 라는 용어를 사용하는 경우, 그것이 의미하는 바는 -OH 기이다. "역 에스테르" 라는 용어를 사용하는 경우, 그것이 의미하는 바는
Figure 112006031849791-PCT00011
[식 중 O-결합은 플라보노이드, 스틸벤 또는 폴리페놀계 구조의 모 화합물에 대한 것이고
R 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상이 S, N 또는 O 로 치환될 수 있다] 기이다.
"역 에스테르 니트로 옥시" 라는 용어를 사용하는 경우, 그것이 의미하는 바는
Figure 112006031849791-PCT00012
[식 중 O-결합은 플라보노이드, 스틸벤 또는 폴리페놀계 구조의 모 화합물에 대한 것이고
R 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상이 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있다] 기이다.
본 발명은 하기의 스틸벤 구조를 가지는 화합물을 제공하며:
Figure 112006031849791-PCT00013
이것은 하기의 구조들로 더욱 세분화될 수 있다:
Figure 112006031849791-PCT00014
[식 중
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 은 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R10 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00015
을 의미하고
R 은 R11 또는 R12 이고
이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있다].
본 발명은 또한 하기 구조의 화합물을 제공한다:
Figure 112006031849791-PCT00016
[식 중
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 은 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R10 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00017
을 의미하고
R 은 R11 또는 R12 이고
이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있고
X 및 Y 는 각각 독립적으로 C, N, O 일 수 있고, 단, X 또는 Y 중 어느 하나가 C 인 경우에는 다른 하나는 C 가 아니다].
본 발명은 또한 하기 구조의 화합물을 제공한다:
Figure 112006031849791-PCT00018
[식 중
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 은 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R10 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00019
을 의미하고
R 은 R11 또는 R12 이고
이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함한다].
본 발명은 또한 하기의 폴리페놀 구조를 가지는 화합물을 제공하고:
Figure 112006031849791-PCT00020
이것은 하기의 구조들로 더욱 세분화될 수 있다:
Figure 112006031849791-PCT00021
[식 중
X 는 C 또는 S 이고
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 은 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R10 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00022
을 의미하고
R 은 R11 또는 R12 이고
이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있다].
본 발명은 또한 하기의 플라보노이드 구조를 가지는 화합물을 제공하고:
Figure 112006031849791-PCT00023
이것은 하기의 구조들로 더욱 세분화될 수 있다:
Figure 112006031849791-PCT00024
Figure 112006031849791-PCT00025
본 발명은 또한 하기의 이소플라보노이드 구조를 가지는 화합물을 제공하고:
Figure 112006031849791-PCT00026
이것은 하기의 구조들로 더욱 세분화될 수 있다:
Figure 112006031849791-PCT00027
Figure 112006031849791-PCT00028
[식 중
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R15, 및 R16 은 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R13, R14, OR13, OR14, OCOR13, OCOR14, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R12 또는 R15 또는 R16 중 적어도 하나는 니트로옥시, R14, OR14, 또는 OCOR14 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00029
을 의미하고
R 은 R13 또는 R14 이고
이때 R13 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
이때 R14 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있고;
X 는 O, CR15 또는 NR15 일 수 있고;
Y 는 CO [6 원자 고리 구조를 계속 유지하는 케톤], CR16 또는 NR16 일 수 있고;
Z 는 단일 또는 이중 결합일 수 있다].
본 발명은 또한 하기의 칼콘 구조를 가지는 화합물을 제공하고:
Figure 112006031849791-PCT00030
이것의 몇몇 구조는 하기의 구조들로 나타낸다:
Figure 112006031849791-PCT00031
Figure 112006031849791-PCT00032
[식 중
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, 및 R11 은 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2, 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R13, R12, OR13, OR12, OCOR13, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R11 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00033
을 의미하고
R 은 R12 또는 R13 이고
이때 R13 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있고;
이때
X 는 단일 또는 이중 결합일 수 있고;
Y 는 단일 또는 이중 결합일 수 있고;
Z 는 CO [케톤], CR11 또는 NR11 일 수 있다].
본 발명에 제공되는 콜레스테롤 저하 화합물의 기타 NO-공여 유도체에는 다음이 포함된다:
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물을 제공한다:
Figure 112006031849791-PCT00034
[식 중
R1, R2, R3, R4 는 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R4 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00035
을 의미하고
R 은 R11 또는 R12 이고
이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있다].
본 발명은 또한 하기의 화합물을 제공한다:
Figure 112006031849791-PCT00036
[식 중
R1 은 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00037
을 의미하고
R 은 R12 이고
이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있다].
본 발명은 또한 하기의 화합물을 제공한다:
Figure 112006031849791-PCT00038
[식 중
R1 은 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00039
을 의미하고
R 은 R12 이고
이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있다].
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물을 제공한다:
Figure 112006031849791-PCT00040
[식 중
R1, R2, R3 은 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R3 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00041
을 의미하고
R 은 R11 또는 R12 이고
이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있다].
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물을 제공한다:
Figure 112006031849791-PCT00042
[식 중
R1, R2, R3 은 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R3 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00043
을 의미하고
R 은 R11 또는 R12 이고
이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있다].
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물을 제공한다:
Figure 112006031849791-PCT00044
[식 중
R1, R2, R3 은 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R3 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00045
을 의미하고
R 은 R11 또는 R12 이고
이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있다].
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물을 제공한다:
Figure 112006031849791-PCT00046
[식 중
R1, R2, R3 은 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R3 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00047
을 의미하고
R 은 R11 또는 R12 이고
이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있다].
본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물을 제공한다:
Figure 112006031849791-PCT00048
[식 중
R1, R2 는 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R2 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00049
을 의미하고
R 은 R11 또는 R12 이고
이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있다].
본 발명은 또한 하기의 화합물을 제공한다:
Figure 112006031849791-PCT00050
[식 중
R1 은 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
이때 OCOR 은
Figure 112006031849791-PCT00051
을 의미하고
R 은 R12 이고
이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상은 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있다].
스틸벤, 폴리페놀 및 플라보노이드의 NO-공여 유도체의 합성 방법
스틸벤, 예컨대 레스베라트롤, 폴리페놀, 또는 플라보노이드, 예컨대 나린게닌, 또는 기타 항산화제, 혈청 콜레스테롤 감소 또는 콜레스테롤 역수송 활성화 또는 HDL 증가 화합물의 산화질소 공여 유사체 또는 유도체의 합성을 위한 다수의 방법이 존재한다는 것이 당업자에게는 쉽사리 명백해질 것이다. 공지의 방법이 있음에도 불구하고, 이전에 그러한 화합물이 기재되거나 합성된 적은 없다. 바람직하게는, 그러한 화합물은 산화질소 공여 부분에 결합된 스틸벤, 예컨대 레스베라트롤, 폴리페놀, 또는 플라보노이드, 예컨대 나린게닌, 또는 기타 항산화제, 혈청 콜레스테롤 감소 또는 콜레스테롤 역수송 활성화 또는 HDL 증가 화합물의 유사체 또는 유도체일 것이다. 가장 바람직하게는, 그러한 화합물은 질산 에스테르, 유기 니트레이트, 또는 니트로옥시기로도 칭하는 ONO2 기가 모 호합물의 히드록실기를 치환하는, 스틸벤, 예컨대 레스베라트롤, 폴리페놀, 또는 플라보노이드, 예컨대 나린게닌, 또는 기타 항산화제, 혈청 콜레스테롤 감소 또는 콜레스테롤 역수송 활성화 또는 HDL 증가 화합물의 유사체 또는 유도체일 것이다.
본 발명에서 제공되는 화합물의 예는 천연 레스베라트롤에 있는 3 개의 히드록실기가 유기 니트레이트기로 치환된 레스베라트롤이다. 이 화합물은 3,4',5 트리니트로옥시 트랜스 스틸벤, 또는 레스베라트롤 트리 니트레이트, 또는 IUPAC 명명법을 사용하여, 1,3-BIS-니트로옥시-5-[2-(4-니트로옥시-페닐)-비닐)-벤젠이라고 명명할 것이다. 본 발명에서 제공되는 그러한 화합물의 또다른 예는 천연 나린게닌 있는 3 개의 히드록실기가 유기 니트레이트기로 치환된 나린게린이다. 이 화합물은 나린게닌 트리니트레이트, 또는 IUPAC 명명법을 사용하여, 5,7-bis-니트로옥시-2-(4-니트로옥시-페닐)-크로만-4-온이라고 명명할 것이다. 본 발명에서 제공되는 화합물의 또다른 예는 3 개의 히드록실이 치환되어 5-니트로옥시-펜탄산 4-[5,7-bis-(5-니트로옥시-펜타노일옥시)-4-옥소-크로만-2-일]-페닐 에스테르인, 나린게닌의 역 에스테르 니트로옥시 유사체이다. 본원에 명시적으로 기재한 화합물들에 한정되지 않고, 더 많은 예가 본 발명의 실시예 섹션에 제공된다.
반응에 사용할 트랜스-레스베라트롤 공급 물질은 [Goldberg et al. (1995) Am. J. Enol. Vitic. 46(2):159-165] 의 절차를 사용하여 와인으로부터 단리시켜, Bio-Stat Limited (Stockport, U.K.) 또는 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA) 로부터 상업적으로 구할 수 있었다. 대안적으로는, US 특허 6,048,903 에 교시된 바와 같이 Toppo 법에 따라서 또는 Moreno-Manas 및 Pleixats 법으로부터 Waterhouse 에 의해 변형된 Wittig 반응을 이용하여 적당히 치환된 페놀로부터 트랜스-레스베라트롤을 합성할 수 있다.
합성 반응의 성분으로서 사용할 나린게닌은 다수의 상업적 공급원으로부터 입수가 용이하거나, 대안적으로는, 감귤류 즙과 같은 천연 공급원으로부터, 과도한 실험을 요하지 않는 주지의 방법을 사용하여 단리가능한 천연 화합물이다.
투여
상기에 언급한 질병을 치료하기 위하여, 본 화합물은 그 자체로 사용될 수 있지만, 더욱 바람직하게는 허용가능한 담체 또는 부형제와 함께 약학적으로 허용가능한 제형의 형태로 존재한다. 이러한 제형에는 경구, 직장, 국소, 구강 및 비경구 (예를 들어, 피하, 근육내, 피내, 또는 정맥내) 투여에 적합한 것들이 포함되지만, 어떠한 주어진 경우라도 가장 적합한 투여 형태는 치료할 질병의 정도 및 심각성 및 사용하는 특정 화합물의 성질에 따른다.
경구 투여에 적합한 제형은 별개의 단위, 예컨대 캡슐, 교갑, 마름모꼴 정제, 또는 정제로 존재할 수 있고, 각각은 소정량의 화합물을 분말 또는 과립으로; 수성 또는 비-수성 액체 중 용액 또는 현탁액으로; 또는 수중유 또는 유중수 에멀션으로 함유한다. 나타낸 바와 같이, 그러한 제형은 활성 화합물 및 담체 또는 부형제 (하나 이상의 부속 성분을 구성할 수 있음) 를 회합하는 단계를 포함하는, 제약학의 임의의 적합한 방법으로 제조할 수 있다. 담체는 제형의 나머지 성분과 혼화성이라는 점에서 허용가능해야 하고, 수령자에게 해롭지 않아야 한다. 담체는 고체 또는 액체, 또는 둘 다일 수 있고, 바람직하게는 단위-투약량 제형, 예를 들어, 0.05% 내지 95 중량% 의 활성 화합물을 함유할 수 있는 정제로서 본 화합물과 제형화된다. 기타 화합물을 포함하여 기타 약리학적으로 활성인 물질도 존재할 수 있다. 본 발명의 제형은 본질적으로는 성분들을 부가혼합하는 것으로 이루어지는, 제약학의 임의의 주지 기술로 제조할 수 있다.
고체 조성물에 있어서, 통상적인 비독성 고체 담체에는 예를 들어, 약학적 등급의 만니톨, 락토오스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 나트륨 사카린, 탈크, 셀룰로오스, 글루코오스, 수크로오스, 마그네슘 카르보네이트 등이 포함된다. 약리학적으로 투여가능한 액체 조성물은 예를 들어, 본 원에 기재된 바와 같은 활성 화합물 및 선택적 약학적 보조제를 예를 들어, 물, 식염수, 수성 덱스트로오스, 글리세롤, 에탄올 등과 같은 부형제에 용해시키고, 분산시키는 등에 의해 제조하여, 용액 또는 현탁액을 형성할 수 있다. 일반적으로, 적합한 제형은 유리하게는 활성 화합물을 액체 또는 미세하게 분리된 고체 담체, 또는 둘 다와 균일하고 잘 섞이도록 혼합한 다음, 필요하다면, 생성물을 형상화하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 정제는 화합물의 분말 또는 과립을, 임의로 하나 이상의 부속 성분과, 압착 또는 성형하여 제조할 수 있다. 압착된 정제는 적합한 기계에서, 분말 또는 과립과 같은 자유-유동 형태로 임의로 결합제, 윤활제, 비활성 희석제 및/또는 표면 활성/분산제(들)과 혼합된 화합물을 압착하여 제조할 수 있다. 성형된 정제는 적합한 기계에서, 비활성 액체 희석제로 적셔진 분말화된 화합물을 성형하여 제조할 수 있다.
구강 (혀 아래) 투여에 적합한 제형에는 착향 베이스, 통상적으로 수크로스 및 아타시아 또는 트라가칸트 중의 화합물을 포함하는 마름모꼴 정제 및 젤라틴 및 글리세린 또는 수크로오스 및 아카시아와 같은 비활성 베이스 중의 화합물을 포함하는 패스틸 (pastilles) 이 포함된다.
비경구 투여에 적합한 본 발명의 제형은 목적하는 수령자의 혈액과 대략 등장성인, 화합물의 멸균 수성 제제를 포함한다. 이러한 제제는, 투여가 피하, 근육내, 또는 피내 주사로 이뤄질 수 있음에도 불구하고 정맥내으로 투여된다. 그러한 제제는 통상적으로 화합물을 물과 혼합하고 생성된 용액을 멸균하고 혈액과 등장성이 되도록 하여 제조할 수 있다. 본 발명에 따른 주사가능한 조성물은 일반적으로 0.1 내지 5 % w/w 의 활성 화합물을 함유할 것이다.
직장 투여에 적합한 제형은 단위-투약량 좌약으로 제시된다. 이들은 화합물을 하나 이상의 통상적인 고체 담체, 예를 들어, 코코아 버터와 혼합한 다음, 생성된 혼합물을 형상화하여 제조할 수 있다.
피부에 국소 적용하기에 적합한 제형은 바람직하게는 연고, 크림, 로션, 페이스트, 젤, 스프레이, 에어로졸, 또는 오일의 형태를 취한다. 사용될 수 있는 담체 및 부형제에는 바셀린, 라놀린, 폴리에틸렌 글리콜, 알코올, 및 그들의 둘 이상의 조합이 포함된다. 활성 화합물은 일반적으로 조성물의 0.1 내지 15 % w/w, 예를 들어, 0.5 내지 2 % 의 농도로 존재한다.
투여되는 활성 화합물의 양은 물론, 치료되는 환자, 환자의 체중, 투여 방식 및 처방하는 의사의 판단에 따라 좌우될 것이다. 본 발명의 방법에서, 투여 일정은 일반적으로 캡슐화된 화합물을 매일 또는 반-매일로 1 ㎍ 내지 1000 mg 의 감지된 투여량으로 포함할 것이다. 캡슐화는 작용 부위에 대한 접근을 용이하게 하고, 동시에 활성 성분이 투여되도록 하여, 이론상 상승 효과를 생성한다. 표준 투여법에 따라, 의사들은 최적 투여량을 쉽게 결정할 것이고, 그러한 투여를 달성하기 위해 쉽게 투여를 변경할 수 있을 것이다.
하기 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위해 주어지며, 본원에 기재 및 청구 된 발명을 구체적으로 한정하는 것으로 이해해서는 안된다. 제형의 변화 또는 실험 설계의 미미한 변화를 포함하여, 현재 공지되어 있거나 차후 개발될 등가의 화합물의 대체를 포함하는, 당업자의 재량 내의 본 발명의 변형은, 본원에 반영된 본 발명의 범주 내에 속하는 것으로 간주된다.
본원에 제공된 모든 실시예에 있어서, 달리 명시되지 않는 한, "화합물들" 또는 "화합물" 이라는 용어는 본 발명에서 제공되는 임의의 화합물을 가리킨다.
실시예 1: 1,3-BIS-니트로옥시-5-[2-(4-니트로옥시-페닐)-비닐)-벤젠의 제조.
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 5-[(E)-2-(4-히드록실-페닐)-비닐]-벤젠-1,3-디올 (유사물: 레스베라트롤; 3,4',5 트리히드록실 트랜스 스틸벤) 의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물 (1,3-BIS-니트로옥시-5-[(E)-2-(4-니트로옥시-페닐)-비닐)-벤젠) 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기가 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 2: 피세아타놀 테트라니트레이트의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 1,2-벤젠디올, 4-(2-(3,5-디히드록실페닐)에테닐)-(E)- (유사물: 피세아타놀) 의 용액에 4 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물 (피세아타놀 테트라니트레이트) 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기가 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 3: 부테인 테트라니트레이트의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 3,4,2',4'-테트라히드록실칼콘 (유사물: 부테인) 의 용액에 4 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 부테인 테트라니트레이트 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기가 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 4: 이소리퀴리티게닌 트리니트레이트의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 4,2',4'-트리히드록실칼콘 (유사물: 이소리퀴리티게닌) 의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 이소리퀴리티에닌 트리니트레이트 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기가 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 5: 피세틴 테트라니트레이트의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 3,7,3',4'-테트라히드록실플라본 (유사물: 피세틴) 의 용액에 4 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 피세틴 테트라니트레이트 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 6: 퀘르세틴 펜타니트레이트의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 3,5,7,3',4'-펜타히드록실플라본 (유사물: 퀘르세틴) 의 용액에 5 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 퀘르세틴 펜타니트레이트 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 7: N-(3,5-Bis-니트로옥시-페닐)-N'-(4-니트로옥시-페닐)-히드라진의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 5-[N'-(4-히드록실-페닐)-히드라지노]-벤젠-1,3-디올의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 N-(3,5-Bis-니트로옥시-페닐)-N'-(4-니트로옥시-페닐)-히드라진 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 8: 1,3-bis-니트로옥시-5-(4-니트로옥시-페닐디술파닐)-벤젠의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 5-(4-히드록실-페닐디술파닐)-벤젠-1,3-디올의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 1,3-bis-니트로옥시-5-(4-니트로옥시-페닐디술파닐)-벤젠 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 9: 1,3-bis-니트로옥시-5-(4-니트로옥시-페닐퍼옥시)-벤젠의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 5-(4-히드록실-페닐퍼옥시)-벤젠-1,3-디올의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 1,3-bis-니트로옥시-5-(4-니트로옥시-페닐퍼옥시)-벤젠 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 10: 1,3-bis-니트로옥시-5-(4-니트로옥시-페닐술파닐메틸)-벤젠의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 5-(4-히드록실-페닐술파닐메틸)-벤젠-1,3-디올의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 1,3-bis-니트로옥시-5-(4-니트로옥시-페닐술파닐메틸)-벤젠 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 11: N-(3,5-bis-니트로옥시-페닐-O-(4-니트로옥시-페닐)-히드록실아민의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 5-(4-히드록실-페녹시아미노)-벤젠-1,3-디올의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 N-(3,5-bis-니트로옥시-페닐-O-(4-니트로옥시-페닐)-히드록실아민 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단 리하였다.
실시예 12: 벤질-(4-니트로옥시-페닐)-아민의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 4-벤질아미노-페놀의 용액에 1 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 니트로화된 생성물인 벤질-(4-니트로옥시-페닐)-아민을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 13: 2-(살리실리덴아미노) 페놀 디니트레이트의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 2-(살리실리덴아미노) 페놀의 용액에 2 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 2-(살리실리덴아미노) 페놀 디니트레이트 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 히드록실기 중 어느 하나는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 14: (2,4-bis-니트로옥시-페닐)-(2-니트로옥시-페닐)-디아젠의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 4-(2-히드록실-페닐아조)-벤젠-1,3-디올 (유사물: 1,3-벤젠디올, 4-((2-히드록실페닐)아조)-) 의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 2,4-bis-니트로옥시-페닐)-(2-니트로옥시-페닐)-디아젠 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 15: bis-(2,2'-니트로옥시-페닐)-디아젠의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 bis-(2,2'-히드록실-페닐)-디아젠 (유사물: 1-히드록실-2-(2-히드록실페닐아조)벤젠) 의 용액에 2 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 bis-(2,2'-니트로옥시-페닐)-디아젠 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 히드록실기 중 어느 하나는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 16: N-(3-니트로옥시-페닐)-벤젠술폰아미드의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 N-(3-히드록실-페닐)-벤젠술폰아미드 (유사물: N-(3-히드록실페닐)벤젠 술폰아미드) 의 용액에 1 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 니트로화된 생성물인 N-(3-니트로옥시-페닐)-벤젠술폰아미드를 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 17: N-(4-니트로옥시-페닐)-벤젠술폰아미드의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 N-(4-히드록실-페닐)-벤젠술폰아미드 (유사물: N-(4-히드록실페닐)벤젠 술폰아미드) 의 용액에 1 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 니트로화된 생성물인 N-(4-니트로옥시-페닐)-벤젠술폰아미드를 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 18: 3,3',4,5'-테트라니트로옥시비벤질의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 3,3',4,5'-테트라히드록실비벤질의 용액에 4 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 3,3',4,5'-테트라니트로옥시비벤질 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 19: 1-벤질옥시-2-니트로옥시-벤젠의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 2-벤질옥시-페놀의 용액에 1 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 니트로화된 생성 물인 1-벤질옥시-2-니트로옥시-벤젠을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 20: 벤조산 3-니트로옥시-페닐 에스테르의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 벤조산 3-히드록실-페닐 에스테르 (유사물: 레조르시놀 모노벤조에이트) 의 용액에 1 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 니트로화된 생성물인 벤조산 3-니트로옥시-페닐 에스테르를 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 21: 2-니트로옥시-벤조산 페닐 에스테르의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 2-히드록실-벤조산 페닐 에스테르 (유사물: 페닐 살리실레이트) 의 용액에 1 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 니트로화된 생성물인 2-니트로옥시-벤조산 페닐 에스테르를 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 22: 2-니트로옥시-N-(4-니트로옥시-페닐)-벤즈아미드의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 2-히드록실-N-(4-히드록실-페닐)-벤즈아미드 (유사물: Osalmid) 의 용액에 2 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세 척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 2-니트로옥시-N-(4-니트로옥시-페닐)-벤즈아미드 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 히드록실기 중 어느 하나는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 23: 2-니트로옥시-N-(3-니트로옥시-페닐)-벤즈아미드의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 2-히드록실-N-(3-히드록실-페닐)-벤즈아미드의 용액에 2 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 2-니트로옥시-N-(3-니트로옥시-페닐)-벤즈아미드 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 히드록실기 중 어느 하나는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 24: 3,4,5-tris-니트로옥시-N-페닐-벤즈아미드의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 3,4,5-트리히드록실-N-((Z)-1-메틸렌-부트-2-에닐)-벤즈아미드 (유사물: 갈라닐리드) 의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 3,4,5-tris-니트로옥시-N-페닐-벤즈아미드 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마 토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 25: 1-(2,4-bis-니트로옥시-페닐)-2-페닐-에탄온의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 1-(2,4-히드록실-페닐)-2-페닐-에탄온 (유사물: 벤질 2,4-디히드록실페닐 케톤) 의 용액에 2 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 1-(2,4-bis-니트로옥시-페닐)-2-페닐-에탄온 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 히드록실기 중 어느 하나는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 26: 1,2-bis-니트로옥시-3-페녹시-벤젠의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 3-페녹시-벤젠-1,2-디올의 용액에 2 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 1,2-bis-니트로옥시-3-페녹시-벤젠 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 히드록실기 중 어느 하나는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 27: 1,2-bis-니트로옥시-3-(2-니트로옥시-페녹시)-벤젠의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 3-(2-히드록실-페녹시)-벤젠- 1,2-디올의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 1,2-bis-니트로옥시-3-(2-니트로옥시-페녹시)-벤젠 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 28: 1-니트로옥시-2-페녹시-벤젠의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 2-페녹시-페놀의 용액에 1 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 니트로화된 생성물인 1-니트로옥시-2-페녹시-벤젠을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 29: 5,5 술피닐 bis 레조르시놀 테트라니트레이트의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 5,5 술피닐 bis 레조르시놀의 용액에 4 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 5,5 술피닐 bis 레조르시놀 테트라니트레이트 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 30: 1,3-벤젠디올 4,4'-티오 bis 테트라니트레이트의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 1,3-벤젠디올 4,4'-티오 bis 의 용액에 4 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 1,3-벤젠디올 4,4'-티오 bis 테트라니트레이트 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 31: 페놀 2,2'-티오 bis 디니트레이트의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 페놀 2,2' 티오 bis 의 용액에 2 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 페놀 2,2' 티오 bis 디니트레이트 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 히드록실기 중 어느 하나는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 32: 1-벤질-2,4-bis-니트로옥시-벤젠의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 4-벤질-벤젠-1,3-디올 (유사물: 1,3 벤젠디올 3-페닐 메틸) 의 용액에 2 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 1-벤질-2,4-bis-니트로옥시-벤젠 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 히드록실기 중 어느 하나는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 33: 2-벤질-1,4-bis-니트로옥시-벤젠의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 2-벤질-벤젠-1,4-디올 (유사물: 1,4 벤젠디올 4-페닐 메틸) 의 용액에 2 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 2-벤질-1,4-bis-니트로옥시-벤젠 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 히드록실기 중 어느 하나는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 34: (2,3,4-tris-니트로옥시-페닐)-(3,4,5-tris-니트로옥시-페닐)-메탄온의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 (2,3,4-트리히드록시-페닐)-(3,4,5-트리히드록실-페닐)-메탄온 (유사물: Exifone) 의 용액에 6 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 (2,3,4-tris-니트로옥시-페닐)-(3,4,5-tris-니트로옥시-페닐)-메탄온 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환 됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 35: (2-니트로옥시-페닐)-페닐-아민의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 2-페닐아미노-페놀의 용액에 1 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 니트로화된 생성물인 (2-니트로옥시-페닐)-페닐-아민을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 36: 2-(3,5-bis-니트로옥시-페닐)-6-니트로옥시-4H-크로멘의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 5-(6-히드록실-4H-크로멘-2-일)-벤젠-1,3-디올의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 2-(3,5-bis-니트로옥시-페닐)-6-니트로옥시-4H-크로멘 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 37: 2-(3,5-bis-니트로옥시-페닐)-6-니트로옥시-1,4-디히드로-나프탈렌의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 5-(6-히드록실-1,4-디히드로-나프탈렌-2-일)-벤젠-1,3-디올의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가 하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 2-(3,5-bis-니트로옥시-페닐)-6-니트로옥시-1,4-디히드로-나프탈렌 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 38: 2-(3,5-bis-니트로옥시-페닐)-6-니트로옥시-1,2,3,4-테트라히드로-나프탈렌의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 5-(6-히드록실-1,2,3,4-테트라히드로-나프탈렌-2-일)-벤젠-1,3-디올의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 2-(3,5-bis-니트로옥시-페닐)-6-니트로옥시-1,2,3,4-테트라히드로-나프탈렌 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 39: 5,7-bis-니트로옥시-2-(4-니트로옥시-페닐)-크로만-4-온의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 5,7-디히드록실-2-(4-히드록실-페닐)-크로만-4-온 (유사물: 나린게닌) 의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 5,7-bis-니트로옥시-2-(4-니트로옥시-페닐)-크로만-4-온 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 40: 5,7-bis-니트로옥시-2-(4-니트로옥시-페닐)-크로멘-4-온의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 5,7-디히드록실-2-(4-히드록실-페닐)-크로멘-4-온 (유사물: 아피제닌) 의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 5,7-bis-니트로옥시-2-(4-니트로옥시-페닐)-크로멘-4-온 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 41: 5,7-bis-니트로옥시-3-(4-니트로옥시-페닐)-크로멘-4-온의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 5,7-디히드록실-3-(4-히드록실-페닐)-크로멘-4-온 (유사물: 제니스테인) 의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 5,7-bis-니트로옥시-3-(4-니트로옥시-페닐)-크로멘-4-온 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 42: 2-(3,4-bis-니트로옥시-페닐)-3,4,5,7-테트라키스-니트로옥시-크로만의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 2-(3,4-디히드록실-페닐)-크로만-3,4,5,7-테트라올 (유사물: 류코시아니돌) 의 용액에 6 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 2-(3,4-bis-니트로옥시-페닐)-3,4,5,7-테트라키스-니트로옥시-크로만 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 43: 6-히드록실-7-니트로옥시-3-(4-니트로옥시-페닐)-크로만-4-온의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 6,7-디히드록실-3-(4-히드록실-페닐)-크로만-4-온 (유사물: 6,7,4'-트리히드록실이소플라바논) 의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 6-히드록실-7-니트로옥시-3-(4-니트로옥시-페닐)-크로만-4-온 및 부분적 으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 44: Quracol B 테트라니트레이트의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 Quracol B 의 용액에 4 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 Quracol B 테트라니트레이트 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 45: 1-(4-히드록실-2,6-bis-니트로옥시-페닐)-3-(4-니트로옥시-페닐)-프로판-1-온의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 3-(4-히드록실-페닐)-1-(2,4,6-트리히드록실-페닐)-프로판-1-온 (유사물: 플로레틴) 의 용액에 4 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 1-(4-히드록실-2,6-bis-니트로옥시-페닐)-3-(4-니트로옥시-페닐)-프로판-1-온 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 46: 1-니트로옥시-4-((Z)-3-페닐-알릴)-벤젠의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 4-((Z)-3-페닐-알릴)-페놀 (유사물: 4(-3-페닐-2-프로페닐)-,(E)-페놀) 의 용액에 1 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 니트로화된 생성물인 1-니트로옥시-4-((Z)-3-페닐-알릴)-벤젠을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 47: 1-니트로옥시-4-((E)-3-페닐-프로페닐)-벤젠의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 4-((E)-3-페닐-프로페닐)-페놀의 용액에 1 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 니트로화된 생성물인 1-니트로옥시-4-((E)-3-페닐-프로페닐)-벤젠을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 48: 5,6,7-tris-니트로옥시-2-페닐-크로멘-4-온의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 5,6,7-트리히드록실-2-페닐-크로멘-4-온 (유사물: 바이칼레인) 의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 5,6,7-tris-니트로옥시-2-페닐-크로멘-4-온 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 49: 루틴 테트라니트레이트의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 2-(3,4-디히드록실-페닐)-5,7-디히드록실-3-[(2S,3R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록실-6-((2R,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-트리히드록실-6-메틸-테트라히드로-피란-2-일옥시메틸)-테트라히드로-피란-2-일옥시]-크로멘-4-온 (유사물: 루틴) 의 용액에 4 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 2-(3,4-bis-니트로옥시-페닐)-5,7-bis-니트로옥시-3-[(2S,3R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록실-6-((2R,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-트리히드록실-6-메틸-테트라히드로-피란-2-일옥시메틸)-테트라히드로-피란-2-일옥시]-크로멘-4-온 (루틴 테트라니트레이트) 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 50: 5-히드록실-2-(4-히드록실페닐)-7-(2-O-알파-L-람노피라노실-베타-D-글루코피라노실옥시)-4-크로만온 디니트레이트의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 5-히드록실-2-(4-히드록실페닐)-7-(2-O-알파-L-람노피라노실-베타-D-글루코피라노실옥시)-4-크로만온 (유사물: 나 린긴) 의 용액에 2 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 5-히드록실-2-(4-히드록실페닐)-7-(2-O-알파-L-람노피라노실-베타-D-글루코피라노실옥시)-4-크로만온 디니트레이트 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 히드록실기 중 어느 하나는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 51: (E)-(3S,5R)-7-[3-(4-플루오로-페닐)-1-이소프로필-1H-인돌-2-일]-1,3,5-tris-니트로옥시-헵트-6-엔-1-온의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의(E)-(3S,5R)-7-[3-(4-플루오로-페닐)-1-이소프로필-1H-인돌-2-일]-3,5-디히드록실-헵트-6-엔산 (유사물: 플루바스타틴; Novartis) 의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 (E)-(3S,5R)-7-[3-(4-플루오로-페닐)-1-이소프로필-1H-인돌-2-일]-1,3,5-tris-니트로옥시-헵트-6-엔-1-온 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 52: 5-(4-플루오로-페닐)-2-이소프로필-4-페닐-1-((3R,5R)-3,5,7-tris-니트로옥시-7-옥소-헵틸)-1H-피롤-1-일]-3-카르복실산 페닐아미드의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 (3R,5R)-7-[2-(4-플루오로-페닐)-5-이소프로필-3-페닐-4-페닐카르바모일-피롤-1-일]-3,5-디히드록실-헵탄산 (유사물: 아토르바스타틴; Parke-Davis) 의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 5-(4-플루오로-페닐)-2-이소프로필-4-페닐-1-((3R,5R)-3,5,7-tris-니트로옥시-7-옥소-헵틸)-1H-피롤-1-일]-3-카르복실산 페닐아미드 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 53: (E)-(3R,5S)-7-[4-(4-플루오로-페닐)-2,6-디이소프로필-5-메톡시메틸-피리딘-3-일]-1,3,5-tris-니트로옥시-헵트-6-엔-1-온의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 (E)-(3R,5S)-7-[4-(4-플루오로-페닐)-2,6-디이소프로필-5-메톡시메틸-피리딘-3-일]-3,5-디히드록실-헵트-6-엔산 (유사물: 세리바스타틴; Bayer) 의 용액에 3 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 (E)-(3R,5S)-7-[4-(4-플루오로-페닐)-2,6-디이소프로필-5-메톡시메틸-피리딘-3-일]-1,3,5-tris-니트로옥시-헵트-6-엔-1-온 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독 립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 54: (S)-2-메틸-부티르산 (1S,3S,7S,8S,8aR)-7-메틸-3-니트로옥시-8-((4R,6R)-3,5,7-tris-니트로옥시-7-옥소-헵틸)-1,2,3,7,8,8a-헥사히드로-나프탈렌-1-일 에스테르의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 (2R,4R)-3,5-디히드록실-7-[(1S,2S,6S,8S,8aR)-6-히드록실-2-메틸-8-((S)-2-메틸-부티릴옥시)-1,2,6,7,8,8a-헥사히드로-나프탈렌-1-일]-헵탄산 (유사물: 프라바스타틴; Bristol-Myers Squibb) 의 용액에 4 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 (S)-2-메틸-부티르산 (1S,3S,7S,8S,8aR)-7-메틸-3-니트로옥시-8-((4R,6R)-3,5,7-tris-니트로옥시-7-옥소-헵틸)-1,2,3,7,8,8a-헥사히드로-나프탈렌-1-일 에스테르 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 임의의 히드록실기는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 55: 2,2-디메틸-부티르산 (1S,3R,7S,8S,8aR)-3,7-디메틸-8-[2-((2R,4R)-4-니트로옥시-6-옥소-테트라히드로-피란-2-일)-에틸]-1,2,3,7,8,8a-헥사히드로-나프탈렌-1-일 에스테르의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 2,2-디메틸-부티르산 (1S,3R,7S,8S,8aR)-8-[2-((2R,4R)-4-히드록실-6-옥소-테트라히드로-피란-2-일)-에틸]-3,7-디메틸-1,2,3,7,8,8a-헥사히드로-나프탈렌-1-일 에스테르 (유사물: 심바스타틴; Merck) 의 용액에 1 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 니트로화된 생성물 2,2-디메틸-부티르산 (1S,3R,7S,8S,8aR)-3,7-디메틸-8-[2-((2R,4R)-4-니트로옥시-6-옥소-테트라히드로-피란-2-일)-에틸]-1,2,3,7,8,8a-헥사히드로-나프탈렌-1-일 에스테르를 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 56: (S)-2-메틸-부티르산 (1S,3R,7S,8S,8aR)-3,7-디메틸-8-[2-((2R,4R)-4-니트로옥시-6-옥소-테트라히드로-피란-2-일)-에틸]-1,2,3,7,8,8a-헥사히드로-나프탈렌-1-일 에스테르의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 (S)-2-메틸-부티르산 (1S,3R,7S,8S,8aR)-8-[2-((2R,4R)-4-히드록실-6-옥소-테트라히드로-피란-2-일)-에틸]-3,7-디메틸-1,2,3,7,8,8a-헥사히드로-나프탈렌-1-일 에스테르 (유사물: 로바스타틴; Merck) 의 용액에 1 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 니트로화된 생성물인 (S)-2-메틸-부티르산 (1S,3R,7S,8S,8aR)-3,7-디메틸-8-[2-((2R,4R)-4-니트로옥시-6-옥소-테트라히드로-피란-2-일)-에틸]-1,2,3,7,8,8a-헥사히드로-나프탈렌-1-일 에스테르를 실리카 겔에서 크로마토그래피 하여 정제 및 단리하였다.
실시예 57: N-[4-(4-플루오로-페닐)-6-이소프로필-5-((E)-(3R,5R)-3,5,7-tris-니트로옥시-7-옥소-헵트-1-에닐)-피리미딘-2-일]-N-메틸-메탄술폰아미드의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 (E)-(3R,5R)-7-[4-(4-플루오로-페닐)-6-이소프로필-2-(메탄술포닐-메틸-아미노)-피리미딘-5-일]-3,5-디히드록실-헵트-6-엔산 (유사물: 로수바스타틴; Astra-Zeneca) 의 용액에 1 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 니트로화된 생성물인 N-[4-(4-플루오로-페닐)-6-이소프로필-5-((E)-(3R,5R)-3,5,7-tris-니트로옥시-7-옥소-헵트-1-에닐)-피리미딘-2-일]-N-메틸-메탄술폰아미드를 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 58: 니트로옥시-피리딘-3-일-메탄온의제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 니코틴산 (유사물: 나이아신) 의 용액에 1 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 니트로화된 생성물인 니트로옥시-피리딘-3-일-메탄온을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 59: (S)-1-(4-플루오로-페닐)-3-[(S)-3-(4-플루오로-페닐)-3-니트로 옥시-프로필]-4-(4-니트로옥시-페닐)-아제티딘-2-온의 제조
25 ℃ 에서 5 ml 의 건조 THF 중 1 mmol 의 (S)-1-(4-플루오로-페닐)-3-[(S)-3-(4-플루오로-페닐)-3-히드록실-프로필]-4-(4-히드록실-페닐)-아제티딘-2-온 (유사물: 이제티마이브; Merck) 의 용액에 2 mmol 의 SOCl(NO3) 또는 SO(NO3)2 를 첨가하였다. 1 시간 후, Et2O (디에틸 에테르) 를 첨가하고 용액을 물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 완전히 니트로화된 생성물인 (S)-1-(4-플루오로-페닐)-3-[(S)-3-(4-플루오로-페닐)-3-니트로옥시-프로필]-4-(4-니트로옥시-페닐)-아제티딘-2-온 및 부분적으로 니트로화된 생성물 (이때 히드록실기 중 어느 하나는 독립적으로 ONO2 기로 치환됨) 을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
실시예 60: 본 발명의 화합물을 글루코론화하는 방법
본 실시예는 본 발명의 글루코론화 화합물을 제조하는 방법을 기재한다. 이러한 특정 실시예에서, 디니트레이트화 형태의 레스베라트롤인 실시예 1 에서 제조된 3,4'-니트로옥시-5-히드록시 레스베라트롤 (50-1000 μM) 및 10 ㎕ 의 인간 장, 25 ㎕ 의 결장 또는 10 ㎕ 의 간 마이크로솜 (각각, 200, 400, 200 ㎍ 의 단백질), 총 부피 500 ㎕ 의 50 mM Tris HCl 완충액 (pH 7.8) 중의 20 ㎕ 의 재조합 UDP-글루쿠로노실전이효소 (400 ㎍ 의 단백질) 를 10 mM MgCl2 와 37 ℃ 에서 5 분동안 예비인큐베이션하였다. 1 mM 5'-디포스포글루쿠론산을 첨가하여 반응을 개시하였다. 반응 혼합물을 37 ℃ 에서 60 분 동안 인큐베이션하였다. 샘 플을 얼음에서 냉각시키고, 오아시스 Hydrophilic-Lipophilic Balance 1 cc C18 추출 카트리지 (Waters Corp, Milford, MA) 를 사용하여 고상 추출하였다. 카트리지를 1 ml 메탄올로 세척하고, 1 ml 물로 평형화하였다. 샘플 0.5 ml 를 로딩한 후, 카트리지를 5% 메탄올로 세척하고, 2 ml 의 100% 메탄올로 용출하였다. 메탄올 용출액을 40 ℃ 에서 N2 기체 하에서 건조시키고, HPLC 분석을 위해 샘플을 250 ㎕ 의 이동상에 재용해시켰다.
실시예 61: 본 발명의 화합물을 술페이트화하는 방법
본 실시예는 본 발명의 술페이트화된 화합물을 제조하는 방법을 기재한다. 이러한 특정 실시예에서, 디니트레이트화 형태의 레스베라트롤인 실시예 1 에서 제조한 3,4'-니트로옥시-5-히드록시 레스베라트롤을, 이전에 기재한 이온-쌍 추출법 (Varin et al. 1987. Anal. Biochem. 161:176-180) 을 사용하여 술포전이효소에 의해 술페이트화하였다. 전형적인 반응 혼합물은 0.1 내지 200 μM 의 3,4'-니트로옥시-5-히드록시 레스베라트롤, 1 μM [35S]PAPS 및 2.5 ㎕ 의 모아진 (pooled) 인간 간 시토졸 (50 ㎍ 의 단백질), 2.5 ㎕ 의 인간 미숙(jejunal) 시토졸 (30 ㎍), Caco-2 시토졸 (225 ㎍) 또는 33 mM Tris-HCl 완충액 [pH 7.4] 중의 0.25 ㎕ 재조합 술포전이효소를, 총 부피 100 ㎕ 에 8 mM 디티오트레이톨 및 0.0625% 소 혈청 알부민과 함께 함유한다. 샘플을 37 ℃ 에서 30 분 동안 인큐베이션하고, 10 ㎕ 2.5% 아세트산, 20 ㎕ 의 0.1 μM 테트라부틸암모늄 수소 술페이트 및 500 ㎕ 의 에틸 아세테이트를 첨가하여 반응을 종결시켰다. 혼합 및 원심분리를 한 후, 생분해성 계수 섬광제 (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ) 를 첨가한 후 400 ㎕ 의 에틸 아세테이트 추출물의 액체 섬광 계수를 측정하였다.
실시예 62: ACAT 억제의 측정
ACAT 의 억제제로서의 본 발명의 화합물의 활성을 공지된 방법, 예를 들어, US 특허 6,165,984 에 교시되고, 하기에 요약된 방법에 의해 측정할 수 있다.
우선, 래트를 목을 베어 죽이고, 간을 제거하였다. 간 1 g 각각을 균질화 배지 (0.1 M KH2PO4, pH 7.4, 0.1 mM EDTA 및 10 mM β-메르캅토에탄올) 5 ml 에 균질화시켰다. 균질물을 4℃, 3,000×g 에서 10 분 동안 원심분리하고, 그렇게 해서 수득된 상청액을 4℃, 15,000×g 에서 15 분 동안 원심분리하여, 상청액을 수득하였다. 상청액을 초원심분리 튜브 (Beckman) 에 넣고, 4℃, 100,000×g 에서 1 시간 동안 원심분리하여, 마이크로솜의 펠렛을 수득한 다음, 이를 균질화 배지 3 ml 에 현탁시키고, 4℃, 100,000×g 에서 1 시간 동안 원심분리하였다. 그렇게 수득된 펠렛을 균질화 배지 1 ml 에 현탁시켰다. 생성 현탁액 내의 단백질의 농도를 Lowry's 방법에 의해 측정한 다음, 4 내지 8 mg/ml 로 맞추었다. 생성 현탁액을 급속 냉동 냉장고 (Biofreezer, Forma Scientific Inc.) 에 저장하였다.
아세톤 중의 1 mg/ml 콜레스테롤 용액 6.67 ㎕ 를 아세톤 중의 10% Triton WR-1339 (Sigma Co.) 6 ㎕ 과 혼합한 다음, 아세톤을 질소 기체를 사용해 증발시켜 혼합물로부터 제거하였다. 콜레스테롤 농도를 30 mg/ml 로 맞추는 양으로 증류 수를 생성 혼합물에 첨가하였다.
생성 수성 콜레스테롤 용액 10 ㎕ 에 1 M KH2PO4 (pH 7.4) 10 ㎕, 0.6 mM 소 혈청 알부민 (BSA) 5 ㎕, (단계 1) 에서 수득된 마이크로솜 용액 10 ㎕ 및 증류수 55 ㎕ 를 첨가하였다 (총 90 ㎕). 혼합물을 37℃, 수조에서 30 분 동안 예비-인큐베이션시켰다.
(1-.sup.14 C) 올레오일-CoA 용액 (0.05 μCi, 최종 농도: 10 μM) 10 ㎕ 를 예비-인큐베이션된 혼합물에 첨가하고, 생성 혼합물을 37℃, 수조에서 30 분 동안 인큐베이션시켰다. 혼합물에 이소프로판올:헵탄 혼합물 (4:1(v/v)) 500 ㎕, 헵탄 300 ㎕ 및 0.1 M KH2PO4 (pH 7.4) 200 ㎕ 를 첨가하고, 혼합물을 와동을 이용해 격렬하게 혼합시킨 다음, 실온에서 2 분 동안 놔두었다.
생성 상청액 200 ㎕ 를 섬광병에 넣고, 섬광 유체 (Lumac) 4 ml 을 거기에 첨가하였다. 혼합물을 액체 섬광 계수기로 방사능에 대해 측정하였다. ACAT 활성을 단백질 mg 당 분 당 합성된 콜레스테릴 올레에이트 피코몰 (picomole) (pmoles/min/mg 단백질) 로서 계산하였다. 본 발명의 화합물이 투여된 래트 군에서 관찰된 ACAT 활성은 대조군의 것보다 더 낮았다.
실시예 63: HMG-CoA 환원효소의 억제 측정
본 발명의 화합물에 의한 HMG-CoA 환원효소의 억제 능력을 공지된 방법, 예컨대 US 특허 5,877,208 에 교시된 방법을 사용해 측정할 수 있다. 상기 방법을 하기에 요약하였다.
래트를 목을 베어 죽이고, 간을 제거하여 즉시 얼음-냉각된 균질화 배지 (50 mM KH2PO4 (pH 7.0), 0.2M 수크로오스, 2 mM 디티오트레이톨 (DTT)) 에 넣었다. 간을 균질화 배지 (배지 2 ml/간 g) 내에서 Waring 블렌더 (Potter-Elvehjem 형 유리 균질기에 있는 모터-구동 Teflon 막자로 3 회 타격) 로 15 초 동안 균질화하였다. 균질물을 15,000×g 에서 10 분 동안 원심분리하고, 그렇게 해서 수득된 상청액을 100,000×g 에서 75 분 동안 원심분리하여, 마이크로솜의 펠렛을 수득한 다음, 이를 50 mM EDTA 를 함유하는 균질화 배지 중에 재현탁시키고, 100,000×g 에서 60 분 동안 원심분리하였다. 마이크로솜을 함유하는 상청액을 효소원으로서 사용하였다.
HMG-CoA 환원효소의 활성을 하기에 나타낸 바와 같은 Shapiro 등 (Biochemica et Biophysica Acta, 370, 369-377(1974)) 의 방법에 따라, 방사능표지된 14C HMG--CoA 를 사용해 측정하였다.
(단계 1) 에서 수득된 마이크로솜을 함유하는 상청액 중의 효소를 37℃ 에서 30 분 동안 활성화시켰다. 반응 튜브에 HMG--CoA 환원효소 측정 완충액 (0.25M KH2PO4 (pH 7.0), 8.75 mM EDTA, 25 mM DTT, 0.45M KCl 및 0.25 mg/ml BSA) 20 ㎕, 50 mM NADPH 5 ㎕, 방사능표지된 14C HMG--CoA (0.05 μCi/튜브, 최종 농도 120 μM) 5 ㎕, 및 활성화된 마이크로솜 효소 (0.03-0.04 mg) 10 ㎕ 를 첨가하고, 혼합물을 37℃ 에서 30 분 동안 인큐베이션시켰다. 혼합물에 6M HCl 10 ㎕ 를 첨가하여 반응을 종료하고, 혼합물을 37℃ 에서 15 분 동안 인큐베이션시켜, 생성물을 완 전히 락톤화시켰다. 침전물을 10,000×g 에서 1 분 동안 원심분리하여 제거하고, 상청액을 실리카 겔 60G TLC 플레이트 (Altech, Inc., Newark, U.S.A.) 에 적용한 다음, 벤젠:아세톤 (1:1, v/v) 으로 발색시켰다. 적절한 영역을 휴대용 커버 슬립으로 긁어서 제거하고, 1450 Microbeta 액체 섬광 계수기 (Wallacoy, Finland) 로 방사능을 측정하였다. 효소 활성을 단백질 mg 당 분 당 합성된 멜발론산 피코몰 (pmoles/min/mg 단백질) 로서 계산하였다. 대조군 래트는 상대적으로 높은 HMG-CoA 환원효소 활성을 나타낸 반면, 본 발명의 화합물이 투여된 래트에서 관찰된 HMG-CoA 활성은 대조군의 것보다 더 낮았다.
실시예 64: 본 발명의 화합물에 의한 PPAR 활성의 측정
PPAR감마 및 PPAR알파의 활성을 변형시키는 본 발명의 화합물의 능력을 다수의 공지된 방법, 예컨대 이전에 US 특허 6,369,098 에 교시된 하기에 기술된 방법을 사용해 측정하였다.
NF-카파B 활성화의 억제를 바탕으로 PPAR감마 및 PPAR알파의 활성을 변형시키는 화합물의 스크리닝 방법
본 발명의 화합물을 NF-카파B 의 활성을 억제하는 능력에 대해 테스트하였다. 인간 내피 세포 및 혈관 평활근 세포 (VSMC) 는 PPAR감마 및 PPAR알파 둘 다를 발현하는 것으로 알려져 있다 (Neve BP 등, Biochem Pharmacol., 60:1245-1250 (2000)). 대안적으로, PPAR알파 및/또는 PPAR감마 발현 벡터로 트랜스펙션된 정상의 건강한 공여자로부터 단리된 인간 말초혈액 T 림프구 또는 포유동물 세포주 예컨대 Jurkat T 세포주를 본 실험에 사용할 수 있다. 상기 선택된 세 포 유형 중 하나를 피토헤마글루티닌/포르볼-12-미리스테이트-13-아세테이트 (PHA/PMA), TNF-알파, 인터페론-감마 또는 NF-카파B 를 활성화시키는 기타 인자 중 하나 이상으로 자극시켰다. NF-카파B 의 활성화를 이전에 기술된 것과 유사한 전기영동 이동성 이동 측정법에 의해 측정하였다 (Rossi A 등,. Proc Natl Acad Sci USA, 94:746-50 (1997)). NF-카파B 활성제를 첨가하기 2 시간 전에, 본 발명의 화합물의 5 마이크로몰로 동일한 세포를 예비인큐베이션하여, 본 발명의 화합물이 없는 경우 관찰되는 NF-카파B 의 활성화를 억제하였다.
NFAT 활성화의 억제를 바탕으로 PPAR감마 및 PPAR알파의 활성을 변형시키는 화합물에 대한 스크리닝 방법
PPAR알파 및/또는 PPAR감마 발현 벡터로 트랜스펙션된 정상의 건강한 공여자로부터 단리된 인간 말초혈액 T 림프구 또는 포유동물 세포주 예컨대 Jurkat T 세포주를, PHA/PMA, TNF-알파, 인터페론-감마 또는 NFAT 를 활성화시키는 기타 인자 중 하나 이상으로 자극시켰다. NFAT 의 전사 활성화를 [Yang 등, J Biol Chem.; 275:4541-4 (2000)] 에 의해 기술된 것과 유사한 전기영동 이동성 이동 측정법에 의해 측정하였다. NFAT 활성제를 첨가하기 2 시간 전에, 상기 화합물의 5 마이크로몰로 동일한 세포를 예비인큐베이션하여, 상기 발명의 화합물이 없는 경우 관찰되는 NFAT 의 활성화를 억제하였다.
IL-2 생성의 억제를 바탕으로 PPAR감마 및 PPAR알파의 활성을 변형시키는 화합물에 대한 스크리닝 방법
PPAR알파 및/또는 PPAR감마 발현 벡터로 트랜스펙션된 단리된 인간 T 림프구 또는 포유동물 세포주 예컨대 Jurkat T 세포주를 PHA/PMA, TNF-알파, 인터페론-감마 또는 IL-2 유전자 발현의 유도를 활성화시키는 일부 기타 인자 중 하나 이상으로 자극시켰다. IL-2 의 생성을 [Yang 등 J Biol Chem., 275:4541-4 (2000)] 에서 기술된 것과 같은 Endogen 키트 (Wolbum) 를 사용해 세포로부터의 상청액 중의 IL-2 의 농도를 측정하여 결정하였다. IL-2 생성의 활성제를 첨가하기 12 시간 전에, 본 발명의 화합물 5 마이크로몰로 동일한 세포를 예비배양하면 상기 화합물이 없는 경우 관찰되는 IL-2 생성의 활성을 억제시켰다.
실시예 65: 본 발명의 화합물의 ABCA-1 활성화 능력의 측정 방법
본 테스트는 US 특허 6,548,548 에 교시된 바와 같이 공지된 방법을 사용해 ABCA-1 유전자 발현에 대한 본 발명의 화합물의 효능을 기술하였다. 간단하게는, pGL3 루시퍼라제 리포터 벡터 시스템 (Promega, Madison, Wis.) 을 사용해 재조합 플라스미드를 만들어, ABCA-1 프로모터의 조절 하에 리포터 유전자 발현을 측정하였다.
플라스미드 pGL3-베이직 (pGL3-Basic) (Promega, Madison, Wis.; Cat. #E1751) 을 프로모터가 없는 루시퍼라제 유전자를 함유하는 대조군 플라스미드로서 사용하였다. ABCA-1 프로모터 및 루시퍼라제 유전자를 함유하는 리포터 구축물을 ABCA-1 유전자의 5' 측면 영역 (flanking region) 으로부터의 게놈 단편 (hAPR1 5' 프로모터, SEQ ID NO: 3 의 뉴클레오티드 1080-1643 에 해당) 을 GL3-베이직 플라스미드의 SacI 부위에 클로닝하여, 플라스미드 GL-6a 를 제조하였다. 다음, 플라스미드 GL-6a 를 SpeI 및 Acc65I 로 분해하였다. SEQ ID NO: 3 의 뉴클레 오티드 1-1534 에 해당하는 ABCA-1 게놈 서열을 나타내는, 람다 서브클론으로부터 제거된 BsiWI-SpeI 단편을 상기 분해에 의해 생성된 잔존한 벡터/ABCA-I 프로모터 단편에 연결시켰다. 생성 플라스미드인 pAPR1 은 인간 ABCA-1 프로모터 서열 1.75 kb 의 전사 조절 하에 루시퍼라제 리포터 유전자를 인코딩하였다.
대조군 또는 pAPR1 플라스미드를 10% 태아 소 혈청을 함유하는 DMEM 에서 유지된 RAW 264.7 세포의 포화 배양액에 트랜스펙션시켰다. 12 웰 디쉬의 각 웰을 pGL3-베이직, pGL3-프로모터 또는 pAPR1 DNA (1 ㎍) 중의 어느 하나, 루시퍼라제 플라스미드 DNA (1 ㎍), 및 Geneporter 시약 (Gene Therapy Systems, San Diego, Calif.; Cat. #T201007) 12 ㎕ 로 5 시간 동안 트랜스펙션시켰다. 또한, pCMVβ 플라스미드 DNA (Clontech, Palo Alto, Calif., Cat. #6177-1) 0.1 ㎍ 를 트랜스펙션 효율에 대한 대조군으로서 첨가하였다. 5 시간 후, 배양 배지를 아세틸화된 LDL (100 ㎍/ml) 이 있거나 또는 없는 혈청-없는 DMEM/BSA 로 대체하고, 24 시간 동안 인큐베이션시켰다.
트랜스펙션에 이어, 각 웰에 있는 세포를 1 × 세포 파쇄 시약 (Promega, Madison, Wis., Cat. #E3971) 70 ㎕ 로 파쇄시키고, 1 회의 동결-해동 사이클을 시행하고, 파쇄물을 12,000×g 에서 5 분 동안 원심분리하여 깨끗하게 하였다. 원심 분리 후, 루시퍼라제 측정 시약 (Promega, Madison, Wis.; Cat. #E1501) 100 ㎕ 를 파쇄물 10 ㎕ 에 첨가하였다. 각 파쇄물의 루시퍼라제 활성을 발광분석기를 사용해 빛 단위로서 측정하였다. 추가로, 각 파쇄물의 β-갈락토시다제 활성을 제조업자의 지시에 따라 Galacto-빛 키트에서 적용되는 화학발광 측정 시약 (Tropix Inc., Bedford, Mass.: Cat. #BL100G) 을 사용해 측정하였다. 각 파쇄물에 대한 정상화된 루시퍼라제 활성을, 루시퍼라제 활성값을 β-갈락토시다제 값으로 나누어서 측정하고, 상대 빛 단위로서 보고하였다.
본 발명의 화합물은 상기 측정법에서 증가된 ABCA-1 유전자 발현을 나타낸다.
실시예 66: 인간 아포지단백질 A1 단백질 발현의 측정
본 연구는 인간 장 세포주인 CaCO2 세포 또는 인간 간장 세포주인 Hep G2 세포에서 내생 APO AI 유전자를 통해 발현되는 아포지단백질 A1 단백질의 수준에 있어 본 발명의 화합물의 효과를 측정한다. 본 발명의 화합물을 적절한 용매에 용해시킨 다음, 혈청이 있는 세포 배양 배지 중의 CaCO2 또는 Hep G2 세포에 제공하고, 37℃ 에서 12, 24, 36 또는 48 시간 동안 조직 배양 인큐베이터에 다시 넣어 두었다. 혈청이 없는 배지로 세포를 헹군 후, 세포를 고정시키고, 파쇄하고, 시판의 인간 아포지단백질 A1 항체 (예를 들어, 마우스 항-인간 아포지단백질 A1 항체, Intracel Resources LLC, Frederick, MD, USA) 로 아포지단백질 A1 의 존재를 검출하였다. 용매로만 처리된 세포에서의 발현 부유도와 비교해 본 발명의 화합물로 처리된 세포에 대한 아포지단백질 A1 단백질 발현의 부유도에서의 차이를 관찰하였다. 활성을 조절하는 그의 아포지단백질 발현의 검출을 위한 각각의 화합물의 최적 농도를 2-배 농도 단계에서 약 0.1 피코몰 내지 약 100 밀리몰의 범위로 각각의 화합물의 농도를 달리하면서 실험을 반복하여 결정하였다. 세포에 결합하는 항체가 증가되어 검출된 것은, 화합물이 아포지단백질 A1 발현에서의 증 가를 유도한다는 것을 나타낸다.
실시예 67: 아포A-1 프로모터 유도의 측정
CaCO2 또는 Hep G2 세포를 효과적인 농도의 본 발명의 화합물에 노출시켰다. 세포를 표준 기술을 사용해 트랜스펙션 효율을 모니터링하는, pRSV-B갈락토시다제가 있는 리포터 구축물인 pAI.474-Luc 으로 트랜스펙션시켰다. pAI.474-Luc 은 종래의 분자 생물학 기술을 사용해 만든 구축물이고, 리포터 유전자에 융합된 -474 내지 -7 래트 APO AI 프로모터 뉴클레오티드를 함유하는 것으로, 반딧불이 루시퍼라제 (Luc) (US 특허 출원 10/222,013) 이다. 본 발명의 화합물을 적절한 용매 (예를 들어, DMSO) 에 용해시킨 다음, 배양 배지에 16 시간 동안 첨가하였다. 처리 끝에, 세포를 수합하고, 루시퍼라제 활성을 시판의 루시퍼라제 측정법을 사용하는 표준 프로토콜로 측정하였다. 세포에 36 시간 동안 노출된 소비된 배지 또한 웨스턴 블롯 분석을 사용해 APO AI 단백질의 그의 함량에 대해 측정하였다. 세포 파쇄물 또는 소비된 배지 중의 증가된 루시퍼라제 활성은 아포지단백질 A1 발현 유도 활성이 있는 본 발명의 화합물을 가리킨다.
실시예 68: AGCCCCCGC 서열 원소 유도 측정
CaCO2 또는 Hep G2 세포를 효과적인 농도의 본 발명의 화합물에 노출시켰다. 우선, 세포를 트랜스펙션 효율을 모니터링하는, pRSV-B갈락토시다제와 함께 리포터 유전자 (예를 들어, 루시퍼라제, CAT, 또는 아포지단백질 A1 유전자) 에 조작하여 연결된, 프로모터 (예를 들어, 싸이미딘 키나아제 (TK) 프로모터) 에 조작하여 연결된, 강화 요소로서 작용하는 9 개의 뉴클레오티드, 5'-AGCCCCCGC-3' (Kilbourne 등, JBC, 270(12):7004-7010, 1995) 의 하나 이상의 복사본을 포함하는 리포터 구축물로 표준 기술을 사용해 트랜스펙션시켰다 (US 특허 출원 10/222,013 에 교시됨). 다음, 본 발명의 화합물을 적절한 용매 (예를 들어, DMSO) 에 용해시킨 다음, 배양 배지에 16 시간 동안 첨가하였다. 처리 끝에, 세포를 수합하고, 리포터 유전자 활성을 시판의 표준 측정법을 사용해 측정하였다. 증가된 또는 감소된 리포터 유전자 활성은, 본 발명의 화합물이 egr-1 반응 요소를 포함하는 것으로 여겨지는 9 개의 뉴클레오티드 서열 5'-AGCCCCCGC-3' 을 함유하는 프로모터로부터 전사를 조절하는 능력을 가지고 있음을 가리킨다. 따라서, 본 발명의 화합물은 egr-1 의 활성과 관련된 질병, 질환 또는 장애의 치료에 유용하다.
실시예 69: 고리 테스트를 사용한 화합물의 혈관확장 활성의 측정
표준 단리된 혈관 고리 제조물을 본 발명에 제공된 화합물의 능력을 알아보기 위해 사용하였다. New Zealand White 토끼으로부터의 흉부 대동맥 고리를 37℃ 에서 pH 7.4 완충액 중에 현탁시키고, 예비하중 10 g 을 각각에 넣었다. 평형화를 시킨 지 2 시간 후, 고리를 노르에피네프린으로 예비수축시켰다. 연속해서 증가하는 농도에서 본 발명의 화합물을 기관 배쓰에 첨가하여 유도된 이완의 g 을 측정하여, 투여량-반응 곡선을 각각의 화합물에 대해 구축하였다. 나트륨 니트로프루시드 및 글리세릴 트리니트레이트를 양성 대조군으로서 사용하였다.
Reynolds 등 (J. Pharmacol. Exp. Therap. 252, 915, 1990) 에 의해 기술된 방법에 따라 제조된 조직 내에서 에피네프린에 의해 유도되는 수축의 억제를 측정 하여, 혈관확장 활성을 또한 단리된 래트 동맥에서 측정하였다.
본 발명의 화합물을 첨가하여 유도된 증가된 이완은, 고혈압, 예를 들어, 심혈관 장애와 관련된 무수한 장애의 치료 또는 예방을 위한 본 화합물의 혈관확장 활성 및 유용성을 나타낸다.
실시예 70: NO 공여의 측정
산화질소 방출제로서의 본 발명의 화합물의 효용성을 입증하기 위하여, 본 발명의 화합물을 적당한 용매 및 포스페이트 완충액 (pH 7.4) 에 용해시키고 37 ℃ 수조에서 인큐베이션시켰다. 용액을 비활성 질소 기체로 플러쉬 (flushing) 한 후, 새로 생긴 NO 를 화학발광 검출기 속으로 쓸어내고 다음 4-7 분 동안 생긴 신호를 적분하여 NO 방출 속도를 주기적으로 측정하였다. 음성 대조군 (잠재적으로 적당한 음성 대조군은 동일 화합물의 니트레이트화 버젼이라기 보다는 예를 들어 히드록실화된 것) 에 비하여 증가된 NO 방출이 고혈압, 예를 들어, 심혈관 장애와 관련된 장애, 질환 또는 질병에 대한 치료 또는 예방으로서의 NO 방출 활성 및 유용성을 입증하였다.
실시예 71: 항산화제 효능의 측정
공개된 염료 기재 칼라 분석을 사용하여, 구리 촉매화 자연산화에 의한 저밀도 지단백질 히드록실퍼옥사이드의 정도를 측정하여 본 발명의 화합물의 항산화제 성능을 입증하였다 (FOX Assay, Zadeh, "Methods in Enzymology", 300, 58 (1999) 참고). 시험 물질 없이 LDL 및 황산구리만 포함하는 샘플을 시험 물질을 포함하는 동일 혼합물과 비교하기 위한 양성 대조군으로 이용하였다.
포스페이트 완충 식염수 pH-7.4 중 인간 저밀도 지단백질 (Sigma Chemical Company L2139) 을 황산구리와 혼합하였다. 유효량의 본 발명의 화합물과 함께 25 ℃ 또는 37 ℃ 에서 공기중에 개방하여 인큐베이션시켜 산화시키고, FOX 분석으로 히드로퍼옥사이드를 측정하기 위하여 시간 0 및 인큐베이션 3 내지 20 시간 사이에서 혼합물을 샘플화하였다. 마이크로타이터 플레이트 판독기로 샘플을 판독하였다. FOX 분석에 의해 측정한 바와 같이 감소한 히드로퍼옥사이드는 본 발명의 화합물의 항산화제 활성 및 산화와 연관되거나 항산화제의 투여에 의해 이득을 보는 장애, 질환 또는 질병의 치료 또는 예방에서의 이들의 유용성을 나타내었다. 항산화제의 처리로부터 이득을 보는 그러한 질병의 예는 심혈관 질환이다.
실시예 72: LDL 산화 분석에 의한 항산화제 활성의 측정:
다음과 같이 일부 변형시켜 Esterbauer 법 (Esterbauer, H., Striegl, G., Puhl, H., Rotheneder, M., "Continuous monitoring of in vitro oxidation of human low density lipoprotein", Free Radic. Res. Commun, 1989; 6(1): 67-75) 을 사용할 수 있다:
적당한 가용화제를 사용하여 화합물을 포스페이트 완충액 (PBS, 0.15 M NaCl - 0.05 M Na 포스페이트 완충액 - pH 7.4) 에 용해시켰다. 정확한 농도를 기록하였다 (측정할 추출물의 대략 30-60 ㎍/mL). 100 ㎕ 의 이 용액에 900 ㎕ 의 산화 완충액 (8 mL PBS 중 인간 LDL (120 ㎕ 의 5 mg/mL 용액, d=1.019-1.063 g/mL, PerImmune, Rockville, Md. 에서 구입) 및 황산구리 (20 ㎕ 의 10 mM 수성 용액) 로부터 제조) 을 첨가하였다. 100 ㎕ PBS 및 900 ㎕ 산화 완충액으로 제조한 블랭크(blank) 샘플을 또한 제조하였다. 이어서 각각의 용액을 1 cm 석영 큐벳 (cuvette) 에 옮기고, 그 큐벳을 자동온도조절장치에 놓았다 (37 ℃). HP-8452A 다이오드 어레이 분광계로 234 nm 에서 광학 밀도 (OD234) 를 측정하였고, 매 5 분마다 측정하였다. 광학 밀도 곡선의 제 1 유도체의 최대로서 산화 래그 타임 (lag time) 을 계산하였다. 아스코르브산을 함유하는 표준을 간단히 분석하였다.
실시예 73: HDL, LDL, VLDL 및 트리글리세리드 수치의 측정 및 비교
음식을 공급한 수컷 Sprague-Dawley 래트 또는 살찐 암컷 Zucker 래트에게 7 일 동안 아침에 1.5% 카르복시메틸셀룰로오스/0.2% Tween-20 (투약 운반체) 중 경구 위관영양법으로 매일 화합물 또는 투약 운반체 단독을 투여하였다. 매일 동물들의 중량을 재고, 연구하는 내내 설치류 음식 및 물을 자유롭게 공급하였다. 초기 투약 전 6-시간 금식 후, 및 7차 투약 후에도 안와 혈액 샘플을 얻었다. 7차 투약 후, 동물을 저녁에 죽이고 혈액 혈청을 총 콜레스테롤 및 트리글리세리드, 지단백질 콜레스테롤 프로파일, 통합 VLDL + LDL 콜레스테롤 (지단백질 콜레스테롤을 함유하는 apo B 또는 비-HDL 콜레스테롤이라고도 칭함), HDL 콜레스테롤, 및 VLDL + LDL 콜레스테롤에 대한 HDL 콜레스테롤의 비에 대하여 분석하였다.
실시예 74: 화합물의 투여에 반응하는, 인간에서의 HDL, LDL, VLDL 및 트리글리세리드 수치의 측정 및 비교
본 발명의 화합물을 인간 대상체에게 매일 투여하였다. 기타 식이요법 섭취를 모니터하고 개인간에 일정하게 유지하였다. 화합물 투여 착수 전인 0 일 및 3 내지 6 개월 동안 매주 1 회 혈액 샘플을 취하였다. 혈액 혈청을 총 콜레스테롤 및 트리글리세리드, 지단백질 콜레스테롤 프로파일, 통합 VLDL + LDL 콜레스테롤 (지단백질 콜레스테롤을 함유하는 apo B 또는 비-HDL 콜레스테롤이라고도 칭함), HDL 콜레스테롤, HDL2 및 HDL3 콜레스테롤 분획, 및 VLDL + LDL 콜레스테롤에 대한 HDL 콜레스테롤의 비에 대하여, 인간 혈액의 소량의 샘플로부터 이러한 변수들을 재생적으로 측정할 수 있는 표준 시판 콜레스테롤 시험, 예컨대 VAP 시험 (Atherotech Inc, Birmingham, AL) 을 이용하여 분석하였다. 대안적으로는, Kulkarni 법 (Kulkarni et al. 1997. J. Lipid Res. 38:2353-64) 또는 Gidez 법 (Gidez et al. 1982. J. Lipid Res. 23:1206-23) 에 의해 혈액으로부터 HDL2 및 HDL3 를 측정하였다. 총 HDL 을 증가시키고, HDL2 를 증가시키고, 총 LDL 을 감소시키고, VLDL 을 감소시키고, 트리글리세리드를 감소시키고, 또는 HDL/총 콜레스테롤 또는 HDL/LDL 비 (그러한 혈액 시험에서 측정한 바와 같음) 를 증가시키는 본 발명의 화합물은 콜레스테롤 또는 지질 관련 장애의 치료에 유용하다.
실시예 75: 프로테오글리칸-결합-결함 LDL 을 사용하는 아테롬성 동맥경화증 병소 크기의 측정
프로테오글리칸-결합-결함 LDL 을 발현하는 마우스를 만드는데 핵산 구성체를 사용할 수 있다. 유전자도입 마우스에게 17 주 동안 1.2% 콜레스테롤, 0.5% 담즙 염, 및 20% 지방을 포함하는 식단을 공급하였다. 이어서 마우스를 죽이고, 대동맥을 관류 고정시키고 페이싱 (en face) 절차로 분석하였고, 여기서 전체 대동맥을 평평하게 핀으로 고정하고 수단(Sudan) Ⅳ 로 염색하고, 형태계측 영상-분석 시스템 (Image-1/AT) 으로 분석하여 아테롬성 동맥경화증의 정도를 정량화하였다.
실시예 76: 살아있는 동물에서 감소한 고혈압의 측정
헤파린화 식염수를 포함하는 카테터를 통해 우측 내경동맥에 압력 변환기를 연결하였다. 평균 동맥 압력 및 심장 속도를 기록하였다. 35 mg/체중 kg 의 초기 투약량의 넴뷰탈과 필요한대로 추가로 소량 주사하여 래트를 마취시켰다. 화합물을 약학적 담체 (예컨대 Abbott's 5% 덱스트로오스 USP) 에 용해시키고 우측 대퇴부 정맥에 카테터를 통하여 래트에 주사하였다. 이용할 수 있는 양성 대조군에는 나트륨 니트로프루시드 및 NaNO2 가 포함되는 반면 NaNO3 는 음성 대조군으로서 이용할 수 있다. 결과는 본 발명에서 제공되는 화합물이 강력한 항-고혈압성이며, 혈압을 상당히 감소시킨다는 것을 나타내었다. 혈압 감소의 피크 값은 단시간, 예를 들어, 주사 후 대략 1 분에 도달하여야 하고, 그 후 혈압이 다시 상승하기 시작하여 대략 10 내지 15 분 내에 전부 회복해야 한다.
실시예 77: 콜레스테롤이 높은 토끼에서 동맥 수술 후 재협착 정도의 감소 측정
U.S. 특허 No. 5,595,974 에 기재되고 나아가 Goodman 에 의해 US 특허 6,022,901 에 기재된 바와 같이 Tomaru 의 절차를 사용하여 콜레스테롤이 높은 토끼에서 재협착을 막는 본 발명의 화합물의 효용을 평가하였다.
실시예 78: 인간에서의 재협착 예방에 있어서의 용도
트랜스-레스베라트롤 대신 본 발명의 화합물을 검사했다는 것을 제외하고는, Goodman 에 의해 US 특허 6,022,901 에 기재된 바와 같이 문헌 [Tardif 등 (1997), New England J. Med. 337(6):365-67] 의 절차를 수행할 수 있다.
실시예 79: 혈소판 항-응집 활성의 측정
문헌 [Bertele 등 (Science 220, 517, 1983)] 에 기재된 방법에 따라 트롬빈에 의해 자극된 인간 혈소판에 대해 시험관 내에서 혈소판 항-응집 활성을 평가할 수 있다.
실시예 80: 래빗에서의 ADP-유도 혈소판 응집에 대한 영향력의 측정
혈소판 응집 시험: 실리콘-코팅 주사기로 래빗의 심장에 구멍을 뚫어 래빗 혈액을 샘플링하였다. 이 혈액을 3.8% 시트르산나트륨과 9:1 로 혼합하고, 6 분간 1,000 rpm 에서 스피닝 (spinning) 하였다. 1 ml 의 혈소판 풍부 혈장을 실리콘 코팅된 2 ml 셀로 옮기고, 혼합하여, 분광광도계로 투과율 (Ti) 을 판독하였다. 0.02 ml 의 ADP (10 μM) 을 첨가하고, 교반하고, 혈소판 함유 혈장의 투과율을 분 당 1 회 판독하고, 10 분 이내에 최대 투과율 (Tm) 을 수득하였다. 혈액 샘플을 3000 rpm 에서 45 분간 스피닝하고, 투과율을 판독하였다.
실시예 81: 생체 내에서 콜라겐 유도 혈소판감소증에 대한 효과의 측정
수컷 래트 (Charles River, CRL:CD(SD), 400-450 g) 를 Na 펜타바르비탈 (65 mg/kg, Vet Labs, Limited, Inc., Lenexa, KA) 로 마취시켰다. 두번 절개하여 두 경정맥을 모두 노출시켰다. 19 g. 버터플라이를 갖는 5 cc 주사기 및 주입 펌프 (Harvard Apparatus, South Natick, Mass.) 를 사용하여, 시험 화합물 또는 비히클을 0.39 ml/분의 속도로 3 분간 좌경정맥 내로 주입하였다. 화합물/비히클을 2 분간 주입한 후, 1 ml 주사기를 사용하여 콜라겐 (60 μg/kg) (Helena Laboratories, Beaumont, TX) 을 우경정맥 내로 주사하였다. 체강을 개방시키고, 혈액을 샘플링하기 위해 대정맥을 노출시켰다. 콜라겐 주사 1 분 후, 화합물 주입을 멈추고, 0.3 mg 의 4.5% EDTA/트리스 (0.1M) (pH 7.35) 및 150 μM 인도메타신을 함유하는 3 cc 주사기를 사용하여 대정맥으로부터 혈액을 샘플링하였다. 혈액을 126× g 으로 10 분간 원심분리하여 혈소판 풍부 혈장 (PRP) 을 제조하였다. 5 μl 의 PRP 를 Coulter Counter 에서 20 ml 의 Isoton.RTM. III 중에 계수하였다. 콜라겐을 투여 받지 않은 동물에 대해 계수된 혈소판 수 및 비히클과 콜라겐을 투여받은 동물로부터 계수된 혈소판 수와 콜라겐 처리된 동물에서 계수된 혈소판 수를 비교하여 콜라겐 유도 응집의 %저해를 계산하였다. 효능의 평가는 콜라겐 유도 혈소판감소증의 저해를 기초로 한다.
실시예 82: 항-건선 유효성의 생체 내 측정
본 발명의 화합물을 포함하는 국소 제형물을 건선으로 고통받는 인간 환자의 환부에 투여하였다. 본 발명의 화합물을 함유하지 않은 대조군 제형물을 상기 환자의 상당 부위에 적용하였다. 투여 후 3 일 및 7 일에 대조군 제형물이 적용된 부위에 비한, 화합물이 적용된 부위에 있는 증식성 세포의 감소 및 염증의 개 선을 분석하여 상기 화합물의 유효성을 측정하였다.
실시예 83: 단백질 키나아제 저해의 측정
본 발명의 화합물을 적절한 완충제 내에서 방사성표지화된 ATP, 적절한 단백질 키나아제 및 적절한 기질과 혼합하였다. 인큐베이션 후, 사용된 여과지 및 신틸레이션 계수기에 스폿팅 (spotting) 함으로써 반응을 중단시켜, 기질에의 ATP 첨가의 차이를 정량하여, 대조군과 비교하였을 때의 단백질 키나아제 저해량을 측정하였다.
실시예 84: 호중구 활성화 저해의 측정
문헌 [Tudan (Tudan. 1999. Biochem. Pharmacol. 58:1869-80)] 의 프로토콜을 사용하여 본 발명의 화합물을 시험하였다. 본 시험은 결정 및 화학주성물질 (chemoattractant), 예컨대 fMLP 에 의해 야기된 호중구의 활성화를 저해하는 시험 화합물의 능력을 입증한다.
실시예 85: TPA-유도 염증 저해의 측정
문헌 [Marks (Marks 등 1976. Cancer Res. 36:2636)] 의 변형된 방법에 의해 본 발명의 화합물을 시험하여, 12-O-테트라데카노일포르볼-13-아세테이트 (TPA) 의 적용에 의해 유도된 염증에 대한 상기 화합물의 유효성을 입증하였다. 상기 화합물을 마우스의 귀에 적용한 후, TPA 를 적용하였다. 4 시간 후, 마우스 귀의 펀치 생검 (biopsy punch) 을 칭량하여, 화합물을 투여받지 않은 다른쪽 귀의 펀치 생검에 비한 부종을 측정하였다.
실시예 86: COX-1 저해의 측정
문헌 [Van der Ouderaa (Van der Ouderaa. 1982. Methods Enzymol. 86:60)] 의 방법에 의해 본 발명의 화합물을 시험하였다. 0.1 M 인산나트륨 (pH 7.4), 1.0 mM 페놀, 0.01 mM 헤민, 및 COX-1 효소 중에 시험 화합물을 함유하는 혼합물에 아라키돈산을 첨가하여 반응을 개시하였다.
실시예 87: 카라기난 유도 염증 저해의 측정
Wistar 래트에서 문헌 [Slowing (Slowing 등 1994. J. WrhnophEMxol. 43:9)] 의 방법으로 본 발명의 화합물을 시험하였다. 동물의 꼬리에 프로인드 보조제 (Freund's adjuvant) 를 피내 주사하였다. 7 일 후 시험 화합물을 투여하고, 그 후 1 일 후 식염수 용액 중의 카라기난의 현탁액을 왼쪽 뒷발바닥에 투여하였다. 물 체적변동기록법 (water plethysmography) 으로 발바닥 부피를 측정하고, 대조군과 비교하였다.
실시예 88: 화학적 암예방 (cancer chemopreventative) 활성의 측정
C3H/10T1/2 클론 8 세포 (ATCC) 를 문헌 [Mondal (Mondal 등 1976. Cancer Res. 36:2254-2260)] 의 방법에 의해 본 발명의 화합물로 처리하였다. 배양중인 세포를 24 시간 동안 3-메틸콜란트렌으로 처리한 후, 새로운 배지에서 인큐베이션한 지 5 일째에 세척하였다. 이어서, TPA 를, 시험 화합물이 있거나 없는 상기 배지에 첨가하였다. 콘플루언시 (confluency) 에 도달한 후 7 주 째에, 메탄올로 고정하고 김자 (Giemsa) 염색을 수행하였더니, 유형 II 및 III 형질전환된 병소를 나타냈으며, 이는 시험 화합물에 의한 2 단계 형질전환의 저해의 유효성을 입증하는 것으로 평가되었다.
실시예 89: 니트로옥시기(들) 로 히드록실기(들) 를 대체하기 전에 스틸벤, 폴리페놀 및 플라보노이드를 포함하는 본 발명의 화합물의 플루오라이드 유도체를 합성하는 방법.
본 발명의 화합물의 하나 이상의 히드록실기를 플루오라이드로 대체시켜 치료 약물로서의 상기 화합물의 유용성을 개선하는 것이 바람직할 수 있기 때문에, 여기서는, 문헌 [Cramer and Coffman (Cramer and Coffman, 1961 J Org. Chem. 26:4164)] 의 방법에 기초한, 방향족 고리에 부착된 히드록실기를 플루오라이드로 치환시키는 방법을 설명하는 실시예가 제공된다. 이러한 절차는, 당업자에 의한 과도한 실험 없이 임의의 본 발명의 화합물에 있어서 임의의 히드록실기를 플루오라이드로 대체시키는 데 유용할 것이다. 본 실시예에 기재된 플루오라이드 첨가 조건은 다소 열악하기 때문에, 본 발명의 화합물 중 일부에 대해서는 플루오라이드 첨가가 아닌 블록 생성을 통해 화합물을 생성함으로써 수율을 개선할 수 있다. 화합물이 히드록실기 대신 플루오라이드를 가질 경우, 및 기타 히드록실기들 대신 치환된 하나 이상의 니트로옥시기를 가질 경우 (예를 들어, 실시예 1 내지 59 에 같이), 플루오라이드 첨가 반응을 먼저 수행하고, 니트로옥시 첨가 반응을 나중에 수행해야 한다.
하기의 반응은 레스베라트롤의 플루오라이드 유도체의 합성을 설명한다.
용량이 400 mL 인 스테인레스 강으로 된 오토클레이브 (stainless steel lined autoclave) 에 250 mmole 의 5-[(E)-2-(4-히드록실-페닐)-비닐]-벤젠-1,3-디올 (유사물: 레스베라트롤) 을 충전시키고 진공으로 만들었다. 500 mmole 의 황 옥시테트라플루오라이드를 넣고, 반응 혼합물을 진탕하고, 150℃ 에서 9 시간 동안 가열하였다. 기체 생성물, 주로 술푸릴 플루오라이드를 -49℃ 내지 -44℃ 에서 증류시켰다. 잔류물을 수성 5% 수산화나트륨 및 물로 세척하였다. 증류 시, 상기 액체는 완전히 또는 부분적으로 플루오라이드 첨가된 생성물, 3-플루오로-5-[(E)-2-(4-히드록실-페닐)-비닐]-페놀, 5-[(E)-2-(4-플루오로-페닐)-비닐]-벤젠-1,3-디올, 4-[(E)-2-(3,5-디플루오로-페닐)-비닐]-페놀, 및 1,3-디플루오로-5-[(E)-2-(4-플루오로-페닐)-비닐-벤젠을 함유하는 혼합물을 함유하고 있음이 확인될 것이다. 다양한 생성물을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
레스베라트롤의 플루오라이드 유도체의 단리 후, 실시예 1 내지 59 에 기재된 바와 같이, 니트록시기를 함유하도록 상기 화합물을 추가로 개질시켰다. 상기 방법은 임의의 본 발명의 화합물에 플루오라이드를 첨가하기 위한 과도한 실험 없이 수행된다.
실시예 90: -(CO)NH- 를 포함하는 연결기에 의해 연결된 2 개의 방향족 고리를 포함하는 폴리페놀의 합성 방법
본 발명과 관련된 폴리페놀 화합물에는, 연결기에 의해 서로 연결된 두개의 방향족 고리를 포함하는 화합물이 포함되며, 상기 연결기는 하기 기를 포함한다:
Figure 112006031849791-PCT00052
하기 화학식의 폴리페놀 화합물은 용이하게 입수가능한 출발 시약으로부터 본 반응에 의해 용이하게 합성된다.
Figure 112006031849791-PCT00053
[식 중 X 는 NH 이고,
R1-10 은 각각 독립적으로 H 또는 OH 로부터 선택된다].
본 발명의 이러한 화합물은 뒤이어 실시예 1-59 에 기재된 바와 같은 니트로옥시 유도체 뿐만 아니라 포스페이트, 플루오라이드, 에스테르기, 및 기타 개질물을 포함하도록 추가로 개질될 수 있는 니트로옥시 유도체를 합성할 수 있는 중간 화합물로서 유용하다. 니트로옥시 유도체의 연속 제조에 유용한 예시적 중간 화합물인 N-(3,5-디히드록실-페닐)-4-히드록실-벤즈아미드를 하기의 방법에 의해 합성하였다.
건조 DMF (15 ml) 중 4-히드록실-벤조산 (6 mmol) 의 용액에 EDCI (9 mmol), HOBt (9 mmol) 및 트리에틸아민 (12 mmol) 을 첨가하였다. 실온에서 24 시간 동안 교반한 후, 5-아미노-벤젠-1,3-디올을 적가하고 아르곤 하에 실온에서 48 시간 동안 계속 반응시켰다. 이어서 물 (300 ml) 을 첨가하고 혼합물을 5 분 동안 교반하였다. 이어서 생성물을 에틸 아세테이트로 추출하였다 (5 × 50 ml). 합친 유기 추출물을 염수 (40 ml) 로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 하고, 용매를 제거하였다. 생성물인 N-(3,5-디히드록실-페닐)-4-히드록실-벤즈아미드를 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제하였다.
대안적으로는, 5-아미노-벤젠-1,3-디올 대신에 5-아미노메틸-벤젠-1,3-디올로 반응을 수행하여 N-(3,5-디히드록실-벤질)-4-히드록실-벤즈아미드를 합성하였다. 이 합성은 이 실시예의 일반식에서 X 가 NHCH2 인 화합물의 합성 방법을 입증한다. 입증한 바와 유사하게, 페놀의 알킬기를 개질시키면 생성된 생성물의 연결기가 동일하게 개질된다.
예를 들어, 플루오르화, 브롬화, 염소화, 또는 아세틸화 아릴기에 의한, 또는 헤테로방향족 아릴기에 의한, 또는 C1-18 알킬기에 의한, 또는 비시클릭 (bicyclic) 아릴기 등에 의한, 이 합성법에서 제공되는 아미노 시약에 연결된 R 기의 치환 (즉, 5-아미노-벤젠-1,3-디올의 벤젠 1,3-디올기의 치환) 은 당업자에게는 명백하게도 적당히 개질된 생성물을 생성한다.
이 방법으로 합성된 생성물은 유리하게는 본 발명의 NO-공여 니트로옥시 유도체의 합성에 유용한 중간 화합물로서 이용될 수 있다.
실시예 91: -C-NH- 를 포함하는 연결기로 연결된 2 개의 방향족 고리를 포함하는 폴리페놀의 합성 방법
본 발명에서 기대되는 폴리페놀 화합물은 질소 원자에 단일 결합된 탄소 원자를 포함하는 연결기로 서로 연결된 2 개의 방향족 고리를 포함하는 화합물을 포함한다. 하기 화학식의 폴리페놀 화합물은 입수가 용이한 출발 시약으로부터 이 반응에 의해 쉽게 합성된다.
Figure 112006031849791-PCT00054
[식 중 X 는 CH2 이고 Y 는 NH 이거나, X 는 NH 이고 Y 는 CH2 이고
R1-10 은 각각 독립적으로 H 또는 OH 로부터 선택된다].
본 발명의 이러한 화합물은 뒤이어 실시예 1-59 에 기재된 바와 같은 니트로옥시 유도체 뿐만 아니라 포스페이트, 플루오라이드, 에스테르기, 및 기타 개질물을 포함하도록 추가로 개질될 수 있는 니트로옥시 유도체로 합성될 수 있는 중간 화합물로서 유용하다. 니트로옥시 유도체의 제조에 유용한 예시적 중간 화합물인 5-(4-히드록실-벤질아미노)-벤젠 1,3-디올을 하기의 방법에 따라 합성하였다.
5-아미노-벤젠-1,3-디올 (1.5 mmol) 을 벤젠 (40 ml) 중 4-히드록실-벤즈알데히드 (1.5 mmol) 에 첨가하고 혼합물을 딘-스탁 (Dean-Stark) 트랩을 사용하여 24 시간 동안 아르곤 하에서 가열하여 환류시켰다. 이어서 반응 혼합물을 농축시켜 벤젠을 완전히 제거하고, 잔류물을 메탄올 (15 ml) 에 재용해시켰다. 교반하면서, 나트륨 시아노보로히드라이드 (3 mmol) 를 3 회로 나누어 30 분 동안 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 추가로 1 시간 동안 교반하였다. 이어서 반응 혼합물에 37% HCl 을 포함하는 NaCl 포화 용액 (100 ml) 을 첨가하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다 (3 × 50 ml). 합친 유기층을 염수 (10 ml) 로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고 농축시켜 미정제 생성물인 5-(4-히드록실-벤질아미노)-벤젠 1,3-디올을 얻었고, 이것을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 추가로 정제하였다.
대안적으로는, 4-히드록실-벤즈알데히드 대신에 4-히드록실-페닐-아세트알데히드를 이용하여 반응을 수행하여 5-[2-(4-히드록실-페닐)-에틸아미노]-벤젠-1,3-디올을 합성하였다. 이 합성은 이 실시예의 일반식에서 X 는 (CH2)2 이고 Y 는 NH 인 화합물의 합성 방법을 입증한다. 입증한 바와 유사하게, 페놀의 알킬기를 개질시키면 생성되는 생성물의 연결기가 동일하게 개질된다.
이 방법에 의해 합성한 생성물은 본 발명의 NO-공여 니트로옥시 유도체의 합성에 유용한 중간 화합물로서 유리하게 이용할 수 있다.
실시예 92: -CO- 연결기로 연결된 2 개의 방향족 고리를 포함하는 폴리페놀의 합성 방법
본 발명에 의해 기대되는 폴리페놀 화합물은 산소 원자에 단일 결합된 탄소 원자를 포함하는 연결기로 서로 연결된 2 개의 방향족 고리를 포함하는 화합물을 포함한다. 하기 화학식의 폴리페놀 화합물은 입수가 용이한 출발 시약으로부터 이 방법에 의해 쉽게 합성된다.
Figure 112006031849791-PCT00055
[식 중 X 는 CH2 이고 Y 는 산소이고
R1-10 은 각각 독립적으로 H 또는 OH 로부터 선택된다].
본 발명의 이러한 화합물은 뒤이어 실시예 1-59 에 기재된 바와 같은 니트로옥시 유도체 뿐만 아니라 포스페이트, 플루오라이드, 에스테르기, 및 기타 개질물을 포함하도록 추가로 개질될 수 있는 니트로옥시 유도체를 합성할 수 있는 중간 화합물로서 유용다. 니트로옥시 유도체의 제조에 유용한 예시적 중간 화합물인 5-(4-히드록실-페녹시메틸)-벤젠 1,3-디올을 하기의 방법에 의해 합성하였다.
고체 tert-부틸클로로디메틸실란 (25 mmol) 을 건조 N,N-디메틸포름아미드 (100 ml) 중 4-히드록실-벤즈알데히드 (17 mmol) 및 이미다졸 (42.5 mmol) 의 교반 용액에 아르곤 하에서 첨가하였다. 4 시간 후, 반응 혼합물을 물에 붓고 에테르로 추출하였다. 유기 추출물을 물 및 염수로 세척하고, 건조 및 농축시켜 착색 오일을 얻었다. 용리액으로서 20% 에틸 아세테이트-헥산을 사용하여 실리카 겔 패드를 통해 여과하여 실릴 에테르 4-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-벤즈알데히드를 얻었다. 메틸렌 클로라이드 (100 ml) 중 4-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-벤즈알데히드 (14 mmol) 및 m-클로로퍼벤조산 (20 mmol) 의 용액을 2 시간 동 안 환류 하에 가열한 후, 실온에서 밤새 방치하였다. 이어서 반응 혼합물을 에테르로 추출한 후 유기층을 수성 수산화나트륨 (1 M), 물 및 염수로 세척하고, 감압 하에 건조 및 증발시켜 고체를 얻었다. 이것을 실리카 겔에 사전흡착시킨 후, 실리카 겔 플러그를 통해 급속 여과시켰다. 생성된 포르메이트인 포름산 4-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-페닐 에스테르의 메탄올 (70 ml) 중 용액을 탄산칼륨 (10 mmol) 에 첨가하였다. 20 분 후, 1-브로모메틸-3,5-bis-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-벤젠 (14 mmol, 상기 포름산 4-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-페닐 에스테르에서와 본질적으로 동일한 실라닐 보호 방법으로 제조) 을 첨가하였다. 6 시간 후 반응 혼합물의 부피가 줄어들었고, 물을 첨가하고 수성 염산 (1 M) 으로 용액을 산성화시켰다. 이것을 에테르로 추출하고 에테르 추출물을 Pearson 법으로 처리하였다 (Pearson et al. 1967 J Org Chem 32:2358). 용리액으로서 2 에서 80% 까지의 에틸 아세테이트-헥산을 사용하는 농도구배 용리 건식 칼럼 크로마토그래피에 의해 1,3-bis-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-5-[4-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-페녹시메틸]-벤젠을 얻었다. 테트라히드로푸란 중 1,3-bis-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-5-[4-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-페녹시메틸]-벤젠을 테트라-n-부틸암모늄 플루오라이드 3수화물로 처리하였다. 3.5 시간 후, 물 및 에테르를 첨가하였다. 수성층을 수성 염산 (1 M) 으로 산성화시키고 에테르로 재추출하였다. 이어서 유기 추출물을 Pearson 법으로 처리하였다. 실리카 겔 플러그를 통해 여과 (20% 에틸 아세테이트-헥산) 시켜 오일을 얻었다. 오일을 아세톤-건조 얼음조에서 냉각시키면서 헥산으로 분쇄하여 결정화하였다. 메틸렌 클로라이드-헥산으로부터 재결정화하여 생성물인 5-(4-히드록실-페녹시메틸)-벤젠 1,3-디올을 얻었고, 이것을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 추가로 정제하였다.
이 방법으로 합성한 생성물은 본 발명의 NO-공여 니트로옥시 유도체의 합성에 유용한 중간 화합물로서 유리하게 이용될 수 있다.
실시예 93: -C=N- 을 포함하는 연결기로 연결된 2 개의 방향족 고리를 포함하는 폴리페놀의 합성 방법
본 발명에 의해 기대되는 폴리페놀 화합물은 질소 원자에 이중 결합된 탄소 원자를 포함하는 연결기로 연결된 2 개의 방향족 고리를 포함하는 화합물을 포함한다. 하기 화학식의 폴리페놀 화합물은 입수가 용이한 출발 시약으로부터 이 반응에 의해 쉽게 합성된다.
Figure 112006031849791-PCT00056
[식 중 X 는 CH 이고 Y 는 N 이거나, X 는 N 이고 Y 는 CH 이고
R1-10 은 각각 독립적으로 H 또는 OH 로부터 선택된다].
본 발명의 이러한 화합물은 뒤이어 실시예 1-59 에 기재된 바와 같은 니트로옥시 유도체 뿐만 아니라 포스페이트, 플루오라이드, 에스테르기, 및 기타 개질물 을 포함하도록 추가로 개질될 수 있는 니트로옥시 유도체를 합성할 수 있는 중간 화합물로서 유용하다. 니트로옥시 유도체의 제조에 유용한 예시적 중간 화합물인 5-{[(E)-4-히드록실-페닐이미노]-메틸}-벤젠 1,3-디올을 하기의 방법에 의해 합성하였다.
톨루엔 (5 ml) 중 3,5-디히드록실-벤즈알데히드 (1 mmol) 및 4-아미노-페놀 (1 mmol) 의 용액을 딘 스탁 기구에서 16 시간 동안 가열하여 환류시켰다. 진공에서 용매를 제거한 후, 생성물인 5-{[(E)-4-히드록실-페닐이미노]-메틸}-벤젠 1,3-디올을 메탄올로부터 재결정화시키고 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 추가로 정제하였다.
이 방법으로 합성한 생성물은 본 발명의 NO-공여 니트로옥시 유도체의 합성에 유용한 중간 화합물로서 유리하게 이용될 수 있다.
실시예 94: -C=C- 를 포함하는 연결기로 연결된 2 개의 방향족 고리를 포함하는 스틸벤 (및 디히드로스틸벤) 의 일반적인 합성 방법
본 발명에 의해 기대되는 스틸벤 화합물은 탄소 원자에 이중 결합된 또다른 탄소 원자를 포함하는 연결기로 서로 연결된 2 개의 방향족 고리를 포함하는 화합물을 포함한다. 하기 화학식의 스틸벤 화합물은 입수가 용이한 출발 시약으로부터 쉽게 합성된다.
Figure 112006031849791-PCT00057
[식 중 X 는 CH 이고 Y 는 CH 이고
R1-10 은 각각 독립적으로 H 또는 OH 로부터 선택된다].
한 본 발명의 이러한 화합물은 뒤이어 실시예 1-59 에 기재한 바와 같은 니트로옥시 유도체 뿐만 아니라 포스페이트, 플루오라이드, 에스테르기, 및 기타 개질물을 포함하도록 추가로 개질될 수 있는 니트로옥시 유도체를 합성할 수 있는 중간 화합물로서 유용하다. 니트로옥시 유도체의 제조에 유용한 예시적 중간 화합물인 레스베라트롤 (유사물: 5[(E)-2-(4-히드록실-페닐)-비닐]-벤젠 1,3-디올) 을 하기의 방법으로 합성하였다.
밀봉 튜브 내에서 3,5-디히드록실-벤질-브로마이드 (10 mmol) 및 트리메틸 포스파이트 (30 mmol) 의 혼합물을 오일 배쓰 내에서 8 시간 동안 180 ℃ 로 가열하였다. 혼합물을 냉각시키고, 과잉의 메틸 포스파이트를 진공에서 제거하였다. 단 (short) 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 잔류물을 정제하여 생성물인 (3,5-디히드록실-벤질)-포스폰산 디메틸 에스테르를 얻었다. 2 ml 의 CH2Cl2 중 갓 분말화한 KOH (2 mmol), 18-크라운-6 (0.1 mmol) 을 또한 포함하는 잘 교반된 현탁액 중 (3,5-디히드록실-벤질)-포스폰산 디메틸 에스테르에 방향족 알데히드 인 4-히드록실-벤즈알데히드 (1 mmol) 를 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 6 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 15 ml CH2Cl2 로 희석하고 물 (10 ml) 및 염수 (2 × 10 ml) 로 세척하였다. 유기층을 황산마그네슘으로 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 2 ml 의 Ch2Cl2 에 용해시켰다. 이 용액에 Girard's 시약 T (0.5 mmol) 및 AcOH (5 mmol) 를 첨가하고 생성된 혼합물을 2 시간 동안 실온에서 교반하였다. 불용물을 여과해내고, 여과액을 진공에서 농축시키고, 잔류물을 15 ml EtOAc 에 용해시켰다. 용액을 염수로 세척하고 (3 × 10 ml) 황산마그네슘으로 건조시키고, 용매를 진공에서 제거하여 레스베라트롤을 E 및 Z 이성질체의 혼합물로 얻었다. 헵탄 (5 ml) 중 이 혼합물의 용액에 촉매량의 아이오드를 첨가한 후, 12 시간 동안 가열하여 환류시켰다. 반응 혼합물을 20 ml 의 에테르로 희석하고 포화 수성 나트륨 비술파이트 (10 ml) 및 염수 (2 × 10 ml) 로 세척하였다. 유기층을 황산마그네슘으로 건조시키고 진공에서 농축시켜 원하는 E-레스베라트롤을 얻었다.
본 발명에 의해 기대되는 NO-공여 니트로옥시 유도체 화합물의 합성을 위한 중간 화합물인 임의의 스틸벤 화합물을 합성하는데 이 방법을 유리하게 이용할 수 있다.
연결기의 2 개의 탄소 원자 사이에 단일 결합을 가진다는 차이가 있는 해당 스틸벤의 유도체인 디히드로스틸벤을 스틸벤 모 화합물로부터 유리하게 합성할 수 있다. 그 방법은 다음과 같다.
에탄올 (120 ml) 중 스틸벤 (1 mmol) 을 40 psi 에서 차콜 (charcoal) 상 10% 팔라듐 (60 mg) 의 존재 하에 18-24 시간 동안 수소화시켰다. 셀라이트 패드를 통해 여과하여 촉매를 제거하고, 여과액으로부터 용매를 증발시켜 디히드로스틸벤 유도체를 얻었다.
본 발명에 의해 기대되는 NO-공여 니트로옥시 유도체 화합물을 합성하는데 있어서 중간 화합물인 임의의 디히드로스틸벤 화합물을 합성하는데 이 방법을 유리하게 이용할 수 있다.
실시예 95: 포스페이트-유도체 본 발명의 화합물의 합성 방법
포스페이트기는 혈청 중 화합물의 대사 및 반감기를 변경할 수 있기 때문에, 본 발명의 일부 화합물에 있어서 히드록실기 대신 포스페이트기를 치환하는 것이 유리할 수 있다. 예로서 (이 예에 한정하지는 않음), 기타 히드록실기를 플루오라이드, 에스테르 및 니트로옥시기 (즉, 니트레이트 또는 질산 에스테르기) 로 치환한 후 유리하게 발생하는, 레스베라트롤의 포스페이트 유도체의 합성을 본원에서 설명한다.
우선, 레스베라트롤의 단일 니트로옥시 치환 유도체 (예를 들어, 3-[(E)-2-(4-히드록실-페닐)-비닐]-5-니트로옥시-페놀) 를 실시예 1 에 기재한 바와 같이 합성하고, 단리하고 정제하였다. 무수 아세토니트릴 (30 ml) 중 단일 니트로옥시 치환 유도체 (4 g) 및 N,N-(디메틸아미노)피리딘 (0.2 g) 을 -10 ℃ 로 냉각시키고, 사염화탄소 (5 당량) 및 DIEA (2 당량) 를 첨가하였다. 혼합물을 -10 ℃ 에서 30 분 동안 아르곤 하에서 교반하고, 디벤질 포스페이트 (1 당량) 를 첨가하 고, 용액을 12 시간 동안 교반한 후, 0.5 M 1가 황산칼륨에 부었다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 진공에서 유기상으로부터 용매를 제거하여 착색 오일을 얻었다. 여기에 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (4:1 헥산/에틸 아세테이트) 를 행하고 포스페이트 에스테르 생성물을 착색 오일로서 회수하였다.
0 ℃ 에서 무수 디클로로메탄 (15 ml) 중 포스페이트 에스테르 생성물의 용액에 브로모트리메틸실란 (2 당량) 을 첨가하고 혼합물을 2 시간 동안 교반하였다. 물 (10 ml) 을 첨가하고, 용액을 1 시간 동안 교반하고 에틸 아세테이트로 세척하고, 수성상을 백색 고체가 되도록 동결건조시켰다. 에탄올 (30 ml) 중 상기 고체의 용액에 나트륨 메톡시드 (0.6 g) 를 첨가하고 현탁액을 12 시간 동안 교반하였다. 진공에서 용매를 제거하고, 생성된 착색 오일을 물에 용해시켰다. 용액을 에틸 아세테이트로 세척한 후, 동결건조시켜 포스페이트, 히드록실 및 니트로옥시기를 가지는 레스베라트롤 유도체의 혼합물을 포함하는 무색 고체를 고수율, 고순도로 얻었다. 원하는 유도체(들)를 실리카 겔에서의 크로마토그래피에 의해 단리 및 정제하였다.
본 발명의 임의의 화합물에 있어서 히드록실기 대신에 포스페이트를 치환하는데 이 합성 방법을 유리하게 이용할 수 있다.
실시예 96: 본 발명의 아세틸-유도체 화합물의 합성 방법
본 발명의 일부 화합물에 있어서 히드록실기 대신에 아세틸기를 치환하는 것이 유리할 수 있는데, 이는 특정 아세틸은 혈청 중 화합물의 친지질성 정도를 변경하여 대사 및 반감기를 변형시킬 수 있기 때문이다. 예를 들어, 레스베라트롤 의 하나 이상의 히드록실기를 치환하여 레스베라트롤의 아세테이트 유도체를 형성하면 혈청 중 대사 속도가 감소하고 반감기가 연장된다. 원한다면, 하나 이상의 니트레이트 (즉, ONO2, 또는 질산 에스테르) 기의 첨가 전, 및 포스페이트기의 첨가 전, 그러나 플루오르화 후에 유리하게 발생하는, 레스베라트롤의 아세테이트 유도체의 합성을 본원에 설명한다.
레스베라트롤 (0.5 밀리몰) 을 건조 디클로로메탄 (5 ml) 에 용해시켰다. 과량의 건조 피리딘에 이어 1 밀리몰의 무수 아세트산을 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 5 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고 디클로로메탄 (20 ml) 에 재용해시켰다. 유기층을 염화수소 용액 (0.1 M, 10 ml), 중탄산나트륨 (포화, 10 ml), 및 염수로 세척하였다. 유기층을 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과 및 농축시켜, 1, 2 또는 모든 3 개의 히드록실기가 아세테이트로 치환된 레스베라트롤 아세테이트 유도체의 혼합물을 고수율 및 고순도로 얻었다. 다양한 생성물을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 정제 및 단리하였다.
아세틸 할라이드 (예컨대 아세틸 클로라이드) 또는 활성화된 아세테이트 (예컨대 N-히드록실숙신이미드 에스테르) 를 사용하여 아세테이트 유도체도 합성하였다. 아세트산 무수물을 또다른 활성화된 에스테르 또는 산 할라이드로 바꾸어, 동일한 절차를 사용하여 본 발명의 화합물의 기타 에스테르를 유사하게 합성하였다. 본 발명에 의해 기대되는 임의의 화합물에 있는 임의의 히드록실기가 치환될 수 있는 그러한 에스테르의 예는 하기 화학식으로 나타낸다:
Figure 112006031849791-PCT00058
[식 중 R 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴, 및 그의 임의치환 유도체일 수 있다].
아세테이트 유도체의 합성, 단리 및 실리카 겔에서의 크로마토그래피에 의한 정제에 따라, 실시예 1 에서 59 까지에 기재되어 있는 바와 같이, 니트레이트화 합성을 유리하게 수행할 수 있다.
실시예 97: 본 발명에 의해 기대되는 모든 화합물인 니트로옥시 유도체를 합성하는 중간 화합물로서 사용되는, 본 발명의 화합물의 메톡시 및 에톡시 유도체 합성 방법
본 발명의 일부 화합물은 R 기에 메톡시 (OCH3) 또는 에톡시 (OCH2CH3) 기를 갖는 것이 유리할 수 있는데, 이는 메톡시 및 에톡시기가 친지질성이라고 알려져 있고 생체내에서 약물의 활성을 감소시키지 않으면서 반감기를 변형시킬 수 있기 때문이다. 아릴 탄화수소 (예를 들어, 벤젠, 페놀 등) 의 다수의 메톡시 및 에톡시 유도체는 공지되어 있고, 상업적 공급원으로부터 입수가 용이하거나, 주지의 방법으로 쉽게 합성할 수 있다. 스틸벤 부류, 및 기타 폴리페놀 부류의 화합물을 제조하기 위한 기초 요소는, 따라서 입수가 용이하고, 실시예 90 에서 94 까지에서와 같이 이용할 수 있다. 본 출원에서 정의한 바와 같이 폴리페놀 및 스틸벤은, 따라서 R 기가 독립적으로는 임의로 메톡시 (OCH3) 또는 에톡시 (OCH2CH3) 를 포함하도록 합성될 수 있다.
실시예 98: 본 발명의 화합물의 항균 활성 입증 방법.
US 특허 6,165,998 에서 교시한 바와 같은 방법을 사용하여 본 발명의 항균성 화합물을 입증하였다. 간단히, 약 106 개의 C. 알비칸 (C. albicans) 또는 S. 세레비시애 (S. cerevisiae) 세포를 25 ㎍/ml 의 본 발명의 항균 화합물에 45 분 동안 노출시키면 검출가능한 콜로니 형성 단위가 없어졌다.
또한, 본 발명의 항균 화합물은 전신성 칸디다증 (systemic candidiasis) 에 있어서 쥣과 모델에 효능이 있다. 본 발명의 항균 화합물은 치료한 마우스의 평균 및 중위수 생존 시간을 연장시켰다. 본 화합물을 IP 로 투여하여, 경구 투여된 양성 대조군 화합물인 플루코나졸에 의해 생긴 것과 유사한 생존 패턴을 만들었다. 본 발명의 항균 화합물 및 플루코나졸은 둘 다 치료한 동물의 신장으로부터 회수가능한 콜로니를 감소시켰다. 본 발명의 항균 화합물은 만성 전신성 칸디다 감염증이 있는 마우스에게 경구 투여된 경우에도 효능이 있다. 경구로 제공된 화합물은 생존 시간, 치유 퍼센트 및 신장 부담으로 측정한 결과 플루코나졸과 효능이 유사하였다. 본 발명의 항균 화합물은 플루코나졸에 대하여 내성인 C. 알비칸 균주에 의해 야기되는 전신성 칸디다증에도 효능이 있다.
실시예 99: 본 발명의 화합물의 항암 활성 입증 방법
하기의 암에 걸린 동물 모델을 사용하고, 본 발명의 화합물로 치료하여, US 특허 5,145,839 에서 교시한 바와 같이, 본 발명의 화합물의 항암 활성을 입증하였다.
임파종 YC8 (복수(Ascitic) 형태) 을 보유하는 O BALB C 마우스 및 Ehrlich 복수 세포 (20-22 그램, Charles River 육종) 를 보유하는 Swiss 마우스를 무작위로 10 마리의 세트로 분포시켰다. 각각의 세트는 각각 다음을 수취하였다:
세트 I 대조군. 종양 세포 및 NaCl 등장액 (0.2 ml/마우스, 2회/1일, i.p. 경로)
세트 Ⅱ: 종양 세포를 보유하며, 본 발명의 화합물을 수취한 마우스: 0.2 ml/마우스, 2회/1일, i.p. 전달
세트 Ⅲ: 종양 세포를 보유하며, 본 발명의 화합물을 수취한 마우스: 0.2 ml/마우스, 2회/1일, i.p. 경로 및 화학치료제 i.p. 투여
세트 Ⅳ: 종양 세포를 보유하며, 본 발명의 화합물을 수취한 마우스: 0.2 ml/마우스, 2회/1일, i.m. 투여
복수 종양 세포를, 15-20 일 동안 이들 세포를 보유한 마우스로부터 멸균 배지로 취하였다. 0.1 ml 의 복수 현탁액을 10 ml 의 완충액 (pH 7.2) 과 혼합하였다: (NaCl 7.2 g/l; Na2 HPO4 4.3 g/l 및 KH2 PO4 0.4 g/l). 세포수를 측정 (Malassez 세포에 의함) 하고 세포수가 거의 40.000-50.000/ml 가 되도록 세포 현탁액을 희석하였다. 0.1 ml 의 이 현탁액을 세트 I, Ⅱ 및 Ⅲ 의 마우스에게 i.p. 경로로 그리고 세트 Ⅳ 의 마우스에게 i.m. 경로로 즉시 주사하였다.
종양 세포 주사 48 시간 후: 세트 Ⅱ 의 마우스들은 본 발명의 화합물을 수취하였고 (i.p.), 37 도에서 가열하고, 밀리포어에서 여과하고, 5 일 동안 연속하 여 치료하였고; 세트 Ⅲ 의 마우스들을 본 발명의 화합물 및 한 가지 항생제로 5 일 동안 연속하여 치료하였고 (i.p.); 세트 I 의 마우스들 (대조군) 은 등장액만 5 일 동안 연속하여 수취하였고 (i.p.); 세트 Ⅳ 의 마우스들은 본 발명의 화합물을 15 일 동안 연속하여 수취하였다 (i.m.). 치료 중지 후 1 또는 2 개월 동안 마우스들을 관찰하였다. 건강 상태가 우수한 생존체들만 고려하였다. 따라서, 본 발명의 화합물은 이 시험에서 입증한 바와 같이, 항암제로서 유용하다.
실시예 100: 본 발명의 화합물의 항-당뇨 활성 입증 방법
US 특허 6,410,596 에서 교시한 방법을 사용하여 본 발명의 화합물의 저혈당 활성을 입증하였다. 이 시험으로 C57BL/ks 당뇨 (db/db) 마우스, 즉, 비-인슐린 의존성 당뇨병 (NIDDM) 의 인위적-인지 모델에서 혈장 글루코오스 수치를 감소시키는 본 발명의 화합물의 활성을 입증하였다.
실시예 101: 본 발명의 화합물의 항-바이러스 활성 입증 방법
쥣과 인플루엔자 모델에서의 로부스타플라본의 생체내 평가
특정 병원체가 없는 BALB/c 마우스에서 실험적으로 유도된 인플루엔자 바이러스 감염에 대하여 본 발명의 화합물이 효능이 있음을 입증하기 위하여 생체내 실험을 수행하였다. 이러한 실험은 로부스타플라본 대신에 치환된 본 발명의 화합물을 사용하여, 본질적으로는 US 특허 6,399,654 의 실시예 11 에서 교시한 바와 같이 수행하였다.
실시예 102: 5-니트로옥시-펜탄산 4-[5,7-bis-(5-니트로옥시-펜타노일옥시)-4-옥소-크로만-2-일]-페닐 에스테르의 제조
Figure 112006031849791-PCT00059
5- 니트로옥시 - 펜탄산의 합성
아세토니트릴 중 5-브로모-펜탄산 (180 mg, 1 mmol), 질산은 (255 mg, 1.5 mmol) 을 40 ℃ 에서 교반하였다. 반응을 박막 크로마토그래피 (TLC) 로 체크하였다. 완료 후, 디클로로메탄을 첨가하고, 혼합물을 물로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축시켰다. 미정제 생성물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다.
Figure 112006031849791-PCT00060
(2,5- 디옥소 - 피롤리딘 -1-일) 5- 니트로옥시 - 펜타노에이트의 합성
디클로로메탄 중 5-니트로옥시-펜탄산 (163 mg, 1 mmol), N-히드록실숙신이미드 (173 mg, 1.5 mmol), N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드 (EDC, 288 mg, 1.5 mmol) 의 혼합물을 N2 하에 실온에서 교반하였다. 반응을 TLC 로 체크하였다. 완료 후, 디클로로메탄을 첨가하고 혼합물을 물로 세척하였다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다.
Figure 112006031849791-PCT00061
나린게닌의 역 에스테르 니트로 옥시 유사체의 합성
아세토니트릴 중 나린게닌 (758 mg, 1 mmol), (2,5-디옥소-피롤리딘-1-일) 5-니트로옥시-펜타노에이트 (1.3 g, 5 mmol), 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (646 mg, 5 mmol) 의 혼합물을 N2 하에 실온 또는 40 ℃ 에서 교반하였다. 반응을 TLC 로 체크하였다. 완료 후, 디클로로메탄을 첨가하고 혼합물을 수성 HCl (0.1 N), 포화 수성 탄산수소나트륨, 및 물로 세척하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축시켰다. 미정제 생성물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다.
대안적으로는, 또다른 활성화된 카르복실산 유사체 (산 클로라이드, 무수물, 등) 를 사용하여 생성물을 제조하였다.
본 발명에 의해 기대되는 모든 화합물에 있어서, 이런 방법으로 역 에스테르 니트로 옥시 유도체를 합성할 수 있고, 예를 들어, 나린게닌에 제공된 합성 방법을 실시예 1 에서 59 가지의 임의의 출발 화합물에 적용할 수 있고, 그때는 결과적으로 상기 출발 화합물의 니트로 옥시 유도체보다는 상기 출발 화합물의 역 에스테르 니트로 옥시 유도체가 생긴다.
방법 1: "역 에스테르 니트로 옥시 " 화합물의 합성에 대하여 제안된 방법론
Figure 112006031849791-PCT00062
방법 2: "역 에스테르 니트로 옥시 " 화합물의 합성에 대하여 제안된 방법론
Figure 112006031849791-PCT00063
실시예 103: 5-니트로옥시-펜탄산 4-[5,7-bis-(5-니트로옥시-펜타노일옥시)-4-옥소-크로만-2-일]-페닐 에스테르의 대안적 제조
Figure 112006031849791-PCT00064
(2,5- 디옥소 - 피롤리딘 -1-일) 5- 브로모 - 펜타노에이트의 합성
디클로로메탄 중 5-브로모-펜탄산 (180 mg, 1 mmol), N-히드록실숙신이미드 (173 mg, 1.5 mmol), N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드 (EDC, 288 mg, 1.5 mmol) 의 혼합물을 N2 하에 실온에서 교반하였다. 반응을 TLC 로 체크하였다. 완료 후, 디클로로메탄을 첨가하고 혼합물을 물로 세척하였다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다.
Figure 112006031849791-PCT00065
활성화된 5- 브로모 - 펜탄산 유사체를 사용하는, 나린게닌의 트리-(5- 브로모 -펜타노에이트) 의 합성
아세토니트릴 중 나린게닌 (272 mg, 1 mmol), (2,5-디옥소-피롤리딘-1-일) 5-브로모-펜타노에이트 (1.39 g, 5 mmol), 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (646 mg, 5 mmol) 의 혼합물을 N2 하에 실온 또는 40 ℃ 에서 교반하였다. 반응을 TLC 로 체크하였다. 완료 후, 디클로로메탄을 첨가하고 혼합물을 수성 HCl (0.1 N), 포화 수성 탄산수소나트륨, 및 물로 세척하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축시켰다. 미정제 생성물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다.
대안적으로는, 또다른 활성화된 카르복실산 유사체 (산 클로라이드, 무수물, 등) 를 사용하여 생성물을 제조하였다.
Figure 112006031849791-PCT00066
나린게닌의 역 에스테르 니트로 옥시 유사체의 합성
나린게닌의 트리-(5-브로모-펜타노에이트) (758 mg, 1 mmol) 및 질산은 (850 mg, 5 mmol) 을 아세토니트릴 중 40 ℃ 에서 교반하였다. 반응을 TLC 로 체크하였다. 완료 후, 디클로로메탄을 첨가하고, 혼합물을 물로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 농축시켰다. 미정제 생성물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다.
본 발명에 의해 기대되는 모든 화합물에 있어서, 이런 방법으로 역 에스테르 니트로 옥시 유도체를 합성할 수 있고, 예를 들어, 나린게닌에 제공되는 합성 방법을 실시예 1 에서 59 까지의 임의의 출발 화합물에 적용할 수 있고, 그때는 결과적으로 상기 출발 화합물의 니트로 옥시 유도체보다는 상기 출발 화합물의 역 에스테르 니트로 옥시 유도체가 생긴다.

Claims (24)

  1. 공여가능 산화질소 성분 및 자유 라디칼 제거 항산화제 분자를 함유하고, ApoA1 의 발현을 유도하여 HDL 의 혈중 수치를 증가시키고 콜레스테롤의 혈중 수치를 감소시키는 화합물.
  2. 제 1 항에 있어서, 하기의 구조를 포함하는 플라보노이드 화합물을 함유하는 화합물:
    Figure 112006031849791-PCT00067
    [식 중
    R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R13 및 R14 는 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R10 또는 R13 또는 R14 중 적어도 하나는 니트로 옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
    이때 OCOR 은
    Figure 112006031849791-PCT00068
    을 의미하고
    R 은 R11 또는 R12 이고
    이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상이 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
    이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상이 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있고;
    X 는 O, CR13 또는 NR13 일 수 있고;
    Y 는 CO [6 원자 고리 구조를 계속 유지하는 케톤], CR14 또는 NR14 일 수 있고;
    Z 는 단일 또는 이중 결합일 수 있다].
  3. 제 2 항의 플라보노이드 화합물을 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 함유하는 약학적 조성물.
  4. 심혈관, 콜레스테롤 또는 지질 관련 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 제 2 항에 따른 플라보노이드 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 환자의 심혈관, 콜레스테롤 또는 지질 관련 장애 치료 방법.
  5. 환자에게 제 2 항에 따른 플라보노이드 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 환자에게 항산화제 활성을 제공하면서 ApoA1 의 발현을 유도하는 방법.
  6. 환자에게 제 2 항에 따른 플라보노이드 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 환자의 혈청 콜레스테롤 감소 방법.
  7. 제 1 항에 있어서, 하기의 구조를 포함하는 이소플라보노이드 화합물을 함유하는 화합물:
    Figure 112006031849791-PCT00069
    [식 중
    R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R13 및 R14 는 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R10 또는 R13 또는 R14 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
    이때 OCOR 은
    Figure 112006031849791-PCT00070
    을 의미하고
    R 은 R11 또는 R12 이고
    이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상이 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
    이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상이 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있고;
    X 는 O, CR13 또는 NR13 일 수 있고;
    Y 는 CO [6 원자 고리 구조를 계속 유지하는 케톤], CR14 또는 NR14 일 수 있고;
    Z 는 단일 또는 이중 결합일 수 있다].
  8. 제 7 항의 이소플라보노이드 화합물을 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 함유하는 약학적 조성물.
  9. 심혈관, 콜레스테롤 또는 지질 관련 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 제 7 항에 따른 이소플라보노이드 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 환자의 심혈관, 콜레스테롤 또는 지질 관련 장애 치료 방법.
  10. 환자에게 제 7 항에 따른 이소플라보노이드 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 환자에게 항산화제 활성을 제공하면서 ApoA1 의 발현을 유도하는 방법.
  11. 환자에게 제 7 항에 따른 이소플라보노이드 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 환자의 혈청 콜레스테롤 감소 방법.
  12. 제 1 항에 있어서, 하기의 구조를 포함하는 스틸벤 화합물을 함유하는 화합물:
    Figure 112006031849791-PCT00071
    [식 중
    R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10 은 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페 이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R10 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
    이때 OCOR 은
    Figure 112006031849791-PCT00072
    을 의미하고
    R 은 R11 또는 R12 이고
    이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상이 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
    이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상이 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있고
    이때 X 는 단일, 이중 또는 삼중 결합일 수 있다].
  13. 제 12 항의 스틸벤 화합물을 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 함유하는 약학적 조성물.
  14. 심혈관, 콜레스테롤 또는 지질 관련 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 제 12 항에 따른 스틸벤 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 환자의 심혈관, 콜레스테롤 또는 지질 관련 장애 치료 방법.
  15. 환자에게 제 12 항에 따른 스틸벤 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 환자에게 항산화제 활성을 제공하면서 ApoA1 의 발현을 유도하는 방법.
  16. 환자에게 제 12 항에 따른 스틸벤 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 환자의 혈청 콜레스테롤 감소 방법.
  17. 제 1 항에 있어서, 하기의 구조를 포함하는 칼콘 화합물을 함유하는 화합물:
    Figure 112006031849791-PCT00073
    [식 중
    R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R13 및 R14 는 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R10 또는 R13 또는 R14 중 적어도 하나는 니트로 옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
    이때 OCOR 은
    Figure 112006031849791-PCT00074
    을 의미하고
    R 은 R11 또는 R12 이고
    이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상이 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
    이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상이 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있고;
    X 는 단일 또는 이중 결합일 수 있고
    Y 는 단일 또는 이중 결합일 수 있고
    Z 는 CO [케톤] CR13 또는 NR13 일 수 있다].
  18. 심혈관, 콜레스테롤 또는 지질 관련 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 제 17 항에 따른 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 환자의 심혈관, 콜레스테롤 또는 지질 관련 장애 치료 방법.
  19. 환자에게 제 17 항에 따른 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 환자에게 항산화제 활성을 제공하면서 ApoA1 의 발현을 유도하는 방법.
  20. 환자에게 제 17 항에 따른 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 환자의 혈청 콜레스테롤 감소 방법.
  21. 제 1 항에 있어서, 하기의 구조를 포함하는 폴리페놀 화합물을 함유하는 화합물:
    Figure 112006031849791-PCT00075
    [식 중
    R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, 및 R10 은 각각 독립적으로 수소, 히드록실 [OH], 히드록실알킬, 아미노알킬, 브로마이드 (Br), 아이오다이드 (I), 니트로옥시 [ONO2], 메톡시 [OCH3], 에톡시 [OCH2CH3], 플루오라이드 [F], 클로라이드 [Cl], CF3, CCl3, 포스페이트, R11, R12, OR11, OR12, OCOR11, OCOR12, O-술페이트 [술페이트 콘쥬게이트], 또는 O-글루코로니데이트 [글루코론 (AKA 글루쿠론) 산 콘쥬게이트] 일 수 있고, 단, R1-R10 중 적어도 하나는 니트로옥시, R12, OR12, 또는 OCOR12 이고;
    이때 OCOR 은
    Figure 112006031849791-PCT00076
    을 의미하고
    R 은 R11 또는 R12 이고
    이때 R11 은 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상이 S, N 또는 O 로 치환될 수 있고,
    이때 R12 는 C1 -18, 아릴, 헤테로아릴 또는 그의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 임의치환된 임의분지형이고, C 원자 중 하나 이상이 S, N 또는 O 로 치환되고, 하나 이상의 ONO2 를 포함할 수 있고;
    X 는 C, S, (CO), SO, AKA 케톤, (SO2)N, (CO)C, (CO)N, (CO)O, C-N [단일 결합], C=N [이중 결합], C-O, N-O, N-N [단일 결합], 또는 N=N [이중 결합] 일 수 있다].
  22. 심혈관, 콜레스테롤 또는 지질 관련 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 제 21 항에 따른 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 환자의 심혈관, 콜레스테롤 또는 지질 관련 장애 치료 방법.
  23. 환자에게 제 21 항에 따른 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 환자에게 항산화제 활성을 제공하면서 ApoA1 의 발현을 유도하는 방법.
  24. 환자에게 제 21 항에 따른 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 환자의 혈청 콜레스테롤 감소 방법.
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