JP3333777B2 - アシルｃｏａ−コレステロール−ｏ−アシルトランスフェラーゼ抑制剤、動脈壁上でのマクロファージ−脂質複合体蓄積の抑制剤および肝疾患予防または治療剤としての柑橘類果皮抽出物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の分野 本発明は、哺乳動物におけるアシルＣｏＡ−コレステロ
ール−o−アシルトランスフェラーゼ活性の抑制、動脈
内皮上でのマクロファージ−脂質複合体蓄積の抑制、お
よび肝疾患予防または治療のための柑橘類果皮抽出物の
使用に関する。

【０００２】発明の背景 近来、動脈硬化および高コレステロール血症などのよう
な冠状動脈性心臓血管疾患が主要な死亡原因となってい
る。血中コレステロールの濃度が高いと、血管壁に脂肪
とともにマクロファージおよび泡沫細胞が沈着してプラ
ークを形成して動脈硬化症に至ると報告されている(Ros
s R., Nature, 362, 801-809(1993))。血中コレステロ
ールの量を減らす方法の一つは、コレステロールおよび
脂肪の摂取を減らす食餌療法である。他の方法は、コレ
ステロールの吸収に係わる酵素を抑制することによって
コレステロールの吸収を阻止することによる。

【０００３】アシルＣｏＡ−コレステロール−o−アシ
ルトランスフェラーゼ(Acyl CoA-cholesterol-o-acyltr
ansferase、以下、ＡＣＡＴという)は、血中コレステロ
ールのエステル化を促進する。泡沫細胞は、ＡＣＡＴの
作用によって形成され、低密度リポタンパク質によって
運搬されるコレステロールエステルを多量含有してい
る。動脈血管壁上での泡沫細胞の形成は、ＡＣＡＴ活性
によって促進されるため、ＡＣＡＴ抑制剤は動脈硬化予
防剤になり得る。また、ＬＤＬ-コレステロールの血中
濃度はＡＣＡＴ活性を抑制することによって低下すると
報告されている(Witiak, D. T. and D. R. Feller(ed
s), Antilipidemic Drugs : Medicinal, Chemical and
Biochemical Aspects, Elsevier, pp159-195(1991))。

【０００４】一方、多量の脂肪を含有する食品またはア
ルコールの過度な摂取、あるいはＢ型またはＣ型肝炎ウ
イルスの感染などによって肝機能が低下し、続いて、肝
炎、肝硬変または肝癌などに進行する。特に、脂肪含有
食品および過度なアルコールの摂取は脂肪肝の原因にな
り、多量の脂質が肝組織に蓄積し、血清ＧＯＴ(glutama
te-oxaloacetate transaminase)、ＧＰＴ(glutamate-py
ruvate transaminase)およびγ−ＧＴＰ(γ−glutamyl
transpeptidase)などが増加することになる(T. Banciu,
et al., “The Hepatic Component in Alcoholic Enc
ephalopathy" , Med. Interne., 20, 69-71(1982);およ
びA. Par, et al., “Serum Gamma-Glutamyl Transpep
tidase : Its Clinical Significance" ,Acta. Med. Ac
ad. Sci. Hung., 33, 309-319(1976))。

【０００５】ＡＣＡＴ活性を抑制する薬物を開発するた
めに多くの努力が払われ、その結果、種々の微生物の培
養液に由来する数々の化合物が報告された。このような
化合物の例としては、アスペルギルス・フミガツス培養
液から分離したピリピロペネン(S. Omura et al., J. A
ntibiotics, 46, 1168-1169(1993))およびシュドモナス
種から分離したアカテリン(S. Nagamura et al., J. An
tibiotics, 45, 1216-1221(1992))がある。

【０００６】さらに、高コレステロール血症の治療剤と
してロバスタチン(商標) (Lovastatin)商標))と呼ばれ
るＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素抑制剤が米国のメルク社によ
って開発され市販されている。しかし、この薬物は、肝
臓のクレアチンキナーゼを増加させるという深刻な副作
用を誘発することが知られている。

【０００７】したがって、毒性のない、ＡＣＡＴの抑制
並びに動脈内皮上でのマクロファージ−脂質複合体蓄積
を抑制する阻害剤および肝疾患予防または治療剤の開発
が求められている。

【０００８】本発明者らは、新規かつ活性の高いＡＣＡ
Ｔ抑制剤、マクロファージ−脂質複合体蓄積抑制剤およ
び肝疾患治療剤を天然物質中から発見することに鋭意努
力し、その結果、柑橘類果皮抽出物が強力なＡＣＡＴ抑
制活性、マクロファージ−脂質複合体蓄積抑制活性およ
び肝疾患予防または治療活性を有することを知った。

【０００９】これまで、柑橘類の果皮は廃棄されるか、
動物の飼料または有機肥料製造用としてのみ用いられて
きた。乾燥した柑橘類の果皮は、ペクチン、ヘミセルロ
ースおよびセルロースのようなアルコール不溶性高分子
５０〜６０ｗｔ％；アルコール可溶性固形物３０〜５０
ｗｔ％(このうち、８０ｗｔ％はグルコース、フルクト
ースおよびスクロースからなる)；および少量または微
量のバイオフラボノイド(bioflavonoids)、ビタミン(vi
tamins)、リモノイド(limonoids)、フェノール系化合物
およびオイルを含む。特に、表１に記載された種々のバ
イオフラボノイドが柑橘類の果皮に存在する(Horowitz,
R. M. et al., J. Org. Chem., 25, 2183-2187(196
0))。バイオフラボノイドのうち、ヘスペリジン(hesper
idin)はオレンジ、レモンまたは柑橘(tangerine)の主要
成分であり、ナリンジン(naringin)はグレープフルーツ
(grapefruit)の主要成分であり、シトロン(citron)には
ナリンジンとヘスペリジンがほとんど同量入っている。

【００１０】

【表１】

【００１１】柑橘類の果皮から分離したバイオフラボノ
イドが抗酸化、抗癌、抗ウイルスおよび血圧降下活性を
有するということが報告された(Saija. A. et al., Fre
e Radical Biol. Med., 19, 481-486(1985); Matsubar
a, Y. et al., Japan organic Synthesis Chem. Associ
ation Journal, 52, 318-327(1994, Mar.); Galati, E.
M. et al., Farmaco., 51(3), 219-221(1996, Mar.);
Felicia, V., et al., Nutr. Cancer, 26, 167-181(199
6); EP 0352147 A2(1990.1.24); and Kaul, T. N. et a
l., J. Med. Virol., 15, 71-75(1985))。また、柑橘類
の果皮に存在するリモノイドは抗癌活性を有すると報告
された(Lam, L. K. T., et al., Inhibition of Chemic
ally Induced Carcinogenesis by Citrus Limonoids, I
n food Phytochemicals for Cancer Prevention. Vol.
I, ACS Symposium series No. 546, M. T. Huang, O. O
sawa, C. T. Ho, Ro. Rosen(eds), 1993)。

【００１２】しかし、現在まで柑橘類果皮抽出物がＡＣ
ＡＴを抑制する活性、マクロファージ−脂質複合体蓄積
を防止する活性および肝疾患予防または治療活性を有す
るという報告はされていない。

【００１３】発明の要約 したがって、本発明の主な目的は、哺乳動物のＡＣＡＴ
活性を抑制するための柑橘類果皮抽出物の使用を提供す
ることである。

【００１４】本発明の他の目的は、哺乳動物の動脈内皮
壁上にマクロファージ−脂質複合体が蓄積することを抑
制するための柑橘類果皮抽出物の新規用途を提供するこ
とである。

【００１５】本発明のまた他の目的は、哺乳動物におけ
る肝疾患を予防または治療するための柑橘類果皮抽出物
の新規使用を提供することである。本発明の前記および
他の目的と特徴は添付の図面とともに下記本発明の説明
から明らかになる。

【００１６】発明の詳細な説明 本発明の一実施態様によって、本発明は哺乳動物のアシ
ルＣｏＡ−コレステロール−o−アシルトランスフェラ
ーゼ(ＡＣＡＴ)の活性を抑制するための柑橘類果皮抽出
物の使用を提供する。

【００１７】本発明の他の実施態様によって、本発明は
哺乳動物の動脈内皮壁上にマクロファージ−脂質複合体
が蓄積することを抑制するための柑橘類果皮抽出物の使
用を提供する。

【００１８】本発明のまた他の実施態様によって、本発
明は哺乳動物の肝疾患を予防または治療するための柑橘
類果皮抽出物の使用を提供する。

【００１９】柑橘類は、柑橘、オレンジ、レモン、グレ
ープフルーツ、シトロンなどである。化学農薬を用いな
いで有機農法によって生産された柑橘類の果皮を用いる
ことが好ましい。

【００２０】本発明の柑橘類果皮抽出物は、水、または
アルコール、Ｃa(ＯＨ)₂およびＮaＯＨのような適当な
溶媒を用いて公知の方法に従って製造し得る。たとえ
ば、１ｋｇの乾燥した柑橘類の果皮に２０〜９５％エタ
ノール３〜３０Lを加え、混合物を２５〜８０℃範囲の
温度で１〜１２時間放置する。得られた抽出物を濾過
し、濾液を、たとえば、真空によって濃縮して濃縮され
た果皮抽出物を得る。一方、乾燥した柑橘類果皮１ｋｇ
に０.１〜２％Ｃａ(ＯＨ)₂およびＮａＯＨ５〜３０lを
加え、混合物を２５〜６０℃の温度で１〜５時間放置す
る。得られた抽出物を濾過し、濾液に１Ｎ ＨＣｌ溶液
を加えて混合液のｐＨを４.０〜７.０の範囲に調節す
る。得られた濾液を１〜１０℃範囲の温度で１０〜４８
時間放置する。生成された沈澱物を回収し、乾燥して柑
橘類果皮抽出物を得る。

【００２１】また、本発明では、柑橘類果皮抽出物の代
りに柑橘類果皮粉末を用い得る。柑橘類果皮粉末は、柑
橘類果物から汁を絞ってから残った柑橘類果皮を含む固
形物を、通常の方法に従って凍結乾燥または乾燥した
後、これを５０〜２５０μｍ範囲の粒径に粉末化して製
造することができる。

【００２２】柑橘類果皮抽出物は、０.１ｍｇ／ｋｇ／
日以上の投与量でＡＣＡＴ活性抑制、動脈内皮壁上での
マクロファージ−脂質複合体蓄積の抑制、および肝疾患
予防または治療効果を有し、投与量が増加するにつれて
当該効果が増加する。

【００２３】さらに、このような有効性にもかかわら
ず、柑橘類果皮抽出物はマウスを用いた試験において毒
性や有糸分裂(mitogenicity)をほとんど示さない。さら
に詳しくは、柑橘類果皮抽出物は５０ｋｇ体重のヒトに
対して経口投与量５０〜１００ｇ／ｋｇに該当する１,
０００ｍｇ／ｋｇの量をマウスに経口投与しても毒性を
示さない。また、柑橘類果皮抽出物は肝機能に対する副
作用を惹起しない。

【００２４】また、本発明は、活性成分として柑橘類果
皮抽出物および薬剤学的に許容可能な賦形剤、担体また
は希釈剤を含む、ＡＣＡＴ活性抑制、動脈壁でのマクロ
ファージ−脂質複合体蓄積抑制、および肝疾患予防また
は治療のための薬剤学的組成物を提供する。なお、(1)
哺乳動物の動脈内皮上でのマクロファージ−脂質複合体
の蓄積を抑制するための柑橘類果皮抽出物または柑橘類
果皮粉末を含む組成物および(1′)哺乳動物の肝疾患を
予防または治療するための柑橘類果皮抽出物または柑橘
類果皮粉末を含む組成物の実施態様には、(2)上記哺乳
動物がヒトである(1)または(1′)の組成物；(3)上記柑
橘類が、柑橘、オレンジ、レモンまたはグレープフルー
ツである、(1)、(1′)または(2)の組成物；(4)上記柑橘
類果皮抽出物が、１ｋｇの乾燥した柑橘類果皮に２０〜
９５％エタノール３〜３０lを加え、混合物を２５〜８
０℃範囲の温度で１〜１２時間放置し、得られた抽出物
を濾過し、濾液を濃縮して柑橘類果皮抽出物を得る段階
を含む方法によって製造される、(1)または(1′)〜(3)
のいずれかの組成物；(5)上記柑橘類果皮抽出物が、１
ｋｇの乾燥した柑橘類果皮に０.１〜２％Ｃａ(ＯＨ)₂ま
たはＮａＯＨ５〜３０Lを加え、混合物を２５〜６０℃
の温度で１〜５時間放置し、得られた抽出物を濾過し、
濾液をｐＨ４.０〜７.０範囲に調節し、得られた濾液を
１〜１０℃範囲の温度で１０〜４８時間放置し、生成し
た沈澱物を回収および乾燥して柑橘類果皮抽出物を得る
段階を含む方法によって製造される、(1)または(1′)〜
(3)のいずれかの組成物：(6)上記柑橘類果皮粉末が、柑
橘類果物から汁を絞ってから残った固形物を凍結乾燥ま
たは乾燥し、乾燥した物質を５０〜２５０μｍ範囲の粒
径に粉末化する段階を含む方法によって製造される、
(1)または(1′)〜(3)のいずれかの組成物；(7)哺乳動物
のための医薬、または機能性食品に用いられる、(1)ま
たは(1′)〜(6)のいずれか１項記載の組成物；(8)上記
医薬に用いられる柑橘類果皮抽出物の量が１〜１,００
０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲である、(7)の組成物；(9)
上記医薬に用いられる柑橘類果皮粉末の量が１〜１,０
００ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲である、(7)の組成物；
(10)上記機能性食品が、肉類、チョコレート、スナック
類、菓子類、ピザ、穀物の粉末から作られる食品類、チ
ューインガム類、乳製品、スープ、肉汁、ペースト、ケ
チャップ、ソース、ビタミン複合体または健康食品類か
ら選ばれる食品である、(7)の組成物；(11)上記穀物の
粉末から作られる食品類が、パン、ケーキ、クラッカ
ー、クッキー、ビスケットまたはヌードルである、(10)
の組成物；(12)上記食品に用いられる柑橘類果皮抽出物
の量が０.５〜１０重量％の範囲である、(10)または(1
1)の組成物；(13)上記食品に用いられる柑橘類果皮粉末
の量が１〜３０重量％の範囲である、(10)または(11)の
組成物；(14)上記機能性食品が、乳製品、野菜ジュー
ス、果物ジュース、茶、アルコール飲料類または炭酸飲
料から選ばれる飲料である、(7)の組成物；(15)上記飲
料に用いられる柑橘類果皮抽出物の量が、飲料１,００
０ｍL当り１０〜１００ｇの範囲である、(14)の組成物
が含まれる。

【００２５】医薬剤形は、通常の方法に従って製造する
ことができる。剤形の製造において、活性成分を担体と
ともに混合または希釈するか、カプセル、におい袋(sac
het)またはその他容器形態の担体に封入することが好ま
しい。担体が希釈剤として働く場合には、活性成分に対
するビヒクル、賦形剤または媒質として作用する固体、
半固体または液状物質であり得る。したがって、剤形
は、錠剤、丸剤、粉末、におい袋、エリキシル、懸濁
液、エマルジョン、溶液、シロップ、エーロゾル、軟質
または硬質ゼラチンカプセル、滅菌注射溶液、滅菌包装
粉末などの形態であり得る。

【００２６】適切な担体、賦形剤および希釈剤の例とし
ては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソル
ビトール、マンニトール、スターチ、アラビアゴム、ア
ルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カル
シウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロ
ース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸
メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステア
リン酸マグネシウムおよびミネラル油などを挙げること
ができる。剤形は、充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤
剤、香料、乳化剤、防腐剤などをさらに含むことができ
る。本発明の組成物は、哺乳動物に投与された後、活性
成分の迅速、遅速または遅延放出を提供するために当業
界で公知の方法を用いて剤形化することができる。

【００２７】本発明の薬剤学的組成物は、経口、経皮、
静脈または筋肉内投与を含む種々の経路を通じて投与さ
れ得る。ヒトの場合、柑橘類果皮抽出物の通常の１日投
与量は１〜１,０００ｍｇ／ｋｇ体重であり、好ましく
は１０〜５００ｍｇ/ｋｇ体重の範囲であり、１回また
は数回に分けて投与し得る。

【００２８】しかし、活性成分の実際投与量は処理条
件、投与経路、患者の年齢、性別および体重、および患
者の症状を含む種々の関連因子を考慮して決定され、し
たがって、前記投与量は本発明の範囲を制限しない。

【００２９】また、本発明の柑橘類果皮抽出物はＡＣＡ
Ｔ活性を抑制し、動脈内皮上にマクロファージ−脂質複
合体の蓄積を抑制するか、肝疾患を予防または治療する
目的で食品または飲料に添加剤または食品補助剤として
加え得る。前記食品または飲料としては、各種肉類；野
菜ジュース(たとえば、ニンジンジュース、トマトジュ
ース)および果物ジュース(たとえば、オレンジジュー
ス、ブドウジュース、パイナップルジュース、リンゴジ
ュースおよびバナナジュース)；チョコレート；スナッ
ク類；お菓子類；ピザ；パン、ケーキ、クラッカー、ク
ッキー、ビスケット、ヌードルなどのように穀物の粉末
から作られた食品類；チューインガム類；牛乳、チー
ズ、ヨーグルトおよびアイスクリームのような乳製品；
スープ；肉汁；ペースト、ケチャップおよびソース；
茶；アルコール飲料類；コカ・コーラ(商標)およびペプ
シ・コーラ(商標)のような炭酸飲料；ビタミン複合体；
および様々な健康補助食品類などがある。

【００３０】この場合、食品または飲料中の柑橘類果皮
抽出物の含量は０.５〜１０重量％の範囲である。特
に、本発明による飲料は飲料１,０００ｍｌ当り柑橘類
果皮抽出物１０〜１００ｇを含み得る。柑橘類果皮粉末
の場合、食品または飲料中のこれの含量は０.５〜３０
重量％の範囲である。

【００３１】前述のように、柑橘類果皮抽出物は有効
で、かつ毒性のない、ＡＣＡＴ活性抑制、動脈内皮上で
のマクロファージ−脂質複合体の蓄積抑制、および／ま
たは肝疾患予防または治療のための薬剤として用いられ
る。

【００３２】下記実施例は本発明をさらに詳細に説明す
るためのものであり、本発明の範囲を制限しない。

【００３３】また、下記固体混合物中の固体、液体中の
液体、および液体中の固体に対して下記に記載の百分率
は、各々重量／重量、体積／体積および重量／体積に基
づいたものであり、特に断らない限りすべての反応は室
温で行われた。

【００３４】実施例１：柑橘類果皮抽出物の製造および
分析 柑橘(済州島、韓国)、シトロン(全羅南道、韓国)および
オレンジ、グレープフルーツおよびレモン(カリフォル
ニア、米国)の皮を室温で乾燥した後、粒径１００μｍ
〜２００μｍ範囲の粒子サイズに粉末化した。この柑橘
類果皮粉末５００ｍｇずつにメタノール５０ｍｌずつを
加えて５０℃で６時間水浴中で抽出した。このようにし
て得られた抽出物を冷却し、濾過した後、濾液にメタノ
ールを加えて５０ｍｌにした。

【００３５】前記のように得られた柑橘類果皮抽出物の
組成を確認するため、得られた抽出液５.０μｌを用い
て、３７％メタノールで前もって平衡化したリクロソル
ブＲＰ−８カラム(５μｍ、４ｘ２５０ｍｍ)を３０℃で
維持してＨＰＬＣを実施した。抽出物は、３７％メタノ
ールを用いて１.０ｍｌ／分の流速で溶出させた。ヘス
ペリジンおよびナリンジン(Sigma Co., 米国)をメタノ
ールに溶解して最終濃度が各々０.１、０.２、０.３、
０.４および０.５ｍｇ／ｍｌになるように標準溶液を調
製し、前記と同様な条件下でＨＰＬＣを行った。溶出物
をＵＶ−ＶＩＳ分光光度計(spectrophotometer)を用い
て２８０ｎｍで検出し、標準溶液と柑橘類果皮抽出物の
ＨＰＬＣプロファイル(profile)の面積比からヘスペリ
ジンおよびナリンジンの含量を計算した。種々の柑橘類
の果皮抽出物からのヘスペリジンおよびナリンジンの含
量(％)を下記表２に示す。

【００３６】

【表２】

【００３７】実施例２：柑橘類果皮抽出物の製造 (１)エタノールを用いた方法 柑橘(済州島、韓国)の果皮を室温で乾燥し、乾燥した果
皮５００ｇに３０％エタノール５lを加えた。果皮を６
０℃で５時間抽出した。得られた抽出物を木綿布に通し
て濾過した後、濾液を真空下濃縮してシロップ状抽出物
１９０ｇを得た。前記実施例１と同様な方法で柑橘類果
皮抽出物中のヘスペリジン含量を測定してこの柑橘類果
皮抽出物がヘスペリジン５.１ｇを含むことを確認し
た。

【００３８】さらに、ＨＰＬＣを用いて柑橘類果皮抽出
物の成分を確認し、その結果を表３に示す。

【００３９】

【表３】

【００４０】(２)Ｃa(ＯＨ)₂を用いた方法 柑橘(済州島、韓国)の果皮を室温で乾燥し、乾燥した果
皮５００ｇに０.５％Ｃａ(ＯＨ)₂溶液５lを加えた。室
温でかき混ぜながら１時間果皮を抽出し、得られた抽出
物を綿織物に通して濾過した。濾液に１Ｎ ＨＣｌ溶液
を加えてｐＨを４.５に調節した。濾液のｐＨを６.８に
調節することを除いては前記と同様な手順を繰り返して
濾液を得た。このように得られた濾液を５℃で２４時間
放置した。このように得られた沈澱物を回収し、乾燥し
て各々５ｇおよび１０ｇの粉末を得た。粉末をHPLCで分
析して柑橘類果皮抽出物が各々ヘスペリジン３.２ｇお
よび６.５５ｇ(純度：６４％および６５％)を含むこと
を確認した。

【００４１】(３)ＮａＯＨを用いた方法 柑橘(済州島、韓国)の果皮を室温で乾燥し、乾燥した果
皮５００ｇに０.５％ＮａＯＨ ５lを加えた。室温でか
き混ぜながら果皮を１時間抽出し、得られた抽出物を木
綿布に通して濾過した。濾液に１Ｎ ＨＣｌ溶液を加え
てｐＨを４.５に調節した。濾液のｐＨを６.８に調節す
ることを除いては前記と同様な手順を繰り返して濾液を
得た。このように得られた濾液を５℃で２４時間放置し
た。このように得られた沈澱物を回収し、乾燥して各々
４４ｇおよび４９ｇの粉末を得た。粉末をＨＰＬＣで分
析して柑橘類果皮抽出物が各々ヘスペリジン１３.９ｇ
および９.８ｇ(純度：３１％および２０％)を含むこと
を確認した。

【００４２】実施例３：経口投与された柑橘類果皮抽出
物の毒性実験 ７−８週齢の無菌ＩＣＲマウスであって、体重が２５〜
２９ｇである雌マウス(６匹)と体重が３４〜３８ｇであ
る雄マウス(６匹)を温度２２±１℃、湿度５５±５％、
光周期１２Ｌ／１２Ｄの条件下で飼育した。実験動物用
飼料(Cheiljedang Co., マウスおよびラット用)および
飲料水は滅菌した後摂取させた。

【００４３】実施例２(１)で得られた柑橘類果皮抽出物
を０.５％ツイーン８０に１００ｍｇ／ｍｌの濃度で溶
解した後、この溶液をマウスにマウス体重２０ｇ当り
０.２ｍｌずつ経口投与した。この溶液は、１回経口投
与し、その後副作用または致死につく観察を１、４、
８、および１２時間後、そしてその後は１２時間ごとに
１０日間行った。柑橘類果皮抽出物の効果を調査するた
めにマウスの体重変化を毎日記録した。また、投与１０
日目にマウスを致死させた後、肉眼で内部臓器を観察し
た。

【００４４】いずれのマウスも１０日目まで生存し、こ
れは柑橘類果皮抽出物が１,０００ｍｇ／ｋｇの投与量
では毒性を示さないことを示す。検体によってマウスに
何ら病理的異常が発生しなかったことが確認され、１０
日間の試験期間中体重減少は観察されなかった。したが
って、柑橘類果皮抽出物は動物に経口投与する場合毒性
がないと結論づけることができる。

【００４５】実施例４：柑橘類果皮抽出物の動物投与 体重９０〜１１０ｇの４週齢スプラグダウリーラット
(テハン実験動物センター、大韓民国)２０匹を無作為ブ
ロックデザインに従って２つの食餌群に分けた。２グル
ープのラットに２種類の高コレステロール食餌、すなわ
ち、１％コレステロールを含むＡＩＮ−７６実験動物食
餌(ICN Biochemicals, Cleveland, OH, U.S.A.)(対照
群)、１％コレステロールと１６.７％実施例２(１)で得
られた柑橘類果皮抽出物を含むＡＩＮ−７６実験動物食
餌を各々摂取させた。２群に摂取させた食餌組成は表４
を示す。

【００４６】

【表４】

【００４７】ラットに水とともに所定の食餌を６週間自
由に摂取させ、摂取量を毎日記録し、ラットの体重を７
日ごとに測定した後飼育記録を分析した。すべてのラッ
トは正常の成長速度を示し、食餌摂取量と体重増加量に
おいては２群間の差はほとんどなかった。

【００４８】実施例５：血中総コレステロール、ＨＤＬ
−コレステロールおよび中性脂質含量の決定 柑橘類果皮抽出物の投与がラットの血中コレステロール
と中性脂質含量に及ぼす影響を次のように調査した。

【００４９】２つの食餌群のラットから血液試料を採取
し、これからデキストラン−硫酸塩を含むＨＤＬ−コレ
ステロール試薬(Sigma Chemical Co. Cat. No. 352-3)
を用いて血漿ＨＤＬ分画を分離した。総コレステロール
およびＨＤＬ−コレステロール濃度はシグマ社の診断キ
ットカタログ番号352-100(Sigma Chemical Co., U. S.
A.)(Allain et al., Clin. Chem., 20, 470-475(197
4))、中性脂質濃度はシグマ社の診断キットカタログ番
号339-50(Bucolo, G. and David, H., Clin. Chem., 1
9, 476-482(1973))を各々用いて測定し、その結果を表
５に示す。ここで、総血漿コレステロール濃度は、柑橘
類果皮抽出物投与群において対照群に比べて３６％減少
した。

【００５０】

【表５】

【００５１】実施例６：柑橘類果皮抽出物によるＡＣＡ
Ｔ活性の抑制 (段階１)ミクロソームの製造 ラットに投与した柑橘類果皮抽出物がＡＣＡＴ酵素活性
に及ぼす影響を調査するために肝組織からミクロソーム
を分離して酵素源として用いた。まず、実施例４で製造
した２群のラットを斬首して殺した後、肝を切り取っ
た。肝組織１ｇを均質化溶液５ｍｌ(０.１Ｍリン酸カリ
ウム(ｐＨ７.４)、０.１ｍＭ ＥＤＴＡおよび１０ｍＭ
β−メルカプトエタノール)中で均質化した。この均
質液を４℃で３,０００ｘｇで１０分間遠心分離し、得
られた上澄液を４℃で１５分間１５,０００ｘｇでさら
に遠心分離して上澄液を得た。上澄液を超遠心分離チュ
ーブ(ベックマン社)に入れ、４℃で１００,０００ｘｇ
で１時間遠心分離してミクロソームペレットを得た後、
これを均質化溶液３ｍｌに懸濁し、４℃で１００,００
０ｘｇで１時間遠心分離した。得られたペレットを前記
均質化溶液１ｍｌに懸濁した。得られた懸濁液中のタン
パク質濃度をローリ(Lowry)らの方法で測定した後、タ
ンパク質の濃度を４〜８ｍｇ／ｍｌに調節した。この懸
濁液をディープフリーザー(Biofreezer, Forma Scienti
fic inc.)に保管した。

【００５２】(段階２)ＡＣＡＴ活性測定 アセトンに１ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解したコレステロー
ル溶液６.６７μｌを１０％トリトンＷＲ−１３３９(Si
gma Co.)アセトン溶液６μｌと混合した後、窒素ガスを
用いてアセトンを蒸発させた。この混合物に蒸留水を加
えてコレステロールの濃度が３０ｍｇ／ｍｌになるよう
に調節した。

【００５３】前記コレステロール水溶液１０μｌに１Ｍ
リン酸カリウム１０μｌ(Ｈ７.４)、０.６ｍＭウシ清ア
ルブミン(ＢＳＡ)５μｌ、段階１で得られたミクロソー
ム溶液１０μｌおよび蒸留水５５μｌを加えた(総９０
μｌ)。混合物を３７℃水浴中で３０分間予備インキュ
ベートした。

【００５４】(１−¹⁴Ｃ)オレオイル−ＣｏＡ溶液１０μ
ｌ(０.０５μＣｉ、最終濃度：１０μＭ)を予備インキ
ュベートした混合物に加え、生成した混合物を３７℃水
浴中で３０分間インキュベートした。これに、イソプロ
パノール：ヘプタン混合溶液（４：１(ｖ／ｖ))５００
μl、ヘプタン３００μlおよび０.１Ｍリン酸カリウム
２００μl(ｐＨ７.４)を加え、混合物をボルテックス(v
ortex)で激しく混合した後、室温で２分間静置した。

【００５５】上澄液２００μlをシンチレーション瓶に
入れ、シンチレーション液(Lumac社)４ｍｌを加えた。
この混合物の放射線量を１４５０マイクロベータ液体シ
ンチレーション計数器(1450 Microbeta liquid scintil
lation counter, Wallacoy, Finland)で測定した。ＡＣ
ＡＴ酵素活性は、タンパク質１ｍｇ当り１分間合成した
オレイン酸コレステリルの量(ピコモル／分／ｍｇタン
パク質)で計算した。その結果を表６に示す。

【００５６】

【表６】 表６から分かるように、柑橘類果皮抽出物投与群のＡＣ
ＡＴ活性度は対照群に比べて３２％減少した。

【００５７】実施例７：柑橘類果皮抽出物投与群におけ
るマクロファージ−脂質複合体によって誘導されたプラ
ーク形成の抑制 (段階１)柑橘類フラボノイドの動物投与 ２.５〜２.６ｋｇの３月齢ニュージーランド白ウサギ
(大韓民国ヨンアム園芸畜産大学)３６匹を温度２０±２
℃、相対湿度５５±５％および光周期１２Ｌ／１２Ｄの
条件下で飼育した。ウサギを６匹ずつの群に分け、６群
のウサギに６つの異なる食餌、すなわち、１％コレステ
ロール(対照群)；１％コレステロールと１ｍｇ／ｋｇロ
バスタチン(商標) (メルク社、米国)(比較群)；１％コ
レステロールと０.１％ヘスペリジン；１％コレステロ
ールと０.１％ヘスペレテン；１％コレステロールと０.
１％ナリンジン；および１％コレステロールと０.１％
ナリンゲニンを各々含むＲＣ４食餌(Oriental Yeast C
o.,日本)を摂取させた。ＲＣ４食餌は７.６％水分、２
２.８％粗タンパク質、２.８％粗脂肪、８.８％粗灰
粉、１４.４％粗セルロースおよび４３.６％無窒素溶解
性物質を含む。ウサギは食餌と水を自由に摂取できるよ
うにしながら６週間飼育した。

【００５８】(段階２)大動脈の脂肪層(fatty streak)の
分析 段階１で飼育したウサギを屠殺し、胸部を切開した。大
動脈を大動脈弁の１ｃｍ上方から下方に約５ｃｍ長さに
切り取り、大動脈周辺の脂肪を除去した。大動脈の中間
を縦軸に沿って切開した後、皿上にピンで固定した。こ
の湿った組織を写真撮影した後エスパー(Esper E. et a
l.(J. Lab. Clin. Med., 121, 103-110(1993))の方法に
従って次のように脂肪層の染色を行った。

【００５９】切開した大動脈の一部を無水プロピレング
リコールで２分間隔で３回洗浄し、プロピレングリコー
ルに溶かしたオイルレッドオー(ORO, Sigma Co.)の飽和
溶液で３０分間染色した。次いで、動脈を８５％プロピ
レングリコールで３分間隔で２回洗浄して残っている染
色溶液を除去した後、生理食塩水で洗浄した。動脈を写
真撮影した後写真を透写した。染色された領域(脂肪層
領域)の面積をイメージ分析器(LEICA、Q-600、ドイツ)
で測定し、大動脈の総面積に対する脂肪層の比率(％)を
計算した。

【００６０】一方、大動脈の他の部分は、ヘマトキシリ
ン−エオシン(H&E)染色法およびマソーンの三色染色法
(Masson′s trichrome stain)に従って染色した後、光
学顕微鏡下で血管内膜(intima)、内部(internus)、弾性
膜(elastic lamina)、中膜(media)の各々にマクロファ
ージ−脂質複合体が蓄積されているかを観察した。

【００６１】さらに、ウサギから血液試料を採取し、実
施例５と同様な方法で総コレステロールおよび中性脂質
濃度を測定した。その結果を表７に示す。

【００６２】

【表７】

【００６３】表７から分かるように、１ｍｇ／ｋｇロバ
スタチン(商標)投与群、０.１％ヘスペリジン投与群、
０.１％ヘスペレチン投与群、０.１％ナリンジン投与群
および０.１％ナリンゲニン投与群においては、対照群
に比べて動脈内皮上に蓄積されたマクロファージ−脂質
複合体の面積が著しく減少した。したがって、柑橘類果
皮抽出物から分離したヘスペリジン、ヘスペレチン、ナ
リンジンおよびナリンゲニンだけでなく、これらのフラ
ボノイドを含む柑橘類果皮抽出物は、動脈内皮上にマク
ロファージ−脂質複合体の蓄積を抑制することが確認さ
れた。特に、柑橘類果皮抽出物から分離したブラボノイ
ドのマクロファージ−脂質複合体の蓄積に対する抑制活
性が正常のウサギの血中コレステロール濃度である約５
０ｍｇ／ｄｌよりはるかに高い約１,１００ｍｇ／ｄｌ
以上のコレステロール濃度において示されることは注目
すべきである。この結果は、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素抑
制剤によるコレステロール合成阻害、ＡＣＡＴ抑制剤に
よるコレステロール吸収阻害、またはＣＥＴＰ抑制剤に
よるコレステロール転移阻害とは異なる新しい動脈硬化
症防止機構によるものであると思われる。

【００６４】図１Ａ、１Ｂ、１Ｃおよび１Ｄは、各々１
％コレステロール(対照群)；１％コレステロールと１ｍ
ｇ／ｋｇロバスタチン(商標) (比較群)；１％コレステ
ロールと０.１％ヘスペリジン；および１％コレステロ
ールと０.１％ナリンジンを投与したウサギの動脈写真
を示す。図１Ａ、１Ｂ、１Ｃおよび１Ｄから分かるよう
に、１％コレステロールを投与したウサギの動脈内皮上
にはマクロファージ−脂質複合体の厚い層が形成される
に反して、１％コレステロールと１ｍｇ／ｋｇロバスタ
チン(商標)、１％コレステロールと０.１％ヘスペリジ
ン、および１％コレステロールと０.１％ナリンジンを
投与したウサギの動脈内皮上にはマクロファージ−脂質
複合体の非常に薄い層が形成されるか、層が形成されな
かった。

【００６５】したがって、ヘスペリジン、ヘスペレチ
ン、ナリンジンおよびナリンゲニンのような柑橘類フラ
ボノイドだけでなく、柑橘類果皮抽出物は動脈内皮上に
マクロファージ−脂質複合体の蓄積を強く抑制すると結
論づけられる。

【００６６】実施例８：柑橘類果皮抽出物による肝疾患
の予防 (段階１)柑橘類果皮抽出物または柑橘類フラボノイドを
ラットに投与 体重９０〜１１０ｇの４週齢スプラグダウリーラット
(テハン実験動物センター、大韓民国)３０匹を無作為ブ
ロックデザインに従って３つの食餌群に分けた。この３
群のラットに３種類の高コレステロール食餌、すなわ
ち、１％コレステロールを含むＡＩＮ−７６実験動物食
餌(ICN Biochemicals, Cleveland, OH, U.S.A.)(対照
群)、１％コレステロールと０.０２％ナリンジンを含む
ＡＩＮ−７６実験動物食餌、および１％コレステロール
と０.０４％ヘスペリジン相当量の実施例２(１)で製造
した柑橘類果皮抽出物を含むＡＩＮ−７６実験動物食餌
を各々摂取させた。３群に摂取させた食餌組成を表８に
示す。

【００６７】

【表８】

【００６８】ラットに水とともに所定の食餌を６週間自
由に摂取させ、摂取量を毎日記録し、ラットの体重を７
日ごとに測定した後飼育記録を分析した。すべてのラッ
トは正常な成長速度を示し、食餌摂取量と体重増加量に
おいては３群間の差はほとんどなかった。

【００６９】(段階２)血漿ＧＯＴおよびＧＰＴ濃度測定 ラットの肝機能に対するナリンジンおよび柑橘類果皮抽
出物投与の効果を次のように測定した。３つの食餌群の
ラットから血液試料を採取し、血漿ＧＯＴ(glutamate-o
xaloacetate transaminase)およびＧＰＴ(glutamate-py
ruvate transaminase)濃度をレイトマンとフランケルの
方法(Reitman, S. and J. S. Frankel, Am. J. Clin. P
athol., 28, 56(1956))に従って測定した。ＧＯＴとＧ
ＰＴは肝と心臓で合成される酵素であって、これらの組
織が損傷すると血中に放出される。従って、ＧＯＴとＧ
ＰＴは肝機能検査の代表的な指標であり、高い血漿ＧＯ
ＴおよびＧＰＴ濃度は肝の損傷が重いことを示す。

【００７０】実験結果、柑橘類抽出物群およびナリンジ
ン群のＧＯＴおよびＧＰＴ濃度は対照群のそれより各々
３０％および１０％低いことが観察された。

【００７１】(段階３)ウサギを用いた実験 ラットの代わりに２.５〜２.６ｋｇの３月齢ニュージー
ランド白ウサギ(大韓民国ヨンアム園芸畜産大学)４０匹
を用い、ウサギに４つの異なる高コレステロール食餌、
すなわち、１％コレステロールを含むＲＣ４食餌(対照
群)；１％コレステロールと１ｍｇ／ｋｇロバスタチン
(商標)を含むＲＣ４食餌(比較群)；１％コレステロール
と０.１％ヘスペリジンを含むＲＣ４食餌；および１％
コレステロールと０.１％ナリンジンを含むＲＣ４食餌
を各々８週間摂取させることを除いては段階１と同様な
手順を繰り返した。

【００７２】次いで、ウサギから肝を分離し、次のよう
に組織病理学的観察を行った。ケタミン(７５ｍｇ／ｋ
ｇ)を筋肉内注射してウサギを麻酔した後、腹部を切開
した。肝の色調、硬化度を肉眼で観察し、ウサギから分
離した肝を１０％中性緩衝ポルマリン中で２４時間以上
固定した。固定した肝を水で十分洗浄し、７０％、８０
％、９０％および１００％エタノールで段階的に脱水し
た後、パラフィン中に固定した。固定した肝をミクロト
ーム(microtome)を用いて約４μｍ厚さに切り、ヘマト
キシリンとエオシンで染色した。染色した肝試料をキシ
レンで透明化し、パーマウントに乗せた後、光学顕微鏡
下で観察して病変の有無を調査した。

【００７３】図２Ａ、２Ｂ、２Ｃおよび２Ｄは、各々１
％コレステロール投与群(対照群)；１％コレステロール
と１ｍｇ／ｋｇロバスタチン(商標)投与群(比較群)；１
％コレステロールと０.１％ヘスペリジン投与群；およ
び１％コレステロールと０.１％ナリンジン投与群のウ
サギの肝の電子顕微鏡写真を示す。図２Ａおよび２Ｂか
ら分かるように、対照群および比較群の肝細胞は不規則
な配列であり、かつ肥大化し、多量の脂肪が蓄積されて
いる。反面、図２Ｃおよび２Ｄから分かるように、ヘス
ペリジン投与群およびナリンジン投与群の肝細胞は正常
であり、脂肪蓄積は観察されなかった。この結果は、柑
橘類バイオフラボノイド、すなわち、ヘスペリジンおよ
びナリンジン、およびこれらを含む柑橘類果皮抽出物が
肝細胞に副作用なしに脂肪肝の発生を強く抑制すること
を示している。

【００７４】(段階４)ヒトを用いた実験 ナリンジンを５５歳の男性に毎日１０ｍｇ／ｋｇの投与
量で６８日間経口投与し、投与直前(０日)、投与後４５
日(４５日)および６８日(６８日)に血漿ＧＯＴ、ＧＰＴ
およびγＧＴＰ濃度を各々測定した。その結果、４５日
と６８日に血漿ＧＯＴ濃度が０日に比べて各々１７％減
少した。４５日および６８日の血漿ＧＰＴの濃度は０日
に比べて各々１５％および１９％減少した。また、４５
日および６８日に測定した血漿γＧＴＰ値は０日に比べ
て各々２５％および５１％減少した。驚くべきことに、
６８日までの血漿γＧＰＴ濃度の減少は５０％以上であ
り、この結果はナリンジンおよびこれを含む柑橘類果皮
抽出物が強力な肝保護活性および、肝炎、脂肪肝および
アルコール性脂肪肝のような肝疾患に対する予防活性を
有することを示す。

【００７５】一方、毎日１００ｃｃのアルコール飲料を
習慣的に飲む５６歳の男性にナリンジンを毎日６ｍｇ／
ｋｇの量で３０日間経口投与し、血漿γＧＴＰ濃度を投
与直前(０日)と投与後３０日(３０日)に測定した。その
結果、０日の初期血漿γＧＴＰ濃度は１２９ ＩＵ／ｌ
である反面、３０日の場合には正常範疇内である６９
ＩＵ／ｌに減少した。この結果は、ナリンジンまたはこ
れを含む柑橘類果皮抽出物がアルコール性脂肪肝および
肝硬変症に対して高い予防活性を有することを示す。

【００７６】実施例９：柑橘類果皮粉末または抽出物を
含む食品 実施例１および２で得られた柑橘類果皮粉末または抽出
物を含む食品は次のように製造した。 (１)トマトケチャップおよびソースの製造 実施例１で得られた柑橘類果皮粉末をトマトケチャップ
またはソースに１〜２０重量％の量で加えて健康増進用
トマトケチャップまたはソースを得た。または、実施例
２(１)で得られた柑橘類果皮抽出物をトマトケチャップ
またはソースに０.５〜１０重量％の量で加えて健康増
進用トマトケチャップまたはソースを得た。

【００７７】(２)小麦粉食品の製造 実施例１で得られた柑橘類果皮粉末を小麦粉に１〜３０
重量％の量で加え、この混合物を用いてパン、ケーキ、
クッキー、クラッカーおよび麺類を製造して健康増進用
食品を得た。

【００７８】または、実施例２(１)で得られた柑橘類果
皮抽出物０.５〜１０重量％を含む小麦粉を用いて前記
食品を製造した。

【００７９】(３)スープおよび肉汁の製造 実施例１で得られた柑橘類果皮粉末をスープおよび肉汁
に１〜３０重量％の量で加えて健康増進用スープおよび
肉汁を得た。または、実施例２(１)で得られた柑橘類果
皮抽出物０.５〜１０重量％を含むスープおよび肉汁を
用いて前記食品を製造した。

【００８０】(４)グラウンドビーフの製造 実施例１で得られた柑橘類果皮粉末をグラウンドビーフ
に１〜３０重量％の量で加えて健康増進用スープおよび
肉汁を得た。または、実施例２(１)で得られた柑橘類果
皮抽出物０.５〜１０重量％を含むグラウンドビーフを
用いて前記食品を製造した。

【００８１】(５)乳製品の製造 実施例１で得られた柑橘類果皮粉末または実施例２(１)
で得られた柑橘類果皮抽出物を牛乳に０.５〜１０重量
％の量で加え、この牛乳を用いてバーターおよびアイス
クリームのような種々の牛製品を製造した。

【００８２】しかし、チーズの製造の際には、柑橘類果
皮粉末または抽出物を凝固した牛乳タンパク質に加え、
ヨーグルトの製造の際には、柑橘類果皮粉末または抽出
物を醗酵後に得られた凝固した牛乳タンパク質に加え
た。

【００８３】実施例１０：柑橘類果皮粉末または抽出物
を含む飲料 (１)野菜ジュースの製造 実施例１で得られた柑橘類果皮粉末または実施例２(１)
で得られた柑橘類果皮抽出物１０〜１００ｇをトマトま
たはニンジンジュース１,０００ｍｌに加えて健康増進
用野菜ジュースを得た。

【００８４】(２)果物ジュースの製造 実施例１で得られた柑橘類果皮粉末または実施例２(１)
で得られた柑橘類果皮抽出物１０〜１００ｇをリンゴま
たはブドウジュース１,０００ｍｌに加えて健康増進用
野菜ジュースを得た。

【００８５】(３)炭酸飲料の製造 実施例１で得られた柑橘類果皮粉末または実施例２(１)
で得られた柑橘類果皮抽出物１〜１００ｇをコカ・コー
ラ(商標)またはペプシコーラ(商標)１,０００ｍｌに加
えて健康増進用野菜ジュースを得た。

【００８６】本発明を具体的な実施態様と関連させて記
述したが、添付した特許請求の範囲によって定義される
本発明の範囲内で、当該分野の熟練者が本発明を多様に
変形および変化させ得ると理解されなければならない。 ［図面の簡単な説明］

【図１】図１Ａ、１Ｂ、１Ｃおよび１Ｄは各々１％コレ
ステロール、１％コレステロールと１ｍｇ／ｋｇロバス
タチン(商標)、１％コレステロールと０.１％ヘスペリ
ジン、および１％コレステロールと０.１％ナリンジン
が投与されたウサギの動脈を示す顕微鏡写真である。

【図２】図２Ａ、２Ｂ、２Ｃおよび２Ｄは各々１％コレ
ステロール、１％コレステロールと１ｍｇ／ｋｇロバス
タチン(商標)、１％コレステロールと０.１％ヘスペリ
ジン、および１％コレステロールと０.１％ナリンジン
が投与されたウサギの肝の電子顕微鏡写真である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ (31)優先権主張番号 １９９８／１１４５０ (32)優先日 平成10年４月１日(1998．4．1) (33)優先権主張国 韓国（ＫＲ） (31)優先権主張番号 １９９８／１２４１１ (32)優先日 平成10年４月８日(1998．4．8) (33)優先権主張国 韓国（ＫＲ） (31)優先権主張番号 １９９８／１３２８３ (32)優先日 平成10年４月14日(1998．4．14) (33)優先権主張国 韓国（ＫＲ） (72)発明者 ミュンソク・チョイ 大韓民国706−014テク、スソンク、ブメ オ４ドン、ガーデン・ハイツ・アパート メント102−203 (72)発明者 スルクシク・モン 大韓民国314−110チュンチョンナムド、 ゴンジュシ、シンクワンドン、ナンバー ５番、ゴムナル・アパートメント101− 601 (72)発明者 ヨンコク・クウォン 大韓民国305−333テジョン、ユソンク、 エウンドン、ナンバー99番、ハンビッ ト・アパートメント126−1307 (72)発明者 エウンソク・リー 大韓民国301−013テジョン、ジュンク、 テフン３ドン、ナンバー49−２番 (72)発明者 ビュンハ・ヒュン 大韓民国305−333テジョン、ユソンク、 エウンドン、ナンバー99番、ハンビッ ト・アパートメント131−1401 (72)発明者 ヤンキュー・チョイ 大韓民国305−333テジョン、ユソンク、 エウンドン、ナンバー99番、ハンビッ ト・アパートメント137−706 (72)発明者 チュルホー・リー 大韓民国302−171テジョン、ソーク、ガ ルマドン、ギュンソン・クンマエウル・ アパートメント120−1307 (72)発明者 キファン・ベ 大韓民国302−200テジョン、ソーク、ゴ イジョンドン、ナンバー113−12番 (72)発明者 ヨンボク・パク 大韓民国706−014テグ、スソンク、ブメ オ４ドン、ガーデン・ハイツ・アパート メント102−203 (72)発明者 ジュンソン・リー 大韓民国302−280テジョン、ソーク、ウ ォルピュンドン、ヌリ・アパートメント 107−102 (72)発明者 クワンヘー・ソン 大韓民国305−333テジョン、ユソンク、 エウンドン、ナンバー99番、ハンビッ ト・アパートメント103−1702 (72)発明者 ビョンモグ・クウォン 大韓民国305−340テジョン、ドリョンド ン、ナンバー380−51番、ドリョン・ビ ラ102 (72)発明者 ヨンコク・キム 大韓民国305−333テジョン、ユソンク、 エウンドン、ナンバー99番、ハンビッ ト・アパートメント102−601 (72)発明者 ドイル・チョイ 大韓民国305−340テジョン、ユソンク、 ドリョンドン、キスト・アパートメント ２−305 (72)発明者 ソンウク・キム 大韓民国305−333テジョン、ユソンク、 エウンドン、ナンバー99番、ハンビッ ト・アパートメント110−405 (72)発明者 インギュ・ファン 大韓民国305−340テジョン、ユソンク、 ドリョンドン、キスト・アパートメント ２−206 (72)発明者 ジュンアー・アーン 大韓民国300−092テジョン、ドンク、ガ ヤン２ドン、ナンバー162−40番 (72)発明者 ヨンベ・パク 大韓民国135−110ソウル、カンナムク、 アプグジョンドン、ヒュンダイ・アパー トメント83−206 (72)発明者 ヒョーソー・キム 大韓民国135−110ソウル、カンナムク、 アプグジョンドン、ヒュンダイ・アパー トメント85−1401 (72)発明者 ソーンチョーン・チョウ 大韓民国121−040ソウル、マポク、ドー ワドン、マポ・サムソン・アパートメン ト105−1204 審査官 鶴見 秀紀 (56)参考文献 特開 平２−67216（ＪＰ，Ａ) 特開 平８−280358（ＪＰ，Ａ) 特開 平８−283154（ＪＰ，Ａ) 特表 平９−510446（ＪＰ，Ａ) Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．, 1994，Ｖｏｌ．59，ｐｐ．869−878 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61K 35/78 A23L 1/03 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)

Claims (11)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 哺乳動物におけるアシルＣｏＡ−コレス
   テロール−o−アシルトランスフェラーゼ(ＡＣＡＴ)の
   活性を抑制するための柑橘類果皮のアルコール抽出物を
   含む組成物。
2. 【請求項２】 上記哺乳動物がヒトである、請求項１記
   載の組成物。
3. 【請求項３】 上記柑橘類が、柑橘、オレンジ、レモン
   またはグレープフルーツである、請求項１または２記載
   の組成物。
4. 【請求項４】 上記柑橘類果皮抽出物が、１ｋｇの乾燥
   した柑橘類果皮に２０〜９５％エタノール３〜３０lを
   加え、混合物を２５〜８０℃範囲の温度で１〜１２時間
   放置し、得られた抽出物を濾過し、濾液を濃縮して柑橘
   類果皮抽出物を得る段階を含む方法によって製造され
   る、請求項１〜３のいずれか１項記載の組成物。
5. 【請求項５】 哺乳動物のための医薬、またはコレステ
   ロール低減用食品に用いられる、請求項１〜４のいずれ
   か１項記載の組成物。
6. 【請求項６】 上記医薬に用いられる柑橘類果皮抽出物
   の量が１〜１,０００ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲であ
   る、請求項５記載の組成物。
7. 【請求項７】 上記食品が、肉類、チョコレート、スナ
   ック類、菓子類、ピザ、穀物の粉末から作られる食品
   類、チューインガム類、乳製品、スープ、肉汁、ペース
   ト、ケチャップ、ソース、ビタミン複合体または健康食
   品類から選ばれる食品である、請求項５記載の組成物。
8. 【請求項８】 上記穀物の粉末から作られる食品類が、
   パン、ケーキ、クラッカー、クッキー、ビスケットまた
   はヌードルである、請求項７記載の組成物。
9. 【請求項９】 上記食品に用いられる柑橘類果皮抽出物
   の量が０.５〜１０重量％の範囲である、請求項７また
   は８記載の組成物。
10. 【請求項１０】 上記食品が、乳製品、野菜ジュース、
    果物ジュース、茶、アルコール飲料類または炭酸飲料か
    ら選ばれる飲料である、請求項５記載の組成物。
11. 【請求項１１】 上記飲料に用いられる柑橘類果皮抽出
    物の量が、飲料１，０００ｍｌ当り１０〜１００ｇの範
    囲である、請求項１０記載の組成物。