KR20040062000A - 대장암 원인 장내유해세균 효소 및 헬리코박터 파이로리성장 저해 활성을 갖는 버섯 유산균 발효물의 제조 및그의 용도 - Google Patents
대장암 원인 장내유해세균 효소 및 헬리코박터 파이로리성장 저해 활성을 갖는 버섯 유산균 발효물의 제조 및그의 용도 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 유산균인 락토바실러스 애시도필러스, 락토바실러스 불가리쿠스, 락토바실러스 컨푸수스, 락토바실러스 루테리, 락토바실러스 카제이, 비피도박테리움 브레이브, 비피도박테리움 인판티스, 비피도박테리움 비피덤, 비피도박테리움 써모필럼, 스트렙토코코스 페이스칼리스, 스트렙토코코스 써모필러스를 느타리, 양송이, 신령, 표고, 팽나무, 만가닥, 목이, 잎새, 뽕나무, 송이, 영지, 동충하초, 상황, 구름, 석이, 운지, 천마버섯 추출물 혹은 이들 버섯에 접종하여 위궤양의 원인균인 헬리코박터 파이로리의 성장을 억제하면서 장내 유해 효소인 베타-글루크로니데이스 및 트립토판나제의 활성을 억제하는 버섯 발효물을 제조하는 방법을 제공하는 것이다. 또한 버섯에 물을 가하여 침지한 후 믹서나 콜로이드 분쇄기로 곱게 간 버섯 분쇄물에 아스코르브산을 첨가하여 살균한 다음 방냉 후 위에 언급한 유산균을 접종하여 발효시킨 버섯 발효물을 동결하여 동결 건조하였을 때 유산균수가 대부분 X 108이상인 유산균 버섯 발효 동결건조 분말을 얻을 수 있는 방법을 제공하는 것이다.
Description
본 발명은 버섯을 이용하여 유산균 발효물 및 동결건조 분말을 만드는 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 버섯에서 물과 알콜로 추출한 추출물이 헬리코박터 파이로리(Helicobactor pylori)균에 대한 저해 효과가 있는 것을 이용하는 것이 특징이며, 또한 이들 버섯을 여러 가지 유산균으로 발효시켜 버섯 발효물에서 추출한 물과 에탄올 추출물도 헬리코박터 파이로리균을 저해하는 효과가 있다. 또한 이들 버섯 추출물 역시 대장암을 유발하는 장내 유해효소인 베타-글루크로니데이스(β-glucuronidase) 및 트립토판나제 (tryptophanase)의 활성 억제에도 효과가 있는 것이다. 이러한 효과가 있는 유산균 버섯 발효물을 동결 건조하여 분말을 제조시 유산균 수가 108이상으로 존재하여 버섯 발효물은 유산균 제제로 사용할 수 있음을 보여주는 것이며, 위염 및 대장암 억제 식품 소재로 혹은 다양한 기능성 식품소재 및 선식, 이유식 소재로도 이용할 수 있는 것이다.
버섯은 균류의 일종으로, 식용으로 알려진 버섯은 300여종으로 알려져 있다. 또한 본초학에서는 버섯을 약으로 취급하여, 한방에서는 버섯을 약으로도 이용하고 있다. 현대 의학의 발달로 버섯의 특수 성분을 이용하여 약품화하려는 연구가 활발하게 진행되고 있으며, 구름버섯으로부터 크레스틴(PSK)이 정제되어 항암제로 사용하고자 하고 있으며, 소화기암과 폐암 등에도 효과가 인정되었다. 표고버섯으로부터 렌티난(lentinan)이 추출되어 각종 임상 실험에 이용되고 있으며, 표고버섯을 사료에 혼합하여 쥐에게 섭취시킨 결과 혈중 콜레스테롤과 혈압이 강하한다. 콜레스테롤의 강하작용을 일으키는 표고의 성분은 엘리타네딘으로 판명되었다. 버섯의 세포벽 성분은 글루칸(glucan)으로 80% ∼ 90%를 차지하고 있다. 영지버섯은 옻칠을 한 듯한 광택이 있는 1년생 버섯으로 강장, 진정제로 중국에서 이용하여 왔으며, 다당체 단백질 결합체와 쓴맛을 내는 테르페노이드(terpenoid) 계통이 주요 약효 성분이다. 또한 버섯은 조미료의 소재로도 이용하여 왔는 데 버섯에는 맛을 내는 본체인 5-구아닌산 나트륨이 다량 존재하기 때문이다. 느타리 버섯은 영어로 "oyster mushroom"이라고도 하며, 맛과 향기가 좋고 혈압강하 작용도 있다고 알려져 있다. 신령버섯은 들버섯속 송이과에 속하는 버섯으로 식용은 물론 면역증강물질이 함유되어 있다. 만가닥 버섯은 가을철에 활엽수 고목이나 그루터기에서 다발로 발생하며, 조직이 연하고 사각사각한 맛이 있다. 이 버섯은 한 개체만 돋아나는 것이 아니고 여러 개체가 발생하기 때문에 만가닥이라고 부르게 되었다. 목이 버섯은 활엽수의 고사목에 주로 자라는 데 사람의 귀와 같아서 중국에서는 목이(木耳),우리나라에서는 목이 또는 호르레기, 일본에서는 해파리 또는 기쿠라제라고 하며, 서구에서는 ear mushroom이라고 한다. 잎새버섯은 물참나무 같은 죽은 활엽수의 그루터기에서 매년 늦가을에 자연 발생하는 버섯으로 엘르고스테롤, 만니톨, 트레할로오스 성분들이 연구되어 있다. 동충하초 버섯은 겨울에는 곤충의 몸에 있다가 여름에는 풀처럼 돋아나오는 모습에서 동충하초라는 이름을 갖게 되었다. 동충하초의 유효 약효 성분은 코디세핀으로 알려져 있다. 상황버섯은 소나무 비늘 버섯과에 속하는 버섯으로 한방처방에 의하면, 소화기의 암 및 위장 기능의 활성화를 하는 효과가 있다고 알려져 있다. 복령은 소나무에서 주로 사물 기생하는 갈색 부후균으로 현재까지 밝혀진 주요 성분은 복령산(pachymic acid), 송령산(pinicolic acid) 등이 있으며, 복령은 심신의 보양 및 안정, 이뇨 증진, 만성 위염에 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 천마는 난과에 속하는 다년생 식물로 뿌리만을 이용할 수 있다는 특징이 있다. 천마는 예로부터 1등급 약재 원료로 분류되어 있으며, 천마의 성분으로는 바닐린 알콜, 페놀글리코사이드 등이 알려져 있다. 약효로는 고혈압, 스트레스 해소, 간기능 촉진 효과가 있다고 한방에서 알려져 있다. 이렇게 인류는 수천년 동안 버섯을 다양하게 이용하여 왔으나, 버섯을 이용한 유산균 발효물 제조에 대한 연구는 거의 없다고 할 수 있다.
유산균은 크게 락토바실러스속, 비피도박테리움속, 스트렙토코코스속으로 분류하는 데, 연령에 따른 장내 유산균의 변화를 보면 생후 3 ∼ 4일이 되면 비피도박테리움이 나타나고, 5일째가 되면 가장 우세한 균이 된다. 또한 이유기가 끝나면 혐기성균과 비피도박테리움이 우세하며, 다른 유산균인 락토바실러스 등은 훨씬적다. 노인에 가까워 지면 장내 세균의 균형도 노화하여 우세하던 비피도박테리움의 세력이 약화되어, 락토바실러스 균이 비피도박테리움의 세력보다 많아진다. 따라서 노령화 될수록 비피도박테리움균을 복용하면 유아기나 청장년층의 장내균총과 유사하게 조성할 수 있을 것이다. 락토바실러스와 비피도박테리움의 차이점은 락토바실러스는 동형발효(homofermentation)를 하는 것과 이형발효(heterofermentation)를 하는 것이 있으며, 비피도박테리움은 이형발효(heterofermentation)를 한다는 것이다. 일반적으로 유산균의 생리활성은 유해균의 증식 억제, 유당 불내성의 완화, 혈청 콜레스테롤의 저하작용, 항암작용, 면역작용, 설사 및 변비의 개선, 비타민 합성 등을 들 수 있다. 비피도박테리아는 생후 3 ∼ 4일경부터 나타나기 시작하여 5일경에 가장 우세균으로 성장하여, 기존에 존재하던 이콜리(E. coli)나, 다른 유산균인 락토바실러스, 스트렙토코커스 등은 100분의 1로 감소한다. 이는 모유속에만 존재하는 비피도박테리아의 증식을 촉진하는 인자때문으로 여겨지고 있어, 다른 유산균인 락토바실러스보다 비피도박테리아가 장내 균총중에서 가장 중요한 균임을 알 수 있다.
종래의 기술로는 유산균을 이용하여 요구르트 같은 유산 발효 제품을 만드는 데 집중하여 왔으며, 이들 기술은 대부분 우유에 유산균을 접종하고 탈지분유를 첨가하여 유산균을 증식시킨 유산균 음료를 만드는 것이 보편화 된 방법이다. 우유 이외에 곡류를 이용한 유산균 음료나 젖산을 생산하기 위한 특허인 경우를 살펴보면 락토바실러스 플란타룸(Lactrobacillus plantarum)을 이용하여 채소와 한약재 유래의 젖산발효음료(한국공개특허 2000-0055832)와 쌀눈음료(한국특허출원 1996-042486), 곡립형태의 쌀을 이용한 젖산발효 제품 제조 방법(한국공개특허 92-16030), 곡분 이용 액상 젖산 발효 제품의 제조 방법(한국공개특허 97-14592), 콩 유래 성분을 이용한 젖산의 생산 방법(한국특허출원 10-1999-0017375), 락토바실러스 아시도필러스 균주를 이용한 유산균 원말의 생산(한국특허 148340) 등이 있으며, 위장내 헬리코박터 피로리 감염균의 증식 억제 유산균에 관한 특허(한국공개특허 2002-0072486, 한국공개특허 2002-0061040, 한국공개특허 2002-0045496) 중금속 흡착능이 높은 유산균주 및 그를 이용한 제품(한국공개특허 2000-0065010), 유산균 발효를 이용한 대사성 골질환 예방 및 개선 식품 소재(한국공개특허 2002-0048959) 등이 있다. 버섯을 이용한 유산균 발효물에 대한 특허는 버섯 분말 또는 버섯 추출물을 포함하는 유산균 배지, 상기 배지를 이용한 버섯 유산발효 조성물에 관한 특허(한국공개특허 2002-0085159)가 있으나, 이 특허에서는 유산균 배지를 탈지분유, 버섯분말(표고, 영지, 느타리), 올리고당, 텍스트린으로 구성하고 있는 배지를 이용하여 발효시키는 것으로 본 특허의 내용인 헬리코박터 파일로리균과 장내유해효소인 베타-글루크로니데이스와 트립토판네이즈의 활성을 억제하는 버섯 발효물를 이용하는 것과는 많은 차이가 있다.
본 특허에서는 다양한 유산균을 이용하여 버섯을 발효시켜 대장암 원인 장내유해세균 효소 및 헬리코박터 파이로리 성장 저해 활성을 갖는 버섯 유산균 발효물을 제조하는 것과 이들 발효물을 동결건조하여 유산균을 X 108이상으로 얻을 수 있다는 것이 큰 특징이다. 이들 버섯 발효물은 이유식, 유아식의 소재 및 유산균제재 및 버섯을 이용한 기능성 식품의 소재로도 이용할 수 있는 기술이라 할 수 있다.
본 발명의 목적은 버섯에 물 혹은 에탄올을 가하고 끓이면서 가열 추출하고 여과하여 헬리코박터 파이로리 성장 저해 활성을 갖는 버섯 추출물의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 버섯에 물을 가하여 침지한 후 믹서나 콜로이드 분쇄기로 곱게 간 버섯 분쇄물에 아스코르브산을 첨가하여 살균한 다음 방냉 후 유산균을 접종하여 발효시킨 버섯 발효물을 동결 건조하여 위궤양의 원인균인 헬리코박터 파이로리의 성장을 억제하면서 장내 대장암 및 간장해 유해 효소인 베타-글루크로니데이스와 트립토판나제의 활성을 억제하여 대장암을 예방하고 장내환경을 개선하는 버섯 발효물을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또다른 목적은 헬리코박터 파이로리의 성장을 억제하면서 베타-글루크로니데이스와 트립토판나제의 활성을 억제하여 대장암을 예방하고 장내환경을 개선하는 효과가 있는 유산균 버섯 발효물을 함유하는 이유식, 유아식, 유산균제제, 기타 위염이나 대장암 억제능이 있는 기능성 건강식품을 제공하는 것이다.
본 발명에 따르면 유산균인 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophillus), 락토바실러스 불가리쿠스(L. bulgaricus), 락토바실러스 컨푸수스(L. confusus), 락토바실러스 루테리(L. luteri), 락토바실러스 카제이(L.casei), 비피도박테리움 브레이브(B. breve), 비피도박테리움 인판티스(B. infantis), 비피도박테리움 비피덤(B. bifidum), 비피도박테리움 써모필럼(B. thermophyllum), 스트렙토코코스 페이스칼리스(Str. facecalis), 스트렙토코코스 써모필러스(Str. thermophllus)를 느타리, 양송이, 신령, 표고, 팽나무, 만가닥, 목이, 잎새, 뽕나무, 송이, 영지, 동충하초, 상황, 구름, 석이, 운지, 천마버섯 추출물 혹은 이들 버섯에 접종하여 위궤양의 원인균인 헬리코박터 파이로리(helicobactor pylori)의 성장을 억제하면서 장내 대장암 및 간장해 유해 효소인 베타-글루크로니데이스(β-glucuronidase) 및 트립토판나제의 활성을 억제하여 대장암을 예방하고 장내환경을 개선하는 버섯 발효물을 제조할 수 있다. 버섯 추출물의 제조는 버섯에 물 혹은 에탄올을 가하여 끓이면서 추출한 다음 여과하여 물추출물과 알콜 추출물을 농축하여 브루셀라 한천배지에서 헬리코박터 파이로리(Helicobactor pylori)균에 대한 버섯 추출물의 저해 효과를 조사한 결과 버섯의 물 추출물 중에서 운지, 양송이와 영지 버섯이 효과가 강하며, 구름, 석이, 동충하초, 신령, 표고버섯, 상황버섯은 효과 있으며, 팽나무와 목이버섯, 느타리, 만가닥, 잎새, 뽕나무, 송이버섯은 억제 효과가 약하다. 버섯 알콜 추출물인 경우 양송이, 운지, 표고, 영지, 구름, 석이버섯은 효과가 강하며, 신령, 동충하초, 상황, 송이 천마는 억제 효과가 있으나, 나머지 버섯의 알콜 추출물은 억제 효과가 약하나, 전반적으로 물추출물보다 알콜 추출물이 헬리코박터 파이로리균에 대한 억제 효과가 크게 나타나, 헬리코박터 파이로리균에 대한 억제 효과가 있는 버섯의 물 또는 알콜 추출물을 제조할 수 있다.
또한 위에 언급한 유산균을 이용하여 버섯을 발효하여 장내 유해효소로 알여진 베타-글루크로니데이스(β-glucuronidase) 및 트립토판나제에 대한 활성을 측정한 결과, 버섯 유산균 발효물의 물 추출물 중에서 영지, 양송이, 석이, 표고, 상황버섯이 억제 효과가 강하며, 상황, 구름, 동충하초, 느타리, 천마, 신령버섯은 억제 효과가 있으며, 나머지 버섯은 억제 효과가 미비하다. 한편 버섯 유산균 발효물의 알콜 추출물은 물추출물과 비슷한 효과를 나타내나, 물추출물보다 베타-글루크로니데이스(β-glucuronidase)및 트립토판나제에 대한 활성을 억제하는 효과가 증가하는 경향이 있어 베타-글루크로니데이스(β-glucuronidase)및 트립토판나제에 대한 활성을 억제하는 유산균 버섯 발효물의 물 또는 알콜 추출물을 제조할 수 있다.
버섯에 물을 가하여 침지한 후 믹서나 콜로이드 분쇄기로 곱게 간 버섯 분쇄물에 아스코르브산 0.5%를 첨가하여 살균한 다음 방냉 후 위에 언급한 유산균을 1%를 접종하여 12 - 24시간동안 발효시킨 버섯 발효물을 - 20 ∼ -40℃에서 동결하여 15 ∼ 24시간 냉동 건조할 때 유산균수가 대부분 X 108이상 이며, 발효한 버섯 분쇄물을 동결건조하면 X 108이상의 유산균을 함유하는 유산균 버섯 발효 분말을 얻을 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예는 다음과 같으며, 본 발명의 단순한 변형 또는 변경은 본 발명의 영역에 해당하는 것이므로 첨부된 특허청구범위에 의하여 그 권리범위가 명확해 질 것이다.
실시예 1. 버섯 추출물의 제조
건조 버섯에 약 6배의 물 혹은 에탄올을 가하여 끓이면서 6시간 추출한 다음 여과하여 물추출물과 알콜 추출물을 얻었다. 이들 추출물을 30oBrix 되도록 농축하여 다음 실시예의 시료로 사용하였다.
실시예 2. 헬리코박터 파이로리(Helicobactor pylori)균에 대한 버섯 추출물의 저해 효과
말혈청(horse serum) 7%를 첨가한 브루셀라 한천 배지(brucellar agar)에 버섯 추출물을 100mg/mL농도로 첨가한 후 헬리코박터 파이로리균을 접종하여 37℃에서 3일간 혐기 배양하면서 헬리코박터 파이로리균의 저해 효과를 조사하였다. 헬리코박터 파이로리균에 대한 버섯 추출물의 저해 효과 크기는 90 ∼ 100%인 경우 +++++, 71 ∼ 89%인 경우 ++++, 51 ∼ 70%인 경우 +++, 31 ∼ 50%인 경우 ++, 10 ∼ 30%인 경우 +, 억제 효과가 없을 경우 -로 표시하였다. 버섯의 물 추출물 중에서 운지, 양송이와 영지 버섯이 90 ∼ 100%의 억제 효과가 있었으며, 구름, 석이, 동충하초, 신령, 표고 버섯은 71 ∼ 89% 억제 효과가 있었으며, 상황버섯은 51 ∼ 70%의 억제 효과가, 팽나무와 목이버섯은 31 ∼ 50% 정도 억제효과가 있었으나, 느타리, 만가닥, 잎새, 뽕나무, 송이는 10 ∼ 30% 정도로 억제 효과가 약하였다. 버섯 알콜 추추물인 경우 양송이, 운지, 표고, 영지, 구름, 석이 버섯 추출물이 90∼ 100%의 억제 효과가 있었으며, 신령, 동충하초, 상황, 천마가 71 - 89%의 억제 효과가 있었으나, 나머지 버섯의 알콜 추출물은 70% 이하로 나타났다. 전반적으로 물추출물보다 알콜 추출물이 헬리코박터 파이로리균에 대한 억제 효과가 크게 나타났다.
| 버섯명 | 물 추출물의 억제효과 | 알콜 추출물의 억제효과 |
| 느타리 | + | ++ |
| 양송이 | +++++ | +++++ |
| 신령 | ++++ | ++++ |
| 표고 | ++++ | +++++ |
| 팽나무 | ++ | ++ |
| 만가닥 | + | + |
| 목이 | ++ | ++ |
| 잎새 | + | + |
| 뽕나무 | + | + |
| 송이 | + | +++ |
| 영지 | +++++ | +++++ |
| 동충하초 | ++++ | ++++ |
| 상황 | +++ | ++++ |
| 구름 | ++++ | +++++ |
| 석이 | ++++ | +++++ |
| 운지 | +++++ | +++++ |
| 천마 | ++ | ++++ |
실시예 3 유산균으로 발효한 버섯 발효물에서 추출한 물과 에탄올 추출물이 헬리코박터 파이로리균에 대한 저해 효과
분쇄한 버섯 분말에 물을 2 - 6배를 가하여 4시간 정도 침지하여 120℃ 살균솥(autoclave)에서 멸균한 후 유산균 즉 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophillus), 락토바실러스 불가리쿠스(L.bulgaricus), 락토바실러스 컨푸수스(L. confusus), 락토바실러스 루테리(L. luteri), 락토바실러스 카제이(L. casei), 비피도박테리움 브레이브(B. breve), 비피도박테리움 인판티스(B. infantis), 비피도박테리움 비피덤(B. bifidum), 비피도박테리움 써모필럼(B. thermophyllum), 스트렙토코코스 페이스칼리스(Str.facecalis), 스트렙토코코스 써모필러스(Str. thermophllus)를 1% 접종하여 12 - 24시간 배양 한 후 동결건조하였다. 동결건조한 버섯 발효물에 물 혹은 에탄올을 6배정도 가하여 열수 추출과 에탄올 추출을 실시예 1의 방법으로 실시하였다. 이 추출물을 실시예 2에서 실시한 방법인 말혈청(horse serum) 7%를 첨가한 브루셀라 한천 배지(brucellar agar)에 버섯 물 혹은 에탄올 추출물을 100mg/mL농도로 첨가한 후 헬리코박터 파이로리(helicobactor pylori)균을 접종하여 37℃에서 3일간 혐기 배양하면서 헬리코박터 파이로리균의 저해 효과를 조사하였다. 헬리코박터 파이로리균에 대한 버섯 추출물의 저해 효과 크기는 90 ∼ 100%인 경우 +++++, 71 ∼ 89%인 경우 ++++, 51 ∼ 70%인 경우 +++, 31 ∼ 50%인 경우 ++, 10 ∼ 30%인 경우 +, 억제 효과가 없을 경우 -로 표시하였다. 전체적으로 버섯 유산균 발효물의 물 추출물 중에서 양송이, 영지, 구름, 석이, 표고 버섯이 90 ∼ 100%의 억제 효과가 있었으며, 동충하초, 신령, 상황은 71 ∼ 89% 억제 효과가 있었으며, 천마는 유산균에 따라 71 ∼ 89%의 억제 효과와 51 ∼ 70%의 억제 효과가 있었다. 나머지 버섯은 70% 이하의 억제 효과만을 나타내었다. 한편 버섯 유산균 발효물의 알콜 추출물 중에서 양송이, 영지, 구름, 석이, 표고, 상황 버섯이 90 ∼ 100%의 억제 효과가 있었으며, 동충하초, 신령, 느타리 버섯은 전반적으로 71∼ 89% 억제 효과가 있었으며, 천마는 유산균에 따라 90 ∼ 100%의 억제 효과와 71 ∼ 89%의 효과를 보였으며, 나머지 버섯은 일반적으로 70% 이하의 억제 효과만을 나타내었다. 일반적으로 알콜추출물이 물추출물 보다 효과가 좋았다.
| 유산균버섯 | 엘에이 | 엘비 | 엘시 | 엘엘 | 엘카 | 비비 | 비아이 | 비피 | 비티 | 에스프 | 에스티 | |||||||||||
| 추출물 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 |
| 영지 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ |
| 양송이 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ |
| 구름 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ |
| 석이 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ |
| 동충하초 | ④ | ⑤ | ④ | ④ | ④ | ⑤ | ④ | ④ | ③ | ④ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ |
| 신령 | ③ | ④ | ④ | ④ | ③ | ④ | ③ | ④ | ④ | ④ | ④ | ④ | ④ | ④ | ③ | ④ | ④ | ④ | ③ | ④ | ④ | ④ |
| 표고 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ③ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ |
| 상황 | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ③ | ④ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ③ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ |
| 팽나무 | ① | ③ | ② | ③ | ② | ② | ③ | ② | ② | ② | ② | ③ | ② | ② | ① | ② | ① | ② | ② | ② | ① | ② |
| 목이 | ① | ② | ② | ② | ② | ③ | ② | ② | ② | ③ | ② | ② | ② | ② | ① | ② | ② | ② | ① | ② | ② | ② |
| 느타리 | ③ | ④ | ③ | ④ | ③ | ④ | ③ | ③ | ③ | ④ | ③ | ④ | ③ | ④ | ③ | ③ | ③ | ④ | ③ | ④ | ③ | ④ |
| 만가닥 | ① | ② | ① | ② | ② | ② | ③ | ③ | ① | ③ | ③ | ③ | ② | ② | ① | ② | ① | ② | ① | ② | ② | ② |
| 잎새 | ① | ① | ① | ③ | ② | ① | ② | ② | ① | ② | ② | ③ | ② | ② | ① | ② | ② | ③ | ① | ② | ① | ② |
| 뽕나무 | ① | ② | ② | ③ | ② | ② | ① | ② | ① | ③ | ① | ② | ① | ① | ① | ③ | ① | ① | ① | ② | ① | ① |
| 운지 | ① | ① | ① | ③ | ② | ③ | ① | ② | ③ | ③ | ③ | ① | ① | ③ | ① | ① | ② | ③ | ① | ① | ① | ① |
| 천마 | ③ | ③ | ③ | ④ | ③ | ④ | ③ | ④ | ④ | ⑤ | ③ | ④ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ③ | ④ | ③ | ④ |
유산균의 약어 명칭 : 엘에이(Lactobacillus acidophillus), 엘비(L. bulgaricus), 엘시(L. confusus), 엘엘(L. luteri), 엘카(L. casei), 비비(B. breve), 비아이(B. infantis), 비피(B. bifidum), 비티(B. thermophyllum), 에스프(Str. facecalis), 에스티(Str. thermophllus)
① : +, ② : ++, ③ : +++, ④ : ++++, ⑤ : +++++
실시예 4. 유산균으로 발효한 버섯 발효물의 물과 에탄올 추출물이 베타-글루크로니데이스(β-glucuronidase)및 트립토판나제의 활성 억제에 미치는 효과
실시예 3에서처럼 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophillus, 엘에이), 락토바실러스 불가리쿠스(L. bulgaricus, 엘비), 락토바실러스 컨푸수스(L. confusus, 엘시), 락토바실러스 루테리(L. luteri, 엘엘), 락토바실러스 카제이(L. casei, 엘카), 비피도박테리움 브레이브(B. breve, 비비), 비피도박테리움 인판티스(B. infantis, 비아이), 비피도박테리움 비피덤(B. bifidum, 비피), 비피도박테리움 써모필럼(B. thermophyllum, 비티), 스트렙토코코스 페이스칼리스(Str.facecalis, 에스프), 스트렙토코코스 써모필러스(Str. thermophllus, 에스티)로 발효한 버섯 발효물을 이용하여 물과 에탄올 추출물을 실시예 1에서 처럼 제조하여 장내 유해효소로 알여진 베타-글루크로니데이스(β-glucuronidase)에 대한 활성을 측정한 결과는 표 3과 같았다. 감(GAM) 10mL에 버섯 추출물 1%를 가하여 멸균한 후 유산균을 접종하고, 37℃의 항온기에서 12 - 24시간 동안 혐기적 조건에서 배양한 후 효소 활성을 측정하였다. 베타-글루크로니데이스(β-glucuronidase)에 대한 활성을 측정은 먼저 10mM p-니트로페닐-β-D-글루코피라노시드 40㎕, pH 7.0인 0.1M 인산 완충액 0.76mL, 효소액 0.2mL를 혼합하여 반응 혼합물을 제조하였다. 각 반응 혼합물을 37℃의 항온기에서 30분동안 보관하여 반응 시킨 다음 가성소다를 가하여 효소 반응을 종결시켰다. 효소 반응 종결 후 20분 동안 1000×g에서 원심분리하여 상등액을 분광광도계로 405nm에서 흡광도를 측정하여 효소 활성 억제 효과를 조사하였다.
트립토판나제(Tryptophanase) 효소활성은 반응혼합물(complete reaction mixture, 0.1M bicine(pH8.0), 4% pyridoxal 5-phosphate, 20% bovine serum albumin) 0.2ml, 0.02M 트립토판(tryptophan) 0.2ml 및 효소액 0.1ml을 가하여 30분 반응시키고 발색제(color reagent, p-dimethylaminobenzaldehyde 14.7g, 95% ethanol 948ml, C-H2SO452ml) 2ml을 가하여 반응을 종료 시킨 후 원심분리(2000xg, 20min)하고 상등액으로 550nm에서 흡광도를 측정하였다.
장내유해효소에 대한 버섯 유산균 발효물의 물과 에탄올 추출물의 저해 효과 크기는 90 ∼ 100%인 경우 +++++, 71 ∼ 89%인 경우 ++++, 51 ∼ 70%인 경우 +++, 31 ∼ 50%인 경우 ++, 10 ∼ 30%인 경우 +, 억제 효과가 없을 경우 -로 표시하였다. 전체적으로 버섯 유산균 발효물의 물 추출물 중에서 영지, 양송이, 석이, 표고, 상황, 느타리, 운지 버섯이 90 ∼ 100%의 억제 효과가 있었으며, 구름, 동충하초, 천마, 신령버섯은 유산균에 따라 90 ∼ 100% 또는 71 ∼ 89% 억제 효과가 있었으며, 나머지 버섯은 70% 이하의 억제 효과만을 나타내었다. 한편 버섯 유산균 발효물의 알콜 추출물은 물추출물과 비슷한 효과를 나타내었으나, 물추출물보다 효과가 증가하는 경향이 있었다.
| 유산균버섯 | 엘에이 | 엘비 | 엘시 | 엘엘 | 엘카 | 비비 | 비아이 | 비피 | 비티 | 에스프 | 에스티 | |||||||||||
| 추출물 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 | 물 | 알콜 |
| 영지 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ |
| 양송이 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ |
| 구름 | ③ | ④ | ④ | ④ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ④ | ④ | ④ | ④ | ④ | ④ | ④ | ④ | ④ |
| 석이 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ |
| 동충하초 | ⑤ | ④ | ④ | ④ | ④ | ⑤ | ④ | ④ | ③ | ④ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ④ | ④ | ⑤ | ④ | ④ | ④ | ④ |
| 신령 | ③ | ④ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ③ | ④ | ④ | ④ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ④ | ④ | ④ | ③ | ④ | ④ | ④ |
| 표고 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ |
| 상황 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ |
| 팽나무 | ② | ② | ② | ② | ① | ② | ② | ③ | ② | ③ | ② | ③ | ② | ② | ① | ② | ① | ② | ② | ② | ① | ② |
| 목이 | ② | ② | ① | ② | ② | ① | ② | ② | ② | ③ | ② | ② | ② | ② | ① | ② | ② | ② | ① | ① | ① | ① |
| 느타리 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ③ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ |
| 만가닥 | ② | ② | ② | ③ | ② | ③ | ③ | ③ | ② | ③ | ③ | ③ | ② | ③ | ① | ② | ② | ② | ② | ② | ② | ② |
| 잎새 | ② | ② | ① | ② | ② | ① | ② | ② | ② | ② | ② | ③ | ② | ② | ① | ② | ② | ② | ② | ② | ① | ② |
| 뽕나무 | ① | ② | ② | ③ | ② | ③ | ① | ② | ① | ② | ① | ② | ① | ① | ① | ③ | ① | ② | ① | ② | ① | ① |
| 운지 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ |
| 천마 | ④ | ④ | ④ | ④ | ③ | ④ | ③ | ④ | ④ | ④ | ④ | ④ | ⑤ | ④ | ④ | ⑤ | ④ | ④ | ⑤ | ④ | ④ | ⑤ |
유산균의 약어 명칭 : 엘에이(Lactobacillus acidophillus), 엘비(L. bulgaricus), 엘시(L. confusus), 엘엘(L. luteri), 엘카(L. casei), 비비(B. breve), 비아이(B. infantis), 비피(B. bifidum), 비티(B. thermophyllum), 에스프(Str. facecalis), 에스티(Str. thermophllus)
① : +, ② : ++, ③ : +++, ④ : ++++, ⑤ : +++++
실시예 5. 유산균 종류별 버섯 발효물의 동결 건조물 제조시 유산균 수
건조 버섯에 약 3 - 6배의 물을 가하여 4시간 정도 침지한 버섯, 혹은 생버섯을 믹서(mixer)나 콜로이드 분쇄기(colloidal mill)로 곱게 간 버섯 분쇄물에 아스코르브산 0.5%를 첨가하여 살균한 다음 방냉 후 유산균을 1%를 접종하여 0, 12, 24시간동안 37℃에서 발효시킨 버섯 발효물을 - 20 ∼ -40℃에서 동결하여 15∼ 24시간 냉동 건조하였을 때 유산균수가 ×1010이상은 ⑤로, ×109이상은 ④로, ×108이상은 ③으로 ×107이하는 ②로, × 106이하는 ①로 구분하여 표 4에 나타내었다. 발효전 유산균수는 0이었으나 12시간 발효시켰을 때는 대부분 X 108이상 이었으며, 24시간 발효시켰을 때는 X 109, X 1010이상으로 나타났으며, 12시간 발효한 것 보다 24시간 발효한 것이 유산균수가 전반적으로 많았다. 따라서 유산균을 이용하여 버섯 분쇄물을 12 ∼ 24시간 발효시키면 X 108이상의 유산균수를 얻을 수 있었다. 한국식품공전에서 유산균 제제로 사용하려면 1g당 108임에 비추어 버섯 발효물은 이보다 많거나 유사한 균수를 함유하고 있으므로 유산균 제제로 사용할 수 있을 보여주는 것이다. 또한 유산균으로 발효한 버섯 발효물은 헬리코박터 파이로리균에 대해 억제효과가 있으며, 장내 유해효소인 베타-루크로니데이스(β-glucuronidase)및 트립토판나제에 대한 활성을 억제하는 효과도 있어 위염 및 대장암 억제 식품 소재로 혹은 다양한 기능성 식품 소재 및 선식 소재로도 이용할 수 있는 것이다.
| 유산균버섯 | 엘에이 | 엘비 | 엘시 | 엘엘 | 엘카 | 비비 | 비아이 | 비피 | 비티 | 에스프 | 에스티 | |||||||||||
| 발효시간 | 12 | 24 | 12 | 24 | 12 | 24 | 12 | 24 | 12 | 24 | 12 | 24 | 12 | 24 | 12 | 24 | 12 | 24 | 12 | 24 | 12 | 24 |
| 영지 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ |
| 양송이 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ |
| 구름 | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ④ | ④ | ④ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ④ |
| 석이 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ④ | ④ | ④ | ④ | ⑤ |
| 동충하초 | ④ | ⑤ | ③ | ④ | ④ | ④ | ④ | ④ | ③ | ④ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ③ | ③ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ |
| 신령 | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ④ | ③ | ⑤ | ④ | ⑤ | ③ | ③ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ④ | ③ | ④ | ⑤ | ⑤ |
| 표고 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ |
| 상황 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ④ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ④ | ⑤ | ⑤ |
| 팽나무 | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ③ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ③ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ③ | ④ | ⑤ | ⑤ | ③ | ③ |
| 목이 | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ③ | ④ | ⑤ | ⑤ | ③ | ③ | ⑤ | ⑤ | ③ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ |
| 느타리 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ④ | ④ | ④ | ③ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ④ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ④ | ⑤ | ④ |
| 만가닥 | ④ | ⑤ | ④ | ④ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ |
| 잎새 | ④ | ⑤ | ④ | ④ | ③ | ④ | ⑤ | ⑤ | ③ | ③ | ④ | ⑤ | ③ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ③ | ③ | ⑤ | ⑤ |
| 뽕나무 | ⑤ | ⑤ | ③ | ④ | ③ | ④ | ④ | ④ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ③ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ③ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ |
| 운지 | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ⑤ |
| 천마 | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ⑤ | ④ | ⑤ | ④ | ④ | ④ | ④ |
유산균의 약어 명칭 : 엘에이(Lactobacillus acidophillus), 엘비(L. bulgaricus), 엘시(L. confusus), 엘엘(L. luteri), 엘카(L. casei), 비비(B. breve), 비아이(B. infantis), 비피(B. bifidum), 비티(B. thermophyllum), 에스프(Str. facecalis), 에스티(Str. thermophllus)
① : +, ② : ++, ③ : +++, ④ : ++++, ⑤ : +++++
이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명은 전술한 기술 구성으로 인하여 유산균인 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophillus), 락토바실러스 불가리쿠스(L. bulgaricus), 락토바실러스 컨푸수스(L. confusus), 락토바실러스 루테리(L. luteri), 락토바실러스 카제이(L. casei), 비피도박테리움 브레이브(B. breve), 비피도박테리움 인판티스(B. infantis), 비피도박테리움 비피덤(B. bifidum), 비피도박테리움 써모필럼(B. thermophyllum), 스트렙토코코스 페이스칼리스(Str. facecalis), 스트렙토코코스 써모필러스(Str. thermophllus)를 느타리,양송이, 신령, 표고, 팽나무, 만가닥, 목이, 잎새, 뽕나무, 송이, 영지, 동충하초, 상황, 구름, 석이, 운지, 천마버섯 추출물 혹은 이들 버섯에 접종하여 위궤양의 원인균인 헬리코박터파이로리(helicobactor pylori)의 성장을 억제하면서 장내 유해 효소인 베타-글루크로니데이스(β-glucuronidase)및 트립토판나제(Tryptophanase)의 활성을 억제하는 버섯 발효물을 제조할 수 있는 것이다. 또한 곱게 갈은 버섯 분쇄물에 유산균을 접종하여 발효시킨 버섯 발효물을 동결하여 동결 건조하여 유산균 버섯 발효 동결건조 분말을 얻을 수 있는 방법을 제조할 수 있는 것이다. 이들 소재는 위염 및 대장암 억제 식품 소재로 혹은 다양한 기능성 식품 소재 및 선식, 이유식 소재로도 이용할 수 있는 것이다.
Claims (4)
- 건조 버섯에 대략 6배의 물 혹은 에탄올을 가하고 끓이면서 6시간 추출한 다음 여과하는 것을 특징으로 하는 헬리코박터 파이로리 성장 저해 활성을 갖는 버섯 추출물의 제조방법.
- 버섯에 물을 2-6배 가하여 4시간 정도 침지한 후 믹서나 분쇄기로 곱게 간 버섯 분쇄물에 아스코르브산 0.5%를 첨가하여 살균한 다음 방냉 후 유산균을 1%를 접종하여 12 - 24시간 발효시키는 것을 특징으로 하는 헬리코박터 파이로리 성장 억제 및 베타-글루크로니데이스나 트립토판나제 활성 억제능을 갖는 유산균 버섯 발효물의 제조방법.
- 버섯에 물을 2-6배 가하여 4시간 정도 침지한 후 믹서나 분쇄기로 곱게 간 버섯 분쇄물에 아스코르브산 0.5%를 첨가하여 살균한 다음 방냉 후 유산균을 1%를 접종하여 12 - 24시간 발효시킨 버섯 발효물을 - 20 ∼ -40℃에서 동결하여 15 ∼ 24시간 냉동 건조하는 것을 특징으로 하는 동결건조 유산균 버섯 발효물 제조방법.
- 제2항 또는 제3항에 따라 제조되는 유산균 버섯 발효물을 함유하는 것을 특징으로 하는 건강 기능성 식품.
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