KR20040030676A - 락톤 포뮬레이션과 그 사용방법 - Google Patents

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KR20040030676A KR10-2003-7016356A KR20037016356A KR20040030676A KR 20040030676 A KR20040030676 A KR 20040030676A KR 20037016356 A KR20037016356 A KR 20037016356A KR 20040030676 A KR20040030676 A KR 20040030676A
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다비드떼르레로
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매그나켐 인터내셔널 레버러토리즈 아이엔씨
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Abstract

락톤의 구조를 가지며 락톤구조의 알파위치에 메틸렌 군을 가지는 Ia 와 Ic식의 화합물의 제조 및 이용방법은 공개되어 있다. 락톤 화합물은 친핵체와 반응하여 Ib식의 화합물에 락톤 고리를 연다. Ia식의 락톤과 그의 기능적 유도체들은시큐리다카 버가타(Securidaca virgata)로부터 분리되어 왔다. 정제된 화합물들은 항박테리아 그리고 항균성 활성에 대한 검사에서 그리고 암과 같은 증식분열 질병의 치료에 입증된 활성을 가지고 있다.

Description

락톤 포뮬레이션과 그 사용방법{LACTONE FORMULATIONS AND METHOD OF USE}
감염, 암, 그리고 다른 병들의 치료에 유용한 많은 다른 화합물들의 발전에도 불구하고, 적은 복용양으로 효과적이고 보다 선택적이며 적은 부작용을 가지거나 기존의 화합물에 대한 내성이 발달된 질병들을 치료할 수 있는 새로운 화합물의 발전의 필요성은 여전히 남아있다.
화학치료제는 감염, 암, 비정상적 분열증식 질병(자궁내막증, 리스테노시스, 건선), 그리고 다른 질병들의 치료에 사용된다. 대부분의 화학치료제는 특이성의 부족때문에 부작용을 가지고 있다. 예를 들면, 암은 죽음을 일으키는 것 중의 하나이다. 암을 치료하는 주요한 방법 중 하나인 화학치료는 세포성장과 복제를 제한하는데 특이하게 사용된다. 대부분의 화학치료제는 또한 종양과 일반 조직의 급속한 증식분열 세포들(에를 들면 골수, 모낭 등)에도 영향을 미치며, 그것은 머리카락의 손실, 현기증, 구토, 골수기능의 저하를 포함하는 많은 부정적인 부작용을 초래한다. 나아가, 이러한 약제들의 효과는 때때로 내성의 증가로 인에 시간에 따라 감소하게 된다.
따라서 본 발명의 목적은 항감염제 및/또는 항증식분열제로서 효과적인 새로운 부류의 화합물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 부작용을 최소화하기 위해 특이성 있게 세포파괴하는 효과적인 항종양제를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 현재 사용중인 많은 다른 약제들과는 구별되고 다른 항감염제를 제공하고, 약제 내성의 유기체에 대한 선택적인 치료방법을 제공하는 것이다.
본 발명은 일반적으로 약제학적으로 활성인 락톤, 그들의 약제학적 포뮬레이션, 그들의 사용방법, 그리고 항암제와 항전염성제로서 유용한 화학적으로 기능기화된 락톤의 합성제조방법의 분야에 관계된 것이다.
락톤의 구조를 가지며 락톤구조의 알파위치에 메틸렌 군을 가지는 Ia 와 Ic식의 화합물이 발견되었다. 락톤 화합물은 친핵체와 반응하여 Ib식의 화합물에 락톤 고리를 연다. Ia식의 락톤과 그의 기능적 유도체들은시큐리다카 버가타(Securidaca virgata)로부터 분리되어 왔다. 이러한 화합물들은 LMSV-6 또는 SecurolideTM로 알려졌다. 정제된 화합물들은 항박테리아 그리고 항균성 활성에 대한 검사에서 그리고 암과 같은 증식분열 질병의 치료에 입증된 활성을 가지고 있다. 시험관 분성에 기초하여, 락톤은 예컨대 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 췌장암, 폐암, 간암, 난소암, 식도암, 그리고 백혈병을 포함하는 증식분열 질병들을 치료하는데 유용하다. 그들은 또한 소화성 궤양, 치은염, 치주염을 포함하는 박테리아나 균류의 감염의 치료에 효과적이다.
Ia 와 Ic식의 화합물을 만드는 방법은 일반적으로 a) 락톤의 구조를 가지는 전구체를 제공하는 것, b) 전구체와 하나이상의 화학제가 반응하여 락톤 구조의 알파위치에 메틸렌 군을 가지는 산물을 제공하는것 을 포함하고 있다. 그 산물은 알코올, 알콕사이드, 아민, 또는 어떤 다른 중성의 또는 음이온성의 친핵체같은 친핵성 물질과 함께 다루어 Ib식의 화합물을 만들어낸다.
Ⅰ. 락톤 합성
A. 시큐리다카 버가타(Securidaca virgata) 로부터의 분리된 락톤
엑소시클릭 메틸렌 그룹을 가지는 락톤과 감마 위치에 하이드록실을 가지는 그들의 각각의 유도체들이 공개되었다. 락톤과 그들의 유도체들은 합성되거나 또는 천연물질로부터 분리될 수 있다. 그 하나의 실시예로, 락톤과 그 유도체들은 그 식물과가 폴리갈락시아에 속하는 분류학적 명칭이시큐리다카 버가타(Securidaca virgata)인 식물로부터 크로카노그래피법에 의해 분리될 수 있다. 여기에서 사용되는 단어 "락톤"은 C=O그룹의 산소원자가 황원자나 질소그룹에 속하는 것에 의해 치환될 수 있는 다섯개의 고리의 락톤 구조를 가지는 어떤 유기 화학물을 포함한다. 여기에서 사용되는 단어 "유도체"는 하나이상의 화학물질과 락톤의 반응에 의한 락톤으로부터 만들어지는 어떤 화합물을 의미한다. 그 단어는 또한 예컨대 산, 에스테르, 아미드, 또는 그들의 어떤 다른 산물을 형성하기 위하여 유기 또는 무기 친핵체와 함께 락톤의 고리 열림으로 얻을 수 있는 어떤 산물을 의미한다.
하나의 실시예에서, 락톤은 다음의 화학구조를 갖는다.
Ia식
여기에서, 독립적으로 취해진 R1내지 R6또는 함께 취해진 R3내지 R6는 수소원자, 할로겐 원자, 하이드록실 그룹, 또는 어떤 수의 탄소 원자 바람직하게는 1 내지 8의 탄소원자를 포함하는 어느 다른 유기 그룹이며, 선택적으로 선형, 가지달린, 또는 환형 구조형식의 산소, 황, 질소 족을 포함하며 대표적 R1내지 R6그룹으로 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 페닐, 치환된 페닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 할로, 하이드록실, 알콕시. 치환된 알콕시, 페녹시, 치환된 페녹시, 아록시, 치환된 아록시, 알킬티오, 치환된 알킬티오, 페닐티오, 치환된 페닐티오, 아릴티오, 치환된 아릴티오, 시아노, 이소시아노, 치환된 이소시아노, 카르보닐, 치환된 카르보닐, 카르복실, 치환된 카르복실, 아미노, 치환된 아미노, 아미도, 치환된 아미도, 술포닐, 치환된 술포닐, 술포닉산, 포스포릴, 치환된 포스포릴, 포스포닐, 치환된 포스포닐, 폴리아릴, 치환된 폴리아릴, C1 내지 C20의 시클릭, 치환된 C1 내지 C20의 시클릭, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, 아미노산, 펩타이드, 또는 폴리펩타이드 그룹이다.
Z는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족과 같은 헤테로원자이다.
X는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족과 같은 헤테로원자이다.
또 다른 실시예에서, 화합물은 다음의 화학구조를 가지고 있다.
Ib식
여기에서, 독립적으로 취해진 R1내지 R7또는 함께 취해진 R3내지 R6는 수소원자, 할로겐 원자, 하이드록실 그룹, 또는 어떤 수의 탄소 원자 바람직하게는 1 내지 8의 탄소원자를 포함하는 어느 다른 유기 그룹이며, 선택적으로 선형, 가지달린, 또는 환형 구조형식의 산소, 황, 질소 족을 포함하며 대표적 R1내지 R6그룹으로 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 페닐, 치환된 페닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 할로, 하이드록실, 알콕시. 치환된 알콕시, 페녹시, 치환된 페녹시, 아록시, 치환된 아록시, 알킬티오, 치환된 알킬티오, 페닐티오, 치환된 페닐티오, 아릴티오, 치환된 아릴티오, 시아노, 이소시아노, 치환된 이소시아노, 카르보닐, 치환된 카르보닐, 카르복실, 치환된 카르복실, 아미노, 치환된 아미노, 아미도, 치환된 아미도, 술포닐, 치환된 술포닐, 술포닉산, 포스포릴, 치환된 포스포릴, 포스포닐, 치환된 포스포닐, 폴리아릴, 치환된 폴리아릴, C1 내지 C20의 시클릭, 치환된 C1 내지 C20의 시클릭, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, 아미노산, 펩타이드, 또는 폴리펩타이드 그룹이다.
X는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족과 같은 헤테로원자이다.
Z는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족과 같은 헤테로원자이다.
Z'은 수소원자,할로겐 원자,하이드록실 그룹, 또는 1내지 8의 탄소원자를 포함하는 어느 다른 유기 합성물일 수 있고 선택적으로 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족과 같은 헤테로원자를 포함한다.
또 다른 실시예에서, 알파-메틸렌 그룹을 가지는 락톤은 아래에보여진 것과 같은 구조를 가질 수 있다.
Ic식
여기에서, 독립적으로 취해진 R1내지 R9또는 함께 취해진 R5와 R6는 수소원자, 할로겐 원자, 하이드록실 그룹, 또는 어떤 수의 탄소 원자 바람직하게는 1 내지 8의 탄소원자를 포함하는 어느 다른 유기 그룹이며, 선택적으로 선형, 가지달린, 또는 환형 구조형식의 산소, 황, 질소 족을 포함하며 대표적 R1내지 R6그룹으로 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 페닐, 치환된 페닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 할로, 하이드록실, 알콕시. 치환된 알콕시, 페녹시, 치환된 페녹시, 아록시, 치환된 아록시, 알킬티오, 치환된 알킬티오, 페닐티오, 치환된 페닐티오, 아릴티오, 치환된 아릴티오, 시아노, 이소시아노, 치환된 이소시아노, 카르보닐, 치환된 카르보닐, 카르복실, 치환된 카르복실, 아미노, 치환된 아미노, 아미도, 치환된 아미도, 술포닐, 치환된 술포닐, 술포닉산, 포스포릴, 치환된 포스포릴, 포스포닐, 치환된 포스포닐, 폴리아릴, 치환된 폴리아릴, C1 내지 C20의 시클릭, 치환된 C1 내지 C20의 시클릭, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, 아미노산, 펩타이드, 또는 폴리펩타이드 그룹이다.
독립적으로 취해진 Y1, Y2및 Y3또는 함께 취해진 Y1과 Y2는 수소원자, 할로겐 원자, 하이드록실 그룹, 또는 어떤 수의 탄소 원자 바람직하게는 1 내지 8의 탄소원자를 포함하는 어느 다른 유기 그룹이며, 선택적으로 선형, 가지달린, 또는 환형 구조형식의 산소, 황, 질소 족을 포함하며 대표적 R1내지 R6그룹으로 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 페닐, 치환된 페닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 할로, 하이드록실, 알콕시. 치환된 알콕시, 페녹시, 치환된 페녹시, 아록시, 치환된 아록시, 알킬티오, 치환된 알킬티오, 페닐티오, 치환된 페닐티오, 아릴티오, 치환된 아릴티오, 시아노, 이소시아노, 치환된 이소시아노, 카르보닐, 치환된 카르보닐, 카르복실, 치환된 카르복실, 아미노, 치환된 아미노, 아미도, 치환된 아미도, 술포닐, 치환된 술포닐, 술포닉산, 포스포릴, 치환된 포스포릴, 포스포닐, 치환된 포스포닐, 폴리아릴, 치환된 폴리아릴, C1 내지 C20의 시클릭, 치환된 C1 내지 C20의 시클릭, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, 아미노산, 펩타이드, 또는 폴리펩타이드 그룹이다.
Z는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족과 같은 헤테로원자이다.
X는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족과 같은 헤테로원자이다.
다른 실시예에서, 락톤은 다음의 구조를 가지는 알파-메틸렌-락톤인 시큐로라이드(securolide)이다.
또 다른 실시예에서, 에스테르는 다음의 구조에서 보여진 것과 같이 메틸 α-메틸렌-γ-하이드록시-부탄노에이트(2)이다.
또 다른 실시예에서, 락톤은 다음의 구조를 갖는 바이시클릭 화합물이다.
B. 첨가물들
락톤과 그 기능적 유도체들은 장의, 비경구의, 또는 국부적 투여에 대한 표준 기술을 사용함으로서 계통화될 수 있다. 효과적인 복용량은 실시예들에서 기술된 검사방법과 같은 당업자에게 알려진 시험관 검사에 기초하여 결정될 수 있다.
비경구적인 운반에 대한 적절한 약제학적으로 받아들일 수 있는 용액(운반체)들은 중성 염류, 포스페이트로 버퍼된 염류, 그리고 고분자적 미세구체, 미세캡슐, 리포좀, 그리고 에멀젼을 포함하는, 주입을 위한 표준 미세미립자군의 포뮬레이션을 포함한다. 이것들은 폴리락틱산, 폴리글리콜릭산, 그들의 공중합체, 폴리안하이드라드, 폴리오르토에스테르, 폴리아이드록시알카노에이트와 같은 화학적으로 분해가능한 고분자들을 포함할 수 있다. 주입을 위하여, 락톤은 전형적으로 액체운반체로 용액이나 서스펜션으로 계통화될 것이다.
국부적인 운반을 위하여, 락톤은 연고, 로션, 겔, 스프레이, 또는 제어되거나 지속적인 방출 포뮬레이션(피부를 통한 패치와 같이)으로 계통화될 수 있다.
장을 통한 운반을 위하여, 락톤은 정제, 캡슐, 서스펜션 또는 용액, 용해되거나 또는 락토스 당과 같은 첨가제로 캡슐화된 것, 마그네슘 스테아레이트, 파라핀유도체, 글리콜이나 아라빅 검과 같은 안정화된 화합물의 형태로 계통화될 수 있다. 포뮬레이션은 나아가 염료, 향료, 방부제, 분산 또는 에멀젼화제, 또는 포뮬레이션의 방출 또는 안정 특성을 변형시키는 물질들을 포함한다.
활성 화합물은 티니다졸과 메트로니다졸 등의 니트로이미다졸 항생제; 테트라시클린, 독시시클린, 미노시클린 등의 테트라시클린즈; 아목시실린, 메지오실린 등의 페니실린; 세파클로, 세파드록실, 세타드린, 세푸록심, 세푸록심 악세틸, 세팔렉신, 세프포독심 프록세틸, 세파지딤, 세파트리악손 등의 세팔로스포린; 이미페넴, 메로페넴 등의 카바페넴; 파로모마이신 등의 아미노글리코시드; 에리쓰로마이신, 클래리쓰로마이신, 아지쓰로마이신 등의 매크로리드 항생제; 클린다마이신 등의 린코사미드 항생제; 리팜피신, 니트로퓨란토인 등의 리팡신과 같은 둘째의 약제학적으로 받아들일 수 있는 항미생물제와 함께 사용될 수 있다.
오메프라졸, 란소프라졸 등의 산 펌프 억제재; 래니티딘, 시메티딘, 파모티딘 등의 H2길항제와 같이, 약제학적 산-낮춤 제재와의 화합물의 화합은 산-관련 질병의 치료에 사용될 수 있다.
Ⅱ. 락톤의 합성
락톤과 그들 각각의 유도체들의 합성은 알파-메틸렌 그룹을 형성하는 단계를 포함한다. 일반적으로, Ia식과 Ib식의 화합물을 만드는 방법은 다음의 것을 포함한다; a) 락톤 구조를 갖는 전구체를 제공하는 것, b) 락톤 구조의 α위치에 메틸렌 그룹을 갖는 산물(product)을 제공하기 위하여 하나 이상의 화학제재와 전구체를 반응시키는 것. 산물은 알코올, 알콕사이드, 아민, 또는 어느 다른 중성 또는 음이온적 친핵체와 같은 친핵성 물질과 함께 다루어 Ib식의 화합물을 만들어낸다.
메틸렌 그룹의 형성방법은 합성유기화학(예컨데, March, "Advanced OrganicChemistry" 4판, 1992, 윌리인터사이언스 출판, 뉴욕)에 잘 기술된 표준 기술들이다. 락톤은, 예를 들면 다섯개의 고리를 가진 락톤으로부터 출발하고 분자에 메틸렌 그룹을 첨가하기 위해 알파 위치에서 유도체를 형성함으로서 합성될 수 있다.
예를 들면, 도식 1(scheme 1)에 보여진 것과 같이, 구조(1)을 갖는 화합물과 염기, 알코올,그리고 에스테르를 반응시켜 엔놀레이트를 만들어 내는데 이것은 구조(4)의 락톤의 전구체이다(도식 1 참고).
도식 1
락톤(4)는 유기합성 분야에서 사용될 수 있는 표준 합성 기술을 사용하여 더욱 더 유도체를 만들 수 있다(예컨대, March,Supra). 예를 들면, 카르복실 그룹 기능화된 락톤(4)은 예컨대, 구조(1)을 가진 화합물과 락톤의 알파 카르복실레이션에대한 제재(MMC, 메틸-마그네슘-카보네이트), 트리에틸아민과 같은 염기의 존재하의 알데히드와 반응하여 구조(4)의 락톤, 그것은 분리된 자연적 발생의 락톤인데,을 생산하는 것에 의해 제조될 수 있다.
도식 2
도식 2에서, 기능화된 메틸렌 그룹 락톤(4)은, 구조(1)을 가진 화합물과 메틸-마그네슘-카보네이트(MMC), 염기 NN-다이메틸포름아미드[DMF-HCON(CH3)2]로 버퍼된 알데히드와 반응시켜 카드복시산 기능화된 락톤(1B)을 생산하고 락톤(1B)을 알데히드, 다이에틸아민, 소디움아세테이트, 아세틱산으로 처리하여 락톤(4)을 만들어 내는 것에 의해 제조된다.
다른 기능기화된 락톤유도체들은 손쉽게 제조될 수 있다. 예를 들면, 기능화된 유도체 락톤(9)는 다음과 같이 반응시켜 제조될 수 있다. 구조(5)를 가지는 화합물과 무기산, 알코올을 가열하여 환류(reflux)시켜 반응시키고 염기로 환원하여 구조(7)의 산물을 만들어 낸다. 구조(7)과 염기, 알콜, 에스테르와의 반응은 엔올레이트를 만들며 이것은 화합물(9)의 기능화된 락톤의 전구체이다(도식 3).
도식 3
보다 더 기능화된 락톤도 이 분야에서 활용가능한 합성방법에 의해 쉽게 제조될 수 있다(예를 들면, March, "Advanced Organic Chemistry" 4판, 1992, 윌리인터사이언스 출판, 뉴욕). 예컨데, 기능화된 락톤(4)는 구조(1)을 가진 화합물과 염기, 알코올, 에스테르를 반응시켜 구조(4)의 락톤 에 대한 전구체인 엔올레이트를 생산하는 것에 의해 제조될 수 있다(도식 4).
도식 4
산의 형태이든 또는 아민과 같은 염기의 형태이든, 식 Ia-c의 락톤 화합물의 약제학적으로 수용가능한 염들은 식 Ia-c의 화합물의 용액 또는 서스펜션과 대략 등가 당량의 약제학적으로 수용가능한 염기 또는 산과 처리시키는 전통적 방법에 의해 제조될 수 있다. 전통적인 농축방법과 재결정방법은 염을 분리하는데 적용된다.
Ⅲ 치료방법
A. 치료되는 질병들
실시예에서 기술된 것에 의해 결정된 활성에 기초하여, 락톤은 항감염제와 항증식분열제로서 유용하다. 특히 락톤은 박테리아나 균류의 성장, 바이러스성 질병을 억제하고 박테리아성 또는 균성 질병을 치료하는데 효과적인 양으로 투여될수 있다.
잘 치료되는 박테리아성 질병들의 예는 소화성 궤양, 위염, 소화불량, 치주질환, 치은염을 포함한다. 살균제의 조성물은 살균적으로 효과적인 양의 식1의 확합물 또는 그 염과 안정한 약제학전 운반체를 포함한다. 약제학적 조성물의 예들은 단순한 또는 당으로 코팅된 정제, 젤라틴 캡슐, 미립자, 좌약, 주입식의 것, 연고, 크림, 겔의 형태일 수 있다.
살균제의 조성물은 특히사카로미세스 세레비시에, 칸디다 알비칸스, 칸디다 글라브라타, 크루세이, 트로피칼리스, 쉐도트로피칼리스와 파랍실로시스와 같은 그 밖의칸디다,애스퍼길러스 푸미가투스, 애스퍼길러스 플라버스, 애스퍼길러스 니거, 크립토콕커스 네오포르만스, 마이크로스포럼 카니스, 트리코피톤 러브런, 트피코피톤 멘타그로파이트에 효과가 있으며, 특히 소화기의, 빈뇨기의, 질의 또는 피부의 칸디다증, 효모균증, 예를 들면 신경뇌막염, 폐의 또는 피부의 효모균증, 폐기관지의 또는 폐의 아스페프길루스증, 그리고 면역저하된 시스템의 침투적인 아스페르길루스증과 잘 싸운다. 조성물은 선천적 또는 후천적인 면역학적 억제에 있어서 진균성의 질환의 예방에 사용될 수 있다.
락톤은 암들을 포함한 증식분열하는 질환을 치료하기 위해 투여될 수 있다. 세포성장의 억제 또는 분열증식을 보여주는 대표적 유형의 암들은 유방암, 폐암, 난소암, 식도암, 백혈병을 포함한다. 락톤이 유용하게 사용될 수 있는 다른 유형의 비정상적 증식분열 질환은 자국내막증과 레스테노시스(restenosis)이며 혈관 형성시의 내피조직의 비정상적인 과도한 증식분열에 의해 생긴다.
기능화된 락톤(9)는 특히 아스파틱 프로테아제 저해제로서 유용하며, HIV-1의 아스파틱 프로테아제를 저해하고 바이러스성 과정을 저해하며 특히 바이러스성 유전자 산물들(gag/gag-pol)의 후속 번역과정을 저해하는데 유용하다.
이러한 락톤들은 또한 신경전달물질로서 그 활성을 통하여 자극반응을 조절하는데 유용하다.
B. 복용량
효과적인 양은 치료될 병이나 질환에 따라 결정될 것이며, 투여 방법이나 형태도 마찬가지이다. 효과적인 복용량은 실시예에서 기술된 것가 같이 시험관 검사를 사용하여 결정된 효과적 복용량에 기초하여 결정될 수 있다.
대장균,클레브시엘라 뉴모니에, 쉐도모나 에어로기노사, 스타필로커스 오레우스에 대한 시큐로라이드(LMSV-6)의 높은 활성과 그 낮은 분자량은 매우 유리하다. 시큐로라이드의 장점은 편리성과 약리학적 반응을 촉진하는 신속함을 포함한다; 세포막 장벽을 통과하는 그 능력이 좋은데 높은 분자량은 주요한 장애물이다. 그리고 약물에 대한 내성이 강한 미생물의 하나인쉐도모나스에 대한 강력한 활성이 있다.
균의 감염에 싸우는 방법은 살균적으로 효과가 있는 양의 식Ⅰ의 화합물 또는 그들의 산첨가 염을 구강으로, 직장으로, 비경구적으로 또는 피부와 점액질의 막으로 국부적으로 적용하는 방법으로 투여하는 것을 포함하는데 바람직한 것은 구강투여방법이다. 보통의 하루 복용량은 투여 방법, 치료조건, 특별한 화합물의 종류에 따라 1 내지 5 mg/kg이다.
화합물들은 단독으로 투여될 수도 있지만 일반적으로는 의도하는 투여 경로와 표준적인 약제학적 관습에 따라 선택된 약제학적 운반체와 혼합되어 투여된다. 예를 들면, 그들은 구강으로 또는 녹말이나 락토스등의 첨가물과 같은 것을 함유하는 정제의 형태로, 캡슐단독으로 또는 첨가물과 혼합된 캡슐로, 또는 향료나 착색제를 포함하는 엘리서나 서스펜션의 형태로 투여된다. 동물의 경우에는, 그것들은 동물의 먹이나 마실 것에 약 5 내지 5000 ppm의 농도로, 바람직하게는 25 내지 500 ppm의 농도로 넣어서 효과적으로 사용될 수 있다. 그것들은 비경구적으로 주입될 수 있는데 예를 들면 근육내로, 정맥내로, 또는 피하주사의 방법이 있다. 비경구적 투여에 대하여, 그들은 등장용액을 만들기 위해 충분한 염이나 글루코스를 넣는 등의 다른 용질을 함유하는 중성의 수용액의 형태로 사용되는 것이 최상이다. 동물의 경우에는, 화합물은 근육내로 또는 피하내로 약 0.1 내지 50 mg/kg/day, 바람직하게는 0.2 내지 10 mg/kg/day의 복용정도로 단일 하루복용량이나 4회 나누는 복용량으로 투여될 수 있다.
화합물은 구강 또는 비경구적인 방법으로H. 필로리(H. pylori)감염의 치료를 위해 인간에게 투여될 수 있으며 약 0.1 내지 50 mg/kg의 복용 수준으로, 효과적으로는 약 0.5 내지 50 mg/kg/day 의 양으로 단일 복용이나 4차례에 나누어 복용할 수 있다. 근육내로 또는 정맥내로의 투여에 대하여, 복용 수준은 약 0.1 내지 100 mg/kg/day, 바람직하게는 약 0.5 내지 50 mg/kg/day 이다. 근육내로의 투여는 단일 복용이나 4회 나누어 복용하는 것인 반면 정맥내의 투여는 지속적인 적하를포함할 수 있다. 치료받는 대상의 중량과 상태에 따라 다양한 변화가 필요적으로 발생할 수 있고 선택된 특별한 투여 경로는 이 분야의 당업자에게 잘 알려져 있다.
둘째의 항균제와 산-낮춤 물질은 본 발명의 화합물에 대해 위에서 논의된 것과 동일한 방법으로 화합물과 같이 투여될 수 있다. 따라서, 특별한 물질에 따라서, 투여는 약 0.1 내지 500 mg/kg으로, 예컨대, 둘째의 항균제는 하루당 1 내지 3g, 산-낮춤 물질은 하루에 약 40 내지 80 mg으로 구강투여되거나, 주사로 약 0.1 내지 200 mg/kg/day이다.
본 발명은 다음의 비제한적인 실시예들을 참고하여 좀 더 이해될 수 있을 것이다.
실시예 1 : 시큐리다가 버가타(Securidaca virgata) 로부터의 락톤의 분리
시큐리다가 버가타뿌리는 산 크리토발 도미니카 공화국에서 수집되었다. 기생부분의 샘플이 국립식물정원에 식별을 위해 보내졌다. 공기에 건조되고 잘게 잘라지고 밀어진 뿌리(253g)는 소클렛(Soxhlet)장치에서 추출되었다. 저온성의 추출물은 필터된 후 진공(55℃)에서 농축되어 시럽 액체(29.76g)를 제공하였으며 이는 11.76%의 수율이다. 이 시럽(28g, 미세생물학적으로 실험된)은 300 ml의 0.5M 황산으로 처리하였고 4시간동안 저어주었으며 클로로포름을 사용하여 액체-액체 추출방법으로 추출하였으며 그것은 시럽이 산 클로로포름 용해물질로부터 완전히 분리될 때까지 했다. 그리고 나서 수용상(hydrosoluble phase)은 암모니움 하이드록사이드20%(pH=8 내지 9)로 염기화하고 수용상은 다시 클로로포름으로 추출한다. 클로로포름 추출물은 진공(50℃)에서 농축하여 5.92g의 추출물을 산출한다(수율은 크루드한 추출물과 관련해서는 21.14%이고 추출된 뿌리와 관련해서는 2.33%이다). 5.92g은 순도 95.34%의 LMSV-6(SecurolideTM)이다. 최종적인 클로로포름 추출물(5.92g)은 염기 알루미나(63 내지 150 미크론)로 크로마토그래피하고 페트롤리움 에테르-에틸아세테이트 혼합물(30:70)으로 용출시킨다. 수집된 단편들은 농축시켜 순수한 맑은 액체물질(SecurolideTM)(1)을 얻는다. (1)이 분리된 액체크로마토그래피 칼럼으로부터의 크로마토그래피의 단편들 72-97 (674 mg)은 다시 크로마토그래피하여 호박색의 액체(2)를 얻는다. 화합물(1)과 (2)는 생분석을 하여 테스트된다.
분광학적 분석은 화합물(1)에 대한 다음의 데이타를 산출했다.
물리적 데이타
상대 밀도 : 1.070 g/mL pH = 5.853
굴절율 = 1.471
분광 데이타
매스스펙트로메트리 : MS m/z (rel.Int,) : 분자이온 98.0[M+], (54), 68(100), 분자식 C5H6O2
적외선분광(IR) : 1761.6cm-1(락톤), 1667cm-1(C=C), 810cm-1(C=CH2)
프로톤핵자기공명(NMR1H, 200 MHz, CDCI3) : δ2.98 ppm(2H 멀티플릿), 4.37 ppm(1H 트리플릿, J=7.4Hz), 5.65(1H 트리플릿, J=2.6Hz),6.22(1H 트리플릿, J=2.6Hz)
탄소13핵자기공명(NMR13C, CDCI3) : δ170.7(C-1), 133.3(C-2), 27.4(C-3), 65.5(C-4), 122.2(C-5)
이중핵자기공명프로톤실험(방사) : 이중핵자기공명프로톤실험은 존재하는 프로톤(양성자)의 각각사이에서의 커플링을 보여준다. 메틸렌의 바깥 환형 프로톤 δ(5.65와 6.22), C-3의 방사는 C-4와의 커플링을 보여주며 이런식으로 (1)의 프로톤의 연결이 결정되었다.
분광학적 분석은 화합물(2)에 대한 다음의 데이타를 산출했다.
매스스펙트로메트리 : 130.0(M+, 3), 113(M+-OH, 12), C6H10O3.
적외선 분광(IR) : 3614.6cm-1(OH), 1629cm-1(C=C), 1150.9cm-1(-CO-OCH3), 810cm-1(C=CH2)
프로톤핵자기공명(NMR1H, 200 MHz, CDCI3) : δ2.54 ppm(2H td, J=6.26Hz), 3.73(s), 3.72(2H 트리플릿, J=6.26Hz), 5.65(1H 트리플릿, J=1.2Hz),6.21(1H 트리플릿, J=1.2Hz)
탄소13핵자기공명(NMR13C, 200 MHz, CDCI3) : δ167.8(C-1), 137.2(C-2), 35.4(C-3), 61.3(C-4), 127.5(C-5), 51.93(C-6).
식 1(Securolide)의 화합물을 함유하는 약제학적 조성으로 이루어지는 앰플은 다음의 구성성분을 가지고 있다.
원래의 양 : 750 Amp
원료 중량 UM
LMSV-6(Securolide) 51.7900 mL 6.27%
참기름 760.8200 mL 92.20%
벤실릭 알코올 12.3750 mL 1.50%
U.S.P.
총 부피 824.9850 mL 99.97%
실시예 2 : 항박테리아 활성에 대한 분석
실시예 1에서 얻은 물질은스타필로콕커스 오레우스, 쉐도모나스 에어로기노사, 대장균, 그리고 클레브시엘라 뉴모니에에 대항하여 항생활성을 위하여 스크린되었다.
물질과 방법들
용매: 버퍼 포스페이트 0.1N, pH=8.0
항생제: LMSV-6(Securolide)
배지 코팅: 2 mL/100 mL
접종물: 4 mL/Petri Dish
배양배지의 준비
스타필로콕커스 오레우스 (USP 23<81>)을 위한 배양 배지
펩톤 1.0g
소화성의 췌장 카세인 4.0g
효모 추출물 3.0g
쇠고기 추출물 1.0g
덱스트로스 1.0g
우무 15.0g
멸균후 pH 66±.01
쉐도모나스 에어로기노사 (USP 23<81>)을 위한 배양 배지
소화성의 췌장 카세인 17.0g
소화성 콩 파파인 3.0g
소디움 클로라이드 5.0g
이염기성 포타슘 포스페이트 2.5g
덱스트로스 2.5g
우무 20.0g
1.0 Lit 를 만들기 위한 물
멸균후 pH 7.2±0.1
대장균, 그리고 클레브시엘라 뉴모니에 (USP 23<81>)을 위한 배양 배지
펩톤 5.0g
효모 추출물 1.5g
쇠고기 추출물 1.5g
소디움 클로라이드 3.5g
덱스트로스 1.0g
이염기성 포타슘 포스페이트 3.68g
모노염기성 포타슘 포스페이트 1.32g
1.0 Lit 를 만들기 위한 물
멸균후 pH 7.0±0.05
농도(㎕/10mL)
박테리아 LMSV-6(puro) 0 20 30 40 Ciprof Fosf Dis(-) Dis(+)
대장균 30(mm) . . . . 28 10 . .
Kleb 40 . . . . 26 22 . .
Ps.A 30 . . . . 12 6 . .
St.a 30 . . . . 20 18 . .
Str. P . N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A
억제지역 측정단위는 밀리미터(mm)이다.
Ciprof = 시프로플록사시나(Ciprofloxacina) 5 마이크로그램의 민감도 디스크(Disc)
Fosf = 포스포미시나(Fosfomicina) 5 마이크로그램의 민감도 디스크(Disc)
Dis(-) = 적용되는 물질을 가지고 있지 않은 상태의 민감도 디스크
Dis(+) = 2%에서 60 내지의 20 마이크로리터를 가진 것의 민감도 디스크
N/A = 시험되지 않은 것
사용된 미생물들은 미국식의 배양에 의해 표준화되었다.
첫 세대에서 사용된 컬렉션(ATCC):
대장균(E. coli)ATCC35218, Lot202602, Exp. 05/2000(19-258)
*Kleb.클레브시엘라 뉴모니에, ATCC13882, Lot202174,Exp.02/2000(19-152)
*Ps.A쉐도모나스 에어로기노사,ATCC27853, Lot202992,Exp.08/2000(19-060)
*St.A스타필로콕커스 오레우스,ATCC12598, Lot202564,Exp.05/2000(19-137)
**Str.P스트렙토커스 피오지네스, ATCC21547, Lot202691,Exp.06/2000(19-190)
*= 대기중의 산소, 온도 =35±2℃
**=대기중의 이산화탄소, 온도 = 35±2℃
결과
5 마이크로리터의 LMSV-6(Securolide)는스타필로콕커스 오레우스, 쉐도모나스 에어로기노사, 대장균, 그리고 클레브시엘라 뉴모니에의 성장을 억제한다.
희석도:
10 ㎕/10 mL, (0.001 ㎕/mL)
20 ㎕/10 mL, (0.002 ㎕/mL)
30 ㎕/10 mL, (0.003 ㎕/mL)
그리고 40 ㎕, (0.004 ㎕/mL)의 LMSV-6(in 10 mL)로 60 내지 2%의 것은 박테이아성 성정을 억제하는 것을 보여주지 않았으며 이는 이러한 농도들은 최소한의 억제 농도(MCI)이하이다.
실시예 3 : 최소한의 박테리아성의 결정(팔련구군속(Sarcina) 루테아(lutea)와 억제 농도, MIC, LMSV-6(Securolide).
물질과 방법:
방법론 : 플레이트에 붓기, 뮐러-힌톤배지 pH=8
세프트리액손 패턴 희석 버퍼 pH=8
LMSV-6(Securolide)희석에 대해 2%에서 20 내외
미생물 :사르시나 루테아
샘플 : LMSV-6(16.0 ㎕/100 mL 그리고 민감도 디스크에 적용되는 10 ㎕)
방법론 : 플레이트에 붓기, 뮐러-힌톤배지 pH=8
세프트리액손 패턴 희석 버퍼 pH=8
LMSV-6(Securolide)희석에 대해 2%에서 20 내외
미생물 :사르시나 루테아
샘플 : LMSV-6(10 ㎕/mL 그리고 민감도 디스크에 적용되는 20 ㎕)
조절패턴(P): 세프트리액손(10 mcg 를 갖는 디스크)
결과
디스크에 적용되는 부피 억제지역
5 ㎕ 42.0 mm
1.6 ㎕ 20.0 mm
특별한 억제지역은 없다. 따라서 최소 억제 농도는 0.2 ㎕의 LMSV-6에 가깝다. 대략적인 MIC는 0.2 ㎕의 LMSV-6 3.3 mm 억제이다.
실시예 4 : 박테리아성 감염의 생체내 치료
쥐가 수술로 감염되었고 성공적으로 세프트리액손과 비교 기초하여 계산된 복용량을 사용한 시큐로리드로 치료하였다.
실시예 5 : 항종양 활성에 대한 분석
물질과 방법들:
포유동물의 세포를 살리거나 증식분열하는 것을 측정하는 것을 요구하는 수 많은 생물학적 분석하는 방법이 있다. 이것은 다른 방법들에 의해 성취될 수 있는데 예컨대 염료를 포함하거나 배제하는 세포를 계산하는 것; 세포 용해후에 방출되는51Cr표지된 단백질을 측정하는 것; 그리고 세포 분열증식되는 동안 방사성 뉴클레오티드인 방사성 [3H]띠미딘 (또는 [125I]아이오도디옥시우리딘)의 합침을 측정하는 것이다. 생존가능한 세포는 여러가지 착색 방법의 어느 것을 사용하여 측정될 수 있지만 보다 정확한 방법은 멀티웰 스캐닝 분광광도계(ELISA 판독기)이며 그것은 많은 수의 샘플들을 높은 수준의 정확성을 갖고 측정할 수 있다.
죽은 세포나 조직 배양배지에 의해서가 아닌 어떤 살아있는 세포에 의한 색채있는 산물에 변형된 색채없는 기질을 사용하여 살아있는 세포를 탐지하는 색채계적 분석(colorimetric assay)이 사용되었다. 그 분석은 테트라졸리움염 MTT[3-(4,5-다이메틸띠아졸-2-일)-2,5 다이페닐 테트라졸리움 브로마이드]을 사용하여 다양한 탈수소화 효소의 활성을 측정한다(Slater et.al. 1963). 테트라졸리움 고리는 활성 미토콘드리아에 의해 분열되고 그래서 이 반응은 단지 살아있는 세포에서 일어난다. 미토콘드리아 효소 호박산 탈수소화제에 의한 MTT의 포르만잔으로의 분열은 짙은 블루색의 화합물(포르만잔(Formanzan))을 만들며 그 양은 존재하는 세포의 수에 비례한다. 시큐롤리드 농도의 변화도에서 포르만잔의 농도는 멀티웰 스캐닝 분광광도계(ELISA 판독기)에 의해 측정된다. 데이타 분석이 사용되어 억제 농도 50(IC50)이 확립되며 그것은 항종양 활성의 정량적 파라미터이다. 다른 암 세포라인은 LMSV-6(Securolide)의 세포파괴적 또는 항종양 활성(살아있는 세포)을 간접적으 로 측정하기 위해 테스트되었다. 테스트된 암세포라인은 HEP 2(라린지 카르시노마)와 HELA(세르빅스 카르시노마)를 포함한다.
재료들 :
배양배지(DMEN +all)
EDTA
트립신-EDTA
DMEN+all 그리고 10% 테르네로 리센탈 세럼(TERNERO RECENTAL SERUM)
다이메틸 설폭사이드
MTT[3-(4,5-다이메틸띠아졸-2-일)-2,5 다이페닐 테트라졸리움 브로마이드]
멀티웰 스캐닝 분광광도계(ELISA 판독기)
방법들 :
세포는 표준기술을 사용하여 배양된다. 참고로 예컨대 R. Ian Freshney "Culture of Animal Cells" 기초 기술 매뉴얼(Alan R Liss, Inc., 뉴욕, 2판, p. 245-256).
세포성장 억제의 산정은 Skehan et.al, J. Nat.Cancer Inst. 82, 1107(1990).에 따라서 결정되었다. 세포들은 96 웰 플레이트에 400 내지 1200 세포로 평판 배양되었고 세포의 부착을 허용하기위해 약물을 추가하기에 앞서 15 내지 18시간동안 37℃에서 배양되었다. 테스트된 화합물들은 100% DMSO에 용해되었고, 나아가 10mM HEPES를 함유하는 RPM1-1640에 희석되었다. 각각의 세포라인은 10 농도의 화합물(5 로그범위)로 처리했다. 72시간의 배양후에, 100 ml의 차가운 50%TCA가 각각의 웰에 첨가되고 4℃에서 1시간 배양되었다. 플레이트는 수돗물에 5차례 씻어 TCA, 낮은 분자량의 대사물질, 림프액 단백질을 제거하였다. 술포로드아민 B(SRB)(0.4%, 50 mL)가 각각의 웰에 첨가된다. 상온에서 5분간 배양하고 플레이트는 0.1% 아세트산으로 5차례 씻고 공기에 건조시켰다. 표지를 단 염료는 10 mM 트리스 염기(pH 10.5)에 용해하여 회전 교반기를 사용해 5분동안 교반되었다. 광학 밀도는 570 nm에서 측정되었다.
또한 Gerlier, et.al. J.Immunol. Meth. 94, 57-63(1986); Slater, et.al.,Biochim.Biophys.Acta,77,383-393(1963); Kasugai, et.al.,Japan J:Pharmacol.52,95-100(1990); Mosmann J. Immunol. Method, 65, 55-63(1983); Denizot, et.al. J. Immunol. Method,89,271-277(1986)을 참고.
데이타는 시그모이드-이맥스 농도-효과 모델(참고 Holford, N.H.G.:Scheiner, L.B., "Understanding the dose effect relationship:Clinical application of pharmaco-kinetic-pharmacodynamic model", Clin. Pharimiacokin.1981,6,429-453)에 부합되며 예측되는 반응의 역제곱에 의해 가중되는 비선형 리그레션과도 부합한다. 조정 소프트웨어는 마이크로소프트 포트란을 가지고 로즈웰 파크 연수소에의해 발전되었고 비선형 리그레션에 대해 나쉬(참고 Nash J.C.,"Compact numerical method for computer: Linear algebra and function minimization". John Wiley&Sons, New York, 1979)에 의해 채택된 마르쿼드트 알고리즘(참고 Marquardt,D.W., "An algorithm for least squares estimation of nonlinear parameter",J.Soc. Ind.Appl.Math.1963,11.431-441)을 사용하였다. 50%성장 억제(IC50)을 나탸내는 약품의 농도가 계산되었다.
결과:
10 5 세포/ml(라린지 카르시노마)의 HEP-2 세포집단에서의 LMSV-6 세포파괴 분석
r=0.9878
IC50= 10.38 ㎍/mL
10 6 세포/ml(라린지 카르시노마)의 HEP-2 세포집단에서의 LMSV-6 세포파괴 분석
r=0.9941
IC50= 37.37 ㎍/mL
10 5 세포/ml(세르빅스 카르시노마)의 HELA 세포집단에서의 LMSV-6 세포파괴 분석
r=0.9950
IC50= 7.37 ㎍/mL
10 6 세포/ml(세르빅스 카르시노마)의 HELA 세포집단에서의 LMSV-6 세포파괴 분석
r=0.9941
IC50= 27.30 ㎍/mL
실시예 6 : H. 피엘로리(H. pyelori) 의 억제에 대한 테스트
물질 및 방법:
항균성 화합물의 우무(세균배양기) 희석: 6mg을 측정한 화합물을 0.6 ml 100% 다이메틸 설폭사이드(DMSO)에 용해시키고 중성의 브루셀라 배양액으로 6 ml까지 올린다. DMSO의 최종 농도는 총부피의 10%이다. 연속적 2중의 희석(3ml 시큐롤리드 + 3ml 브루셀라 배양액)은 중성의 브루셀라 배양액에서 만들어진다. 시리즈내에서 각각의 2 ml의 정제된 배양액희석은 독립된 중성 페트리 디쉬에 위치되며 거기에 7% 말피가 보충된 녹이고 냉각된(약 50℃) 브루셀라 우무가 첨가된다. 이것은 우무속의 시큐롤리드의 최종 1:10 희석과 1%의 DMSO의 최종 농도를 산출한다. 예를 들면, 우무속의 약물의 최고 농도가 100 ㎍/mL이다. 우무 플레이트는 접종에 하루 앞서 준비될 수 있고 밤새도록 냉동보관한다.
접종 준비 :헬리코박터 파일로리배양은 트립티카제 소이-5% 양피 우무 배양 플레이트에서 이루어지며, 매 48시간마다 옮겨진다.헬리코박터 머스텔라배양은 같은 우무 배양기에서 이루어지고 이전에 옮겼을 때의 성장의 정도에 따라 매 48 내지 60시간마다 옮긴다. 플레이트는 팔라디움 촉매를 가지는 물활성(10 ml)된 캠피팩 플러스(BBL Microbio. System) 외피가 있는 가스팩 자르에서 37℃로 배양된다.
헬리코박터 배양은 깊은 페트리 디쉬에서 10 ml의 부피로 10%의 태아송아지 림프액으로 보충된브루셀라배양액에서 성장될 수 있다. 50 rpm의 속도로 교반기에서, 플레이트는 팔라디움 촉매를 가지는 물활성(10 ml)된 캠피팩 플러스(BBL Microbio. System) 외피가 있는 가스팩 자르에서 37℃로 18 내지 20시간 배양한다.
밤새도록 배양한 것(약 108CFU/ml)은 스크류캡이 달린 시험관에 브루셀라 배양액(FCS는 없음)에 10배 묽혀져서 표준 접종체로 사용된다. 스티어(steer) 복제기의 웰은 0.8 ml의 희석된 유기체로 채우고, 대략 0.002 ml에 2*104의 세포를 우무 표면에 위치시킨다. 접종 플레이트는 가스팩 자르에 위치되고 거기에 팔라디움 촉매를 가지는 물활성(10 ml)된 캠피팩 플러스 외피가 부착되며 48시간동안 37℃에서 배양된다.
결과 :
다음의 배양에서, 모든 테스트 플레이트는 시큐롤리드가 없는 성장 대조구플레이트와 비교한다. MIC는 대조구 플레이트와 비교한 성장 억제 농도이다. 얇은 필름 성장은 높은 농도에서는 보일 수 있으나 이것은 셈해지지 않고 진정한 MIC로 고려하지 않는다. 대조 미생물들은 또한 각각의 플레이트에서 배양되고 이것들은 접종체로 사용되기 위해 1000배 희석된다. 대조 미생물들은캠필로박터 제주니, 대장균[ATCC35218, Lot202602, Exp 05/2000(19-258)]의 스크린 배양, 쉐도모나 에어로기노사[ATCC27853, Lot202992, Exp 08/2000(19-060)], E.클로아카, 프로비덴시아스투아타이, 그리고 P. 레트게리를 포함한다. 플레이트 및/또는 접종체 운반은 2시간 이상 마이크로에어필릭 환경을 벗어나서는 안된다.헬리코 박터배양을 포함한 모든 처리들은 층류 흐름 후드에서 시행하여 몰드로 배양액을 오염시킬 수 있는 기회를 줄인다.
Lee et.al.,Gastroenterology,99,1315-23(1990)의 쥐 모델이 사용되어 인체내에서의헬리코박터 파일로리에 대항하는 화합물의 유기체내에서의 활성을 예측한다.
헬리코박터 펠리스는 10%의 태아 소의 림프액을 가진 브루셀라 배양액에서 성장시킨다. 얼어붙은 배양균은 재빨리 녹이고; 배양균은 운동성을 체크하고 0.5 ml의 녹인 얼은 배양균은 9.5 ml의 브루셀라/림프액 혼합물을 함유하는 깊은 조직배양 디쉬속으로 접종된다. 디쉬들은 캐피 팍 자르[BBL]에 넣어 마이크로에어필릭 환경을 유지시킨다. 자르(jar)는 37℃의 배양기에서 60 rpm으로 회전 교반기에 놓는다. 18시간 후에, 눈에 보이는 현탁현상이 있을 것이다. 배양균은 (상)현미경하에서 그 순도와 운동성이 체크되고 플라스크로 울혈한다. 스위스-웹스터 암컷 쥐(18-20g)들은 감염 전 18시간동안 절식시킨다. 쥐들은 단일 주간동안에 교호되는 날에 3차례 감염시킨다. 복용은 미생물의 마지막 복용후 2주에 시작한다. 치료는 14일의 연속적인 날동안 하루에 한번 한다. 실험적인 죽음은 치료가 완료된 후 약 3주이다. 각각의 쥐에 대해, 위가 보다 큰 뒤틀림으로 절개되고 열린다. 플러그(3 mm 조직단면)는 위의 공동 지역으로부터 취해진다. 부착된 플러그를 씻고 잘게 썰어 100 ㎕ 의 우레아제와 같이 시험관에 떨어뜨린다. 우레아제(pH 6.3-6.5)는 우레아와 페놀 레드를 함유하고 있다. 만약헬리코박터가 존재하면 우레아제는 우레아를 파괴하여 pH의 변화를 가져온다. 자주빛(알칼린)은헬리코박터에 대해 양성이고; 빨강/노랑(변화없음)은 음성이다. 18시간후에는 어떤 색의 변화가 기록된다. 일반적으로 치료그룹당 20마리의 쥐들이 있으며 각 그룹의 양성 비율이 기록된다.
인체에 헬리코박터 파일로리가 존재하는지를 의학적으로 결정하는 사용된 많은 방법들이 있다. 이것들은 환자로부터 미생물을 박멸하는 치료의 성공을 정하는 것 뿐만 아니라 치료에 앞서 감염의 초기 진단에도 사용된다.
우레아 흡입 테스트는 방사 표지된 우레아의 섭취를 포함한다. 헬리코박터 파일로리는 우레아제 효소를 생산하고 우레아를 퇴화시키며;포유동물의 위세포는 이 효소를 가지고 있지 않다. 표지된 이산화탄소(매스 분광 또는 방사활성으로 분석되며, 적용된 동위원소에 의존함)의 발산은 따라서 헬리코박터 파일로리가 존재한다는 것을 지시한다.
혈청반응 테스트가 또한 사용되어 헬리코박터 파일로리에 감염되었는지를 산정할 수 있다. IgG와 IgA같은 헬리코박터 파일로리에 대한 림프 항체의 탐지는 효소결합된 면역흡착 분석(ELISA)을 사용하여 수행된다. 수 많은 다른 헬리코박터 파일로리 단백질은 항원으로 작용할 수 있다.
환자에 대한 내시경 검사법은 헬리코박터 파일로리 감염을 진단하기 위해 마이크로에어필릭 환경에서 배당될 수 있는 샘플 조직을 제공한다. 선택적으로, 샘플은 김사 또는 헤마톡실리네오신과 같은 수많은 착색제중의 하나를 사용하여 역사적인 방법으로 조사될 수 있다. 헬리코박터 파일로리에 의한 우레아제의 생산의 효과가 있는 우레아 테스트가 또한 적용될 수 있다. 이 테스트는 우레아 가수분해로부터 암모니아의 형성에 의존하며 이것은 pH의 가시적인 변화를 가져오며 이것은 헬리코박터의 박멸을 표시하는 것이다.
결과 :
실시예 1의 화합물을 가지고 치료한 전과 후의 내시경 검사에 의한 환자 상태의 비교는 헬리코박터 파일로리의 감소 또는 소멸을 보여준다.
실시예 7 : 균성 활성의 결정
물질 및 방법
방법
산물의 항-균성 활성은 다음과 같이 결정될 수 있다. 18 내지 22g의 암컷 쥐들이 사용되고칸디나 알비칸스44858의 양이 쥐(CFU : 군체 형성 단위)당 106CFU의 속도로 꼬리의 정맥에 투여된다. 쥐들은 5마리씩 5군으로 분리되고 그들은 다음의 방법으로 다뤄진다.
감염후 한 시간
그룹 1 : 25 mg/kg의 산물(product)을 구강으로 투여하여 처리한 쥐들
그룹 2 : 25 mg/kg의 산물을 복강내로 투여하여 처리한 쥐들
그룹 3 : 25 mg/kg의 케토코나졸을 구강으로 투여하여 처리한 쥐들
그룹 4 : 25 mg/kg의 케토코나졸을 복강내로 투여하여 처리한 쥐들
그룹 5 : 어떤 항-균성 치료를 받지 않은 쥐들
죽은 쥐들은 22일에 걸쳐서 셈했다.
결과 :
산물에 대한 활성은 두 가지의 복용 방법이 사용된 복용에서 뛰어났다 동일한 치료가 또한 피부 균 예를 들면 트리코피톤을 갖는 "국부적 모델", 그리고 치사량에 가까운 모델에서도 효과적이었다.
최소 억제 농도(MIC)
칸디나 알비칸스 세포는 J. Antimicrobial Chemotherapy 38,579-587에 지시된 것과 같이 준비되었고 0.1M 포스페이트 용액으로 3차례 씻고 곧 최소 억제 농도(MIC)를 결정한다. MIC는 코미테 내셔날의 실험병리적 표준의 표준방법에 따른 마이크로터트의 변형에 의해 결정된다.
RPMI-1640과 L-글루타민은 0.15M 용액의 MOPS(3-[N-모르포리노]프로판 설포닉산)을 사용해 pH 7로 버퍼한다. 칸디나 알비칸스 세포(1.5*103세포/ml)는 RPMI-1640과 항균제의 희석액을 함유하는 96-웰 플레이트의 웰에 첨가한다. 결과는 35℃에서 배양한 후 48시간에 읽히고 칸디나 알비칸스 세포의 성장을 억제하는 MIC 또는 최소 억제 농도가 결정된다.
최소 살균성 농도
48시간에 MIC를 읽은 후에, 플레이트는 교반되고, 10 ㎕ 의 잘 정제된 것은 덱스트로스당을 함유하는 사각 디스크에 위치된 웰로부터 제거된다. 플레이트는 35℃, 최소 살균성 농도와 어떠한 수의 군체형성단위도 없는 항균성제의 농도에서 48시간 동안 배양된다.
부수적 분석은 LMSV-6이 칸디나 알비칸스에 대해 높은 활성을 보이는 곳에서 행해졌다.
실시예 8 : 치주질환의 치료
시큐롤리드는 선택적으로 감염된 치은염에 국부적으로 적용되었을 때 치은염과 고나련하여 특이한 혐기성 녹두 음성 미생물에 대하여 효과적이다는 것이 알려져 왔다.
Walker et.al(Antimicrobial and chemotherapy, Vol.16.p.452-457(1979))에 따라 결정된박테로이드 아사카로리티커스(Forsyth strain)를 죽이기 위해 필요한 최소 억제 농도(MIC)는 ml당 6 내지 60 마이크로그램이다.B. 긴기발리스에 대한 MIC값은 ml당 6 마이크로그램이다. B. 그라실리스와 푸소박테리움, 다른 녹두 음성 미생물에 대한 MIC값은 각각에 대해 25이고; 녹두 음성 미생물 액티노미세스 비스코서스에 대한 MIC값은 호기성 스트레인에 대해 60, 협기성 스트레인에 대해 60이다.

Claims (31)

  1. 다음의 구조식의 하나로 정의되는,
    독립적으로 취해진 R1내지 R7또는 함께 취해진 R3내지 R6는 수소원자 또는 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 페닐, 치환된 페닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 할로, 하이드록실, 알콕시. 치환된 알콕시, 페녹시, 치환된 페녹시, 아록시, 치환된 아록시, 알킬티오, 치환된 알킬티오, 페닐티오, 치환된 페닐티오, 아릴티오, 치환된 아릴티오, 시아노, 이소시아노, 치환된 이소시아노, 카르보닐, 치환된 카르보닐, 카르복실, 치환된 카르복실, 아미노, 치환된 아미노, 아미도, 치환된 아미도, 술포닐, 치환된 술포닐, 술포닉산, 포스포릴, 치환된 포스포릴, 포스포닐, 치환된 포스포닐, 폴리아릴, 치환된 폴리아릴, C1 내지 C20의 시클릭, 치환된 C1 내지 C20의 시클릭, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, 아미노산, 펩타이드, 또는 폴리펩타이드 군으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 군이며;
    Z는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족들로구성된 군으로부터 선택된 헤테로원자이며;
    Z'은 수소원자,할로겐 원자,하이드록실 그룹, 또는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족으로 이루어지는 군으로부터 선택된 헤테로원자를 포함하는 1내지 8의 탄소원자를 가지는 유기군이며; 그리고
    X는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 헤테로원자임
    또는 다음의 구조식에 의해 정의되는 분리된 락톤의,
    상기 구조식에서, 독립적으로 취해진 R1내지 R9또는 함께 취해진 R5와 R6는 수소원자 또는 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 페닐, 치환된 페닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 할로, 하이드록실, 알콕시. 치환된 알콕시, 페녹시, 치환된 페녹시, 아록시, 치환된 아록시, 알킬티오, 치환된 알킬티오, 페닐티오, 치환된 페닐티오, 아릴티오, 치환된 아릴티오, 시아노, 이소시아노, 치환된 이소시아노, 카르보닐, 치환된 카르보닐, 카르복실, 치환된 카르복실, 아미노, 치환된 아미노, 아미도, 치환된 아미도,술포닐, 치환된 술포닐, 술포닉산, 포스포릴, 치환된 포스포릴, 포스포닐, 치환된 포스포닐, 폴리아릴, 치환된 폴리아릴, C1 내지 C20의 시클릭, 치환된 C1 내지 C20의 시클릭, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, 아미노산, 펩타이드, 또는 폴리펩타이드 군으로구성되는 군으로부터 선택되는 어느 다른 군이며;
    독립적으로 취해진 Y1, Y2및 Y3또는 함께 취해진 Y1과 Y2는 수소원자 또는 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 페닐, 치환된 페닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 할로, 하이드록실, 알콕시. 치환된 알콕시, 페녹시, 치환된 페녹시, 아록시, 치환된 아록시, 알킬티오, 치환된 알킬티오, 페닐티오, 치환된 페닐티오, 아릴티오, 치환된 아릴티오, 시아노, 이소시아노, 치환된 이소시아노, 카르보닐, 치환된 카르보닐, 카르복실, 치환된 카르복실, 아미노, 치환된 아미노, 아미도, 치환된 아미도, 술포닐, 치환된 술포닐, 술포닉산, 포스포릴, 치환된 포스포릴, 포스포닐, 치환된 포스포닐, 폴리아릴, 치환된 폴리아릴, C1 내지 C20의 시클릭, 치환된 C1 내지 C20의 시클릭, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, 아미노산, 펩타이드, 또는 폴리펩타이드 군으로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 다른 군이며;
    Z는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족들로 구성된 군으로부터 선택된 헤테로원자이며;
    X는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족들로 구성된 군으로부터 선택된 헤테로원자임
    식(formula) Ia, 식 Ib, 또는 식 Ic로 정의된 분리된 화합물.
  2. 제 1항에 있어서,
    식 Ia로 정의되는 화합물.
  3. 제 2항에 있어서,
    상기 X는 산소인 화합물.
  4. 제 2항에 있어서,
    상기 R5는 엑소시클릭(exocyclic) 메틸렌인 화합물.
  5. 제 1항에 있어서,
    식 Ib로 정의되는 화합물.
  6. 제 1항에 있어서,
    다음의 구조들 중의 하나를 갖는 화합물.
  7. 제 1항에 있어서,
    락톤이시큐리다카 버가타(Securidaca virgata)로부터 분리되는 상기 식 Ia의 화합물.
  8. 제 1항에 있어서,
    비경구, 장, 또는 국부적으로 투여하기 위한 약제학적으로 수용가능한 운반체를 더 포함하는 식 Ia의 화합물.
  9. 다음의 구조식의 하나에 의해 정의되는 화합물이 아래와 같고,
    독립적으로 취해진 R1내지 R7또는 함께 취해진 R3내지 R6는 수소원자 또는 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 페닐, 치환된 페닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 할로, 하이드록실, 알콕시. 치환된 알콕시, 페녹시, 치환된 페녹시, 아록시, 치환된 아록시, 알킬티오, 치환된 알킬티오, 페닐티오, 치환된 페닐티오, 아릴티오, 치환된 아릴티오, 시아노, 이소시아노, 치환된 이소시아노, 카르보닐, 치환된 카르보닐, 카르복실, 치환된 카르복실, 아미노, 치환된 아미노, 아미도, 치환된 아미도, 술포닐, 치환된 술포닐, 술포닉산, 포스포릴, 치환된 포스포릴, 포스포닐, 치환된 포스포닐, 폴리아릴, 치환된 폴리아릴, C1 내지 C20의 시클릭, 치환된 C1 내지 C20의 시클릭, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, 아미노산, 펩타이드, 또는 폴리펩타이드 군으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 군이며;
    Z는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족들로 구성된 군으로부터 선택된 헤테로원자이며;
    Z'은 수소원자,할로겐 원자,하이드록실 군, 또는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족으로 이루어지는 군으로부터 선택된 헤테로원자를 포함하는 1내지 8의 탄소원자를 가지는 유기군이며; 그리고
    X는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 헤테로원자이거나,
    또는 다음의 구조식에 의해 정의되는 분리된 락톤에 있어서,
    상기 구조식에서, 독립적으로 취해진 R1내지 R9또는 함께 취해진 R5와 R6는 수소원자 또는 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 페닐, 치환된 페닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 할로, 하이드록실, 알콕시. 치환된 알콕시, 페녹시, 치환된 페녹시, 아록시, 치환된 아록시, 알킬티오, 치환된 알킬티오, 페닐티오, 치환된 페닐티오, 아릴티오, 치환된 아릴티오, 시아노, 이소시아노, 치환된 이소시아노, 카르보닐, 치환된 카르보닐, 카르복실, 치환된 카르복실, 아미노, 치환된 아미노, 아미도, 치환된 아미도, 술포닐, 치환된 술포닐, 술포닉산, 포스포릴, 치환된 포스포릴, 포스포닐, 치환된 포스포닐, 폴리아릴, 치환된 폴리아릴, C1 내지 C20의 시클릭, 치환된 C1 내지 C20의 시클릭, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, 아미노산, 펩타이드, 또는 폴리펩타이드 군으로구성되는 군으로부터 선택되는 어느 다른 군이며;
    독립적으로 취해진 Y1, Y2및 Y3또는 함께 취해진 Y1과 Y2는 수소원자 또는알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 페닐, 치환된 페닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 할로, 하이드록실, 알콕시. 치환된 알콕시, 페녹시, 치환된 페녹시, 아록시, 치환된 아록시, 알킬티오, 치환된 알킬티오, 페닐티오, 치환된 페닐티오, 아릴티오, 치환된 아릴티오, 시아노, 이소시아노, 치환된 이소시아노, 카르보닐, 치환된 카르보닐, 카르복실, 치환된 카르복실, 아미노, 치환된 아미노, 아미도, 치환된 아미도, 술포닐, 치환된 술포닐, 술포닉산, 포스포릴, 치환된 포스포릴, 포스포닐, 치환된 포스포닐, 폴리아릴, 치환된 폴리아릴, C1 내지 C20의 시클릭, 치환된 C1 내지 C20의 시클릭, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, 아미노산, 펩타이드, 또는 폴리펩타이드 군으로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 다른 군이며;
    Z는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족들로 구성된 군으로부터 선택된 헤테로원자이며;
    X는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족들로 구성된 군으로부터 선택된 헤테로원자이며,
    식(formula) Ia, 식 Ib 또는 식 Ic의 하나에 의해 정의되는 화합물의 효과적인 양의 투여단계를 포함하여 필요로 하는 환자의 치료방법.
  10. 제 9항에 있어서,
    상기 X는 산소인 방법.
  11. 제 9항에 있어서,
    상기 R5는 엑소시클릭(exocyclic) 메틸렌인 방법.
  12. 제 9항에 있어서,
    상기 화합물은 다음의 구조들 중에 하나를 갖는 방법.
  13. 제 8항에 있어서,
    상기 식 Ia의 화합물은 구강으로, 비경구적으로, 국부적으로, 또는 경피적으로 투여되는 방법.
  14. 제 9항에 있어서,
    상기 환자는 증식분열(proliferation) 질병인 방법.
  15. 제 14항에 있어서,
    상기 증식분열 질병은 암인 방법.
  16. 제 9항에 있어서,
    상기 환자는 병균감염된 자인 방법.
  17. 제 16항에 있어서,
    상기 병균감염은 박테리아성인 방법.
  18. 제 16항에 있어서,
    상기 병균감염은 균성인 방법.
  19. 제 9항에 있어서,
    상기 환자는 소화성 궤양 질병을 가진 자인 방법.
  20. 제 19항에 있어서,
    상기 소화성 궤양 질병은헬리코박터 파일로리의 존재와 관련있는 것인 방법.
  21. 제 9항에 있어서,
    상기 환자는 통증환자인 방법.
  22. 제 9항에 있어서,
    약제학적으로 수용가능한 운반체를 사용하여 상기 식 Ia의 화합물의 투여단계를 더 포함하는 방법.
  23. 제 22항에 있어서,
    구강 투여에 대한 상기 운반체는 양치질약, 마름모꼴의 정제, 일반 정제, 캡슐, 액제, 서스펜션, 미립체 또는 그들을 조합한 것인 방법.
  24. 제 22항에 있어서,
    국부적 투여에 대한 상기 운반체는 좌약, 연고, 크림, 겔, 페이스트, 콜로디온, 글리세로겔라틴, 바르는 약, 로션, 고약, 분말, 테이프, 패치, 에어로졸, 액제, 팅크제, 또는 그들의 조합인 것인 방법.
  25. 다음의 구조식에 의해 정의되는 락톤은.
    독립적으로 취해진 R1내지 R7또는 함께 취해진 R3내지 R6는 수소원자 또는 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 페닐, 치환된페닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 할로, 하이드록실, 알콕시. 치환된 알콕시, 페녹시, 치환된 페녹시, 아록시, 치환된 아록시, 알킬티오, 치환된 알킬티오, 페닐티오, 치환된 페닐티오, 아릴티오, 치환된 아릴티오, 시아노, 이소시아노, 치환된 이소시아노, 카르보닐, 치환된 카르보닐, 카르복실, 치환된 카르복실, 아미노, 치환된 아미노, 아미도, 치환된 아미도, 술포닐, 치환된 술포닐, 술포닉산, 포스포릴, 치환된 포스포릴, 포스포닐, 치환된 포스포닐, 폴리아릴, 치환된 폴리아릴, C1 내지 C20의 시클릭, 치환된 C1 내지 C20의 시클릭, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, 아미노산, 펩타이드, 또는 폴리펩타이드 군으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 군이며;
    Z는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족들로 구성된 군으로부터 선택된 헤테로원자이며; 그리고,
    X는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 헤테로원자이며,
    식물체로부터 락톤을 추출하는 방법 포함하는 식물체로부터 락톤을 분리하는 방법.
  26. 제 25항에 있어서,
    상기 식물은시큐리다카 버가타(Securidaca virgata)인 방법.
  27. 제 25항에 있어서,
    상기 분리방법은 크로마토그래피법에 의해 수행되는 추출방법인 방법.
  28. 다음의 구조식 중 하나에 의해 정의되며,
    독립적으로 취해진 R1내지 R7또는 함께 취해진 R3내지 R6는 수소원자 또는 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 페닐, 치환된 페닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 할로, 하이드록실, 알콕시. 치환된 알콕시, 페녹시, 치환된 페녹시, 아록시, 치환된 아록시, 알킬티오, 치환된 알킬티오, 페닐티오, 치환된 페닐티오, 아릴티오, 치환된 아릴티오, 시아노, 이소시아노, 치환된 이소시아노, 카르보닐, 치환된 카르보닐, 카르복실, 치환된 카르복실, 아미노, 치환된 아미노, 아미도, 치환된 아미도, 술포닐, 치환된 술포닐, 술포닉산, 포스포릴, 치환된 포스포릴, 포스포닐, 치환된 포스포닐, 폴리아릴, 치환된 폴리아릴, C1 내지 C20의 시클릭, 치환된 C1 내지 C20의 시클릭, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, 아미노산, 펩타이드, 또는 폴리펩타이드 군으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 군이며;
    Z는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족들로 구성된 군으로부터 선택된 헤테로원자이며;
    Z'은 수소원자,할로겐 원자,하이드록실 군, 또는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족으로 이루어지는 군으로부터 선택된 헤테로원자를 포함하는 1내지 8의 탄소원자를 가지는 유기군이며; 그리고
    X는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 헤테로원자이거나,
    다음의 구조식에 의해 정의되는 분리된 락톤에 의해,
    상기 구조식에서, 독립적으로 취해진 R1내지 R9또는 함께 취해진 R5와 R6는 수소원자 또는 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 페닐, 치환된 페닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 할로, 하이드록실, 알콕시. 치환된 알콕시, 페녹시, 치환된 페녹시, 아록시, 치환된 아록시, 알킬티오, 치환된 알킬티오, 페닐티오, 치환된 페닐티오, 아릴티오, 치환된 아릴티오, 시아노, 이소시아노, 치환된 이소시아노, 카르보닐, 치환된 카르보닐, 카르복실, 치환된 카르복실, 아미노, 치환된 아미노, 아미도, 치환된 아미도, 술포닐, 치환된 술포닐, 술포닉산, 포스포릴, 치환된 포스포릴, 포스포닐, 치환된 포스포닐, 폴리아릴, 치환된 폴리아릴, C1 내지 C20의 시클릭, 치환된 C1 내지 C20의 시클릭, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, 아미노산, 펩타이드, 또는 폴리펩타이드 군으로구성되는 군으로부터 선택되는 어느 다른 군이며;
    독립적으로 취해진 Y1, Y2및 Y3또는 함께 취해진 Y1과 Y2는 수소원자 또는 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 페닐, 치환된 페닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 할로, 하이드록실, 알콕시. 치환된 알콕시, 페녹시, 치환된 페녹시, 아록시, 치환된 아록시, 알킬티오, 치환된 알킬티오, 페닐티오, 치환된 페닐티오, 아릴티오, 치환된 아릴티오, 시아노, 이소시아노, 치환된 이소시아노, 카르보닐, 치환된 카르보닐, 카르복실, 치환된 카르복실, 아미노, 치환된 아미노, 아미도, 치환된 아미도, 술포닐, 치환된 술포닐, 술포닉산, 포스포릴, 치환된 포스포릴, 포스포닐, 치환된 포스포닐, 폴리아릴, 치환된 폴리아릴, C1 내지 C20의 시클릭, 치환된 C1 내지 C20의 시클릭, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, 아미노산, 펩타이드, 또는 폴리펩타이드 군으로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 다른 군이며;
    Z는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족들로 구성된 군으로부터 선택된 헤테로원자이며;
    X는 선형, 가지달린 또는 환형구조 형식으로 된 산소, 황, 또는 질소 족들로 구성된 군으로부터 선택된 헤테로원자임
    상기의 식(formula) Ia, 식 Ib 또는 식 Ic로 표시되는 합성화합물.
  29. 제 28항에 있어서,
    다음의 구조식의 어느 하나에 의해 정의되는 화합물.
  30. a) 락톤구조를 가지는 전구체를 제공하는 단계, 그리고
    b) 락톤구조의 α-위치에 메틸렌 군을 갖는 산물을 제공하기 위하여 하나 이상의 화학제와 전구체를 반응시키는 단계,
    를 포함하는 식 Ia 와 식 Ic의 화합물의 제조방법.
  31. a) 락톤구조를 가지는 전구체를 제공하는 단계,
    b) 락톤구조의 α-위치에 메틸렌 군을 갖는 산물을 제공하기 위하여 하나 이상의 화학제와 전구체를 반응시키는 단계, 그리고
    c) 친핵체와 산물을 반응시키는 단계,
    를 포함하는 식 Ib의 화합물의 제조방법.
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