KR20020020274A

KR20020020274A - 육모제

Info

Publication number: KR20020020274A
Application number: KR1020027002106A
Authority: KR
Inventors: 다까하시도모야; 가미무라아야꼬; 마쯔오까다까꼬
Original assignee: 히라타 다다시; 교와 핫꼬 고교 가부시끼가이샤
Priority date: 1999-08-18
Filing date: 2000-08-18
Publication date: 2002-03-14
Also published as: WO2001012141A1; US20040266730A1; EP1214928A1; CA2380640A1; US7015209B2; EP1214928A4; AU6595900A

Abstract

본 발명은 리조포스파티딘산 및 지방산 잔기부분이 짝수 직쇄의 탄소쇄의 지방산 잔기만으로 구성된 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상을 유효 성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 육모제에 관한 것이다.

Description

육모제{HAIR GROWTH STIMULANTS}

남성형 탈모증의 치료약으로서는 많은 물질이 연구되어 왔으나, 안전하면서 유효한 물질은 발견되지 않았다. 고혈압 치료약으로 사용되어 온 미녹시딜은 그 부작용으로서 다모증이 발증되는 것이 발견되어 [British Journal of Dermatology,101, 593-595 (1979)], 현재 남성형 탈모증의 치료약으로서 사용되고 있지만 유효율이나 안전성ㆍ부작용 면에서 이상적인 약제라고는 할 수 없다.

한편, 대부분의 식물추출물이 전통적으로 남성형 탈모증의 치료에 사용되어 왔다. 예컨대, 월년초 (Swertia Japonica Makino) 추출물은 모세혈관의 혈류항진 작용이 있는 것으로 여겨져 육모제에 사용되고 있으나 [Tokushima Journal of Experimental Medicine,9, 37-59 (1962)], 그 효과는 충분하다고는 할 수 없다.

리조포스파티딘산 또는 포스파티딘산을 함유하는 육모제로서는, 미녹시딜 리포솜 제제의 리포솜 구성 기제로서의 배합예가 알려져 있다 (US 5030442). 또, 홀수의 탄소쇄 길이를 갖는 지방산잔기를 갖는 포스파티딘산을 함유하는 양모제 (일본 특허공보 소63-41363) 또는 분지쇄 지방산잔기를 갖는 포스파티딘산을 함유하는 세포부활제 (일본 공개특허공보 소61-7205 호) 가 알려져 있다. 그러나, 리조포스파티딘산을 유효성분으로 함유하는 육모제, 짝수 직쇄의 탄소쇄 길이를 갖는 지방산잔기만을 지방산잔기로서 갖는 포스파티딘산을 함유하는 육모제는 알려져 있지 않다. 또, 포스파티딘산을 함유하는 몇가지 인지질의 혼합물이 아폽토시스 억제 작용을 갖고 있음이 알려져 있다 (WO 97/09989). 또한, 인지질 혼합물을 함유하는 육모제가 알려져 있다 (DE 3222016 A1, DE 4113346 A1).

프로안토시아니딘을 함유하는 육모제가 WO96/00561 에 기재되어 있다. 단백질 키나아제 C (PKC) 특이적 저해제를 함유하는 육모제가 일본 공개특허공보 평9-315947 호에 기재되어 있다. 토코페롤이 육모 작용을 갖고 있음이 알려져 있다 [모(毛)의 의학, 283면(1987년), 분꼬도; 헤어사이언스, 80면(1986년), 사단법인 일본모발과학협회]. 그러나, 포스파티딘산과 프로안토시아니딘을 유효성분으로 하는 육모제, 포스파티딘산과 단백질 키나아제 C 특이적 저해제를 유효성분으로 하는 육모제 및, 포스파티딘산과 토코페롤을 유효성분으로 하는 육모제에 대해서는 알려져 있지 않다.

발명의 개시

본 발명자들은 외용에 의해 육모 작용을 갖는 물질을 찾아 거듭 검토한 결과, 리조포스파티딘산 및 지방산잔기 부분이 짝수 직쇄의 탄소쇄의 지방산잔기만으로 구성된 포스파티딘산에서 강한 육모활성을 발견하였다. 또한, 리조포스파티딘산 또는 포스파티딘산과 프로안토시아니딘, 단백질 키나아제 C 특이적 저해제 또는 그 약리학적으로 허용되는 염 및 토코페롤로 구성된 군에서 선택된 하나 이상을유효성분으로 함유하는 조성물에서 강한 육모활성을 발견하였다.

본 발명은 다음 (1) 내지 (22) 에 관한 것이다.

(1) 리조포스파티딘산 및 지방산잔기 부분이 짝수 직쇄의 탄소쇄의 지방산잔기만으로 구성된 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 육모제.

(2) 실질적으로 미녹시딜을 함유하지 않는 상기 (1) 에 기재된 육모제.

(3) 리조포스파티딘산 및 지방산잔기 부분이 짝수 직쇄의 탄소쇄의 지방산잔기만으로 구성된 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상의 함량이 0.01 ∼ 5.0% 인 상기 (1) 또는 (2) 에 기재된 육모제.

(4) 리조포스파티딘산 및 지방산잔기 부분이 짝수 직쇄의 탄소쇄의 지방산잔기만으로 구성된 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상의 함량이 0.01 ∼ 1.0% 인 상기 (1) 또는 (2) 에 기재된 육모제.

(5) 리조포스파티딘산이 하기 화학식 I:

(식 중, R¹은 알킬, 알케닐 또는 알키닐을 나타냄) 으로 표시되는 화합물인 상기 (1) 내지 (4) 중 어느 하나에 기재된 육모제.

(6) 리조포스파티딘산이 하기 화학식 II:

(식 중, R²는 상기 R¹과 동일함) 으로 표시되는 화합물인 상기 (1) 내지 (4) 중 어느 하나에 기재된 육모제.

(7) 지방산잔기 부분이 짝수 직쇄의 탄소쇄의 지방산잔기만으로 구성된 포스파티딘산이 하기 화학식 III:

(식 중, R³및 R⁴는 동일하거나 다르며 홀수 직쇄의 탄소쇄의 알킬, 홀수 직쇄의 탄소쇄의 알케닐 또는 홀수 직쇄의 탄소쇄의 알키닐기를 나타냄) 으로 표시되는 화합물인 상기 (1) 내지 (4) 중 어느 하나에 기재된 육모제.

(8) 리조포스파티딘산 및 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상과 프로안토시아니딘, 단백질 키나아제 C 특이적 저해제 또는 그 약리학적으로 허용되는 염 및 토코페롤로 구성된 군에서 선택된 하나 이상을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 육모제.

(9) 리조포스파티딘산 및 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상과 프로안토시아니딘을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 육모제.

(10)프로안토시아니딘이 프로시아니딘 B-1, 프로시아니딘 B-2, 프로시아니딘 B-3 및 프로시아니딘 C-1 에서 선택된 1 종 또는 2 종 이상의 프로안토시아니딘인 상기 (8) 또는 (9) 에 기재된 육모제.

(11) 단백질 키나아제 C 특이적 저해제 또는 그 약리학적으로 허용되는 염을 함유하는 상기 (9) 또는 (10) 에 기재된 육모제.

(12) 리조포스파티딘산 및 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상과 단백질 키나아제 C 특이적 저해제 또는 그 약리학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 육모제.

(13) 단백질 키나아제 C 특이적 저해제가 카르포스틴 C, 헥사데실포스포콜린, 팔미토일-DL-카르니틴 및 폴리믹신 B 에서 선택된 1 종 또는 2 종 이상의 단백질 키나아제 C 저해제인 상기 (8), (11) 또는 (12) 에 기재된 육모제.

(14) 토코페롤을 함유하는 상기 (9) 내지 (13) 중 어느 하나에 기재된 육모제.

(15) 리조포스파티딘산 및 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상과 토코페롤을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 육모제.

(16) 토코페롤이 dl-α-토코페롤, d-α-토코페롤, 아세트산 dl-α-토코페롤, 아세트산 d-α-토코페롤 및 니코틴산 dl-α-토코페롤에서 선택된 1 종 또는 2 종이상의 토코페롤인 상기 (8), (14) 또는 (15) 에 기재된 육모제.

(17) 포스파티딘산이 상기 (1) 에 기재된 포스파티딘산인 상기 (8) 내지 (16) 중 어느 하나에 기재된 육모제.

(18) 포스파티딘산이 상기 (7) 에 기재된 포스파티딘산인 상기 (17) 에 기재된 육모제.

(19) 리조포스파티딘산이 상기 (5) 또는 (6) 에 기재된 포스파티딘산인 상기 (8) 내지 (16) 중 어느 하나에 기재된 육모제.

(20) 실질적으로 미녹시딜을 함유하지 않는 상기 (8) 내지 (19) 중 어느 하나에 기재된 육모제.

(21) 리조포스파티딘산 및 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상의 함량이 0.01 ∼ 5.0% 인 상기 (8) 내지 (20) 중 어느 하나에 기재된 육모제.

(22) 리조포스파티딘산 및 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상의 함량이 0.01 ∼ 1.0% 인 상기 (8) 내지 (20) 중 어느 하나에 기재된 육모제.

화학식 Ⅰ의 각 기의 정의에 있어서, 알킬로서는, 예컨대 직쇄 또는 분지형의 탄소수 1 ∼ 23, 바람직하게는 7 ∼ 17 의, 보다 구체적으로는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 네오펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 노닐, 데실, 운데실, 도데실, 트리데실, 테트라데실, 펜타데실, 헥사데실, 헵타데실, 옥타데실 등을 들 수 있다. 알케닐로서는, 예컨대 직쇄 또는 분지형의 탄소수 2 ∼ 23, 바람직하게는 7 ∼ 17 의, 보다 구체적으로는 비닐, 알릴, 부테닐, 헵테닐, 헥세닐, 펜타디에닐, 헥사디에닐 등을 들 수 있다. 알키닐로서는, 예컨대 직쇄 또는 분지형의 탄소수 2 ∼ 23, 바람직하게는 7 ∼ 17 의, 보다 구체적으로는 에티닐, 프로피닐, 부티닐, 펜티닐, 헥시닐 등을 들 수 있다.

홀수 직쇄의 탄소쇄의 알킬로서는, 예컨대 탄소수 1 ∼ 23, 바람직하게는 7 ∼ 17 의, 보다 구체적으로는 메틸, 프로필, 펜틸, 헵틸, 노닐, 운데실, 트리데실, 펜타데실, 헵타데실, 노나데실, 헨에이코사닐, 트리코사닐 등을 들 수 있다. 홀수 직쇄의 탄소쇄의 알케닐로서는, 예컨대 탄소수 3 ∼ 23, 바람직하게는 7 ∼ 17 의, 보다 구체적으로는 알릴, 1-프로페닐, 2-펜테닐, 4-펜테닐, 펜타디에닐, 헵테닐, 노네닐, 운데세닐, 트리데세닐, 펜타데세닐, 헵타데세닐 등을 들 수 있다. 홀수 직쇄의 탄소쇄의 알키닐로서는, 예컨대 탄소수 3 ∼ 23, 바람직하게는 7 ∼ 17 의, 보다 구체적으로는 프로피닐, 펜티닐, 헵티닐, 노니닐, 운데시닐, 트리데시닐, 펜타데시닐, 헵타데시닐 등을 들 수 있다.

알케닐, 알키닐, 홀수 직쇄의 탄소쇄의 알케닐 및 홀수 직쇄의 탄소쇄의 알키닐에 있어서의 불포화결합의 개수는 특별히 한정되지는 않는다.

본 발명에 사용되는 리조포스파티딘산으로는 어떠한 것도 포함되고, 본 발명에 사용되는 지방산잔기 부분이 짝수 직쇄의 탄소쇄의 지방산잔기만으로 구성된 포스파티딘산으로는 지방산잔기 부분이 짝수 직쇄의 탄소쇄의 지방산잔기만으로 구성된 것이면 어떠한 것도 포함된다. 짝수 직쇄의 탄소쇄의 지방산잔기로서는, 예컨대 탄소수 2 ∼ 24, 바람직하게는 8 ∼ 18 의, 보다 구체적으로는 에타노일, 부타노일, 헥사노일, 옥타노일, 데카노일, 도데카노일, 테트라데카노일, 헥사데카노일, 옥타데카노일, 에이코사노일, 도코사노일, 테트라코사노일, 2-부테노일, 3-부테노일, 3-헥세노일, 5-헥세노일, 헥사디에노일, 옥테노일, 데세노일, 도데세노일, 테트라데세노일, 헥사데세노일, 옥타데세노일, 부티노일, 헥시노일, 옥티노일, 데시노일, 도데시노일, 테트라데시노일, 헥사데시노일, 옥타데시노일, 테트라데카-4-엔-8-인오일 등을 들 수 있다. 상기 리조포스파티딘산 및 지방산잔기 부분이 짝수 직쇄의 탄소쇄의 지방산 잔기만으로 구성된 포스파티딘산 중에서도 바람직하게는 화학식 Ⅰ로 표시되는 화합물을 들 수 있다. 구체적으로는 리조포스파티딘산으로서는, 모노아세틸리조포스파티딘산, 모노프로피오닐리조포스파티딘산, 모노부타노일리조포스파티딘산, 모노펜타노일리조포스파티딘산, 모노헥사노일리조포스파티딘산, 모노헵타노일리조포스파티딘산, 모노옥타노일리조포스파티딘산, 모노노나노일리조포스파티딘산, 모노데카노일리조포스파티딘산, 모노운데카노일리조포스파티딘산, 모노라우로일리조포스파티딘산, 모노트리데카노일리조포스파티딘산, 모노미리스토일리조포스파티딘산, 모노펜타데카노일리조포스파티딘산, 모노팔미토일리조포스파티딘산, 모노헵타데카노일리조포스파티딘산, 모노스테아로일리조포스파티딘산, 모노올레오일리조포스파티딘산 등을 들 수 있고, 지방산잔기 부분이 짝수 직쇄의 탄소쇄의 지방산잔기만으로 구성된 포스파티딘산으로서는, 포스파티딘산디올레오일, 포스파티딘산디미리스토일, 포스파티딘산디팔미토일, 포스파티딘산디라우로일, 포스파티딘산디옥타노일, 포스파티딘산디데카노일, 포스파티딘산디스테아로일, 포스파티딘산아라키도노일스테아로일, 1-올레오일-2-아세틸포스파티딘산, 1-라우로일-2-아세틸포스파티딘산, 1-미리스토일-2-아세틸포스파티딘산, 1-팔미토일-2-아세틸포스파티딘산, 1-스테아로일-2-아세틸포스파티딘산, 1-팔미톨레오일-2-아세틸포스파티딘산 등을 들 수 있다.

본 발명의 리조포스파티딘산과 프로안토시아니딘, 단백질 키나아제 C 특이적 저해제 또는 그 약리학적으로 허용되는 염 및 토코페롤로 구성된 군에서 선택된 하나 이상을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 육모제의 리조포스파티딘산은 상기 리조포스파티딘산과 동일하다.

또한, 본 발명의 포스파티딘산과 프로안토시아니딘, 단백질 키나아제 C 특이적 저해제 또는 그 약리학적으로 허용되는 염 및 토코페롤로 구성된 군에서 선택된 하나 이상을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 육모제의 포스파티딘산으로는, 상기 지방산잔기 부분이 짝수 직쇄의 탄소쇄의 지방산잔기만으로 구성된 포스파티딘산에 첨가하여 지방산잔기 부분이 홀수의 탄소쇄의 지방산잔기로 구성된 것, 지방산잔기 부분이 짝수이고 분지된 탄소쇄의 지방산잔기로 구성된 것 및, 지방산잔기 부분이 상기 각종 지방산잔기의 조합으로 이루어진 것도 포함된다. 구체적으로는, 상기 지방산잔기 부분이 짝수 직쇄의 탄소쇄의 지방산잔기만으로 구성된 포스파티딘산의 구체예에 부가하여 포스파티딘산디프로피오닐, 포스파티딘산디펜타노일, 포스파티딘산디헵타노일, 포스파티딘산디노나노일, 포스파티딘산디운데카노일, 포스파티딘산디트리데카노일, 포스파티딘산디펜타데카노일, 포스파티딘산디헵타데카노일, 포스파티딘산디α-메틸옥타데카노일, 포스파티딘산디α-메틸운데카노일, 포스파티딘산디β-프로필운데카노일, 포스파티딘산디α-메틸스테아로일, 포스파티딘산디α-메틸팔미토일, 포스파티딘산디α-메틸노나노일, 포스파티딘산비스(γ-디메틸노나노일), 포스파티딘산비스(δ-에틸트리데카노일), 1-올레오일-2-이소부티릴포스파티딘산, 1-라우로일-2-이소부티릴포스파티딘산, 1-미리스토일-2-이소부티릴포스파티딘산, 1-팔미토일-2-이소부티릴포스파티딘산, 1-스테아로일-2-이소부티릴포스파티딘산, 1-팔미톨레오일-2-이소부티릴포스파티딘산, 1-올레오일-2-프로피오닐포스파티딘산, 1-라우로일-2-프로피오닐포스파티딘산, 1-미리스토일-2-프로피오닐포스파티딘산, 1-팔미토일-2-프로피오닐포스파티딘산, 1-스테아로일-2-프로피오닐포스파티딘산, 1-팔미톨레오일-2-프로피오닐포스파티딘산 등을 들 수 있다.

이들 포스파티딘산은 난황이나 대두 등으로부터 정제하여 얻을 수 있으며, 시판품으로서 또는 화학합성 (예컨대, US 3423440) 에 의해 얻을 수도 있다. 또한, 리조포스파티딘산은 난황이나 대두 등으로부터 정제한 포스파티딘산을 효소처리 (포스포리파아제A₁또는 포스포리파아제A₂로 가수분해) 함으로써 얻을 수 있으며, 화학합성 (예컨대 US 3423440) 에 의해 얻을 수도 있다.

본 발명에 사용되는 프로안토시아니딘은 하기 화학식 Ⅳ:

(식 중, R³및 R⁴는 동일하거나 다르며 수소원자 또는 히드록실기를 나타냄) 등으로 표시되는 프라반-3-올 유도체를 구성단위로 하여 중합한 화합물군을 말한다.

프라반-3-올 유도체의 구체예로는 카테킨, 에피카테킨, 가로카테킨, 에피가로카테킨, 아프제레틴, 에피아프제레틴 등을 들 수 있고, 이들의 광학이성체도 모두 포함되지만, 에피카테킨 또는 카테킨을 구성단위로 하는 프로안토시아니딘이 본 발명에서는 보다 바람직하게 사용된다.

식(Ⅳ) 로 표시되는 프라반-3-올 유도체의 결합양식으로는 어떠한 것도 포함되지만, 예컨대 프라반-3-올 유도체가 2 개 중합된 2 량체로는 하기 화학식 Ⅴ:

(식 중, R³및 R⁴는 각각 상기와 동일한 의미이고, R^3a및 R^4a는 각각 상기 R³및 R⁴와 동일한 의미임) 으로 표시되는 결합양식을 채택하는 것을 들 수 있고, 3 량체 이상의 중합체로는 동일하거나 다른 이들의 결합양식의 조합에 의한 것을 들 수 있다.

본 발명에 사용되는 프로안토시아니딘은 프라반-3-올 유도체의 2 량체 이상이면 되지만, 바람직하게는 2 ∼ 10 량체, 보다 바람직하게는 2 ∼ 5 량체, 보다 더 바람직하게는 2 ∼ 3 량체이다. 프라반-3-올 유도체의 2 량체로서는, 예컨대 에피카테킨-(4β→8)-카테킨 등과 같은 에피카테킨과 카테킨의 결합체, 에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨 등과 같은 에피카테킨의 2 량체, 카테킨-(4α→8)-카테킨 등과 같은 카테킨의 2 량체 등을 들 수 있고, 프라반-3-올 유도체의 3 량체로서는, 예컨대 에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨 등과 같은 에피카테킨의 3 량체, 카테킨-(4α→8)-카테킨-(4α→8)-카테킨 등과 같은 카테킨의 3 량체, 에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨-(4β→8)-카테킨 등과 같은 에피카테킨과 카테킨의 혼합 3 량체 등을 들 수 있다.

또, 이들 프로안토시아니딘에 갈릭산이나 글루코스, 람노스 등과 같은 당류가 부가된 화합물도 본 발명에 사용되는 프로안토시아니딘에 포함된다.

프로안토시아니딘은, 포도속, 사과속, 대맥속, 감속, 야자나무속, 카카오속, 소나무속, 강낭콩속, 낙화생속 등에 속하는 포도, 사과, 대맥, 감, 야자, 카카오, 소나무, 팥, 피넛 등과 같은 각종 식물로부터 추출 정제하여 얻는 것 이외에 화학합성으로도 얻을 수 있다.

예컨대, 프로안토시아니딘의 식물로부터의 추출 정제는 다음과 같은 공지된 방법으로 실시할 수 있다.

원료인 식물의 과실, 종자, 잎, 줄기, 뿌리, 뿌리줄기 등을 적당한 시기에 채취한 후, 그대로 또는 통상 공기건조 등의 건조공정을 실시하여 추출원료로 한다. 건조된 식물체로부터 프로안토시아니딘의 추출을 실시하는 경우에는, 공지된 방법 [케미컬 앤드 파머슈티컬 블루틴 (Chemical & Pharmaceutical Bulletin),3, 3218 (1990) 및 동,40, 889-898 (1992)] 에 준하여 실시할 수 있다.

즉, 원료를 분쇄 또는 세단한 후, 용매를 사용하여 추출을 실시한다. 추출용매로서는, 물, 에탄올, 메탄올, 이소프로필알콜 등과 같은 알콜류, 아세톤, 메틸에틸케톤 등과 같은 케톤류, 아세트산메틸, 아세트산에틸 등과 같은 에스테르류 등의 친수성 또는 친유성 용매를, 단독으로 또는 혼합용매로 하여 이용할 수 있다. 추출온도는 통상 0 ∼ 100℃, 바람직하게는 5 ∼ 50℃ 이다. 추출시간은 1 시간 ∼ 10 일간 정도이고, 용매량은 건조원료에 대해 통상 1 ∼ 30 배 중량, 바람직하게는 5 ∼ 10 배 중량이다. 추출 조작은 교반 또는 침지 방치하며, 필요에 따라 2 ∼ 3 회 반복한다.

상기 조작으로 얻어진 조추출액으로부터 불용성 잔류물을 여과 또는 원심분리로 제거한 추출액, 또는 식물의 착즙액이나 수액으로부터의 프로안토시아니딘의 정제방법은, 공지된 분리정제방법이면 어떤 것이라도 되지만, 2상 용매 분배법, 컬럼 크로마토그래피법, 분취 고속액체 크로마토그래피법 등을 단독으로 또는 조합하여 사용하는 것이 바람직하다. 예컨대 2상 용매 분배법으로는, 상기 추출액으로부터 유용성 성분이나 색소를 n-헥산, 석유에테르 등으로 추출 제거하는 방법, 이 추출액으로부터 n-부탄올, 메틸에틸케톤 등의 용매와 물의 분배에 의해, 용매상으로 프로안토시아니딘을 회수하는 방법 등을 들 수 있다. 컬럼 크로마토그래피법으로는 순상계 실리카겔, 역상계 실리카겔을 사용하는 방법, 담체로서 다이아이온 HP-20, 세파비즈 SP-207 등을 사용하는 흡착 컬럼 크로마토그래피법, 담체로서 세파덱스 LH-20 등을 사용하는 겔여과법 등을 들 수 있고, 이들을 단독으로 또는 조합하여 사용하고, 반복하여 사용할 수도 있다. 분취 고속액체 크로마토그래피법으로서는, 옥타데실실리카 등을 사용하는 역상계의 컬럼을 사용하는 방법, 실리카겔 등을 사용하는 순상계의 컬럼을 사용하는 방법 등을 들 수 있다.

상기 정제방법에 의해, 상기 추출액으로부터 염류 등 수용성의 이온성 물질, 당류ㆍ다당류 등의 비이온성 물질, 유분, 색소 등을 제거하여 프로안토시아니딘을 정제할 수 있다.

또, 포도유래 프로안토시아니딘은 액타 더마토 베네레올로지카 (Acta Dermato Venereologica),78, 428-432 (1998) 에 기재된 방법 또는 이 방법에 준하여, 프로시아니딘 B-1 [에피카테킨-(4β→8)-카테킨], 프로시아니딘 B-2 [에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨], 프로시아니딘 B-3 [카테킨-(4α→8)-카테킨] 및 프로시아니딘 C-1 [에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨] 은 저널 오브 인베스티게이티브 더마톨로지 (The Journal of Investigative Dermatology),112, 310-316 (1999) 에 기재된 방법 또는 이 방법에 준하여 각각 추출 정제할 수 있다.

프로안토시아니딘의 화학합성에 의한 제조는, 에피카테킨 또는 카테킨의 2 량체의 제조방법이 기재되어 있는 저널 오브 케미컬 소사이어티 파킨 트랜색션 Ⅰ (Journal of Chemical Society, Perkin Transaction I), 1535-1543 (1983) 또는 피토케미스트리 (Phytochemistry),25, 1209-1215 (1986) 에 기재된 방법 또는 이들에 준한 방법에 의해 실시할 수 있다.

프로안토시아니딘을 본 발명의 유효성분으로 사용할 경우, 프로안토시아니딘은 1 종 또는 2 종 이상 혼합할 수도 있고, 구체적인 예로는, 포도종자유래 프로안토시아니딘, 사과유래 프로안토시아니딘, 소나무유래 프로안토시아니딘, 정제프로시아니딘올리고머, 프로시아니딘 B-1, 프로시아니딘 B-2, 프로시아니딘 B-3, 프로시아니딘 C-1 등에서 선택된 1 종 또는 2 종 이상, 그 중에서도 프로시아니딘 B-1, 프로시아니딘 B-2, 프로시아니딘 B-3 및 프로시아니딘 C-1 에서 선택된 1 종 또는 2 종 이상이 바람직하게 사용된다.

본 발명에 사용되는 단백질 키나아제 C 특이적 저해제로서는, 단백질 키나아제 C 를 특이적으로 저해하는 것이면 어떠한 것이라도 사용되는데, 바람직하게는 단백질 키나아제 C (PKC) 저해활성과 단백질 키나아제 A (PKA) 저해활성을 이하에 나타내는 PKC 저해활성 측정법 및 PKA 저해활성 측정법으로 측정했을 때, PKA 의 50% 저해정수 (이하, PKA-IC₅₀으로 약기함) 와 PKC 의 50% 저해정수 (이하, PKC-IC₅₀으로 약기함) 의 비 (이하, PKA-IC₅₀/PKC-IC₅₀으로 약기함) 가 3 이상, 바람직하게는 3 ∼ 10⁹, 보다 바람직하게는 10 ∼ 10⁹인 프로테인퀴나아제 저해제가 사용된다. 구체적으로는 카르포스틴C, 헥사데실포스포콜린, 팔미토일-DL-카르니틴 및 폴리믹신B 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염 등에서 선택된 1 종 또는 2 종 이상을 들 수 있다.

이들의 약리학적으로 허용되는 염으로서는, 염산염, 브롬화수소산염, 황산염, 질산염, 포름산염, 아세트산염, 벤조산염, 말레산염, 푸마르산염, 숙신산염,타르타르산염, 시트르산염, 옥살산염, 메탄술폰산염, 톨루엔술폰산염, 아스파라긴산염, 글루타민산염 등을 들 수 있다.

PKC 저해활성 측정법 및 PKA 저해활성 측정법에 대해 다음에 나타낸다.

(1) PKC 저해활성 측정법

PKC 저해활성의 측정은, 요시카와 등의 방법 [저널 오브 바이올로지컬 케미스트리 (Journal of Biological Chemistry),257, 13341(1982)] 에 준하여 실시할 수 있다.

2.5μ㏖ 아세트산마그네슘, 50㎍ 히스톤 타입 ⅢS (시그마사 제조), 20㎍ 포스파티딜세린, 0.8㎍ 다이올레인, 25n㏖ 염화칼슘, 5㎍ 조효소 (요시카와 등의 방법으로 래트의 뇌로부터 부분 정제한 것) 및 5μ㏖ 트리스염산 완충액 (pH 7.5) 을 함유하는 250㎕ 수용액에 검체를 함유하는 상기 수용액 (10㎕) 을 첨가하여, 30℃ 에서 3 분간 인큐베이트한다. 인큐베이트 후, 1.25n㏖ [γ-³²P] ATP (5 ∼ 10 ×10³cpm/n㏖) 를 첨가하여, 30℃ 에서 3 분간 인산화 반응을 실시하고, 25% 트리클로로아세트산을 첨가하여 반응을 정지시킨다. 이 반응액을 아세트산셀룰로오스막 (포어 사이즈 0.45㎛) (토요로시사 제조) 으로 여과하고, 5% 트리클로로아세트산으로 4 회 세정한 후, 이 막위에 남은 방사활성을 측정하여 검체값으로 한다. 또, 상기 조작을 검체를 첨가하지 않고 실시하고, 방사활성을 측정하여 대조값으로 한다.

대조값에 대해, 50% 의 검체값을 나타낼 때의 검체의 몰농도를 PKC 의 50%저해정수 (PKC-IC₅₀) 로 한다.

(2) PKA 저해활성 측정법

PKA 저해활성의 측정은, 쿠오 (Kuo) 등의 방법 [바이오케미스트리 (Biochemistry),64, 1349 (1969)] 에 준하여 실시할 수 있다.

5μ㏖ 트리스염산 완충액 (pH 6.8), 2.5μ㏖ 의 아세트산마그네슘, 100㎍ 히스톤 타입 ⅡS (시그마사 제조), 0.25n㏖ c-AMP 및 200㎍ 조효소 [쿠오 (Kuo) 등의 방법으로 송아지의 심장으로부터 부분 정제한 것] 를 함유하는 250㎕ 의 수용액에 검체를 함유하는 상기 수용액 (10㎕) 을 첨가하여, 30℃ 에서 3 분간 인큐베이트한다. 인큐베이트 후, 1.25n㏖ [γ-³²P] ATP (5∼10 ×10³cpm/n㏖) 를 첨가하여, 30℃ 에서 3 분간 인산화 반응을 실시하고, 25% 트리클로로아세트산을 첨가하여 반응을 정지시킨다. 이 반응액을 아세트산셀룰로오스막 (포어 사이즈 0.45㎛) (토요로시사 제조) 으로 여과하고, 5% 트리클로로아세트산으로 4 회 세정한 후, 이 막위에 남은 방사활성을 측정하여 검체값으로 한다. 또, 상기 조작을 검체를 첨가하지 않고 실시하고, 방사활성을 측정하여 대조값으로 한다.

대조값에 대해, 50% 의 검체값을 나타낼 때의 검체의 몰농도를 PKA 의 50% 저해정수 (PKA-IC₅₀) 로 한다.

본 발명에 사용되는 토코페롤로서는, 예컨대 시판되고 있는 천연 유래품, 합성품 모두 사용할 수 있고, 또 아세트산에스테르나 니코틴산에스테르 등의 유도체를 사용할 수도 있다. 구체적으로는 dl-α-토코페롤, d-α-토코페롤, 아세트산dl-α-토코페롤, 아세트산 d-α-토코페롤, 니코틴산 dl-α-토코페롤 등을 들 수 있다.

본 발명의 육모제의 제형으로서는, 리조포스파티딘산, 포스파티딘산 또는 이 리조포스파티딘산 및 이 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상과 프로안토시아니딘, 단백질 키나아제 C 특이적 저해제 또는 그 약리학적으로 허용되는 염 및 토코페롤로 구성된 군에서 선택된 하나 이상을 배합할 수 있는 제형이면 어떤 제형을 사용할 수도 있다. 예컨대, 적당한 의약 기제와 배합하여 액상 또는 고형상의 육모제로 사용할 수 있다.

액상 또는 고형상의 육모 제형으로서는, 헤어 리퀴드, 헤어 토닉, 헤어 로션 등의 액상 제형, 연고, 헤어크림 등의 고형상 제형을 들 수 있고, 각각 바람직한 기제에 본 발명에 사용되는 리조포스파티딘산, 포스파티딘산 또는 이 리조포스파티딘산 및 이 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상과 프로안토시아니딘, 단백질 키나아제 C 저해제 또는 토코페롤을 첨가하여 통상적인 방법으로 제조할 수 있다.

본 발명의 육모제 중 리조포스파티딘산 또는 포스파티딘산의 함유량은 리조포스파티딘산 및 포스파티딘산의 종류나 물성에서 유래되는 경피 흡수성에 따라 크게 달라지는데, 단독으로 또는 혼합물로서 통상 0.01 ∼ 5.0 중량% (이하, 간단하게 % 라고 함), 바람직하게는 0.01 ∼ 3.0%, 보다 바람직하게는 0.1 ∼ 1.0% 이다. 프로안토시아니딘의 함유량은 정제도에 따라 달라지는데, 통상 0.01 ∼ 10.0%, 바람직하게는 0.1 ∼ 5.0%, 보다 바람직하게는 0.3 ∼ 2.0% 이다. 또, 단백질 키나아제 C 저해제의 함유량은 저해활성의 강도나 물성에서 유래되는 경피 흡수성에따라 크게 달라지는데, 단독으로 또는 혼합물로서 통상 0.00001 ∼ 1%, 바람직하게는 0.0001 ∼ 1%, 보다 바람직하게는 0.001 ∼ 0.1% 이다. 토코페롤의 함유량은 통상 0.01 ∼ 2%, 바람직하게는 0.05 ∼ 1%, 보다 바람직하게는 0.1 ∼ 0.5% 이다.

액상 제형에 바람직한 기제로서는, 육모제에 통상 사용되고 있는 것, 예컨대 정제수, 에틸알콜, 다가 알콜류 등을 들 수 있고, 필요에 따라 첨가제를 첨가할 수도 있다.

다가 알콜로서는, 글리세롤, 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 등을 들 수 있다.

첨가제로서는, 계면활성제, 비타민류, 소염제, 살균제, 호르몬제, 생약 엑스, 팅크류, 청량제, 보습제, 각질용해제, 산화방지제, 금속이온 봉쇄제, 향료 등을 들 수 있다.

계면활성제로서는, 폴리옥시에틸렌(60)경화피마자유, 폴리옥시에틸렌(8)올레일에테르, 폴리옥시에틸렌(10)올레일에테르, 모노올레인산폴리옥시에틸렌(10), 모노스테아린산소르비탄, 모노스테아린산폴리옥시에틸렌(30)글리세릴, 모노올레인산폴리옥시에틸렌(20)소르비탄, 자당지방산에스테르, 모노올레인산헥사글리세린, 모노라우린산헥사글리세린, 폴리옥시에틸렌환원라놀린, 폴리옥시에틸렌(20)라놀린알콜, 폴리옥시에틸렌(25)글리세릴피로글루타민산이소스테아린산디에스테르, N-아세틸글루타민이소스테아릴에스테르 등을 들 수 있다.

비타민류로서는, 니코틴산벤질, 니코틴산아미드, D-판토테닐알콜, 판토테닐에틸에테르, 비오틴, 염산피리독신, 리보플라빈 등을 들 수 있다.

소염제로서는, 글리틸리틴산디칼륨, β-글리틸레틴산, 알란토인, 염산디펜히드라민, 구아이아줄렌, l-멘톨 등을 들 수 있다.

살균제로서는, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 히노키티올, 트리클로산, 클로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레졸신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리실산, 아연피리티온, 염화벤잘코늄, 감광소301호, 모노니트로과이어콜나트륨 등을 들 수 있다.

호르몬제로서는, 에티닐에스트라디올, 에스트론, 에스트라디올 등을 들 수 있다.

생약 엑스로서는, 월년초 엑스, 마늘 엑스, 당근 엑스, 알로에 엑스, 키나 엑스 등을 들 수 있다.

팅크류로서는, 고추 팅크, 생강 팅크, 칸타리스 팅크 등을 들 수 있다

청량제로서는, 고추 팅크, 1-멘톨, 캠퍼 등을 들 수 있다.

보습제로서는, L-피롤리돈카르복실산, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산, 동충하초 추출물, 사프란 추출물 등을 들 수 있다.

각질용해제로서는, 레졸신, 살리실산, 젖산 등을 들 수 있다.

산화방지제로서는, 부틸히드록시아니솔, 이소프로필갈레이트, 갈릭산프로필, 에리소르빈산 등을 들 수 있다.

금속이온 봉쇄제로서는, 에틸렌디아민테트라아세테이트 또는 그 염 등을 들 수 있다.

향료로서는, 오렌지유, 레몬유, 베르가모트유, 라임유, 레몬 그래스유, 라벤더유 등과 같은 천연향료 및 멘톨, 로즈 옥사이드, 리나로올, 시트랄, 아세트산리나릴 등과 같은 합성향료를 들 수 있다.

상기 액상 제형을 분무제로서 사용할 때에는 가연 가스, 불연 가스 등을 사용할 수 있다. 가연 가스로서는 LPG (액화 석유 가스), 디메틸에테르 등을 들 수 있고, 불연 가스로서는 질소 가스, 탄산 가스 등을 들 수 있다.

고체상 제형의 기제로서는, 바세린, 고형 파라핀, 식물유, 광물유, 라놀린, 납류, 매크로골 등을 들 수 있고, 필요에 따라 상기 첨가제, 레시틴 등의 유화제, 에틸알콜, 이소프로필알콜 등과 같은 저급 알콜 등을 첨가할 수도 있다.

본 발명의 육모제의 투여량은 연령, 체중, 증상, 치료효과, 투여방법, 처리시간 등에 따라 달라지만, 성인 1인당 1 회에 리조포스파티딘산 또는 포스파티딘산으로서 0.1∼250㎎, 바람직하게는 1∼100㎎ 이 하루에 1 회에서 몇회, 경피 투여된다.

다음에 실시예로 본 발명을 상세하게 설명한다.

실시예

실시예 1 : 조성물 1 및 조성물 2 의 제조

모노팔미토일리조포스파티딘산 (후나코시사 제조) 0.3%

에틸알콜 70%

1,3-부틸렌글리콜 3%

N-아세틸글루타민이소스테아릴에스테르 0.25%

폴리옥시에틸렌(25)글리세릴피로글루타민산이소스테아린산디에스테르

0.25%

상기 혼합물에 정제수를 첨가하여 100% 로 하고, 이것들을 교반하면서 첨가하여 균일하게 하여 조성물 1 을 조제한다.

상기 조성물에서 모노팔미토일리조포스파티딘산 대신에 정제수를 첨가하여 조성물 2 를 조제한다.

실시예 2 : 조성물 3 및 조성물 4 의 제조

모노팔미토일리조포스파티딘산 (후나코시사 제조) 0.3%

포도유래 프로안토시아니딘 3%

에틸알콜 70%

1,3-부틸렌글리콜 3%

N-아세틸글루타민이소스테아릴에스테르 0.25%

0.25%

포도유래 프로안토시아니딘은 액타 더마토 베네레올로지카 (Acta Dermato Venereologica),78, 428-432 (1998) 에 기재된 방법으로 제조한다.

상기 혼합물에 정제수를 첨가하여 100% 로 하고, 이것들을 교반하면서 첨가하여 균일하게 하여 조성물 3 을 조제한다.

상기 조성물에서 모노팔미토일리조포스파티딘산 대신에 정제수를 첨가하여 조성물 4 를 조제한다.

실시예 3 : 조성물 5 및 조성물 6 의 제조

모노팔미토일리조포스파티딘산 (후나코시사 제조) 0.3%

프로시아니딘 B-2 1%

에틸알콜 70%

1,3-부틸렌글리콜 3%

N-아세틸글루타민이소스테아릴에스테르 0.25%

0.25%

프로시아니딘 B-2 는 저널 오브 인베스티게이티브 더마톨로지 (The Journal of Investigative Dermatology),112, 310-316 (1999) 에 기재된 방법으로 제조한다.

상기 혼합물에 정제수를 첨가하여 100% 로 하고, 이것들을 교반하면서 첨가하여 균일하게 하여 조성물 5 를 조제한다.

상기 조성물에서 모노팔미토일리조포스파티딘산 대신에 정제수를 첨가하여 조성물 6 을 조제한다.

실시예 4 : 조성물 7 및 조성물 8 의 제조

모노팔미토일리조포스파티딘산 (후나코시사 제조) 0.3%

프로시아니딘 C-1 1%

에틸알콜 70%

1,3-부틸렌글리콜 3%

N-아세틸글루타민이소스테아릴에스테르 0.25%

0.25%

프로시아니딘 C-1 은 저널 오브 인베스티게이티브 더마톨로지 (The Journal of Investigative Dermatology),112, 310-316 (1999) 에 기재된 방법으로 제조한다.

상기 혼합물에 정제수를 첨가하여 100% 로 하고, 이것들을 교반하면서 첨가하여 균일하게 하여 조성물 7 을 조제한다.

상기 조성물에서 모노팔미토일리조포스파티딘산 대신에 정제수를 첨가하여 조성물 8 을 조제한다.

실시예 5 : 조성물 9 및 조성물 10 의 제조

모노팔미토일리조포스파티딘산 (후나코시사 제조) 0.3%

카르포스틴C (교와 학꼬고오교샤 제조) 0.03%

에틸알콜 90%

1,3-부틸렌글리콜 3%

N-아세틸글루타민이소스테아릴에스테르 0.25%

0.25%

상기 혼합물에 정제수를 첨가하여 100% 로 하고, 이것들을 교반하면서 첨가하여 균일하게 하여 조성물 9 를 조제한다.

상기 조성물에서 모노팔미토일리조포스파티딘산 대신에 정제수를 첨가하여 조성물 10 을 조제한다.

실시예 6 : 조성물 11 및 조성물 12 의 제조

모노팔미토일리조포스파티딘산 (후나코시사 제조) 0.3%

헥사데실포스포콜린 (시그마사 제조) 0.3%

에틸알콜 70%

1,3-부틸렌글리콜 3%

N-아세틸글루타민이소스테아릴에스테르 0.25%

0.25%

상기 혼합물에 정제수를 첨가하여 100% 로 하고, 이것들을 교반하면서 첨가하여 균일하게 하여 조성물 11 을 조제한다.

상기 조성물에서 모노팔미토일리조포스파티딘산 대신에 정제수를 첨가하여 조성물 12 를 조제한다.

실시예 7 : 조성물 13 및 조성물 14 의 제조

모노팔미토일리조포스파티딘산 (후나코시사 제조) 0.3%

dl-α-토코페롤 (에이자이사 제조) 1%

에틸알콜 70%

1,3-부틸렌글리콜 3%

N-아세틸글루타민이소스테아릴에스테르 0.25%

0.25%

상기 혼합물에 정제수를 첨가하여 100% 로 하고, 이것들을 교반하면서 첨가하여 균일하게 하여 조성물 13 을 조제한다.

상기 조성물에서 모노팔미토일리조포스파티딘산 대신에 정제수를 첨가하여 조성물 14 를 조제한다.

실시예 8 : 조성물 15 및 조성물 16 의 제조

포스파티딘산디올레오일 (시그마사 제조) 0.4%

에틸알콜 70%

1,3-부틸렌글리콜 3%

N-아세틸글루타민이소스테아릴에스테르 0.25%

0.25%

상기 혼합물에 정제수를 첨가하여 100% 로 하고, 이것들을 교반하면서 첨가하여 균일하게 하여 조성물 15 를 조제한다.

상기 조성물에서 포스파티딘산디올레오일 대신에 정제수를 첨가하여 조성물 16 을 조제한다.

실시예 9 : 조성물 17 및 조성물 18 의 제조

포스파티딘산디올레오일 (시그마사 제조) 1%

프로시아니딘 B-2 1%

에틸알콜 70%

1,3-부틸렌글리콜 3%

N-아세틸글루타민이소스테아릴에스테르 0.25%

0.25%

프로시아니딘 B-2 는 저널 오브 인베스티게이티브 더마톨로지 (The Journal of Investigative Dermatology),112, 310-316 (1999) 에 기재된 방법에 따라 제조한다.

상기 혼합물에 정제수를 첨가하여 100% 로 하고, 이것들을 교반하면서 첨가하여 균일하게 하여 조성물 17 을 조제한다.

상기 조성물에서 포스파티딘산디올레오일 대신에 정제수를 첨가하여 조성물 18 을 조제한다.

실시예 10 : 조성물 19 및 조성물 20 의 제조

포스파티딘산디올레오일 (시그마사 제조) 1%

프로시아니딘 C-1 1%

에틸알콜 70%

1,3-부틸렌글리콜 3%

N-아세틸글루타민이소스테아릴에스테르 0.25%

0.25%

프로시아니딘 C-1 은 저널 오브 인베스티게이티브 더마톨로지 (The Journal of Investigative Dermatology),112, 310-316 (1999) 에 기재된 방법에 따라 제조한다.

상기 혼합물에 정제수를 첨가하여 100% 로 하고, 이것들을 교반하면서 첨가하여 균일하게 하여 조성물 19 를 조제한다.

상기 조성물에서 포스파티딘산디올레오일 대신에 정제수를 첨가하여 조성물 20 을 조제한다.

실시예 11 : 조성물 21 및 조성물 22 의 제조

포스파티딘산디올레오일 (시그마사 제조) 1%

헥사데실포스포콜린 (시그마사 제조) 0.3%

에틸알콜 70%

1,3-부틸렌글리콜 3%

N-아세틸글루타민이소스테아릴에스테르 0.25%

0.25%

상기 혼합물에 정제수를 첨가하여 100% 로 하고, 이것들을 교반하면서 첨가하여 균일하게 하여 조성물 21 을 조제한다.

상기 조성물에서 포스파티딘산디올레오일 대신에 정제수를 첨가하여 조성물 22 를 조제한다.

실시예 12 : 조성물 23 및 조성물 24 의 제조

포스파티딘산디올레오일 (시그마사 제조) 1%

dl-α-토코페롤 (에이자이사 제조) 1%

에틸알콜 70%

1,3-부틸렌글리콜 3%

N-아세틸글루타민이소스테아릴에스테르 0.25%

0.25%

상기 혼합물에 정제수를 첨가하여 100% 로 하고, 이것들을 교반하면서 첨가하여 균일하게 하여 조성물 23 을 조제한다.

상기 조성물에서 포스파티딘산디올레오일 대신에 정제수를 첨가하여 조성물 24 를 조제한다.

실시예 13 : 조성물 25 의 제조

포스파티딘산디라우로일 (후나코시사 제조) 0.2%

에틸알콜 70%

1,3-부틸렌글리콜 3%

N-아세틸글루타민이소스테아릴에스테르 0.25%

0.25%

상기 혼합물에 정제수를 첨가하여 100% 로 하고, 이것들을 교반하면서 첨가하여 균일하게 하여 조성물 25 를 조제한다.

참고예 1 : PKC-IC₅₀및 PKA-IC₅₀의 측정

카르포스틴C, 헥사데실포스포콜린, 팔미토일-DL-카르니틴 및 폴리믹신B 에 대하여 상술한 PKC 저해활성 측정법 및 PKA 저해활성 측정법에 따라 PKC 저해활성 및 PKA 저해활성을 측정하여 PKC-IC₅₀및 PKA-IC₅₀을 구한다.

결과를 표 1 에 나타낸다.

[표 1]

검체	PKC-IC₅₀(μmol/ℓ)	PKA-IC₅₀(μmol/ℓ)	PKA-IC₅₀/PKC-IC₅₀
카르포스틴C	0.05	＞50	＞1000
헥사데실포스포콜린	94	＞1000	＞10.6
팔미토일-DL-카르니틴	230	＞1000	＞4.3
폴리믹신B	2.6	＞1000	＞384

다음으로 본 발명의 육모제 작용에 대해서 시험예로 구체적으로 나타낸다.

시험예 1 : 마우스 모포 상피세포 배양에 대한 촉진효과

모포 상피세포의 분리 및 배양은 Tanigaki 등의 방법 [어키브 오브 더마톨로지컬 리서치 (Archives of Dermatological Research),284, 290-296 (1992)] 을 개변하여 실시한다.

즉, 생후 4 일된 C3H 마우스 (닛뽕 찰슬리버) 의 등부분 피부를 채취하여 500 단위/㎖ 의 디스파아제 (고오도 슈세이) 및 5% 소 태아 혈청 (FCS) 을 함유한 MEM 배지 (Eagle's Minimum Essential Medium) 에서 4℃, 16 시간 처리한다.

얻은 피부 절편에서 표피를 박리하고, 진피층을 0.25% 콜라게나아제 N-2 (닛따 젤라틴) 및 10% FCS 를 함유한 DMEM 배지 (Dulbecco's modified Eagle Medium) 에서 37℃, 1시간 처리하여 진피 현탁액을 얻는다. 진피 현탁액을 212 미크론의나일론 메시 (닛뽕 리가가꾸 기까이) 로 여과한 후, 여과액을 1000rpm 으로 5분간 원심분리하여 모포 조직을 함유한 펠릿을 얻는다. 펠릿에 칼슘 마그네슘 프리 PBS (Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline) 용액을 첨가하여 피펫으로 현탁한 후, 15 분간 정치함으로써 모 조직을 침강시킨다. 얻은 모 조직을 사용하며 상기 펠릿으로 실시하고, 칼슘 마그네슘 프리 PBS 용액의 첨가, 피펫에 의한 현탁, 15 분간 정치, 침강 조작과 동일한 조작을 3 회 반복한다.

얻은 모 조직에 0.1% 에틸렌디아민4아세트산 (EDTA)-0.25% 트립신액 (기부코사 제조) 을 첨가하여 37℃ 에서 5 분간 처리한 후, 10% FCS 를 함유한 DMEM 배지를 첨가하여 3 ×10⁵/㎖ 의 세포 농도의 모 조직 세포액을 조제한다. 모 조직 세포액을 24 웰 콜라겐코트 플레이트 (이와끼 글래스사 제조) 에 1㎖/웰씩 파종하여 37℃, 5% CO₂하에서 24 시간 배양한다.

배양 후 MCDB153 배지 (교꾸또 세이야꾸사 제조) 에 소 인슐린 (시그마사 제조) 5㎎/L; 마우스 상피 증식인자 (EGF) (다까라 슈조사 제조) 5㎍/L; 소 하수체 추출물 (교꾸또 세이야꾸사 제조) 40㎎/L; 인체 트랜스페린 (시그마사 제조) 10㎎/L; 하이드로코티존 (시그마사 제조) 0.4㎎/L; 프로게스테론 (코라보라티브 리서치사 제조) 0.63㎍/L; O-포스포에탄올아민 (시그마사 제조) 14㎎/L; 에탄올아민 (시그마사 제조) 6.1㎎/L; 페니실린 (와꼬오사 제조) 50U/㎖; 스트렙토마이신 (와꼬오사 제조) 50㎍/㎖; 모노올레오일리조포스파티딘산, 포스파티딘산디올레오일 (시그마사 제조), 포스파티딘산디데카노일 (시그마사 제조), 포스파티딘산디미리스토일 (후나코시사 제조), 포스파티딘산디팔미토일 (와꼬오 쥰야꾸사 제조), 포스파티딘산디라우로일 (후나코시사 제조) 또는 난황 유래의 포스파티딘산 (시그마사 제조); 및/또는 프로안토시아니딘, 단백질 키나아제 C 특이적 저해제 또는 토코페롤을 함유한 DMSO 용액 (1/100 부피 첨가함) 을 첨가한 배지로 배지 교환하고, 다시 37℃, 5% CO₂존재하에서 5 일간 배양한다. 또한, 배지는 하루 걸러 교환한다.

또, 상기 배지에서 리조포스파티딘산 또는 포스파티딘산 및/또는 프로안토시아니딘, 단백질 키나아제 C 특이적 저해제 또는 토코페롤을 함유한 DMSO 용액 대신에 DMSO 만을 1/100 부피 첨가한 배지에서 배양한 것을 대조군으로 한다.

세포증식도의 측정은 MTT [3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드] 를 사용한 방법으로 실시한다 [실험의약 별책, 바이오매뉴얼 UP 시리즈 분자생물학 연구를 위한 배양세포실험법, 89-92 면, 요오도사 (1995)].

24웰 마이크로 플레이트 (2㎠/웰) 의 각 웰에, 배양액 1㎖ 에 대하여 1/10 부피의 MTT 의 PBS 용액 (5㎎/㎖) 을 첨가하여 흔들어서 균일하게 하고, 37℃, 5% CO₂존재 하에서 4 시간 배양한다. 4 시간 후 배양액을 흡인하고 각각의 플레이트에 1㎖ 의 0.04mol/L HCl 이소프로필알콜 용액을 첨가하여 웰 안에 생성된 포르마잔이 완전히 녹을 때까지 혼합한다.

650㎚ 를 대조로 하고 570㎚ 에서의 흡광도를 측정하여 세포의 증식도를 측정한다.

본 발명의 화합물의 증식촉진활성을 표 2 에 나타낸다.

[표 2] (1) 리조포스파티딘산의 증식촉진활성

유효성분	대조군의 증식을 100 으로 하였을 때의 상대 증식도
프로시아니딘 B-2 (30μmol/ℓ)	260
프로시아니딘 B-2 (30μmol/ℓ)＋모노올레오일리조포스파티딘산 (3μmol/ℓ)	327
카르포스틴C (3μmol/ℓ)	180
카르포스틴C (3μmol/ℓ)＋모노올레오일리조포스파티딘산 (3μmol/ℓ)	272
dl-α-토코페롤 (30μmol/ℓ)	150
dl-α-토코페롤 (30μmol/ℓ)＋모노올레오일리조포스파티딘산 (3μmol/ℓ)	240
모노올레오일리조포스파티딘산 (3μmol/ℓ)	200

[표 2] (2) 포스파티딘산의 증식촉진활성

유효성분	대조군의 증식을 100 으로 하였을 때의 상대 증식도
프로시아니딘 B-2 (10μmol/ℓ)	251
프로시아니딘 B-2 (10μmol/ℓ)＋포스파티딘산디올레오일 (10μmol/ℓ)	346
카르포스틴C (0.01μmol/ℓ)	172
카르포스틴C (0.01μmol/ℓ)＋난황 레시틴 유래의 포스파티딘산(20μmol/ℓ)	314
dl-α-토코페롤 (30μmol/ℓ)	199
dl-α-토코페롤 (30μmol/ℓ)＋난황 레시틴 유래의 포스파티딘산(20μmol/ℓ)	341
포스파티딘산디라우로일 (10μmol/ℓ)	379
포스파티딘산디미리스토일 (10μmol/ℓ)	361
포스파티딘산디팔미토일 (20μmol/ℓ)	314
포스파티딘산디올레오일 (10μmol/ℓ)	255
포스파티딘산디데카노일 (1μmol/ℓ)	168
난황 레시틴 유래의 포스파티딘산 (20μmol/ℓ)	273

표 2 에서 본 발명의 육모제는 현저한 마우스 모포 상피세포 증식촉진활성을 나타낸다.

시험예 2 : 마우스의 발모에 대한 효과

오가와 등의 방법 [저널 오브 더마톨로지 (The Journal of Dermatology),10, 45-54 (1983)] 을 참고로 마우스에 대한 발모 효과를 시험한다.

털 주기의 휴지기에 있는 생후 9 주된 C3H/HeSlc 수컷 마우스 (1군 4∼5 마리) 의 등부분 털을 전기 이발기와 전기 면도기로 깍아 실시예 1 내지 13 에서 제조한 조성물을 하루에 1 회, 제모 부분에 200㎕ 씩 균일하게 도포한다. 조성물 2 또는 조성물 16 을 대조군으로 한다.

시험 도포 개시 18 일 후, 마우스의 등부분 피부를 채취하여 사진 촬영한 후, 화상해석 처리장치 (아비오닉스사 제조, 스피카Ⅱ) 로 등부분의 피부 전면적에 대한 발모부의 100 분율을 구하고, 피검약제군의 발모율의 값에서 대조군의 발모율의 값을 뺀 값을 증가 발모 면적율 (%) 로 한다.

결과를 표 3 에 나타낸다.

[표 3] (1) 리조포스파티딘산의 마우스 발모 촉진효과

조성물	증가 발모 면적율 (%)
2 (대조군)	0
1	35
3	60
4	45
5	64
6	51
7	67
8	57
9	68
10	60
11	73
12	63
13	60
14	45

[표 3] (2) 포스파티딘산의 마우스 발모 촉진효과

조성물	증가 발모 면적율 (%)
16 (대조군)	0
15	44
17	51
18	40
19	55
20	44
21	58
22	46
23	52
24	39
25	41

표 3 에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 리조포스파티딘산 또는 포스파티딘산을 함유한 육모제에서는 현저한 마우스의 발모촉진효과가 보인다. 또한, 프로안토시아니딘, 단백질 키나아제 C 특이적 저해제, 토코페롤 각각의 발모 촉진효과는 리조포스파티딘산과 혼합함으로써 증강된다.

본 발명은 리조포스파티딘산 또는 포스파티딘산을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 두발의 육모ㆍ발모 효과가 우수한 육모제에 관한 것이다.

본 발명에 따르면, 리조포스파티딘산 및 지방산잔기 부분이 짝수 직쇄의 탄소쇄의 지방산잔기만으로 구성된 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 두발의 육모ㆍ발모 효과가 우수하고 안전한 육모제가 제공될 수 있다.

Claims

리조포스파티딘산 및 지방산잔기 부분이 짝수 직쇄의 탄소쇄의 지방산잔기만으로 구성된 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 육모제.
제 1 항에 있어서, 실질적으로 미녹시딜을 함유하지 않는 육모제.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 리조포스파티딘산 및 지방산잔기 부분이 짝수 직쇄의 탄소쇄의 지방산잔기만으로 구성된 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상의 함량이 0.01 ∼ 5.0% 인 육모제.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 리조포스파티딘산 및 지방산잔기 부분이 짝수 직쇄의 탄소쇄의 지방산잔기만으로 구성된 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상의 함량이 0.01 ∼ 1.0% 인 육모제.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 리조포스파티딘산이 하기 화학식 I:

[화학식 I]

(식 중, R¹은 알킬, 알케닐 또는 알키닐을 나타냄) 으로 표시되는 화합물인 육모제.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 리조포스파티딘산이 하기 화학식 Ⅱ:

[화학식 II]

(식 중, R²는 상기 R¹과 동일함) 으로 표시되는 화합물인 육모제.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 지방산잔기 부분이 짝수 직쇄의 탄소쇄의 지방산잔기만으로 구성된 포스파티딘산이 하기 화학식 Ⅲ:

[화학식 III]

(식 중, R³및 R⁴는 동일하거나 다르며 홀수 직쇄의 탄소쇄의 알킬, 홀수 직쇄의 탄소쇄의 알케닐 또는 홀수 직쇄의 탄소쇄의 알키닐기를 나타냄) 으로 표시되는 화합물인 육모제.
리조포스파티딘산 및 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상과 프로안토시아니딘, 단백질 키나아제 C 특이적 저해제 또는 그 약리학적으로 허용되는 염 및 토코페롤로 구성된 군에서 선택된 하나 이상을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 육모제.
리조포스파티딘산 및 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상과 프로안토시아니딘을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 육모제.
제 8 항 또는 제 9 항에 있어서, 프로안토시아니딘이 프로시아니딘 B-1, 프로시아니딘 B-2, 프로시아니딘 B-3 및 프로시아니딘 C-1 에서 선택된 1 종 또는 2 종 이상의 프로안토시아니딘인 육모제.
제 9 항 또는 제 10 항에 있어서, 단백질 키나아제 C 특이적 저해제 또는 그 약리학적으로 허용되는 염을 함유하는 육모제.
리조포스파티딘산 및 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상과 단백질 키나아제 C 특이적 저해제 또는 그 약리학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 육모제.
제 8 항, 제 11 항 또는 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질 키나아제 C 특이적 저해제가 카르포스틴C, 헥사데실포스포콜린, 팔미토일-DL-카르니틴 및 폴리믹신B 에서 선택된 1 종 또는 2 종 이상의 단백질 키나아제 C 저해제인 육모제.
제 9 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 토코페롤을 함유하는 육모제.
리조포스파티딘산 및 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상과 토코페롤을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 육모제.
제 8 항, 제 14 항 또는 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서, 토코페롤이 dl-α-토코페롤, d-α-토코페롤, 아세트산 dl-α-토코페롤, 아세트산 d-α-토코페롤및 니코틴산 dl-α-토코페롤에서 선택된 1 종 또는 2 종 이상의 토코페롤인 육모제.
제 8 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 포스파티딘산이 제 1 항에 기재된 포스파티딘산인 육모제.
제 17 항에 있어서, 포스파티딘산이 제 7 항에 기재된 포스파티딘산인 육모제.
제 8 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 리조포스파티딘산이 제 5 항 또는 제 6 항에 기재된 리조포스파티딘산인 육모제.
제 8 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 실질적으로 미녹시딜을 함유하지 않는 육모제.
제 8 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서, 리조포스파티딘산 및 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상의 함량이 0.01 ∼ 5.0% 인 육모제.
제 8 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서, 리조포스파티딘산 및 포스파티딘산에서 선택된 하나 이상의 함량이 0.01 ∼ 1.0% 인 육모제.