KR100311439B1

KR100311439B1 - 육모제

Info

Publication number: KR100311439B1
Application number: KR1019960707418A
Authority: KR
Inventors: 도모야 다까하시; 요시노리 고바야시; 미찌오 가와무라; 요시하루 요꼬오; 도시까즈 가미야; 다쓰야 다마오끼
Original assignee: 히라타 다다시; 교와 핫꼬 고교 가부시끼가이샤
Priority date: 1994-06-30
Filing date: 1995-06-30
Publication date: 2002-02-19
Also published as: CA2194167C; ES2199996T3; AU706302B2; EP0768079A1; JP3650400B2; KR970703746A; ATE241334T1; US6126940A; EP0768079A4; DE69530926T2; AU2807195A; EP0768079B1; CA2194167A1; DE69530926D1; WO1996000561A1

Abstract

본 발명은 프로안토시아니딘을 활성 성분으로서 함유하고 강력한 약리학적 효과를 가지는 육모제에 관한 것이다.

Description

육모제 {HAIR GROWTH STIMULANT}

탄닌은 식물계에 널리 존재하고, 분자 중에 다수의 페놀성 수산기를 가지고 있다. 탄닌은 산, 알칼리 또는 탄나아제로 가수분해되는 가수분해형 탄닌과 가수분해되지 않는 축합형 탄닌 등으로 분류되고, 축합형 탄닌으로서는 다시 플라반-3-올을 구성 단위로 하는 단순 축합형 탄닌 (프로안토시아니딘) 및 플라반-3-올, 커피산, 차르칸 β-올을 구성 단위로 하는 복합 축합형 탄닌이 알려져 있다.

축합형 탄닌이 모발 보호작용을 갖는다는 것이 알려져 있지만 (특공평 2-37884 호 공보), 이것은 화장료로서의 모발표면에 대한 작용이며, 육모작용에 대해서는 알려져 있지 않다. 또, 프로안토시아니딘이 항산화제로서 이용되고 있지만 (특개소 61-16982 호 공보), 그 육모 작용은 알려져 있지 않다.

본 발명은 프로안토시아니딘을 유효 성분으로서 함유하는 육모제에 관한 것이다.

본 발명은 프로안토시아니딘을 유효 성분으로서 함유하는 육모제에 관한 것이다. 또, 본 발명은 남성형 탈모증의 치료를 위한 의약조성물 조제시의 프로안토시아니딘 사용에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 프로안토시아니딘을 유효 성분으로서 함유하는 의약조성물을 사용한 남성형 탈모증의 치료방법에 관한 것이다.

프로안토시아니딘은 하기 화학식 1 로 나타낸 플라반-3-올 유도체를 구성 단위로서 중합한 화합물군이다 :

(식 중, R₁또는 R₂는 동일하거나 상이하고, 수소 또는 수산기를 나타낸다).

화학식 1 로 나타낸 플라반-3-올 유도체의 구체적인 예로는 카테킨, 에피카테킨, 갈로카테킨, 에피갈로카테킨, 아프젤레틴, 에피아프젤레틴 등이 있고, 이들의 광학이성질체도 모두 포함되는데, 에피카테킨 또는 카테킨을 구성 단위로 하는 프로안토시아니딘이 본 발명의 육모제로서 더욱 바람직하게 사용된다.

화학식 1 로 나타낸 플라반-3-올 중합체의 결합 양식은 임의의 것일 수 있는데, 예를 들면 플라반-3-올이 2개 중합한 이량체는 하기 화학식 2 로 나타낸 결합 양식을 취하는 것이 있고, 또 삼량체 이상으로는 이들 결합 양식이 동일 또는 상이하게 조합된 것이 있다 :

(식 중, R₁및 R₂는 상기 정의한 바와 동일하며, R₃및 R₄는 동일 또는 상이하고, 수소 또는 수산기를 나타낸다).

본 발명에 사용되는 프로안토시아니딘은 보통 플라반-3-올 유도체의 이량체 이상이면 되는데, 바람직하게는 이량체∼십량체, 보다 바람직하게는 이량체∼오량체, 더욱 바람직하게는 이량체∼삼량체이다. 플라반-3-올 유도체의 이량체로서는 예를 들면, 에피카테킨-(4β→8)-카테킨 등의 에피카테킨과 카테킨의 결합체, 에피카테킨-(4β→6)-에피카테킨, 에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨 등의 에피카테킨의 이량체, 카테킨-(4α→8)-카테킨 등의 카테킨의 이량체 등이 있고, 플라반-3-올 유도체의 삼량체로서는 예를 들면, 에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨, 에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨-(4β→6)-에피카테킨 등의 에피카테킨의 삼량체, 카테킨-(4α→8)-카테킨-(4α→8)-카테킨 등의 카테킨의 삼량체, 에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨-(4β→8)-카테킨 등의 에피카테킨과 카테킨의 혼합 삼량체를 사용하는 것이 특히 바람직하다.

프로안토시아니딘은 포도, 감, 빈랑수, 사과, 보리, 신성초, 대황, 계피, 팥, 나무딸기 등의 각종 식물로부터 추출 정제하여 수득되는 것 이외에도, 화학적 합성에 의해 수득할 수 있다.

식물로부터의 추출 정제는 다음과 같은 공지의 방법으로 행할 수 있다. 원료인 식물의 과실, 종자, 잎, 줄기, 뿌리, 뿌리줄기를 적당한 시기에 채취하여, 그대로 또는 통상적으로 공기건조 등의 건조공정을 행한 후 추출원료로 사용한다. 원료가 식물의 착즙액이나 수액인 경우는 그대로 추출원료로 사용할 수 도 있다.

상기 건조시킨 식물체로부터 프로안토시아니딘의 추출은 공지의 방법 [Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 38 권, 3218 페이지, 1990 년 ; 40 권, 889 - 898 페이지, 1992 년]을 참고하여 행할 수 있다. 원료를 분쇄 또는 세절한 후, 용매를 사용하여 배치식 또는 연속식 추출방법으로 행할 수 있다. 추출용매로는 물 또는 에탄올, 메탄올, 이소프로필알콜 등의 알콜류, 아세톤, 메틸에틸케톤 등의 케톤류, 아세트산메틸, 아세트산에틸 등의 에스테르류 등의 친수성 또는 친유성의 용매를 단독 또는 혼합 용매로서 사용할 수 있다. 추출 온도는 통상 0∼100 ℃, 바람직하게는 5∼50 ℃ 이다.

추출을 배치식으로 행하는 경우 추출시간은 1 시간∼10 일 정도이며, 용매사용량은 건조원료에 대해 통상 1∼30 중량배, 바람직하게는 5∼10 중량 배이다. 추출조작은 교반 또는 침지(浸漬) 방치할 수 있다. 추출조작은 필요에 따라서 2∼3 회 반복해도 좋다. 연속 추출법으로는 환류냉각기와 사이폰을 조합한 싹슬릿 (Soxhlet) 추출기를 사용한 방법 등이 있고, 용매량, 추출시간 등은 전술한 배치식추출법의 조건과 동일하다.

상기 조작으로 수득한 조(粗)추출액으로부터 불용성 잔사를 여과 또는 원심분리하여 제거한 추출액으로부터 프로안토시아니딘을 정제하는 방법은 공지의 생약분리정제방법이라면 어떠한 것이라도 좋은데, 이상 (二相) 용매분배법, 칼럼크로마토그래피법, 분취 (分取) 고속액체 크로마토그래피법 등을 단독 또는 조합하여 사용하는 것이 바람직하다. 이상용매분배법에는 상기의 추출액으로부터 유용성 성분이나 색소를 n-헥산, 석유 에테르 등으로 추출제거하는 방법, 상기 추출액으로부터 n-부탄올, 메틸에틸케톤 등의 용매와 물을 분배시켜 용매상 (溶媒相) 으로 프로안토시아니딘을 회수하는 방법 등이 있다. 칼럼크로마토그래피법으로는 담체로서 인버라이트 IR-120B, 인버라이트 IRA-402 등을 사용하는 이온교환 칼럼크로마토그래피법, 담체로서 순상계 (順相系) 실리카겔, 역상계 (逆相系) 실리카겔, 다이아이온 HP-20, 세파비스 SP-207 등을 사용하는 흡착 칼럼크로마토그래피, 담체로서 세파덱스 LH-20 등을 사용하는 겔여과법 등이 있고, 이들을 단독 또는 조합하여 반복하여 사용할 수 있다. 분취고속액체 크로마토그래피법에는 옥타데실실리카 등을 사용하는 역상계의 칼럼을 사용하는 방법, 실리카겔, 실리카겔-NH₂등을 사용하는 순상계의 칼럼을 사용하는 방법 등이 있다.

상기 정제 방법에 의해 염류 등 수용성의 이온성 물질, 당류, 다당류 등의 비이온성 물질, 유분, 색소 등을 조추출액으로부터 제거함으로써 프로안토시아니딘을 수득할 수 있다.

프로안토시아니딘의 합성법에 의한 제조방법으로서 에피카테킨 또는 카테킨의 이량체의 제조방법이 J. of Chemical Society Perkin Transsection Ⅰ (1535∼1543 페이지, 1983 년) 에 기재되어 있으며, 이 문헌에 기재된 방법에 준하여 합성할 수 있다.

또, 프로안토시아니딘을 본 발명의 유효 성분으로서 사용하는 경우, 프로안토시아니딘 1 종 또는 2 종 이상을 혼합하여 사용할 수 있다.

육모제의 제형 (劑型) 은 프로안토시아니딘을 유효 성분으로서 배합할 수 있는 임의의 제형이다. 적당한 의약 기제(基劑)와 배합하여 액상 또는 고체 상의 육모제로서 사용한다. 액상 또는 고체상의 육모제형으로 헤어리퀴드, 헤어토닉, 헤어로션 등의 액상제형, 연고, 헤어크림 등의 고체상 제형이 있으며, 각각 적당한 기제에 프로안토시아니딘을 첨가한 후, 통상적인 방법으로 제조할 수 있다. 본 발명의 육모제중의 프로안토시아니딘의 배합량은 단독 또는 혼합하여 통상 0.01∼30 중량 % (이하, % 라 함), 바람직하게는 0.1∼10 %, 특히 바람직하게는 0.5∼10 % 이다.

액체상 제형에 적당한 기제는 육모제에 통상 사용되는 것, 예를 들면 정제수, 에탄올, 다가알콜류, 유지 등이 있고, 필요에 따라 첨가제를 첨가할 수 있다. 다가알콜로는 글리세롤, 1,3-부티렌글리콜, 프로필렌글리콜 등이 있다. 유지류로서는 소맥 배아유, 동백기름, 호호바유, 올리브유, 스쿠알렌, 해바라기유, 마카데미아땅콩유, 아보가드유, 대두수 첨가 레시틴 등이 있다.

첨가제는 향료, 계면활성제, 살균제 등이 있다. 또, 산화방지제, 자외선 흡수제, 소염제, 청량제, 보습제, 비타민류, 생약추출물 등도 적당히 첨가할 수 있다.

향료는 통상 화장료 등에 사용하는 임의의 향료를 사용할 수 있다.

계면활성제는 폴리옥시에틸렌 (60) 경화 피마자유, 폴리옥시에틸렌 (8) 올레일에테르, 모노올레인산폴리옥시에틸렌 (10), 폴리옥시에틸렌 (30) 글리세릴모노스테아레이트, 모노스테아린산소르비탄, 모노올레인산폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄, 자당지방산에스테르, 모노라우린산헥사글리세린, 폴리옥시에틸렌 환원라놀린, POE(25)글리세릴피로글루타민산 이소스테아린산 디에스테르, N-아세틸글루타민이소스테아릴에스테르 등이 있다.

살균제는 히녹티올, 트리크로산, 크롤헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아즐렌 (azulene), 살리신산, 징크피리타온 등이 있다.

산화방지제는 부틸히드록시아니솔, 몰식자산, 몰식자산프로필, 에리소르빈산 등이 있다.

자외선 흡수제는 디히드록시벤조페논 등의 벤조페논류, 멜라닌, 파라아미노벤조산에틸, 파라디메틸아미노벤조산 2-에틸헥실에스테르, 시녹사이트, 파라메톡시계피산 2-에틸헥실에스테르, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐) 벤조트리아졸, 우로카닌산, 금속산화물 미립자 등이 있다.

소염제는 글리틸리틴산디칼륨, 알란토인 등이 있다. 청량제는 고추틴크, 1-멘톨 등이 있다. 보습제는 피롤리돈카르복실산, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴황산 등이 있다. 비타민류는 아세트산 d1-α-토코페롤, d1-α-토코페롤, 비타민 E, 니코틴산벤질, D-판토테닐알콜, 판토테닐에틸에테르, 비오틴, 염산피리독신, 리보플라빈 등이 있다. 생약추출물로는 당약 (자주쓴풀) 추출물, 마늘추출물, 인삼추출물, 알로에추출물 등이 있다.

상기의 액체상 제형을 분무제로 사용할 때는 불연화 액화 가스 등을 사용한다.

고체상 제형의 기제는 바셀린, 고형파라핀, 식물유, 광물유, 라놀린, 왁스류, 마크로골 등이 있고, 필요에 따라서 상기의 첨가제, 레시틴 등의 유화제, 에탄올, 이소프로필알콜 등의 저급 알콜을 첨가할 수 있다.

본 발명의 육모제의 투여량은 연령, 체중, 증상, 치료 효과, 투여 방법, 처리 시간 등에 따라 다른데, 성인 1 인당 1회에 프로안토시아니딘으로서 0.1∼600 mg, 바람직하게는 10∼300 mg 의 범위에서 1일 1회부터 수회 경피투여한다.

이하의 실시예, 참고예 및 시험예로 본 발명을 구체적으로 설명한다. 또한, 이하의 실시예에 사용하는 프로안토시아니딘 중에서, Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 41 권 (1491 페이지 (1993 년)) 및 38 권 (3218 페이지(1990 년))에 기재된 방법으로 제조된 화합물인 에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨 [화합물 2] 및, Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 40 권(889 페이지 (1992 년)) 에 기재된 방법으로 제조된 화합물인 에피카테킨-(4β→6)-에피카테킨 [화합물 4] 및 에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨-(4β→6)-에피카테킨 [화합물 8] 을 사용하였다. 이 이외의 실시예에 사용한 프로안토시아니딘은 참고예 1∼5 에 기재된 방법으로 제조하였다.

실시예 1

에틸알콜 7 ㎏, 글리세롤 500 g, 참고예 1 에서 수득한 화합물 1 (300 g), N-아세틸글루타민이소스테아릴에스테르 50 g 및 정제수 1600 g 을 균일하게 교반혼합하고, 고형물을 용해시켜서 용액 A 를 조제하였다. 이와는 별도로, 1,3-부티렌글리콜 500 g 및 POE (25) 글리세릴피로글루타민산 이소스테아린산 디에스테르 50 g 을 균일하게 교반혼합하여, 용액 B 를 조제하였다. 용액 B 를 용액 A 에 가해 교반하면서 균일한 육모 토닉 (조성물 1) 을 조제하였다. 또한, 상기 조작은 모두 실온에서 실시하였다.

실시예 2

참고예 1 에서 수득한 화합물 1 대신 화합물 2 를 사용하는 것 이외에는, 실시예 1 과 동일한 방법으로 육모 토닉 (조성물 2) 을 조제하였다.

실시예 3

참고예 1 에서 수득한 화합물 1 대신 참고예 2 에서 수득한 화합물 3 을 사용하는 것 이외에는, 실시예 1 과 동일한 방법으로 육모 토닉 (조성물 3) 을 조제하였다.

실시예 4

참고예 1 에서 수득한 화합물 1 대신 화합물 4 를 사용하는 것 이외에는, 실시예 1 과 동일한 방법으로 육모 토닉 (조성물 4) 을 조제하였다.

실시예 5

참고예 1 에서 수득한 화합물 1 대신 참고예 3 에서 수득한 화합물 5 를 사용하는 것 이외에는, 실시예 1 과 동일한 방법으로 육모 토닉 (조성물 5) 을 조제하였다.

실시예 6

참고예 1 에서 수득한 화합물 1 대신 참고예 4 에서 수득한 화합물 6 을 사용하는 것 이외에는, 실시예 1 과 동일한 방법으로 육모 토닉 (조성물 6) 을 조제하였다.

실시예 7

참고예 1 에서 수득한 화합물 1 대신 참고예 5 에서 수득한 화합물 7 을 사용하는 것 이외에는, 실시예 1 과 동일한 방법으로 육모 토닉 (조성물 7) 을 조제하였다.

실시예 8

참고예 1 에서 수득한 화합물 1 대신 화합물 8 을 사용하는 것 이외에는, 실시예 1 과 동일한 방법으로 육모 토닉 (조성물 8) 을 조제하였다.

실시예 9

에틸알콜 7 ㎏, 화합물 2 (100 g), N-아세틸글루타민이소스테아릴에스테르 50 g, d1-α-토코페롤 10 g, 팔미틴산아스코빌 10 g, d-비오틴 5 g, β-카로틴 0.1 g, 시트르산 10 g 및 정제수 1790 g 을 균일하게 교반혼합하고, 고형물을 용해시켜서 용액 A 를 조제하였다. 이와는 별도로 1,3-부티렌글리콜 1 ㎏ 및 POE (25) 글리세릴피로글루타민산 이소스테아린산 디에스테르 25 g 을 균일하게 교반혼합하여, 용액 B 를 조제하였다. 용액 B 를 용액 A 에 가해 교반하면서 균일한 육모 토닉(조성물 9) 을 조제하였다. 또한, 상기 조작은 모두 실온에서 실시하고 용액의 pH 는 수산화나트륨 용액으로 4 로 조정하였다.

참고예 1 : 에피카테킨-(4β→8)-카테킨 [화합물 1]의 제조 방법

빈랑수 (Areca catachu L.) 종자의 건조분쇄물 1.25 ㎏ 을 2 ℓ의 50 (v/v) % 아세톤 [(v/v) % 는 물과의 혼합액에 대한 용량백분율을 나타내고, 이하의 기재에서도 동일한 의미이다] 으로 2 시간 실온에서 추출하였다. 이 조추출액을 여과지 (어드벤텍스도오요오사 제조, No.526) 로 여과하여 추출액을 수득하였다. 다시 나머지에 1.5 ℓ의 50 (v/v) % 아세톤을 가하여 실온에서 1 시간 추출하였다. 상기의 조작으로 수득한 여과액을 합하여 감압농축한 후, 상기 농축액을 10 (v/v) % 메탄올로 평형화시킨 다이어이온 HP-20 수지 (미쓰비시가세이사 제조) 를 충전한 칼럼 (6 ㎝ Φ×44 ㎝ ; 1243 ㎖ 체적) 에 통과시키고, 10 (v/v) % 메탄올 2.5 ℓ로 세정하였다. 다음에, 2.5 ℓ의 30 (v/v) % 메탄올 및 1.25 ℓ의 30 (v/v) % 메탄올로 순차적으로 목적물을 용출시켰다. 수득된 용출액을 감압농축한 후, 50 (v/v) % 메탄올로 평형화시킨 세파덱스 LH-20 (팔마샤 제조) 을 충전한 칼럼 (9 ㎝ Φ×41 ㎝ ; 2607 ㎖ 체적) 에 통과시키고, 5.2 ℓ의 50 (v/v) % 메탄올 및 2.6 ℓ의 75 (v/v) % 메탄올로 칼럼을 세정하였다. 그 다음에, 1.3 ℓ의 75 (v/v) % 메탄올로 목적 물질을 용출한 후 건조시켜 3.75 g 의 건조물을 수득하였다. 건조물을 탈염수에 용해한 후, 분취고속액체 크로마토그래피 (와이엠씨사 제조, 10 ㎝ Φ×100 ㎝ : ODS 칼럼) 로 분리하여 화합물 1 을 0.5 g 수득하였다. 수득된 화합물 1 의 동정은 액체 크로마토그래피의 보유시간 및 박층실리카겔크로마토그래피의Rf값을 표준품 [J. of Chemical Society Chemical Communication, 781 페이지 (1981 년)] 과 비교하여 실시하였다.

참고예 2 : 카테킨-(4α→8)-카테킨 [화합물 3]의 제조 방법

니조오 (二條) 보리 (Hordeum vulgare L. var. distichon alefeld) 의 종자의 밀기울 (외피 분쇄물) 10 ㎏ 을, 70 (w/w) % 아세톤 [(w/w) % 는 물과의 혼합액에 대한 중량 백분율을 나타낸다] 30 ㎏ 을 사용하여 4 일간 실온에서 추출하였다. 이 조추출액을 여과지 (어드벤텍스도오요오사 제조, No.526) 로 여과하여 추출액 18.4 ㎏ 을 수득하였다. 수득된 여과액으로부터 용매를 제거한 후 탈염수에 용해하였다. 상기 용해액을 물로 평형화시킨 다이어이온 HP-20 수지 (미쓰비시가세이사 제조) 를 충전한 칼럼 (10 ㎝ Φ×50 ㎝ : 3925 ㎖ 체적) 에 통과시키고, 8 ℓ의 20 (v/v) % 메탄올 및 8 ℓ의 40 (v/v) % 메탄올로 칼럼을 순차적으로 세정한 후, 8 ℓ의 60 (v/v) % 메탄올로 목적물을 용출시켰다. 상기 용출액을 건조한 후, 0.1 ℓ의 25 (v/v) % 메탄올에 용해한 후, 탈염수로 평형화시킨 세파덱스 LH-20 을 충전한 칼럼 (6 ㎝ Φ×35 ㎝ : 989 ㎖ 체적) 에 통과시키고, 2 ℓ의 탈염수 및 2 ℓ의 50 (v/v) % 메탄올로 칼럼을 세정하였다. 그 다음에, 2 L 의 75 (v/v) % 메탄올로 목적물을 용출시킨 후, 건조하여 0.65 g 의 건조물을 수득하였다. 건조물을 탈염수에 용해한 후, 분취고속 액체 크로마토그래피 (지엘사이언스사 제조, 2 ㎝ Φ×25 ㎝ L; ODS 칼럼) 로 분리하여 화합물 3 을 0.23 g 수득하였다. 수득된 화합물 3 의 동정은 액체 크로마토그래피의 보유시간 및 박층 실리카겔 크로마토그래피의 Rf값을 표준품 [J. of Society of Food and Agriculture, 34 권, 62 페이지] 과 비교하여 실시하였다.

참고예 3 : 에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨 [화합물 5]의 제조 방법

사과 쥬스 21.6 ℓ를 물로 평형화시킨 다이어이온 HP-20 수지 (미쓰비시가세이사 제조) 를 충전한 칼럼 (9 ㎝ Φ×50 ㎝ ; 3179 ㎖ 체적) 에 통과시키고, 9 ℓ 의 탈염수 및 2 ℓ의 메탄올로 칼럼을 세정하였다. 다음에, 1 ℓ의 메탄올로 목적물을 용출시키고, 감압농축한 후 다시 한 번 물로 평형화시킨 다이어이온 HP-20 수지 (미쓰비시가세이사 제조) 를 충전한 칼럼 (7.2 ㎝ Φ×48 ㎝ : 1953 ㎖ 체적) 에 통과시키고, 4 ℓ의 탈염수, 4 ℓ의 20 (v/v) % 메탄올, 4 ℓ의 30 (v/v) % 메탄올로 순차적으로 칼럼을 세정한 후, 4 ℓ의 40 (v/v) % 메탄올로 목적물을 용출시켜 6.1 g 의 건조물을 수득하였다. 다음에, 이것을 50 ㎖ 의 25 (v/v) % 메탄올에 용해하고, 25 (v/v) % 메탄올로 평형화시킨 세파덱스 LH-20 을 충전한 칼럼 (3.4 ㎝ Φ×30 ㎝ : 272 ㎖ 체적) 에 통과시키고, 500 ㎖ 의 25 (v/v) % 메탄올, 500 ㎖ 의 50 (v/v) % 메탄올로 순차적으로 칼럼을 세정한 후, 500 ㎖ 의 75 (v/v) % 메탄올로 목적물을 용출시켜 1.5 g 의 건조물을 수득하였다. 건조물을 탈염수에 용해한 후, 분취고속액체 크로마토그래피 (지엘사이언스사 제조, 2 ㎝ Φ×25 ㎝ L; ODS 칼럼) 로 분리하여, 화합물 5 를 0.16 g 수득하였다. 수득된 화합물 5 의 동정은 액체크로마토그래피의 보유시간 및 박층실리카겔크로마토그래피의 Rf값을 표준품 [J. of Liquid Chromatography, 15 권, 637 페이지 (1992 년)] 과 비교하여 실시하였다.

참고예 4 : 카테킨-(4α→8)-카테킨-(4α→8)-카테킨 [화합물 6] 의 제조방법

니조오 (二條) 보리 (Hordeum vulgare L. var. distichon alefeld) 의 피무식 (皮武儀) 종자를 통풍 건조시킨 후, 그 중 10 ㎏ 을 취해, 우이레 분쇄기 (W-140 : 이께다요리기기 제조) 를 사용하여 분쇄하였다. 이것에 75 (v/v) % 아세톤 50 ℓ를 가하고, 3 시간 교반하면서 추출하였다. 이 조추출액을 여과지 (어드벤텍스도오요오사 제조, No.526) 로 여과하여 여과액을 수득하였다. 이 여과액에 6 ㎏ 의 염화나트륨을 가하여 포화시켰다. 30 분간 방치한 후, 분리한 아세톤 층을 취하였다. 아세톤 층을 감압농축하여, 111 g 의 건조물을 수득하였다. 다음에 상기 건조물을 메탄올 500 ㎖ 에 용해한 후, 메탄올로 평형화시킨 세파덱스 LH-20 을 충전한 칼럼 (12 ㎝ Φ×44 ㎝ : 4974 ㎖ 체적) 에 통과시키고 10 ℓ의 메탄올로 칼럼을 세정한 후, 2.5 ℓ의 메탄올로 목적물을 용출시킨 후, 건조시켜 3.2 g 의 건조물을 수득하였다. 건조물을 탈염수에 용해한 후, 분취고속액체 크로마토그래피 (지엘사이언스사 제조, 2 ㎝ Φ×25 ㎝ L; ODS 칼럼) 로 분리하여, 화합물 6 을 0.31 g 수득하였다. 화합물 6 의 이화학적 성질을 하기의 표 1 에 나타낸다.

Fab-MS(m/z) ; 867.1(M＋H)^＋

참고예 5 : 에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨-(4β→8)-카테킨 [화합물 7] 의 제조방법

화합물 7 의 제조는 Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 40 권, 889 - 898 페이지(1992 년) 에 기재된 방법에 따라서 이하와 같이 실시하였다.

빈랑수 (Areca catachu L.) 의 과실을 채취하여 4 분할한 후, 통풍 건조기에서 3 일간 40 ℃ 에서 건조하였다. 또한, 건조 종자를 망치로 가늘게 부순 후, 우이레 분쇄기 (W-140 : 이께다요리기기 제조) 를 사용하여 분쇄하였다. 이들 건조 분쇄물 0.5 ㎏ 을 취하고 50 (v/v) % 아세톤 1 ℓ를 사용하여 3시간 실온에서 추출하였다. 이 조추출액을 여과지 (어드벤텍스도오요오사 제조, No.526) 로 여과하여 추출액을 수득하였다. 다시 나머지에 1 ℓ의 50 (v/v) % 아세톤을 가하여 실온에서 3 시간 추출하였다. 상기의 조작으로 수득한 여과액을 합하여 감압농축한 후, 탈염증류수를 가하여 0.5 ℓ로 하였다. 이것에 아세트산에틸 0.5 ℓ를 가해서 분배하여 아세트산에틸 층을 모았다. 이 조작을 3회 반복하고, 수득된 아세트산 에틸 층을 합해서 감압농축하였다. 이것에 0.5 ℓ의 탈염 증류수를 가하여 현탁시킨 후, 헥산 0.5 ℓ를 가하여 분배하였다. 이 조작을 2회 반복한 후, 수층을 취하여 감압농축하였다. 수득된 건조물을 250 ㎖ 의 탈염증류 수에 용해하고, 250 ㎖ 의 클로로포름:메탄올:물 (3 : 3 : 2) 혼합물을 가하여 혼합교반한 후, 3000 g 에서 20 분간 원심분리하고, 물-메탄올 층 (하층) 을 모아 감압농축하였다. 이 농축액을 물로 평형화시킨 다이어이온 HP-20 수지 (미쓰비시가세이사 제조) 를 충전한 칼럼 (6 ㎝ Φ×29 ㎝ : 8204 ㎖ 체적) 에 통과시키고, 1.6 ℓ의 물 및 1.6 ℓ의 20 (v/v) % 메탄올로 순차적으로 세정하였다. 다음에, 1.6 ℓ의 40 (v/v) % 메탄올 및 0.8 ℓ의 60 (v/v) % 메탄올로 순차적으로 목적물을 용출시켰다. 이용출액을 감압농축하여 8.8 g 의 건조물을 수득하였다. 이어서 건조물을 50 ㎖ 의 탈염수에 용해하고, 물로 평형화시킨 세파덱스 LH-20 (팔마샤 제조) 을 충전한 칼럼 (4 ㎝ Φ×29 ㎝ : 820 ㎖ 체적) 에 통과시키고, 0.6 L 의 물, 0.6 ℓ의 25 (v/v) % 메탄올, 0.3 ℓ의 50 (v/v) % 메탄올 및 0.3 ℓ의 75 (v/v) % 메탄올로 순차적으로 칼럼을 세정한 후, 0.3 ℓ의 75 (v/v) % 메탄올로 목적물을 용출시켰다. 이것을 감압건조하여, 화합물 7 을 0.95 g 수득하였다. 화합물 7 의 이화학적 성질을 하기의 표 2 에 나타낸다.

Fab-MS(m/z) ; 867.2(M＋H)^＋

시험예 1 (마우스의 발모에 대한 효과)

오가와 (小川) 의 방법 (The Journal of Dermatology, 10 권, 45∼54 페이지, 1983 년) 을 참고로 하여 마우스의 발모 효과를 시험하였다. 발모 주기 중 휴지기에 있는 9 주된 C3H/HeSlc 계 웅성 마우스 (1 군 4∼5 마리) 의 등부분 털을 전기 이발기로 깎고, 실시예 1∼8 에서 제조한 조성물 1∼8 을 1일 1회 털을 깎은 부분에 150 ㎕ 씩 균일하게 도포하였다. 또, 대조군은 실시예의 조성물에서 프로안토시아니딘을 제거한 것 이외에는 동일한 조성을 갖는 토닉 베이스를 도포하였다. 도포한 후 17 일째의 마우스 등부분의 피부를 절취하여 사진 촬영을 한 후, 화상처리장치 (언비오닉스사 제조, 스피커 II) 를 사용하여 등부분 피부 전면적에 대한 발모부분의 면적 비를 구하고, 이 비로부터 발모 효과를 판정하였다. 결과를 표 3 에 나타냈다.

조성물	발모 면적율 (%)
조성물 1	93
조성물 2	98
조성물 3	97
조성물 4	90
조성물 5	90
조성물 6	93
조성물 7	88
조성물 8	84
조성물 9	42

시험예 2 (토끼의 눈을 자극하는 시험)

뉴질랜드 화이트종 토끼 (체중 3∼3.5 ㎏, 웅성) 에 실시예 1∼8 에서 수득된 본 발명의 조성물 1∼8 을 정제수에 용해하여 5 % 농도가 되도록 시험액을 제조하고, 이 시험액을 100 ㎕ 씩 점안하였다. 사용하는 동물을 2 시험군으로 나누어 1 군은 점안 5 분 후에 흐르는 물로 눈을 씻어주고, 2 군은 점안 24 시간 후에 흐르는 물로 눈을 씻어주었다. 대조군은 정제수만을 투여하였다. 시험 개시후 1,24, 48, 72 시간 및 7 일 후에 눈을 관찰한 결과, 각막의 혼탁, 홍채의 충혈, 결막의 발적 종창, 배출물 등 눈의 이상을 나타내는 임상 소견은 어느 군에서도 보이지 않았다.

시험예 3 (토끼 피부 연속 도포 시험)

뉴질랜드 화이트종 토끼 (22 주, 웅성) 의 등부분 피부의 털을 깎아, 실시예 1∼8 에서 수득된 본 발명의 조성물 1∼8 을 1 일 1 회 3개월간 연속 도포함으로써, 피부의 자극성 시험을 하였다. 토끼는 1 마리씩 4 시험군으로 나누어, 약 15 ㎠ (5 ㎝ × 3 ㎝) 의 면적에 200 ㎕ 의 시험액을 도포하였다. 대조군으로서 토닉액으로부터 프로안토시아니딘만을 제거한 군 및 무도포군을 설정하였다. 그 결과, 대조군 및 시험군 모두 염증, 발적 종창 등 피부의 이상을 나타내는 임상 소견은 없었다.

시험예 4 (인간 임상 시험)

(1) 임상 시험 방법

본원 발명 화합물의 남성형 탈모증에 대한 유효성을 평가하기 위해서, 실시예 9 에서 수득한 조성물 9 를 함유하는 토닉을 피험약으로 해서, 지원자 37 명에게 투여하여 임상 효과를 검토하였다. 지원자는 25 세부터 60 세까지 머리에 남성형 탈모증 이외의 질환을 가지고 있지 않은 건강한 남자를 채용하였다. 또한, 피험약의 대조약으로는 화합물 2 를 제거한 것 이외에는 조성물 9 와 동일한 조성의 토닉을 사용하였다.

전술한 지원자 37 명을 연령, 탈모 진행도, 탈모 유형 등의 배경 인자에 치우침이 없도록 피험약 투여군 19 명과 대조약 투여군 18 명으로 분리하였다. 임상 시험은 24 주 동안, 매일 아침과 밤에 각 1회, 조성물 9 또는 대조약 1.5∼2 ㎖ 를 머리의 환부에 도포하여 실시하였다.

(2) 평가 방법

임상 시험의 평가는 피부과 의사 진단, 사진 판정, 모발의 굵기, 모발 밀도의 네 종류의 방법으로 실시하였다. 이하에 각 평가 방법을 개략적으로 기술한다.

i) 피부과 의사 진단

시험 개시 전 및 시험 종료 시에 피부과 의사가 도포 부위의 탈모 진행도, 뻣뻣한 모발 (硬毛) 이 나는 방법, 부드러운 모발 (軟毛) 이 나는 방법 등에 대하여 검토하고, 종합적으로 판단하여 4 단계의 등급 (효과 현저, 개선, 변화 없음, 악화) 으로 효과를 판정하였다. 또한, 도포 부위에 염증 등의 부작용 유무를 검사하였다.

ii) 사진 촬영

시험 개시 전 및 시험 종료 시에 머리를 상방향 및 후방향에서 사진 촬영하여, 임상소견 및 모발 소견의 보조 자료로 사용하고 동시에, 이 사진으로 피검약의 효과를 전술한 4 단계의 등급으로 나누어 판정하였다.

iii) 모발의 굵기

시험 개시 전 및 시험 종료 시에 머리의 일정 부위에서 모발을 취하고, 모발 뿌리의 굵기를 측정하였다. 모발 뿌리의 굵기 변화로부터 피검약의 효과를 3 단계의 등급 (굵어짐, 변화 없음, 가늘어짐) 으로 나누어 판정하였다.

iv) 모발 밀도

iii) 에서 확대 사진을 사용하여 모발을 채취한 부위의 시험 개시전 및 시험 종료의 모발 밀도를 측정하였다. 모발 밀도의 변화로부터 피검약의 효과를 3 단계의 등급 (증가, 변화 없음, 감소) 으로 나누어 판정하였다.

(3) 결과

이상의 피부과 의사 진단, 사진 판정, 모발의 굵기, 모발 밀도의 결과를 표 4 에 나타내었다. 또 피부과 의사 진단에 의해 피검약의 부작용은 인정되지 않았다.

	투여군
평가 방법	효과	대조약 투여군 (%)	피검약 투여군 (%)
i) 피부과 의사 진단	효과현저개선변화없음악화	11.122.266.70	26.331.642.10
ii) 사진촬영	효과현저개선변화없음악화	011.188.90	31.621.147.40
iii) 모발의 굵기	굵어짐변화없음가늘어짐	38.938.922.2	73.715.810.5
iv) 모발밀도	증가변화없음감소	38.911.150.0	73.710.515.8

표 4 에 있어서, 피부과 의사 진단에 의하면 지원자의 57.9 % 가 효과 현저 또는 개선을 보이고 [대조군에서는 33.3 %], 사진 효과에 있어서는 지원자의 52.7 % 가 효과 현저 또는 개선을 보이며 [대조군에서는 11.1 %], 모발의 굵기에 있어서는 지원자의 73.7 % 가 모발이 굵어지고 [대조군에서는 38.9 %], 모발 밀도에 있어서는 지원자의 73.7 % 가 모발 밀도가 증가하였다 [대조군에서는 38.9 %].

따라서, 네 가지 종류의 평가 방법 모두에 의해 본 발명의 화합물 투여에 의한 치료 효과가 인정되었다.

시험예 5 (급성 독성)

dd 계 웅성 마우스 (체중 20 ± 1 g) 를 1 군당 5 마리씩 사용하여, 시험화합물 2 를 2000 ㎎/㎏ 피하 투여한 결과, 사망예는 관찰되지 않았다.

이상의 시험예의 결과로부터 본 발명의 프로안토시아니딘을 함유하는 육모제는 우수한 육모 및 발모 효과를 나타내면서 동시에, 눈이나 피부에 대한 자극 없이 장기간 연속 사용이 가능한 안전한 육모제인 것이 밝혀졌다.

프로안토시아니딘을 유효 성분으로 하는 본 발명의 육모제를 사용해서 남성형 탈모증을 치료할 수 있다.

Claims

프로안토시아니딘을 유효 성분으로서 함유하는 육모제.
제 1 항에 있어서, 프로안토시아니딘이 플라반-3-올 유도체의 2∼5량체로부터 1종 이상 선택되는 육모제.
제 1 항에 있어서, 프로안토시아니딘이 에피카테킨-(4β→8)-카테킨, 에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨, 카테킨-(4β→8)-카테킨, 에피카테킨-(4β→6)-에피카테킨, 에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨, 카테킨-(4α→8)-카테킨-(4α→8)-카테킨, 에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨-(4β→8)-카테킨, 에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨-(4β→6)-에피카테킨으로부터 선택되는 육모제.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 프로안토시아니딘을 0.1∼10 중량% 함유하는 육모제.