KR100654959B1

KR100654959B1 - 미백용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR100654959B1
Application number: KR1020050026100A
Authority: KR
Inventors: 신홍식; 이훈; 박시호; 김희정; 신철호; 김준태
Original assignee: (주)케비젠; 신홍식
Priority date: 2005-03-29
Filing date: 2005-03-29
Publication date: 2006-12-06
Also published as: KR20060104178A

Abstract

본 발명은 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 추출물을 함유하는 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 미백용 화장료 조성물은 티로시나제 활성을 억제하는 효과가 있고, 멜라닌 생성을 억제하는 효과가 있으며, 세포독성이 낮아 피부에 자극이 없어 안전하므로 피부 미백용 화장품에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

미백용 화장료 조성물{The cosmetic composition for skin whitening}

본 발명은 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

일반적으로 자외선에 피부가 노출되면 피부 표피가 검게 된다. 이는 멜라노사이트(melanocyte) 내에서 멜라닌이 합성되고 방출되는 것에 기인하는데, 멜라닌 생성은 세포 내의 티로시나아제(Tyrosinase)가 기질인 L-티로신(L-tyrosine)을 산화시켜 3,4-디히드록시페닐알라닌(L-DOPA)을 생성하고, 이로부터 도파 퀴논(Dopaquinone)을 생성시키면서 이루어지며, 이 도파 퀴논으로부터 자발적인 산화 반응에 의해 멜라닌 합성이 이루어진다.

그러므로 피부흑화를 막기 위해서는 상기 티로시나제 활성을 저해하거나, 멜라닌 생성 과정 중의 일부 반응을 저해함으로서 멜라닌의 생성을 감소시켜주는 방법이 가장 간단하며 일반적이다.

티로시나제 억제제로 다수의 천연 및 합성물질이 알려져 있으며, 몇몇은 피부 미백제로 사용되고 있다. 예를 들면, 리놀레인산(linoleic acid), 히노키티올(hinokitiol), 코직산(kojic acid), 히드로퀴논(hydroquinone), 아스코르브산 (ascorbic acid), 글루타치온(glutathione), 상백피 추출물, 알부틴(arbutin)을 비롯한 다양한 물질들이 이용되어 왔다.

이 중에서 아스코르브산, 상백피 추출물, 글루타치온 등은 피부 흑색화 또는 피부병의 치료에 사용되어 왔지만, 피부의 안전성과 화장료 제형의 안정성에 문제점을 가지고 있어 그 사용이 제한되어 왔다. 또한 히드로퀴논은 기미 치료가 목적인 약으로 이미 사용되고 있지만 피부 자극성이 있으며 발암성 물질로 규정되어 사용이 금지되고 있다. 아스코르브산은 빛, 열에 대한 안정성의 문제와 효과를 얻기 위해 지불해야 하는 비용이 높으므로 제품 적용에 어려움이 있다.

한편, 산수유(山茱萸)는 층층나무과의 산수유나무(Cornus officinalis SIEB. et ZUCC.)의 성숙한 과실을 건조한 것으로, 과육에는 코르닌(cornin)·모로니사이드(Morroniside)·로가닌(Loganin)· 탄닌(tannin)·사포닌(Saponin) 등의 배당체와 포도주산·사과산·주석산 등의 유기산이 함유되어 있고, 그 밖에 비타민 A와 다량의 당(糖)도 포함되어 있다. 종자에는 팔미틴산·올레인산·리놀산 등이 함유되어 있다. 성분 중 코르닌은 부교감신경의 흥분작용이 있는 것으로 알려져 있다.

예로부터 한방에서는 과육을 약용하며, 강음(强陰), 신정(腎精)과 신기(腎氣)보강, 수렴 등의 효능이 있다고 알려져 있다. 두통·이명(耳鳴)·해수병, 해열·월경과다 등에 약재로 쓰이며 식은땀·야뇨증 등에도 사용된다.

구기자(枸杞子)는 구기자나무(Lycium chinense Miller)의 성숙한 과실을 건조한 것으로, 주요 유효성분으로 베타인(betain), 지아잔틴(zeaxanthin), 베타-시토스테롤(β-sitosterol), 피살린(physalin), 콜린(cholin), 루틴(rutin) 및 단백 질·지방·당질·칼슘·인·철분·비타민(A·B1·B2·C) 등이 함유되어 있다. 한방에서는 강장제·해열제로 쓰고 간기능 보호 작용이 뛰어나 부작용이 별로 없다. 시력을 좋게 하고 당뇨병 등의 성인병을 예방하며 폐와 신장의 기능을 좋게 하고, 허약체질을 보하는 효과가 있다고 알려져 있다. 또한, 구기자 추출물은 항산화 활성이 있음이 보고된 바 있다(Kim et al., Korean Journal of Food Preservation, 11(3), pp352-357, 2000).

또한, 복분자(覆盆子)는 복분자딸기(Rubus coreanus Miquel)의 미성숙열매를 약용한 것으로, 안토시안, 폴리페놀, 카로틴, 염화시안 배당체, 색소 등을 함유하고 있고, 비타민 B, C, E 및 레몬산, 사과산, 살리실산, 카프론산 등의 유기산을 함유하고 있다. 탄수화물로 포도당 43%, 과당 8%, 서당 6.5%를 함유하며 펙틴도 함유한다. 복분자는 예로부터 보간신(補肝腎), 명목(明目), 이뇨제의 효능이 있고, 정력감퇴, 유정, 빈뇨를 치료한다고 알려져 있다.

해송자(海松子)는 한방에서의 잣의 명칭으로, 성분은 지방유(脂肪油) 74%, 단백질 15%를 함유하고, 지방은 올레인산, 리놀산, 리놀레인산등의 불포화 지방산을 함유하며, 자양강장 및 동맥경화증 등의 성인병, 노인성 질환을 예방, 노화를 방지하는 효과가 있다.

한국공개특허 특1997-21273호에는 티로시나제 저해효과가 있는 상백피 또는 산수유 추출물을 함유하는 미백 비누 조성물이 개시되어 있고, 한국공개특허 특2002-44267호에는 복분자 추출물을 주성분으로 하는 미백 화장품 조성물이 개시되어 있으며, 한국공개특허 특1998-26114호에는 멜라닌 색소의 생성억제, 기미, 주근 깨 등의 제거 작용이 우수한 담수 진주 추출액을 주원료로 함유하는 미용 음료 조성물을 개시하고 있다.

상기 문헌에 개시된 바와 같이 각각의 단일 추출성분을 화장품 조성물에 사용시 혼합 추출물 보다 낮은 미백효과, 제조 기법에 따른 안정성 결여 또는 피부 트러블 유발 같은 문제점이 발생하게 된다.

이에 본 발명자는 여러 종류의 식물 및 천연물을 혼합하여 미백 효과를 얻고자 연구한 결과, 식물 열매 및 천연물의 혼합물로부터 추출한 성분이 탁월한 미백 효과를 나타냄을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명은 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장료 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 미백용 화장료 조성물에 사용하는 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 추출물은 1~30:1~30:1~30:1~30:1~30 의 건조중량비, 바람직하게는 1: 1: 1: 1: 1 의 건조중량비로 혼합하여 추출한 것이다.

또한, 본 발명의 미백용 화장료 조성물이 함유하는 추출물은, 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루의 조추출물 및 비극성용매 가용추출물, 극성용매가용추출물이 될 수 있으며, 이 중 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루의 에 탄올 추출물을 사용하는 것이 바람직하다.

본 발명의 미백용 화장료 조성물은 총 중량에 대하여 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 추출물을 0.001 ~ 10.00중량부로 함유하고, 0.01 ~ 1.00 중량부를 함유하는 것이 바람직하다. 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 추출물이 총 중량에 대하여 0.001 중량부 이하로 함유될 경우, 미백효과를 얻기 어려우며, 10.00 중량부 이상으로 함유될 경우, 함유량 대비 미백효과가 떨어지며 제조비용이 높아지게 된다.

본 발명의 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 추출물을 함유하는 조성물은 피부 흑화과정에 관여하는 티로시나제 효소 활성 억제정도가 알부틴 보다 뛰어나고, 동시에 B16 멜라노마 세포에서도 멜라닌 생성 억제율이 알부틴 보다 높아, 미백효과가 우수하다.

또한 본 발명의 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 추출물을 함유하는 조성물은 기존의 산수유, 복분자, 진주가루 추출물보다 탁월하게 상승된 미백효과를 나타내며, 세포독성이 낮아 피부에 자극이 없어 안전하므로 피부 미백용 화장품에 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 함유하는 추출물은 하기와 같이 제조될 수 있다.

본 발명의 미백용 화장료 조성물이 함유하는 추출물은, 산수유, 구기자, 복분자, 해송자를 포함하는 식물 열매 및 진주를 물로 깨끗이 세척한 후, 통상적인 건조 방법, 바람직하게는 자연 건조시키고, 상기 건조물을 세절 또는 분말 형태로 준비한 다음 통상적인 추출 방법으로 유효성분을 추출한 것이다.

추출 전 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루=1~30:1~30:1~30:1~30:1~30 의 건조중량비, 바람직하게는 1~10: 1~10: 1~10: 1~5: 1~5 의 건조중량비로 혼합하여 추출할 수 있고, 각각의 추출물을 제조하여 상기와 같은 혼합비로 혼합하여 사용할 수 있다.

본 발명의 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 조추출물은, 세절 또는 분말화된 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 건조물 무게의 약 3배 내지 20배의 물, C₁ 내지 C₄의 탄소수를 갖는 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 에탄올로, 실온 내지 100 ℃의 추출온도에서 약 6시간 내지 48시간 동안 열수추출, 냉침추출, 초음파 추출 또는 환류냉각 추출 등의 추출방법에 의하여 1회 내지 3회 반복하여 추출한 후, 추출물을 여과, 감압농축 또는 동결건조하여 제조할 수 있다.

또한 상기 조추출물을 물에 현탁한 후, 이를 현탁액의 약 0.5 내지 10배, 극성 또는 비극성 용매를 가하여 1회 내지 5회 분획하여 본 발명의 극성 또는 비극성 용매 가용 추출물을 수득할 수 있다. 또한 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있다.

상기 극성용매는 물, 에탄올, 부탄올, 아세톤 등을 포함하고, 비극성용매는 에틸아세테이트, 클로로포름, 헥산, 벤젠, 디클로로메탄 등을 포함한다.

또한, 본 발명의 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 추출물은, 세절 또는 분말화된 혼합건조물을 에탄올로 추출하는 단계, 에탄올로 추출된 상등액을 제거한 후 침전물을 건조시키는 단계, 상기 건조물을 볼 밀링(ball milling)하여 미세하게 분쇄하는 단계, 상기 분쇄물에 증류수를 가하여 추출한 후 여과, 감압 증류하는 단계, 상기 단계의 추출물에 에탄올을 가하여 침전을 유도시키고, 원심분리 후 침전물을 동결건조시키는 단계, 상기 건조추출물 15 % TCA(트리클로로아세트산)를 첨가하여 단백질을 침전시켜 제거하는 단계, 상기 단계의 상등액을 에탄올로 침전 후 동결 건조하는 단계를 통하여 제조될 수 있다.

본 발명의 미백용 화장료 조성물은 상기 기재한 유효성분 이외에 필요에 따라 화장품학적으로 허용가능한 기제 및 첨가물을 함유할 수 있으며, 예를 들면, 당업계에 통상적인 보습제, 유지성분, 유화제, 유연제, 윤활제, 용제, 용해보조제, 점증제, pH 조정제, 방부제, 향료, 색소, UV 차단제 등의 성분을 추가로 포함할 수 있고, 이들의 종류와 함량은 당업자에 의해 용이하게 선택될 수 있다.

보습제는 에틸렌글리콜, 디에틸렌글리콜, 트리에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 솔비톨, 콜라겐 등 기존에 사용되어 온 보습성분 중에서 1종 또는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있다.

유지성분으로서 에스테르계유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물유지, 식물유지 등을 들 수 있고, 이소프로필 미리스테이트, 이소스테아릴-이소스테아레이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 스쿠알렌, 유동파라핀 등이 될 수 있다.

유화제는 구체적으로 tween 20(polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester) 이 될 수 있다.

유연제 및 윤활제는 구체적으로 사이클로 메치콘(cyclomethicone), 폴리메틸 메타아크릴레이트(polymethyl metacrylate), 및 수소화 캐스터 오일(hydrogenated castor oil)이 될 수 있다.

용제는 구체적으로 정제수, 에탄올 등의 저급알코올, 세틸알코올 등의 고급알코올, 이들의 혼합액 등이 될 수 있다.

용해보조제는 구체적으로 이소프로필 미리스테이트, 폴리에틸렌 글리콜, 중쇄 지방산 트리글리세리드, 탄화수소, 글리콜류 등이 될 수 있다.

점증제는 메틸셀룰로스, 카르복시메틸셀룰로스, 카르복시메틸하이드록시구아닌, 하이드록시메틸셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 카르복시비닐폴리머, 코카마이드디이에이, 폴리쿼터늄, 세테아릴알콜, 스테아린산, 카라기난 등을 사용할 수 있다.

pH 조정제는 구체적으로 시트르산, 숙신산, 타르타르산, 락트산, 말산, 푸마르산, 말레산, 글리콜산 등의 유기산, 염산, 황산, 인산, 질산 등의 무기산 중 어느 것이라도 사용할 수 있으며, 이들 산의 나트륨염, 칼륨염 또는 암모늄염 등을 조합하여 사용할 수 있으며, 트리에탄올아민, 수산화나트륨, 수산화칼륨 등을 사용할 수도 있다.

방부제는 구체적으로 이미다졸리디닐 우레아, 메틸 파라벤, 프로필파라벤 등이 될 수 있다.

향료는 인공향료 등을 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 미백 효과가 뛰어난 화장료 조성물은 화장품, 세안제, 세정제, 샴푸 등에 다양하게 이용될 수 있고, 통상의 제형을 가질 수 있으며, 예를 들어 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 에센스, 피부접착용 패취, 팩, 전신세정제, 바디로션, 바디오일, 바디에센스 등으로 제형화될 수 있다.

또한 본 발명에 따른 미백 효과가 우수한 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[실시예] 본 발명의 미백용 화장료 조성물의 제조

1) 본 발명의 조성물이 함유하는 추출물 제조

본 발명의 조성물을 제조하기 위해 산수유, 구기자, 복분자, 해송자 및 진주가루 추출물을 준비하였다.

1-1) 추출물 제조 1

산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루를 물로 깨끗이 세척한 후 완전히 자연 건조하였다. 각 원료를 1:1:1:1:1의 중량비로 혼합하고, 분쇄하였다. 건조 중량 100 g에 대하여 10배의 에탄올로 12시간 동안 2회 반복하여 냉침추출하여 얻어 진 추출물을 여과 및 농축 후, 동결 건조하여 조추출물을 7 g을 얻었다.

1-2) 추출물 제조 2

상기 1-1)의 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 혼합 분쇄물을 건조 중량 10 g에 대하여 10배의 에탄올로 24시간 환류냉각 추출하고, 에탄올로 추출된 상등액을 제거한 후 침전물을 건조시켰다.

상기에서 얻어진 침전물은 탈지된 상태이며, 이것을 48시간동안 볼 밀링(ball milling)하여 입자크기가 10 내지 50 ㎛ 정도가 되도록 미세하게 분쇄한 후 다음 과정에 사용하였다.

상기 분쇄물에 5배의 증류수를 가하여 6시간 3회 환류냉각 추출한 후 여과하고, 감압 증류하여 소량의 물만 남긴 후, 에탄올을 가하여 침전을 유도시키고, 원심분리 후 침전물을 동결건조시켰다.

상기에서 얻어진 건조 시료에 15 % TCA(트리클로로아세트산)를 첨가하여 단백질을 침전시켜 제거하고, 상등액을 에탄올로 침전 후 동결 건조하여 수추출물을 3 g을 얻었다.

1-3) 추출물 제조 3

상기 실시예 1-1)의 조추출물 7 g 을 증류수 50 ㎖에 현탁한 후, 에틸아세테이트 50 ㎖를 가하여 혼합하였다. 수층 및 에틸아세테이트 층으로 분획하는 조작을 3회 반복하고, 수층 및 에틸아세테이트층을 감압농축하여 수추출물 5 g, 에틸아세테이트 추출물 2 g 을 얻었다.

1-4) 추출물 제조 4

산수유를 물로 깨끗이 세척한 후 완전히 자연 건조하였다. 이를 분쇄하였으며, 건조 중량 10 g에 대하여 10배의 에탄올로 환류냉각추출 방법으로 12시간 동안 2회 반복 추출하였다. 여기서 얻어진 추출물을 여과하여 농축 후 동결 건조하여 조추출물을 0.15 g을 얻었다.

구기자, 복분자, 해송자, 진주가루를 상기와 동일한 방법을 사용하여 추출, 여과, 농축, 동결건조하여 조추출물을 각각 0.13 g, 0.16 g, 0.10 g, 0.04 g을 얻었다.

각각의 추출물을 1:1:1:1:0.2의 비율로 혼합한 것을 미백용 화장료 조성물에 첨가하여 사용하였다.

2) 본 발명의 추출물의 티로시나제 활성 억제 효과 측정

상기 실시예 1-1) 및 실시예 1-2)에서 얻은 추출물을 사용하여 티로시나제 활성 억제효과를 확인하기 위하여, 노 등의 문헌에 기재된 방법을 변형시켜 측정하였다(No.J.K., et al.;Life Science, 65, p241-246, 1999).

양성대조군으로서 기존의 미백성분인 알부틴(arbutin)을 사용하였다.

또한, 산수유, 구기자, 복분자, 해송자 열매를 가진 식물 전체(뿌리, 줄기, 열매 포함) 및 진주가루를 사용하여 실시예 1-1)과 실시예 1-2)의 방법으로 제조된 추출물을 각각 비교예 1, 2로 사용하였으며, 산수유, 복분자, 진주가루 세 천연물의 혼합물을 사용하여 실시예 1-1)의 방법으로 제조된 추출물을 비교예 3으로 사용하였다.

먼저 0.3 mg/㎖ 티로신 용액을 1 ㎖씩 시험관에 넣고, 여기에 0.1M 인산칼륨 완충용액(pH 6.8) 1 ㎖ 및 추출물의 농도별 시료(0.07, 0.1, 0.5, 1.0(%, W/V)) 0.9 ㎖을 넣은 뒤, 25 ℃ 항온조에서 10분 동안 반응시켰다. 이 때 대조군으로 각 시료 대신 용매만을 0.9 ㎖을 넣은 것을 사용하였다. 이 반응액에 2500 Unit/㎖의 티로시나제 효소 0.1 ㎖씩을 넣고 다시 25 ℃ 항온조에서 10분 동안 반응시켰다.

이 반응액이 든 시험관을 얼음물 속에 넣어 급냉시켜 반응을 중지시키고, 광전 분광분석계로 파장 475nm에서의 흡광도를 측정하였다. 각각 시료의 티로시나제 활성 억제 효과는 아래 공식으로 구하였고, 그 결과를 표 1에 나타내었다.

* 티로시나제 활성 억제율(%) = 100-(각 시료의 반응흡광도/대조군의 반응흡광도)×100

시료	IC₅₀(%)
실시예 1-1)	0.26
실시예 1-2)	0.23
알부틴	0.40
비교예 1	0.35
비교예 2	0.31
비교예 3	0.37

상기에서 보는 바와 같이, 본 발명의 실시예 1-1) 및 1-2) 추출물의 티로시나제 활성 50% 억제 농도(IC₅₀)가 양성대조군인 알부틴 처리군 및 비교예 1, 2, 3 보다 훨씬 낮게 나타났다.

따라서, 본 발명의 미백용 화장료 조성물이 함유하는 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 추출물은 낮은 농도에서도 티로시나제 억제 효과가 매우 뛰어나 미백효과가 우수함을 알 수 있었다.

본 발명의 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 추출물을 함유하는 조성물은 기존의 산수유, 복분자, 진주가루 추출물보다 탁월하게 상승된 미백효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.

3) 본 발명의 추출물의 멜라닌 생성 억제 효과 측정

상기 실시예 1-1) 및 실시예 1-2)에서 얻은 추출물의 멜라닌 생성 억제효과를 확인하기 위하여, 노 등의 문헌에 기재된 방법을 이용하여 측정하였다(JS Roh, et al.;Biol. Pharm. Bull., 27, p1976-1978, 2004).

세포는 B16 멜라노마를 사용하였고, 96-웰 마이크로플레이트에 5000 세포/웰의 B16 멜라노마 세포를 분주하고, 24시간 후에 추출물을 농도별 (각각 0.0025, 0.005, 0.01, 0.025(%, W/V))로 처리하여 72시간동안 배양하였다.

배양 후 트립신 처리하여 배양용기로부터 분리된 세포에서 멜라닌을 추출하기 위해, 세포를 10% DMSO 및 1N NaOH와 혼합하여 10분동안 실온에 두고, 원심분리한 후, 상등액 내의 멜라닌 생성량을 475 nm에서 흡광도를 측정하였다.

대조군은 추출물을 처리하지 않은 세포와 배지로만 하여 동시에 측정하였고, 추출물 대신 배지를 동일량으로 사용하였다. 양성대조군은 알부틴을 사용하였고, 상기 실시예 2)와 같이 제조한 추출물을 비교예 1~3으로 사용하였다.

결과는 시료의 세포 독성을 측정하여 세포 독성이 없는 농도 범위 내에서 그리고 세포수를 고려하여 멜라닌 생성 억제 효과를 알부틴과 비교하였고, 하기 표 2에 나타내었다.

* 멜라닌 생성 억제율(%) = {(대조군-실험군)/대조군}×100

	멜라닌 생성 억제율 (%)
처리농도 시료 ＼	0.0025 %	0.005 %	0.01 %	0.025 %
실시예 1-1)	12.5	21.2	24.3	25.1
실시예 1-2)	10.3	20.1	19.3	19.4
알부틴	9.8	15.0	20.3	14.1
비교예 1	9.9	15.4	19.2	14.5
비교예 2	9.8	15.3	19.1	14.5
비교예 3	10.1	15.6	19.4	15.7

하기 표 5의 결과를 보면, 실시예 1-1) 및 1-2) 추출물의 멜라닌 생성 억제 효과가 양성대조군(알부틴) 및 비교예 1, 2, 3보다 우수한 것으로 확인되어, 본 발명의 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 추출물을 함유하는 조성물은 미백효과가 탁월함을 알 수 있었다.

4) 본 발명의 추출물의 세포독성 실험

본 발명의 추출물의 세포독성(cytotoxicity)을 MTT 분석법을 통해 측정하였다.

상기 B16 멜라노마 세포(1×10⁵ 세포)를 이글 최소 배지를 사용하여 96-웰 마이크로플레이트에서 배양하였다. 세포들을 37 ℃ 및 5 % CO₂- 95 % 대기상태에서 24시간 동안 배양한 후, DMSO에 용해시킨 실시예 1-1)의 조추출물을 다양한 농도로 배양배지에 처리하였다. 다시 48시간 동안 배양한 후, 테트라졸리움을 이용한 MTT 발색분석을 통하여 세포독성을 관찰하였다. 흡광도(O.D.)는 540 nm에서 ELISA 판독기를 사용하여 측정하였다.

그 결과, 실시예 1-1) 조추출물의 세포독성은 LD₅₀ 100 ㎍/㎖ 이상으로 측정되어, 세포독성을 보이지 않아, 본 발명의 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 추출물을 함유하는 조성물은 안전하게 사용될 수 있음을 확인하였다. 알부틴 LD₅₀ 는 150 ㎍/㎖ 이상으로 측정되었다.

5) 본 발명의 미백용 화장료 조성물의 제조 : 스킨 로션

상기 티로시나제 활성 억제 효과 및 멜라닌 생성 억제 효과가 있는 본 발명의 추출물을 함유하는 미백용 화장료 조성물을 제조하였다.

하기 표 3에 나타난 바와 같은 조성비율로 스킨 로션을 제조하였다.

알콜 부분은 곡정에서 생산하여 78 ℃ 증류한 알콜에 메틸파라히드록시벤조익산(M-P), tween 20, 노닐페닐에테르-12(NP-12)의 순서대로 용해시켜 제조하였고, 정제수 부분은 멸균 처리된 정제수에 글리세린, 1,3-부틸렌글리콜, 알라닌 193, 구연산, 구연산소다의 순서대로 용해시켜 제조한 다음, 상기 실시예 1-1)에서 제조한 추출물을 혼합하여 스킨 로션을 제조하였다.

분류	원료명	무게(중량부)
알콜부분	에탄올	7
	메틸파라히드록시벤조익산	0.1
	tween-20	0.2
	노닐페닐에테르-12	0.2
정제수부분	정제수	90.51
	글리세린	0.65
	1,3-부틸렌글리콜	0.2
	알라닌 193	0.1
	구연산	0.01
	구연산소다	0.03
미백성분	실시예 1-1) 추출물	1.0
합계		100

[실시예 2] 본 발명의 미백용 스킨로션의 제조 2

하기 표 4에 나타난 바와 같은 조성비율로 스킨 로션을 제조하였다. 알콜 부분은 곡정에서 생산하여 78℃ 증류한 알콜에 M-P, tween 20, NP-12의 순서대로 용해시켜 제조하였고, 정제수 부분은 멸균 처리된 정제수에 글리세린, 1,3-부틸렌글리콜, 알라닌-193, 구연산, 구연산소다의 순서대로 용해시켜 제조한 다음 상기 실시예 1-2)에서 제조한 추출물을 혼합하여 스킨 로션을 제조하였다.

분류	원료명	무게(중량부)
알콜부분	에탄올	7
	메틸파라히드록시벤조익산	0.1
	tween-20	0.2
	노닐페닐에테르-12	0.2
정제수부분	정제수	90.51
	글리세린	0.65
	1,3-부틸렌글리콜	0.2
	알라닌 193	0.1
	구연산	0.01
	구연산소다	0.03
미백성분	실시예 1-2) 추출물	1.0
합계		100

[실시예 3] 본 발명의 미백용 밀크로션의 제조 3

하기 표 5에 나타난 바와 같은 조성비율로 밀크 로션을 제조하였다.

알콜 부분은 곡정에서 생산하여 78 ℃ 증류한 알콜에 스테아린산, 세탄올, 유동파라핀, 스쿠알렌, 이소프로필 미리스테이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 아라셀-60, tween-20, 이소스테아릴-이소스테아레이트, 프로필파라벤, 알라닌 200F/100CS의 순서대로 용해시켜 제조하였고, 정제수 부분은 멸균 처리된 정제수에 글리세린, 트리에탄올아민, 프로필렌글리콜, 메틸파라히드록시벤조익산의 순서대로 용해시켜 제조한 다음 상기 실시예 1-1)에서 제조한 추출물을 혼합하여 밀크 로션을 제조하였다.

분류	원료명	무게(중량부)
알콜부분	스테아린산	2.1
	세탄올	1.3
	유동파라핀	7.0
	스쿠알렌	0.5
	이소프로필 미리스테이트	1.0
	글리세릴 모노스테아레이트	0.5
	아라셀-60	0.85
	tween-20	0.1
	이소스테아릴-이소스테아레이트	0.5
	프로필파라벤	0.1
	알라닌 200F/100CS	0.1
정제수부분	정제수	74.15
	트리에탄올아민	0.7
	프로필렌글리콜	7.0
	글리세린	3.0
	메틸파라히드록시벤조익산	0.1
미백성분	실시예 1-1) 추출물	1.0
합계		100

[실시예 4] 본 발명의 미백용 밀크로션의 제조 4

하기 표 6에 나타난 바와 같은 조성비율로 밀크 로션을 제조하였다.

알콜 부분은 곡정에서 생산하여 78 ℃ 증류한 알콜에 스테아린산, 세탄올, 유동파라핀, 스쿠알렌, 이소프로필 미리스테이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 아라셀-60, tween-20, 이소스테아릴-이소스테아레이트, 프로필파라벤, 알라닌 200F/100CS의 순서대로 용해시켜 제조하였고, 정제수 부분은 멸균 처리된 정제수에 글리세린, 트리에탄올아민, 프로필렌글리콜, 메틸파라히드록시벤조익산의 순서대로 용해시켜 제조한 다음 상기 실시예 1-2)에서 제조한 추출물을 혼합하여 밀크 로션을 제조하였다.

분류	원료명	무게(중량부)
알콜부분	스테아린산	2.1
	세탄올	1.3
	유동파라핀	7.0
	스쿠알렌	0.5
	이소프로필 미리스테이트	1.0
	글리세릴 모노스테아레이트	0.5
	아라셀-60	0.85
	tween-20	0.1
	이소스테아릴-이소스테아레이트	0.5
	프로필파라벤	0.1
	알라닌 200F/100CS	0.1
정제수부분	정제수	74.15
	트리에탄올아민	0.7
	프로필렌글리콜	7.0
	글리세린	3.0
	메틸파라히드록시벤조익산	0.1
미백성분	실시예 1-2)의 추출물	1.0
합계		100

상기한 바와 같이 본 발명의 미백용 화장료 조성물에 함유되는 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 추출물은 티로시나제 효소 억제 활성이 매우 뛰어나고, 멜라닌 생성을 억제하는 활성이 우수하며, 세포독성이 낮아 피부에 자극이 없어 안전하므로 피부 미백용 화장품에 유용하게 사용될 수 있다.

Claims

유효성분으로 산수유, 구기자, 복분자, 해송자, 진주가루 추출물을 1~30:1~30:1~30:1~30:1~30의 건조중량비로 함유하며, 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 10.00중량부로 함유하는 미백용 화장료 조성물.
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제 1항에 있어서, 상기 추출물은 에탄올 추출물인 미백용 화장료 조성물.
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