KR20220046162A - 울릉산마늘 추출물을 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 - Google Patents

울릉산마늘 추출물을 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 울릉산마늘 추출물을 함유하는 피부 상태 개선용 조성물에 관한 것으로, 본 발명자들은 피부 탄력, 주름, 미백 또는 보습의 개선 또는 치료용 화장료 조성물, 약학적 조성물, 또는 식품 조성물로써 울릉산마늘의 새로운 기능을 확인하고자 하였고, 본 발명은 울릉산마늘 추출물 및 부위별 울릉산마늘 추출물을 유효 성분으로 함유하는 피부 탄력 개선용, 피부 주름 예방 또는 개선용, 피부 미백용 또는 보습용 화장료 조성물, 약학적 조성물, 또는 식품 조성물을 제공하는 것이다. 이에 대한 효능으로 콜라겐 분해효소의 발현 억제, 콜라겐 총량 증가 및 피부 탄력 향상 효능, 티로시나아제 저해 효능, 멜라닌 생성 억제 및 피부톤 개선 효능, 히알루론산 합성효소 및 막관통 단백질인 아쿠아포린의 합성 촉진과 피부 보습 효능을 나타냄을 규명함으로써 본 발명을 완성하였다.

Description

울릉산마늘 추출물을 포함하는 피부 상태 개선용 조성물{Composition for improving skin conditions comprising the extract of Allium ulleungense}
본 발명은 울릉산마늘 추출물을 함유하는 피부 상태 개선용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 울릉산마늘 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 탄력 개선용, 피부 주름 예방 또는 개선용, 피부 미백용 또는 피부 보습용 화장료 조성물, 약학적 조성물, 또는 식품 조성물에 관한 것이다.
인간의 피부는 인체의 일차 방어막으로서 온도 및 습도의 변화, 자외선, 공해물질과 같은 외부 환경의 자극으로부터 체내의 기관을 보호해 주는 기능을 하며, 나이가 들어감에 따라 여러 가지 내적, 외적 요인에 의해 변화를 겪는다. 즉, 내적으로는 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고, 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 단백질 및 생체 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 되며, 외적으로는 오존층 파괴로 인하여 태양 광선 중 지표에 도달하는 자외선의 함량이 증가하고 환경 오염이 더욱 심화됨에 따라 미세먼지, 자유 라디칼 및 활성 유해 산소 등이 증가함으로써, 피부의 두께가 감소하고, 주름이 증가하며, 탄력이 감소될 뿐 아니라 피부 혈색도 칙칙해지고, 피부 트러블이 자주 발생하며, 기미와 주근깨 및 검버섯 또한 증가하고, 혈색이 나빠지고 피부톤도 어두워지는 등 여러 가지 변화를 일으키게 된다.
이러한 피부 내적 및 외적 요인에 의한 피부 상태의 변화를 방지하고, 건강한 피부 상태를 유지하기 위해서 기존에 알려진 각종 동물, 식물, 미생물 등으로부터 얻은 생리 활성 물질들을 화장품에 부가하여 사용함으로써 피부 상태를 개선시키기 위한 노력이 있어 왔다. 그 중에서도 동물성 원료보다는 천연 식물 기원의 원료들이 원료들이 각광 받고 있으며, 피부의 상태 개선 효과가 뛰어나고 세포독성이나 알러지 반응을 일으키지 않는 천연 식물 기원의 안전한 보습제 개발이 필요하다.
한편, 봄에 먹는 산나물 중 하나인 산마늘은 멩이, 맹이, 명이 등으로 불리며, 오래전부터 구황식물로 식용하고 있다. 한방에서는 산마늘이 몸을 따뜻하게 해주고 위를 보호해 주며 독을 없애주는 역할을 한다고 알려져 있다. 국내에 자생하는 산마늘은 그동안 일반 산마늘(Allium microdictyon)과 울릉 산마늘 (Allium ochotense, Allium victoriallis) 2종으로 알려져 쓰여져 왔다. 울릉산마늘 (Allium ochotense, Allium victoriallis)은 외떡잎 식물 백합목 백합과에 속하는 여러해살이 풀로, 한국, 중국, 일본 등의 서늘하고 그늘진 고산지대에서 자생한다. 우리나라에서는 울릉, 지리산, 설악산 등에 자생하고 있으며, 외형 기준으로 두 가지로 나눌 수 있는데 잎이 좁은 강원도 울릉산마늘과 잎이 넓은 울릉도 울릉산마늘이다. 현재까지는 외형이 다른 강원도 재배 울릉 산마늘과 울릉도 재배 울릉 산마늘을 동종으로 보고 동일 학명으로 명명하였다. 그러나, 최근 국립수목원에서 울릉도 재배 산마늘 5개체를 동정한 결과, 기존 울릉산마늘 (Allium ochotense, Allium victoriallis)에 비해 꽃이 백색이고 크며 잎이 넓고, 유전자 정보가 다르므로 새로운 종(Allium ulleungense[비특허문헌 0001])으로 발표하였다.
현재까지 기존 울릉산마늘로 알려진 Allium victoriallis에 대한 다양한 효능 연구들이 보고되었다. 최근 보고된 바에 따르면 울릉산마늘 (Allium victoriallis) 줄기 및 근부추출물은 피부 노화 방지, 미백, 육모, 여드름 방지 및 피부자극 완화 효능 [특허문헌 0001]이 있으며, 종자추출물은 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 리스테리아 모노시토게네스(Listeria monocytogenes), 그람 음성 균주인 살모넬라 콜레라에수이스(Salmonella choleraesuis) 및 비브리오 파라헤모리티쿠스(Vibrio parahaemolyticus)에 대한 항균 효능[특허문헌 0002]이 있으며, 울릉산마늘 (Allium victoriallis) 추출물에 대한 항염 및 항산화 효능[특허문헌 0003] 및 울릉산마늘 (Allium victoriallis) 추출물에 대한 당뇨성 질환의 예방 및 치료 효능[특허문헌 0004]이 보고되었다.
그러나, 모두 Allium victoriallis에 관한 특허로 현재까지 울릉도 재배 산마늘인 Allium ulleungense (A. ulleungense)[비특허문헌 0001]에 관한 효능은 보고된 바 없다.
0001: 대한민국 공개특허 10-2006-0012805 0002: 대한민국 공개특허 10-2009-0100732 0003: 대한민국 공개특허 10-2007-0136236 0004: 대한민국 공개특허 10-2002-0050362
0001: Korean Journal of Plant Taxonomists 2019; 49(4): 294-299.
본 발명자들은 피부 탄력 개선용, 피부 주름 예방 또는 개선용, 피부 미백 개선용 또는 피부 보습용 화장료 조성물, 약학적 조성물, 또는 식품 조성물로써 울릉산마늘(Allium ulleungense)의 새로운 기능을 확인하고자 하였고, 이에 대한 효능으로 콜라겐 분해효소의 발현 억제, 콜라겐 총량 증가 및 피부 탄력 향상 효능, 티로시나아제 저해 효능, 멜라닌 생성 억제 및 피부톤 개선 효능, 히알루론산 합성효소 및 막관통 단백질인 아쿠아포린의 합성 촉진과 피부 보습 효능을 나타냄을 규명함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 울릉산마늘(Allium ulleungense) 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 울릉산마늘 추출물을 포함하는 피부상태 개선용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 울릉산마늘 추출물을 포함하는 피부 탄력 개선용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 울릉산마늘 추출물을 포함하는 피부 주름 예방 또는 개선용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 울릉산마늘 추출물을 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 울릉산마늘 추출물을 포함하는 피부 보습용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기한 울릉산마늘 추출물을 포함하는 조성물은 피부 탄력, 주름, 미백 또는 보습의 개선 또는 치료를 위한 화장료 조성물, 약학적 조성물, 또는 식품 조성물일 수 있다.
구체적으로, 본 발명은 울릉산마늘 추출물 및 부위별 울릉산마늘 추출물을 유효 성분으로 함유하는 피부 탄력 개선용, 피부 주름 예방 또는 개선용, 피부 미백용 또는 보습용 화장료 조성물, 약학적 조성물, 또는 식품 조성물을 제공한다.
상기 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 울릉산마늘 추출물을 포함하는 조성물을 제공한다.
본 발명에서 "울릉산마늘"은 울릉도 재배 산마늘인 Allium ulleungense (A. ulleungense)을 말한다.
본 발명의 울릉산마늘은 종류에 제한되지 않으며, 재배한 것을 사용하거나, 시중에서 구입한 것을 사용하는 등 그 출처에 제한 없이 모든 울릉산마늘을 사용할 수 있다.
본 발명은 울릉산마늘(Allium ulleungense) 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 울릉산마늘 추출물을 포함하는 피부상태 개선용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 울릉산마늘 추출물을 포함하는 피부 탄력 개선용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 울릉산마늘 추출물을 포함하는 피부 주름 예방 또는 개선용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 울릉산마늘 추출물을 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 울릉산마늘 추출물을 포함하는 피부 보습용 조성물을 제공한다.
본 발명에서의 조성물은 화장료 조성물, 약학적 조성물, 또는 식품 조성물일 수 있다.
이하, 본 발명을 구체적으로 설명한다.
하나의 양태로서, 울릉산마늘 추출물을 포함하는 피부 탄력, 주름, 미백 또는 보습의 개선 또는 치료용 화장료 조성물, 약학적 조성물, 또는 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "추출물"은 상기 울릉산마늘을 추출하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 또한, 울릉산마늘을 직접 압착 혹은 분쇄 후 여과하여 얻은 착즙액을 포함한다. 더불어, 본 발명의 추출물은 상기 추출액을 다시 분획하여 얻어지는 분획물도 포함한다.
본 발명의 상기 추출물은, 울릉산마늘의 뿌리, 잎, 꽃, 줄기, 종자로부터 추출될 수 있으며 이들의 혼합물을 사용할 수 있다. 또한, 이들 부위에 국한하지 않으며 식물체 전 부위를 사용할 수 있다. 구체적으로, 전초, 꽃 또는 종자 추출물을 사용할 수 있다.
본 발명의 상기 울릉산마늘의 추출에 있어서, 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.
본 발명에서 상기 울릉산마늘을 추출하는데 사용되는 추출용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 추출 용매의 비제한적인 예로는 물(또는 증류수); 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올 등의 C1 내지 C4의 저급 알코올; 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 등의 다가 알코올; 및 에틸아세테이트, 아세톤, 헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등의 탄화수소계 용매; 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있으며, 구체적으로 물(또는 증류수), 저급알코올, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸아세테이트를 단독으로 사용하거나 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있고, 보다 구체적으로 에탄올 수용액을 사용할 수 있다.
상기 용매를 사용하여 울릉산마늘을 1회 이상 추출하여 용매 추출물을 제조할 수 있고, 상기 용매 추출물을 감압증류한 후 동결건조 또는 분무 건조하여 얻은 건조 추출물을 제조할 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서는 울릉산마늘을 뿌리, 잎, 꽃, 줄기, 종자로 분리하여, 세척하였고, 건조하여 분쇄하였다. 분쇄된 울릉산마늘 뿌리, 잎, 꽃, 줄기, 종자에 10배의 70% 에탄올을 가하여 울릉산마늘 추출물을 제조하였다(제조예).
본 발명에서 사용되는 용어, "개선"이란 상태의 완화 또는 치료와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 용어, "피부 상태 개선"은 피부 상태의 완화 또는 치료와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미하며, 구체적으로 피부 보습, 피부 탄력 증진, 피부 주름 개선 및 피부 미백으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상을 의미할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 용어, "피부 재생" 또는 "피부 탄력 개선" 또는 "피부 주름 예방 또는 개선" 이란 콜라겐 총량을 증가시키는 모든 작용을 의미한다.
본 발명의 울릉산마늘 추출물 또는 부위별 울릉산마늘 추출물은 콜라겐의 총량을 효과적으로 증가시키는 효능이 있으며, 구체적으로 콜라게나아제 활성을 억제하는 효능을 나타내며, 콜라겐 총량 증가와 관련된 효소로서 상기 콜라게나아제인 MMP-1의 생성을 억제시키는 효능을 나타낸다.
상기 효능들과 관련하여 본 발명의 구체적인 일 실시예에 따르면 인간 섬유아세포에 울릉산마늘 추출물 또는 부위별 울릉산마늘 추출물을 농도별로 처리한 경우, 인간 섬유아세포에서 생산되는 콜라겐의 총량이 농도 의존적으로 증가하는 것을 확인하였다.(실험예 1)
또 다른 실시예에 따르면, 인간 섬유아세포에 울릉산마늘 추출물 또는 부위별 울릉산마늘 추출물을 농도별로 처리한 후 콜라게나아제인 MMP-1을 생성시키는 것으로 알려진 물질인 TNF-a (tunor necrosis factor-a)를 처리한 경우, 인간 섬유아세포로부터 합성된 MMP-1의 양이 울릉산마늘 추출물 처리 농도에 의존적으로 저해되는 것으로 확인되었다.(실험예 2)
또한 울릉산마늘 추출물 또는 부위별 울릉산마늘 추출물을 포함한 크림 제형을 피부에 적용하였을 때, 피부 탄력이 증가하는 것을 확인하였다.(실험예 3)
상기 "피부 주름 예방 또는 개선"이란 피부에 주름이 생기는 것을 예방, 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화시키는 것을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "피부 미백"이란 멜라닌 색소의 합성을 저해하여 피부 톤을 밝게 할 뿐만 아니라, 멜라닌의 피부 침착(과색소 침착증)을 억제하거나 방지, 자외선, 호르몬 또는 유전에 기인한 기미, 주근깨를 완화 또는 개선하는 모든 작용을 의미한다.
본 발명의 울릉산마늘 추출물 또는 부위별 울릉산마늘 추출물은 멜라닌의 생성을 효과적으로 저해하는 효능이 있으며, 구체적으로 티로시나아제 효소를 저해하고 합성되는 멜라닌의 총량을 감소시키는 효능을 나타낸다.
멜라닌은 멜라노사이트에서 생성되는 흑갈색의 색소로서 사람의 피부색을 결정하며 멜라닌 색소억제로 피부를 밝게 하는 효능을 기대할 수 있다.
상기 효능과 관련하여 본 발명의 구체적인 실시예에 따르면, 울릉산마늘 추출물 또는 부위별 울릉산마늘 추출물이 티로시나제를 저해하는 것을 확인하였다.(실험예 4)
또 다른 실시예에 따르면, 마우스 멜라노마 세포(B-16 mouse melanoma cell)에 울릉산마늘 추출물 또는 부위별 울릉산마늘 추출물을 농도별로 처리한 경우, 멜라노마 세포의 멜라닌 함유량이 울릉산마늘 추출물 또는 부위별 울릉산마늘 추출물의 처리 농도에 의존적으로 감소되는 것으로 확인되었다.(실험예 5)
또한 울릉산마늘 추출물 또는 부위별 울릉산마늘 추출물을 포함한 크림 제형을 피부에 적용하였을 때, 피부 톤(밝기)이 개선되는 것을 확인하였다.(실험예 6)
본 발명에서 사용되는 용어, "피부 보습"은 피부에 수분감을 증가시켜주고, 촉촉한 상태를 유지시키는 것으로, 피부에 수분을 공급하거나 수분의 증발을 차단하여 피부의 유연성을 유지하고 균일한 각질 탈락을 유도하여 매끈한 표면을 유지하게 하는 모든 작용을 의미한다. 피부 보습 효과를 높일 경우, 피부 탄력 증진, 피부 주름 개선에 이로운 영향을 미칠 수 있다.
본 발명의 울릉산마늘 추출물 또는 부위별 울릉산마늘 추출물은 우수한 히알루론산 합성 효소 및 아쿠아포린 단백질 발현 증가 효능을 나타낸다. 구체적으로 피부보습 효능과 관련된 HAS2, HAS3 유전자와 AQP3 유전자의 발현을 증가시키는 효능을 나타낸다.
울릉산마늘 추출물 또는 부위별 울릉산마늘 추출물을 인간 각질형성세포에 처리하였을 때, HAS2, HAS3 및 AQP3 발현을 증가시키는 것으로 확인되었다. (실험예 7)
또한, 울릉산마늘 추출물 또는 부위별 울릉산마늘 추출물을 포함한 크림 제형을 피부에 적용하였을 때, 피부 수분량이 증가하는 것을 확인하였다. (실험예 8)
상기 "피부 보습"은 예컨대, 아토피 피부염, 건선, 피부 건조증, 습진 및 색소성 건피증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상에 대한 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 화장료 조성물, 약학적 조성물 및 식품 조성물에 있어, 상기 울릉산마늘 추출물의 함량은 화장료 조성물, 약학적 조성물 및 식품 조성물 전체 중량 대비 0.00001 내지 10중량%인 것이 바람직하다.
하나의 양태로서, 울릉산마늘 추출물을 포함하는 피부 탄력 개선용, 피부 주름 예방 또는 개선용, 피부 미백용, 피부 보습용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 용액, 외용연고, 크림, 폼, 영양화장수, 유연화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업베이스, 에센스, 비누, 세정제, 입욕제, 선스크린크림, 선오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형으로 제조할 수 있고, 바람직하게는 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤, 파우더, 파운데이션 또는 세정제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 항료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이제 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토오스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제, 또는 유탁화제가 이용되고 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일이 있으며, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 비누인 경우에는 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 이용될 수 있다.
본 발명은 또한 울릉산마늘 추출물을 포함하는 조성물을 개체의 피부에 도포하는 단계를 포함하는, 피부 탄력 개선, 피부 주름 예방 또는 개선, 피부 미백, 피부 보습 방법을 제공한다. 상기 개체는, 인간, 가축, 쥐 등을 포함하는 포유류 동물을 제한 없이 포함한다.
하나의 양태로서, 울릉산마늘 추출물을 포함하는 피부 탄력, 주름, 미백 또는 보습의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "약학적 조성물"이란 '의약외품' 또는 '의약품'의 의미를 포함하는 개념으로 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 유효량의 울릉산마늘 추출물을 포함할 때 바람직한 피부 탄력 개선, 피부 주름 예방 또는 개선, 피부 미백, 피부 보습 효과를 제공할 수 있다. 본 발명에서 "유효량"이라 함은, 피부 탄력 개선, 피부 주름 예방 또는 개선, 피부 미백 또는 피부 보습 촉진 효과를 충분히 나타낼 수 있는 추출물의 양을 의미한다.
본 발명의 조성물에 포함되는 울릉산마늘 추출물의 유효량은 조성물이 제품화되는 형태, 상기 울릉산마늘 추출물이 피부에 적용되는 방법 및 피부에 머무르는 시간 등에 따라 달라질 것이다. 예컨대, 상기 조성물이 의약품으로 제품화되는 경우에는 일상적으로 피부에 적용하게 되는 화장품으로 제품화되는 경우에 비해 높은 농도로 상기 울릉산마늘 추출물을 포함할 수 있을 것이다. 따라서, 일일 투여량은 상기 울릉산마늘 추출물을 기준으로 0.1 내지 500 mg/kg이며, 하루 1 내지 6회 투여될 수 있다.
본 발명의 울릉산마늘 추출물을 포함하는 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있으나, 바람직하게는 비경구 제제일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 울릉산마늘 추출물이 의약외품 조성물로 제공되는 경우, 상기 의약외품 조성물은 하이드록시신남산, 아이소아밀 아세테이트 및 베타인으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 것에 더하여, 필요에 따라 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더욱 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제는 본 발명의 효과를 해하지 않는 한 제한되지 않으며, 예를 들어 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제, 윤활제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 포함할 수 있다.
상기 의약외품 조성물은 소독 청결제, 샤워폼, 연고액, 물티슈, 코팅제 등을 예시할 수 있으며, 바람직하게는 외용 연고, 로션 등과 같은 반고형 제제로 제조될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 의약외품의 제제화 방법, 용량, 이용방법, 구성성분 등은 기술분야에 공지된 통상의 기술로부터 적절히 선택될 수 있다.
하나의 양태로서, 울릉산마늘 추출물을 포함하는 피부 탄력 개선용, 피부 주름 예방 또는 개선용, 피부 미백용, 피부 보습용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 울릉산마늘 추출물이 식품 조성물로 제공되는 경우, 상기 조성물은 유효성분 이외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조첨가제를 포함할 수 있다.
상기 식품보조첨가제는 식품에 보존적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착삭제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 그 종류가 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 식품 조성물에는 건강기능식품이 포함될 수 있다. 본 발명에서 건강기능식품이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절 기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다. 일반식품에 비해 적극적인 건강유지나 증진 효과를 가지고, 건강 보조 식품(health supplement food)은 건강보조 목적의 식품을 의미한다. 경우에 따라, 기능성 식품, 건강 식품, 건강 보조 식품의 용어는 혼용된다.
구체적으로, 상기 건강기능식품은 본 발명의 울릉산마늘 추출물을 음료, 차류, 향신료, 껌, 과자류 등의 식품소재에 첨가하거나, 캡슐화, 분말화, 현탁액 등으로 제조한 식품으로, 이를 섭취할 경우 건강상 특정한 효과를 가져오는 것을 의미하나, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용이 없는 장점이 있다.
상기 식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 건강 기능 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
상기 조성물은 식품 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 예들 들어, 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin), 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐산(panthotenic acid) 등을 포함할 수 있다. 또한, 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca), 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu), 크륨(Cr) 등의 미네랄을 포함할 수 있다. 또한, 라이신, 트립토판, 시스테인, 발린 등의 아미노산을 포함할 수 있다. 본 발명의 건강기능식품이 취할 수 있는 형태에는 제한이 없으며, 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있고, 기능성 식품 등 당업계에 알려진 용어와 혼용 가능하다.
아울러 본 발명의 건강기능식품은 당업자의 선택에 따라 식품에 포함될 수 있는 적절한 기타 보조성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다. 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명의 울릉산마늘 추출물을 주성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 동물을 위한 사료로 이용되는 식품도 포함한다.
본 발명의 조성물은 당업계에 공지된 피부 탄력 개선용 성분, 피부 주름 예방 또는 개선 성분, 피부 미백 성분 또는 피부 보습 성분을 추가로 포함할 수 있다. 추가의 성분은 전체 조성물 중량에 대하여 0.0001 중량% 내지 10 중량%로 포함될 수 있으며, 상기 함량 범위는 피부 안전성, 울릉산마늘 추출물의 제형화 시의 용이성 등의 요건에 따라 조절될 수 있다.
이상 본 명세서에 기재된 수치 값은 달리 명시되어 있지 않은 한 균등범위까지 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
본 발명의 조성물인 울릉산마늘 추출물은 콜라겐 분해효소의 발현 억제, 콜라겐 총량 증가 및 피부 탄력 향상, 티로시나아제 저해, 멜라닌 생성 억제 및 피부톤 개선, 히알루론산 합성효소 및 막관통 단백질인 아쿠아포린의 합성 촉진을 통해서 피부 탄력, 주름, 미백 또는 보습의 개선 또는 치료 효과를 갖는 화장료 조성물, 약학적 조성물, 또는 식품 조성물을 제공할 수 있고, 천연 유래 추출물로서 부작용의 문제가 없어, 화장품 및 의약 등으로 널리 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 울릉산마늘 추출물 및 대조군을 처리한 경우 HAS2 유전자의 발현에 미치는 영향을 확인한 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 울릉산마늘 추출물 및 대조군을 처리한 경우 각 시료의 HAS3 유전자의 발현에 미치는 영향을 확인한 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 울릉산마늘 추출물 및 대조군을 처리한 경우 각 시료의 AQP3 유전자의 발현 정도를 확인한 것으로, 결과는 추출물을 첨가하지 않은 음성 대조군의 mRNA 발현량을 약 1.0으로 기준하여 수치화하였다.
<제조예> 울릉산마늘 추출물의 제조
울릉산마늘 (Allium ulleungense)은 농장으로부터 판매되고 있는 것을 온라인을 통해 구입하여 사용하였다. 구입한 울릉산마늘은 전초 외 필요한 부위별로 분리하여 세척하고 건조하여 분쇄하였다. 분쇄된 울릉산마늘 각 부위 질량의 10배에 해당하는 70% 에탄올 수용액을 가하여 상온에서 3일간 추출한 후 감압 여과하였다. 각각의 여과한 추출물을 rotary evaporator(Buchi, Switzerland)로 농축, 건조하여 부위별 울릉산마늘 추출물을 제조하였다. 또한 각각의 부위별 추출물을 같은 비로 혼합하여, 울릉산마늘 전초 추출물로 사용하였다.
비교예로, 기존 울릉산마늘 (Allium victoriallis) 및 삼채 (A. hookeri)의 전초 추출물 및 종자 추출물도 울릉산마늘 (Allium ulleungense)과 동일한 방법으로 제조하였다.
샘플 이름 시료
비교예 1 양성대조군 [비타민C(52.8 ug/ml), TNF-α(10ng/ml), 알부틴(100 ug/ml), EGF(10ng/ml)]
실시예 1 Allium ulleungense 전초 추출물(40 ug/ml)
실시예 2 Allium ulleungense 꽃 추출물(40 ug/ml)
실시예 3 Allium ulleungense 종자 추출물(40 ug/ml)
비교예 2 Allium victoriallis 전초 추출물(40 ug/ml)
비교예 3 Allium victoriallis 종자 추출물(40 ug/ml)
비교예 4 삼채 (A. hookeri) 전초 추출물(40 ug/ml)
비교예 5 삼채 (A. hookeri) 종자 추출물(40 ug/ml)
<실험예 1> 콜라겐 총량 증가 효과
울릉산마늘 (Allium ulleungense) 전초 추출물 또는 부위별 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 추출물을 인간 유래 섬유아세포의 배양액에 첨가하여 세포수준에서 콜라겐 총량 증가 효과를 실험하였다.
증가된 콜라겐 총량의 측정은 PICP EIA kit(Procollagen Type I C-Peptide Enzyme ImmunoAssay KIT)를 이용하여 정량하였다. 실험전 인간 유래 섬유아세포를 대상으로 제조예에서 제조한 울릉산마늘 전초 추출물 또는 부위별 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 추출물, 기존 울릉산마늘 (Allium victoriallis) 및 삼채 (A. hookeri)의 전초 추출물 또는 종자 추출물의 농도(ug/ml)를 달리하여 세포독성을 평가하였으며, 세포독성이 없는 농도를 선정(40 ug/ml)하여 콜라겐 총량의 증가 정도를 평가하였다.
각각의 시료를 인간 섬유아세포의 배양배지에 첨가하여 1일간 배양한 후, 배양액을 취하여 PICP EIA 키트로 각 농도에서의 콜라겐의 총량 증가 정도를 분광광도계를 이용하여 450 nm에서 측정하였다. 효과의 비교를 위하여 아무것도 첨가하지 않은 섬유아세포의 배양 배지(대조군)와 비타민 C를 최종 농도 52.8 ug/ml이 되도록 첨가한 시료(비교예 1)에 대하여 동일한 방법으로 콜라겐 총량의 증가 정도를 측정하였다. 콜라겐의 총량은 UV 흡광도로서 측정하였으며, 콜라겐 총량의 증가율은 대조군에 대한 상대적인 콜라겐 총량의 비율로 계산하고, 그 결과를 하기 표 2(산마늘 추출물의 콜라겐 총량 증가 효과, 반복수=3)에 정리하였다.
시료 흡광도 평균 콜라겐 증가율(%)
대조군(무첨가) 421 -
비교예 1(비타민 C) 531 26
실시예 1 472 12
실시예 2 488 16
실시예 3 518 23
비교예 2 463 9
비교예 3 494 18
비교예 4 470 12
비교예 5 461 9
상기 표 2의 결과에서 볼 수 있듯이, 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 전초 추출물 또는 부위별 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 추출물은 콜라겐 합성을 촉진하여 콜라겐의 총량을 증가시키는 효능이 있으며, 특히 실시예 3은 콜라겐 총량을 증가시키는 능력이 있는 것으로 알려진 비타민 C와 유사한 정도로 콜라겐 총량을 증가시키는 것으로 확인 되었다.
<실험예 2> 콜라게나아제 활성 억제 효과
울릉산마늘 (Allium ulleungense) 전초 추출물 또는 부위별 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 추출물, 기존 울릉산마늘 (Allium victoriallis) 및 삼채 (A. hookeri)의 전초 추출물 또는 종자 추출물에 대하여 콜라게나아제 활성 억제 효과를 다음과 같이 확인하였다.
인간 정상 피부 세포인 섬유아세포를 24-웰 마이크로 플레이트에 각 웰당 2.5X104 세포가 되도록 접종하고, 10% 혈청 DMEM 배지 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 10% 혈청 DMEM 배지를 제거하고 인산완충용액으로 1회 세척한 후 울릉산마늘 추출물을 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 울릉산마늘 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 30분 동안 추가로 배양하였다.
울릉산마늘 (Allium ulleungense) 전초 추출물 또는 부위별 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 추출물, 기존 울릉산마늘 (Allium victoriallis) 및 삼채 (A. hookeri)의 전초 추출물 또는 종자 추출물을 최종 농도가 40 ug/ml이 되도록 시료 처리하고, 30분 후 콜라게나아제인 MMP-1을 생성시키는 것으로 알려진 물질인 TNF-α(tumor necrosis factor-α) 10 ng/ml로 자극 후 24시간 배양하였다. 이때 TNF-α 무처리군과 처리군은 울릉산마늘 추출물이 포함되지 않은 대조군 중 TNF-α를 처리하지 않은 무처리군과 TNF-α를 처리한 처리군(비교예 1)으로 하였다.
각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 킷트(Amersham, 미국)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(ng/ml)을 측정하고, 콜라게나아제 활성 저해율은 하기 수학식 1에 따라 MMP-1 생성억제율(%)을 계산하였으며, 그 결과는 하기 표 3(울릉산마늘 추출물의 콜라게나아제 활성 저해 효과 (반복수=3))에 나타낸 바와 같다.
음성 대조군의 MMP-1의 양은 TNF 무처리군의 MMP-1양을 의미하며 양성 대조군의 MMP-1의 양은 TNF 처리군의 MMP-1의 양을 의미하며 실험군의 MMP-1의 양은 울릉산마늘 추출물이 각 농도로 첨가된 군을 말한다.
[수학식 1]
MMP-1 생성 억제율(%) = (1-(x-z)/(Y-Z))X100
(X = 실험군 MMP-1의 양, Y = 양성 대조군 MMP-1의 양, Z = 음성 대조군 MMP-1의 양)
시료 MMP-1의 양(ng/㎖) 저해율(%)
대조군(무첨가) 6.79 -
비교예 1 (TNF-α) 18.95 -
실시예 1 15.87 25.3%
실시예 2 12.36 54.2%
실시예 3 9.04 81.5%
비교예 2 16.47 20.4%
비교예 3 9.90 74.4%
비교예 4 17.82 9.3%
비교예 5 17.70 10.6%
상기 표 3의 결과에서 볼 수 있듯이, 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 전초 추출물 및 부위별 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 추출물, 특히 실시예 3은 콜라게나아제인 MMP-1의 우수한 저해 능력이 있음을 알 수 있다.
<실험예 3> 크림 적용 전후의 피부 탄력 증진 효과
실제 사람의 피부에서의 탄력 증진 효과를 시험하기 위하여 하기 표 4의 조성으로 A와 B를 크림 제형으로 제조하여 시험하였다(단위: 중량%). 삼채, 울릉산마늘 (Allium victoriallis), 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 중 in vitro 실험에서 가장 우수한 효능을 보인 실시예 3으로 in vivo 테스트를 진행하였다.
성분 A B
실시예 3 1 0
정제수 잔량 잔량
글리세린 8.0 8.0
부틸렌글리콜 4.0 4.0
히알루론산 추출물 5.0 5.0
베타글루칸 7.0 7.0
카보머 0.15 0.15
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 8.0 8.0
스쿠알란 5.0 5.0
세테아릴 글루코사이드 1.5 1.5
소르비탄 스테아레이트 0.4 0.4
세테아릴 알코올 2.0 2.0
방부제 적량 적량
색소 적량 적량
트리에탄올아민 0.15 0.15
25~40세 여성 20명을 아침 저녁 매일 2회씩 8주간 안면에 도포한 후 피부 탄력 측정기(Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 피부 탄력 개선 효과를 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다. 결과값은 피부 탄력 측정기의 피부 점탄성(viscoelasticity)을 의미한다.
2주 후 피부 탄력 변화율(%)
A 22
B 8
상기 표 5의 결과에서 보여지는 바와 같이, 실시예 3을 처리한 군은 피부 탄력을 증가시켰으므로, 실시예 3은 피부 탄력을 증진시키는 효과가 우수하였다.
<실험예 4> 티로시나아제 저해 효과
티로시나제 효소는 버섯류(Mushroom)로부터 추출된 것으로 시그마(SIGMA)사의 것을 사용하였다. 먼저 기질인 티로신을 증류수에 용해시켜 0.3mg/ml의 용액으로 만들고 그 용액을 1.0ml씩 시험관에 넣은 다음, 여기에 포타슘-포스페이트 완충용액(0.1mol 농도, pH 6.8) 1.0ml 및 증류수 0.7ml를 첨가하였다. 본 발명의 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 전초 추출물 및 부위별 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 추출물, 기존 울릉산마늘 (Allium victoriallis) 및 삼채 (A. hookeri)의 전초 추출물 또는 종자 추출물을 에탄올 용액에 최종 농도 40 ug/ml 농도로 각각 혼합하여 준비한 시료액 0.2ml를 반응액에 넣은 다음 37℃항온조에서 10분 동안 반응시켰다. 이때 대조군은 시료액 대신 에탄올 용액만을 0.2ml 넣은 것으로 준비하였고, 양성대조군으로는 비타민 C의 최종 농도 52.8 ug/ml이 되도록 첨가한 시료 (비교예 1)를 사용하였다. 이 반응액에 2500유닛/ml의 티로시나제 용액 0.1ml씩을 넣고 다시 37℃항온조에서 10분 동안 반응시켰다. 이 반응액이 든 시험관을 얼음물속에 넣어서 급냉시켜 반응을 중지시키고 광전분광분석계로 파장 475nm에서의 흡광도를 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다. 각각의 티로시나제 저해 효과는 하기 수학식 2로 산출하였다.
[수학식 2]
Figure pat00001
시료 티로시나아제 저해율(%)
대조군(무첨가) 0
비교예 1(비타민 C) 50
실시예 1 32
실시예 2 35
실시예 3 45
비교예 2 27
비교예 3 21
비교예 4 12
비교예 5 23
표 6과 같이, 본 발명에 의한 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 전초 추출물 및 부위별 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 추출물, 특히 실시예 3은 티로시나제 억제율이 공지된 티로시나제 저해제인 아스코르브산과 동등한 수준의 억제효과를 보여 미백 효과가 매우 우수함을 알 수 있다.
<실험예 5> 멜라닌 총량 감소 효과 확인
울릉산마늘 (Allium ulleungense) 전초 추출물 및 부위별 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 추출물, 기존 울릉산마늘 (Allium victoriallis) 및 삼채 (A. hookeri)의 전초 추출물 또는 종자 추출물에 대하여 쥐의 멜라노마 세포(B-16 mouse melanoma cell)의 배양액에 첨가하여 세포 수준에서의 미백 효과를 실험하였다.
각각의 시료를 배양액에 최종 농도가 40 ug/ml이 되도록 하여 실험하였으며, 대조군인 알부틴은 100 ug/ml(비교예 1)가 되도록 배지에 첨가하여 각각 B-16 멜라노마 세포에 처리하여 3일간 배양하였다.
이후, 세포들을 트립신(trypsin) 처리하여 배양용기로부터 떼어내 원심분리 한 후 멜라닌을 추출하였다. 떼어 낸 세포는 수산화 나트륨 용액(1N) 1ml를 가하여 10분간 끓여 멜라닌을 녹이고 분광 광도계를 이용하여, 400nm에서 흡광도를 측정하여 생성된 멜라닌의 양을 측정하였다.
상기 멜라닌 양은 단위 세포수당(106 cell)의 흡광도로 나타내는 방법으로 측정하였으며, 대조군에 대한 상대적인 멜라닌 총량에 대한 저해율(%)로 계산하고 결과를 표 7(울릉산마늘 추출물의 멜라닌 총량 감소 효과 (반복수=3))에 정리하였다.
시료 멜라닌 총량(Abs) 저해율(%)
대조군(무첨가) 0.254 -
비교예 1(알부틴) 0.126 50.4
실시예 1 0.203 20.1
실시예 2 0.175 31.1
실시예 3 0.168 33.9
비교예 2 0.215 15.4
비교예 3 0.235 7.5
비교예 4 0.222 12.5
비교예 5 0.199 21.8
상기 표 7의 결과에서 볼 수 있듯이, 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 전초 추출물 및 부위별 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 추출물, 특히 실시예 3은 낮은 농도에서도 멜라닌 합성을 저해하여 멜라닌의 총량을 감소시키는 효능이 나타났다.
<실험예 6> 크림 적용 전후의 피부톤 개선 효과
피부톤 개선 효과를 실험하기 위하여 표 4의 조성으로 제조한 A와 B 크림 제형으로 시험을 실시하였다. 25~40세의 10명의 피험자를 대상으로 대상자에게 각각 사용(저녁 1회/일 도포, 총 1주간)하도록 한 후, Facial Stage DM-3 (Moritex, Japan) 기기를 활용하여 피부톤 개선 정도를 평가하였다. 피부의 명도 및 색채 측정값으로 피부의 명도 및 색채 변화 값으로 피부톤 개선율을 판단하였다. 그 결과는 하기 표 8에 나타내었다.
크림 A 크림 B
피부톤 개선율(%) 명도 (평균±표준편차) 명도 (평균±표준편차)
1.8 ± 0.3 0.5 ± 0.3
색채 (평균±표준편차) 색채 (평균±표준편차)
1.3 ± 0.2 0.7 ± 0.4
표 8의 결과에서 알 수 있듯이, 본 발명의 실시예 3을 함유하지 않는 크림 B는 유의한 피부톤 개선 효능을 나타내지 않았으나, 본 발명에 따라 실시예 3을 유효성분으로 함유하는 크림 A는 사용전보다 사용후의 피부톤이 많이 개선되었다.
<실험예 7> 인간 각질형성세포에서의 HAS2, HAS3 및 AQP3 발현 증가 시험
인간 각질형성세포(HaCaT)를 6-well cell culture plate에 각 2X105씩 분주하여 10% 우혈청(fetal bovin serum)을 포함한 DMEM 배지에서 24시간 배양하였다. 배양된 세포에 10% 우혈청과 칼슘(Ca2+)이 포함되지 않은 DMEM 배지로 교체한 후, 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 전초 추출물 및 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 종자 추출물, 기존 울릉산마늘 (Allium victoriallis) 및 삼채 (A. hookeri)의 전초 추출물 또는 종자 추출물을 배지에 희석하여 배양액에 최종 농도가 40 ug/ml이 되도록 하여 실험하였으며, 24시간 처리하였다. 24시간 경과 후 세포를 회수하여 냉각된 인산완충용액(PBS)으로 세척하고, RNeasy mini kit (Qiagen, Germany)를 이용하여 전체 RNA를 추출하였다. RNA를 cDNA Synthesis Kit (PhileKorea, Korea) 이용하여 역전사반응을 수행하였다. 합성된 cDNA는 정량 후 물로 희석하여 모든 반응에 동일량을 사용하였다. TaqMan® Universal Master Mix II와 TaqMan® Gene Expression Assays (Thermo Fisher, USA) HAS2, HAS3 및 AQP3 프라이머를 사용하였다. StepOnePlus® Real-time PCR System (Applied Biosystems, USA)를 이용하여 실시간 중합 효소 연쇄 반응(quantitative real time PCR)을 수행하였다. 실험 결과는 하우스키핑 유전자(housekeeping gene) Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)를 기준으로 △△Ct 방법으로 계산하여 나타내었다. 각 시료의 HAS2, HAS3 및 AQP3 유전자의 발현 정도는 추출물을 첨가하지 않은 음성 대조군의 mRNA 발현량을 약 1.0으로 기준하여 수치화하였으며, 그 결과를 도 1 내지 3 및 표 9 내지 11에 나타내었다. 양성 대조군으로 EGF Recombinant Human Protein (Life Technologies, USA) 10 ng/ml(비교예 1) 를 사용하였다.
시료 HAS2의 mRNA 발현량
무첨가(대조군) 1
비교예 1(EGF) 7.35
실시예 1 3.05
실시예 2 2.46
실시예 3 4.50
비교예 2 1.50
비교예 3 1.26
비교예 4 2.58
비교예 5 1.13
시료 HAS3의 mRNA 발현량
무첨가(대조군) 1
비교예 1(EGF) 4.85
실시예 1 2.54
실시예 2 3.42
실시예 3 3.50
비교예 2 1.32
비교예 3 1.03
비교예 4 2.10
비교예 5 1.89
시료 AQP3의 mRNA 발현량
무첨가(대조군) 1
비교예 1(EGF) 1.28
실시예 1 2.58
실시예 2 2.24
실시예 3 4.8
비교예 2 1.27
비교예 3 2.45
비교예 4 2.25
비교예 5 3.58
상기 표 9 내지 11 및 도 1 내지 3의 결과에서 볼 수 있듯이, 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 전초 추출물 및 부위별 울릉산마늘 (Allium ulleungense) 추출물, 특히 실시예 3은 히알루론산 합성효소 유전자 (HAS2, HAS3) 및 막관통 단백질인 아쿠아포린 유전자 (AQP3)의 발현을 증가시키는 효능이 나타났다.
<실험예 8> 크림 적용 전후의 피부 수분량 변화
피부톤 개선 효과를 실험하기 위하여 표 4의 조성으로 제조한 A와 B 크림 제형으로 시험을 실시하였다. 평가대상은 30~40세 여성 20명을 선정하여 A와 B를 나누어 주고 왼쪽 및 오른쪽 뺨에 각각 A와 B를 사용하게 한 후 2주 후에 피부 수분함유량을 측정하였다. 구체적으로 상기 피험자 20명을 대상으로 안면을 비누로 씻은 후, 항온항습 조건(온도 20±2℃ 상대습도 40±2%)에서 피부를 적응시켰다. 코네오미터(Corneometer, CM825)를 이용하여, 피부 표면 전기용량을 3회 반복 측정하였다. 그 평균 결과를 표 12에 표시하였다.
2주 후 수분함유량 변화율(%)
A 20
B 8

Claims (12)

  1. 울릉산마늘(Allium ulleungense) 추출물을 포함하는 화장료 조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 화장료는 피부 탄력, 주름, 미백 또는 보습의 개선용인 화장료 조성물.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 추출물은 물, C1-C4 알코올, 1,3-부틸렌글리콜 및 에틸 아세테이트로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매의 추출물인 화장료 조성물.
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 화장료는 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤, 파우더, 파운데이션 또는 세정제의 제형인 화장료 조성물.
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 울릉산마늘(Allium ulleungense) 추출물은 전초, 꽃 또는 종자의 추출물인 화장료 조성물.
  6. 울릉산마늘(Allium ulleungense) 추출물을 포함하는 피부 탄력, 주름, 미백 또는 보습의 예방 또는 치료용인 약학적 조성물.
  7. 제 6항에 있어서,
    상기 미백은 과색소침착증의 예방 또는 치료용인 약학적 조성물.
  8. 제 6항에 있어서,
    상기 추출물은 물, C1-C4 알코올, 1,3-부틸렌글리콜 및 에틸 아세테이트로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매의 추출물인 약학적 조성물.
  9. 제 6항에 있어서,
    상기 울릉산마늘(Allium ulleungense) 추출물은 전초, 꽃 또는 종자의 추출물인 약학적 조성물.
  10. 울릉산마늘(Allium ulleungense) 추출물을 포함하는 피부 탄력, 주름, 미백 또는 보습의 개선용인 식품 조성물.
  11. 제 10항에 있어서,
    상기 추출물은 물, C1-C4 알코올, 1,3-부틸렌글리콜 및 에틸 아세테이트로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매의 추출물인 식품 조성물.
  12. 제 10항에 있어서,
    상기 울릉산마늘(Allium ulleungense) 추출물은 전초, 꽃 또는 종자의 추출물인 식품 조성물.
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