KR20010093217A - 면역 크로마토그래피 시험편 및 크로마토그래프 분석방법 - Google Patents

면역 크로마토그래피 시험편 및 크로마토그래프 분석방법 Download PDF

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KR20010093217A
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나다오카마사타카
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나카야마히로시
시게토노부유키
기타와키후미히사
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마츠시타 덴끼 산교 가부시키가이샤
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Abstract

본 발명은 혈액 등의 유색 성분을 함유하는 시료에 대해, 전처리를 필요로 하지 않고, 또한 정확한 정성 또는 정량 분석이 가능한 면역 크로마토그래피 시험편, 및 크로마토그래피 분석 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
면역 크로마토그래피 시험편(10)을, 세포 성분 파괴 물질을 보유하는 세포 성분 파괴 물질 보유부위(7)와, 표지시약을 보유하는 표지물 보유부위(3)와, 반응층(4)의 영역중에 특이적 단백질이 고정화된 특이적 단백 고정화부(5)를 갖는 구성으로 하고, 상기 면역 크로마토그래피 시험편(10)을 사용하고, 상기 반응층(4)상의 착색도를 580 nm 이상의 파장으로 측정함으로써 정성 또는 정량 분석한다.

Description

면역 크로마토그래피 시험편 및 크로마토그래프 분석방법{IMMUNE CHROMATOGRAPHIC TEST PIECE AND CHROMATOGRAPHIC ANALYSIS METHOD}
종래, 수질검사 또는 뇨 검사 등의 액체 시료의 화학시험 또는 임상시험을 실시하는 방법으로서, 항원항체 반응을 이용한 면역 크로마토그래피에 의한 측정방법이 널리 사용되고 있다. 일반적으로 크로마토그래피란, 혼합물을 그의 구성성분에 따라 분리하고 확인하는 방법을 말한다. 크로마토그래피 시험편은 액체시료를 첨가하는 부분과, 액체시료의 침투에 의해 이동가능하고 또한 흘러들어온 액체시료에 함유된 분석대상물에 대해 특이적으로 결합하는 물질을 갖는 표지시약이 보유된 부분과, 표지시약과 분석대상물과의 결합반응이 수행되는 부분과, 흘러들어온 시료를 흡수하는 부분을 갖는다. 크로마토그래피 시험편에 액체시료를 첨가하고 방치하여 놓음으로써, 일정 시간 후에 발색 또는 변색을 수반한 착색반응이 일어나고,육안 검출양식에 의해 정성적인 판정을 수행할 수 있다.
면역 크로마토그래프 분석방법은 항원항체 반응의 특이성을 이용하여 항원항체를 확인하고 검출하는 것이다. 면역 크로마토그래피 시험편은 상술한 일반적인 크로마토그래피 시험편에 대해서, 또한 액체시료에 함유된 분석대상물과 표지시약의 복합체에 대해서, 항원항체반응을 일으키는 항체 또는 항원이 고정화된 부분을 갖는 것이다. 면역 크로마토그래피 시험편에 분석대상물을 함유하는 액체시료를 첨가하면, 액체시료에 의해 표지시약이 용해하여 침투방향으로 전개하고, 항체 또는 항원이 고정화된 측정영역에 소정의 착색이 발생한다. 따라서, 측정영역의 착색의 유무에 따라, 액체시료중에 특정의 분석대상물이 함유되어 있는지 여부를 판단할 수 있다. 이러한 분석결과는 착색반응에 의해 판정되기 때문에, 육안적인 검출양식에 의해 기록된다. 이와 같이, 면역 크로마토그래프 분석방법은, 분석결과의 판정이 매우 용이하고, 다양한 분석대상물의 분석에 이용할 수 있다.
일반적으로, 면역 크로마토그래피에 의한 분석은 정성적인 것이지만, 정량적인 분석방법도 개발되고 있다. 일본 특허공개공보 제 96-240591 호에는, 면역 크로마토그래피 시험편에 시료를 첨가하고, 반응을 수행한 후에, 검출계기를 사용하여 시험편상의 착색부분의 흡수 또는 반사 등의 신호를 측정함으로써, 착색도를 정량화하는 방법이 개시되어 있다. 또한, 일본 특허공개공보 제 96-334511 호에는, 착색한 면역 크로마토그래피 시험편을 이미지 센서를 사용하여 상을 취하고, 화상변환된 계조(階調) 화상을 해석처리함으로써, 착색도를 정량적으로 측정하는 방법이 개시되어 있다.
일반적인 면역 크로마토그래피 시험편에는, 액체시료의 침투속도를 기계적으로 조절하는 수단이 없고, 인위적으로 침투속도를 제어할 수 없기 때문에, 상기 침투속도는 시험편의 침투성에 좌우된다. 이러한 시험편을 사용하여 혈액과 같은 세포성분을 함유하는 액체시료를 분석하는 경우, 액체시료의 점성 또는 세포성분의 존재가, 반응층 담체를 막히게 하여 액체시료의 침투를 방해하고, 그 결과 측정시간이 대폭으로 길어지고, 그 사이에 액체시료의 건조 등이 발생하여 반응의 정확성 또는 정량성능을 잃게 되는 문제가 있었다.
또한, 육안 또는 검출계기를 사용하여 착색도를 측정하는 면역 크로마토그래프 분석방법에서는, 유색시료에 함유된 색소, 예를 들면 혈액성분을 지닌 혈색소(적색)가, 항원항체 반응에 의해 발생한 착색반응의 판독을 방해하고, 정량측정시의 감도의 저하와 측정오차를 발생하는 문제가 있었다.
상기의 문제점을 해결하기 위해, 종래는 유색시료, 특히 전혈의 경우에는, 미리 해당 시료에 함유된 색소, 즉 혈색소를 함유하는 혈구성분을 취하여 제거하고, 원심분리 등의 전처리를 해야 했다. 그러나, 이와 같은 전처리를 수행하면, 면역 크로마토그래프 분석방법이 번잡해지고, 또한 비용 상승과 작업성의 저하를 초래하였었다.
본 발명은, 이러한 문제점을 해결하고자 이루어진 것으로, 세포성분 등에 의해 액체시료의 시험편으로의 침투가 방해되는 것을 방지하고, 또한 시료에 함유된 유색 성분, 특히 혈색소로부터 유래하는 백그라운드의 영향을 받지 않으면서 항원항체반응의 결과인 착색도를 정량적으로 판독하고, 또한 첨가할 액체시료, 특히 혈액에 대한 원심분리 등의 전처리가 필요없는, 면역 크로마토그래피 시험편 및 크로마토그래피 분석 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
발명의 개시
상기 목적을 달성하기 위해, 청구의 범위 제1항에 따른 면역 크로마토그래피 시험편은, 유색 시료에 함유된 분석대상물의 정성 또는 정량분석시에 사용하는 면역 크로마토그래피 시험편에 있어서, 표지물 그 자체 또는 표지물이 생산하는 물질이 분석대상물을 함유하는 시료의 흡수파장과 상이한 흡수파장을 갖거나 또는 동일한 흡수파장이더라도 시료의 흡수계수보다도 충분히 높은 흡수계수를 갖는 파장영역을 갖고 있는 것이다.
또한, 청구의 범위 제2항에 따른 면역 크로마토그래피 시험편은, 유색 시료에 함유된 분석대상물의 정성 또는 정량분석시에 사용하는 면역 크로마토그래피 시험편에 있어서, 반응종료후의 표지물 또는 표지물에 의한 반응물이 분석대상물을 함유하는 시료의 흡수파장과 상이한 흡수파장을 갖거나 또는 동일한 흡수파장이더라도 시료의 흡수계수보다도 충분히 높은 흡수계수를 갖는 파장영역을 갖는 것이다.
또한, 청구의 범위 제3항에 따른 면역 크로마토그래피 시험편은, 청구의 범위 제1항 또는 제2항에 기재된 면역 크로마토그래피 시험편에 있어서, 상기 시료가 혈액인 경우, 상기 시험편상에 발생한 착색에 특이적인 흡수파장이 580 nm 이상인 것이다.
또한, 청구의 범위 제4항에 따른 면역 크로마토그래피 시험편은, 청구의 범위 제1항 내지 제3항중 어느 한 항에 기재된 면역 크로마토그래피 시험편에 있어서, 상기 시료에 함유된 세포성분을 파괴하는 물질을 보유하는 영역을 갖는 것이다.
또한, 청구의 범위 제5항에 따른 면역 크로마토그래피 시험편은, 청구의 범위 제4항에 기재된 면역 크로마토그래피 시험편에 있어서, 세포성분을 파괴하는 물질이 무기물, 계면활성제, 또는 사포닌류를 함유하는 것이다.
또한, 청구의 범위 제6항에 따른 면역 크로마토그래피 시험편은, 청구의 범위 제5항에 기재된 면역 크로마토그래피 시험편에 있어서, 상기 무기물이, 염화물을 함유하는 것이다.
또한, 청구의 범위 제7항에 따른 면역 크로마토그래피 시험편은, 청구의 범위 제5항에 기재된 면역 크로마토그래피 시험편에 있어서, 상기 계면활성제가 비극성 계면활성제를 함유하는 것이다.
또한, 청구의 범위 제8항에 따른 면역 크로마토그래피 시험편은, 청구의 범위 제1항 내지 제7항중 어느 한 항에 기재된 면역 크로마토그래피 시험편에 있어서, 분광광도계에 의해 착색도를 정성 또는 정량분석하는 것이다.
또한, 청구의 범위 제9항에 따른 면역 크로마토그래피 시험편은, 청구의 범위 제1항 내지 제8항중 어느 한 항에 기재된 면역 크로마토그래피 시험편에 있어서, 상기 표지물이, 금속 졸, 산화금속 입자, 비금속졸, 염료졸, 착색입자, 색소, 및 산소로부터 선택된 하나 이상을 함유하는 것이다.
또한, 청구의 범위 제10항에 따른 면역 크로마토그래피 시험편은, 청구의 범위 제1항 내지 제9항중 어느 한 항에 기재된 면역 크로마토그래피 시험편에 있어서, 상기 분석대상물이 혈장 단백질, 세균, 바이러스중 하나 이상을 함유하는 것이다.
또한, 청구의 범위 제11항에 따른 크로마토그래프 시험방법은, 면역 크로마토그래피 시험편을 사용한 크로마토그래프 분석방법에 있어서, 상기 면역 크로마토그래피 시험편에 분석대상물을 함유하는 유색 시료를 첨가하고, 상기 시험편상의 착색도를 상기 착색에 특이적인 흡수파장에서 측정하는 것을 특징으로 하고, 표지물 그 자체 또는 표지물이 생산하는 물질이 상기 분석대상물을 함유하는 유색시료의 흡수파장과 상이한 흡수파장을 갖거나 또는 동일한 흡수파장이더라도 유색시료의 흡수계수보다도 충분히 높은 흡수계수를 갖는 파장영역을 갖는 것이다.
또한, 청구의 범위 제12항에 따른 크로마토그래프 분석방법은, 면역 크로마토그래피 시험편을 사용한 크로마토그래프 분석방법에 있어서, 상기 면역 크로마토그래피 시험편에 분석대상물을 함유하는 유색시료를 첨가하고, 상기 시험편상의 착색도를 상기 착색에 특이적인 흡수파장에서 측정하는 것을 특징으로 하고, 반응종료후의 표지물 또는 표지물에 의한 반응물이 상기 분석대상물을 함유하는 시료의 흡수파장과 상이한 흡수파장을 갖거나, 또는 동일한 흡수파장이더라도 시료의 흡수계수보다도 충분히 높은 흡수계수를 갖는 파장영역을 갖는 것이다.
또한, 청구의 범위 제13항에 따른 크로마토그래프 분석방법은, 청구의 범위 제11항 또는 제12항에 기재된 크로마토그래프 분석방법에 있어서, 상기 시료가 혈액인 경우, 착색영역에서 표지물로부터의 신호를, 580 nm 이상의 임의의 파장에서 측정함으로써, 분석대상물을 정성 또는 정량분석하는 것이다.
또한, 청구의 범위 제14항에 따른 크로마토그래프 분석방법은, 청구의 범위 제11항 내지 제13항중 어느 한 항에 기재된 크로마토그래프 분석방법에 있어서, 상기 면역 크로마토그래피 시험편은 시료중의 세포성분을 파괴하는 물질이 보유된 영역을 함유하는 것이다.
또한, 청구의 범위 제15항에 있어서 크로마토그래프 분석방법은, 청구의 범위 제14항에 기재된 크로마토그래프 분석방법에 있어서, 세포성분을 파괴하는 물질이 무기물, 계면활성제, 또는 사포닌류를 함유하는 것이다.
또한, 청구의 범위 제16항에 있어서 크로마토그래프 분석방법은, 청구의 범위 제15항에 기재된 크로마토그래프 분석방법에 있어서, 상기 무기물이 염화물을 함유하는 것이다.
또한, 청구의 범위 제17항에 따른 크로마토그래프 분석방법은, 청구의 범위 제15항에 기재된 크로마토그래프 분석방법에 있어서, 상기 계면활성제가 비극성 계면활성제를 함유하는 것이다.
또한, 청구의 범위 제18항에 따른 크로마토그래프 분석방법은, 청구의 범위 제11항 내지 제17항중 어느 한 항에 기재된 크로마토그래프 분석방법에 있어서, 분광광도계에 의해, 착색도를 정성 또는 정량분석하는 것이다.
또한, 청구의 범위 제19항에 따른 크로마토그래프 분석방법은, 청구의 범위 제11항 내지 제18항중 어느 한 항에 기재된 크로마토그래프 분석방법에 있어서, 상기 표지물이 금속졸, 산화금속 입자, 비금속졸, 염료졸, 착색입자, 색소 및 효소로부터 선택된 하나 이상을 함유하는 것이다.
또한, 청구의 범위 제20항에 있어서 크로마토그래프 분석방법은, 청구의 범위 제11항 내지 제19항중 어느 한 항에 기재된 크로마토그래프 분석방법에 있어서, 상기 분석대상물이 혈장 단백질, 세균, 바이러스중 하나 이상을 함유하는 것이다.
청구의 범위 제1항 내지 제3항, 청구의 범위 제9항, 및 청구의 범위 제10항의 면역 크로마토그래피 시험편에 따르면, 유색시료에 함유된 분석 대상물의 정성 또는 정량분석시에 사용하는 면역 크로마토그래피 시험편에 있어서, 표지물 그 자체 또는 표지물이 생산하는 물질이 분석대상물을 함유하는 시료의 흡수파장과 상이한 흡수파장을 갖거나, 또한 동일한 흡수파장이더라도 시료의 흡수계수보다도 충분히 높은 흡수계수를 갖는 파장영역을 갖고 있는 것으로서 유색성분을 함유하는 시료의 분석에 있어서, 상기 유색성분에 의한 백그라운드의 영향을 받지 않는 착색도의 정성 또는 정량분석이 가능해지고, 고감도로, 고성능의 크로마토그래피 분석을 실현할 수 있는 효과가 있다.
청구의 범위 제4항 내지 제7항의 면역 크로마토그래피 시험편에 따르면, 청구의 범위 제1항 내지 제3항중 어느 하나에 기재된 면역 크로마토그래피 시험편에 있어서, 상기 시료에 함유된 세포성분을 파괴하는 물질을 갖는 영역을 갖는 것으로서, 상기 청구의 범위 제1항 내지 제3항의 효과에 덧붙여, 세포성분을 함유하는 시료의 분석시에, 상기 세포성분이 파괴되어, 상기 시료의 시험편으로의 침투가 원활하게 되고, 측정시간이 단축되고, 더욱 정확하게 정량분석할 수 있는 효과가 있다.또한, 혈액 등, 세포성분을 갖는 시료에 대한 원심분리 등의 전처리가 불필요하게 되기 때문에, 비용이 저하하고 작업성의 향상을 실현할 수 있는 효과가 있다.
청구의 범위 제8항의 면역 크로마토그래피 시험편에 따르면, 청구의 범위 제1항 내지 제7항중 어느 하나에 기재된 면역 크로마토그래피 시험편에 있어서, 분광광도계에 의해, 착색도를 정성 또는 정량분석하는 것으로서, 상기 청구의 범위 제1항 내지 제7항의 효과에 덧붙여, 반사형 분광광도계를 사용한 경우에는, 반응층을 지지하는 지지체로서 불투명한 재료를 사용할 수 있고, 또한 반응층의 이면상태를 우려하지 않고 측정을 수행할 수 있고, 또한, 투과형 분광 광도계를 사용한 경우에는, 반응층의 심부의 착색도를 측정할 수 있고, 고감도로, 고성능의 정성 또는 정량분석할 수 있는 효과가 있다.
청구의 범위 제11항 내지 제13항, 제19항, 및 제20항의 크로마토그래프 분석방법에 따르면, 면역 크로마토그래피 시험편을 사용한 크로마토그래프 분석방법에 있어서, 상기 면역 크로마토그래피 시험편에 분석대상물을 함유하는 유색시료를 첨가하고, 상기 시험편상의 착색도를 상기 착색에 특이적인 흡수파장에서 측정하는 것을 특징으로 하고, 표지물 그 자체, 또는 표지물이 생산하는 물질이 상기 분석 대상물을 함유하는 유색 시료의 흡수파장과 상이한 흡수파장을 갖거나 또는 동일한 흡수파장이더라도 유색 시료의 흡수계수보다도 충분히 높은 흡수계수를 갖는 파장영역을 갖는 것으로, 유색성분을 함유하는 시료의 분석에 있어서, 상기 유색 성분에 의한 백그라운드의 영향을 받지 않는 착색도를 정성 또는 정량분석이 가능해지고, 고감도로 고성능의 크로마토그래피 분석을 실현할 수 있는 효과가 있다.
청구의 범위 제14항 내지 제17항의 크로마토그래프 분석방법에 따르면, 청구의 범위 제11항 내지 제13항중 어느 하나에 기재된 크로마토그래프 분석방법에 있어서, 상기 면역 크로마토그래피 시험편은, 시료중의 세포성분을 파괴하는 물질이 보유된 영역을 함유하는 것으로 하여도, 상기 청구의 범위 제11항 내지 제13항의 효과에 덧붙여, 세포성분을 함유하는 시료의 분석시에, 상기 세포성분이 파괴되어, 상기 시료의 시험편으로의 침투가 원활하게 되고, 측정시간이 단축되고, 더욱 정확하게 정량분석할 수 있는 효과가 있다. 또한, 혈액 등, 세포성분을 갖는 시료에 대한 원심분리 등의 전처리가 불필요하게 되기 때문에, 비용의 저하와 작업성의 향상을 실현할 수 있는 효과가 있다.
청구의 범위 제18항의 크로마토그래프 분석방법에 따르면, 청구의 범위 제11항 내지 제17항중 어느 한항에 기재된 크로마토그래프 분석방법에 있어서, 분광 광도계에 의해 착색정도를 정성 또는 정량분석한 것으로, 상기 청구의 범위 제11항 내지 제17항의 효과에 덧붙여, 반사형 분광광도계를 사용한 경우에는, 반응층을 지지하는 지지체로서 불투명한 재료를 사용할 수 있고, 또한 반응층의 이면상태를 우려하지 않고 측정을 수행할 수 있고, 또한 투과형 분광광도계를 사용한 경우에는, 반사층의 심부의 착색도를 측정할 수 있고, 고감도로, 고성능의 정성 또는 정량분석이 가능하게 되는 효과가 있다.
본 발명은 항원항체 반응을 이용하여 액체 시료를 정성 또는 정량분석하기 위한 면역 크로마토그래피 시험편 및 크로마토그래프 분석방법에 관한 것이고, 특히 혈액 등의 유색시료를 전처리하지 않고 분석가능한 것에 관한 것이다.
도 1은 본 발명의 실시형태 1에 의한 면역 크로마토그래피 시험편을 나타내는 도이다.
도 2는 본 발명의 실시형태 2에 의한 면역 크로마토그래피 시험편을 나타내는 도이다.
도 3은 본 발명의 실시예에 의한 착색 영역을 520 nm의 파장에서 측정한 경우(a)와, 610 nm의 파장에서 측정한 경우(b)의 정량성능을 나타내는 도이다.
실시형태 1
이하, 본 발명의 실시형태 1에 의한 면역 크로마토그래피 시험편, 및 크로마토그래프 분석방법에 대하여, 도면을 참조하면서 설명한다.
도 1은, 본 실시형태 1에 의한 면역 크로마토그래피 시험편(10)을 나타내는 도이다.
도 1에 있어서, 면역 크로마토그래피 시험편(10)은 반응층 담체 지지체(1)와, 시료 첨가부(2)와, 표지물 유지부위(3)와, 반응층(4)과, 특이적 단백 고정화부(5)와, 흡수부(6)를 구비한다.
반응층 담체 지지체(1)는 액체 불투과성 플라스틱 등으로 이루어지고, 크로마토그래피 재료를 지지한다. 시료 첨가부(2)는, 흡수성이 큰 부직포 등으로 이루어지고, 액체 시료가 첨가 또는 도포된다. 표지물 보유부위(3)는, 부직포 등에 용해가능하도록 표지시약을 유지한다. 반응층(4)은 니트로셀룰로즈 등으로 이루어진다. 특이적 단백 고정화부(5)는 반응층(4)의 영역상에 반응형식에 따라, 항체 또는 항원과 같은 분석대상물에 대하여 특이적으로 결합반응하는 특이적 단백질을 고정화한다. 흡수부(6)는, 액체 시료를 최종적으로 흡수한다. 이상, 시료첨가부(2), 표지물 보유부위(3), 반응층(4), 특이적 단백 고정화부(5), 및 흡수부(6)는 반응층 담체 지지체(1)의 상부에 형성되어 있다. 표지시약, 및 특이적 단백질은, 분석할 시료, 및 분석대상물에 따라 적절한 것을 선택할 필요가 있다.
또한, 표지물이 생산하는 물질로는, 예를 들면 표지물이 특이적 단백 고정화부(5)에 생산하는, 발광이 가능한 물질이고, 반응종료 후의 표지물로는, 예를 들면 착색반응에 의해 착색한 후의 표지물이고, 표지물에 의한 반응물로는, 예를 들면 표지물이 효소인 경우에, 그의 표지물이 고정화된 특이적 단백 고정화부(5)에 기질을 가하는 것 등에 의해 착색한 후의 물질이다. 그의 표지물 보유 부위(3)에 유지된 표지 시약으로서는, 염료 졸, 수용성 색소, 금 콜로이드 등의 금속졸, 셀레늄 또는 탄소 등의 비금속 졸, 페라이트 등의 산화금속 입자, 라텍스 등의 착색 입자, 또는 효소 등, 또는 이들과, 분석 대상물과 특이적으로 결합하는 물질의 복합체를 사용한다.
또한, 도 1의 면역 크로마토그래피 시험편(10)의 구조는 일례이고, 크로마토그래피를 수행하는 구조면 어느 구조든지 사용하여도 좋고, 사용할 부재도 임의의 담체 또는 시약에 의해 구성되어도 좋다.
또한, 면역 크로마토그래피 시험편(10)으로서는, 니트로셀룰로즈 또는 유리 섬유 여과지와 같은, 임의의 다공질성 담체로 구성된 크로마토그래피 재료로 이루어진 시험편이 사용된다.
이어서, 본 실시 형태(1)에 의한 면역 크로마토그래피 시험편(10), 및 크로마토그래프 분석방법에 대해서 설명한다.
도 1에 있어서, 액체 시료가 시료 첨가부(2)에 첨가되면, 시료 첨가부(2)에 침투하고, 표지물 보유부분(3)에 도달한다. 이어서, 표지물 보유 부위(3)의 영역에 유지된 표지시약이, 액체 시료의 침투에 의해 용해되고, 액체 시료와 함께 반응층(4)에 침투한다. 반응층(4)의 영역상에는, 특이적 단백질이 고정화된 특이적 단백 고정화부(5)가 있다. 액체 시료가 분석대상물을 함유하는 경우는, 특이적 단백질이 분석대상물과 표지시약의 복합체에 대하여 항원항체 반응을 일으키고, 특이적 단백 고정화부(5)의 영역에 임의의 착색 반응이 발견된다. 액체 시료가 분석 대상물을 함유하지 않는 경우는, 항원항체반응은 일어나지 않고, 착색 반응도 발견되지 않는다. 최종적으로, 액체 시료는 흡수부(6)에 흡수되고 반응은 종료한다.
상기 반응종료 후에, 임의의 검출계기를 사용하여, 착색 영역에 있어서 표지물로부터의 신호를 측정한다. 시료가 전혈의 경우는, 예를 들면 580 nm 이상의 임의의 파장에서 측정하는 것이 바람직하다. 이에 의해, 착색 유무와, 착색도의 정성적, 또는 정량적 분석을 수행할 수 있다. 상기 분석에 의해, 액체시료가 분석 대상물을 함유하는지를 검지할 수 있고, 또한 함유하는 경우에는 그의 분량을 측정할 수 있다. 또한, 상술한 「표지물로부터의 신호」로는, 구체적으로는, 그 자체 착색물인 표지물의 색, UV의 조사 또는 전압의 인가 등에 의한 발광, 또는 착색반응에 의한 착색 등을 의미한다.
또한, 착색 영역에 있어서는 표지물로부터의 신호의 측정에 있어서는, 임의의 일파장에서 흡광도 또는 흡광도 분포의 적분치를 측정하는 경우 외에, 임의의 폭을 갖는 파장 영역에서 흡광도를 측정하여도 좋고, 그의 경우에는 흡광도를 특성의 파장 영역에서 적분하고, 정량분석하는 것도 가능하다.
이상과 같이, 본 실시형태 1에 따른 면역 크로마토그래피 시험편, 및 크로마토그래프 분석 방법에 따르면, 면역 크로마토그래피 시험편(10)상의 착색 영역에 있어서 표지물로부터의 신호를 예를 들면 580 nm 이상의 임의의 파장에서 측정함으로써, 유색성분, 특히 혈액중의 혈색소를 함유하는 시료의 분석에 있어서, 혈액의 흡수파장인 200 내지 580 nm 이외의 파장에서 착색도를 측정하게 된다. 따라서, 액체 시료에 함유된 유색 성분, 특히 혈색소에 의한 백그라운드의 영향을 받지 않는 착색도의 정성적, 또는 정량적 측정을 수행할 수 있고, 측정 오차를 저감할 수 있고, 더욱 고감도로, 더욱 고성능의 면역 크로마토그래피에 의한 정성 또는 정량 분석을 실현할 수 있는 효과가 있다. 또한, 사용하는 표지시약에 의해서는, 유색 시료의 육안에 의한 크로마토그래피 정성 분석도 가능해진다.
또한, 본 실시형태 1에는, 측정 형식이 표지물 복합체와 분석 대상물과의 결합반응과, 그의 반응체와 고정화물의 결합반응으로 이루어진 샌드위치 반응을 예로 설명하였지만, 분석 대상물과 표지물 복합체가 경쟁적으로 고정화물과 반응하는 경합반응으로도 측정할 수 있다.
또한, 본 실시형태 1에서는, 시료가 전혈의 경우에는, 표지물로부터의 신호를 580 nm 이상의 임의의 파장으로 측정하였지만, 바람직하게는 580 nm 내지 700 nm의 임의의 파장에서 측정할 수 있다.
또한, 본 실시형태 1의 크로마토그래프 분석방법에서는, 면역 크로마토그래피 시험편(10)의 착색도를 측정하는 검출계기로서, 예를 들면 반사형 분광광도계를 사용할 수 있고, 본 실시형태 1과 동일한 효과에 덧붙여, 반응층(4)을 지지하는 반응층 담체 지지체(1)로서 불투명한 재료를 사용할 수 있기 때문에, 재료 선택의 폭이 넓고, 또한 반응층(4)의 이면상태를 우려하지 않고 측정할 수 있는 효과가 있다.
또한, 본 실시형태(1)의 크로마토그래프 분석방법에서는, 면역 크로마토그래피 시험편(10)의 착색도를 측정하는 검출계기로서, 예를 들면 투과형 분광광도계를 사용할 수 있고, 본 실시형태(1)와 동일한 효과에 덧붙여, 반응층(4)의 심부의 착색도를 측정할 수 있기 때문에, 더욱 고감도로, 더욱 고성능의 정성 또는 정량 분석이 가능해지는 효과가 있다. 또한, 표지 시약으로서, 저농도의 것을 사용할 수 있다.
또한, 본 실시형태 1에서는, 유색 성분을 함유하는 시료로서, 특히 혈액을 사용했지만, 이는 일례로서, 혈액 이외의 유색 성분을 함유하는 시료도 분석가능하다. 예를 들면, 뇨, 변잠혈(便潛血), 식품의 분쇄액 등을 들 수 있다. 이러한 경우, 분석할 시료, 및 분석대상물과 함께, 표지시약, 및 특이적 단백질을 선택할 필요가 있다. 즉, 착색반응에 특이적인 파장에서의 흡수계수가 시료의 동일파장에서의 흡수계수보다 충분히 높은 것이어야 한다. 또한, 검출계기에 의한 착색도의 측정에 있어서는, 착색반응에 특이적인 파장에서 측정하면 좋다. 또한, 상술한 「특이적인 파장」으로서는, 유색 시료가 갖는 최대 파장영역을 제거하고, 임의의 일파장, 또는 임의의 폭을 가진 광범위한 파장 영역을 의미한다. 또한, 상술한 「충분히 높다」란, 착색반응에 의한 표지물로부터의 신호가, 정성 또는 정량분석에 대하여 신뢰할 수 있는 결과가 수득되는 정도로 높음을 의미한다.
실시형태 2
이하, 본 발명의 실시형태 2에 의한 면역 크로마토그래피 시험편, 및 크로마토그래프 분석방법에 대해서, 도면을 참조하면서 설명한다.
도 2는, 실시형태 2에 의한 면역 크로마토그래피 시험편(10)을 나타내는 도이다.
도 2에 있어서, 면역 크로마토그래피 시험편(10)은, 반응층 담체 지지체(1)와, 시료 첨가부(2)와, 표지물 보호부위(3)와, 반응층(4)과 특이적 단백 고정화부(5)와, 흡수부(6)와, 세포 성분 파괴물질 유지부위(7)를 구비한다.
반응층 담체 지지체(1)는, 액체 불투과성의 플라스틱 등으로 이루어지고, 크로마토그래피 재료를 지지한다. 시료 첨가부(2)는, 흡수성이 큰 부직포 등으로 이루어지고, 액체 시료가 첨가 또는 도포된다. 표지물 유지 부위(3)는, 부직포 등에 용해가능하도록 표지 시약을 유지한다. 반응층(4)은, 니트로셀룰로즈 등으로 이루어진다. 특이적 단백 고정화부(5)는, 반응층(4)의 영역상에, 반응형식에 따라, 항체 또는 항원과 같은 분석 대상물에 대하여 특이적으로 결합반응하는 특이적 단백질을 고정화한다. 흡수부(6)는, 액체 시료를 최종적으로 흡수한다. 세포 성분 파괴물질 보유 부위(7)는, 세포성분을 파괴하는 물질을 보유한다. 이상, 시료 첨가부(2), 표지물 보유 부위(3), 반응층(4), 특이적 단백 고정화부(5), 흡수부(6), 및세포성분 파괴물질 유지 부위(7)는, 반응층 담체 지지체(1)의 상부에 형성되어 있다. 표지시약, 및 특이적 단백질, 및 세포성분 파괴물질은, 분석할 시료, 및 분석 대상물에 따라 적절한 것을 선택할 필요가 있다.
또한, 표지물이 생산하는 물질로는, 예를 들면 표지물이 특이적 단백 고정화부(5)에 생산하는, 발광이 가능한 물질이고, 반응종료 후의 표지물로는, 예를 들면 착색반응에 의해 착색한 후의 표지물이고, 표지물에 의한 반응물로는, 예를 들면 표지물이 효소인 경우에, 그의 표지물이 고정화된 특이적 단백 고정화부(5)에 기질을 가하는 등에 의해 착색한 후의 물질이다. 그의 표지물 보유 부위(3)에 유지된 표지시약으로서는, 염료 졸, 수용성 색소, 금 콜로이드 등의 금속 졸, 셀레늄 또는 탄소 등의 비금속 졸, 페라이트 등의 산화금속 입자, 라텍스 등의 착색입자, 또는 효소 등, 또는 이들과 분석대상물과 특이적으로 결합하는 물질과의 복합체를 사용한다.
또한, 세포성분 파괴물질 유지부위(7)에 보유된 세포성분 파괴물질로서는, 염화 나트륨 또는 염화 칼륨 등의 염화물, 트리톤계 또는 트윈계 등의 비극성 계면활성제, 극성 계면활성제 또는 사포닌류 등을 사용한다.
또한, 도 2의 면역 크로마토그래피 시험편(10)의 구조는 일례이고, 세포성분 파괴물질 보유부위(7)를 함유한, 크로마토그래피를 수행하는 구조이면 어느 구조를 사용하여도 좋고, 사용하는 부재도 임의의 담체 또는 시약에 의해 구성되어도 좋다.
또한, 면역 크로마토그래피 시험편(10)으로서는, 니트로셀룰로즈 또는 유리섬유 여과지와 같은, 임의의 다공질성 담체로 구성된 크로마토그래피 재료로 이루어진 시험편이 사용된다.
이어서, 본 실시형태 2에 의한 면역 크로마토그래피 시험편(10), 및 크로마토그래프 분석방법에 대해 설명한다.
도 2에 있어서, 액체시료가 시료첨가부(2)에 첨가되면, 시료 첨가부(2)에 침투하여 세포성분 파괴물질 보유 부위(7)의 영역에 도달하고, 그의 영역에 함유된 세포 성분 파괴물질의 작용에 의해, 액체시료중의 세포 성분이 파괴된다. 이러한 세포 성분의 파괴된 액체 시료가, 표지물 보유 부위(3)에 도달한다. 이어서, 표지물 보유 부위(3)의 영역에 보유된 표지 시약이 액체 시료의 침투에 의해 용해되고, 액체 시료와 함께 반응층(4)으로 침투한다. 반응층(4)의 영역상에는, 특이적 단백질이 고정화된 특이적 단백 고정화부(5)가 있다. 액체 시료가 분석 대상물을 함유하는 경우는, 특이적 단백질이 분석대상물과 표지시약의 복합체에 대하여 항원항체 반응을 일으키고, 특이적 단백 고정화부(5)의 영역에 임의의 착색반응이 발견된다. 액체 시료가 분석대상물을 함유하지 않는 경우는, 항원항체반응은 일어나지 않고, 착색반응도 발견되지 않는다. 최종적으로, 액체 시료는 흡수부(6)에 흡수되고, 반응은 종료한다.
상기 반응 종료후에, 임의의 검출계기를 사용하여, 착색 영역에 있어서 표지물로부터의 신호를 측정한다. 시료가 전혈의 경우는, 예를 들면 580 nm 이상의 임의의 파장에서 측정하는 것이 바람직하다. 이로써, 착색의 유무와, 착색도의 정성적 또는 정량적 분석을 수행할 수 있다. 상기 분석에 의해, 액체 시료가 분석대상물을 함유하는지 여부를 검지할 수 있고, 또한 함유하는 경우에는 그의 분량을 측정할 수 있다. 또한 상술한 「표지물로부터의 신호」로는, 구체적으로는, 이의 자체착색물인 표지물의 색, UV의 조사 또는 전압의 인가 등에 의한 발광, 또는 착색반응에 의한 착색 등을 의미한다.
또한, 착색 영역에 있어서 표지물로부터의 신호의 측정에 있어서는, 임의의 일파장에서 흡광도 또는 흡광도 분포의 적분치를 측정하는 경우 외에, 임의의 폭을 갖는 파장영역에서 흡광도를 측정하여도 좋고, 그의 경우에는 흡광도를 특정의 파장 영역에서 적분하고 정량분석하는 것도 가능하다.
이상과 같이, 본 실시형태 2에 의한 면역 크로마토그래피 시험편, 및 크로마토그래프 분석 방법에 따르면, 면역 크로마토그래피 시험편(10)상의 착색영역에 있어서 표지물로부터의 신호를 예를 들면 580 nm 이상의 임의의 파장에서 측정함으로써, 유색 성분, 특히 혈액중의 혈색소를 함유하는 시료의 분석에 있어서, 혈액의 흡수파장인 200 내지 580 nm 이외의 파장에서 착색도를 측정하게 된다. 따라서, 액체 시료에 함유된 유색 성분, 특히 혈색소에 의한 백그라운드의 영향을 받지 않는 착색도의 정성적, 또는 정량적 측정을 수행할 수 있고, 측정 오차를 저감할 수 있고, 더욱 고감도로 더욱 고성능의 면역 크로마토그래피에 의한 정성 또는 정량분석을 실현할 수 있는 효과가 있다.
또한, 세포성분을 파괴하는 물질을 보유하는 부분을 마련한 것으로, 세포성분을 함유하는 액체 시료의 분석시에, 세포성분이 파괴된 반응층(4)상의 침투가 원활하게 되고, 측정시간이 단축되고, 더욱 정확하게 정량분석할 수 있는 효과가 있다. 또한, 혈액 등, 세포성분을 갖는 시료에 대한 원심분리 등의 전처리가 불필요하게 되기 때문에, 비용의 저하와 작업성의 향상을 실현할 수 있는 효과도 있다.
또한 사용하는 표지시약에 따라서는, 유색시료의 육안에 의한 크로마토그래프 정성분석도 가능하다.
또한, 본 실시양태 2에는, 측정형식이 표지물 복합체와 분석대상물과의 결합반응과, 그의 반응체와 고정화물과의 결합반응으로 이루어진 샌드위치 반응을 예로 설명했지만, 분석대상물과 표지물 복합체가 경쟁적으로 고정화물과 반응하는 경합반응으로도 측정가능하다.
또한, 본 실시형태 2에서는, 시료가 전혈인 경우에, 표지물로부터의 신호를 580 nm 이상의 임의의 파장에서 측정하였지만, 바람직하게는 580 nm로부터 700 nm의 임의의 파장에서 측정을 수행할 수 있다.
또한, 본 실시형태 2의 크로마토그래프 분석방법에서는, 면역 크로마토그래피 시험편(10)의 착색도를 측정하는 검출계기로서, 예를 들면 반사형 분광광도계를 사용하는 것도 가능하고, 본 실시형태 2와 동일한 효과에 덧붙여, 반응층(4)을 지지하는 반응층 담체 지지체(1)로서 불투명한 재료를 사용할 수 있게 되기 때문에, 재료선택의 폭이 넓어지고, 또한 반응층(4)의 이면상태를 우려하지 않고 측정하는 것이 가능하게 되는 효과가 있다.
또한, 본 실시형태 2의 크로마토그래프 분석방법에는, 면역 크로마토그래피 시험편(10)의 착색도를 측정하는 검출계기로서, 예를 들면 투과형 분광 광도계를 사용하는 것도 가능하고, 본 실시형태 2와 동일한 효과에 덧붙여, 반응층(4)의 심부의 착색도를 측정하는 것이 가능하기 때문에, 더욱 고감도로 더욱 고성능의 정성 또는 정량분석이 가능해지는 효과가 있다. 또한, 표지시약으로서, 저농도의 것을 사용할 수 있다.
또한, 본 실시형태 2에서는, 유색성분, 및 세포성분을 함유하는 시료로서, 특히 혈액을 사용했지만, 이들은 일례이고, 혈액 이외의 유색성분, 및 세포성분을 함유하는 시료도 분석가능하다. 예를 들면 체액, 세균을 함유하는 액체, 식품의 파쇄액 등을 들 수 있다. 이 경우, 분석할 시료, 및 분석대상물에 따라, 표지시약, 및 항체를 선택할 필요가 있다. 즉, 착색반응에 특이적인 파장에서의 흡수계수가, 시료의 동일한 파장에서의 흡수계수보다 충분히 높은 것일 필요가 있다. 또한, 검출계기에 의한 착색도의 측정에 있어서는, 착색반응에 특이적인 파장에서 측정하면 좋다. 또한, 상술한 「특이적인 파장」으로서는, 유색시료가 지닌 최대파장영역을 제거하고, 임의의 일파장, 또는 임의의 폭을 갖는 광범위한 파장 영역을 의미한다. 또한, 상술한 「충분히 높은」으로는, 착색반응에 의한 표지물로부터의 신호가 정성 또는 정량분석에 대하여 신뢰할 수 있는 결과가 수득될 정도로 높은 것을 의미한다.
이하의 실시예에 의해, 본 발명을 실시하는 방법을 추가로 상세하게 설명한다. 또한, 본 발명은 이하의 실시예에 결코 제한되는 것이 아니다.
(혈액중 hCG의 정량)
니트로셀룰로즈 막중에 항 hCG-β 항체 고정화 라인, 및 항 hCG-α 항체와 금 콜로이드와의 복합체의 넓은 밴드를 함유하는 면역 크로마토그래피 시험편을 제조하였다. 이러한 시험편을 도 2에 도시한다. 도중, 시험편은, 항체 고정화부(5)와, 그보다 앞에 있는 hCG-α 항체와 금 콜로이드와의 복합체가 함유된 영역인 표지물 보유 부위(3)와, 시료 첨가부(2)를 함유한다. 이들의 시험편은, 다음과 같이 제조하였다.
실시예 1
크로마토그래피 시험편의 제조
인산완충용액으로서 희석하여 농도 조정을 한 항 hCG-β 항체 용액을 준비하였다. 이러한 항체 용액을 용액 토출장치를 사용하여, 니트로셀룰로즈 막상에 도포하였다. 이로써, 니트로셀룰로즈막상에 검출용의 항체고정화 라인이 수득되었다. 이러한 니트로셀룰로즈막을 건조 후, 1% 탈지유를 함유하는 Tris-HCl 완충 용액중에 침적하여 30분간 느리게 진동하였다. 30분 후, Tris-HCl 완충용액조로 막을 이동하고, 10분간 느리게 진동한 후에, 개별적인 Tris-HCl 완충용액조에 추가로 10분간 서서히 진동하고, 막의 세정을 수행하였다. 2회 세정을 수행한 후에, 막을 세정액으로부터 꺼내어 실온에서 건조시켰다.
금 콜로이드는, 0.01% 염화금산의 환류중의 100℃ 용액에 1% 시트레이트 용액을 가함으로써 조제하였다. 환류를 30분간 계속한 후에, 냉각하였다. 0.2M의 탄산칼륨 용액에 의해, pH 9로 조정한 상기 금 콜로이드 용액에, 항 hCG-α항체를 가하여 수분간 교반한 후에, 10% BSA(우혈청 알부민) 용액 pH 9를 최종 1%로 되는양만 가하여 교반함으로써, 항체 금 콜로이드 복합체(표지항체)를 제조하였다. 상기 표지항체 용액을 4℃, 20000G로 50분간 원심분리함으로써, 표지항체를 단리하여 이를 세정완충액(1% BSA· 인산 완충액) 중에 현탁한 후에, 상기 원심분리를 수행하여 표지항체를 세정단리하였다. 이러한 표지항체를 세정완충액에 현탁하여, 0.8㎛의 필터로 여과한 후에 당초의 금 콜로이드 용액량의 10분의 1로 조제하여 4℃에서 저장하였다.
상기 표지항체 용액을 용액 토출장치에 세팅하여, 항 hCG-β항체 고정화 건조막상의 항체 고정화 위치로부터 떨어진 위치에 도포한 후에, 막을 건조시켰다. 이에 따라, 고정화막상에 표지항체 보유부위가 수득되었다.
이와 같이 조제한 표지항체 보유부위를 함유하는 항체고정화막을 반응층 담체 지지체상에 부착하고, 용혈제로서 계면활성제를 함침한 후에 건조시킨 부직포를 시료 첨가부로 하고, 유리 섬유지를 흡수부로 하여, 부가하여 0.5cm 폭의 얇은 조각으로 절단하여 시험편을 제조하였다.
실시예 2
시료의 조제
항응고제로서 헤파린을 가한 사람의 혈액을 헤마토크리트(hematocrit)값 45%로 되도록 제조하였다. 그의 혈액에 기지 농도의 hCG 용액을 가함으로써, 다양한 기지 농도의 hCG 용액을 제조하였다.
실시예 3
흡광도를 측정하는 파장의 검토
시험편상의 시료첨가부에 hCG를 함유하는 혈액을 200㎕ 이상첨가하여, 흡수부 방향으로 전개처리하여 항원항체 반응을 시켜서 항체고정화부에 있어서 착색반응을 행하였다. 이러한 시험편으로의 시료첨가로부터 5분후의 착색상황을 반사형 분광광도계(CS9300; 도진제작소(島津製作所)제)를 사용하여 계측하여, 착색도를 연산처리하였다.
0.100, 1000, 10000U/ℓ의 hCG를 함유하는 혈액(헤마토크리트값 45%)를 시험편에 첨가하여 전개처리하였다. 각 hCG 농도의 혈액에 대한 시험편상의 항체고정화부의 착색상황을 반사형 분광광도계로 측정하였다. 520 nm와 610 nm의 파장에 있어서 흡광도를 계측하여, 미리 작성하여 놓은 hCG 농도와 흡광도와의 관계를 나타내는 검량선에 대입하였다. 그 결과를 도 3에 도시한다. 종래, 예를 들면 1000 U/1의 hCG를 함유하는 혈액의 흡광도를 계측하고, 그의 흡광도를 검량선에 대입하면, hCG 농도는 1000 U/ℓ로 된 것으로 예상되지만, 실제로는 작은 갭이 생긴다. 이러한 갭의 크기에 따라, 그 측정의 정확성을 알 수 있다.
도 3은 크로마토그래피 정량측정에 있어서 흡광도를 520 nm의 파장에서 측정한 경우(a)와, 610nm의 파장에서 측정한 경우(b)의 정량성능을 나타내는 도이다. 횡축은, 시험편에 첨가한 시료의 hCG 농도를 나타낸다. 종축은, 시험편상의 착색 영역에 있어서 표지물로부터의 신호를 검출선에 대입하여 구한 항원농도의 환산값을 나타낸다.
이하, 크로마토그래피 정량측정에 있어서, 580nm 이하의 파장에서 측정한 경우와, 580nm 이상의 파장에서 측정한 경우에 대하여 그의 효과를 설명한다.
도 3에 있어서, 면역 크로마토그래피 시험편에 액체시료를 첨가하고, 5분 후의 착색도의 측정값을 기초로, 분석대상물의 농도를 환산한 결과를 나타낸다. 이때에 사용한 표지시약은, (a), (b) 모두 동일한 항체-금 콜로이드 복합체를 사용한다. 우선, 610 nm에서 측정한 경우(도 3(b))는, CV값(변동계수)이 0 내지 15%인 것에 대해, 520 nm에서 측정한 경우(도 3(a))는, 혈구색소의 영향을 받아, CV값이 35 내지 45%로 큰 편차를 나타내고 정량성능이 나쁜 것이 밝혀졌다.
본 실시예에서는, 금 콜로이드를 표지물로서 사용하여 결과를 설명하였지만, 금 콜로이드는 580 nm 이상의 파장에서 흡수를 하는 입경이 바람직하다. 또한, 그 이외의 표지물에서는, 착색입자 또는 수용성 색소이면, 착색된 색소의 최대 흡수파장. 예를 들면 청색입자 또는 청색 색소이면, 650 nm 주위의 파장에서, 카본블랙이면, 580 nm 이상의 임의의 파장에서 측정을 수행하는 것이 바람직하고, 측정파장은 그의 반응 착색물을 지닌 흡수파장으로부터 유래한다.
본 발명은 항원항체 반응을 이용하여, 액체 시료를 정성 또는 정량분석하기 위한 크로마토그래프 분석을 수행할 때, 표지물 그 자체 또는 표지물이 생산하는 물질이 분석대상물을 함유하는 시료의 흡수파장과 상이한 흡수파장을 갖거나, 또는 동일한 흡수파장이더라도 시료의 흡수계수보다도 충분히 높은 흡수계수를 갖는 파장 영역을 갖게 함으로써, 혈액 등의 유색 시료를 전처리하지 않고 분석할 수 있다.

Claims (20)

  1. 유색 시료에 함유된 분석대상물의 정성 또는 정량분석시에 사용하는 면역 크로마토그래피 시험편에 있어서, 표지물 그 자체 또는 표지물이 생산하는 물질이 분석대상물을 함유하는 시료의 흡수파장과 상이한 흡수파장을 갖거나 또는 동일한 흡수파장이더라도 시료의 흡수계수보다도 충분히 높은 흡수계수를 갖는 파장영역을 갖고 있는 것을 특징으로 하는 면역 크로마토그래피 시험편.
  2. 유색 시료에 함유된 분석대상물의 정성 또는 정량분석시에 사용하는 면역 크로마토그래피 시험편에 있어서, 반응종료 후의 표지물 또는 표지물에 의한 반응물이 분석대상물을 함유하는 시료의 흡수파장과 상이한 흡수파장을 갖거나 또는 동일한 흡수파장이더라도 시료의 흡수계수보다도 충분히 높은 흡수계수를 갖는 파장 영역을 갖고 있는 것을 특징으로 하는 면역 크로마토그래피 시험편.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 시료가 혈액인 경우, 상기 시험편상에 발생한 착색에 특이적인 흡수파장이 580 nm 이상인 것을 특징으로 하는 면역 크로마토그래피 시험편.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항중 어느 한 항에 있어서,
    상기 시료에 함유된 세포성분을 파괴하는 물질을 보유하는 영역을 갖는 것을 특징으로 하는 면역 크로마토그래피 시험편.
  5. 제 4 항에 있어서,
    세포성분을 파괴하는 물질이 무기물, 계면활성제, 또는 사포닌류를 함유하는 것을 특징으로 하는 면역 크로마토그래피 시험편.
  6. 제 5 항에 있어서,
    상기 무기물이 염화물을 함유하는 것을 특징으로 하는 면역 크로마토그래피 시험편.
  7. 제 5 항에 있어서,
    상기 계면활성제가 비극성 계면활성제를 함유하는 것을 특징으로 하는 면역 크로마토그래피 시험편.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항중 어느 한 항에 있어서,
    분광광도계에 의해 착색도를 정성 또는 정량분석하는 것을 특징으로 하는 면역 크로마토그래피 시험편.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항중 어느 한 항에 있어서,
    상기 표지물이 금속졸, 산화금속입자, 비금속졸, 염료졸, 착색입자, 색소, 및 효소로부터 선택된 1개 이상을 함유하는 것을 특징으로 하는 면역 크로마토그래피 시험편.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항중 어느 한 항에 있어서,
    상기 분석대상물이 혈장 단백질, 세균, 바이러스중 하나 이상을 함유하는 것을 특징으로 하는 면역 크로마토그래피 시험편.
  11. 면역 크로마토그래피 시험편을 사용한 크로마토그래프 분석방법에 있어서, 상기 면역 크로마토그래피 시험편에 분석대상물을 함유하는 유색 시료를 첨가하고, 상기 시험편상의 착색도를 상기 착색에 특이적인 흡수파장에서 측정하는 것을 특징으로 하고, 표지물 그 자체 또는 표지물이 생산하는 물질이 상기 분석대상물을 함유하는 유색시료의 흡수파장과 상이한 흡수파장을 갖거나 또는 동일한 흡수파장이더라도 유색시료의 흡수계수보다도 충분히 높은 흡수계수를 갖는 파장영역을 갖는 것을 특징으로 하는 크로마토그래프 분석방법.
  12. 면역 크로마토그래피 시험편을 사용한 크로마토그래프 분석방법에 있어서, 상기 면역 크로마토그래피 시험편에 분석대상물을 함유하는 유색시료를 첨가하고, 상기 시험편상의 착색도를 상기 착색에 특이적인 흡수파장에서 측정하는 것을 특징으로 하고, 반응종료후의 표지물 또는 표지물에 의한 반응물이 상기 분석대상물을 함유하는 시료의 흡수파장과 상이한 흡수파장을 갖거나 또는 동일한 흡수파장이더라도 시료의 흡수계수보다도 충분히 높은 흡수계수를 갖는 파장영역을 갖는 것을 특징으로 하는 크로마토그래프 분석방법.
  13. 제11 항 또는 제 12 항에 있어서,
    상기 시료가 혈액인 경우, 착색영역에 있어서 표지물로부터의 신호를 580 nm 이상의 임의의 파장에서 측정함으로써, 분석대상물을 정성 또는 정량분석하는 것을 특징으로 하는 크로마토그래프 분석방법.
  14. 제 11 항 내지 제 13 항중 어느 한 항에 있어서,
    상기 면역 크로마토그래피 시험편이 시료중의 세포성분을 파괴하는 물질이 보유된 영역을 함유하는 것을 특징으로 하는 크로마토그래프 분석방법.
  15. 제 14 항에 있어서,
    세포성분을 파괴하는 물질이 무기물, 계면활성제 또는 사포닌류를 함유하는 것을 특징으로 하는 크로마토그래프 분석방법.
  16. 제 15 항에 있어서,
    상기 무기물이 염화물을 함유하는 것을 특징으로 하는 크로마토그래프 분석방법.
  17. 제 15 항에 있어서,
    상기 계면활성제가 비극성 계면활성제를 함유하는 것을 특징으로 하는 크로마토그래프 분석방법.
  18. 제 11 항 내지 제 17 항중 어느 한 항에 있어서,
    분광광도계에 의해 착색도를 정성 또는 정량분석하는 것을 특징으로 하는 크로마토그래프 분석방법.
  19. 제 11 항 내지 제 18 항중 어느 한 항에 있어서,
    상기 표지물이 금속졸, 산화금속 입자, 비금속졸, 염료졸, 착색입자, 색소 및 효소로부터 선택된 하나 이상을 함유하는 것을 특징으로 하는 크로마토그래프 분석방법.
  20. 제 11 항 내지 제 19 항중 어느 한 항에 있어서,
    상기 분석대상물이 혈장 단백질, 세균, 바이러스중 하나 이상을 함유하는 것을 특징으로 하는 크로마토그래프 분석방법.
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