KR20010075639A - 리포솜-엔트랩된 토포이소머라제 억제제 - Google Patents

리포솜-엔트랩된 토포이소머라제 억제제 Download PDF

Info

Publication number
KR20010075639A
KR20010075639A KR1020017004803A KR20017004803A KR20010075639A KR 20010075639 A KR20010075639 A KR 20010075639A KR 1020017004803 A KR1020017004803 A KR 1020017004803A KR 20017004803 A KR20017004803 A KR 20017004803A KR 20010075639 A KR20010075639 A KR 20010075639A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
liposome
liposomes
camptothecin
entrapped
topoisomerase
Prior art date
Application number
KR1020017004803A
Other languages
English (en)
Other versions
KR100679906B1 (ko
Inventor
슬레이터제임스로이드
콜베른게일티
워킹피터케이
Original Assignee
스톤 스티븐 에프.
알자 코포레이션
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22301756&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=KR20010075639(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 스톤 스티븐 에프., 알자 코포레이션 filed Critical 스톤 스티븐 에프.
Publication of KR20010075639A publication Critical patent/KR20010075639A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100679906B1 publication Critical patent/KR100679906B1/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/473—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. acridines, phenanthridines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
    • A61K9/1278—Post-loading, e.g. by ion or pH gradient

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

토포이소머라제 억제제 Ⅰ 또는 토포이소머라제 Ⅰ/Ⅱ 억제제의 치료적 효과 투여량을 투여하기 위한 조성물을 기재하였다. 본 조성물은 수성 리포솜 구획을 규정하는 내부 표면 및 외부 표면을 갖는 리포솜을 포함하고, 소포-형성 지질 및 친수성 중합체로 유도체화된 소포-형성 지질로 구성되어 리포솜의 내부 및 외부 표면 모두에 친수성 중합체 사슬의 코팅을 형성한다. 지질 1 μmole 당 약 0.10 μmole 이상의 농도로 토포이소머라제 억제제가 리포솜에 엔트랩된다.

Description

리포솜-엔트랩된 토포이소머라제 억제제{LIPOSOME-ENTRAPPED TOPOISOMERASE INHIBITORS}
미국에서 암은 연간 500,000 명 이상의 사망자를 초래하는, 심장 질환 다음의 주요 사망 원인이다 [Katzung, B., "Basic and Clinical Pharmacology", 7 판, Appleton & Lange, Stamford CT, 1998, p. 882]. 현재의 치료 방법을 사용하여, 환자의 1/3 이 수술 또는 방사선 요법과 같은 국부 처치로 치료되며, 이는 치료시까지 종양이 전이되지 않은 경우 매우 효과적이다. 조기 진단은 그러한 국부 처치를 거쳐 치료할 수 있는 환자를 증가시켰다. 그러나, 많은 경우에 있어서, 초기 마이크로전이가 신생물 종양의 특징적인 특색이 되는데, 이는 효과적인 암 관리를 위하여 종종 국부 처치법과 병행하여 화학요법과 같은 전신성 접근이 요구될 수 있음을 가리킨다.
암의 화학치료는 진단시까지 전체적으로 또는 미세하게 퍼진 특정 파종성 신생물 종양에서 치유력이 있을 수 있다. 이는 고환암, 산재성 대세포 림프종, 호자킨병 및 융모막암종 뿐 아니라 소아 종양, 예를 들어 급성 림프모세포성 백혈병을 포함한다. 파종성 암의 다른 형태에 대해서는, 화학요법이 치유성 치료보다는 완화를 제공하게 된다. 효과적인 완화성 치료는 암의 징후 및 증상의 일시적인 제거 및 유익한 삶의 연장을 가져온다. 암 화학치료의 진보는 최근 신생물의 화학적 제어가 다수의 암에 대하여 가능하다는 증거를 제공하였다.
암 치료에 사용되는 약물의 한 범주는 토포이소머라제 억제제이다. 상기 화합물은 DNA 의 복제, 복구, 유전자 재조합 및 전사에서 역할을 하는 토포이소머라제 효소의 활성을 억제한다. 토포이소머라제 억제제의 한 예로는 DNA 복제 및 RNA 전사에 참여하는 효소인 토포이소머라제 Ⅰ 의 활성을 방해하는 천연 화합물인 캄프토테신 (camptothecin) 이다. 캄프토테신 및 캄프토테신 유사체인 토포테칸 (topotecan) 및 이리노테칸 (irinotecan) 이 임상적인 용도로 인정된다.
캄프토테신 및 그의 유사체는 토포이소머라제 Ⅰ 의 분해/재결합 작용을 방해함으로써 암 화학요법에 효과적이다. 상기 화합물들은 토포이소머라제 반응의 분해/재결합 사이클의 재결합 단계를 방지하는 가역성 효소-캄프토테신-DNA 3 차 착체를 형성 및 안정화시킨다.
캄프토테신이 갖는 한가지 문제점은 약물의 전달의 장애가 되는, 그의 수 불용성이다. 수많은 캄프토테신 유사체가 상기 화합물의 수 용해성을 개선하기 위하여 제조되어 왔다. 캄프토테신 및 그의 유사체들의 또 다른 문제점은 상기 화합물들이 수성 환경에 민감하여 α-히드록시 락톤 고리에서 가수분해된다는 점이다. 락톤 고리가, 토포이소머라제 Ⅰ 에 대하여 활성을 거의 나타내지 않는 형태인, 약물의 카르복실레이트 형태로 열린다.
캄프토테신 및 그의 유사체들의 안정성을 개선하기 위한 다양한 접근이 개시되어 있다. 하나의 접근은 리포솜에 화합물을 엔트랩하는 것이다.
Burke (미국 특허 제 5,552,156 호) 는 지질 이중층에 화합물을 침투시키거나 또는 삽입시킬 수 있는 지질 이중막을 갖는 리포솜에 화합물을 엔트랩함으로써 캄프토테신 및 그의 유사체들의 불안정성을 극복하려고 의도되는 리포솜 조성물을 개시한다. 이중막에 화합물을 삽입시켜서, 리포솜 중심의 수성 환경으로부터 제거하여 가수분해로부터 보호한다.
상기 접근방식의 한가지 문제점은 리포솜이 세망내피계 (RES) 에 의하여 혈류로부터 빠르게 제거되어 종양 부위에서의 운반, 바람직하게는 축적을 방해한다는 점이다.
Subramanian 및 Muller [Oncology Research, 7(9): 461-469 (1995)] 는 토포테칸의 리포솜 제형물을 개시하고, 리포솜-엔트랩된 형태에서는, 토포테칸이 락톤 고리의 가수분해에 의한 불활성화로부터 안정화된다고 보고한다. 그러나, 생체외의 리포솜-엔트랩된 약물의 생물학적 활성은 유리 약물 활성의 단지 60 % 에 지나지 않는다.
Lundberg [Anti-Cancer Drug Design, 13:453 (1998)] 는 락톤 고리의 안정화를 위하여 이중층에 삽입되고 리포솜에 엔트랩된 캄프토테신 유사체의, 두 개의 친유성 올레산 에스테르 유도체를 개시한다. Daoud [Anti-Cancer Drug, 6:83-93 (1995)] 는 약물이 또한 지질 이중층에 삽입되는, 캄프토테신을 포함하는 리포솜 조성물을 개시한다. 상기 두 참고문헌에서 리포솜은 통상적으로, 안정화를 위하여 약물을 리포솜에 수동적으로 엔트랩하여 지질 이중막에서 약물을 격리시키도록 제조된다. 상기 제조 방법을 사용하여 임상 효능상 리포솜에서의 충분한 약물 로딩을 성취하기는 어렵다.
따라서, (ⅰ) 토포이소머라제 억제제, 예를 들어 캄프토테신 및 그의 유사체를 포함하고; (ⅱ) 연장된 기간 동안 혈류에 잔류하고; (ⅲ) 항종양 활성을 유지하고; (ⅳ) 임상적 타당성을 갖고 약물이 충분히 로딩되는 것을 포함하는 리포솜 제형물에 대한 필요성이 아직 당업계에 있다.
본 발명의 요약
따라서, 본 발명의 목적은 개선된 암 치료를 위한 토포이소머라제 억제제 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 항종양 치료를 위한 토포이소머라제 억제제 투여용 리포솜 조성물을 제공하는 것이다.
한 측면에서, 본 발명은 친수성 중합체로 유도체화된 소포-형성 지질 약 1 내지 20 mole% 및 소포-형성 지질로 구성된 리포솜을 포함하는, 환자의 종양 치료용 조성물을 포함한다. 리포솜은 리포솜 이중막의 약 측면 상의 중합체를 분배하는 조건 하에 형성된다. 지질 1 μmole 당 약 0.10 μmole 이상의 약물 농도로 토포이소머라제 Ⅰ 억제제 또는 토포이소머라제 Ⅰ/Ⅱ 억제제가 리포솜에 엔트랩된다.
한 구현예에서, 토포이소머라제 억제제는 캄프토테신 및 캄프토테신 유도체로 구성된 군으로부터 선택되는 토포이소머라제 Ⅰ 억제제이다. 예를 들어, 캄프토테신 유도체는 9-아미노캄프토테신, 7-에틸캄프토테신, 10-히드록시캄프토테신, 9-니트로캄프토테신, 10,11-메틸렌디옥시캄프토테신, 9-아미노-10,11-메틸렌디옥시캄프토테신 또는 9-클로로-10,11-메틸렌디옥시캄프토테신일 수 있다. 다른 구현예에서, 캄프토테신 유도체는 이리노테칸, 토포테칸, (7-(4-메틸피페라지노메틸렌-10,11-에틸렌디옥시-20(S)-캄프토테신, 7-(4-메틸피페라지노메틸렌)-10,11-에틸렌디옥시-20(S)-캄프토테신 또는 7-(2-(N-이소프로필아미노)에틸)-(20S)-캄프토테신이다.
또 다른 구현예에서, 토포이소머라제 억제제는 토포이소머라제 Ⅰ/Ⅱ 억제제, 예를 들어 6-[[2-(디메틸아미노)-에틸]아미노]-3-히드록시-7H-인데노[2,1-c]퀴놀린-7-온 디히드로클로라이드, 아조톡신 또는 3-메톡시-11H-피리도[3',4'-4,5]피롤로[3,2-c]퀴놀린-1,4-디온이다.
리포솜 조성물에 포함된 친수성 중합체는 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐메틸에테르, 폴리메틸옥사졸린, 폴리에틸옥사졸린, 폴리히드록시프로필옥사졸린, 폴리히드록시프로필메타크릴아미드, 폴리메타크릴아미드, 폴리디메틸아크릴아미드, 폴리히드록시프로필메타크릴레이트, 폴리히드록시에틸아크릴레이트, 히드록시메틸셀룰로스, 히드록시에틸셀룰로스, 폴리에틸렌글리콜 및 폴리아스파르트아미드일 수 있다.
바람직한 구현예태에서, 친수성 중합체는 500 내지 5,000 달턴의 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜이다.
또 다른 구현예에서, 리포솜은 또한 37 ℃를 초과하는 상 전이 온도를 갖는소포-형성 지질을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 소포-형성 지질은 수소화 콩 포스파티딜콜린, 디스테아로일 포스파티딜콜린 또는 스핑고미엘린이다. 한 바람직한 리포솜 조성물은 20 내지 94 mole% 의 수소화 콩 포스파티딜콜린, 폴리에틸렌글리콜로 유도체화된 1 내지 20 mole% 의 디스테아로일 포스파티딜콜린 및 5 내지 60 mole% 의 콜레스테롤로 구성되어 있다.
또 다른 바람직한 조성물은 30 내지 65 mole% 의 수소화 콩 포스파티딜콜린, 폴리에틸렌글리콜로 유도체화된 5 내지 20 mole% 의 디스테아로일 포스파티딜콜린 및 30 내지 50 mole% 의 콜레스테롤이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 리포솜 안의 약물을 보유하는데 효과적인 내부/외부 이온 구배를 갖고 소포-형성 지질로 구성된 리포솜을 포함하는, 토포이소머라제 Ⅰ 억제제 또는 토포이소머라제 Ⅰ/Ⅱ 억제제 투여용 조성물을 포함한다. 지질 1 μmole 당 약 0.20 μmole 이상의 약물 농도로 토포이소머라제 Ⅰ 억제제 또는 토포이소머라제 Ⅰ/Ⅱ 억제제가 리포솜에 엔트랩된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 친수성 중합체 사슬로 유도체화된 소포-형성 지질 1 내지 20 mole% 를 포함하는 소포-형성 지질로 구성된 리포솜을 제조하는 것을 포함하는 환자의 종양을 치료하는 방법을 포함하고, 리포솜은 리포솜의 이중막의 양 측면 상에 중합체를 분포시키는 조건 하에 형성된다. 리포솜은 지질 1 μmole 당 약 0.10 mole 이상의 농도로 리포솜에 엔트랩된 토포이소머라제 Ⅰ 억제제 또는 토포이소머라제 Ⅰ/Ⅱ 억제제를 포함하고, 리포솜은 특정 농도에서 리포솜안에 토포이소머라제 Ⅰ 억제제 또는 토포이소머라제 Ⅰ/Ⅱ 억제제를 보유하기에 충분한 내부/외부 이온 구배를 갖는다. 그 후 리포솜을 환자에게 투여한다.
이러한 측면의 한 구현예에서, 방법은 또한 예를 들어 황산암모늄 구배를 통하여 원격 로딩함으로써 리포솜에 토포이소머라제 Ⅰ 억제제 또는 토포이소머라제 Ⅰ/Ⅱ 억제제를 엔트랩하는 것을 포함한다.
본 발명의 상기 및 다른 목적 및 특성은 본 발명의 하기 상세한 설명이 그에 수반하는 도면과 함께 이해될 때 더욱 완전하게 인식될 것이다.
본 발명은 엔트랩된 토포이소머라제 억제제를 갖는 리포솜 조성물에 관한 것이다.
도 1A 는 약물의 유리 형태와 비교하여, 시간의 함수로서 주입된 투여량의 백분율로서 취해지는, 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 (단색 원) 의 혈액 순환 수명 플롯이고;
도 1B 는 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 (단색 원) 및 유리 (비-리포솜성) MPE-캄프토테신 (단색 사각형) 을 랫트에게 투여하고 수시간 후, 시간의 함수로서 MPE-캄프토테신의 혈액 농도를 나타내고;
도 2A 는 HT29 결장 종양을 사용하여 종양 접종 후 날짜의 함수로서, 그람으로 마우스의 체중을 나타내는 플롯이다. 24 mg/kg (닫힌 원), 15 mg/kg (닫힌 삼각형) 및 6 mg/kg (닫힌 사각형) 의 투여량으로 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 및 24 mg/kg (열린 원), 15 mg/kg (열린 삼각형) 및 6 mg/kg (열린 사각형) 의 투여량으로 유리 MPE-캄프토테신을 사용한 종양 접종 후 10, 16 및 23 일에 동물을 처리하였다;
도 2B 는 HT29 결장 종양을 사용하여 접종 후 날짜의 함수로서, mm3로 종양 부피를 나타내는 플롯이다. 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신을 24 mg/kg (닫힌 원), 15 mg/kg (닫힌 삼각형) 및 6 mg/kg (닫힌 사각형) 의 투여량으로 및 유리 약물을 24 mg/kg (열린 원), 15 mg/kg (열린 삼각형) 및 6 mg/kg (열린 사각형) 의 투여량으로 사용하여 종양 접종 후 10, 16 및 23 일에 동물을 처리하였다;
도 3A 는 HT29 결장 종양을 사용한 접종 후 날짜의 함수로서, 그람으로 마우스의 체중을 나타내는 플롯이다. 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신을 5 mg/kg (열린 삼각형), 3 mg/kg (열린 거꾸로된 삼각형), 1 mg/kg (열린 다이아몬드), 0.5 mg/kg (열린 원) 및 0.1 mg/kg (열린 사각형) 의 투여량으로 및 유리 MPE-캄프토테신을 20 mg/kg (닫힌 사각형) 의 투여량으로 사용한 종양 접종 후 9, 16 및 23 일에 동물을 처리하였다;
도 3B 는 HT29 결장 종양을 사용한 접종 후 날짜의 함수로서, mm3으로 종양 부피를 나타내는 플롯이다. 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신을 5 mg/kg (열린 삼각형), 3 mg/kg (열린 거꾸로된 삼각형), 1 mg/kg (열린 다이아몬드), 0.5 mg/kg (열린 원) 및 0.1 mg/kg (열린 사각형) 의 투여량으로 및 유리 MPE-캄프토테신을 20 mg/kg (닫힌 사각형) 의 투여량으로 사용한 종양 접종 후 9, 16 및 23 일에 동물을 처리하였다;
도 4A-4B 는 랫트에게 2 mg/kg (도 4A) 및 5 mg/kg (도 4B) 의 투여량으로 리포솜-엔트랩된 토포테칸 (단색 삼각형) 및 유리 (비-리포솜성) 토포테칸 (단색사각형) 을 투여하고 수시간 후, 시간의 함수로서 토포테칸의 혈장 농도를 나타내는 플롯이고;
도 5A 는 HT29 결장 종양을 사용한 접종 후 날짜의 함수로서, 그람으로 마우스의 체중을 나타내는 플롯이다. 리포솜-엔트랩된 토포테칸을 2 mg/kg (다이아몬드), 5 mg/kg (원), 8 mg/kg (열린 사각형) 의 투여량으로; 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신을 4 mg/kg (삼각형); 유리 토포테칸 25 mg/kg (거꾸로된 삼각형) 의 투여량 및 염수 (닫힌 사각형) 를 사용한 종양 접종 후 9, 16 및 23 일에 동물을 처리하였다;
도 5B 는 HT29 결장 종양을 사용한 접종 후 날짜의 함수로서 mm3으로 종양 부피를 나타낸 플롯이다. 리포솜-엔트랩된 토포테칸을 2 mg/kg (다이아몬드), 5 mg/kg (원), 8 mg/kg (열린 사각형) 의 투여량; 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 을 4 mg/kg (삼각형); 유리 토포테칸을 25 mg/kg (거꾸로된 삼각형) 의 투여량 및 염수 (닫힌 사각형) 를 사용한 종양 접종 후 9, 16 및 23 일에 동물을 처리하였다.
도 6 은 리포솜-엔트랩된 CKD602 (단색 원) 및 유리 (비-리포솜성) 토포테칸 (단색 사각형) 을 1 mg/kg 의 투여량으로 랫트에게 투여하고 수시간 후, 시간의 함수로서 CKD602 의 혈장 농도의 플롯이고;
도 7A 는 HT29 결장 종양으로 접종 후 날짜의 함수로서, 그람으로 마우스의 체중을 나타내는 플롯이다. 리포솜-엔트랩된 CKD602 을 4 mg/kg (다이아몬드), 2 mg/kg (원) 및 1 mg/kg (열린 사각형) 의 투여량; 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신을 4 mg/kg (삼각형); 유리 CKD602 을 20 mg/kg (거꾸로된 삼각형) 의 투여량 및 염수 (닫힌 사각형) 를 사용한 종양 접종 후 9, 16 및 23 일에 동물을 처리하였다; 및
도 7B 는 HT29 결장 종양을 사용한 접종 후 날짜의 함수로서, mm3으로 종양 부피를 나타내는 플롯이다. 리포솜-엔트랩된 CKD602 을 4 mg/kg (다이아몬드), 2 mg/kg (원), 1 mg/kg (열린 사각형) 의 투여량; 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신을 4 mg/kg (삼각형); 유리 CKD602 을 20 mg/kg (거꾸로된 삼각형) 의 투여량 및 염수 (닫힌 사각형) 를 사용한 종양 접종 후 9, 16 및 23 일에 동물을 처리하였다.
본 발명의 상세한 설명
Ⅰ.정의
달리 지시되지 않는 한, 용어는 하기 의미를 갖는다:
"유효량" 또는 "유효 투여량" 은 종양 세포 성장과 같은, 존재하고 있는 세포 성장을 감소시키거나 또는 바람직하지 못한 세포 성장을 예방하는 것과 같은, 바람직하지 못한 세포 성장을 억제하기에 충분하거나 필요한 양을 의미한다. 유효량은 당업계의 숙련자에게 공지된 요소, 예를 들어 세포 성장 형태, 투여 양식 및 방법, 환자의 치수, 세포 성장의 심각성 등에 따라 다양할 수 있다. 당업계의 숙련자는 그러한 요소들을 고려하여 유효량에 관하여 결정할 수 있다.
"치료적으로 효과적인 항종양 치료법" 은 크기, 예를 들어 일차 종양 또는 전이 종양의 부피를 유지시키거나 감소시키는데 효과적인 치료법을 의미한다.
"토포이소머라제 Ⅰ 억제제" 는 토포이소머라제 Ⅰ 효소의 활성을 억제하거나 감소시키는 임의의 화합물을 일컫는다.
"토포이소머라제 Ⅰ/Ⅱ 억제제" 는 토포이소머라제 Ⅰ 효소 및 토포이소머라제 Ⅱ 효소 둘 모두의 활성을 억제하거나 감소시키는 임의의 화합물을 일컫는다.
"토포이소머라제 억제제" 는 토포이소머라제 Ⅰ 억제제 또는 토포이소머라제 Ⅰ/Ⅱ 억제제를 일컫는다.
"MPE-캄프토테신" 은 7-(4-메틸-피페라지노-메틸렌)-10,11-에틸렌디옥시-20(S)-캄프토테신을 일컫는다.
"토포테칸" 은 9-디메틸-아미노메틸-10-히드록시캄프토테신을 일컫는다.
"CKD-602" 는 7-(2-(N-이소프로필아미노)에틸)-(20S)-캄프토테신을 일컫는다.
Ⅱ.리포솜 조성물
본 발명은 토포이소머라제 Ⅰ 억제제 또는 토포이소머라제 Ⅰ/Ⅱ 억제제 투여용 리포솜 조성물에 관한 것이다. 본 발명을 지원하여 수행된 연구에서, 3 개의 토포이소머라제 억제제를 리포솜에 엔트랩하고 생체내에서 특성화하였다: 토포테칸, 7-(4-메틸-피페라지노-메틸렌)-10,11-에틸렌디옥시-20(S)-캄프토테신 ("MPE-캄프토테신" 으로서 언급됨) 및 7-(2-(N-이소프로필아미노)에틸)-(20S)-캄프토테신 ("CKD-602" 로서 언급됨). 원격 로딩으로써 리포솜에 약물을 엔트랩하여, 기재하는 바와 같이 리포솜에서 안정하게 보유되는 고 약물 로딩을 성취하였다. 제형물을 사용한 생체내 연구에서, 유리 형태의 토포이소머라제 억제제를 사용한 치료법과 비교하여, 리포솜 조성물이 치료 활성에 있어서 뛰어나게 예상밖으로 개선되었음이 증명되었다. 더욱 상세하게는, 하기에 기재되는 바와 같이, 치료상 항종양 치료를 성취하는데 요구되는 리포솜-엔트랩된 토포이소머라제 Ⅰ 억제제 MPE-캄프토테신의 투여량이 약물을 유리 형태로 투여하는 경우에 요구되는 투여량보다 약 20 배 낮았다.
본 단락에서, 리포솜의 제조 방법을 포함하여 리포솜 조성물을 기재할 것이다.
A.리포솜 성분
본 발명의 조성물에서 사용하기 적절한 리포솜은 주로 소포-형성 지질로 구성된 것을 포함한다. 소포-형성 지질은, 인지질로서 예시되는 바와 같이, 물에서 이중층 소포를 자발적으로 형성할 수 있다. 리포솜은 또한 소수성 부분이 이중막의 소수성 부분인 내부와 접하고, 머리 부분이 이중막의 극성 표면인 외부로 향하게 하는 지질 이중층에 함입된 다른 지질을 포함할 수 있다.
소포-형성 지질은 바람직하게는 두 개의 탄화수소 사슬, 전형적으로는 아실 사슬, 및 극성 또는 비극성인 머리군을 갖는 것이다. 두 개의 탄화수소 사슬이 전형적으로 약 14 내지 22 개의 탄소 원자 길이이며 불포화 정도가 다양한 인지질, 예를 들어 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티드산, 포스파티딜이노시톨, 및 스핑고미엘린을 포함하는 각종 천연 소포-형성 지질 및 합성 소포-형성 지질이 있다. 아실 사슬의 불포화 정도가 다양한 상기 기재된 지질 및 인지질이 공개된 방법에 따라 공업적으로 수득될 수 있거나 제조될 수 있다. 다른 적절한지질은 콜레스테롤과 같은 스테롤 및 당지질을 포함한다.
양이온성 지질은 또한 본 발명의 리포솜에 사용되기 적절하며, 양이온성 지질은 지질 조성물의 소수 성분 또는 주요 또는 단독 성분으로서 포함될 수 있다. 그러한 양이온성 지질은 전형적으로 스테롤, 아실 또는 디아실 사슬과 같은 친유성 부분을 가지며, 지질은 전체적으로 양전하를 띤다. 바람직하게는, 지질의 머리 부분이 양전하이다. 양이온성 지질의 예는 1,2-디올레일록시-3-(트리메틸아미노)프로판(DOTAP); N-[1-(2,3-디테트라데실록시)프로필]-N,N-디메틸-N-히드록시에틸암모늄 브로마이드 (DMRIE); N-[1-(2,3-디올레일록시)프로필]-N,N-디메틸-N-히드록시 에틸암모늄 브로마이드 (DORIE); N-[1-(2,3-디올레일록시)프로필]-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드 (DOTMA); 3[N-(N',N'-디메틸아미노에탄)카르바모일]콜레스테롤 (DC-Chol); 및 디메틸디옥타데실암모늄 (DDAB) 를 포함한다.
양이온성 소포-형성 지질은 또한 중성 지질, 예를 들어 디올레일포스파티딜 에탄올아민 (DOPE) 또는 양쪽친화성 지질, 예를 들어 양이온성 지질로 유도체화된 인지질, 예를 들어 폴리리신 또는 다른 폴리아민 지질일 수 있다. 예를 들어, 중성 지질 (DOPE) 이 폴리리신을 사용하여 유도체화되어 양이온성 지질을 형성할 수 있다.
또 다른 구현예에서, 소포-형성 지질을 선택하여 특정 수준의 유동성 또는 강성률을 성취하고, 혈청에서의 리포솜의 안정성을 제어하고 리포솜에서의 엔트랩된 제제의 방출율을 제어한다.
더욱 강한 지질 이중층, 또는 지질 결정 이중층을 갖는 리포솜은 비교적 강한 지질, 예를 들어 실온을 초과하는 비교적 높은 상 전이 온도, 보다 바람직하게는 체온을 초과하고 80 ℃ 이하인 상 전이 온도를 갖는 지질을 함입하여 성취된다. 강한, 예를 들어 포화된 지질은 지질 이중층의 보다 큰 막 강성률에 기여한다. 다른 지질 성분, 예를 들어 콜레스테롤 또한 지질 이중층 구조의 막 강성률에 기여하는 것으로 공지되어 있다.
한편, 지질 유동성은 비교적 유동적인 지질, 전형적으로는 예를 들어 실온 이하, 더욱 바람직하게는 체온 이하의 비교적 낮은 액체 내지 액체-결정 상 전이 온도를 갖는 것을 함입하여 성취된다.
약 2 ℃ 내지 80 ℃ 의 주상 전이 온도를 갖는 소포-형성 지질은 본 조성물의 일차 리포솜 성분으로 사용하기에 적절하다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 약 37 ℃ 를 초과하는 주상 전이 온도를 갖는 소포-형성 지질이 리포솜의 주요 지질 성분으로서 사용된다. 또 다른 바람직한 구현예에서, 약 37 내지 70 ℃ 의 상 전이 온도를 갖는 지질이 사용된다. 예로서, 지질인 디스테아로일 포스파티딜콜린 (DSPC) 는 55.1 ℃ 의 주상 전이 온도를 갖고 지질인 수소화 콩 포스파티딜콜린 (HSPC) 는 58 ℃ 의 상 전이 온도를 갖는다. 많은 지질의 상 전이 온도가 각종 원, 예를 들어 Avanti Polar Lipid 카탈로그 및 Lipid Thermotropic Phase Transition Database (LIPIDAT, NIST Standard Reference Datagase 34) 에서 일람표화되었다.
리포솜은 또한 친수성 중합체로 유도체화된 소포-형성 지질을 포함한다. 본원에 참고문헌으로서 포함된 미국 특허 제 5,013,556 호 및 WO 98/07409 에서 기재된 바와 같이, 친수성 중합체는 리포솜 지질 이중막의 내부 및 외부 표면 둘 모두에서의 친수성 중합체 사슬의 표면 코팅을 제공한다. 친수성 중합체 사슬의 최외곽 표면 코팅은 생체내 긴 혈액 순환 수명을 갖는 리포솜을 제공하는데 효과적이다. 친수성 중합체 사슬의 내부 코팅이 리포솜의 수성 구획, 즉 지질 이중층 사이 및 중심 코어 구획으로 확장되고, 화합물이 원격 로딩을 통하여 로딩된 후 엔트랩된 화합물과 접촉하게된다. 하기에서 예시되는 바와 같이, 내부 및 외부 리포솜 표면 상에 분배된 친수성 중합체 사슬의 표면 코팅을 갖는 리포솜 제형물은 화합물이 개선된 치료 활성을 위해 리포솜에 유지되는 토포이소머라제 Ⅰ 억제제 또는 토포이소머라제 Ⅰ/Ⅱ 억제제 조성물을 제공한다.
친수성 중합체로 유도체화되기에 적절한 소포-형성 지질은 상기 열거된 임의의 지질, 및 특히 인지질, 예를 들어 디스테아로일 포스파티딜에탄올아민 (DSPE) 을 포함한다.
소포-형성 지질을 사용하여 유도체화되기에 적절한 친수성 중합체는 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐메틸에테르, 폴리메틸옥사졸린, 폴리에틸옥사졸린, 폴리히드록시프로필옥사졸린, 폴리히드록시프로필메타크릴아미드, 폴리메타크릴아미드, 폴리디메틸아크릴아미드, 폴리히드록시프로필메타크릴레이트, 폴리히드록시에틸아크릴레이트, 히드록시메틸셀룰로스, 히드록시에틸셀룰로스, 폴리에틸렌글리콜, 및 폴리아스파르트아미드를 포함한다. 중합체가 동종중합체 또는 블록 또는 불규칙 공중합체로서 사용될 수 있다.
바람직한 친수성 중합체 사슬은 폴리에틸렌글리콜 (PEG), 바람직하게는 500내지 10,000 달턴, 더욱 바람직하게는 500 내지 5,000 달턴, 가장 바람직하게는 1,000 내지 2,000 달턴의 분자량을 갖는 PEG 사슬이다. 메톡시 또는 에톡시-캡핑된 (capped) PEG 유사체는 또한 바람직한 친수성 중합체이며, 각종 중합체 크기, 예를 들어 120 내지 20,000 달턴으로 공업적으로 입수가능하다.
친수성 중합체를 사용하여 유도체화된 소포-형성 지질의 제조는, 예를 들어 미국 특허 제 5,395,619 호에 기재되어 있다. 그러한 유도체화된 지질을 포함하는 리포솜의 제조법은, 전형적으로는 상기 유도체화된 지질의 1 내지 20 mole% 가 리포솜 제형물에 포함된다고 기재하고 있다. 친수성 중합체가 안정하게 지질에 커플링되거나, 또는 코팅된 리포솜이 자극에 반응하거나 혈류에서 순환하면서 중합체 사슬의 코팅을 벗겨내도록 하는 불안정한 결합을 통하여 커플링됨을 인지할 것이다.
B.토포이소머라제 억제제
본 발명의 리포솜은 리포솜에 엔트랩된 토포이소머라제 억제제를 포함한다. 엔트랩되었다는 것은 리포솜의 수성 공간 및 수성 코어에서의 제제의 캡슐화를 포함하는 것으로 의도된다. 어느 정도의 소수성을 갖는 화합물에 대하여, 리포솜의 지질 이중층(들) 의 엔트랩핑이 일어날 수 있다는 것 또한 알 수 있다.
토포이소머라제는 DNA 의 초나선성의 도입 및 이완을 촉매한다. 다양한 특성을 갖는 몇몇 종류의 효소가 DNA 의 복제, 및 DNA 의 복구, 유전적 재조합 및 전사에 중요한 것으로 공지되어 있다. 토포이소머라제 Ⅰ 으로 고안되는 가장 간단한 토포이소머라제는 에너지상 자발적인 과정으로서 초나선성의 DNA 를 이완시킨다. 토포이소머라제 Ⅱ 로서 공지되어 있는 선회효소는 DNA 에 음성 초나선성 비틀림을 에너지-소비성 및 ATP-의존성 도입하는 것을 촉매한다. DNA 복제에 있어서, 토포이소머라제 Ⅰ 및 Ⅱ 는 헬리카아제의 활성에 의한 복제분기점의 앞부분에 도입되는 양성 초나선성의 이완 기능을 갖는다. 또한, 선회효소는 단일 스트랜드 지역이 나타날 수 있는 DNA 부분에 음성 비틀림을 도입한다.
그래서, 토포이소머라제 억제제는 토포이소머라제 활성을 억제하는 화합물이다. 토포이소머라제 Ⅰ 억제제로서 공지된 화합물은 토포이소머라제 Ⅰ 에 대한 활성을 갖고, 토포이소머라제 Ⅱ 억제제는 토포이소머라제 Ⅱ 에 대한 활성을 갖는다. 어떤 화합물들은 토포이소머라제 Ⅰ 및 토포이소머라제 Ⅱ 모두에 대한 활성을 갖고, 토포이소머라제 Ⅰ/Ⅱ 억제제로서 공지되어 있다.
본 발명에서 사용되는 바람직한 토포이소머라제 Ⅰ 억제제는 캄프토테신 및 캄프토테신의 유사체이다. 캄프토테신은 중국에서 자생하는 나무인Camptotheca acuminata의 나무 및 나무껍질로부터 초기에 단리되는 펜타시클릭 알칼로이드이다 [Wall, M.E. 등, J. Am. Chem. Soc.,94:388 (1966)]. 캄프토테신은 불가역성으로 토포이소머라제 Ⅰ 을 억제함으로써 그의 약리학적 효과를 나타낸다. 캄프토테신 및 캄프토테신 유사체 또는 유도체의 합성 방법이 공지되어 있고, 본원에서 전체가 참고문헌으로 포함되어 있는 미국 특허 제 5,244,903 호에 요약 및 설명되어 있다.
캄프토테신의 유사체는 SN-38 ((+)-(4S)-4,11-디에틸-4,9-디히드록시-1H-피라노[3',4':6,7]-인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-3,14(4H,12H)-디온); 9-아미노캄프토테신; 토포테칸(히캄틴; 9-디메틸-아미노메틸-10-히드록시캄프토테신); 이리노테칸 (CPT-11; 7-에틸-10-[4-(1-피페리디노)-1-피페리디노]-카르보닐록시-캄프토테신), 생체내에서 SN-38 로 가수분해됨); 7-에틸캄프토테신 및 그의 유도체 [Sawada, S. 등, Chem. Pharm. Bull.,41(2):310-313 (1993)]; 7-클로로메틸-10,11-메틸렌-디옥시-캄프토테신; 및 그외의 것들 [SN-22, Kunimoto, T. 등, J. Pharmacobiodyn.,10(3): 148-151 (1987)]; N-포르밀아미노-12,13-디히드로-1,11-디히드록시-13-(베타-D-글루코피라노실)-5H-인돌로[2,3-a]피롤로[3,4-c]카르바졸-5,7(6H)-디온 [NB-506, Kanzawa, F 등, Cancer Res.,55(13): 2806-2813 (1995)]; DX-8951f 및 루르토테칸 (GG-211 또는 7-(4-메틸피페라지노-메틸렌)-10,11-에틸렌디옥시-20(S)-캄프토테신) [Rothenberg, M.L., Ann. Oncol.,8(9): 837-855 (1997)] 및 7-(2-(N-이소프로필아미노)에틸)-(20S)-캄프토테신 (CKD602, 종근당, 서울, 한국) 을 포함한다.
토포이소머라제 Ⅰ 및 토포이소머라제 Ⅱ 모두에 대한 활성을 갖는 토포이소머라제 억제제는 6-[[2-(디메틸아미노)-에틸]아미노]-3-히드록시-7H-인데노[2,1-c]퀴놀린-7-온 디히드로클로라이드 [TAS-103, Utsugi, T. 등, Jpn. J. Cancer Res.,88(10): 992-1002 (1997)] 및 3-메톡시-11H-피리도[3',4'-4,5]피롤로[3,2-c]퀴놀린 -1,4-디온 [AzalQD, Riou, J.F. 등, Mol. Pharmacol.,40(5): 699-706 (1991)] 을 포함한다.
본 발명의 한 구현예에 있어서, 투여되는 토포이소머라제 Ⅰ 억제제는 키랄 중심을 갖는 캄프토테신 유사체의 약리학적 활성 거울상이성질체이다. 거울상이성질체는 당업계의 숙련자에게 공지된 기술을 사용하여 라세믹 혼합물로부터 분석될 수 있다.
C.리포솜 조성물의 제조 방법
리포솜이 각종 기술, 예를 들어 [Szoka, F., Jr. 등, Ann. Rev. Biophys. Bioeng.9:467 (1980)] 에 기재된 바에 의해 제조될 수 있고, 본 발명을 지지하여 제조된 리포솜의 특정예가 하기될 것이다. 전형적으로, 리포솜은 다층판 소포 (MLV) 이고, 간단한 지질-막 수화 기술에 의하여 형성될 수 있다. 이러한 과정에서, 친수성 중합체를 사용하여 유도체화된 소포-형성 지질을 포함하는 리포솜-형성 지질들의 혼합물을, 용기에서 증발시킨 적절한 유기 용매에 용해시켜서 건조 박막을 형성한다. 그 후 막을 수성 매질로 커버하여 전형적으로 약 0.1 내지 10 미크론의 크기의 MLV 를 형성시킨다. 중합체-코팅된 리포솜 형성 및 유도체화된 지질의 제조 방법의 예가 본원에 참고문헌으로서 포함되어 있는, 공-소유의 미국 특허 제 5,013,556 호, 제 5,631,018 호 및 제 5,395,619 호 에 기재되어 있다.
선택된 치료제는 (ⅰ) 제제의 수용액으로 지질막을 수화하여 수용해성 화합물을 수동 엔트랩시킴, (ⅱ) 제제를 포함하는 지질막을 수화시켜서 친유성 화합물을 수동 엔트랩시킴, 및 (ⅲ) 원격 로딩이라 칭하는, 내부/외부 리포솜 이온 구배에 대한 이온성 약물을 로딩시키는 것을 포함하는 표준 방법에 의하여 리포솜에 합입시킬 수 있다. 다른 방법들, 예를 들어 역증발상 리포솜 제조 또한 적절하다.
본 발명에서, 리포솜을 제조하는 바람직한 방법은 원격 로딩에 의한 것이다. 본 발명을 지지하여 수행되는 연구에서, 실시예 1 및 당업계에서 기재하는 바와 같이 (미국 특허 제 5,192,549 호), 3 개의 전형적인 토포이소머라제 Ⅰ 억제제를 이온 농도 구배에 대한 원격 로딩에 의하여 예비 형성된 리포솜에 로딩하였다. 원격 로딩 과정에서, 약물을 다른 로딩 방법으로 성취할 수 있는 것보다 더욱 높은 농도 수준으로 리포솜 중심 구획에 축적시켰다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 토포이소머라제 Ⅰ 억제제 또는 토포이소머라제 Ⅰ/Ⅱ 억제제를 지질 1 μmole 당 약 0.10 μmole 이상의 약물, 더욱 바람직하게는 지질 1 μmole 당 약 0.15 μmole 이상의 약물, 가장 바람직하게는 지질 1 μmole 당 약 0.20 μmole 이상의 약물의 농도로 리포솜에 로딩시킨다. 본 발명을 지지하여 제조된 리포솜은 MPE-캄프토테신, 토포테칸 또는 CKD602 를 함유하였다. 실시예 1 에서 설명하듯이, 상기 화합물들을 하기 논의에서와 같이 지질 1 μmole 당 0.20 μmole 약물을 초과하는 약물 농도 수준으로 리포솜에 원격로딩하였다 (실시예 1 의 표를 참조).
원격 로딩에서 사용되는 리포솜 이중층에 대한 이온 구배를 갖는 리포솜이 각종 기술로 제조될 수 있다. 전형적인 방법은 상기된 것과 같고, 리포솜-형성 지질들의 혼합물이 적절한 유기 용매에 용해되고 용기에서 증발되어 박막을 형성한다. 그 후 리포솜 내부 공간에서 수성상을 형성하게 될 용질 종을 포함하는 수성 매질로 막을 커버한다.
리포솜 형성 후, 공지된 방법에 따라, 선택된 범위 안에서 리포솜의 크기 분포를 성취하도록 소포를 크기조절할 수 있다. 리포솜은 바람직하게는 0.04 내지 0.25 μm 의 선택된 크기 범위로 균일하게 크기조절된다. 전형적으로 0.04 내지 0.08 μm 의 범위인 작은 단층판 소포 (SUV) 가 리포솜의 균질화 또는 광범위한 초음파분해로 제조될 수 있다. 약 0.08 내지 0.4 미크론의 선택된 범위의 크기를갖는 균질하게 크기조절된 리포솜이, 예를 들어 폴리카르보네이트 막 또는 0.03 내지 0.5 미크론, 전형적으로는 0.05, 0.08, 0.1 또는 0.2 미크론의 선택된 균일한 기공 크기를 갖는 다른 정의된 기공 크기 막을 통한 압출에 의하여 제조될 수 있다. 막의 기공 크기는 대략, 특히 제제가 동일한 막을 통하여 2 회 이상 압출되는, 막을 통한 압출로 제조되는 리포솜의 가장 큰 크기에 해당한다. 크기 조절은 바람직하게는 본래의 지질-수화 완충액에서 수행하여 리포솜 내부 공간이 초기의 리포솜 공정 단계를 통하여 상기 매질을 유지하도록 한다.
크기 조절 후, 리포솜의 외부 매질을 처리하여 리포솜 막에 대한 이온 구배를 생성하도록 하는데, 이는 전형적으로 내부는 낮고/외부는 높은 농도 구배이다. 이는 예를 들어 (ⅰ) 외부 매질을 희석, (ⅱ) 목적하는 최종 매질에 대한 투석, (ⅲ) 목적하는 매질에 대하여 예를 들어 Sephadex G-50 을 사용한 분자체 크로마토크래피, 또는 (ⅳ) 목적하는 최종 매질에서 펠렛화된 리포솜의 재현탁 및 고속도 원심분리에 의하여 각종 방법으로 행해질 수 있다. 선택되는 외부 매질은 이제부터 고려되는 바와 같이 목적하는 외부 pH 및 구배 형성 메카니즘에 따라 다를 것이다.
이온 구배를 형성하기 위한 가장 간단한 접근에서는, 수화된, 크기 조절된 리포솜이 선택된 내부-매질 pH 를 갖는다. 리포솜 현탁액을 목적하는 최종 pH 에 도달할 때까지 적정하거나 또는 상기와 같이 처리하여 외부 상 완충액과 목적하는 외부 pH 를 갖는 것과 교환한다. 예를 들어, 본래의 매질은 선택된 완충액, 예를 들어 글루타메이트 또는 인산 완충액에서 5.5 의 pH 를 가질 수 있으며, 최종 외부매질은 동일하거나 상이한 완충액에서 8.5 의 pH 를 가질 수 있다. 내부 및 외부 매질은 예를 들어 완충액, 염, 또는 저분자량 용질, 예를 들어 수크로스의 농도를 적절하게 조절함으로써 바람직하게는 대략 동일한 삼투성을 갖도록 선택된다.
또 다른 일반적인 접근에서, 리포솜에 선택된 이온담체를 포함시켜서 구배를 형성한다. 예를 들어, 리포솜 이중층에 발리노미신을 포함하도록 제조된 리포솜을 칼륨 완충액에서 제조하고, 크기 조절 후 나트륨 완충액과 교환하여 칼륨 내부/나트륨 외부 구배를 생성한다. 내부에서 외부 방향으로 차례로 이동하는 칼륨 이온은 리포솜 막에 대한 전체적인 전기적 음성 대전에 응하여 양자를 리포솜으로 이동시키기 때문에, 내부는 낮고/ 외부는 높은 pH 구배를 생성하게 된다 (Deamer 등, 1972).
또 다른 더욱 바람직한 접근에서, 약물 로딩에 사용되는 양자 구배는 예를 들어 미국 특허 제 5,192,549 호에 기재된 바와 같이 리포솜 막에 대한 암모늄 이온 구배를 생성시킴으로써 생성된다. 여기서 리포솜은 적절한 pH, 예를 들어 5.5 내지 7.5 에서 전형적으로는 0.1 내지 0.3 M 암모늄염, 예를 들어 황산암모늄을 포함하는 수성 완충액에서 제조된다. 또한 술페이트화 중합체, 예를 들어 덱스트란 황산암모늄 또는 헤파린 술페이트를 사용하여 구배를 생성시킬 수 있다. 리포솜 형성 및 크기 조절 후, 외부 매질을 암모늄 이온이 결여된 것, 예를 들어 리포솜의 내부 및 외부에 동일한 삼투성을 초래하는, 황산암모늄을 NaCl 또는 슈가로 대체시킨 동일한 완충액과 교환한다.
리포솜 형성 후에는, 리포솜 내부의 암모늄 이온이 암모니아 및 양자와 평형에 있다. 암모니아는 리포솜 이중층을 침투하여 리포솜 내부로부터 벗어날 수 있다. 암모니아가 계속 빠져나오면서 리포솜 안의 평형을 오른쪽으로, 양자를 생성하는 쪽으로 이동시킨다.
토포이소머라제 억제제는 약물을 이온 구배 리포솜의 현탁액에 첨가함으로써 리포솜으로 로딩되고, 현탁액은 외부 매질로부터 리포솜으로 화합물을 통과시키는데 효과적인 조건 하에 처리된다. 약물 로딩에 적절한 인큐베이션 조건은 (ⅰ) 대전되지 않은 형태의 유도체화된 화합물을 리포솜으로 확산시키고, (ⅱ) 바람직하게는 높은 약물 로딩 농도, 예를 들어 5 내지 500 mM, 더욱 바람직하게는 20 내지 200 mM, 가장 바람직하게는 50 내지 300 mM 의 캡슐화된 약물로 유도하는 것이다.
로딩은 바람직하게는 리포솜 지질의 상 전이 온도를 초과하는 온도에서 수행된다. 따라서, 주로 포화 인지질로 형성된 리포솜에 대해서는, 로딩 온도가 60 ℃ 이상일 수 있다. 로딩 시간은 전형적으로 15 내지 120 분이고, 리포솜 이중막에 대한 약물의 투과성, 온도, 및 리포솜 지질 및 약물의 상대 농도에 따라 다르다.
리포솜의 농도, 첨가되는 화합물의 외부 농도, 및 이온 구배를 적절하게 선택하여, 주로 모든 화합물을 리포솜에 로딩할 수 있다. 예를 들어, 3 단위의 pH 구배 (또는 암모늄 이온 구배를 사용하는 상기 구배의 전위) 를 사용하여, 약물의 최종 내부:외부 농도가 약 1000:1 이 되도록 한다. 계산된 내부 리포솜 부피, 및 로딩된 약물의 최대 농도를 알면, 리포솜에 실질적으로 완전히 로딩하게 되는 외부 매질의 약물의 양을 선택할 수 있다.
선택적으로, 약물 로딩이 유리 약물의 외부 매질을 실질적으로 고갈시킬만큼 효과적이지 않을 경우, 리포솜 현탁액을 처리한 후, 약물을 로딩하여 비캡슐화된 약물을 제거할 수 있다. 유리 약물을 예를 들어 분자체 크로마토그래피, 투석, 또는 원심분리로 제거할 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 토포이소머라제 억제제를, 화합물 보유를 증진시키고 토포이소머라제 억제제와의 착체 형성에 효과적인 트래핑제 (trapping agent) 를 리포솜 내부에 포함하는 예비형성된 리포솜에 로딩한다. 바람직한 구현예에서, 트래핑제는 다음이온성 중합체, 예를 들어 바람직하게는 유사한 화학 구조의 반복 단위로 이루어져 있고 이온성 기, 즉 전해질적 분해하여 이온 전하, 바람직하게는 음이온 전하를 형성할 수 있는 화학적 관능기를 갖는 분자이다. 400 내지 2,000,000 달턴의 광범위한 분자량을 갖는 중합체가 적절하다.
지질 소포 형성 동안 다음이온성 중합체를 리포솜에 엔트랩한다. 약물을 예비 형성된 리포솜에 로딩시, 중합체는 리포솜 안에 약물을 트랩하거나 보유하는 역할을 한다. 본원에 기재된 연구에서, 덱스트란 술페이트는 전형적인 다음이온성 중합체로서 사용된다. 덱스트란 술페이트는 1 개의 글루코소일 잔기 당 대략 2.3 개의 술페이트기를 갖는 무수글루코스의 중합체이다. 덱스트란의 잔기는 약 95 % 의 알파-D-(1-6) 결합 및 잔류하는 (1-3) 결합으로 구성되어 있다. 중합체는 5,000 내지 500,000 달턴의 분자량으로 용이하게 입수가능하다. 그러나, 술페이트화, 술포네이트화, 카르복실레이트화 또는 포스페이트화 친수성 중합체를 포함하는 다른 중합체가 적절하다. 예를 들어, 술페이트화 프로테오글리칸, 예를 들어 술페이트화 헤파린, 술페이트화 다당류, 예를 들어 술페이트화 셀룰로스 또는 셀룰로스 유도체, 카라게닌, 무친, 술페이트화 폴리펩티드, 예를 들어 술페이트화 아민기를 갖는 폴리리신, 술포네이트-유도체화된 당류 또는 펩티드 하위 단위를 갖는 글리코펩티드, 및 히알루론산이 있다. 콘드로이틴 술페이트 A, B 및 C, 케라틴 술페이트, 데르마탄 술페이트 또한 언급할 수 있다. 또한 중합체는 중성 중합체여서 변형되어 음이온성 관능기를 포함할 수 있다. 예를 들어, 아밀로스, 펙틴, 아밀로펙틴, 셀룰로스, 및 덱스트란이 변형되어 음이온성 하위단위를 포함할 수 있다. 술포기를 포함하는 중합체, 예를 들어 폴리비닐술페이트, 폴리비닐술포네이트, 폴리스티렌술포네이트 및 술페이트화 로신 고무 또한 적절하다.
상기 트래핑제를 포함하는 리포솜의 제조는 실시예 4 와 관련하여 기재되어 있다. 상기 실시예에서, 에탄올에 첫번째로 용해되는 리포솜 지질을 덱스트란 술페이트 암모늄염에 첨가하여 다음이온성 중합체 덱스트란 술페이트를 리포솜에 엔트랩시키고 혼합하여 리포솜 안에 엔트랩된 덱스트란 술페이트 암모늄염을 갖는 리포솜을 형성한다. 외부 매질을 교환하여 약물의 원격 로딩용 리포솜에 대한 암모늄 이온 구배를 성립시켰다.
Ⅲ.조성물의 생체내 투여
실시예 1 에 기재된 바와 같이 본 발명을 지지하여 리포솜을 제조하였다. 본원에서 "MPE-캄프토테신" 이라 언급되는 토포이소머라제 Ⅰ 억제제 (7-(4-메틸피페라지노)-메틸렌)-10,11-에틸렌디옥시-20(S)-캄프토테신); 토포테칸; 및 본원에서 "CKD-602" 로서 언급되는 7-(2-(N-이소프로필아미노)에틸)-(20S)-캄프토테신을 암모늄 술페이트 이온 농도 구배 하에 리포솜에 로딩하였다. 리포솜은 수소화 콩 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 디스테아로일 포스파티딜에탄올아민으로 유도체화되는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG-DSPE) 을 55.4:39:5.6 의 몰비로 구성하였다. 실시예 1 의 표는 제조된 리포솜 제형물에 대하여 약물 및 지질 비를 요약한다. 지질 1 μmole 당 0.9 μℓ 의 압출된 리포솜 포착 부피를 기준으로, 3 개의 화합물에 대한 계산된 리포솜의 약물 농도가 MPE-캄프토테신에 대하여 284 mM, 토포테칸에 대하여 264 mM 및 CKD-602 에 대하여 298 mM 이었다. 지질 1 μmole 당 1.5 μℓ 의 압출된 리포솜 포착 부피를 기준으로, MPE-캄프토테신에 대하여 189 mM, 토포테칸에 대하여 174 mM 및 CKD-192 에 대하여 198 이다. 이제 각각의 약물을 사용하여 수행된 생체내 연구를 기재할 것이다.
1.MPE-캄프토테신의 생체내 투여
긴-순환, MPE-캄프토테신을 포함하는 PEG-코팅된 리포솜을 랫트에게 투여하여 리포솜-엔트랩된 형태의 약물의 혈액 순환 수명을 측정하였다. 리포솜-엔트랩된 약물 및 유리 약물의 약동학적 프로필을 시간 함수로서 주입된 투여량의 % 로서 도 1 A 에 나타내었다. 보는 바와 같이, 리포솜-엔트랩된 형태 (단색 원) 의 토포이소머라제 Ⅰ 억제제의 혈액 순환 시간이 유리 형태의 약물 (단색 사각형) 보다 현저하게 길었다. MPE-캄프토테신에 대하여, 리포솜-엔트랩된 약물의 혈액 순환 반수명이 유리 약물의 약 50 분과 비교하여, 14 시간이었다. 랫트에서의 리포솜-엔트랩된 약물의 혈액 청소율이 유리 약물에 비해 35 배 낮고 커브 아래 면적이 약 1250 배 높았다. 분석 결과는 주로 모든 약물이 혈류에서의 리포솜에 엔트랩되어잔류한다는 것을 가리킨다.
도 1B 는 리포솜 제형물 (단색 원) 및 유리 약물을 랫트에게 투여 후 전체 혈액에서의 MPE-캄프토테신의 농도를 나타낸다. 더욱 긴 순환 수명은 혈액에서의 약물의 더욱 높은 농도를 야기한다.
MPE-캄프토테신 리포솜 제형물의 항-종양 효능을, 동형접합성 누드 마우스에 HT29 근원의 결장의 인간 종양 세포를 접종시킨 이종이식편 종양 모델에서 측정하였다. 놀랍게도, 상기 독성 및 항종양 효능 연구는 리포솜성 MPE-캄프토테신이 등량의 투여량의 유리 형태 약물보다 현저하게 더욱 독성임을 나타내었다. 이제 이러한 연구 및 결과를 기재할 것이다.
실시예 1 에 기재된 바와 같이 엔트랩된 MPE-캄프토테신을 포함하도록 리포솜을 제조하였다. HT-29 결장 이종이식편을 갖는 누드 마우스에게 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신을 24 mg/kg, 15 mg/kg 및 6 mg/kg 의 투여량 또는 유리 MPE-캄프토테신을 동일한 투여량으로 처리하였다. 종양 접종 후 10 일에 처리 시작하여 10, 16 및 23 일에 투여하였다. 각 동물의 종양 부피를 처리 동안 및 후에 실시예 2 에 기재된 바와 같이 평가하였다.
동물에게 리포솜 엔트랩된 MPE-캄프토테신을 24 mg/kg (닫힌 원), 15 mg/kg (닫힌 삼각형) 및 6 mg/kg (닫힌 사각형) 의 투여량으로, 그리고 MPE-캄프토테신을 24 mg/kg (열린 원), 15 mg/kg (열린 삼각형) 및 6 mg/kg (열린 사각형) 으 투여량으로 처리하여, 각 테스트 동물의 체중 및 각 동물의 종양 부피를 도 2A 및 2B 에 나타내었다.
리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신으로 처리한 동물과 관련하여, 15 mg/kg 및 24 mg/kg 의 투여량으로 투여된 모든 동물이 약물-관계된 독성으로 인하여 2 회의 투여 후 죽었고, 대부분은 첫번째 투여 후 5 일에 죽었다. 6 mg/kg 의 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신으로 처리한 모든 동물이 23 일에 3 번째 투여시까지 생존하였고, 그 후 10 마리 중 5 마리가 수일 내에 죽었다. 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신의 독성은 도 2A 에서 보는 바와 같이, 더 많은 체중 손실로 반영되었다.
반대로, 유리 형태의 약물로 처리된 모든 동물이 본 연구에서 생존하였는데, 단, 24 mg/kg 의 투여군에서 1 마리 동물이 23 일에 3 번째 투여 후 수일안에 죽었다.
처리 투여량 mg/kg 테스트 동물 수 생존 동물 수
투여 1 후(9 일) 투여 2 후(16 일) 투여 3 후(23 일)
염수 na 20 20 20 20
유리 MPE-캄프토테신 24 10 10 10 9
유리 MPE-캄프토테신 15 10 10 10 10
유리 MPE-캄프토테신 6 10 10 10 10
리포솜-엔트랩됨 24 10 0 0 0
리포솜-엔트랩됨 15 10 0 0 0
리포솜-엔트랩됨 6 10 10 10 5
제형물의 항종양 활성과 관련하여, 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신이 그의 높은 독성에도 불구하고, 종양 성장을 억제시키는데 있어서 유리 형태의 약물보다 보다 효과적이었다. 이는 도 2B 에서 알 수 있는데, 6 mg/kg 투여량의 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신이 유리 MPE-캄프토테신의 가장 높은 투여량 수준 (24 mg/kg, 로그 성장율 0.0048) 보다도 종양 성장을 억제시키는데 현저하게 더욱 효과적이었다 (로그 성장율 -0.026).
테스트 동물의 종양의 완전하고 부분적인 완화를 모니터링하고 표 2 에 나타내었다. 종양의 완전한 완화를 실험 최종시까지의 종양 덩어리의 제거로서 정의하였다. 부분적인 완화를 개개의 동물의 피크 종양 부피의 50 % 미만의 종양 부피로서 정의하였다.
처리 투여량 mg/kg 완전한 경감1 부분적 경감2
염수 0/20 0/20
유리 MPE-캄프토테신 24 3/10 1/10
유리 MPE-캄프토테신 15 2/10 0/10
유리 MPE-캄프토테신 6 0/10 0/10
리포솜-엔트랩됨 24 --3 --3
리포솜-엔트랩됨 15 --3 --3
리포솜-엔트랩됨 6 10/10 na4
1실험 종결시까지 종양 덩어리 제거로서 정의되는 완전 완화.
2개개의 동물의 피크 종양 부피의 50 % 미만의 종양 부피로서 정의되는 부분 완화.
3테스트군의 모든 10 마리 동물이 16 일에 2 번째 투여 후 죽음.
4na = 적용불가능함.
표 2 에서 볼 수 있듯이, 6 mg/kg 의 투여량의 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신이 모든 10 마리의 테스트 동물의 종양의 완전 완화를 일으키는데 효과적이었다. 상기 효과를 16 일에 2 번째 처리 후 5 일 안에 관찰하였다. 상기에서 보는 바와 같이, 6 mg/kg 리포솜-엔트랩된 테스트군의 5 마리의 테스트 동물이 3 번째 투여 직후 죽었다. 생존한 5 마리 동물에게서, 연구 종결시, 23 일의 최종 처리 후 약 30 일까지 종양이 재발하지 않았다. 데이터는 15 mg/kg 및 24 mg/kg 의 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신으로 처리한 동물에게는 적용할 수 없는데, 그 이유는 상기 테스트군의 모든 동물이 상기 지시한 바와 같이, 약물-관계된 독성으로 인해 죽었기 때문이다.
표 2 에서 보는 바와 같이, 24 mg/kg 의 유리 형태의 MPE-캄프토테신을 투여하여 3 마리의 동물이 완전한 종양 완화를 일으켰고 1 마리의 동물이 부분 종양 완화를 일으켰다.
유리 형태 및 리포솜-엔트랩된 형태로 투여되는 약물에 대하여 관찰 비교한 결과, 약물이 리포솜-엔트랩된 형태로 투여될 경우 더욱 강력하다는 것을 알아냈다. 사실, 리포솜-엔트랩된 약물은 유리 형태의 약물보다 4 배 이상 더욱 강력한데, 이는 24 mg/kg 의 유리 MPE-캄프토테신 투여량과 6 mg/kg 의 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 투여량을 비교하여 수득한 결과로부터 알 수 있다 (도 2B, 표 2). 상기 결과로부터 치료적으로 효과적인 항종양 치료법에 요구되는 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신의 투여량은 약물이 유리 형태로 투여되는 경우 요구되는 투여량부다 4 배 낮다는 것이 명백하다.
실시예 2 는 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신의 최저 효과 투여량 및 최대 내성 투여량을 결정하기 위한 2 번째 연구의 상세 부분을 개시한다. 이 연구에서, 실시예 1 에 기재된 바와같이 리포솜을 제조하고 리포솜 제형물을 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg 및 5 mg/kg 의 약물 투여량으로 투여하였다. 유리약물을 비교로서 20 mg/kg 투여하였다.
표 3 은 각 군에서의 테스트 동물의 수를 요약하고 본 연구의 각각의 투여 상태에서 생존한 동물의 마리수를 명기한다. 표에서 보는 바와 같이, 모든 대조구, 염수 처리 동물 및 유리 MPE-캄프토테신로 처리한 모든 동물이 본 연구 동안 생존하였다. 5 mg/kg 의 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신로 처리한 10 마리의 동물 중에서, 4 마리의 동물이 약물-관계된 독성으로 인하여 죽었고, 또 다른 1 마리의 동물이 명백히 구체적이지 않은 원인으로 3 회 투여 후 죽었다. 3 mg/kg 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신이 제공된 테스트군의 10 마리 동물 중 하나는 2 회 투여 후 죽었지만, 독성과 관계된 임의의 증상이 없어서 약물 처리로 인한 것이라고 생각되지 않았다. 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신으로 처리한 모든 다른 동물이 전체 연구 동안 생존하였다.
처리 투여량 mg/kg 테스트한 동물 수 생존 동물 수
투여 1 후(9 일) 투여 2 후(16 일) 투여 3 후(23 일)
염수 20 20 20 20
유리 MPE-캄프토테신 20 10 10 10 10
리포솜-엔트랩됨 5 10 10 10 5
리포솜-엔트랩됨 3 10 10 9 9
리포솜-엔트랩됨 1 10 10 10 10
리포솜-엔트랩됨 0.5 10 10 10 10
리포솜-엔트랩됨 0.1 10 10 10 10
연구 결과를 도 3A-3B 에 나타내었는데, 도 3A 는 HT-29 결장 종양을 사용한 접종 후 날짜의 함수로서 그람으로 마우스의 체중을 나타낸다. 리포솜 엔트랩된 토포이소머라제 Ⅰ 억제제를 5 mg/kg (열린 삼각형), 3 mg/kg (열린 거꾸로된 삼각형), 1 mg/kg (열린 다이아몬드), 0.5 mg/kg (열린 원) 및 0.1 mg/kg (열린 사각형) 의 투여량으로, 유리 약물을 20 mg/kg (닫힌 사각형) 의 투여량을 사용하여 종양 접종 후 9, 16 및 23 일에 동물을 처리하였다. 도 3A 에서 보듯이, 체중이 투여량-관계하여 변화하였고, 상기 변화는 독성의 다른 관찰과도 관계되었다.
도 3B 는 종양 접종 후 날짜의 함수로서 mm3로 종양 부피를 나타내는 유사 플롯인데, 여기서 투여량은 도 3A 에서와 동일한 기호로 나타내었다. 도 3B 는 5 mg/kg 및 3 mg/kg 투여량 수준의 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신이 20 mg/kg 투여량의 유리 약물보다 종양 성장을 억제하는데 있어서 더욱 치료적으로 효과적임을 나타낸다. 유리 MPE-캄프토테신 20 mg/kg 을 사용한 치료 (0.011 의 로그 성장율) 는 리포솜-엔트랩된 형태의 1 mg/kg 의 약물 투여량 수준 (0.017 의 로그 성장율) 에 대한 항종양 활성과 대략 동등하였다. 표 4 는 테스트 동물의 완전 및 부분 종양 완화를 요약한다.
처리 투여량 mg/kg 완전 완화1 부분 완화2
염수 0/20 0/20
유리 MPE-캄프토테신 20 0/10 1/10
리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 5 10/10 na3
리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 3 7/10 1/10
리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 1 0/10 0/10
리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 0.5 0/10 1/10
리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 0.1 0/10 0/10
1실험 종료시까지의 종양 덩어리의 제거로서 정의되는 완전 완화.
2각 동물의 피크 종양 부피의 50 % 미만의 종양 부피로서 정의되는 부분 완화.
3na = 적용불가능함.
20 mg/kg 의 유리 MPE-캄프토테신으로 처리한 동물들에게서는 완전한 종양 완화가 나타나지 않았다. 이와는 달리, 5 mg/kg 투여량 수준의 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신을 사용하여 처리한 모든 10 마리의 동물이 완전 완화를 보였다. 3 mg/kg 의 투여량에서, 7 마리의 동물이 그의 종양의 완전 완화를 보였다.
실시예 3 의 연구로부터의 결과는, 리포솜-엔트랩된 토포이소머라제 억제제 MPE-캄프토테신의 항종양 활성이, 유리 형태의 약물과 비교할 경우 현저하게 우수함을 나타내는데, 이는 리포솜-엔트랩된 형태가 약 20 배 더욱 강력하여 20 mg/kg 의 투여량의 유리 약물의 항종양 활성이 1 mg/kg 투여량의 리포솜-엔트랩된 형태의 약물의 활성과 가장 비교할만하기 때문이다. 3 mg/kg 및 5 mg/kg 의 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 투여량이 20 mg/kg 투여량의 유리 형태의 약물보다 항종양 치료에 있어서 현저히 더욱 효과적이라는 것은 리포솜에 엔트랩된 약물의 치료 지수가 유리 형태의 약물보다 대략 4 배 내지 5 배 더 높다는 것을 나타낸다.
2.토포테칸의 생체내 투여
본 발명을 지지하여 수행된 또 다른 연구에서, 실시예 4 에서 개시한 바와 같이 DSPC 및 mPEG-DSPE 가 95:5 의 몰비로 구성된 리포솜에 토포테칸을 엔트랩하였다. 본원에서 보고되지 않은 일찌기의 연구는, 토포테칸이 리포솜에서 용이하게 보유되지 않는다는 것을 지시하였다. 지질 이중층을 선택하여 mPEG-DSPE 성분에서의 DSPE 와 근접한 아실 사슬 길이를 갖는 단일 성분 인지질을 사용하였다. 그러한 이중층은 고체상 이중층에서의 가장 가까운 인접 상호작용에서의 불완전함으로부터 야기되는 최소한의 패킹 결점을 갖고, 이는 유동 이중층과 관계되는 측면 및 회전 이동성을 감소시켰다. 또한, 덱스트란-술페이트 로딩 배터리가 리포솜 내부에서의 토포테칸의 침전을 성취하기 위하여 사용되었다. 다른 중합체, 특히 다음이온성 중합체가 상기 목적, 예를 들어 콘드로이틴 술페이트 A, 폴리비닐황산, 및 폴리인산에 적절하다.
중심 구획에 덱스트란 암모늄 술페이트를 포함하는 예비-형성된 리포솜을 실시예 4 에 기재된 바와 같이 토포테칸을 사용하여 로딩하였다. 로딩 후, 엔트랩 되지 않은 약물을 투석여과하여 제거하고 리포솜을 특성화하였다. 평균 입자 직경 87 nm 의 리포솜을 약물:지질 비 0.238 로 로딩하였다.
토포테칸을 포함하는 리포솜을 랫트에게 정맥내 투여하여 혈액 순환 수명을 측정하였다. 도 4A-4B 는 랫트에게 투여 후 시간의 함수로서 토포테칸의 혈장 농도를 나타낸다. 도 4A는 2 mg/kg 으로 투여된 리포솜-엔트랩된 토포테칸 (단색 삼각형) 의 농도 및 동일한 투여량으로 투여된 유리 토포테칸 (단색 사각형) 의 농도를 비교한다. 도 4B 는 5 mg/kg 의 투여량의 두 가지 약물 형태를 비교한다. 계산된 약동학적 파라미터를 표 5 에 나타내었다.
파라미터 투여량 = 2 mg/kg 투여량 = 5 mg/kg
유리 토포테칸 리포솜-엔트랩됨 유리 토포테칸 리포솜-엔트랩됨
라스마 Cmax (μg/mL) 2.89 54.5 8.23 119.3
AUC (μg/mL h) 0.57 523 1.57 1140
T 1/2 (h) 0.20 7.2 0.30 9.8
CL (mL/h) 887 0.96 820 1.10
Vol. Dist. (mL) 173 9.2 278 17.5
제거율 상수 (l/h) 3.45 0.096 2.33 0.071
표 5 의 데이터는 리포솜-엔트랩된 약물이 유리 형태의 약물보다 현저하게 긴 순환 시간을 갖는다는 것을 나타낸다.
리포솜의 효능은 또 다른 연구에서 측정되었다. 실시예 4 에 기재된 바와같이, 리포솜을 피하 이종이식편 종양을 갖는 마우스에 투여하였다. 종양을 갖는 마우스를 하기: 염수, 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신을 4 mg/kg; 유리 토포테칸을 25 mg/kg; 리포솜 엔트랩된 토포테칸을 2 mg/kg, 5 mg/kg 또는 8 mg/kg 의 약물 투여량 중 하나로 처리하기 위하여 12 마리 마우스씩 6 개의 처리군으로 무작위화하였다. 모든 처리는 3 개 처리에 대하여 주 단위로, 구체적으로는 9, 16 및 23 일에 제공되는 정맥내 식괴 주사로서 투여되었다.
각 동물의 종양 크기를 연구동안 주 2 회 측정하여 치료 효능을 평가하였다. 각 동물의 체중을 주 2 회 모니터링하여 제형물의 독성을 평가하였다. 결과를 표 6 내지 7 및 도 5A-5B 에 나타내었다.
처리 투여량 mg/kg 완전 완화1 부분 완화2 무반응3
염수 0 0 12
리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 4 8 4 0
유리 토포테칸 25 0 1 11
리포솜-엔트랩된 토포테칸 2 1 2 9
리포솜-엔트랩된 토포테칸 5 2 8 2
리포솜-엔트랩됨 토포테칸 8 7 3 2
1실험 종료시까지의 종양 덩어리의 제거로서 정의되는 완전 완화.
2각 동물의 피크 종양 부피의 50 % 미만의 종양 부피로서 정의되는 부분 완화.
3초기 종양 부피 이상의 종양 부피로서 정의되는 무반응
도 5A 및 표 6 에서 보듯이, 좌측의 미처리 종양이 연구 동안 일일 17.8 mm3의 속도로 성장하였다. 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 (양성 대조구 동물) 으로 처리한 동물은 연구 동안 일일 -1.2 mm3의 종양 성장율을 나타내었다. 40 mg/kg 의 최대 허용 투여량 (MTD) 보다 다소 미만의 25 mg/kg 으로 투여된 비캡슐화 토포테칸으로 처리한 동물은 일일 14.1 mm3의 종양 성장을 나타내었다. 리포솜-엔트랩된 토포테칸으로 처리한 동물은 2 mg/kg 의 투여량에 대하여 일일 0.9 mm3, 5 mg/kg 의 투여량에 대하여 일일 -1.9 mm3, 그리고 8 mg/kg 의 투여량에 대하여 일일 -0.8 mm3의 종양 성장을 나타내었다. 음성 성장율은 출발 종양 부피 미만의 종양 크기의 완화를 나타낸다.
대조구 종양의 크기의 함수로서 처리된 종양의 크기 (% T/C) 를 모든 처리군에 대하여 시험하였고 표 6 에 요약하였다. 국립 암 학회는 42 미만의 % T/C 로서 유의한 항-종양 활성을 정의하였다.
처리 투여량 mg/kg %T/C129 일 %T/C33 일 % T/C36 일
리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 4 1.8 0.6 1.9
유리 토포테칸 25 82.8 79.0 85.9
리포솜-엔트랩된 토포테칸 2 19.5 12.9 16.3
리포솜-엔트랩된 토포테칸 5 10.5 5.6 5.6
리포솜-엔트랩된 토포테칸 8 2.0 2.2 2.2
1%T/C 는 대조구인 염수 처리된 동물의 평균 종양 부피에 대하여 지시된 날짜에서의 평균 종양 부피로서 정의함.
3.CKD-602 의 생체내 투여
실시예 5 는 토포이소머라제 억제제 CKD-602 를 사용하여 본 발명을 지지하여 수행된 또 다른 연구를 기재한다. 약물을 트래핑제로서 덱스트란을 사용하여 암모늄-술페이트 구배에 대하여 리포솜에 원격 로딩하였다. 리포솜 지질 조성물은 토포테칸-HSPC 및 mPEG-DSPE 를 95/5 몰비로 사용한 연구에 대하여 사용된 것과 동일하였다.
도 6 은 1 mg/kg 의 투여량으로 랫트에게 투여 후 시간의 함수로서 CKD-602 의 혈장 농도를 나타내는 플롯이다. 리포솜-엔트랩된 형태의 약물 (단색 원) 은 9.8 시간의 순환 반-수명 및 274 μg/mL/시 의 AUC 를 나타내었다. 유리 형태의 약물은 0.2 시간의 계산된 반수명 및 0.37 μg/mL/시 의 AUC 를 가졌다.
CKD-602 제형물의 치료 효능을 HT-20 결장 암 이종이식편을 갖는 마우스를 사용하여 평가하였다. 72 마리의 마우스에게 HT-29 종양 세포를 접종하고 9 일 후 무작위로 6 개 처리군으로 나누었다. 각 군의 동물을 하기 제형물 중 하나로 처리하였다: 염수, 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 4 mg/kg; 유리 CKD-602 20mg/kg; 1 mg/kg, 2 mg/kg 또는 4 mg/kg 의 약물 투여량의 리포솜 엔트랩된 CKD-602. 모든 처리는 3 개의 처리에 대하여 주 단위로, 구체적으로는 11, 18 및 25 일에 정맥내 식괴 주사로서 투여하였다.
각 동물의 종양 크기를 연구 동안 주 2 회 측정하여 치료 효능을 평가하였다. 각 동물의 체중을 주 2 회 모니터링하여 제형물의 독성을 평가하였다. 결과를 표 8 및 9 및 도 7A 내지 7B 에 나타내었다.
처리 투여량 mg/kg 완전 완화1 부분 완화2 무반응3
염수 0/10 0/10 10/10
리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 4 6/10 0/10 4/10
유리 CKD602 20 0/6 0/6 6/6
리포솜-엔트랩된 CKD602 1 2/10 7/10 1/10
리포솜-엔트랩된 CKD602 2 6/10 2/10 2/10
리포솜-엔트랩된 CKD602 4 4/4 0/4 0/4
1실험 종료시까지 종양 덩어리의 제거로서 정의되는 완전 완화.
2각 동물의 피크 종양 부피의 50 % 미만의 종양 부피로서 정의되는 부분 완화.
3초기 종양 부피 이상의 종양 부피로서 정의되는 무반응.
표 8 및 도 7B 에서 보는 바와 같이, 염수로 처리된 동물은 연구 동안 일일 15.45 mm3의 속도로 계속적인 종양 성장을 보였다. 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신으로 처리된 동물 (양성 대조구 동물) 은 연구 동안 일일 -0.63 mm3의 종양 성장율을 보였다. 유리, 엔트랩되지 않은 CKD602 로 처리된 동물은 일일 15.2 mm3의 종양 성장을 나타내었다. 리포솜성 CKD602 로 처리한 동물은 1 mg/kg 투여량으로 처리한 동물의 경우 일일 -2.21 mm3의 종양 성장, 2 mg/kg 투여량의 경우 일일 -0.96 mm3및 4 mg/kg 투여량의 경우 일일 -2.37 mm3의 종양 성장을 나타내었다. 음성 성장율은 출발 종양 부피 미만의 종양 크기 완화를 가리킨다.
대조구 종양의 크기의 함수로서 처리된 종양의 크기 (%T/C) 를 모든 처리군에 대하여 시험하고 표 9 에 요약하였다. 국립 암 학회는 42 미만의 %T/C 로서 유의한 항-종양 활성을 정의하였다.
처리 투여량 mg/kg %T/C129 일 %T/C33 일 %T/C36 일
리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 4 2.9 2.3 1.6
유리 CKD602 20 129.1 120.1 99.9
리포솜-엔트랩된 CKD602 1 11.4 7/7 4.4
리포솜-엔트랩된 CKD602 2 4.8 2.8 1.6
리포솜 엔트랩된 CKD602 4 1.0 1.3 0.9
1%T/C 는 대조구인 염수 처리 동물의 평균 종양 부피에 대하여 지시된 날짜에서 평균 종양 부피로서 정의됨.
Ⅳ.실시예
하기 실시예는 본 발명의 조성물을 사용하여 특성화된 제조 방법을 예시한다. 본 실시예는 어떤 식으로든 본 발명의 범위를 제한하지 않는다.
재료
토포이소머라제 억제제 (7-(4-메틸-피페라지노-메틸렌)-10,11-에티렌디옥시-20(S)-캄프토테신 트리플루오로아세테이트 (GI147211) (MPE-캄프토테신) 가 Glaxo Research Institute, Research Triangle Park, NC 로부터 제공되었다. CKD602 (7-(2-(N-이소프로필아미노)에틸)-(20S)-캄프토테신) 이 한국, 서울의 종근당으로부터 제공되었다. 토포테칸 (Hycamtin) 을 공업적으로 수득하였다.
리포솜 제조용 재료 및 모든 다른 시약을 공업적으로 수득가능한 원으로부터 수득하였다.
방법
동물 연구 :동질접합체 누드 마우스를 Taconic Farms (Germantown, 뉴욕) 으로부터 수득하고 실험에 앞서 7 일간 적응시켰다. 동물을 임의 섭식 무균 서류식 및 산성화수 및 12:12 낮:밤 주기를 사용하여 적절한 고립된 우리에서 사육하였다. 동물들을 체중에 기초한 종양 접종에 앞서 무작위로 처리군을 나누었다. 무작위화는 처리 시작에 앞서 즉시 종양 크기를 기준으로 확인하였다.
종양 :공여 동물의 빠르게 성장한 종양으로부터 단편의 투관침 배치에 의하여 종양을 접종하였다. 인간 결장 암 세포주, HT-29 를 사용하여 피하 이종이식편 종양을 개시하였다. 배양된 세포를 트립신화하고, 세척하고, 수를 세고 노말성장 매질 1 mL 당 50 ×106세포로 재현탁시켰다. 종양을 목 뒤에서 0.1 mL (5 ×106세포) 주사하여 접종하였다. 종양이 처리 시작에 앞서 100 mm3의 평균 크기로 성장하도록 하였다.
모니터링 :모든 동물을 실험에 걸쳐 일반적인 동태에 대하여 일일 관찰하였다. 종양 접종에 앞서 동물을 칭량하고 그 후 주 단위로 칭량하였다. 종양 접종 후 5 내지 10 일에 시작하여 종양을 실험에 걸쳐 주 2 회 측정하였다. 초기 출발 체중으로부터 15 % 를 초과하여 중량이 손실된 임의의 동물 및 종양 부피가 4,000 mm3를 초과한 임의의 동물은 연구에서 제외하였다.
실시예 1
엔트랩된 토포이소머라제 억제제를 사용한 리포솜의 제조
하기와 같이 리포솜을 제조하고 선택된 토포이소머라제 억제제를 사용하여 로딩하였다.
A.리포솜 제조
65 ℃ 에서 지질 수소화 콩 포스파티실콜린 (HSPC), 콜레스테롤 (Chol) 및 mPEG-DSPE (56.4:38.3:5.3 mol/mol 비) 를 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 용해시켰다. 지질을 30 분 이상 65 ℃ 에서 계속 교반하였다. 에탄올 용액의 총 지질 농도가 10 mL 에탄올 당 총 지질 3.7 g 이었다.
용해된 지질 용액을 65 ℃ 로 평형화된 250 mM 황산암모늄 용액 100 mL 을포함하는 또 다른 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 옮겼다. 에탄올:지질:황산암모늄 수화 혼합물을 1 시간 이상 계속 혼합하는 한편 65 ℃ 수조를 사용하여 온도를 유지해서 올리고라멜라형 에탄올 수화 리포솜을 형성시켰다.
Lipex 열배럴 (thermobarrel) 압출기를 사용하여 올리고라멜라형 리포솜의 크기를 줄여서 공지된 기공 크기 차원의 폴리카르보네이트 막을 통하여 수화 혼합물을 통과시켰다. 혼합물을 0.20 μm 기공 직경막을 통하여 5 회 통과시킨 후 0.10 μm 기공 직경막을 통하여 10 회 통과시켰다. 압출된 리포솜은 리포솜의 내부 수성 구획(들) 안 및 현탁되는 외부 벌크 상 매질에 황산암모늄을 포함하였다. 크기 조절된 리포솜을 원격 로딩 과정에 앞선 투석여과시까지 냉장고에 저장하였다.
선택된 토포이소머라제 억제제, MPE-캄프토테신, CKD-602 또는 토포테칸 100 mg 을 40 mL 10 % 수크로스 용액에 용해하여 2.5 mg/mL 의 농도를 수득하였다. 용해 후, 용액을 0.20 μm 필터를 통과시켜서 불용성 미립자를 제거하였다.
B.리포솜의 원격 로딩
황산암모늄 및 에탄올을 100 KDa 공칭 분자량 절단 카트리지를 사용하여 공동 (hollow) 섬유 접선 유동 투석여과에 의하여 원셕 로딩에 앞서 즉시 외부 벌크 수성상으로부터 제거하였다. 정량 공급 부피를 유지하고, 7 개의 교환 부피를 사용하여 10 % 수크로스를 포함하는 외부 수성상에 현탁된 리포솜을 산출하였다.
투석여과 후, 물을 포함하는 예비 평형화된 재킷된 용기를 사용하여 1:4 (부피/부피) 의 비 (약물 용액:리포솜) 로 선택된 약물 용액과 혼합하고 빠르게 65 ℃로 가온하였다. 혼합물을 온도를 65 ℃ 에서 40 내지 60 분 동안 유지한 후, 혼합물을 빠르게 아이스-물 배스에서 냉각시켰다. 원격 로딩 후, 리포솜 샘플을 결정의 존재에 관하여 체크하고 평균 입자 직경을 측정하고 캡슐화 백분율을 결정하였다.
캡슐화되지 않은 약물을 100 kDa 공칭 분자량 절단 카트리지를 사용하여 공동 섬유 접선 유동 투석여과로 벌크 상 매질로부터 제거하였다. 8 개 이상의 교환 부피를 사용하여, 10% 수크로스 10 mM 히스티딘 pH 6.5 로 구성된 외부 수성상에 리포솜성 캡슐화된 약물을 현탁시켰다.
최종 리포솜 제제는 0.22 μm 셀룰로스 아세테이트 시린지 여과기를 사용하여 멸균 여과하고 냉동 저장하고 사용시까지 빛으로부터 보호하였다.
C.리포솜의 특성화
크기별배제크로마토그래피를 사용하여 캡슐화 백분율을 측정하여 총 약물 (빈 부피와 포함된 부피의 합) 에 대한 빈 부피 (리포솜 캡슐화된) 에 있어서의 약물 백분율을 비교하였다. 컬럼 분획에서의 약물 농도를 흡광도에 의하여 측정하였다. 평균 입자 직경을 준전자 레이저 빛 분산 (QELS) 을 사용하여 측정하였다. 총 지질 농도를 후-멸균 여과 단계에서 분석하여 지지에 대한 약물 비를 측정하였다. MPE-캄프토테신, 토포테칸 및 7-(2-(N-이소프로필아미노)에틸)-(20S)-캄프토테신 (CKD-602) 을 로딩한 리포솜을 제조하고 특성화하였다. 결과를 하기 표에 기재하였다.
파라미터 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 리포솜-엔트랩된 토포테칸 리포솜-엔트랩된 CKD602
로트 번호 221AZ43A 221AZ43B 221AZ53
총 지질 농도 17.81 μmol/mL 15.97 μmol/mL 14.079 μmol/mL
약물 농도 2.69 mg/mL(4.55 μmol/mL) 1.72 mg/mL(3.76 μmol/mL) 1.77 mg/mL(3.77 μmol/mL)
약물:지질 비(mol/mol) 0.26 (1:3.92) 0.24 (1:4.25) 0.27 (1:3.73)
평균 입자 직경 99 nm 95.4 nm 96.7 nm
캡슐화 백분율 96.4 % 99.9 % 95.3 %
실시예 2
리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신의 생체내 효능
엔트랩된 MPE-캄프토테신을 포함하는 리포솜을 실시예 1 에 기재한 바와같이 제조하였다. 목적하는 농도를 성취하기 위하여 요구되는 바와 같이 리포솜 엔트랩된 약물 및 유리 약물을 물 중 5 % 덱스트로스에 희석시켰다.
누드 마우스에 인간 결장 암 세포주 HT-29 를 접종하였다. 70 마리의 마우스를 하기와 같이 7 개의 처리 군으로 무작위화하였다: 유리 약물 24 mg/kg, 15 mg/kg 또는 6 mg/kg; 리포솜 엔트랩된 약물 24 mg/kg, 15 mg/kg 또는 6 mg/kg; 염수. 종양 접종 후 10 일에 평균 종양 부피가 약 75 mm3인 경우 처리를 시작하였다. 모든 처리를 3 개의 처리에 대하여 주 단위로, 구체적으로 10, 16 및 23 일에 정맥내 식괴 주사로서 투여하였다.
각각의 실험 동안 및 후 종양 크기를 치료 효능의 주요 평가로서 사용하였다. 체중을 평가하여 독성을 측정하였다. 상기 기준을 토대로 안락사시킬 때까지 종양을 갖는 모든 동물을 처리 중지 후 관찰하였다. 대부분의 대조구 종양이 최대 허용 부피 (4,000 mm3) 를 성취했을 때 실험을 끝냈다.
각 동물의 종양 크기를 다양한 시점에서 반복하여 측정하고, 이에따라 상기 측정을 상호 관계된 정보로서 간주하였다. 처리 후 시간에 걸친 종양 크기가 관심 대상이었기 때문에, 각 데이터 셋트에 대하여 반복하여 측정 분석을 수행하였다. 데이터를 시험함으로써, 로그 변형이 합당하였다. Y 가 본래 종양 측정을 의미하도록 하여, Z = log(Y + 1) 로 설정하였다. 데이터 변형 후, 변형된 데이터 Z 에 대하여 반복 측정 분석을 수행하였다. SAS 과정 PROC MIXED 가 사용되었다. 각각의 처리군에 대한 로그 성장율을 계산하고 상이한 처리군을 비교하였다. 통계적 유의성을 0.05 수준으로 정하였지만, 복합적인 비교로 인하여, 형태 Ⅰ 오점에 대한 조정을 수행하였고, P-값 < 0.0033 을 임의의 고안된 비교에서의 통계적으로 유의한 차이점으로 지시하였다.
결과를 표 1 및 2 및 도 2A-2 B 에 요약하였다.
실시예 3
리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신에 대한 투여량 찾기 연구
실시예 1 에 기재된 바와 같이 엔트랩된 MPE-캄프토테신을 포함하는 리포솜을 제조하였다. 리포솜 엔트랩된 약물 및 유리 약물을 물 중 5 % 덱스트로스에 희석시켜서 목적하는 농도를 성취하였다.
누드 마우스에 방법 섹션에서 상기 기재한 바와 같이 인간 결장암 세포주를 사용하여 접종하였다. 70 마리의 마우스를 하기와 같은 7 가지 처리군으로 무작위화하였다: 리포솜 엔트랩된 약물 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 5mg/kg 또는 20 mg/kg; 및 염수. 평균 종양 부피가 종양 접종 후 9 일에 약 75 mm3일 때 처리를 시작하였다. 모든 처리는 주 단위, 구체적으로 9, 16 및 23 일에 3 개의 처리군에 대하여 제공되는 정맥내 식괴 주사로서 투여하였다.
실시예 2 에 기재된 바와 같이 종양 크기를 평가 및 분석하고, 결과를 표 3 및 4 및 도 3A-3B 에 나타내었다.
실시예 4
리포솜-엔트랩된 토포테칸의 생체내 효능
A.리포솜 제조
토포테칸을 포함하는 리포솜을 하기와 같이 제조하였다.
지질인 디스테아로일 포스파티딜콜린 (DSPC) 및 (N-(카르보닐메톡시폴리에틸렌 글리콜 2000)-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민) (mPEG-DSPE) 를 95:5 의 몰비로 배합하고 70 ℃ 에서 연속 교반하여 에탄올에 용해시켰다. 에탄올 용액 중 지질 농도가 10 mL 에탄올 당 8.9 그람이었다.
덱스트란 술페이트-암모늄염을 출발 물질로서 덱스트란 술페이트 나트늄염을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피를 사용하여 제조하였다. 덱스트란 술페이트 암모늄염의 100 mg/mL 용액을 물에 덱스트란 술페이트 나트륨염을 용해시키고 수산화암모늄을 사용하여 용액의 pH 를 5 로 조절함으로써 제조하였다.
덱스트란 술페이트 용액 100 mL 를 70 ℃ 로 가열하고 지질의 에탄올 용액과 배합하는 한편 혼합하여 올리고라멜라형 리포솜을 형성하였다. 1 시간 동안 연속교반하여 올리고라멜라형 에탄올 수화 리포솜 분산액의 온도를 70 ℃ 로 유지시켰다.
후 수화 혼합물을 70 ℃ 로 가열하고 폴리카르보네이트 막 연속물을 통한 Lipex 열배럴 압출기를 사용하여 크기를 줄여서 평균 입자 직경이 100 nm 에 가까운 입자 크기에 도달하도록 하였다. 전형적으로, 순서는 0.2 μm 기공 직경막을 통하여 5 회 통과시킨 후, 0.1 μm 기공 직경막을 통하여 10 회 통과시키는 것을 포함한다.
엔트랩되지 않은 덱스트란 술페이트 중합체 및 잔류하는 에탄올을 350 mM 염화나트륨 용액을 사용하여 8 회 부피 교환을 통한 활성 약물 로딩 단계에 앞서 즉시 외부 벌크 수성상으로부터 제거하였다. 사용되는 투석여과 카트리지는 100,000 달턴의 특정 공칭 분자량 컷오프를 가졌다.
토포테칸 용액을 10 % 수크로스 중 2.5 mg/mL 의 농도로 제조하였다. 약물 용액 및 투석여과된 리포솜을 4:1 의 부피비로 배합하고, 생성된 혼합물의 온도를 70 ℃ 로 상승시키고 1 시간 동안 계속 교반하여 유지하였다. 빙수 배스를 사용하여 후-로딩 혼합물을 빠르게 냉각시켜서 활성 약물 로딩을 종료하였다.
엔트랩되지 않은 약물을 100,000 달턴의 공칭 분자량 컷오프를 갖는 카트리지를 사용하여 투석여과로 제거하였다. 전형적으로는, 교환 완충액으로서 10 % 수크로스 10 mM 히스티딘 pH 6.5 를 사용하여 8 내지 10 회 부피 교환하였다.
uv-vis 흡광도 측정 및 뒤이은 희석을 사용한 강력한 분석을 통하여 약물 농도를 최종값으로 조절하였다.
최종 공정 단계는 바이알을 채우기에 앞서 0.22 μm 필터를 사용한 멸균 등급 여과를 포함하였다.
B.리포솜 특성화
백분율 캡슐화를 크기별배제크로마토그래피로 측정하여 포함된 것 및 빈 부피분획 모두에서 회수되는 총 양에 대한 빈 부피 ("리포솜 약물") 에서의 약물 백분율을 결정하였다. 약물 농도를 uv-vis 흡광도 분광광도측정법을 사용하여 모니터링하였다. 평균 입자 직경을 준전자 레이저 빛 분산을 사용하여 측정하였다. 총 지질을 인 분석을 사용하여 측정하였다. 결과를 하기 표에 요약하였다.
파라미터 리포솜-엔트랩된 토포테칸
총 지질 17.2 mg/mL
총 약물 2.1 mg/mL
약물:지질 비 (mol:mol) 0.238
평균 입자 직경 87.3 nm
백분율 캡슐화 98.8
C.생체내 약동학 및 효능
72 마리의 마우스에 상기 방법 섹션에서 개시한 바와 같이 HT-29 암 세포를 접종하였다. 종양 접종 후 9 일에, 일주일 단위로 동물을 하기 정맥 내 처리 중 하나로 처리하였다: 염수; 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 4 mg/kg; 유리 토포테칸 25 mg/kg; 2 mg/kg, 5 mg/kg 또는 8 mg/kg 의 약물 투여량의 리포솜 엔트랩된 토포테칸. 모든 처리는 3 가지 처리에 대하여 일주일 단위로, 구체적으로는 9, 16 및 23 일에 정맥내 식괴 주사로서 투여하였다.
실시예 2 에서 기재한 바와 같이 종양 크기를 평가하고 분석하고, 결과를 표 6 및 7 및 도 5A-5B 에 나타내었다.
실시예 5
리포솜-엔트랩된 CKD-602 의 생체내 효능
A.리포솜 제조 및 특성화
CKD-602 를 포함하는 리포솜을 실시예 4 에 기재된 바와 같이 제조하였는데, 단 CKD-602 의 약물 용액을 사용하였다. 리포솜을 실시예 4 에 기재된 바와 같이 특성화하고 결과를 하기에 요약하였다.
파라미터 리포솜 엔트랩된 CKD-602
총 지질 12.5 mg/mL
총 약물 2.07 mg/mL
약물:지질 비 (mol:mol) 0.315
평균 입자 직경 92.8 nm
백분율 엔캡슐화 94.7
B.생체내 약동학 및 효능
72 마리의 마우스에 상기 방법 섹션에서 개시한 바와 같이 HT-29 암 세포를 접종하였다. 종양 접종 후 11 일에, 일주일 단위로 동물을 하기 정맥내 처리 중 하나로 처리하였다: 염수; 리포솜-엔트랩된 MPE-캄프토테신 4 mg/kg; 유리 CKD602 20 mg/kg; 1 mg/kg, 2 mg/kg 또는 4 mg/kg 의 약물 투여량의 리포솜 엔트랩된 CKD602. 모든 처리는 3 가지 처리에 대하여 일주일 단위로, 구체적으로는 11, 18 및 25 일에 정맥내 식괴 주사로서 투여하였다.
각 동물의 종양 크기를 연구 동안 주 2 회 측정하여 치료 효능을 평가하였다. 각 동물의 체중을 주 2 회 모니터링하여 제형물의 독성을 평가하였다. 결과를 표 8 및 9 및 도 7A-7B 에 나타내었다.
본 발명이 특허 구현예에 관하여 개시되었음에도 불구하고, 당업계의 숙련자들은 본 발명을 벗어나지 않는 각종 변형 및 변화를 만들 수 있음이 명백하다.

Claims (18)

  1. 소포-형성 지질 및 친수성 중합체를 사용하여 유도체화된 1 내지 20 mole% 의 소포-형성 지질로 구성된, 리포솜 이중막의 양 측면상의 중합체를 분배하는 조건 하에 형성되는 리포솜; 및 특정 농도에서 리포솜 안에 토포이소머라제 억제제를 보유하기에 충분한 내부/외부 이온 구배를 갖는 리포솜에 엔트랩되어 있는, 지질 1 μmole 당 약 0.10 μmole 이상의 약물 농도의 토포이소머라제 억제제를 포함하는 환자의 종양 치료용 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서, 토포이소머라제 억제제가 캄프토테신 및 캄프토테신 유도체로 구성된 군으로부터 선택되는 토포이소머라제 Ⅰ 억제제인 것을 특징으로 하는 조성물.
  3. 제 2 항에 있어서, 캄프토테신 유도체가 9-아미노캄프토테신, 7-에틸캄프토테신, 10-히드록시캄프토테신, 9-니트로캄프토테신, 10,11-메틸렌디옥시캄프토테신, 9-아미노-10,11-메틸렌디옥시캄프토테신, 9-클로로-10,11-메틸렌디옥시캄프토테신, 이리노테칸, 토포테칸, (7-(4-메틸피페라지노메틸렌)-10,11-에틸렌디옥시-20(S)-캄프토테신, 7-(4-메틸피페라지노메틸렌)-10,11-메틸렌디옥시-20(S)-캄프토테신 및 7-(2-N-이소프로필아미노)에틸)-(20S)-캄프토테신으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  4. 제 1 항에 있어서, 토포이소머라제 억제제가 6-[[2-(디메틸아미노)-에틸]아미노]-3-히드록시-7H-인데노[2,1-c]퀴놀린-7-온 디히드로클로라이드, 아조톡신 및 3-메톡시-11H-피리도[3',4'-4,5]피롤로[3,2-c]퀴놀린-1,4-디온으로 이루어진 군으로부터 선택되는 토포이소머라제 Ⅰ/Ⅱ 억제제인 것을 특징으로 하는 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서, 친수성 중합체가 500 내지 5,000 달턴의 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜인 것을 특징으로 하는 조성물.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 리포솜이 37 ℃ 를 초과하는 상 전이 온도를 갖는 소포-형성 지질을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  7. 제 6 항에 있어서, 소포-형성 지질이 수소화 콩 포스파티딜콜린, 디스테아로일포스파티딜콜린 및 스핑고미엘린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  8. 제 6 항에 있어서, 리포솜이 20 내지 94 mole% 의 수소화 콩 포스파티딜콜린, 폴리에틸렌글리콜로 유도체화된 1 내지 20 mole% 의 디스테아로일포스파티딜에탄올아민 및 5 내지 60 mole% 의 콜레스테롤로 구성되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  9. 제 6 항에 있어서, 리포솜이 30 내지 65 mole% 의 수소화 콩 포스파티딜콜린, 폴리에틸렌글리콜로 유도체화된 5 내지 20 mole% 의 디스테아로일포스파티딜에탄올아민 및 30 내지 50 mole% 의 콜레스테롤로 구성되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  10. 제 6 항에 있어서, 리포솜이 20 내지 94 mole% 의 디스테아로일포스파티딜콜린 및 폴리에틸렌글리콜로 유도체화된 1 내지 20 mole% 의 디스테아로일포스파티딜에탄올아민으로 구성되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 리포솜이 리포솜 안에 다음이온성 중합체를 포함하며, 상기 중합체는 상기 토포이소머라제 억제제와의 착체를 형성할 수 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
  12. 제 12 항에 있어서, 상기 다음이온성 중합체가 덱스트란 술페이트, 콘드로이틴 술페이트 A, 폴리비닐황산, 및 폴리인산으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  13. 소포-형성 지질로 구성되어 있고 리포솜 안에 약물을 보유하는데 효과적인 내부/외부 이온 구배를 갖는 리포솜; 및 리포솜에 엔트랩된, 지질 1 μmole 당 약0.20 μmole 이상의 약물 농도의 토포이소머라제 억제제를 포함하는, 토포이소머라제 억제제 투여용 조성물.
  14. 제 13 항에 있어서, 토포이소머라제 억제제가 MPE-캄프토테신, 토포테칸 및 (7-(2-N-이소프로필아미노)에틸)-(20S)-캄프토테신으로부터 선택되는 토포이소머라제 Ⅰ 억제제인 것을 특징으로 하는 조성물.
  15. 제 13 항에 있어서, 토포이소머라제 억제제가 6-[[2-(디메틸아미노)-에틸]아미노]-3-히드록시-7H-인데노[2,1-c]퀴놀린-7-온 디히드로클로라이드 및 3-메톡시-11H-피리도[3',4'-4,5]피롤로[3,2-c]퀴놀린-1,4-디온으로 이루어진 군으로부터 선택되는 토포이소머라제 Ⅰ/Ⅱ 억제제인 것을 특징으로 하는 조성물.
  16. 제 13 항에 있어서, 리포솜이 리포솜안에 다음이온성 중합체를 더 포함하고, 상기 중합체가 상기 토포이소머라제 억제제와의 착체를 형성할 수 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
  17. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 환자의 종양 치료를 위한 의약 용도의 조성물.
  18. 환자의 종양 치료용 의약 제조를 위한 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
KR1020017004803A 1998-09-16 1999-10-15 리포솜-엔트랩된 토포이소머라제 억제제 KR100679906B1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US10467198P 1998-09-16 1998-09-16
US60/104,671 1998-10-16

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20010075639A true KR20010075639A (ko) 2001-08-09
KR100679906B1 KR100679906B1 (ko) 2007-02-07

Family

ID=22301756

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020017004803A KR100679906B1 (ko) 1998-09-16 1999-10-15 리포솜-엔트랩된 토포이소머라제 억제제

Country Status (18)

Country Link
US (4) US6355268B1 (ko)
EP (1) EP1121102B1 (ko)
JP (1) JP2002527466A (ko)
KR (1) KR100679906B1 (ko)
CN (1) CN1205923C (ko)
AT (1) ATE238039T1 (ko)
AU (1) AU774715B2 (ko)
BR (1) BR9914601A (ko)
CA (1) CA2346879A1 (ko)
DE (1) DE69907243T2 (ko)
DK (1) DK1121102T3 (ko)
ES (1) ES2198970T3 (ko)
IL (1) IL142573A0 (ko)
NO (1) NO20011844L (ko)
NZ (1) NZ511112A (ko)
PT (1) PT1121102E (ko)
WO (1) WO2000023052A1 (ko)
ZA (1) ZA200103063B (ko)

Families Citing this family (90)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE238039T1 (de) * 1998-09-16 2003-05-15 Alza Corp In liposomen eingeschlossene topoisomerase inhibitoren
US7311924B2 (en) * 1999-04-01 2007-12-25 Hana Biosciences, Inc. Compositions and methods for treating cancer
CA2376849C (en) * 1999-06-24 2008-10-14 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Method of inhibiting leakage of drug encapsulated in liposomes
US20040009229A1 (en) * 2000-01-05 2004-01-15 Unger Evan Charles Stabilized nanoparticle formulations of camptotheca derivatives
AU2001258106A1 (en) * 2000-05-11 2001-11-20 Celator Technologies Inc. Lipid carrier compositions for improved drug retention
ES2253398T3 (es) * 2000-06-30 2006-06-01 Inex Pharmaceuticals Corp. Camptotecinas liposomales mejoradas y sus usos.
US7452550B2 (en) 2000-06-30 2008-11-18 Hana Biosciences, Inc. Liposomal antineoplastic drugs and uses thereof
CA2427467C (en) * 2000-11-09 2010-01-12 Neopharm, Inc. Sn-38 lipid complexes and methods of use
WO2003030864A1 (en) * 2001-05-29 2003-04-17 Neopharm, Inc. Liposomal formulation of irinotecan
JP2005519129A (ja) 2002-03-05 2005-06-30 クリーブランド ステート ユニバーシティー エアロゾル薬物送達のための凝集粒子
EP1393719A1 (en) * 2002-08-23 2004-03-03 Munich Biotech AG Camptothecin-carboxylate formulations
US20060030578A1 (en) * 2002-08-20 2006-02-09 Neopharm, Inc. Pharmaceutically active lipid based formulation of irinotecan
AU2003296897A1 (en) * 2002-08-20 2004-05-04 Neopharm, Inc. Pharmaceutical formulations of camptothecine derivatives
US20070231379A1 (en) * 2002-08-29 2007-10-04 Slater James L Liposome-entrapped topoisomerase inhibitors
EA008930B1 (ru) * 2002-12-31 2007-08-31 Зайдус Би-Эс-Ви Рисерч Энд Дивелопмент Прайвит Лимитид Непэгилированные, длительно циркулирующие липосомы
US8980310B2 (en) * 2002-12-31 2015-03-17 Bharat Serums and Vaccines, Ltd. Non-pegylated long-circulating liposomes
EP1608338A1 (en) * 2003-04-02 2005-12-28 Celator Technologies Inc. Pharmaceutical compositions containing active agents having a lactone group and transition metal ions
EP1618897A4 (en) * 2003-04-04 2010-09-29 Eisai R&D Man Co Ltd LIPID MEMBRANE STRUCTURE COMPRISING AN ANTI-MT-MMP MONOCLONAL ANTIBODY
US20040204435A1 (en) * 2003-04-09 2004-10-14 Joachim Liehr Alternating treatment with topoisomerase I and topoisomerase II inhibitors
US20040247624A1 (en) * 2003-06-05 2004-12-09 Unger Evan Charles Methods of making pharmaceutical formulations for the delivery of drugs having low aqueous solubility
EP1643972A4 (en) * 2003-06-27 2010-01-20 Smithkline Beecham Corp STABILIZED LIPOSOMAL TOPOTECAN COMPOSITION AND METHOD
CN100431525C (zh) * 2003-07-17 2008-11-12 台湾东洋药品工业股份有限公司 脂质体悬浮液制造方法及含该法所制脂质体悬浮液的产物
US7196145B2 (en) 2003-08-26 2007-03-27 Smithkline Beecham Corporation Heterofunctional copolymers of glycerol and polyethylene glycol, their conjugates and compositions
AU2004283758A1 (en) * 2003-10-24 2005-05-06 Alza Corporation Preparation of lipid particles
CN100423778C (zh) * 2003-11-25 2008-10-08 上海复旦张江生物医药股份有限公司 用于上载抗肿瘤药物的脂质体载体及其制备方法和应用
US20070248541A1 (en) * 2003-12-01 2007-10-25 Mitsubishi Pharma Corporation Liposome
US20050129752A1 (en) * 2003-12-15 2005-06-16 Tty Biopharm Limited Company Use and manufacturing process for liposomal doxorubicin pharmaceutical composition
US20050129750A1 (en) * 2003-12-15 2005-06-16 Yu-Fang Hu Process for producing liposome suspension and product containing liposome suspension produced thereby
EP1547582A1 (en) * 2003-12-23 2005-06-29 MediGene Oncology GmbH Method of producing lipid complexed camptothecin-carboxylate
EP1547580A1 (en) * 2003-12-23 2005-06-29 MediGene Oncology GmbH Loading of a camptothecin drug into colloidal nanoparticles
KR101245990B1 (ko) * 2004-03-26 2013-03-20 테루모 가부시키가이샤 리포솜 제제
US8357351B2 (en) 2004-04-21 2013-01-22 Ananth Annapragada Nano-scale contrast agents and methods of use
US7713517B2 (en) 2004-04-21 2010-05-11 Marval Biosciences, Inc. Compositions and methods for enhancing contrast in imaging
AU2011202665C1 (en) * 2004-05-03 2014-04-24 Ipsen Biopharm Ltd. Liposomes useful for drug delivery
US8658203B2 (en) 2004-05-03 2014-02-25 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Liposomes useful for drug delivery to the brain
KR101376895B1 (ko) * 2004-05-03 2014-03-25 헤르메스 바이오사이언스, 인코포레이티드 약물 전달에 유용한 리포좀
JP4885715B2 (ja) * 2004-06-01 2012-02-29 テルモ株式会社 イリノテカン製剤
CA2570329C (en) * 2004-06-18 2009-09-01 Terumo Kabushiki Kaisha Liposome preparation containing slightly water-soluble camptothecin
CA2572865C (en) 2004-07-09 2017-07-25 Robert Sabin Compositions and methods of use for treatment of mammalian diseases
US7449196B2 (en) * 2004-07-09 2008-11-11 Robert Sabin Anti tumor compositions and methods of use
JP4433918B2 (ja) * 2004-07-15 2010-03-17 コニカミノルタエムジー株式会社 画像形成方法
US8318200B1 (en) * 2004-10-05 2012-11-27 Gp Medical, Inc. Pharmaceutical composition of nanoparticles
US8663599B1 (en) * 2004-10-05 2014-03-04 Gp Medical, Inc. Pharmaceutical composition of nanoparticles
US8318198B1 (en) * 2004-10-05 2012-11-27 Gp Medical, Inc. Pharmaceutical composition of nanoparticles
US20060110441A1 (en) * 2004-10-28 2006-05-25 Harry Wong Lyophilized liposome formulations and method
CA2584279C (en) * 2004-11-05 2015-01-27 Index Pharmaceuticals Corporation Compositions and methods for stabilizing liposomal drug formulations
TW200618820A (en) * 2004-11-05 2006-06-16 Alza Corp Liposome formulations of boronic acid compounds
KR100651728B1 (ko) * 2004-11-10 2006-12-06 한국전자통신연구원 정착기를 갖는 전자 소자용 화합물 및 이를 포함하는 전자소자와 이들의 제조 방법
US20070298094A1 (en) * 2004-11-18 2007-12-27 Terumo Kabushiki Kaisha Medicinal Composition, Preparation and Combined Preparation
WO2006069344A2 (en) * 2004-12-22 2006-06-29 Rutgers, The State University Of New Jersey Controlled release hydrogels
US20070254019A1 (en) * 2006-03-15 2007-11-01 William Zamboni Method for treating brain cancer
WO2007127839A2 (en) * 2006-04-26 2007-11-08 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for convection enhanced delivery of high molecular weight neurotherapeutics
US20080081051A1 (en) * 2006-09-28 2008-04-03 Robert Sabin Method of manufacturing anti-tumor and anti-viral compositions
BRPI0717800A2 (pt) * 2006-10-06 2014-09-09 Politechnic Inst Univ New York COMPOSIÇÃO DE LIPOSSOMAS SENSÍVEIS AO pH
US20100047334A1 (en) * 2006-10-06 2010-02-25 Sofou Stavroula Ph sensitive liposome compositions for controlling surface topography and binding reactivity in functionalized liposomes
JP5080779B2 (ja) * 2006-10-25 2012-11-21 テルモ株式会社 リポソーム製剤の製造方法
WO2008070009A2 (en) * 2006-12-01 2008-06-12 Alza Corporation Treating solid tumors and monocytic leukemia using topoisomerase inhibitors in liposomes
EP1932517A3 (en) * 2006-12-11 2008-07-16 Universiteit Utrecht Holding B.V. Liposomes containing a polyphenol derivative such as caffeic acid and a method of post-loading thereof
WO2008079240A1 (en) * 2006-12-19 2008-07-03 Alza Corporation Use of liposome-entrapped agents for treating tumors
CN101209243B (zh) * 2006-12-29 2010-12-08 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 一种脂质体药物及其制备方法
US20100166843A1 (en) * 2007-02-01 2010-07-01 Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A. Pharmaceutical composition comprising a campothecin derivative
CA2708028A1 (en) 2007-12-05 2009-06-11 Marval Biosciences, Inc. Nano-scale contrast agents and methods of use
DE102008036227A1 (de) * 2008-08-02 2010-02-04 Volkswagen Ag Verstellkinematik für eine Armlehne
CN101601642A (zh) * 2009-06-30 2009-12-16 沈阳药科大学 一种囊泡类给药系统及其应用
US11357728B2 (en) 2009-10-26 2022-06-14 Cspc Zhongqi Pharmaceutical Technology (Shijiazhuang) Co., Ltd. Liposome having inner water phase containing sulfobutyl ether cyclodextrin salt
CN102596178B (zh) 2009-10-26 2014-12-03 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 具有磺丁基醚环糊精盐内水相的脂质体
CN102271659B (zh) * 2009-12-03 2013-09-18 江苏恒瑞医药股份有限公司 伊立替康或盐酸伊立替康脂质体及其制备方法
US20110237686A1 (en) 2010-03-26 2011-09-29 Cerulean Pharma Inc Formulations and methods of use
JP2014506922A (ja) * 2011-03-01 2014-03-20 ティーオー − ビービービー ホールディング ベスローテン フェンノートシャップ 難水溶性物質の高度なアクティブリポソームローディング
US9717724B2 (en) 2012-06-13 2017-08-01 Ipsen Biopharm Ltd. Methods for treating pancreatic cancer using combination therapies
AU2013202947B2 (en) 2012-06-13 2016-06-02 Ipsen Biopharm Ltd. Methods for treating pancreatic cancer using combination therapies comprising liposomal irinotecan
CN103655477B (zh) * 2012-09-03 2017-06-23 唐为钢 一种恩替卡韦高密度脂蛋白包封制剂及其制备方法和用途
EP3470061A1 (en) 2012-11-20 2019-04-17 Spectrum Pharmaceuticals, Inc. Improved method for the preparation of a dosage of liposome encapsulated vincristine for therapeutic use
US10220095B2 (en) * 2013-03-15 2019-03-05 Taiwan Liposome Company, Ltd Controlled drug release liposome compositions and methods thereof
JP2016518140A (ja) 2013-05-03 2016-06-23 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア Ｉ型インターフェロンの環状ジヌクレオチド誘導法
US9919002B2 (en) 2013-10-21 2018-03-20 North Carolina State University Methods and constructs for compound delivery
CN104367550A (zh) * 2014-11-18 2015-02-25 南京华威医药科技开发有限公司 一种贝洛替康长循环纳米脂质体及其制备方法
US11318131B2 (en) 2015-05-18 2022-05-03 Ipsen Biopharm Ltd. Nanoliposomal irinotecan for use in treating small cell lung cancer
US10123973B2 (en) * 2015-06-11 2018-11-13 Mashhad University Of Medical Science Liposome composition for cancer treatment
TWI678213B (zh) 2015-07-22 2019-12-01 美商史倍壯製藥公司 用於長春新鹼硫酸鹽脂質體注射之即可使用的調配物
EP3337467B1 (en) 2015-08-20 2020-12-09 Ipsen Biopharm Ltd. Combination therapy using liposomal irinotecan and a parp inhibitor for cancer treatment
IL257149B1 (en) 2015-08-21 2024-07-01 Ipsen Biopharm Ltd Methods for treating pancreatic cancer metastases using combined treatments including liposomal irinotecan and oxaliplatin
EP3360577A4 (en) * 2015-10-07 2019-06-12 Ensuiko Sugar Refining Co., Ltd. LIPOSOME COMPRISING A TAXANE COMPOUND
CA3001467A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Ipsen Biopharm Ltd. Stabilizing camptothecin pharmaceutical compositions
BR112019007844A2 (pt) 2016-11-02 2019-07-16 Ipsen Biopharm Ltd tratamento de câncer gástrico usando terapias de combinação compreendendo irinotecano lipossômico, oxaliplatina, 5-fluoroacila (e leucovorina)
CA3058127C (en) 2017-03-31 2022-07-05 Fujifilm Corporation Liposome composition and pharmaceutical composition
TW202015658A (zh) 2018-06-20 2020-05-01 日商富士軟片股份有限公司 包含內含藥物之脂質體組成物及免疫檢查點抑制劑之組合醫藥
EP3861987A4 (en) 2018-10-01 2021-09-15 FUJIFILM Corporation COMBINATION DRUG CONTAINING A LIPOSOME COMPOSITION ENCAPSULATING A DRUG AND A PLATINUM PREPARATION
TW202313032A (zh) 2021-05-24 2023-04-01 日商富士軟片股份有限公司 處置劑
CN117440810A (zh) 2021-05-24 2024-01-23 富士胶片株式会社 抗肿瘤剂

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1270198A (en) * 1984-08-08 1990-06-12 Marcel B. Bally Encapsulation of antineoplastic agents in liposomes
US5244903A (en) * 1987-03-31 1993-09-14 Research Triangle Institute Camptothecin analogs as potent inhibitors of topoisomerase I
IL91664A (en) * 1988-09-28 1993-05-13 Yissum Res Dev Co Ammonium transmembrane gradient system for efficient loading of liposomes with amphipathic drugs and their controlled release
US5013556A (en) * 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
DE4119981C1 (ko) 1991-06-18 1993-01-21 Fa. Carl Freudenberg, 6940 Weinheim, De
US5552156A (en) 1992-10-23 1996-09-03 Ohio State University Liposomal and micellular stabilization of camptothecin drugs
US5395619A (en) * 1993-03-03 1995-03-07 Liposome Technology, Inc. Lipid-polymer conjugates and liposomes
WO1994026253A1 (en) 1993-05-19 1994-11-24 The Liposome Company, Inc. Liposome having a multicomponent bilayer which contains a bioactive agent as an integral component of the bilayer
EP0721328A4 (en) 1993-09-27 1997-09-17 Smithkline Beecham Corp CAMPTOTHECIN FORMULATIONS
ES2208946T3 (es) 1996-08-23 2004-06-16 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Liposomas que contienen un compuesto de cisplatino.
TW520297B (en) * 1996-10-11 2003-02-11 Sequus Pharm Inc Fusogenic liposome composition and method
US6056973A (en) * 1996-10-11 2000-05-02 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic liposome composition and method of preparation
EP0949906A4 (en) * 1996-10-22 2004-11-24 Hermes Biosciences Inc LIPOSOMES LOADED WITH ACTIVE SUBSTANCE AND THEIR PRODUCTION METHOD
US5837282A (en) 1996-10-30 1998-11-17 University Of British Columbia Ionophore-mediated liposome loading
BR9812316A (pt) * 1997-09-16 2001-03-20 Nexstar Pharmaceuticals Inc Formulações de camptotecina lipossÈmica
ATE238039T1 (de) * 1998-09-16 2003-05-15 Alza Corp In liposomen eingeschlossene topoisomerase inhibitoren

Also Published As

Publication number Publication date
EP1121102B1 (en) 2003-04-23
ES2198970T3 (es) 2004-02-01
ATE238039T1 (de) 2003-05-15
ZA200103063B (en) 2001-10-18
DE69907243T2 (de) 2004-02-19
US20020146450A1 (en) 2002-10-10
NO20011844D0 (no) 2001-04-10
US20030133973A1 (en) 2003-07-17
PT1121102E (pt) 2003-09-30
US7279179B2 (en) 2007-10-09
US6355268B1 (en) 2002-03-12
KR100679906B1 (ko) 2007-02-07
IL142573A0 (en) 2002-03-10
WO2000023052A1 (en) 2000-04-27
CN1323199A (zh) 2001-11-21
CN1205923C (zh) 2005-06-15
US7244449B2 (en) 2007-07-17
NO20011844L (no) 2001-04-10
US6465008B1 (en) 2002-10-15
BR9914601A (pt) 2001-10-23
EP1121102A1 (en) 2001-08-08
NZ511112A (en) 2003-11-28
JP2002527466A (ja) 2002-08-27
CA2346879A1 (en) 2000-04-27
DK1121102T3 (da) 2003-08-11
DE69907243D1 (de) 2003-05-28
US20050106231A1 (en) 2005-05-19
AU774715B2 (en) 2004-07-08
AU1118900A (en) 2000-05-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100679906B1 (ko) 리포솜-엔트랩된 토포이소머라제 억제제
EP1299085B1 (en) Improved liposomal camptothecins and uses thereof
JP4885715B2 (ja) イリノテカン製剤
US7887836B2 (en) Compositions and methods for treating lymphoma
CA2584279C (en) Compositions and methods for stabilizing liposomal drug formulations
JP2024128046A (ja) 安定化カンプトテシン医薬組成物
EP2266537B1 (en) Compositions for treating cancer
AU751439B2 (en) Liposomal camptothecin formulations
KR100387744B1 (ko) 수불용성캄프토테신의지질복합체의동결건조물을포함하는약제학적조성물
JP2003504389A (ja) 凍結／融解ダメージに耐性を有するリポソーム組成物
US6740335B1 (en) Liposomal camptothecin formulations
US20070231379A1 (en) Liposome-entrapped topoisomerase inhibitors
Hao et al. In vitro and in vivo studies of different liposomes containing topotecan
MXPA01003796A (en) Liposome-entrapped topoisomerase inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
AMND Amendment
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E801 Decision on dismissal of amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment
J201 Request for trial against refusal decision
B701 Decision to grant
GRNT Written decision to grant
LAPS Lapse due to unpaid annual fee