CN104367550A

CN104367550A - 一种贝洛替康长循环纳米脂质体及其制备方法

Info

Publication number: CN104367550A
Application number: CN201410657448.0A
Authority: CN
Inventors: 包金远; 张孝清; 程晓佳; 蒋玉伟
Original assignee: Nanjing Huawe Medicine Technology Development Co Ltd
Current assignee: Nanjing Huawe Medicine Technology Development Co Ltd
Priority date: 2014-11-18
Filing date: 2014-11-18
Publication date: 2015-02-25

Abstract

本发明提供了一种贝洛替康长循环纳米脂质体，包含药物活性物质贝洛替康或其药学上可接受的盐、磷脂、胆固醇和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-X，其中X为叶酸或马来酰亚胺，所述药物活性物质与胆固醇、磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-X重量比例为1～2：0～8：6～15：2～8，聚乙二醇的分子量为800～2000。本发明制备方法简单，药物包封率较高，具有良好稳定性，在储存期内足够稳定，而且具有明显的缓释效应。

Description

一种贝洛替康长循环纳米脂质体及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种贝洛替康脂质体组合物及其制备方法，具体涉及一种贝洛替康长循环纳米脂质体及其制备方法。

背景技术

喜树碱是从植物喜树中分离得到的一种天然生物碱，该化合物及其衍生物因可以抑制拓扑异构酶（I）而具有抗肿瘤活性。目前，已有若干种喜树碱类衍生物应用于抗肿瘤临床，其中，式（I）化合物(20S)-7-[2-( 异丙基氨基) 乙基] 喜树碱盐酸盐，即贝洛替康，是拓扑异构酶Ⅰ抑制药，已用于治疗小细胞肺癌和卵巢癌。

贝洛替康（belotecan，CKD-602、CamtobellTM），由韩国钟根堂制药公司研发，本品是半合成喜树碱类似物-（20s）-7-（2-异丙氨基）-乙基喜树碱盐酸盐，易溶于水，可制成注射液，2004年在韩国首次上市，用于治疗卵巢癌和小细胞肺癌。由美国ALZA生物工程公司研制了贝洛替康长循脂质体制剂（S-CKD602、STEALTHTM）是贝洛替康经聚乙二醇修饰所制得的脂质体制剂，可在体内缓慢释放出贝洛替康，使其疗效延长，并可提高靶向性。

脂质体(liposomes)也称为微脂粒，是一种具有靶向给药功能的新型药物制剂。脂质体是利用磷脂双分子层膜所形成的囊泡包裹药物分子而形成的制剂。由于生物体质膜的基本结构也是磷脂双分子层膜，脂质体具有与生物体细胞相类似的结构，因此有很好的生物相容性。可实现药物体内靶向递送，具有延长药物作用时间、增加药物的体内外稳定性、降低药物毒性，增强药理作用等诸多优点。

制备脂质体的方法主要有薄膜分散法、逆相蒸发法、冷冻干燥法、注入法、超声波分散法等。目前脂质体用于包载脂溶性药物较好，而包载水溶性药物时脂质体时往往存在包封率较低，通常达不到80％包封率的最低要求。

采用pH梯度法等主动载药技术可以提高脂质体对于水溶性药物包载量，但是主动载药技术操作较为繁琐，重现性差。

此外，大多数制备方法得到的脂质体一般是呈液体状态，其保存、运输等均比较困难，易受环境条件变化的影响而出现絮凝、聚团、沉淀、药物渗漏等问题，且在体内作用时间

较短，影响制剂的有效、安全和稳定。

本发明针对以上技术问题提供了一种新型的贝洛替康脂质体，与现有技术相比，本发明克服了脂质体的如上缺陷，制备方法简单，药物包封率较高，具有良好稳定性，在储存期内足够稳定，具有较好的缓释效应的贝洛替康长循环纳米脂质体。

发明内容

本发明的第一目的是提供一种贝洛替康长循环纳米脂质体。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种贝洛替康长循环纳米脂质体，包含药物活性物质贝洛替康或其药学上可接受的盐、磷脂、胆固醇和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-X，其中X为叶酸或马来酰亚胺，所述的脂质体的粒径为100～500nm；所述药物活性物质与胆固醇、磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-X重量比例为1～2：0～8 ：6～15：2～8，聚乙二醇的分子量为800～2000。

进一步地，所述磷脂选自1,2-二油酰基卵磷脂、甘油磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺或2-油酰-1-棕榈锡甘油-3-磷酸胆碱中的一种或几种。

本发明的第二个目的在于制备本发明中的贝洛替康长循环纳米脂质体，具体实施方案包括以下步骤：

步骤一、采用注入法制备长循环空白脂质体：将磷脂、胆固醇和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-X按照一定质量比溶于甲醇或乙醇中形成溶液A，其中X为叶酸或马来酰亚胺，胆固醇、磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-X重量比例为0～8：6～15：2～8；在水浴搅拌下将溶液A注入浓度为0.20-0.35mol/L的硫酸铵溶液水化介质中；20～40℃条件下搅拌5～8h，形成空白脂质体；所得的空白脂质体的粒径为100～500nm。

步骤二、将贝洛替康药物浓度按磷脂/贝洛替康质量比为1～2：6～15 配制成贝洛替康溶液加入空白脂质体中，pH调节剂调节外相pH7.0～8.0，在20～35℃孵育10～15 min载药即得贝洛替康长循环纳米脂质体。

其中步骤一中，所述磷脂选自1,2-二油酰基卵磷脂、甘油磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺或2-油酰-1-棕榈锡甘油-3-磷酸胆碱中的一种或几种，所述的聚乙二醇的分子量为800～2000。

二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-X为二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-聚乙二醇或者二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-叶酸中的一种。

实施本发明时，可以根据根据实际需要将所得脂质体定容、除菌、分装：调整脂质体药物浓度，定容，过滤除菌，灌封于小瓶中，得脂质体注射液；或者根据需要在步骤一形成的水化介质中加入甘露醇、葡萄糖等载体物质作为冻干保护剂，将所得的贝洛替康长循环纳米脂质体在液氮或低温装置冻结，然后在冻干机上干燥即可获得该脂质体的冻干粉针剂；在步骤二中pH 调节剂为NaHCO3 水溶液或磷酸盐缓冲液。

硫酸铵在脂质体的制备时加入，但在制备过程中大部分被去除，因此只有很少量保存到最终制剂中。

本发明的有益效果是：

1、本发明由于采用纳米长循环脂质体作为药物载体，结合贝洛替康制备而成，因而能够明显提高药物的体内外稳定性，延长药物作用时间，提高靶向性。

2、本发明贝洛替康纳米长循环脂质体体外释放效果较好，具有明显的缓释效应，表明制得的长循环脂质体具有缓释释放药物的特征，可以延长药物在体内的作用时间，有利于肿瘤病灶部位的吸收体中的药物持续释放，可延长在血液中的循环时间，提高药物有效成份的利用率。

3、本发明用硫酸铵梯度法主动载药，解决了水溶性药物包封率低的问题。

对本发明贝洛替康长循环纳米脂质体及其制剂的质量进行检查，结果表明，贝洛替康长循环纳米脂质体形态粒径分布均一，包封率达92%以上，渗漏率低，稳定性良好。

具体实施方式

以下实施例进一步描述本发明，但是，这些实施例仅是用于说明本发明，而不是对本发明范围的限制。

实施例 1

处方：

制备工艺：

空白脂质体的制备：

称取处方量的1,2-二油酰基卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-马来酰亚胺、胆固醇溶于50ml无水乙醇中，20～30℃充分溶解后注入60ml的0.35mol/L的硫酸铵水溶液中，并于20～30℃水化3h后，将其加入微射流仪器中，以15000psi的压力循环5次，得到粒径100nm～400nm的空白脂质体。

载药过程：

配制50mg/ml的贝洛替康水溶液20ml，加入上述空白脂质体中，调节外相pH为7～7.5，于35℃孵育15分钟后即可得到载药的贝洛替康长循环脂质体。通过切向流超滤方法将脂质体外水相中未包封的游离药物及硫酸铵去除。

本实施例所得贝洛替康长循环纳米脂质粒径在100～400nm，表面光滑圆整，且分布均匀，载药量为9.35%。

实施例 2

处方：

制备工艺：

空白脂质体的制备：

称取处方量的2-油酰-1-棕榈锡甘油-3-磷酸胆碱、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-叶酸、胆固醇溶于50ml甲醇中，20～30℃充分溶解后注入100ml的0.20mol/L的硫酸铵水溶液中，并于30～40℃水化1h后，将其加入微射流仪器中，以15000psi 的压力循环5次，得到粒径200nm～500nm的空白脂质体。

载药过程：

配制50mg/ml的贝洛替康水溶液20ml，加入上述空白脂质体中，调节外相pH为7～7.5，于35℃孵育15分钟后即可得到载药的贝洛替康长循环脂质体。通过切向流超滤方法将脂质体外水相中未包封的游离药物及硫酸铵去除去除。

本实施例所得贝洛替康长循环纳米脂质粒径在200～500nm，表面光滑圆整，且分布均匀，载药量为9.23%。

实施例 3

处方：

贝洛替康	2g
		磷脂酰乙醇胺	6g
胆固醇	5g
		二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇800-叶酸	6g

制备工艺：

空白脂质体的制备：

称取处方量的2-油酰-1-棕榈锡甘油-3-磷酸胆碱、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇800-叶酸、胆固醇溶于50ml甲醇中，20～30℃充分溶解后注入100ml的0.20mol/L的硫酸铵水溶液中，并于30～40℃水化1h后，将其加入微射流仪器中，以15000psi的压力循环5次，得到粒径100nm～500nm的空白脂质体。

载药过程：

配制50mg/ml的贝洛替康水溶液40ml，加入上述空白脂质体中，调节外相pH为7.5～8.0，于35℃孵育15分钟后即可得到载药的贝洛替康长循环脂质体。通过切向流超滤方法将脂质体外水相中未包封的游离药物及硫酸铵去除去除。

本实施例所得贝洛替康长循环纳米脂质粒径在300-400nm，表面光滑圆整，且分布均匀，载药量为9.51%。

实施例4 贝洛替康长循环纳米脂质体体外释放测定

将实施例1、2和3制得的贝洛替康长循环纳米脂质体体外释放测定，计算体外累积释放度。以PBS（pH 7.0）为释放介质，分别精密吸取一定量贝洛替康脂质体和注射剂溶液( 含主药13mg)，加至经预处理过的透析袋（截留分子量1000）中，将袋口扎紧，固定于桨上，置于装有500mL PBS 缓冲液的溶出杯中，37℃恒速100r/min，定时吸取4mL透析液，并及时补充等量恒温的PBS。分别测定3批样品，并与贝洛替康溶液比较，其体外释放曲线如说明书附图图1所示。

由图1可知，贝洛替康溶液释放较快，1h 释放35% 左右，9h 即释放90%左右，24h即释放完全；而脂质体释放较慢，2h 释放20% 左右，具有突释效应，12h 释放60%左右，12h 后进入释放相对平稳的缓释相，48h释放率为75%左右，72h累计释放率达到95%，具有明显的缓释效应，表明制得的长循环脂质体具有缓释释放药物的特征，可以延长药物在体内的作用时间，有长效的作用。

实施例4 贝洛替康脂质体的组合物的稳定性试验

该试验旨在考察实施例中制备的长循环脂质体样品的贮存稳定性和使用稳定性。

将实施例1、2、3 制得贝洛替康脂质体组合物在40℃下贮存1个月至3个月。在贮存后，使用HPLC测试制剂的稳定性。

将实施例1、2、3 制得的干燥的贝洛替康脂质体组合物按照以下方法测试包封率：

精密量取定量稀释后的贝洛替康脂质体1.00 mL 上柱,进行分离。以pH 7.0 的PBS 为洗脱介质, 接取28～70mL洗脱液, 置于50mL容量瓶中,并用PBS定容, 测定吸光度, 按以下公式计算包封率:

包封率=（W_总—W_游）/W _总×100%

式中,W_总系系统中的总药量;W_游系未包封的游离药物量。

用测定包封率的方法测定脂质体包封量，与贮存前包封的药量比较，并计算渗漏率。

贝洛替康脂质体的组合物的稳定性试验试验结果如下表所示：

试验结果发现，贝洛替康脂质体组合物的稳定性较好，包封率较高，在储存的过程中含量和包封率均未明显下降，具有较好的贮存稳定性和使用稳定性，同时其渗漏率为均为超过11%。

Claims

1.一种贝洛替康长循环纳米脂质体,其特征在于包含药物活性物质贝洛替康或其药学上可接受的盐、磷脂、胆固醇和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-X，其中X为叶酸或马来酰亚胺，所述的脂质体的粒径为100～500nm。

2.如权利要求1所述的贝洛替康长循环纳米脂质体，其特征在于其中所述药物活性物质与胆固醇、磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-X重量比例为1～2：0～8 ：6～15：2～8，所述的聚乙二醇的分子量为800～2000。

3.如权利要求1所述的贝洛替康长循环纳米脂质体，其特征在于所述磷脂选自1,2-二油酰基卵磷脂、甘油磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺或2-油酰-1-棕榈锡甘油-3-磷酸胆碱中的一种或几种。

4.一种贝洛替康长循环纳米脂质体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：步骤一、将磷脂、胆固醇和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-X溶于甲醇或乙醇中形成溶液A，其中胆固醇、磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-X重量比例为0～8：6～15：2～8；在水浴搅拌下将溶液A注入硫酸铵溶液水化介质中；20～40℃条件下搅拌5～8h，形成空白脂质体；步骤二、将贝洛替康药物浓度按磷脂/贝洛替康质量比为1～2：6～15 配制成贝洛替康溶液加入空白脂质体中，pH调节剂调节外相pH7.0～8.0，在20～35℃孵育10～15 min载药即得贝洛替康长循环纳米脂质体。

5.如权利要求4所述的贝洛替康长循环纳米脂质体的制备方法，其特征在于硫酸铵溶液水化介质的浓度为0.20-0.35mol/L。

6.如权利要求4所述的贝洛替康长循环纳米脂质体的制备方法，其特征在于所述的步骤一中得到的空白脂质体的粒径为100～500nm。