KR20000016635A

KR20000016635A - 프로테아제 효소와 산성 완충액 복합물 및 이의용도

Info

Publication number: KR20000016635A
Application number: KR1019980710231A
Authority: KR
Inventors: 스콧 제이. 노르톤
Original assignee: 비숍 미첼 에이.; 액티브 올가닉스 인코퍼레이션
Priority date: 1996-06-13
Filing date: 1997-06-13
Publication date: 2000-03-25
Also published as: ES2383682T3; WO1997047283A1; EP1598057A1; DE69731955T2; DE69731955D1; ATE552891T1; DK0921785T3; ES2235239T3; EP0921785A4; JP2000512298A; US6569437B1; JP2007302680A; PT921785E; US5976556A; AU3396597A; EP1598057B1; EP0921785B1; ATE284670T1; JP4681087B2; EP0921785A1

Abstract

본 발명은 피부 질환의 치료에 유용한 적어도 하나의 산성 프로테아제, 산성 완충액으로 구성되고, 산성 완충액은 산과 제약학적 또는 화장용 사용가능한 담체로 구성되는 조성물에 관계한다.

Description

프로테아제 효소와 산성 완충액 복합물 및 이의용도

사람 피부의 상피 층의 박리를 유도하면, 상피 세포의 재생 속도를 증가시키는 것으로 알려져 있다(E. Phillips, 1995, U.S. Pat. No. 5,431,913; W.P. Smith, 1994, Cosmetics and Toiletries 109:41-8). 사람의 상피는 일정한 속도로 재생되는 여러 층으로 된 비늘 모양의 상피 세포로 구성된다. 새로운 세포는 처음에는 기저 층에서 형성되는데 기저 층은 상피의 가장 안쪽에 있는 막이다. 이와 같은 세포는 새로 만든 세포가 생성되면 대체되고, 결과적으로 상피의 외층인 각질층으로 이동되는데, 각질층은 통상 2 내지 3주마다 박리된다. 일반적으로 사람 피부의 건강 및 외양은 주로 이와 같은 공정의 속도에 따라 달라진다.

노화 또는 환경에 노출되는 등의 특정 상황 또는 상태에 의해 이와 같은 정상적인 과정을 방해할 수 있고, 이는 세포 재생 속도를 일반적으로 감소시킨다(VanScott and Yu, 1984, J. Am. Acad. Dermatol. 11:867-79). 사람의 나이가 증가함에 따라 기저 층으로부터 세포층이 각질층으로 이동되는데 필요한 시간이 증가되기 때문에, 상피 재생 속도는 감소된다. 일반적으로 20살 정도의 사람에서, 상피의 바깥층 세포는 평균 2주마다 바뀌는데 좀 더 성숙한 세포의 이동 주기는 약 2배 정도 길어진다(E. Phillips, 1995, U.S. Pat. No. 5,431,913). 노화로 인하여 세포 재생 속도가 감소되는데 있어서, 태양광 및 다른 기후 조건 등에 피부가 노출되는 등의 환경적인 요인에 의해 이와 같은 속도 감소를 더욱 악화시킨다(K.E. Burke, 1990, Postgraduate Medicine 88(1):207-27). 세포의 재생 속도가 감소되면, 피부의 최외층에 있는 세포가 환경 조건에 노출되는 시간이 길어지게 되고, 이는 추가 손상 또는 손상을 누적시키게 된다. 특정 연구에서는 상피의 이동 속도가 감소되는 것은 각질 세포 응집을 증가시키는 것과 관련이 있다(VanScott and Yu, 1989, Cutis 43:222-28).

상피 층의 세포는 반교소체, 교소체, 갭 정션, 글리코자미노글리칸, 프로테오글리칸과 같은 단백질 성분 및 피부에 있는 다른 성분에 의해 서로 연결되어 있는데, 이들 모두는 서로 그리고 세포 성분과 결합하는 능력이 있다. 이와 같은 상피 세포들이 서로 결합하는 것은 "각질 세포간의 응집"으로 설명하고, 응집 강도는 수화 및 pH와 같은 인자에 의해 영향을 받는다. 각질세포간에 응집이 증가되면 각화가 과도하게 일어나고, 이로써 피부가 두꺼워지고, 가끔은 상피 세포가 유지되어 건조되거나 비늘이 떨어지게 된다. 응집과 피부 이동간에 균형이 이루어지면 어린 피부의 정상적인 원기회복을 할 수 있고, 이들 인자간에 균형이 깨지면, 피부가 노화되고, 거칠어진다. 세포 재생 속도 및 각질세포간의 응집간의 균형을 이루는 국소 활성 성분에 대한 연구가 현재 피부 연구 부분에 주를 이룬다(VanScott and Yu, 1984, J. Am. Acad. Dermatol. 11:867-79).

이 분야에서 최근에 진전된 것으로는 이에 대해 전망을 보여주는 다수의 국소 활성 산성 화합물에 대해 보고된 것이다(Yu et al., 1978, U.S. Pat. No. 4,105,783; Yu et al., 1982, U.S. Pat. No. 4,363,815). 이와 같은 상선 화합물로 장시간 치료를 하면 상피 세포 재생 속도를 증가시키게 된다. 상피에 활성이 있는 것으로 공지된 이와 같은 산성 성분 가령, 분자량이 적은 하이드록시 또는 케토산 또는 이의 에스테르는 각질세포분해 또는 피부 탈락제로써 효과에 대해 잘 알려져 있다. 이와 같은 고농도의 산(가령, 살리실산 및 글리콜산) 및 트리클로로아세트산과 같은 다른 산들도 작용 부위에서 조직을 파괴하는 능력이 있는 것으로 공지되어 있다(W.L. Epstein, 1990, in Irritant Contact Dermatitis, Jackson and Glodner, eds., Marcel Decker, Inc., New York and Basel, pp. 127-165; Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, ed., Sixteenth Ed., Mack Publishing, Inc., Easton, PA., 1980). 낮은 농도에서, 이들 산은 케라틴이 풍부한 각질층에서 죽은 세포를 느슨하게 하고, 각질세포간의 응집을 방해하는 하는 능력이 있어, 피부가 떨어지도록 한다. 이와 같은 활성은 "케라틴분해 활성"이라고 한다(Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, ed., Sixteenth Ed., Mack Publishing, Inc., Easton, PA., 1980; W.P. Smith, 1994, Cosmetics and Toiletries 109:41-8).

대부분의 케라틴 분해제는 전술한 것을 포함하는 피부 자극제이다. 일부 케라틴 분해제는 다른 것에 비해 다소 유익한 효과가 있으나, 각 산의 치료요법적 지수를 비교하면 다른 것에 비해 장점이 거의 없는 것으로 나타난다. "치료요법 지수"는 성분의 케라틴 분해 효과와 주어진 성분의 농도에서 피부 자극 수준을 고려하여 이들 성분의 등급을 메기는 정확한 방법이다. 이들 성분이 비록 낮은 수준(4% 이상의 산 농도)으로도 상당한 피부 자극을 일으킨다. 이들 성분을 비록 적은 수준으로 이용을 하면 자극을 줄일 수 있으나, 일반적으로 케라틴 분해 효과도 감소한다. 또한, 산을 장시간 이용을 하면, 세포 재생을 유도하는 효과도 감소한다(W.P. Smith, 1994, Cosmetics and Toiletrics 109:41-8). 이와 같은 단점으로 자극을 주지 않는 농도에서 이들 산의 케라틴 분해 효과를 강화시키는 방법이 필요하다.

국소 치료법에서 단백질 분해 효소를 이용하여 화상으로 인한 반흔을 제거하고, 항균 치료에 부속물로 일부 이용되었다(G. Rodeheaver, 1975, Am. J. Surg. 129(5):537-544). 이와 같은 효소는 파파야(파파인), 무화과(피신), 파인애플(브로멜라닌)과 같은 식물기원에 일반적으로 한정된다. 이와 같은 추출물을 포함하고 단백질 분해 작용에 의해 외측 상피층의 제거를 강화시키도록 촉진시키는 화장용 조제물이 시판된다. pH에 관련된 기질 특이성 및 스펙트럼 활성은 이들 조제물의 단백질 분해 작용이 외측 상피층에서 케라틴 분해 활성을 유도하나. 국소 치료요법에 이미 이용된 단백질 효소를 이용할 때 단점이 항상 나타난다.

미용계에 현재 이용하는 이들 효소(가령, 파파인, 브로멜라민, 피신)은 일반적으로 pH 3-9의 광역에서 단백질 분해 활성을 나타낸다(Glazer and Smith, 1971, in The Enzymes, Vol. 3, P. Boyer, ed., Academic Press, New York, pp. 501-546). 아마도 이들 식물에서 유도한 효소를 광역의 pH 범위에서 이용하는 것은 장시간 피부의 노출과 관련된 문제점들중 일부와 연관이 있는 것으로 보인다. 사람 상피 시스템에는 피부의 층간에 pH차가 유지되고, 바깥층은 평균 pH가 약 5.5인 것으로 알려져 있다(W.P. Smith, 1994, Cosmetics and Toiletries 109:41-48). 상피 연속 층의 pH는 깊이에 따라 증가되어, 피부 층에서는 생리학적 pH(약 pH 7.4)에 근접한 최종 pH를 가진다. 전술한 식물에서 유도한 효소는 이와 같은 pH차에 대해서도 활성이 유지되기 때문에, 이들 효소를 피부에 이용을 할 경우에 이들 식물 효소의 활성에 대해 pH를 조절할 필요는 없다.

단백질 분해 효소를 국소 이용한 것으로부터 치료요법 활성 정도는 이들 효소의 고유 촉매 특징에 의해 조절된다. 전술한 것과 같은 단백질분해 효소의 pH(pH 3-9)와 연관하여, 이들 단백질 분해 활성 범위로 인하여, 생성물 제조 시에 단백질 분해 활성에 대해 거의 조절을 하지 않아도 된다(Glazer and Smith, 1971, in The Enzymes, Vol. 3, P. Boyer, ed., Academic Press, New York, pp. 501-546). 이들 효소를 수득하는 식물은 가려움, 부종, 물집이 생기는 등의 증상을 가지는 자극제 접촉 피부염을 일으킨다. 이들 효소는 각질세포간에 응집이 상당히 감소됨에 따라 이들 증상이 주로 나타나는 것으로 가정하였다(W.L. Epstein, 1990, in Irritant Contact Dermatitis, Jackson and Glodner, eds., Marcel Decker, Inc., New York and Basel, pp. 127-165). 미용계에서 현재 이용하는 효소는 상피의 모든 층을 통하여 기질-의존성 단백질 분해 활성을 나타낸다. 각질세포간의 응집을 안정화시키는데 기여하는 상피 단백질의 단백질 분해가 조절이 안되면, 이와 같은 각질 세포간의 응집을 상당히 감소시키고, 이는 결과적으로 자극을 일으키는 것이다. 세포가 가장 처음으로 재생되는 상피의 기저 층에서 단백질 분해 공격을 하면, 상피 세포 재생 속도가 균형을 잃게 된다. 포유류의 피부 안으로 이들 식물 효소를 주사하면 피부에 부종이 생기는 것을 알 수 있어, 이와 같은 가능성을 뒷받침해준다(Morimoto et al., 1987, Ensho 7(6):563-567). 이와 같은 발견을 이용하여, 피부학 연구에서 실험용 부종을 만든다. 또한, 전술한 자극제 접촉 피부염의 증상은 국소에 현재 이용을 하는 상피 활성이 있는 가장 효과를 가지는 농도의 산성 성분에 의해 유도되는 것과 비슷하다. 따라서, 국소 이용에 대해 단백질 분해 활성에 대해 더 조절을 하는 방법을 이용하면, 이와 같은 부작용이 없이 원하는 결과를 얻을 수 있다.

3도 화상에서 볼 수 있는 심각한 회저 형성을 분해하는데 이용되는 몇 가지 산과 펩신과 같은 단백질 분해 효소를 포함하는 조성물에 대해서는 Soviet Union Patent No. 439288, 1974에서 기록을 하고 있다. 이 조성물이 상피 박리를 강화시키는데 효과가 있다고는 기재된 바가 없고, 이들 조성물은 제한된 시간 안에서만 유효하다고 기술하고 있다.

본 출원의 배경으로 언급한 문헌은 이들 문헌이 본 발명에 대한 선행 기술로 간주한다는 의미가 아니다.

3. 발명의 요약

본 발명은 비정상적인 피부 질환, 질병, 상태를 치료하는데 유용하고, 또는 피부 결 및 외양을 개선시키고 또는 피부 박리를 개선시키고 또는 상피 세포 재생을 강화시키는데 이용할 수 있는 신규한 제약학적 조성물 또는 화장용 조성물에 관계한다. 조성물은 적어도 하나의 산성 프로테아제와 산성 완충액으로 구성된다. 본 발명의 목적을 위해, 산성 프로테아제는 피부 표면의 평균 pH이하에서 펩티드성 가수분해(단백질 분해) 활성을 나타내는 효소로써, 피부 표면의 평균 pH와 동일한 또는 그 이상에서는 활성이 없다. 사람의 피부 표면의 pH는 5.5이다(W.P. Smith, 1994, Cosmetics and Toiletries 109:41-8). 남자의 경우에, 피부 표면의 평균 pH는 약 5.3이고, 여자의 경우는 약 6이다(Ohman and Vahlquist, 1994, Acta Dermato-Venereol. 74(5):375-379). 본 발명의 목적에서, 피부 표면의 평균 pH(약 5.5)에는 다른 것에 추가하여, 성별 특정 변수를 포함하는데, 남자의 피부 평균 pH약 pH가 5.5는 약 5.3의 범위를 포함하고, 여자의 경우에는 최고 6을 포함한다. 좀 더 바람직하게는, 피부 표면의 평균 pH 와 동일한 또는 그 이상에서(약 pH 5.3 - 6), 본 발명에서 이용할 수 있는 산성 프로테아제는 피부 표면의 평균 pH이하인 이들의 최적 pH에서 발휘하는 이들의 활성의 약 10%미만을 발휘한다.

산성 프로테아제는 아포엔자임(apoenzyme), 홀로엔자임(holoenzyme), 이소엔자임(isoenzyme), 자이모젠(zymogen)형이 될 수 있다. 조성물에 산성 프로테아제 성분은 최종 조성물의 중량에 약 0.001% 내지 약 50%가 존재할 수 있고, 적절하게는 약 0.1% 내지 약 50%, 가장 바람직하게는 약 1% 내지 약 5%가 된다. 프로테아제는 약 1 내지 약 5,000 HUT units/mg의 특이 활성을 가진다(이는 Food Chemicals CODES, 3rd ed., (1981), pp. 496-497, National Academy Press, Washington, D.C.,의 방법을 기초하여 본 단락 5.1에서와 같이 변형한 방법으로 측정한 것임). 적절하게는 프로테아제는 약 50 내지 약 3000 HUT units/mg의 특이 활성을 가지고, 더욱 바람직하게는 약 500 내지 약 1500 HUT units/mg의 특이 활성을 가진다.

피부에 조성물을 국소적으로 바를 때, 산성 완충액은 피부 표면의 pH를 일시적으로 약 pH 5.5이하로 낮추는데(단, 약 pH 1이하로는 낮추지 않음), 적절하게는 pH 약 2.5 내지 pH 4.5범위로 낮춘다. 산성 완충액 조성물은 적어도 하나의 산과 제약학적 또는 화장품에 사용할 수 있는 담체, 운반체 또는 부형제로 구성된다. 완충액의 산 성분은 하나 이상의 무기 산 또는 하나 이상의 유기산 또는 무기산 또는 유기산의 복합물이 될 수 있다. 산성 완충액은 발한과 같은 자연적인 상피 과정에 의해 시간이 지남에 따라, 피부 표면의 평균 pH로 중화될 가능성이 있다. 산성 완충액이 중화되어, 프로테아제가 비활성화되는데 소요되는 시간은 산성 완충액의 조성에 따라 달라진다. 예를 들면, 산성 완충액에 약산 또는 피부의 상대적인 알칼리성을 중화시키는 약 완충제를 포함하는 경우에 시간이 짧아지고; 강산이 이용되거나 산성 완충액에 더 강한 완충제가 이용되는 경우에는 그 시간이 더 길어진다. 완충액의 산 성분은 하나 이상의 무기산 또는 하나이상의 유기산 또는 무기산 및 유기산 복합물이 될 수 있고, 최종 조성물의 중량의 약 0.001% 내지 약 95%, 바람직하게는 약 0.01% 내지 약 25%, 더욱 바람직하게는 약 1% 내지 약 5%가 존재한다.

본 발명의 조성물을 국소적으로 바른 후에, 피부 표면의 pH를 약 5.5로 복귀시키는데 걸리는 시간을 조절하면, 프로테아제 효소의 활성을 조절할 수 있다. 본 발명의 단백질 분해 활성을 조절함으로써 광역의 pH 단백질분해 효소를 이용하여 생기는 따끔거림, 화끈거림, 수포가 형성되는 등의 선행 기술에서 볼 수 있는 단점 및 합병증 등을 극복할 수 있다. 피부 표면의 pH를 약 5.5로 복귀시키는데 소요되는 시간은 여러 인자에 의해 결정되는데 가령, 피부 타입, 치료를 해야하는 질환 또는 질병, 치료를 받는 환자 피부의 민감성등이 된다. 선행기술에서 볼 수 있었던 단점을 피하기 위해서는, 본 발명의 조성물의 각 적용 시간을 약 4시간 이상을 초과시키지 않도록 하고, 바람직하게는 약 5 분 내지 약 4시간 이내에, 더욱 바람직하게는 약 30분 내지 약 2시간 이내에, 가장 바람직하게는 약 30분 내지 1 시간이내가 좋다.

본 발명의 제약학적 조성물을 피부에 투여하였을 경우에, 비정상적인 생물학적 질환, 상태를 치료하는 또는 예방하는 유익한 효과를 제공한다는 것이다. 이와 같은 비정상적인 상태 또는 질환을 치료 또는 예방하는 효과 또는 장점은 비정상적인 질환 또는 상태의 원인 및 증상이 사라지거나 그 심각성 정도가 감소되게 한다. 비정상적인 질환, 상태의 제거 또는 심각성의 감소는 단기간 또는 장기간이 될 수 있다. 본 발명의 조성물을 투여하여 치료를 하는 이와 같은 비정상적인 상태 또는 질환에는 건성 피부, 심각한 건성 피부, 비듬, 좌창, 각질증, 건선, 습진, 피부 벗겨짐, 주름(고유 및 외부적인 손상에 의한 굵은 주름 및 잔주름), 사마귀, 얼룩진 피부, 과색소착색 피부, 과다 각질 피부, 염증성 피부질환, 노인성 피부 변화, 클렌저가 필요한 피부 및 피부 퇴화 등을 포함하나 이에 국한시키지는 않는다.

또한, 본 발명의 화장용 조성물을 피부에 바를 경우, 비정상적인 생물학적 상태, 질환을 치료 및 예방하는 장점 또는 효과를 필수적으로 제공하지는 않으면서, 피부 결 또는 외양이 개선되고, 상피 탈피 또는 상피 세포 재생을 강화시킨다. 이에 대해, 피부의 결 또는 외양을 개선하고, 상피 탈피 또는 상피 세포 재생을 강화시킨다는 것은 피부가 자연스럽게 보이고 또는 자연적인 느낌을 주어, 피부를 처리 안한 상태보다 더 부드럽게 보이고, 미적인 것을 강화시키고 또는 비정상적인 생물학적 상태, 질환등 원하지 않는 증상을 가려준다는 의미를 포함한다. 여기에는 상피에 일시적인 보습 효과를 제공하는 것도 포함된다. 이와 같은 비정상적인 생물학적 상태 또는 질환에는 건성 피부, 심각한 건성 피부, 비듬, 좌창, 각질증, 건선, 습진, 피부 벗겨짐, 주름(고유 및 외부적인 손상에 의한 굵은 주름 및 잔주름), 사마귀, 얼룩진 피부, 과다 색소 착색 피부, 과다 각질 피부, 염증성 피부질환, 노인성 피부 변화, 클렌저가 필요한 피부 및 피부 퇴화 등을 포함하나 이에 국한시키지는 않는다.

또 다른 구체예에서, 본 발명에는 비정상적인 피부 상태 또는 질환을 치료하는 방법을 포함하는데, 이와 같은 질환에는 건성 피부, 심각한 건성 피부, 비듬, 좌창, 각질증, 건선, 습진, 피부 벗겨짐, 소양증, 노인성 반점, lentigines, 흑색증, 주름(고유 및 외부적인 손상에 의한 굵은 주름 및 잔주름), 사마귀, 얼룩진 피부, 과색소착색 피부, 과다 각질 피부, 염증성 피부질환, 노인성 피부 변화, 클렌저가 필요한 피부 및 피부 퇴화 등을 포함하나 이에 국한시키지는 않는다. 방법은 이러한 상태 및 질환을 가지고 있는 개체의 피부 표면에 pH 5,5이하에서 효소적으로 활성이 있는 산성 프로테아제와 질환을 치료하는 동안에 피부 표면의 pH를 5.5이하로 낮추어주는 산성 완충액으로 구성된 조성물의 효과량을 국소적으로 투여하는 것으로 구성되고, 이때 산성 완충액은 정상적인 상피 과정에 의해 중화되게 된다.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 상피 탈피 또는 상피 세포 재생을 강화시키는 방법을 제공하는데, 이 방법은 개체의 피부 표면적에 pH 5,5이하에서 효소적으로 활성이 있는 산성 프로테아제와 상피 탈피 또는 상피 세포 재생을 강화하는데 효과적인 시간 동안에 피부 표면의 pH를 5.5이하로 낮추어주는 산성 완충액으로 구성된 조성물의 효과량을 국소적으로 투여하는 것으로 구성되고, 이때 산성 완충액은 정상적인 상피 과정에 의해 중화되게 된다.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 피부 결 또는 외양을 개선시키는 방법을 제공하는데, 이 방법은 pH 5.5이하에서 효소적으로 활성이 있는 산성 프로테아제와 피부 결 또는 외양을 개선하는 동안에 피부 표면의 pH를 5.5이하로 낮추어주는 산성 완충액으로 구성된 조성물의 효과량을 국소적으로 투여하는 것으로 구성되고, 이때 산성 완충액은 정상적인 상피 과정에 의해 중화되게 된다.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 피부 위축 효과를 조절하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 pH 5.5이하에서 효소적으로 활성이 있는 산성 프로테아제와 피부 위축 효과를 조절하는 동안에 피부 표면의 pH를 5.5이하로 낮추어주는 산성 완충액으로 구성된 조성물의 효과량을 국소적으로 투여하는 것으로 구성되고, 이때 산성 완충액은 정상적인 상피 과정에 의해 중화되게 된다.

상피 탈피 또는 상피 세포 재생을 강화시키는 적절한 구체예에서, 조성물은 펩신과 유산(乳酸)으로 구성된다. 상피 탈피 또는 상피 세포 재생을 강화하는 이와 같은 적절한 구체예에서, 조성물은 특이 활성이 약 1000HUT Units/㎎인 펩신이 약 중량의 1%, 유산이 중량의 약 3%로 구성된다. 상피 탈피 또는 상피 세포 재생을 강화하는 또 다른 구체예에서, 조성물은 특이 활성이 약 1000HUT Units/㎎인 펩신이 약 중량의 1%, 유산이 중량의 약 1.5%로 구성된다. 또 다른 적절한 구체예에서, 조성물은 펩신이 중량의 1%, 인산이 중량의 3%로 구성된다. 또 다른 구체예에서, 조성물은 펩신이 중량의 약 1%, 구연산이 중량의 약 1%로 구성된다. 또 다른 적절한 구체예에서, 조성물은 펩신이 중량의 1%, 구연산이 중량의 약 3%로 구성된다.

본 발명의 조성물 및 방법은 지금까지 산, α-하이드록시카르복실산, 살리실산, 또는 광역의 pH 프로테아제에 의해 얻을 수 없었던 피부 질환에 제약학적 활성 또는 미용상의 효과가 있음을 설명한다.

3.1 정의

본 발명에서 사용하는 다음과 같은 용어는 다음의 의미를 내포한다.

산성 완충액 ; 산과 제약학적 또는 화장용으로 수용가능한 담체, 운반체, 부형제로 구성된 조성물을 국소적으로 바를 경우에 피부 표면의 pH를 약 5.5이하로 낮추고, 이는 자연적인 피부 과정에 의해 중화되어, 시간이 지남에 따라 피부 표면 의 pH는 정상 pH(5.5)로 복귀된다. 완충액의 산성 성분은 하나 이상의 무기산 또는 유기산 또는 무기 산 및 유기산의 복합물이 될 수 있다.

산성 프로테아제 ; 피부 표면의 정상 pH이하의 pH에서 펩티드 가수분해 활성을 발휘하는 효소로써, 정상 피부 표면의 pH 또는 그 이상의 pH에서는 활성이 상당히 약하고, 가령, pH 5.5 이하에서의 활성을 최고로 하여 비교하였을 경우에, pH 5.5 또는 그 이상에서는 최고 활성의 약 10% 미만이 된다. 산성 프로테아제는 아포엔자임, 홀로엔자임, 이소자임 또는 자이모젠이 될 수 있다.

미용 ; 피부에 조성물을 투여하였을 때, 비정상적인 생물학적 상태 또는 질환을 치료하는 또는 유익한 효과를 주지 않지만, 피부의 결 또는 외양을 개선시키는 조성물로써, 이와 같은 개선에는 포유류의 상피에 일시적인 보습 효과를 제공하는 것을 포함한다.

효과량 ; 상태에 양성적인 변화를 유도하는데에는 충분한 그러나, 심각한 부작용을 야기하는데에는 부족한 조성물의 양을 말한다. 조성물의 효과향은 치료를 받게될 특정 상태, 치료를 받을 개체의 나이 및 신체적인 조건, 치료 기간 및 병행하는 요법의 특징, 이용하는 특정 조성물의 성질, 이용하는 특정 제약학적-수용가능한 담체 또는 화장용 수용가능한 담체 및 당분야에 공지된 유사한 인자 등에 따라 달라진다.

상피 세포 재생 ; 새로운 세포가 기저 층에서 형성되어, 바깥층, 각질층으로 이동하는 과정, 각질층은 궁극적으로 탈피되고, 새로운 피부 세포로 대체된다.

피부 탈피 ; 상피 또는 임의 조직 표면으로부터 표면 세포의 이탈 또는 탈피.

제약학적 ; 피부에 투여되어 비정상적인 생물학적 상태 또는 질환을 치료 및 예방하는 효과를 가지는 조성물.

피부 위축을 조절 ; 포유류 피부에 위축 과정을 예방, 지연, 정지, 처리 또는 역전시키는 것.

피부 위축 ; 콜라겐 또는 엘라스틴등이 감소되어, 포유류의 피부 진피층이 얇아지거나 또는 일반적으로 분해되고, 뿐만 아니라 섬유아세포의 수, 크기 및 증가력을 감소시킴. 피부 위축은 나이가 들면서 일어나는 자연적인 과정이나 고유 또는 외부 요인 예를 들면, chronoaging, 빛에 의한 손상, 화상 또는 화학물질에 의한 손상 또는 오염물질 또는 알레르기원에 노출(가령, 담배 연기)되는 등에 의해 발생될 수 있다. α-하이드록시카르복실산 또는 살리실산으로 치료를 하여 발생되는 부작용으로 피부 위축이 일어날 수 있다.

본 발명은 다음의 상세한 설명 및 실시예를 통하여 더욱 분명하게 이해를 할 수 있을 것이나, 이들은 본 발명을 설명하기 위함이다.

본 발명은 적어도 하나의 프로테아제 효소와 산성 완충액으로 구성된 신규한 조성물에 관계하는데, 산성 완충액은 산과 제약학적 또는 미용학적으로 수용 가능한 담체로 구성되고, 이때 조성물은 비정상적인 피부 질환, 질병, 상태를 치료하는데 유용하고, 또는 피부 결 및 외양을 개선시키고 또는 피부 박리를 개선시키고 또는 상피 세포 재생을 강화시키는데 이용할 수 있다. 본 발명은 또한 비정상적인 피부 질환, 질병, 상태를 치료하는데 유용하고, 또는 피부 결 및 외양을 개선시키고 또는 피부 박리를 개선시키고 또는 상피 세포 재생을 강화시키는데 이용하는 방법에 관계한다.

도 1은 다른 농도의 산성 프로테아제(펩신)(HUT Units ×10⁶/g)와 두 가지 다른 양(■는 유산 1.5% , □은 유산 3%)의 산성 완충액(유산)으로 세포 재생 속도에 끼치는 영향을 설명하는 막대 그래프이다.

도 2는 1.5%와 3%(■는 유산 1.5% , □은 유산 3%) 농도의 산성 완충액(유산)에 대해 다양한 농도의 산성 프로테아제(펩신)(HUT Units ×10⁶/g)를 제공하였을 경우에 탈피 또는 세포 재생 속도가 증가하는 비율을 설명하는 막대 그래프이다.

도 3은 HUT 검사에서 pH를 변화시켰을 경우에, 펩신과 AFP 2000, Solvay, Inc., Elkhart IN, 곰팡이에서 유도한 산성 프로테아제의 활성이 달라지는 것을 설명하는 막대 그래프이다. 이때 ■는 AFP 2000를 나타내고, □는 펩신을 나타낸다.

5.1 조성물

본 발명은 비정상적인 피부 상태, 질환을 치료 또는 예방을 하고, 피부 결 또는 외양을 개선시키고, 피부 탈피를 강화시키고 또는 상피 세포 재생을 강화시키는 신규한 조성물을 제공한다. 이와 같은 조성물은 적어도 하나의 산성 프로테아제 효소와 산성 완충액으로 구성된다. 이와 같은 조성물은 바람직하게는 국소로 투여되어, 전신 효과 또는 바람직하지 못한 부작용을 최소화한다. 발명자는 특정 방식에 제한시키는 것은 아니고; 그러나, 발명자는 본 발명의 조성물은 피부 표면의 pH를 피부 표면의 평균 pH(사람의 경우 pH는 약 5.5)이하로 낮춘다. pH 값을 낮추면 피부 표면의 pH가 약 5.5이하에 있는 동안에, 조성물의 산성 프로테아제 효소 성분이 단백질 분해/케라틴 분해 활성을 나타낼 수 있도록 한다. 시간은 개인의 피부 pH 조건에 따라 달라지는데 이는 산성 완충액 성분의 조제물에 의해 조절된다. 당업자는 시간을 다양하게 하고, 원하는 효과를 얻기 위해서, 조제물을 조정을 할 수 있다.

이 시간동안에, 산성 완충액은 발한 과정과 같은 자연 상피 과정에 따라 중화되어, 피부 표면의 pH는 평균 pH 5.5 정도로 복귀된다. pH가 증가되면, 산성 프로테아제 효소가 비활성화되고, 단백질 분해/케라틴 분해 활성이 중단(약 90%가 감소됨)된다. 사람 피부 표면의 pH가 약 5.5이하가 되는 시간은 약 1 분 내지 약 4시간이 되고, 바람직하게는 약 30분 내지 약 2 시간이 되고, 가장 바람직하게는 약 30분 내지 약 1 시간이 된다.

본 발명의 목적을 위해, 산성 프로테아제 효소는 피부 표면의 평균 pH 5.5이하에서 상당한 펩티드 가수분해(단백질 분해) 활성을 가지고, pH가 5.5 또는 그 이상이 되면 활성을 잃게되는 효소이다. 남자의 경우에 피부 평균 pH는 약 5.3이 되고, 여자의 경우에는 약 6.0이 된다. 본 발명의 목적을 위해, 피부 표면의 평균 pH(약 5.5)에는 다른 것에 추가하여, 성별 특정 변수를 포함하는데, 남자의 피부 평균 pH가 5.5는 약 5.3의 범위를 포함하고, 여자의 경우에는 최고 6을 포함한다. 단락 6.1에서 설명하는 것과 같은 단실 클로라이드 테스트에 의해 측정하였을 때, 피부에 바른 후에, 이의 활성을 간단하게 비교를 하면, 프로테아제 효소 활성의 약 10%미만을 발휘한다. 본 발명에서 유용한 산성 프로테아제 효소는 pH가 약 5.5 또는 그 이상에서 in vitro 검사를 하면, 특정 프로테아제 효소의 최적 pH(pH가 5.5이하)에서 동일한 in vitro 검사에서 측정되는 효소 활성의 약 10% 미만을 나타낸다.(단락 6.4를 참고).

산성 프로테아제는 아포엔자임(apoenzyme), 홀로엔자임(holoenzyme), 이소엔자임(isoenzyme), 자이모젠(zymogen)형이 될 수 있다. 또한, 산성 프로테아제 효소는 박테리아, 곰팡이, 조직 배양 세포, 동물 등으로부터 분리할 수 있다는 것을 인지할 것이다. 조성물에서 산성 프로테아제 성분은 최종 조성물의 중량에 약 0.001% 내지 약 75%가 존재할 수 있고, 적절하게는 약 0.1% 내지 약 50%, 가장 바람직하게는 약 1% 내지 약 5%가 된다. 프로테아제는 약 1 내지 약 5,000 HUT units/mg의 특이 활성을 가지고, 적절하게는 프로테아제는 약 50 내지 약 3000 HUT units/mg의 특이 활성을 가지고, 더욱 바람직하게는 약 500 내지 약 1500 HUT units/mg의 특이 활성을 가진다(이는 Food Chemicals CODES, 3rd ed., (1981), pp. 496-497, National Academy Press, Washington, D.C.,의 방법을 기초하여 본 단락 5.1에서와 같이 변형한 방법으로 측정한 것임).

간단하게, 다음의 원액을 만들 수 있다; HEMOGLOBIN SUBSTRATE은 80㎖ 증류수에 2g 소의 헤모글로빈을 혼합하여 준비한다. 용액은 인산 또는 구연산을 첨가하여 pH를 2로 적정하고, 추가로 증류수를 첨가하여 최종 용적으로 100㎖로 만든다. 이 용액은 4부분(동량)으로 나누어, 각 부분은 50% 수산화나트륨 또는 50% 염산으로 원하는 pH로 조정을 한다. 이와 같은 최종 용액은 20분간 30℃로 가열을 하고, 글래스울(glass wool)을 통하여 여과시킨다. TCA 원액은 TCA의 최종 농도가 5%(w/v)이 되도록 증류수에 삼염소아세트산을 용해하여 만든다.

그 다음, 각 샘플에서 단백질 분해 활성을 측정하고, 튜브에 "B"와 "T"로 라벨을 한다. 각 튜브에 4㎖ 헤모글로빈 용액을 넣고, 샘플이 37℃로 예열되도록 한다. "T" 튜브에는 100 ㎍ 효소 용액을 첨가하고, 천천히 흔들어서 20분간 37℃에서 배양한다. 그 다음 10 ㎖ TCA 원액 용액을 각 튜브에 참가한다. 상기 "T" 튜브에 넣은 동일한 효소 동량을 "B"에 넣고 이는 배경 흡수도를 측정하기 위한 기준으로 한다. 각 튜브를 원심 분리하고, 주사기 필터를 통하여 여과시켜, 여과된 샘플은 수정 큐벳에 넣어 280 ㎚에서 흡수도를 측정한다. 실제 흡수도는 배경 흡수도로부터 "T"의 흡수도를 뺀 것이다. 표준 곡선은 농도를 아는 프로테아제 효소 활성을 측정함으로써 만들 수 있다.

단백질 분해 활성의 1 HUT 단위는 특정한 검사 조건에서 1분간 가수분해물질을 생산하는 효소의 양으로 정의되는데, 280 ㎚에서 가수분해물질의 흡수도는 0.006 N 염산에서 티로신 1㎖당 1.10 ㎍을 포함하는 용액의 것과 동일하다. g당 HUT 단위는 다음의 식으로 결정을 할 수 있다;

HUT/g =(280 ㎚에서의 흡수도 ×V)/(0.0084 ×T ×W)

이때, V는 테스트 용액의 최종 용적이고; T는 반응 시간(분) 이고; W는 검사에 이용된 원래 효소 샘플을 건조 중량(g)이다. 단백질 농도는 공지의 방법으로 측정을 하는데 가령, Bradford Assay 검사(Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel et al., (Eds.), John Wiley ＆ Sons, Inc., New York, 1994)를 이용할 수 있다.

이와 같은 프로테아제 효소의 예로는 펩신, 카텝신, 사람 뇨의 프로테아제 효소, 뉴로스포라 오리제(Neurospora oryzae), 뮤코르 퓨실러스(Mucor pusillus), 뮤코르 미하이(Mucor miehei), 리조푸스 키넨시스(Rhizopus chinensis), 앤도티아 파라시티카(Endothia parasitica)와 같은 곰팡이 프로테아제 효소, 박테리아성 리조푸스펩신, 페니실리노펩신, 엔도티아펩신 등을 포함하나 이에 한정하지는 않는다. 또한, 프로테아제 효소는 유전자 조작 기술 및 과정이 관련된 공정으로 유도할 수 있으며, 예를 들면, 배아, 성숙한 세포 또는 유도성 세포가 연관되고, DNA 단편, 플라스미드, 벡터 또는 이의 발현 벡터 또는 형질변환된 세포 또는 순수 배양물을 이용한다. 두 가지 이상의 산성 프로테아제 효소를 복합하여 이용할 수 있고, 이때 복합 양의 중량은 상기 범위안에 있게 됨을 인지할 것이다.

피부에 조성물을 국소적으로 바를 때, 산성 완충액은 피부 표면의 pH를 일시적으로 약 pH 5.5이하로 낮추는데(단, 약 pH 1이하로는 낮추지 않음), 적절하게는 pH 약 2.5 내지 pH 4.5범위로 낮춘다. 산성 완충액 조성물은 적어도 하나의 산과 제약학적 또는 화장품에 사용할 수 있는 담체, 운반체 또는 부형제로 구성된다. 산성 완충액은 발한과 같은 자연적인 상피 과정에 의해 시간이 지남에 따라, 피부 표면의 평균 pH로 중화될 가능성이 있다. 산성 완충액이 중화되어, 프로테아제가 비활성화되는데 소요되는 시간은 산성 완충액의 조성에 따라 달라진다. 예를 들면, 산성 완충액에 약산 또는 피부의 상대적인 알칼리성을 중화시키는 약 완충제를 포함하는 경우에 시간이 짧아지고; 강산이 이용되거나 산성 완충액에 더 강한 완충제가 이용되는 경우에는 그 시간이 더 길어진다.

완충액의 산 성분은 하나 이상의 무기산 또는 하나이상의 유기산 또는 무기산 및 유기산 복합물이 될 수 있고, 최종 조성물의 중량의 약 0.001% 내지 약 95%, 바람직하게는 약 0.01% 내지 약 25%, 더욱 바람직하게는 약 1% 내지 약 5%가 존재한다. 산성 성분의 중량비는 산 강도 및 몰농도에따라 달라진다. 또한, 조성물에서 산 성분의 양과 강도는 단백질 분해/케라틴 분해 활성에 효과가 있으나 피부 자극을 일으키지 않는 수준이 되어야 한다. 또한, 산성 완충액의 산 성분은 케라틴 분해 활성을 나타내지는 않으나, 프로테아제 효소의 활성화를 위해 단순히 산성 환경을 제공하는 산으로 구성될 수도 있다. 이와 같은 산의 예로는 임의 조성물을 pH 0.1 내지 pH 8의 범위에서 상피 pH를 완충시키는 임의 분자로써 예를 들면, 유산, 소르빈산, 글루콘산, 구연산, 글리콜산, 사과산, 글로코닌산, 피로포스포린산, 삼인산, 폴리포스포린산, 이황화나트륨, 이황화칼륨 등을 포함하나 이에 국한시키지는 않는다. 두 가지 이상의 산을 복합하여 이용할 수 있고, 이때 복합 양의 중량지는 상기 범위 안에 있게 됨을 인지할 것이다.

산성 완충액에는 적어도 제약학적 또는 화장품에 사용할 수 있는 담체, 운반체 또는 부형제를 포함한다. 이와 같은 제약학적 수용 가능한 담체, 운반체 또는 부형제는 당분야에 잘 알려져 있고, 참고로는 Remington's Pharmaceutical Sciences, Eighteenth Edition, A.R. Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania, 1990가 된다. 이와 같은 화장품에 사용할 수 있는 담체, 운반체 또는 부형제는 당분야에 잘 알려져 있고, 참고로는 CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary, Fourth Edition, J.M. Nikitakis, Ed., The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association, Washington, D.C., 1991를 한다.

본 발명의 조성물은 국소적으로 이용할 의도로 물, 락톤, 에탄올, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 부탄-1,3-디올, 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, 미네랄 오일, 또는 이의 혼합물질과 같은 담체, 부형제 또는 운반체를 포함하여, 제약학적으로 또는 화장용으로 또는 피부에 수용가능한 독성이 없는 로션, 크림, 에멸젼, 겔 또는 연고를 만든다. 또는, 보습제 또는 습윤제를 원하는 경우에 본 발명의 조성물에 참가를 할 수 있다. 이와 같은 제약학적 조성물에 유용한 첨가 성분의 예로는 Remington's Pharmaceutical Sciences, Eighteenth Edition, A.R.Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania, 1990를 참고로 한다. 이와 같은 화장용 조성물에 유용한 첨가 성분의 예로는 CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary, Fourth Edition, J.M. Nikitakis, Ed., The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association, Washington, D.C., 1991를 참고로 한다.

당업자에 공지된 이와 같은 운반체 또는 다른 운반체에 추가하여, 본 발명의 제약학적 그리고 화장용 조성물에는 다음과 같은 성분을 포함하나 이에 국한시키지는 않는다; 노인성 반점, 각화증, 주름 등을 개선시키는 또는 제거하는 물질; 무통제; 마취제; 좌창방지제; 항균제; 항곰팡이제; 항이스트제; 항바이러스제; 비듬억제제; 항피부염제; 항소양증제; 항토제; 항동요병제; 항염증제; 항-과다케라틴분해방지제; 피부건조방지제; 항발한제; 항건선제; 항지루제; 헤어 컨디셔너; 모발 처리제; 노화 및 주름 방지제; 항천식제; 기관지확대제; 태양광 차단제; 항히스타민제; 피부 미백제; 탈색제; 비타민; 코르티코스테로이드; 타닌제; 호르몬; 레티놀; 국소 심장맥관제; 클로트리마졸; 케토코나졸; 미코나졸; 그리스풀로빈; 하이드록시진; 디페닐하이드라민; 프라모신; 리도카인; 프로카인; 메피바카인; 모노벤존; 에리티오카인; 프로카인; 메피바카인; 메클로실린; 하이드로퀴논; 미노사이클린; 나프록센; 이부프로펜; 테오필린; 크로몰린; 알부테롤; 레티논산; 13-시스 레티논산; 하이드로코르티손; 하이드로코르티손 21-아세테이트; 하이드로-코르티손 17-발레에이트; 하이드로코르티손 17-부티레이트; 베타메타손 발레에이트; 베타메타손 디프로피오네이트; 트리아미시노론 아세토니드; 플루시나노니드; 클로베타솔 프로피오네이트; 벤조일 퍼옥시드; 크로타미톤; 프로프라노롤; 프로메타진; 비타민 A 팔미테이트; 비타민 E 아세테이트; 제약학적 조성물에 이용되는 친수성 농후제; 또는 이의 혼합물. 이들 성분의 농도는 사용하고자 용도 가령, 제약학적 용도 또는 화장용 등에 따라 달라진다.

본 발명의 조성물을 국소적으로 바른 후에, 피부 표면의 pH를 약 5.5로 복귀시키는데 걸리는 시간을 조절하면, 프로테아제 효소의 활성을 조절할 수 있다. 본 발명의 단백질 분해 활성을 조절함으로써 광역의 pH 단백질분해 효소를 이용하여 생기는 따끔거림, 화끈거림, 수포가 형성, 또는 다른 부작용 등의 선행 기술에서 볼 수 있는 단점 및 합병증 등을 극복할 수 있다. 피부 표면의 pH를 약 5.5로 복귀시키는데 소요되는 시간은 여러 인자에 의해 결정되는데 가령, 피부 타입, 치료를 해야하는 질환 또는 질병, 치료를 받는 환자 피부의 민감성, 신체 부위 등이 된다. 선행기술에서 볼 수 있었던 단점을 피하기 위해서는, 본 발명의 조성물의 각 적용 시간을 약 4시간 이상을 초과시키지 않도록 한다. 시간 제한은 이용하는 목적 가령, 매일 매일 유지, 거친 건조된 피부의 제거 또는 제약학적/치료요법적인 징후 등의 여러 인자에 따라 달라진다. 다른 인자로는 민감성, 정상, 비민감성, 손상 또는 심각한 손상 등의 피부 타입, 또는 지속적인 세수를 하는 타입 또는 크림 또는 로션을 바르는 타입 등의 여러 인자에따라 달라진다. 또 다른 인자로는 프로테아제 효소 활성이 기질 특이성이기 때문에 산성 프로테아제 효소 성분에 이용된 특정 프로테아제 효소가 된다.

5.2. 본 발명의 조성물을 이용하는 방법

본 발명은 상피 탈피 또는 상피 세포 재생을 강화시키는 방법을 제공하는데, 이 방법은 본 발명의 조성물의 효과량을 피부의 표면에 투여하는 것으로 구성되는데, 조성물은 pH 5.5이하에서 효소적으로 활성이 있고, pH 5.5 이상에서는 활성이 없는 산성 프로테아제와 상피 탈피 또는 상피 세포 재생을 강화하는데 효과적인 시간 동안에 피부 표면의 pH를 5.5이하로 낮추어주는 산성 완충액으로 구성되고, 이때 산성 완충액은 정상적인 상피 과정에 의해 중화되게 된다.

본 발명은 피부 결 또는 외양을 개선시키는 방법을 제공한다. 본 발명의 조성물의 효과량을 피부의 표면에 투여하는 것으로 구성되는데, 조성물은 pH 5.5이하에서 효소적으로 활성이 있고, pH 5.5 이상에서는 활성이 없는 산성 프로테아제와 피부 결 또는 외양을 개선시키는데 효과적인 시간 동안에 피부 표면의 pH를 5.5이하로 낮추어주는 산성 완충액으로 구성되고, 이때 산성 완충액은 정상적인 상피 과정에 의해 중화되게 된다.

본 발명은 피부 위축 효과를 조절하는 방법을 제공한다. 본 발명의 조성물의 효과량을 피부의 표면에 투여하는 것으로 구성되는데, 조성물은 pH 5.5이하에서 효소적으로 활성이 있고, pH 5.5 이상에서는 활성이 없는 산성 프로테아제와 피부 위축 효과를 조절하는데 효과적인 시간 동안에 피부 표면의 pH를 5.5이하로 낮추어주는 산성 완충액으로 구성되고, 이때 산성 완충액은 정상적인 상피 과정에 의해 중화되게 된다.

본 발명은 또한 비정상적인 피부 상태, 질환을 치료 및 예방하는 방법을 제공한다. 이 방법은 본 발명의 조성물의 효과량을 피부의 표면에 투여하는 것으로 구성되는데, 조성물은 pH 5.5이하에서 효소적으로 활성이 있고, pH 5.5 이상에서는 활성이 없는 산성 프로테아제와 비정상적인 피부 상태, 질환을 치료 및 예방하는데 효과적인 시간 동안에 피부 표면의 pH를 5.5이하로 낮추어주는 산성 완충액으로 구성되고, 이때 산성 완충액은 정상적인 상피 과정에 의해 중화되게 된다. 이와 같은 비정상적인 상태 또는 질환에는 건성 피부, 심각한 건성 피부, 비듬, 좌창, 각질증, 건선, 습진, 피부 벗겨짐, 주름(고유 및 외부적인 손상에 의한 굵은 주름 및 잔주름), 사마귀, 얼룩진 피부, 과색소착색 피부, 과다 각질 피부, 염증성 피부질환, 노인성 피부 변화, 클렌저가 필요한 피부 및 피부 퇴화 등을 포함하나 이에 국한시키지는 않는다.

본 발명의 조성물의 효과량을 투여하는 적절한 방법은 피부에 상기 언급한 임의 방법으로 국소 투여를 하는 것이다. 최종 조성물에 산성 완충액과 산성 프로테아제 효소의 양과 피부에 적용하는 빈도는 특정 피부 질환, 피부 질환의 심각성, 관련 피부의 위치 또는 형태, 원하는 치료 정도에 따라 달라진다. 당업자는 개체의 필요에 따라 약량을 조절할 수 있다. 예를 들면, 일주일에 매일 1회 내지 4-5회, 적절하게는 일주일간 매일 3회 내지 약 5회, 가장 바람직하게는 하루에 1회 또는 2회가 될 수 있다. 국소적으로 제공을 하는 최종 조성물은 산성 성분이 약 0.001% 내지 약 95%, 바람직하게는 약 0.01% 내지 약 25%, 가장 바람직하게는 약 0.01% 내지 약 5%로 구성된다. 국소 적용의 최종 조성물에는 산성 성분이 약 0.001% 내지 약 75%, 바람직하게는 약 0.01% 내지 약 50%, 가장 바람직하게는 약 0.01% 내지 약 5%로 구성된다. 또 다른 투여 방식은 만성 투여이다. "만성" 투여는 여기에서 이용한 것과 같이, 국소적으로 제공하는 시간은 개체의 일생동안 제공하는 것으로 바람직하게는 적어도 한 달간, 더욱 바람직하게는 약 6개월 내지 10년간 제공을 하여, 비정상적인 피부 상태, 질환을 치료 또는 예방하고, 피부 결 또는 외양을 개선시키고, 또는 상피 탈피 또는 상피 재생 속도를 강화시키고 또는 피부 위축 효과를 조절할 수 있다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 방법은 산성 완충액, 산성 프로테아제 효소 및 태양광 차단제, 항염증제, 항산화제/라다칼 소거제, 킬레이트제, 레티노이드, 자체 타닌제, 벤조퓨란 유도체중 하나이상으로 구성된 효과량의 조성물을 피부에 투여하는 것으로 구성된다. 여기에서 사용된 것과 같은, "동시에 적용" 또는 "동시에"란 의미는 동일한 시간에 신체의 동일한 부위에서 피부에 물질을 투여하는 것이다. 피부에 별도로 물질을 투여할 수 있으나, 적절한 방법은 모든 원하는 물질로 구성된 조성물을 피부에 투여하는 것이다. 투여되는 태양광 차단제의 양은 일반적으로 0.02㎎ 내지 1mg per ㎠가 된다. 투여되는 항-염증제의 양은 일반적으로 0.005㎎ 내지 0.5㎎가 되고, 바람직하게는 0.01㎎ 내지 0.1㎎/㎠가 된다. 투여되는 킬레이트제의 양은 일반적으로 0.001㎎ 내지 1㎎, 적절하게는 0.01㎎ 내지 약 0.5㎎, 더욱 바람직하게는 0.05㎎ 내지 약 0.1㎎/㎠ 가 된다. 투여되는 레티노이드의 양은 일반적으로 약 0.00001㎎ 내지 약 0.02㎎/㎠가 된다. 투여되는 벤조퓨란 유도체의 양은 일반적으로 투여당 0.001㎎ 내지 약 1㎎/㎠이 되고, 바람직하게는 약 0.01 내지 0.5㎎/㎠가 된다. 투여되는 산성 완충액과 산성 프로테아제 효소로 구성된 조성물의 양은 일반적으로 투여할 때마다 0.001㎎ 내지 약 1㎎/㎠, 바람직하게는 0.01㎠ 내지 약 0.5㎎/㎠, 더욱 바람직하게는 0.05 내지 약 0.25㎎/㎠이 되는데 이는 치료를 할 상태의 심각성, 개체 피부의 민감성, 개체의 치료 부위 및 이용되는 화합물의 효과 등에 따라 달라질 수 있다.

본 발명의 특징과 실행하는 방법을 좀더 상세하게 설명을 하기 위해, 다음의 실시예를 제공하나, 이는 본 발명을 설명하기 위함이고 이에 한정하고자 함은 아니다.

실시예 6.1 내지 6.4를 통하여 다음의 조성물에 이용된 성분을 나열한 것이다;

AFP 2000, 곰팡이에서 유도한 산성 프로테아제 효소, Solvay Inc., Elkhart IN; 조류 추출물/알로에 추출물, Active Organics, Inc., Dallas TX; 알란토인 Sutton Laboratories, Chatham NJ; Arlacel 65, ICI 계면활성제,Wilmington DE; 아스파르트산, Ajinomoto USA, Inc., Teaneck NJ; BHT, Eastman Kodak, Co., Rochester NY; 부틸렌 글리콜, Hoechst Celanese, Co., Charlotte NC; 카르보머(Carbomer), B.F. Goodrich, Co., Brecksville OH; 세테아릴 알코올, Lipo Chemicals, Inc., Patterson NJ; 세틸 알코올, Lipo Chemicals, Inc., Patterson NJ; 구연산, Roche Vitamins and Fine Chemicals, Nutley NJ; 코스모왁스(Cosmowax), Croda Chemicals, Ltd., Parsippany NJ; 사이클로메티콘, Dow Chemicals USA, Midland MI; 디하이드록시아세톤, Rona/E. Merck Industries, Hawthorne NY; 디메티콘, Dow Chemicals USA, Midland MI; disoium EDTA, Ciba-Geigy Co., Greensbore NC; DL-판테놀, Roche Vitamins and Fine Chemicals, Nutley NJ; 에톡시디글리콜, Gattefosse S.A., Paris, France; 글로코닌산, Sigma Chemicals, St. Louis MO;글리세레스-26, Amerchol Co. Edison NJ; 글리세랄 스테아레이트, Croda Chemicals, Ltd., Parsippany NJ; 유산 USP 88%, Rita Corporation, Woodstock IL; 레시틴/아시아틱산, Active Organics, Dalls TX; 메틸 글루세트-20, Amerchol Co., Edison NJ; 메틸파라벤, Napp Co., Lodi NJ; 옥틸 팔미테이트, ICI 계면활성제, Wilmingto DE; 옥틸도데실 네오펜토네이트, ICI 계면활성제, Wilmington DE; PEG-75, Lipo Chemicals, Inc., Patterson NJ; PEG-40 스테아레이트, Lipo Chemicals, Inc., Patterson NJ; 펩신 1:15,000 NF, American Laboratories, Inc., Omaha NE; 인산 85%, Sigma Chemicals, Inc., St. Louis MO; 폴리아크릴아미드/C13-14 이소파라핀/라우레트-7, Seppic, Co., Paris, France; 프로필렌 글리콜, Dow Chemicals USA, Midland MI; 프로필파라벤, Napp Co., Lodi NJ; 레티닐 팔미테이트, Roche Vitamins and Fine Chemicals, Nutley NJ; 살리실산, Kalama Co., Seattle WA; 카르복실-메틸셀룰로오즈 나트륨 7HXF, Aqualon, Co., Wilmington DE; 히알루로네이트 나트륨, Active Organics, Dallas TX; 스테레트-10, Lipo Chemicals, Inc., Patterson NJ; 토코페릴 아세테이트, Roche Vitamins and Fine Chemicals, Nutley NJ; 트리에탄올아민 99%, BASF Co., Mount Olive NJ; and xantham gum, Kelco, San Diego, CA.

6.1. 피부 탈피의 강화

본 발명의 조성물은 산성 프로테아제 펩신 1:15,000 NF(American Laboratories, Inc., Omaha, NE)와 산성 완충액 유산을 여러 농도로 하여 사람의 손바닥 전암에서 피부 탈피 및 세포 재생의 강화에 대해 테스트하였다. 30 내지 60세 나이 범위의 20명을 선별하여, 이들의 손바닥 전암에 다른 물질의 사용을 억제하고, 테스트 과정(합성 비누를 포함)과 연계하여 공급되는 물질만을 테스트하는 동안 그리고 테스트 5일전에 제공한다. 개체중에는 (1) 테스트 후에 3개월 이내에 임신을 하거나, 모유를 제공해야할 개체는 없고; (2) 하나이상의 공지된 전염성 질환을 가진 자는 없으며; (3) 테스트하는 동안에 임의 다른 임상 연구에 관여하는 자는 없고; (4) 건선, 피부염 또는 습진을 앓고 있는 사람은 없고; (5) 레티노이드, 코르티코스테로이드 또는 항생제를 포함하는 테스트 화합물과 간섭하는 것으로 간주되는 약물을 복용하는 사람은 없고; (6) 테스트하기전 6개월 동안에 레티노이드, 코르티코스테로이드 또는 항생제를 복용한 사람은 없고; 담배, 민감성 피부, 테스트에 적합하지 않은 사람 또는 테스트용에 적합하지 않은 다른 성질을 가지는 사람은 없다.

각 개체의 손바닥 전암에 4개의 2 ×3㎝ 접착성 밴드를 붙이고, 여기에는 페트롤리움으로 분쇄한 2gm/㎠ 5% 고순도 염화단실을 제공한다. 각 전암의 밴드중 세 개는 테스트 부위에 그리고 나머지 하나는 기준으로 이용을 한다.

각 개체의 각 전암의 4개 부위에 염화단실이 적하된 밴드를 덮고, 이는 24시간동안 방해를 받지 않도록 남겨둔다. 24시간이 종료될 시점에서, 밴드를 제거하고, 부위를 세척을 하고, 염화단실에 의한 부위 착색은 장파 UV 광원으로부터 볼 수 있는 것으로 확인을 한다. 6개의 제어안된 염화단실은 표 1의 테스트 조성물중 무작위로 선택된 1-2㎖/㎠를 매일 2회 국소적으로 제공을 받은 개체의 테스트 부위에 착색되었다. 적용시에, 테스트 조성물을 부위에 더 이상 젖지 않을 때까지 피부에 문지른다. 염화단실 착색이 증명된 후에, 테스트 부위와 기준 부위는 덮지 않고 동일한 방식으로 취급을 하는데, 단, 테스트 적용 및 기준 부위에 제공을 받지 않은 조성물을 제공한다는 것이 다른 점이다.

각질층의 탈피/케라틴 분해는 착색 제거를 측정하기 위해 장파 UV 광원하에서 매일 염화단실 착색을 관찰하여 결정을 한다. 다음의 식으로 탈피/케라틴 분해의 증가 비율 및 이에 상응하는 각질층의 세포 제거를 계산할 수 있다.

테스트 조성물 번호	유산(100%)Wt%	산성 프로테아제 효소²wt%	HUT units/g^*10⁶	소르빈산보존제 wt%	탈이온수wt%
12345678910111213	0.001.501.501.501.501.501.503.003.003.003.003.003.00	0.000.000.020.201.002.004.000.000.020.201.002.004.00	0.00.00.020.21.02.04.00.00.020.21.02.04.0	0.050.050.050.050.050.050.050.050.050.050.050.050.05	99.9598.4598.4398.2597.4596.4594.4596.9596.9396.7595.9594.9592.95

테스트 조성물의 번호	유산 농도(%)	산성 프로테아제 효소의 농도²(%)	HUTunits/g^*10⁶	조성물의 효과(기준치에 비해 증가%)	펩신 효과(유산 기준치에 대한 증가%)
12345678910111213	0.001.501.501.501.501.501.503.003.003.003.003.003.00	0.000.000.020.201.002.004.000.000.020.201.002.004.00	0.00.00.020.21.02.04.00.00.020.21.02.04.0	0(Control)141417252833181823313336	00(Control)021791001360(Control)0287283100
*이용된 산성 프로테아제는 펩신 1:15,000, NF Amerincan Lab., Inc. Omaha, NE

테스트에서 얻은 데이터는 표 2와 도 1과 2에서 요약하였다. 표 2(칼럼 5)에서 볼 수 있는 것과 같이, 산성 완충액 유산은 각 1.5%와 3% 농도에서 약간의 케라틴 분해/세포 재생 효과[기준(테스트 조성물 1)에 조성물 2와 8의 비교 테스트]를 가진다. 이와 같은 양성 케라틴 분해/세포 재생 효과는 산성 프로테아제 효소 펩신 존재 하에 상당히 강화되었다(테스트 조성물 3-7, 9-13). 또한 강화는 약량에 따른 것으로 가령, 각질층 탈피/세포 재생 속도는 산성 프로테아제 효소의 농도가 증가됨에 따라 증가된다(표 2의 칼럼 5). 도 1은 그래프로 칼럼 5의 데이터를 나타낸 것이다.

표 2의 칼럼 6에는 각 1.5%와 3% 농도의 주어진 유산에 대해 산성 프로테아제 효소 펩신의 농도를 다양하게 하였을 경우에, 탈피/세포 재생 속도가 증가하는 비율을 반영한 것이다. 칼럼 6에 데이터는 도 2의 그래프로 나타내었다. 분명한 것은, 비록 산성 프로테아제 효소의 효과는 이용된 유산 농도에서 상당히 의미가 있지만, 유산 농도가 1.5wt%에서 산성 프로테아제 효소 펩신을 이용하였을 경우에, 강화 비율이 더 크다.

테스트를 받은 개체의 일부 피부에서 약간의 붉어짐과 팽창이 나타났는데, 피부 테스트 부위에 약 75%에 3wt%의 유산을 사용하였을 경우에 나타나는데, 이는 유산 1,5wt% 농도에서는 그 경우가 더욱 적게 나타난다. 또한, 이와 같은 발견은 대개 펩신 존재와는 무관하다. 따라서, 적절한 농도의 산성 프로테아제 효소 존재하에 낮은 수준의 자극을 유발하지 않는 농도 범위의 산성 완충액을 이용하여 피부 탈피 또는 세포 재생을 이룰 수 있다. 피부에 적용하는 여기에서 정의한 생리학적 pH 범위에서 활성을 가지는 프로테아제 효소와는 대조적으로, 사람의 고유 자연적인 과정에 의해 피부 표면의 pH가 정상치 약 pH 5.5로 상승이 될 때까지 이의 단백질 분해 활성이 유지된다.

6.2 본 발명의 방법에 이용되는 조성물

다음의 표에는 본 발명의 여러 가지 다른 조성물의 예제를 나타낸 것이다. 다음의 모든 조성물은 희석된 인산 또는 수산화나트륨, NaOH로 pH를 약 3 내지 3.2로 조절을 한다.

세안 AP-01

	중량비
아스파르트산	1.50
탈이온수	82.50
메틸파르벤	0.20
PEG 75	1.50
EDTA 이나트륨	0.05
알란토인	0.25
글리세레스26	1.00
에톡시디글리콜	4.00
프로필렌 글리콜	4.00
AFP 2000	5.00
합계	100.00

세안 AP-02

	중량비
인산 85%	1.20
탈이온수	86.80
메틸파라벤	0.20
PEG 75	1.50
EDTA 이나트륨	0.05
알란토인	0.25
글리세레스26	1.00
에톡시디글리콜	4.00
프로필렌 글리콜	4.00
펩신 1,000 HUT UNITS/MG	1.00
합계	100.00

혈청 AP-03

	중량비
살리실산	0.50
트리에탄올아민 99%	1.00
유산 USP 88%	1.20
탈이온수	82.70
카르복시메틸 셀룰로오즈나트륨7HXF	0.60
메틸파르벤	0.20
PEG 75	1.50
EDTA 이나트륨	0.05
알란토인	0.25
메틸 글루세트-20	1.00
글리세레스26	1.00
에톡시디글리콜	4.00
프로필렌 글리콜	4.00
레시틴/아시아틱산	1.00
펩신 1,000 HUT UNITS/MG	1.00
합계	100.00

혈청 AP-04

	중량비
글루코닌산	1.50
탈이온수	84.08
메틸파라벤	0.02
카르복시메틸셀룰로오즈나트륨 7HXF	0.60
PEG 75	1.50
EDTA 이나트륨	0.05
알란토인	0.25
메틸 글루세스-20	1.00
글리세레스26	1.00
에톡시디글리콜	4.00
프로필렌 글리콜	4.00
레시틴/아시아틱산	1.00
펩신 1,000 HUT UNITS/MG	1.00
합계	100.00

펩신 로션 AP-05

	중량비
탈이온수	64.75
산탄검	0.10
EDTA 이나트륨	0.10
알란토인	0.50
해조추출물 및 알로에 추출물	6.00
메틸파르벤	0.20
DL-판테놀	0.50
에톡시디글리콜	4.00
부틸렌 지콜	5.00
세틸 알코올	2.00
글리세릴 스테아레이트	2.00
옥틸 팔미테이트	4.00
사이클로메티콘	2.00
프로필파라벤	0.10
BHT	0.05
폴리아크릴아미드, C 13-14이소파라핀, LAURETH-7	1.50
히알루론산 나트륨	3.00
레티닐 팔미테이트	0.10
토코페릴 아세테이트	0.10
펩신 1,000 HUT UNITS/MG	1.00
구연산	3.00
합계	100.00

재생 겔 AP-06

	중량비
탈이온수	89.60
카르보머	1.50
살리실산	0.50
유산 USP 88%	1.20
프로필렌 글리콜	6.00
펩신 1,000 HUT UNITS/MG	1.00
메틸파라벤	0.15
프로필렌파라벤	0.05
합계	100.00

재생 겔 AP-07

	중량비
탈이온수	85.10
폴리아크릴아미드 C13-14이소파라핀,LAURETH-7	4.00
살리실산	0.50
유산 USP 88%	1.20
부틸렌 글리콜	8.00
펩신 1,000 HUT UNITS/MG	1.00
메틸파라벤	0.15
프로필렌파라벤	0.05
합계	100.00

자가-타닌 로션 AP-08

	중량비
탈이온수	48.15
산탄검	0.75
프로필렌 글리콜	5.00
메틸파라벤	0.20
프로필렌파라벤	0.10
펩신 1,000 HUT UNITS/MG	2.00
스테레스-10	0.70
ARLACEL 1651	1.20
PEG-40 스테아레이트	0.40
코스모왁스J2	1.00
세틸 알코올	1.50
시클로메티콘	5.00
디메티콘	0.50
옥틸도데실 네오펜토네이트	28.50
디하이드록시아세톤	5.00
합계	100.00

6.3. 조성물의 안정화

pH 3에서 다음의 조성물은 37℃에서 저장하는 동안에 적어도 3개월간은 이들의 산성 프로테아제 효소 활성의 적어도 90%를 보유하고 있다.

중량비

사이클로메티콘 5.0

세틸알코올 1.5

Arlacel 165 1.5

디메티콘 1.0

Sepigel 305 3.0

페녹시에탄올 1.0

EDTA. 이나트륨 0.1

부틸렌글리콜 10.0

구연산/구연산나트륨 3.0

유산(100%) 1.5

소르빈산 0.05

유당 1.0

펩신 1000 HUT Units/mg 1.0

H₂O 70.35

6.4. pH 수준을 다양하게 하였을 때 프로테아제 효소의 활성

광역의 pH 범위에서 두 가지 산성 프로테아제 효소를 테스트하여, 이들이 pH 5.5이하에서 단백질 분해 활성을 가지는지 그리고 이 활성이 최적 pH에서의 것과 비교를 하였을 때, 약 10%미만으로 감소되는지를 조사한다. 단백질 분해 활성은 하기에서 상술하는 것과 같이 HUT 검사를 이용하여, 헤모글로빈에서 단백질 분해 효과를 결정하여 측정한다. 두 가지 산성 프로테아제 효소는 펩신 1:15,000 NF(1000 HUT units/㎎, American Laboratories, Inc., Omaha NE에서 공급)와 AFP 2000(Solvay, Inc.,에서 공급, 약 100HUT units/㎎)이다. 이 검사는 헤모글로빈 기질과 TCS 원액을 준비하여 실행한다. 헤모글로빈 기질은 80㎖ 증류수에 2g 소의 헤모글로빈(Sigma Chemicals, Inc. St. Louis MO)을 혼합하여 준비한다. 용액은 pH를 2, 3.5, 5.5, 6으로 적정한다. pH 1-3의 인산 1.8g을 첨가하여 최종 농도를 100mM으로 만들고, 50% 수산화나트륨 또는 50% 염산으로 원하는 pH로 조정을 한다. 증류수를 추가하여, 최종 용적을 100㎖로 만든다. 다른 pH 값을 가지는 기질을 20분간 30℃에서 배양을 하여, 글래스울(glass wool)을 통하여 여과시킨다. TCA 원액은 100㎖ 증류수에 삼염소아세트산 5g을 용해하여 만든다.

표준 효소는 증류수 10㎖에 10㎎ 펩신을 용해시켜 만들고, 8㎖ 증류수에 AFP2000 100㎎과 구연산 300㎎을 용해하여 만든다. 이 용액은 그 다음 6% 수산화나트륨 6M의 염산으로 pH를 3.5로 조정을 하고, 최종 용적은 증류수를 첨가하여 10㎖로 만든다.

그 다음, 각 샘플은 "B", "T1", "T2", "T3"로 표시를 한 네 개의 튜브에 넣고, 각 튜브에 4㎖ 헤모글로빈 용액을 넣고, 샘플이 37℃로 예열되도록 한다. "T" 튜브에는 100 ㎕ 표준 효소를 첨가하고, 20분간 37℃에서 배양하고, AFP2000은 30분간 배양을 한다. 그 다음 10 ㎖ TCA 원액 용액을 모든 각 튜브에 첨가하고, 효소 100㎕를 "B"에 놓고, 1분간 1000rpm에서 원심분리한다. 주사기 필터를 통하여 여과시켜, 여과된 샘플은 수정 큐벳에 넣어 280 ㎚에서 흡수도를 측정한다. 실제 흡수도는 배경 흡수도로부터 "T"의 흡수도를 뺀 것이다. 표준 곡선은 농도를 아는 프로테아제 효소 활성을 측정함으로써 만들 수 있다.

도 3은 pH2에서 두 가지 효소 모두 최적의 활성을 가지는 것으로 설명을 하고 있다. 또한, 두 가지 효소는 pH 2에서 최적 수준과 비교를 하였을 때, pH 5.5 또는 그 이상에서는 10% 미만의 활성을 가진다. 이 검사에서 명백하게 설명을 하고 있는 것은 이들 효소는 본 발명에서 이용을 할 수 있다는 것이다. 또한, 이와 같은 검사를 이용을 하면, 본 발명에서 이용을 할 수 있는 추가 효소를 결정할 수 있다는 것이다.

여기에서 설명을 하는 발명 및 청구항은 여기에서 상술하고 있는 특정 구체예에 한정하지 않는데 그 이유는 구체예는 본 발명을 설명하기 위한 의도만을 가지기 때문이다. 또한 구체예와 등가의 것도 본 발명의 범주에 속한다. 또한 이와 같은 것에 추가로 다양한 변화 및 수정이 있을 수 있음은 당업자가 인지할 수 있을 것이다. 이와 같은 변화 및 수정 또한 본 발명의 범주에 속한다.

여기에서 언급하고 있는 문헌은 모두 참고 자료로 첨부한다.

Claims

비정상적인 피부 상태, 질환의 치료 및 예방 또는 상피 탈피를 강화시키거나 또는 피부 결 또는 외양을 개선시키는데 이용되는 조성물에 있어서, 조성물에는 (1) pH 5,5이하에서 효소적으로 활성이 있고, pH 5.5이상에서는 활성이 없는 산성 프로테아제; (2) 피부 표면의 pH를 5.5이하로 일시적으로 낮추어주는 산성 완충액으로 구성되고, 이때 산성 완충액은 정상적인 상피 과정에 의해 중화되어, 피부 표면의 pH는 약 5.5로 복귀되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 산성 완충액은 제약학적 또는 화장용에 사용할 수 있는 적절한 담체, 부형제 또는 운반체를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 산성 프로테아제 효소는 곰팡이 프로테아제, 세균성 프로테아제, 또는 포유류 프로테아제 또는 이의 혼합물에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 3 항에 있어서, 산성 프로테아제는 펩신, 카텝신, 사람 뇨의 프로테아제 효소, 리조푸스펩신, 페니실리노펩신, 엔도티아펩신 등에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 무기산은 인산, 피로포스핀산, 삼인산, 폴리포스핀산, 이황화나트륨, 이황화칼륨 또는 이의 혼합물에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 2 항에 있어서, 산성 완충액의 제약학적 또는 화장용으로 사용가능한 담체, 운반체 또는 부형제는 로션, 팅크제, 크림, 에멸젼, 겔, 연고, 물, 물에서 작용하는 크림, 폴리비닐 알코올, 하이드록시 셀룰로오즈, 셀룰로오즈, 친수성 아크릴 고분자, 에몰리엔트, 보습제, 효소 안정제, 글리세롤, 계면활성제, 보존제, 친수성 농후제등에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 산성 프로테아제는 최종 조성물의 약 0.001% 내지 약 75%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 7 항에 있어서, 산성 프로테아제는 최종 조성물의 약 0.01% 내지 약 50%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 8 항에 있어서, 산성 프로테아제는 최종 조성물의 약 1% 내지 약 5%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 산성 프로테아제는 특이 활성이 약 1 내지 약 5000HUT units/㎎를 가지는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 10 항에 있어서, 산성 프로테아제는 특이 활성이 약 50 내지 약 3000HUT units/㎎를 가지는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 11 항에 있어서, 산성 프로테아제는 특이 활성이 약 500 내지 약 1500HUT units/㎎를 가지는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 산성 완충액의 산 성분은 최종 조성물의 약 0.001% 내지 약 75%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 13 항에 있어서, 산성 완충액의 산 성분은 최종 조성물의 약 0.01% 내지 약 25%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 14 항에 있어서, 산성 완충액의 산 성분은 최종 조성물의 약 1% 내지 약 5%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 조성물.
상피 탈피를 강화시키거나 또는 상피 세포 재생을 강화시키는 방법에 있어서, 조성물의 효과량을 피부에 국소적으로 투여하는 것으로 구성되는데, 조성물에는 (1) pH 5,5이하에서 효소적으로 활성이 있고, pH 5.5이상에서는 활성이 없는 산성 프로테아제; (2) 상피 탈피/상피 재생 속도를 강화시키는데 충분한 시간동안에 피부 표면의 pH를 5.5이하로 일시적으로 낮추어주는 산성 완충액으로 구성되고, 이때 산성 완충액은 정상적인 상피 과정에 의해 중화되어, 피부 표면의 pH는 약 5.5로 복귀되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 산성 완충액은 제약학적 또는 화장용에 사용할 수 있는 적절한 담체, 부형제 또는 운반체를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 산성 프로테아제 효소는 곰팡이 프로테아제, 세균성 프로테아제, 또는 포유류 프로테아제 또는 이의 혼합물에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 18 항에 있어서, 산성 프로테아제는 펩신, 카텝신, 사람 뇨의 프로테아제 효소, 리조푸스펩신, 페니실리노펩신, 엔도티아펩신 또는 이의 혼합물 등에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 산성 프로테아제는 펩신이 되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 산성 완충액의 산성 성분은 무기산, 유기산 및 이의 혼합물에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 21 항에 있어서, 무기산은 인산, 피로포스핀산, 삼인산, 폴리포스핀산, 이황화나트륨, 이황화칼륨 또는 이의 혼합물에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 21 항에 있어서, 유기산은 유산, 구연산, 소르빈산, 글리콜산, 말산, 글루코닌산 및 이의 혼합물에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 17 항에 있어서, 산성 완충액의 제약학적 또는 화장용으로 사용가능한 담체, 운반체 또는 부형제는 로션, 팅크제, 크림, 에멸젼, 겔, 연고, 물, 물에서 작용하는 크림, 폴리비닐 알코올, 하이드록시 셀룰로오즈, 셀룰로오즈, 친수성 아크릴 고분자, 에몰리엔트, 보습제, 효소 안정제, 글리세롤, 계면활성제, 보존제, 친수성 농후제등에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 산성 프로테아제는 최종 조성물의 약 0.001% 내지 약 75%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 25 항에 있어서, 산성 프로테아제는 최종 조성물의 약 0.01% 내지 약 50%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 26 항에 있어서, 산성 프로테아제는 최종 조성물의 약 1% 내지 약 5%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 산성 프로테아제는 특이 활성이 약 1 내지 약 5000HUT units/㎎를 가지는 것을 특징으로 하는 방법.
제 28 항에 있어서, 산성 프로테아제는 특이 활성이 약 50 내지 약 3000HUT units/㎎를 가지는 것을 특징으로 하는 방법.
제 29 항에 있어서, 산성 프로테아제는 특이 활성이 약 500 내지 약 1500HUT units/㎎를 가지는 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 산성 완충액의 산 성분은 최종 조성물의 약 0.001% 내지 약 95%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 31 항에 있어서, 산성 완충액의 산 성분은 최종 조성물의 약 0.01% 내지 약 25%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 32 항에 있어서, 산성 완충액의 산 성분은 최종 조성물의 약 1% 내지 약 5%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 피부 표면의 pH는 약 5분 내지 약 4시간동안 약 5.5이하로 되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 34 항에 있어서, 피부 표면의 pH는 약 5분 내지 약 2시간동안 약 5.5이하로 되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 35 항에 있어서, 피부 표면의 pH는 약 5분 내지 약 1시간동안 약 5.5이하로 되는 것을 특징으로 하는 방법.
비정상적인 피부 상태, 질환을 치료 및 예방을 하고, 또는 피부 위축 효과를 조절하고, 또는 피부 결 또는 외양을 개선하는 방법에 있어서, 조성물의 효과량을 피부에 국소적으로 투여하는 것으로 구성되는데, 조성물에는 (1) pH 5,5이하에서 효소적으로 활성이 있고, pH 5.5이상에서는 활성이 없는 산성 프로테아제; (2) 비정상적인 피부 상태, 질환을 치료 및 예방을 하고, 또는 피부 위축 효과를 조절하고, 또는 피부 결 또는 외양을 개선하는데 충분한 시간동안에 피부 표면의 pH를 5.5이하로 일시적으로 낮추어주는 산성 완충액으로 구성되고, 이때 산성 완충액은 정상적인 상피 과정에 의해 중화되어, 피부 표면의 pH는 약 5.5로 복귀되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 37 항에 있어서, 산성 완충액은 제약학적 또는 화장용에 사용할 수 있는 적절한 담체, 부형제 또는 운반체를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 37 항에 있어서, 산성 프로테아제 효소는 곰팡이 프로테아제, 세균성 프로테아제, 또는 포유류 프로테아제 또는 이의 혼합물에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 39 항에 있어서, 산성 프로테아제는 펩신, 카텝신, 사람 뇨의 프로테아제 효소, 리조푸스펩신, 페니실리노펩신, 엔도티아펩신 또는 이의 혼합물 등에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 37 항에 있어서, 산성 프로테아제는 펩신이 되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 37 항에 있어서, 산성 완충액의 산성 성분은 무기산, 유기산 및 이의 혼합물에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 42 항에 있어서, 무기산은 인산, 피로포스핀산, 삼인산, 폴리포스핀산, 이황화나트륨, 이황화칼륨 또는 이의 혼합물에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 42 항에 있어서, 유기산은 유산, 구연산, 소르빈산, 글리콜산, 말산, 글루코닌산 및 이의 혼합물에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 38 항에 있어서, 산성 완충액의 제약학적 또는 화장용으로 사용가능한 담체, 운반체 또는 부형제는 로션, 팅크제, 크림, 에멸젼, 겔, 연고, 물, 물에서 작용하는 크림, 폴리비닐 알코올, 하이드록시 셀룰로오즈, 셀룰로오즈, 친수성 아크릴 고분자, 에몰리엔트, 보습제, 효소 안정제, 글리세롤, 계면활성제, 보존제, 친수성 농후제등에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 37 항에 있어서, 산성 프로테아제는 최종 조성물의 약 0.001% 내지 약 75%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 46 항에 있어서, 산성 프로테아제는 최종 조성물의 약 0.01% 내지 약 50%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 47 항에 있어서, 산성 프로테아제는 최종 조성물의 약 1% 내지 약 5%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 37 항에 있어서, 산성 프로테아제는 특이 활성이 약 1 내지 약 5000HUT units/㎎를 가지는 것을 특징으로 하는 방법.
제 49 항에 있어서, 산성 프로테아제는 특이 활성이 약 50 내지 약 3000HUT units/㎎를 가지는 것을 특징으로 하는 방법.
제 50 항에 있어서, 산성 프로테아제는 특이 활성이 약 500 내지 약 1500HUT units/㎎를 가지는 것을 특징으로 하는 방법.
제 37 항에 있어서, 산성 완충액의 산 성분은 최종 조성물의 약 0.001% 내지 약 95%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 52 항에 있어서, 산성 완충액의 산 성분은 최종 조성물의 약 0.01% 내지 약 25%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 53 항에 있어서, 산성 완충액의 산 성분은 최종 조성물의 약 1% 내지 약 5%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 37 항에 있어서, 피부 표면의 pH는 약 5분 내지 약 4시간동안 약 5.5이하로 되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 55 항에 있어서, 피부 표면의 pH는 약 5분 내지 약 2시간동안 약 5.5이하로 되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 56 항에 있어서, 피부 표면의 pH는 약 5분 내지 약 1시간동안 약 5.5이하로 되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 37 항에 있어서, 건성 피부, 심각한 건성 피부, 비듬, 좌창, 각질증, 건선, 습진, 피부 벗겨짐, 소양증, 노인성 반점, 흑자, 흑색증, 주름, 사마귀, 얼룩진 피부, 과색소착색 피부, 과다 각질 피부, 염증성 피부질환, 노인성 피부 변화, 건선등에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
상피 탈피를 강화하거나 상피 세포 재생을 강화시키는 방법에 있어서, 조성물의 효과량을 피부에 투여하는 국소적으로 투여하는 것으로 구성되는데, 조성물에는 (1) pH 5,5이하에서 효소적으로 활성이 있고, pH 5.5이상에서는 활성이 없고 특이 활성이 4000HUT units/㎎을 가지는 산성 프로테아제가 최종 조성물의 중량의 약 4%로 존재하고; (2) 상피 탈피를 강화하거나 상피 세포 재생을 강화시키는데 충분한 시간동안에 피부 표면의 pH를 5.5이하로 일시적으로 낮추어주는 산성 완충액이 최종 조성물 중량의 3%로 구성되고, 이때 산성 완충액은 정상적인 상피 과정에 의해 중화되어, 피부 표면의 pH는 약 5.5로 복귀되는 것을 특징으로 하는 방법.
상피 탈피를 강화하거나 상피 세포 재생을 강화시키는 방법에 있어서, 조성물의 효과량을 피부에 투여하는 국소적으로 투여하는 것으로 구성되는데, 조성물에는 (1) pH 5,5이하에서 효소적으로 활성이 있고, pH 5.5이상에서는 활성이 없고 특이 활성이 4000HUT units/㎎을 가지는 산성 프로테아제가 최종 조성물의 중량의 약 4%로 존재하고; (2) 상피 탈피를 강화하거나 상피 세포 재생을 강화시키는데 충분한 시간동안에 피부 표면의 pH를 5.5이하로 일시적으로 낮추어주는 산성 완충액이 최종 조성물 중량의 1.5%로 구성되고, 이때 산성 완충액은 정상적인 상피 과정에 의해 중화되어, 피부 표면의 pH는 약 5.5로 복귀되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 60 항에 있어서, 기준과 비교를 하였을 때 136%가 증가되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 59 항에 있어서, 산성 프로테아제는 펩신인 것을 특징으로 하는 방법.
제 60 항에 있어서, 산성 프로테아제는 펩신인 것을 특징으로 하는 방법.
상피 탈피를 강화하거나 상피 세포 재생을 강화시키는 방법에 있어서, 조성물의 효과량을 피부에 투여하는 국소적으로 투여하는 것으로 구성되는데, 조성물에는 (1) pH 5,5이하에서 효소적으로 활성이 있고, pH 5.5이상에서는 활성이 없고 특이 활성이 4000HUT units/㎎을 가지는 산성 프로테아제가 최종 조성물의 중량의 약 4%로 존재하고; (2) 상피 탈피를 강화하거나 상피 세포 재생을 강화시키는데 충분한 시간동안에 피부 표면의 pH를 5.5이하로 일시적으로 낮추어주는 산성 완충액이 최종 조성물 중량의 3%로 구성되고, 이때 산성 완충액은 정상적인 상피 과정에 의해 중화되어, 피부 표면의 pH는 약 5.5로 복귀되는 것을 특징으로 하는 방법.
상피 탈피를 강화하거나 상피 세포 재생을 강화시키는 방법에 있어서, 조성물의 효과량을 피부에 투여하는 국소적으로 투여하는 것으로 구성되는데, 조성물에는 (1) pH 5,5이하에서 효소적으로 활성이 있고, pH 5.5이상에서는 활성이 없고 특이 활성이 4000HUT units/㎎을 가지는 산성 프로테아제가 최종 조성물의 중량의 약 4%로 존재하고; (2) 상피 탈피를 강화하거나 상피 세포 재생을 강화시키는데 충분한 시간동안에 피부 표면의 pH를 5.5이하로 일시적으로 낮추어주는 산성 완충액이 최종 조성물 중량의 1.5%로 구성되고, 이때 산성 완충액은 정상적인 상피 과정에 의해 중화되어, 피부 표면의 pH는 약 5.5로 복귀되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 64 항에 있어서, 산성 프로테아제는 펩신인 것을 특징으로 하는 방법.
제 65 항에 있어서, 산성 프로테아제는 펩신인 것을 특징으로 하는 방법.