KR20000000942A - 서방형 전립선염 치료제 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 전립선염 치료에 유용한 생리활성 물질인 항균제 또는 소염진통제 등의 생리활성 물질이 20 중량 % 이상 봉입되고 상기 생리 활성 물질이 1 개월에 걸쳐 유효 치료 농도 이상으로 방출되며 생분해성 고분자로 이루어진 마이크로스피어를 포함함을 특징으로 하는 병소(病巢) 투여형 생분해성 전립선염 치료용 주사제 조성물 및 이의 제조 방법을 제공한다.

Description

서방형 전립선염 치료제 조성물

본 발명은 전립선염 치료제 조성물에 관한 것으로 보다 상세하게는, 전립선염 치료에 유효한 생리활성 물질이 병소부위에서 유효농도로 장기간 방출함으로써 난치성 질환인 전립선염을 치료하는 생분해성 서방형 마이크로스피어 주사제 조성물 및 그 제조 방법에 관한 것이다.

전립선은, 선조직과 이를 둘러싸는 섬유근조직으로 이루어진 부성선 기관으로, 성인의 정상 전립선의 무게는 약 20g 이다. 전립선은 위로는 방광 경부에 고정되어 있고, 아래로는 비뇨생식격막에 의해 제 위치에 고정되어 있으며, 전립선내로 전립선 요도가 지나가며 길이는 약 2.5㎝이다. 전립선에는 교감신경 및 부교감신경이 풍부하게 분포되어 있는데, 특히 알파-아드레날린 수용체가 풍부하게 존재한다. 전립선 액은 사정시 정자의 운동성을 높여 주고 질내 산성 물질을 중화하여 수정율을 높이는 역할을 한다.

이러한 전립선에 생길 수 있는 대표적인 전립선 질환으로는, 전립선염, 전립선 비대증, 전립선암이 있다. 전립선 질환은 대부분이 난치성으로, 평균 수명의 연장으로 노년층 인구가 증가하면서 전립선 질환 환자수도 증가 일로에 있다. 그 중에서도 만성 전립선염은 현재 전세계적으로 문제가 되고 있는 비뇨기 감염성 질환이다.

만성 전립선염의 원인물로는, 원생동물 (protozoa)을 포함한 여러 종류의 세균으로부터 바이러스에 이르기까지가 추정되고 있고, 미생물 뿐 아니라 일반 화학물질도 그 원인물중 하나로 추정되고 있다. 만성 전립선염 환자들중 일부는 세균학적 검사에서 전형적인 감염 증상을 보이지만, 다른 일부는 감염 증상을 보이지 않기도 있다.

대부분의 감염성 질환은, 에이즈를 비롯한 몇몇 바이러스성 질환을 포함하는 일부 감염성 질환을 제외하고는, 현재 거의 완치가 가능한 단계에까지 왔다. 그러나 각종 박테리아성 질환의 경우에 있어서는, 병원균이 침입한 장기 종류에 따라서 치료에 저항성을 보이는 정도가 각기 다르다. 인간의 대부분의 장기는 특별히 약물선택성이 있지는 않으나, 뇌, 태반, 및 전립선 등은 특정 약물에 대한 선택성이 있는 것으로 알려져 있다. 따라서 전립선은 일반적으로 약물 효과가 강하다고 알려져 있는 최신 항생제에 대해서 일률적으로 좋은 선택성을 보이지는 않는다. 전립선의 이러한 특성은, 전립선 감염증이 일반 감염증과는 그 병태가 다르다는 것을 시사한다.

전립선염은 세균성과 비세균성으로 나뉘며, 세균성 전립선염은 다시 급성과 만성으로 나뉜다. 급성 전립선염의 원인균은 주로 G(-)균 (대장균계통)이고, 감염 경로는 요도로부터의 상행성 감염과 감염뇨의 역류로 인한 감염이 가장 일반적인 경로이다. 급성 전립선염은 대개 항균제의 경구 투여로 완치되나, 최소 30일 이상 동안 충분한 양을 지속적으로 투여해야 하므로, 항균제의 과량 투여가 문제될 수 있다.

만성 전립선염의 원인균은 주로 G(-) 호기성 간균이고, 간혹 G(+)균도 원인균이 된다. 감염경로는 급성의 경우와 동일하나, 급성 전립선염이 완치되지 않은 상태로 지속되는 형태인 경우도 많다. 만성 전립선염의 주증상으로는, 급뇨, 빈뇨, 야간뇨, 배뇨곤란 등의 배뇨 자극 증상과, 하부요통, 회음부통증, 및 불쾌감 등이 있다.

만성 전립선염의 일반적인 치료법으로는, 배뇨자극 증상의 완화를 위해 항염증제 및 항콜린제가 투여 된다. 전립선 조직내로 가장 잘 침투되는 약물은 트리메토프림으로, 200mg/day씩 12주 이상을 경구 투여한다. 이 외에도, 카베니실린, 미노사이클린, 에리스로마이신, 오플록사신 등의 항균제가 상용되기는 하나, 항균제는 일반적으로 전립선내로 잘 침투되지 않아 완치가 매우 어렵다는 문제가 있다. 즉, 전립선내 감염은 전립선내의 아시니(acini)에서 일어나는데, 이곳으로는 항균제가 잘 이행되지 않는다. 또한 항균제의 장기 복용으로 내성균이 생길 수 있고, 체내 정상세균의 균형이 파괴될 수 있으며, 전립선액중에 지속적으로 잠복하고 있는 세균이 요로감염을 유발시킬 수 있는 문제점이 있다.

만성 전립선염은 전술한 바와 같이. 약제선택성이 있어 항생제요법에 매우 강한 저항성을 보이며 따라서 완치가 매우 힘들다. 이 때문에 최소한 12주 이상의 장기요법을 실시한 후에야 약효 평가를 해야 하며, 1년 이상의 장기 요법후에도 만족할 만한 치료 효과를 얻지 못하는 경우도 있다.

비세균성 전립선염은 소위 전립선염 증후군(prostatic syndrome) 중에서 가장 흔한 것으로 원인은 잘 모르며, 다만 전립선액 내에 염증세포가 많이 발견되지만 각종 배양 검사에서 원인균이 검출되지 않는 것이 특징이다. 최근에는 Chlamydia와 Ureaplasma 등이 원인으로 밝혀지고 있다. 비세균성 전립선염은 임상적인 증상은 그다지 심하지 않으나 완치하기가 힘들고 또 대체로 장기간 지속되므로 불안, 우울, 고민 등의 정신 신경증이 동반되며 심하면 정신적인 폐인의 상태로 되는 예가 가끔 있다. 일단 비세균성 전립선염으로 인정되면 minocycline이나 erythromycin 등을 약 4 주간 투여하는 치료 방법이 사용되나 세균성 만성 전립선염에서와 마찬가지의 부작용 등이 염려되고 있다.

따라서 전립선염 치료를 위해 경구 투여제를 주로 사용하는 종래의 약물 치료방법은, 전립선내로의 약물 이행의 어려움, 장기간에 걸친 빈번한 약물 투여로 인한 환자의 불편함, 및 치료 효과가 떨어진다는 점 등의 문제점을 안고 있었다.

이러한 문제점을 해결하기 위해, 다양한 방법들이 제안되고 시도되어 왔다. 그 중에서, 항균제를 전립선내로 잘 이행되도록 하기 위해 직접 전립선에 항균제를 주사하는 방법이 보고되었다. Baert,L. 등은 겐타마이신을 직접 전립선에 주사하여 전립선액중의 높은 항균제 농도와 우수한 치료 효과를 얻었다. (Baert,L. et al. Urology, 21, 370(1983), Baert, L. et al., Journal of Urology, 140, 755-757, 1988). Masanori Yamamoto 등은 25 명의 환자들을 대상으로 아미카신과 세파졸린을 전립선에 직접 주사하여 만성 세균성 전립선염에 대한 효과를 알아보았다. 그 결과 56 %의 환자에게서 치료 효과를 확인하였다고 보고하였다(Masanori Yamamoto et al., Scand. J. Urol. Nephrol., 30, 199-202, 1996). 이와 같이 항균제를 직접 전립선에 주사하는 방법은 병소에 약물을 직접 주입하므로 전신적 부작용 없이 병소에 고농도의 약물을 전달할 수 있다는 장점이 있으나, 작용 시간이 짧다는 단점을 가지고 있다.

약물을 전립선내로 직접 주사하기 위한 경로로는, 경직장, 경요도, 경회음부가 일반적으로 이용된다. 항균제 용액 또는 현탁액을 직접 전립선에 주사하는 방법은, 병소부위에 약물을 직접 적용한다는 유리한 점은 있으나, 통증이 수반되므로 자주 주사하기는 곤란한 문제점이 있다.

최근에는 전립선염을 치료하기 위한 새로운 방법들이 보고되고 있다. 미국 특허 제 4,822,610호에는 황산아연을 함께 투여할 수도 있는, 구아이페네신의 경구 투여법이 기재되어 있다. 구아이페네신은 각 기관의 배출물의 점도를 저하시켜 배출을 용이하게 함으로써 전립선염 등의 치료를 가능하게 한다. 그러나, 이 방법은 약물이 경구 투여되므로, 전신작용에 의한 만성 기침이나 불면증 등의 부작용을 일으킬 수 있다.

미국 특허 제 5,234,698호, 제 5,071,658호, 및 제 4,946,688호에는 아연이온을 전립선에 직접 주사하여 전립선염과 전립선 비대증을 치료하는 방법으로서 아연을 각종염 형태로 하여 전립선에 직접 주사해, 전립선액 자체의 항균 활성을 강화시키는 방법이 기재되어 있다. 그러나 아연이온이 병원균에 직접 작용하는 것이아니므로 치료 효과에 한계가 있고, 또 1회의 주사로는 작용시간이 짧기 때문에 빈번한 투여가 요구되므로 환자에게 고통과 불편을 초래하는 문제가 있다.

한편, 병소투여되는 약제학적 조성물에 관한 선행기술로서, WO-9517901호에는 폐, 유방, 대장, 난소, 전립선 등의 병소에 주사하는 세포증식 억제제 조성물이 기재되어 있다. 글리세라이드와 같은 지방산 에스테르에 세포증식 억제제를 함유시켜 투여해, 투여 부위에 6시간 이상 머물며 약물이 방출되도록 하였고 유동성이 있으면서도 일정 점도를 유지하여 투여 부위에 조성물이 머물수 있도록 하였다. 그러나, 이 방법은 약물방출 시간이 너무 짧다는 단점이 있다.

미국 특허 제 4,619,913호에는 약물을 함유하는 콜라겐 및/또는 피브리노겐 매트릭스제를 목, 머리, 전립선 등의 병소에 주사함으로써, 임파계와 같은 비표적 부위로의 약물이행으로 인한 부작용을 최소화하고 약물 대사로 인한 약물 불활성화를 막아 종양 치료 효과를 높이기 위한 방법이 기재되어 있다. 그러나 상기 미국 특허 문헌에는 일회 투여로서 약효를 지속시키는 효과에 대한 언급은 없는바, 서방성을 얻을 수 없다는 단점이 있다.

본 발명의 목적은, 전립선에 직접 1 회 투여되어 장기간에 걸쳐 지속적으로 약효를 나타낼 수 있는 생분해성 서방형 전립선염 치료제 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은, 상기 치료 효과를 이루기 위한 병소 투여형 생분해성 서방형 전립선염 치료제 조성물의 제조 방법을 제공하는 것이다.

도 1은 본 발명의 독성 시험에 있어, 광학 현미경으로 관찰한 성견(成犬)의 전립선 조직 표면 사진이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 전립선 치료에 사용되는 생리 활성 물질을 20중량% 이상으로 포함하고 전립선에 직접 1회 투여되어 생리활성 물질을 1개월 이상 유효치료농도 이상으로 방출하며 생체내에서 분해되는, 크기 150㎛이하의 생분해성 서방형 마이크로스피어를 포함하는 전립선 치료제 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 a) 고분자-약물입자-유기 용매의 현탁액을 제조하는 단계; b) 폴리비닐알콜 수용액을 제조하는 단계; c) 소포제가 함유된 폴리비닐알콜 수용액으로 만드는 단계; d) 상기 a)의 현탁액을 상기 c)의 수용액에 가하고 교반시켜 유탁액을 만든 후, 유기 용매를 증발시켜 마이크로스피어를 형성시키는 단계; e) 순수를 가하고 교반하여 폴리비닐알콜을 희석하고 디클로로메탄을 제거하는 단계; f) 마이크로스피어를 분리하고 순수로 세척하고 건조시키는 단계를 포함함을 특징으로 하는 생분해성 서방형 마이크로스피어의 제조 방법이 제공된다.

이하, 본 발명을 더 상세히 설명하기로 한다.

본 발명의 조성물에 있어, 전립선염 치료제로 사용될 수 있는 생리활성 물질로는, 항균제, 소염진통제 등이 포함된다.

항균제는 일반적인 전립선염 치료제인 트리메토프림, 설파메톡사졸, 및 페니실린계, 세파계, 아미노글리코시드계, 테트라사이클린계, 마크로라이드계, 퀴놀론계, 펩티드계 등의 항균제와 이들의 염을 포함한다.

소염진통제는 디클로페낙, 플루비프로펜, 이부프로펜, 케토프로펜, 아스피린, 메페남산, 아세트아미노펜 등 및 이들의 염을 포함한다.

본 발명의 조성물은 상기한 항균제나 소염진통제 외에도, 항암제, 남성호르몬 차단제, 알파-차단제 등을 함유할 수 있으며, 이러한 약물들을 함유하는 조성물은 전립선염 외에 전립선암이나 전립선비대증에도 사용할 수 있다.

본 발명의 마이크로스피어내에 포함되는 생리활성 물질의 양은 20중량% 이상이다.

항균제의 경우 일반적으로 호르몬제 등의 생리활성물질 보다는 많은 양의 약물이 필요하다. 일본의 Takeda사에서 개발한 전립선암 치료용 마이크로스피어 제제인 Lupron의 경우에는 1 개월간 약효가 지속되는 제형에 활성 물질이 3.75 mg 들어 있다. 이 경우에는 활성 물질이 전신 작용을 하는 물질임에도 1 개월 치료에 필요한 약물의 양이 3.75 mg에 불과하다. 항균제의 경우에는 감염의 원인이 되는 세균에 대한 최소 저지 농도(MIC) 이상의 농도가 지속되어야 하므로 이를 고려하여 약물의 양이 결정되게 된다.

일반적으로 만성 세균성 전립선염의 경우에는 E. coli 및 그 변종들이 원인균의 80%이상이라고 알려져 있으며 만성 비세균성 전립선염의 경우에는 Ureaplasma 또는 Chlamydia가 주요 원인이라고 알려져 있다. 따라서 만성 전립선염의 치료를 위해서는 이들 원인균에 감수성을 지닌 항균제가 원하는 기간 동안 MIC 이상의 농도로 지속되게끔 제제가 이루어져 있어야 한다.

전립선염 치료에 유효한 것으로 알려져 있는 ofloxacin의 경우를 들어 보면 E. coli에 대한 MIC 값이 0.6 - 1.0 μg/mL로 보고되어 있다. 효과적인 치료를 위해서 MIC의 10 배인 10 μg/mL를 목표로 하고 평균적인 전립선의 무게인 20g을 고려하면 200μg/20g이 유지되어야 한다. 종래의 투여 방법인 경구 투여의 경우 300 - 400 mg을 투여했을 때 최고 4μg/g 정도의 농도를 유지하다가 투여 후 약 12 시간 경과 후에는 1 μg/g 정도로 농도가 떨어 진다. 이를 적용하여 반감기를 12 시간이라고 가정하면 1 일 평균 400 μg의 약물이 필요하다고 할 수 있다. 1 개월간 약물을 유효 농도 이상으로 유지하려면 12 mg의 약물이 필요하다. 전립선에 투여 가능한 마이크로스피어의 양에 대해서는 알려진 바가 없으며 일본의 Takeda사에서 개발한 Lupron 의 경우에는 근육이나 피하에 주사하게 되어 있지만 1회 투여량이 마이크로스피어로써 약 40 mg이다. 전립선에 직접 주사하는 본 발명의 마이크로스피어 주사제도 40 mg을 적정 투여량이라고 가정하면 마이크로스피어의 약물 함유량이 30 중량 %가 되어야 상기 언급한 12 mg의 약물이 투여되게 된다. 종래에 전립선염 치료에 사용되어 왔던 미노싸이클린, 에리스로마이신 등의 경우에도 상기와 같은 약물 필요량을 고려하면 20 중량% 이상의 고농도로 약물이 함입된 마이크로스피어가 필요하다.

본 발명의 조성물에 있어, 마이크로스피어를 형성하는 생분해성 고분자로는 알파-하이드록시 카르복실산 유도체, 예컨대 글리콜산 중합체 (PGA), 락트산 중합체 (PLA), 또는 락트산-글리콜산 공중합체 (PLGA)가 바람직하다. 이들은 체내에서 가수분해되어 인체에 무해한 물과 이산화탄소로 분해된다.

상기 중합체의 분자량은 제제의 약물 방출 시간 및 분해에 매우 중요한 영향을 미친다. 통상 분자량이 증가할수록 약물의 방출과 분해에 장시간을 요하고, PGA 보다는 PLA가, D,L-PLA보다는 L-PLA가 장시간 소요된다. 따라서 PLA와 PGA의 공중합체인 PLGA는 락트산의 비율이 증가할수록, 그리고 L-락트산을 사용할수록 약물의 방출과 분해에 장시간이 소요된다. 이러한 성질을 잘 이용하면 제제의 약물 방출 기간을 원하는 대로 조절할 수 있다. 예를 들어, 전립선염 치료를 위해 약물 방출 기간을 약 4주로 설정할 경우에는 분자량 4,000 - 50,000 범위의 것이 바람직하고, 5,000 - 20,000 범위의 것이 더욱 바람직하다. 전립선 비대증 치료를 위해 약물 방출 기간을 약 6 개월로 설정할 경우에는 분자량 10,000 - 200,000 범위의 것이 바람직하고, 10,000 - 100,000 범위의 것이 보다 바람직하다.

생분해성 고분자로는 상기의 것 이외에도, 폴리하이드록시부틸산 (PHB), 폴리카프로락톤 (PCL) 등을 사용할 수 있다. 또한 상기 언급한 고분자와 폴리에틸렌 옥사이드 (PEO)와의 공중합체도 사용할 수 있는데, 특히 이들의 블록 공중합체는 친수성과 소수성이 교대로 나타나는 특성이 있으므로 이러한 특성을 이용하여 미셀형태의 제제를 만들면 지용성 약물을 봉입시킬 수 있다. 한편, 천연 고분자로서는 알긴산나트륨, 콜라겐, 및 키토산 등을 사용할 수 있다.

본 발명의 생리활성 물질을 두 가지 이상 복합 투여하는 경우에는 각 약물에 대해, 동일한 고분자 또는 다른 분자량을 가지는 고분자를 각기 사용하여 마이크로스피어 제제를 따로 제조하면 된다. 이 경우 각 마이크로스피어내의 약물들은 상호 독립적인 약물 방출 패턴을 보인다.

본 발명의 조성물에 있어, 생리활성 물질이 봉입되는 약물 운반체로는 마이크로스피어를 사용하였다.

생분해성 마이크로스피어는, 국소 마취하에 크기가 큰 임플란트를 투여할 때의 불편함이 없이 서방성을 달성할 수 있고 약물 방출이 완료된 후 제거할 필요가 없다는 장점이 있다.

마이크로스피어는, 사용하는 고분자의 분자량에 따라 약물 방출 및 생체내 고분자 분해에 걸리는 시간이 결정되고, 용도에 따라 그 크기가 결정된다. 또한 마이크로스피어내의 약물 분포 양상에 따라 다양한 약물 방출 양상을 보이므로, 초기에 다량의 약물이 방출된 후 이어 지속적으로 일정량의 약물이 방출되도록 하는 방법, 초기에는 약물 방출이 지연되고 일정 시간이 경과한 후에 약물이 방출되도록 하는 방법, 또는 초기부터 방출 완료시까지 일정 속도로 약물이 방출되도록 하는 방법이 모두 가능하다.

마이크로스피어는 약물을 국소 투여하기에 적합하다. 근육내, 피하, 또는 전립선 같은 고립 기관에 투여된 마이크로스피어는 고형이고 또 한정된 크기를 갖기 때문에, 투여 부위에 일정시간 머무르면서 약물을 방출할 수 있다. 항생제를 병소 부위에 투여해 병원균을 소멸시키기 위해서는, 초기에는 최소 유효 농도 (MIC)보다 훨씬 많은 양의 약물이 필요하고 이후 일정기간 동안 MIC 이상의 약물 농도를 유지할 수 있어야 한다. 따라서, 본 발명에서는 약물방출이 약 1개월에 걸쳐 일어나며, 초기에 소정의 속방출성 (initial burst)이 있고, 이후 일정속도로 약물 방출이 일어나며 유효 치료 농도 이상의 약물 농도를 유지시킬 수 있도록 하는 마이크로스피어를 제조하여 사용하였다.

상기 언급한 바와 같이 마이크로스피어를 이용해서 약물을 필요한 부위에만 전달하게 되면 종래의 경구나 정맥 투여 방법에 비해 사용하는 약물의 양을 대폭 줄일 수 있다. 전립선염에 유효한 것으로 알려진 항균제인 오플록사신의 예를 들어 보면 경구 투여의 경우 통상 성인에게 1일 400 - 600 mg의 약물을 투여한다. 1 일 400 mg이라고 가정하면 1 개월간 복용시 약물의 총량이 12 g이 되지만 본 발명의 병소 투여형 조성물의 경우에는 12 mg의 미량으로도 그 이상의 효과를 낼 수 있게 된다. 따라서 종래의 방법에 비해 사용하는 약물의 양이 1/1000 로 줄게 되어 전신적인 투여로 인한 부작용 등에 대한 염려가 없게 된다.

본 발명에 사용되는 투여보조제는, 주사용 정제수, 계면활성제, 무통화제, 점도 유지제, 등장화제중 선택된 하나 이상의 투여보조제를 포함한다.

계면활성제로는 폴리소르베이트 등이 사용된다. 생분해성 고분자중 PLA, PGA, PLGA 등은 소수성이라 정제수에는 현탁되지 않으므로 계면활성제를 사용한다.

점도 유지제로는 카르복실산 메틸 셀룰로오스 나트륨염 등의 수용성 고분자가 사용된다. 계면활성제만 포함된 정제수에 마이크로스피어를 현탁시키는 경우에는 잠시 방치만으로도 마이크로스피어가 바닥에 가라앉게 되므로, 균일하게 현탁된 상태를 유지하지 못해 주사시 전량 주입하는 것이 어려우므로, 점도 유지제를 정제수에 용해시켜 사용하면 현탁제에 점도를 주어 마이크로스피어가 가라앉는 것을 현저히 감소시키므로 효과적으로 주입할 수 있다.

기타, 주사시의 통증경감을 위해 국소마취제를 사용할 수도 있다. 경직장, 경요도, 경회음부로 전립선에 주사시 아무리 가는 주사 바늘을 사용한다 해도 통증이 수반되므로 환자에게 불편을 초래할 수 있다. 따라서, 리도카인, 디부카인, 프로카인, 및 이들의 염 등의 국소 마취제를 사용하면 주사와 동시에 국소 마취 효과가 발현되므로 통증을 없앨 수 있다.

주사용 정제수를 투여 보조제로 포함하는 상기 현탁액 외에도, 주입전에는 용액 상태이고 주입 후에는 체내에서 겔 형태 (in situ gel)로 되는 현탁액을 투여 보조제로 포함하는 방법도 바람직하다.

통상의 겔은 점도가 커서 주사기를 이용하여 주입하는 것이 어렵고, 특히 겔중에 마이크로스피어가 현탁되어 있으면 유동성이 더욱 나빠지므로, 주사용 보조제로서는 적합하지 않다. 반면, 상기한 in situ gel의 경우에는 주입시에는 용액 상태이므로 이러한 문제가 없고, 또 체내 투여된 후 겔 형태로 되기 때문에 겔중에 분산되어 있는 마이크로스피어가 병소에 오래 머무를 수 있는 장점이 있다.

예컨대, 폴록사머는 저온에서는 물에 용해되어 용액이 되나 이를 체온 정도로 가온하면 겔 형태가 된다. 따라서, 마이크로스피어를 폴록사머 수용액 (저온, 10℃ 이하)에 현탁시켜 주사하면, 체내 주입된 폴록사머 용액이 겔로 되고 겔중에 분산되어 있는 마이크로스피어로부터 생리활성 물질이 방출되어 장기간의 치료 효과를 얻을 수 있다. 또한 겔 자체에도 약물을 봉입시킬 수 있어 2 이상의 약물을 복합적으로 투여하는 것이 가능하고, 동일 약물을 마이크로스피어 겔에 각각 봉입시키면 동일 약물의 2상 방출 (two-phase release)을 실현할 수 있다.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위해서 제공되는 병소 투여형 생분해성 서방형 전립선염 치료제 조성물의 제조 방법에 있어, 먼저 주사기를 통해 병소에 투여될 수 있을 정도의 크기를 갖고 1 회의 투여만으로도 치료 효과가 장기간 유지될 정도로 약물 함량이 높은, 마이크로스피어를 제조한다.

따라서 본 발명에서는 상기 목적을 만족시키는 마이크로스피어를 제조하기 위한 방법을 함께 제공한다.

마이크로스피어의 제조 방법

초기에 속방출되고, 이후 일정 속도로 방출 양상을 보이는 마이크로스피어를 얻기 위해서는 다중핵 마이크로캡슐 (multi-core microcapsule)형의 마이크로스피어를 제조해야 한다. 공지 기술인 이중 에멀젼을 이용하면 (예, 대한민국 특허 공보 제 2946호 W/O/W 다중 에멀젼 이용 방법 참조) 수용성 약물을 지용성 마이크로스피어에 봉입시킬 수 있고, 식물성 오일과 같은 코아세르베이션제 (coacervation agent)를 이용하는 상분리법에서 생길수 있는 단점인 입자들의 부착 문제를 해결할 수 있다. 그러나 제조 방법이 복잡하고, 약물을 함유하는 수층을 미세하게 분산시키는 것이 어렵다는 문제가 있다.

다중핵 마이크로스피어에서는 약물이 함유되는 핵의 크기가 매우 중요하다. 핵의 크기가 크면 주사용으로 사용되는 미세한 마이크로스피어에 약물을 봉입시키기가 어려워, 약물 봉입률이 낮아지고 초기 속방출성 (burst effect)이 과도해진다. 또한, 얻어진 마이크로스피어는 약물을 20 중량% 이상의 다량으로 함유하기 어렵다.

본 발명에서는, 다중핵 마이크로스피어의 제조에 있어서 상기의 문제점을 극복하고자, 생리활성 물질을 용해시키지 않고 입자 상태로 마이크로스피어에 봉입시키는 방법을 사용하였다. 즉, 봉입하고자 하는 약물과 고분자 용해용 유기 용매가 상호 잘 혼합되지 않는 짝을 이용해 마이크로스피어를 제조하는 방법이다.

마이크로스피어를 제조할 때 일반적으로 사용되는 유기 용매로는, 디클로로메탄이 있다. 디클로로메탄은 비점이 낮아 제거가 용이하고 수용해도가 한정되며 (2g /100g) 생분해성 고분자에 대한 용해도가 좋다는 장점이 있다. 대부분의 수용성 약물은 디클로로메탄에 대한 용해도가 낮아 디클로로메탄과 짝을 지어 사용하기 좋다. 지용성 약물들은 대개 디클로로메탄에 잘 용해되나 오플록사신과 같은 약물은 디클로로메탄 용해도가 낮아 본 발명에서 제공하는 방법으로 마이크로스피어에 봉입 시킬 수 있다.

먼저, 약물의 평균 입자경이 5 ㎛ 이하가 되도록 제트-분쇄기 등을 이용해 분쇄한다. 입자경이 0.2 ㎛ 이하가 되도록 분쇄하는 것은, 기계적인 문제가 있고 설사 다른 방식으로 분쇄하더라도 분진이 날려 제조 공정이 불편하고 유기 용매에 현탁시키기 어렵다. 분쇄 약물의 크기를 전자현미경으로 확인하고 입자경이 5 ㎛ 이상이면 제트-분쇄기로 재분쇄한다.

PLA나 PLGA와 같은 생분해성 고분자를 디클로로메탄에 용해시키고, 이 용액에 상기 분쇄 약물을 첨가해 현탁시켰다. 마이크로스피어에 약물을 균일하게 분포시키기 위해서는 현탁액을 잘 교반하여야 한다. 일반적인 교반기를 사용하거나 초음파를 이용해 현탁시키는 것이 바람직하다.

중량 평균 분자량이 5,000 - 20,000인 고분자를 사용하는 경우, 이 고분자들의 유리전이 온도 (Tg)가 대략 40℃ 이하이므로 마이크로스피어가 쉽게 형성되도록 하기 위해서는, 제조 공정중 현탁액 또는 유탁액의 온도를 20℃ 이하로 유지하는 것이 바람직하고 10℃ 이하로 유지하는 것이 더욱 바람직하다. 그러나, 유기용매인 디클로로메탄의 건조를 위해서는 -5℃ 이상의 온도가 바람직하므로, 상기 현탁액을 -5℃ 내지 10℃ 범위로 유지시킨 상태에서 혼합한다.

다음, 미리 -5℃ 내지 10℃ 범위의 온도로 냉각시킨 폴리비닐알콜 수용액에 상기 현탁액을 부가하고 교반하여 유탁액을 형성한다. 이때 폴리비닐수용액의 농도와 교반속도는 생성물인 마이크로스피어의 크기에 직접적으로 영향을 미치므로 잘 조절해야 한다. 폴리비닐알콜 수용액의 농도가 진하면 마이크로스피어의 크기가 작아지고 교반속도가 빨라도 마이크로스피어의 크기가 작아진다.

마이크로스피어를 주사 투여하는 경우 입자 크기에 제한이 있다. 근육주사나 피하주사등에 통상적으로 사용되는 주사 바늘은, 굵기가 21 - 23 게이지이다. 이 중 더 가늘어서 통증을 감소시키는 23 게이지의 주사 바늘은 그 외경이 630 nm 정도이고 내경이 170 nm 정도이다. 한편, 현탁주사제의 경우 대한 약전에서 입자 크기를 150 ㎛ 이하로 제한하고 있다. 따라서 본 발명에서의 마이크로스피어는 상기 주사 바늘의 내경보다 입자경이 작아야 하고 또 150 ㎛ 이하이어야 한다. 일반적으로 마이크로스피어는 입자경이 균일하게 제조하기 어려운바, 크기에 있어 정규 분포를 갖는다. 이러한 점을 감안할 때, 본 발명에서의 마이크로스피어는 최대 입자경이 150 ㎛ 이하, 평균 입자경이 100 ㎛ 이하인 것이 바람직하고, 최대 입자경이 100 ㎛ 이하, 평균입자경이 75 ㎛ 이하인 것이 더욱 바람직하다.

마이크로스피어의 평균 입자경이 75 ㎛ 이하로 되게 하려면 폴리비닐알콜 수용액의 농도를 높이거나 교반속도를 증가시키면 되는데, 폴리비닐알콜 수용액의 농도가 너무 진하면 수용액 제조가 힘들고 마이크로스피어가 형성된 후 폴리비닐알콜의 제거도 힘들게 된다. 농도가 너무 묽으면 교반 속도가 매우 빨라야 하며, 일반적인 기계적 교반기로는 제조하기가 힘들다. 이때 균질혼합기 (homomixer)형의 균질화기를 사용하면 6,000 rpm 이상의 빠른 교반 속도를 얻을 수 있으나 혼합기 날개에 마이크로스피어가 부딪쳐 깨질 수 있으므로 바람직하지 못하다. 따라서 1 - 10 중량%의 폴리비닐알콜 수용액에 약물-고분자-유기용매 현탁액을 주입하고 400 - 2000 rpm의 속도로 교반하여 유탁액을 형성하는 것이 바람직하다. 이때 교반기의 날개는 일반적으로 많이 사용하는 3각, 4각, 및 패들형 날개 등 모든 형태가 가능하다.

상기 유탁액을 -5℃ 내지 10℃에서 20분 내지 2시간 동안 교반하여 마이크로스피어를 형성한다. 이때 교반 속도가 빨라질수록, 많은 양의 거품이 발생해 디클로로메탄이 마이크로스피어로부터 수용액상으로 빠져 나가는 것을 방해한다. 초기에 형성된 유적으로부터 마이크로스피어가 형성되기 위해서는 유적내에 존재하는 디클로로메탄이 제거되어야 한다. 이는, 먼저 디클로로메탄이 유적에서 수용액상으로 용해되는 단계와 수용액상에서 공기층으로 증발되는 단계를 통해 이루어진다. 거품이 많이 발생하면 마이크로스피어가 수용액과 접하기 어려워 디클로로메탄의 제거도 어렵게 되고, 또 마이크로스피어가 계면 활성제의 영향을 받지 못해 모양 불균일이 발생할 수 있다. 따라서 본 발명에서는 마이크로스피어의 제조시 소포제를 사용하여 거품을 제거하였다. 소포제로는 실리콘류, 저가 알콜류, 폴리프로필렌 옥사이드류, 트리톤류 등이 사용되며 0.01 - 1 중량%의 농도로 사용하는 것이 소포력이나 제거 용이성면에서 바람직하다.

상기 유탁액에 물을 가해 희석하고 다시 30분 - 3시간 동안 교반하여 디클로로메탄을 제거하였다. 희석후의 전체 수용액에 대한 폴리비닐알콜의 농도는 0.1 - 1 중량%가 바람직하다. 폴리비닐알콜의 농도가 0.1 중량% 미만이면 마이크로스피어 내부에 봉입된 약물이 쉽게 빠져나갈 수 있고, 1 중량%를 초과하면 디클로로메탄의 제거가 어렵기 때문이다.

상기 방법에 의해 생성된 마이크로스피어를 함유하는 현탁 수용액을 실온에서 교반하여 유기 용매를 증발시키고, 수용액을 원심분리 또는 여과에 의해 마이크로스피어를 분리한 후, 순수로 세척하여 동결건조시킴으로써, 약물이 봉입된 마이크로스피어를 수득하였다.

평균 분자량이 8,000 - 12,000인 D,L-PLA를 사용하여 상기 방법에 따라 마이크로스피어를 제조한 경우 약물방출은 약 1개월에 걸쳐 이루어졌으며, PLGA를 사용한 경우는 평균 분자량이 10,000 - 20,000일 때 약물방출이 약 1개월에 걸쳐 완료되었다. 마이크로스피어중에 함유되는 약물 양은 약 10 - 30 중량%인 것이 바람직하고, 20 - 30 중량%인 것이 특히 바람직하다. 전립선염 치료를 위한 마이크로스피어의 방출 특성은 2주 이상 지속적으로 방출되고 3 개월내에 종결되는 것이 바람직하다.

본 발명의 마이크로스피어를 전립선에 직접 투여하기 위해서는 주사용 현탁액에 현탁시켜야 한다.

주사용 정제수에, 계면활성제로는 폴리소르베이트를 첨가하고 점도 유지제로는 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨(Na-CMC)을 첨가하고 국소마취제로는 리도카인 염산염을 첨가용해시켜 전립선 주사용 현탁액을 제조한다.

또한, 다른 방법으로는 주사용 정제수를 10℃ 이하의 저온으로 냉각시키고 여기에 폴록사머를 용해하여 in situ gel 형태의 전립선 주사용 현탁액을 제조한다.

본 발명의 조성물을 병소 투여하는 방법은, 경직장, 경회음부, 및 경요도 투여 방법을 포함한다.

경직장 주사의 경우, 항문으로 손가락을 넣어 촉진에 의해 전립선 위치를 확인한 후, 척추 주사용 바늘 (23게이지, 이중 바늘 구조)을 직장을 통해 전립선에 삽입한다. 이물질 유입 방지용인 내부 바늘을 제거하고 병소 투여제가 담겨 있는 주사기를 연결하여 주입한다.

경회음부 주사의 경우, 직장 수지 검사나 직장 초음파 검사 등을 통해 전립선의 위치를 확인한 후, 경직장의 경우와 동일한 방법으로 주사한다.

경요도 주사의 경우는, 요도를 통해 카테터나 이와 유사한 기구를 삽입하여 주사한다.

이하, 본 발명을 실시예에 의거하여 보다 상세히 설명한다. 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것으로, 본 발명이 하기 실시예에만 국한되는 것은 아니다.

실시예 1 :

분자량 8,000의 D,L-락트산 중합체 1.4 g과 입자경이 5 ㎛이하의 오플록사신 0.6 g을 디클로로메탄 2 ㎖에 가하고 5℃에서 120 분간 자석 젓개로 교반하여 오플록사신이 분산된 현탁액을 제조하였다. 상기 용액을 0.1%의 실리콘유가 함유된 5%의 폴리비닐알콜 수용액 150 ㎖에 가하고 1,500 rpm으로 1 시간동안 교반하면서 유화시켰다. 다음, 순수 1000 ㎖를 가하고 실온에서 서서히 디클로로메탄을 증발시켰다. 생성된 마이크로스피어를 원심분리로 분리하고 순수로 세척한후 동결건조시켜, 오플록사신을 함유한 락트산 중합체 마이크로스피어를 얻었다(M1). 생성물의 평균 입자경은 40 ㎛이고 약물 함유량은 29 중량% 이었다.

실시예 2

분자량 10,000의 D,L-락트산 중합체 1.4 g과 입자경 5 ㎛ 이하의 이부프로펜 나트륨염 0.6 g을 디클로로메탄 2 ㎖에 가하고 5℃에서 120 분간 교반하여 이부프로펜 나트륨염이 분산된 락트산 중합체 현탁액을 제조하였다. 상기 용액을 0.05%의 2-옥탄올이 함유된 4%의 폴리비닐알콜 수용액에 가하고 2,000rpm으로 90 분간 교반하면서 유화시켰다. 순수 1000 ㎖를 가하고 실온에서 서서히 디클로로메탄을 증발시켰다. 생성된 마이크로스피어를 원심분리로 분리하고 순수로 세척한후 동결건조시켜, 이부프로펜 나트륨염 함유 락트산 중합체 마이크로스피어를 얻었다(M2). 생성된 마이크로스피어의 평균 입자경은 45 ㎛이고 약물 함유량은 28 중량% 이었다.

실시예 3

분자량 16,000의 D,L-락트산 글리콜산 공중합체 (PLGA) 1.4 g과 입자경 5 ㎛ 이하의 미노사이클린 염산염 0.6 g을 디클로로메탄 2 ㎖에 가하고 5℃에서 180 분간 교반하여 미노사이클린 염산염-PLGA 현탁액을 제조하였다. 상기 용액을 5%의 폴리비닐알콜 수용액에 가하고 1,900 rpm으로 60 분간 교반하면서 유화시켰다. 순수1500 ㎖를 가하고 실온에서 서서히 디클로로메탄을 증발시켰다. 생성된 마이크로스피어를 원심분리로 분리하고 순수로 세척한후 동결건조시켜, 미노사이클린 염산염 함유 락트산 글리콜산 공중합체 마이크로스피어를 얻었다(M3). 생성된 마이크로스피어의 평균입자경은 35 ㎛이고 약물 함유량은 23 중량% 이었다.

실시예 4

폴리소르베이트 80, 저점도의 Na-CMC, D-만니톨, 및 리도카인 염산염을 주사용 정제수에 용해시켜, 상기 실시예들에서 제조한 마이크로스피어 M1, M2, M3를 분산시킬 주사용 현탁액을 제조하였다.

성분	함량
폴리소르베이트 80	200 ㎎
Na-CMC (저점도)	1 g
D-만니톨	10 g
리도카인 염산염	2 g
주사용 정제수	200 ㎖

실시예 5

폴록사머 188을 5℃로 냉각시킨 주사용 정제수에 용해시켜 in situ gel형의 현탁액을 다음과 같이 제조하였다.

성분	함량
폴록사머 188	60 g
주사용 정제수	200㎖
프로카인 염산염	2 g

평가 시험

1. 마이크로스피어 M1의 약물 방출 시험

마이크로스피어 M1을 pH 7.4의 인산염 완충용액에 넣고 37℃의 항온수조에서 온도를 유지시키면서, 시간에 따른 약물 방출량을 UV 스펙트로미터를 사용하여 조사하였다. 또한, 완충용액을 pH 8.3의 트리스 완충용액을 이용해 상기와 동일한 방법으로 약물 방출량을 분석하였다. 각 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

2. 마이크로스피어 M2의 약물 방출 시험

마이크로스피어 M2를 pH 7.4의 인산염 완충용액에 넣고 37℃의 항온수조에서 온도를 유지시키면서, 시간에 따른 약물 방출량을 UV 스펙트로미터를 사용하여 조사하였다. 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

	약물 방출 시험에 의한 누적 방출율 (%)
시험마이크로스피어	방출 기간 (일)
	1	3	5	7	9	12	14	16	19	21	24	26	28	30
M1(pH 7.4)	9	13	18	22	32	41	49	55	64	72	80	86	91	94
M1(pH 8.3)	12	23	32	40	47	55	61	68	76	82	88	91	93	95
M2(pH 7.4)	7	11	15	18	28	35	38	43	51	57	66	72	76	78

3. 주사 시험

상기 실시예 1에서 제조한 마이크로스피어 40 mg이 들어있는 주사제용 바이알에 상기 실시예 4에서 제조한 현탁액 1 ㎖를 가하여 잘 흔들어 주었다. 바늘 굵기가 23 게이지인 척추 주사 1회용 주사기를 이용하여 상기 현탁 주사용액을 주사기에 전량 취하고 성견(成犬)의 전립선에 주사하였다. 상기 현탁 주사 용액을 전량 주사기에 취할 수 있었고, 전립선에 주사시도 막힘없이 전량이 주사되었다.

4. 효과 및 독성 시험

오플록사신 함유 마이크로스피어 M1을 상기 실시예 4에서 제조한 현탁액 1 ㎖에 현탁하여 성견 4마리를 대상으로 전립선에 주사하였다.

즉, 성견들을 수술전일 오후 8시부터 절식시켰고, 전신 마취 직후 혈액 10 ㎖를 채취하였고 바로 5% 하트만-덱스트로오스 용액을 최대 속도로 정맥 주사하였다. 복부의 털을 제거하고 완전 소독한 후, 페니스 근처에 중간 절개 (median incision)을 가하고, 피하조직을 박리하여, 직장근을 절개해 (splitting) 복막을 열었다. 복강내 내부 장기에 손상을 주지 않으면서 조심스럽게 양쪽으로 옮겨 놓아 전립선을 노출시켰다. 미리 주사기에 준비한 마이크로스피어를 전립선 피막을 통해 주사하고 봉합시켰다.

1, 2, 3, 및 4주가 경과한 후 성견의 두부에 손상을 가해 실신시킨 상태에서 혈액을 채취하고, 즉시 복막을 열고 전립선도 채취하였다.

혈액은 채취 즉시 원심분리하여 혈청을 얻었으며, 전립선은 주위 조직을 미세수술장치 (microsurgical operation set)로 완전히 제거하고 요도를 중심으로 중앙홈 (median groove)을 통해 양분하였으며, 각각의 엽(lobe)은 9개로 나우어 절단하였다. 각 절편의 일부를 다시 취하여 조직 검사를 위해 10% 포르말린 용액으로 고정하였으며, 나머지 절편에서 전립선 조직액을 추출하였다.

채취 조직액을 20 마이크로리터씩 취하여 항생물질 조사용 종이디스크를 적신 후 잘말려서 E.coli가 접종된 아가판에 얹고 37℃에서 배양하여 생장 억제 영역의 지름을 측정하였다. 미리 오플록사신의 표준용액을 상기와 같은 방법으로 실험하여 얻은 검량선을 이용하여 각 검체의 약물 농도를 측정하였다.

한편, 대조군으로 오플록사신 정제 (타리비드, 제일약품)를 1일 2회, 200 ㎎씩 (총 400㎎)을 투여하였으며, 채취일에는 오전 9시에 200 ㎎, 오후 12시에 200 ㎎을 경구 투여하고 오후 2시에 상기와 같은 방법으로 혈액 및 전립선을 채취하였다. 전립선은 상기 마이크로스피어를 주사한 실험군 동일한 방법으로 처리하고 약물 농도를 측정하였다.

실험군과 대조군에서 각각 채취한 혈액을 원심분리하여 혈청을 분리하고 클로로포름으로 3회 추출한 후, 인산염 완충 용액에 용해하고 HPLC를 이용하여 약물 농도를 측정하였다.

실험군과 대조군에서 측정한 전립선 내 국소 약물 농도값은 표 2에 나타내었으며, 혈중 약물 농도값은 표 3에 나타내었다.

전립선 내의 국소 약물 농도 (mcg/㎖)
구분	실험군 (마이크로스피어 주사)	대조군 (경구 투여)
경과시간	최고 농도	최저 농도	최고 농도	최저 농도
1주2주3주4주	120408050	1111	-1010-	-54-

혈중 약물 농도 (mcg/㎖)
경과 시간	실험군 (마이크로스피어)	대조군(경구투여)
1주	검출 되지 않음.	-
2주	검출 되지 않음.	1.7
3주	검출 되지 않음.	4.1
4주	검출 되지 않음.	-

마이크로스피어가 투여된 성견들은 희생시킬 때까지 잘 생존하였고, 어떠한 특이한 양상도 관찰되지 않았다. 채취한 전립선 조각을 10% 포르말린에 고정시키고 박리절편한 후 염색하여 조직 표본을 만들고 광학 현미경으로 관찰한 결과, 조직 괴사 및 심각한 염증 소견을 발견할 수 없었다. ( 도 1 사진 참조)

본 발명의 병소투여형 생분해성 전립선 치료제 조성물은, 전립선에 직접 주사되어 생분해성 고분자가 전립선내에서 서서히 분해되어 생리활성 물질을 방출함으로써, 전신 투여시 약물 이행이 어려운 전립선내에서 장기간 지속적으로 약효를 발휘할 수 있다. 또한, 1회 투여로 1개월 이상 효과가 지속되므로 빈번한 투여로 인한 환자의 불편과 고통을 덜 수 있고, 전립선내로 직접 투여하므로 종래의 투여 방법에 비해 0.1 % 이하의 약물 양으로도 치료 효과를 얻을 수 있고 전신 작용으로 인한 부작용이 경감되며 약물 효과를 극대화 시킬 수 있다.

Claims (6)

1. 서방형 전립선염 치료제에 있어서, 생분해성 고분자로 이루어지고 내부에 전립선염에 유용한 생리활성물질을 20중량% 이상으로 함유하며 크기가 150㎛ 이하로서 병소에 직접 1회 주사되어 병소부위에서 유효치료농도 이상으로 1개월에 걸쳐 생리활성물질을 방출하는 마이크로스피어를 포함하는 전립선염 치료제 조성물.
2. 제 1항에 있어서, 상기 마이크로스피어를 구성하는 생분해성 고분자는 락트산 중합체(PLA) 또는 락트산-글리콜산 공중합체(PLGA)인 것을 특징으로 하는 전립선염 치료제 조성물.
3. 제 1항에 있어서, 상기 생리활성 물질이 항균제 및 소염 진통제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 생리활성 물질인 것을 특징으로 하는 생분해성 서방형 전립선염 치료제 조성물.
4. 제 1항에 있어서, 주사용 정제수, 계면활성제, 무통화제, 점도유지제, 및 등장화제로 이루어진 투여 보조제군 중에서 적어도 하나 이상 선택된, 투여 보조제를 부가적으로 포함함을 특징으로 하는 생분해성 서방형 전립선염 치료제 조성물.
5. 제 4항에 있어서, 투여 보조제가 주사 전에는 용액 상태이고 주사 후에는 겔 형태가 되는 in situ gel임을 특징으로 하는 생분해성 서방형 전립선염 치료제 조성물.
6. 전립선염 치료에 유용한 생리활성물질을 함유하는 생분해성 마이크로스피어 서방형 전립선염 치료제 조성물을 제조함에 있어서,

   a) 평균 분자량이 5,000 - 20,000의 락트산 중합체(PLA) 또는 락트산-글리콜산 공중합체(PLGA)와 같은 생분해성 고분자를 디클로로메탄에 용해시키고 여기에 평균 입자경이 0.2 - 5 ㎛로 미세하게 분산된 약물 입자를 현탁시켜 고분자-약물입자-디클로로메탄 현탁액을 제조하고 상기 현탁액의 온도를 -5℃ 내지 10℃로 유지하는 단계;

   b) 농도가 1 내지 10 중량 %인 폴리비닐알콜 수용액에 소포제를 0.01 내지 1 중량 %가 되도록 투입하여 소포제가 함유된 폴리비닐알콜 수용액을 만들고 이 수용액의 온도를 -5℃ 내지 10℃로 유지하는 단계;

   c) 상기 a)의 현탁액을 상기 b)의 수용액에 가하고 400 내지 2,000 rpm으로 20 분 내지 2 시간 동안 교반시켜 유탁액을 만든 후, 유기용매를 증발시켜 마이크로스피어를 형성하는 단계;

   d) 마이크로스피어가 형성된 현탁수용액에 순수를 가하고 30 분 내지 3 시간 동안 교반하여 폴리비닐알콜의 농도가 0.1 내지 1 중량 %가 되도록 희석하고 디클로로메탄을 제거하는 단계;

   e)마이크로스피어를 분리하고 이를 순수로 세척하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제조 방법.