KR19990030419A

KR19990030419A - 자연산 상황버섯 추출물의 추출방법 및 그 추출물을 이용한 미백화장품 제조방법

Info

Publication number: KR19990030419A
Application number: KR1019980059727A
Authority: KR
Inventors: 김상묵; 김병기
Original assignee: 김상묵
Priority date: 1998-12-24
Filing date: 1998-12-24
Publication date: 1999-04-26
Also published as: KR100308392B1

Abstract

본 발명은 높은 강도를 갖는 자연산 상황버섯을 감압하여 초고주파 처리후 탈색 및 이취 제거하여 추출물을 획득하고, 이 추출물에 1종 이상의 자외선 흡수제 혹은 자외선 산란제와, 1종 이상의 멜라닌 합성을 저해하는 펩타이드, 감초추출물, 알부틴, 쌀추출물, 비타민C 등을 배합한 미백화장품을 제조하여 자외선에 의한 피부의 흑화 또는 색소 침착의 방지와 피부 등의 멜라닌 생성을 억제하여 피부의 색조와 기미.주근깨를 개선하는 효과와 항산화 효과에 의한 피부 노화 방지 기능을 갖도록 하는 자연산 상황버섯 추출물의 추출방법 및 그 추출물을 이용한 미백화장품 제조방법에 관한 것이다.

이를 위하여 본 발명은, 높은 강도를 갖는 자연산 상황버섯의 추출방법에 있어서, 상기 자연산 상황버섯을 중량의 변화가 없을 때까지 건조시킨 후 분쇄기로서 분쇄하고, 상기 분쇄된 자연산 상황버섯 20g을 30% 1,3-부틸렌글리콜 수용액 60g에 가하여 20~40kg/㎠ 감압하에 60℃에서 48시간 물중탕과 동시에 24시간 초고주파 처리하고, 400mesh로 1차여과 및 0.45㎛ 제균 여과지로 2차 여과 후 활성탄 칼럼을 통과시켜 이취제거 및 탈색한 것에 특징이 있다.

또한 본 발명은, 상황버섯 추출물이 함유된 화장품 제조방법에 있어서, 세토스테아릴알콜 3.0중량부, 밀납 1.0중량부, 자기유화형 모노스테아린산글리세린 3.0중량부, 롤리소르베이트 60 1.0중량부, 소르비탄 스테아레이트 0.4중량부, 방부제 1.6중량부, 항산화제 5.0중량부, 미네랄오일 10중량부, 스쿠알란 5.0중량부, 히아루론산 나트륨 5.0중량부, 프로필렌 글리콜 5.0중량부, 정제수 40중량부, 자연산 상황버섯 추출물 20중량부의 조성비로 이루어진 것에 있다.

Description

자연산 상황버섯 추출물의 추출방법 및 그 추출물을 이용한 미백화장품 제조방법

본 발명은 자연산 상황버섯 추출물의 추출방법 및 그 추출물을 이용한 미백화장품 제조방법에 관한 것으로써, 더욱 상세하게는 매우 높은 강도를 갖는 자연산 상황버섯을 감압하여 초고주파 처리후 탈색 및 이취 제거하여 추출물을 획득하고, 이 추출물에 1종 이상의 자외선 흡수제 혹은 자외선 산란제와, 1종 이상의 멜라닌 합성을 저해하는 펩타이드, 감초추출물, 알부틴, 쌀추출물, 비타민C 등을 배합한 미백화장품을 제조하여 자외선에 의한 피부의 흑화 또는 색소 침착의 방지와 피부 등의 멜라닌 생성을 억제하여 피부의 색조와 기미.주근깨를 개선하는 효과와 항산화 효과에 의한 피부 노화 방지 기능을 갖도록 하는 자연산 상황버섯 추출물의 추출방법 및 그 추출물을 이용한 미백화장품 제조방법에 관한 것이다.

일반적으로 자연산 상황(桑黃)버섯은 옛날부터 중국에서는 상이(桑耳)라고도 하여 뽕나무에 기생하는 것으로 조사되어 왔으나, 우리나라에서 조사된 바에 의하면 뽕나무 이외에 일부 활엽수의 심재부에서도 야생되는 것을 볼 수 있는 것으로 알려져 (차동렬, 월간잠사, P34-37, 1992.12)있고, 소나무 비늘버섯과(Hymenochaetaceae)의 진흙버섯속 (Phellinus Quel. em. Imaz)에 속하며, 우리나라에서 상황버섯이라 함은 목질 진흙버섯(Phellinus Linteus)을 지칭한다.

이와 같은 진흙버섯속에는 전세계 약 48종이 보고 되고 있으나, 우리나라에서는 녹슨 진흙버섯(p. ferrginosus), 마른 진흙버섯(P. gilvus), 말똥 진흙버섯(P. igniarius), 가지 진흙버섯(P. laevigatus), 벚나무 진흙버섯(P. pomaceus), 찰 진흙버섯(P. robustus), 전나무 진흙버섯, 낙엽 진흙버섯(P. pini) 등으로 8종이 존재하며, 약리작용으로는 항암효과, 면역강화기능, 종양저지효과, 자궁출혈, 월경불순 등의 부인병 치료에 효과가 좋다고 알려져 있다.

또한, 자연산 상황버섯 추출물에는 여러 종류의 당과 플라보노이드 성분, 섬유질, 이소플라본 등이 다량 함유되어 있어 화장품에서의 보습력과 피부노화 방지기능, 항산화 효과가 우수하고 특히 피부 미백효과 면에서 효과가 매우 우수하다고 보고 〔T. Iked, T. T sutsumi, Fragrance J., 6, 59 (1990)〕되고 있으며, 피부노화는 크게 생리적 노화와 광노화가 중요한 역할을 한다고 알려져 있는데, 그 중에서도 가장 설득력 있는 것으로 세포내에 발생하는 활성산소종(Reactive Oxygen Species)인 프리 라디칼(Free Radical)이 지질, 단백질, 핵산 등의 생체 분자들을 변화시켜 노화현상을 초래한다는 것이다.(Harman, 1956 ; 1992 ; Richter et al., 1988 : Oliver et al., 1987 ; Brank et al., 1992)

이러한 활성산소종은 정상적인 대사과정에서도 생성되며, 질병상태나 스트레스를 받을 때는 과잉으로 생성될 수 있고, 특히 피부는 자외선에 노출되어 있어 활성산소종을 만드는 광화학적 반응들이 게속해서 일어나고 있다. 그 밖에도 흡연, 공해 및 세균감염 등도 활성 산소종을 생성시키며, 과잉 활성산소종은 피부의 항산화 방어망을 위태롭게 만들어 지질과산화 반응, DNA 산화 등으로 이어져 병리학상 암 및 피부탄력 감소, 주름살 및 기미 주근깨 등의 피부노화로 이어짐으로써 필요한 항산화제를 함유한 식품이나 화장품을 통한 계속적인 항산화제 보충으로 피부 황산화 방어망을 견고히 할 때 피부 노화는 지연된다고 할 수 있다.

그러므로 기미.주근깨의 생성을 방지하고 침착된 색소를 제거하기 위한 화장료는 멜라닌 합성과 생성을 저해하는 물질, 자외선 차단제, 피부노화 방지를 위한 보습제, 신진대사 촉진제 등이 복합적으로 처방되어야 한다.

따라서 최근에 들어 의약품 및 화장품 분야에서 상황버섯 추출물을 함유한 제품이 취급되어 우수한 미백효과와 항산화 효과가 입증되고 있지만, 대부분 추출물의 성분이 매우 적은 인공재배한 상황버섯을 사용하고, 또한 인공재배로 성장시킨 상황버섯의 추출물을 일반적인 방법인 수용성의 중탕에 의해 행해지므로 추출 효율이 낮고, 멜라린 색소 침착의 예방수준과 자외선에 의해 유발될 수 있는 기미 주근깨의 예방과 치유에 대해서는 완만한 효과를 갖는다는 단점이 있다.

즉, 종래 인공재배한 상황버섯 추출물의 추출방법과 그 추출물을 이용한 화장품은 대한민국 공개특허번호 제 98-50697호(공개일자 1998.09.15)에서와 같이 강도가 거의 없는 인공재배한 상황버섯을 분쇄하여 즙 형태로 만든 후, 이 즙 형태의 상황버섯을 물중탕 처리하여 얻은 물 추출방법과, 60~95%의 에탈올에 중탕하여 얻은 에탄올 추출방법과, 1.3-부틸렌글리콜 및 물의 혼합액에 중탕 처리하여 얻은 혼합액 추출방법 등의 일반적이며 전통적인 방법에 의해 추출물을 획득하고 있다.

그러나 이와 같은 인공재배에 의해 성장된 상황버섯은 전술한 여러 종류의 당과 플라보노이드 성분, 섬유질, 이소플라본 등과 같은 성분이 자연산 상황버섯에 비해 함유율이 매우 적게 포함되어 있을 뿐만아니라 이로 인해 인공재배 상황버섯을 화장품에 사용할 경우 사실상 고유의 효과를 얻을 수 없게 되는 것이며, 또한 자연산 상황버섯은 인공재배 상황버섯에 비해 매우 높은 강도를 지니게 되어 전술한 중탕 방법으로 추출물을 획득하기에는 사실상 불가능하게 되는 것이다.

또한 인공재배 상황버섯의 추출물을 화장품에 첨가하여 제조할 경우에는 효능의 저하로 인하여 보습력과 피부노화 방지기능, 항산화효과 및 피부 미백효과 면에서 효과가 저하되어 사실상 효과얻 얻지 못하는 문제점이 있는 것이다.

종래 또다른 방법으로서는, 대한민국 공개특허번호 제 98-38284호 (공개일자 1998.08.05)에서와 같이 상황버섯의 균사체 또는 그의 배양액으로부터 얻은 추출물을 이용한 것이다.

즉, 공개특허번호 제 98-38284호는 상황 균사체 또는 그의 배양액으로부터 얻은 추출물은 균사체에 증류수를 가하여 약 100℃에서 3시간 동안 열수추출한 열수추출물 또는 균사체를 제거한 배양액을 분자량 10,000의 초여과막을 사용하여 여과시켜 분자량 10,000이하의 저분자 물질을 제거한 후, 알코올을 가하여 침전시켜서 얻은 침전물을 원심분리하여 얻으며, 이 균사체를 화장료 조성물로서 사용하고 있다.

그러나 이와 같은 종래 공개특허번호 제 98-38284호는 상황 균사체를 배양함에 따라 자연산 상황버섯에 비하여 항암효과, 면역강화기능, 종양저지효과, 자궁출혈, 월경불순 등의 약리작용의 효능이 낮은 문제점이 있는 것이다.

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해소하기 위하여 여러 종류의 당과 플라보노이드 성분, 섬유질, 이소플라본 등과 같은 성분의 함유율이 인공재배 상황버섯 보다 월등히 높으며, 강도가 매우 높은 자연산 상황버섯을 사용하되, 추출물의 추출방법을 건조 분쇄하여 열수추출, 에탄올수용액,1,3-부틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 이소프로판올을 용매를 이용하여 60~80℃ 고온에서 일정 기간동안 반응조에 질소가스를 주입하면서 교반, 용출시킨 후 감압하에 초고주파 처리과정을 거쳐 활성탄으로 여과하는 방법으로 추출물을 획득함으로써 강도가 매우 높은 자연산 상황버섯의 추출 효율을 높이는 한편, 이취 및 일차 탈색과정을 거친 자연산 상황버섯의 추출물의 추출방법을 제공하는데 본 발명의 목적이 있는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 자연산 상황버섯을 전술한 방법으로 추출된 추출물과, 자외선 흡수제 또는 산란제와 멜라닌 합성 저해 펩타이드, 감초추출물, 알부틴, 쌀추출물 등을 배합하여 자외선으로 인한 피부색소 침착의 예방과 기미.주근개의 제거, 광노화 또는 지질과산화에 의한 피부노화 방지 등에 복합상승 작용을 가지는 자연산 상황버섯 추출물을 이용한 미백화장품 제조방법을 제공하는데 있다.

상기의 목적을 달성하기 위한 본 발명은, 높은 강도를 갖는 자연산 상황버섯의 추출방법에 있어서, 상기 자연산 상황버섯을 중량의 변화가 없을 때까지 건조시킨 후 분쇄기로서 분쇄하고, 상기 분쇄된 자연산 상황버섯 20g을 30% 1,3-부틸렌글리콜 수용액 60g에 가하여 20~40kg/㎠ 감압하에 60℃에서 48시간 물중탕과 동시에 24시간 초고주파 처리하고, 400mesh로 1차여과 및 0.45㎛ 제균 여과지로 2차 여과 후 활성탄 칼럼을 통과시켜 이취제거 및 탈색한 것에 특징이 있다.

본 발명의 다른 특징은, 상황버섯 추출물이 함유된 화장품 제조방법에 있어서, 세토스테아릴알콜 3.0중량부, 밀납 1.0중량부, 자기유화형 모노스테아린산글리세린 3.0중량부, 롤리소르베이트 60 1.0중량부, 소르비탄 스테아레이트 0.4중량부, 방부제 1.6중량부, 항산화제 5.0중량부, 미네랄오일 10중량부, 스쿠알란 5.0중량부, 히아루론산 나트륨 5.0중량부, 프로필렌 글리콜 5.0중량부, 정제수 40중량부, 자연산 상황버섯 추출물 20중량부의 조성비로 이루어진 것에 있다.

도 1은 본 발명에 사용되는 자연산 상황버섯 추출물의 자외선(UV)스펙트럼도

도 2는 본 발명에 사용되는 자연산 상황버섯 추출물의 멜라닌 생성 억제

실험결과 도표도.

도 3은 본 발명에 사용되는 자연산 상황버섯 추출물의 피부색 개선효과 실험

결과를 나타낸 도표도.

이하 본 발명에 따른 자연산 상황버섯 추출물의 추출방법 및 그 추출물을 이용한 미백화장품 제조방법을 상세히 설명하면 다음과 같으며, 이들 실시예는 본 발명의 예시적인 기재이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되는 것은 아니다.다.

먼저 자연산 상황버섯 추출물의 추출방법에 대하여 살펴보면, 매우 높은 강도를 갖는 자연산 상황버섯을 중량의 변화가 없을 때까지 건조시킨 후 분쇄기로서 분쇄한다.

실시예 1

(1) 상기 분쇄된 자연산 상황버섯 20g을 30% 1,3-부틸렌글리콜 수용액 60g에 가하여 20~40kg/㎠ 감압하에 60℃에서 48시간 물중탕 하면서 24시간 초고주파 처리하고, 400mesh로 1차여과 및 0.45㎛ 제균 여과지로 2차 여과 후 활성탄 칼럼을 통과시켜 이취제거 및 탈색하는 방법으로 추출하였다.

(2) 상기 분쇄된 자연산 상황버섯 20g을 30% 에탄올 수용액 60g에 가하여 5일간 방치하고 20~40kg/㎠ 감압하에 60℃에서 에탄올을 증발시킨 후 24시간 초고주파 처리를 거쳐 0.45㎛ 제균 여과지로 여과 후 활성탄 칼럼을 통과시켜 이취제거 및 탈색하는 방법으로 추출하였다.

(3) 상기 분쇄된 자연산 상황버섯 20g을 30% 프로필렌글리콜 수용액 또는 30% 이소프로판올 수용액 60g에 가하여 20~40kg/㎠ 감압하에 60℃에서 48시간 물중탕하면서 24시간 초고주파 처리하고 0.45㎛ 제균 여과지로 여과 후, 활성탄 칼럼을 통과시켜 이취제거 및 탈색하는 방법으로 추출하였다.

(4) 상기 분쇄된 자연산 상황버섯 20g에 증류수 80g을 가하여 20~40kg/㎠ 감압하에 80℃에서 48시간 물중탕하면서 24시간 초고주파 처리하고 0.45㎛ 제균 여과지로 여과 후 활성탄 칼럼을 통과시켜 이취제거 및 탈색하는 방법으로 추출하였다.

(5) 상기 분쇄된 자연산 상황버섯 20g을 에탄올, 1.3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 이소프로판올 및 증류수의 동일부피 혼합액 60g을 가하여 20~40kg/㎠ 감압하에 60℃에서 48시간 물중탕하면서 24시간 초고주파 처리하고 0.45㎛ 제균 여과지로 여과 후 활성탄 칼럼을 통과시켜 이취제거 및 탈색하는 방법으로 추출하였다.

상기의 방법으로 추출된 자연산 상황버섯 추출물의 자외선 흡수스펙트럼 분석결과 도 1에서와 같이 강한 자외선 흡수능력(190nm-400nm)을 가지고 있었으며, 피부 화장료로 응용하기 위한 테스트로 일반 유기자외선 차단제(자극치 2.0)와 비교시 대단히 낮은 자극치(0.80)를 나타내었고,(지질과 산화에 대한 항산화 효과, Free Radical Scavenging(유리기포착능) 효과, 미백효과를 테스트한 결과 리놀레익산을 이용한 항산화 효과(81%)는 대조군으로 인공재배한 상황버섯 추출물(70%), 비타민E(35%),녹차추출물(63%), 당근추출물(10%)에 비해 우수한 효과를 나타내었으며, DPPH법에 의한 Free Radical Scavenging 효과(90.10%)도 은행잎추출물(68%), 녹차추출물(77%)에 비해 높게 나타났으며, 미백효능 테스트인 티로신억제효과법과 C57BL Mouse의 귀부분을 이용한 멜라닌 생성 억제 실험법, 미생물(Streptomyces bikiniensis)의 멜라닌 생성 저해능, 임상테스트에서도 대조군으로 사용된 자연산 상황버섯, 비타민C, 알부틴, 코직산 보다 높은 미백효과를 나타내었다.

또한 자외선 차단으로 광노화 억제도 매우 우수하게 나타났으며 이를, 함유한 화장료 및 자연산 상황버섯 추출물과 동시에 자외선 차단제, 1종 이상의 미백제 함유 화장료에서도 효과적인 자외선 차단으로 피부노화 방지와 미백효과의 복합 상승작용으로 우수한 효과를 나타내었다.

본 발명의 바람직한 실시 형태에 의하면 미백화장료 조성물을 통상 사용되는 화장료기제 등에 가하여 일반적인 화장품 제조방법에 따라 화장수, 유액, 크림 등의 화장품으로 제조할 수 있다. 상세하게는 (a) 자연산 상황버섯 고농축 추출물 0.10 내지 40.0 중량부, (b)옥틸메톡시 신나메이트 0.1 내지 5.0 중량부, 벤조페논 0.1 내지 5.0 중량부, 옥시벤존 0.1 내지 5.0 중량부 중에서 1종이상, (c)멜라닌 합성 저해 펩타이드 0.10 내지 30.0 중량부, 감초추출물 0.1 내지 30.0 중량부, 알부틴 0.1 내지 30.0 중량부, 쌀 추출물 0.1 내지 30.0 중량부 중에서 1종 이상을 함유한 화장료이다.

이들 중 (b)성분, (c)성분은 1종 또는 2종 이상이 배합되며 이에 한정되는 것은 아니다.

또한 (b)성분은 5.0 중량부 이상을 배합하면 화장료의 사용감과 안전성 및 안정성에 문제를 나타내게 된다.

이와 같은 본 발명의 미백화장료를 전술한 (a)와 (b) 및 (c)성분을 배합하는 것을 특징으로 하지만, 본 발명의 미백화장료는 이들 성분 이외에도 통상의 미백화장료에 배합되는 기제 및 여러 첨가제를 배합하여도 좋다. 예를 들면 유분, 활성제, 향료 및 방부제 등이 배합된다.

이하 실시예에 의해 본 발명을 보다 상세히 설명하며, 이들 실시예는 본 발명의 예시적인 기재일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되는 것은 아니다.

상기에서 전술한 다수의 (1)~(5)의 방법에 의해 추출한 상황버섯 추출물의 미백효과를 측정하기 위해 티로시나아제 효소의 기능억제 되는 정도를 비교하였으며, 티로시나아제는 색소 세포내의 티로신을 활성화시켜 멜라닌 생성을 일으키는 효소이다.

본 실시예는 Horowits와 A. Vanni 등의 실험법에 따라 실시하였으며 대조로는 자연산 상황버섯 (0.01, 0.10, 0.50, 1.00, 10.00의 증류수에 대한 부피 %), 유용성비타민(0.01, 0.50, 0.10, 1.00, 10.00의 증류수에 대한 부피 %, 알부틴(0.01, 0.10, 0.50, 1.00, 10.00의 증류수에 대한 부피 %), 코직산(0.01, 0.01, 0.50, 1.00, 10.00의 증류수에 대한 부피 %)으로 하였다.

여기서 티로시나아제 저해 활성은 시료 0.9ml를 마이크로플레이트(96웰)에 넣고 0.1몰 인산완충 용액 (pH 6.5) 1.0ml, L-티로신 용액 0.3mg/ml를 넣은 후 티로시나아제 (Sigrma, 1250U/ml mushroom tyrosinase) 0.1ml를 첨가하여 37℃에서 10분간 반응시킨 후 마이크로플레이트를 사용하여 475nm에서 흡광도를 측정하였다.

티로시나아제 저해율은 다음식으로 계산하였으며, IC₅₀값은 효소 활성 저해율 50%에 달하는 저해물질의 농도이다.

저해율(%) = (시료 첨가 흡광도/시료 무첨가의 흡광도)×100

티로시나아제 활성 억제 작용 시험결과 자연산 상황버섯 각 추출물의 저해율은 아래 표 1과 같이 우수한 미백효과를 나타내었다.

물 질	저 해 율(%)	저해율(%)IC₅₀
인 공 재 배 상 황 버 섯	42.10	0.80
유 용 성 비 타 민	51.70	0.50
알 부 틴	60.30	0.40
코 직 산	96.60	0.03

자연산 상황버섯	열수 추출물	83.40	0.12
	30% 에탄올 추출물	82.10	0.13
	30% 프로필렌글리콜 추출물	80.20	0.15
	30% 1.3-부틸렌글리콜 추출물	80.20	0.15
	30% 이소프로판올 추출물	78.50	0.20
	60% 프로필렌글리콜,1.3-부틸렌글리콜,이소프로판올, 물,에탄올 혼합물	84.00	0.10

실시예 2

전술한 추출방법에 의해 추출된 자연산 상황버섯 추출물을 이용하여 도 1에서와 같이 자외선 흡수능력을 보기 위해 UV Spectrum을 (190-700nm) 측정하였으며, 도 1에서 알수 있듯이 190-400nm에서 효과적인 자외선 흡수능이 나타났다.

실시예 3

전술한 방법에 의해 추출된 상황버섯 추출물을 이용하여 미백효과를 알아보기 위해 자외선 유발 후 멜라닌 생성 억제 작용 및 소실되는 정도를 알아보는 것을 목적으로 하였다.

그 실험과정은 C57BL Mouse (8W,♀)에 자외선 (FL20-SE 램프)을 15.2mJ/㎠, 1일 1회, 5일간 연속 조사하고, 최종 조사일로부터 1주간 후에 귀부분을 채취하여 연골을 제거한 후 외귀의 피부를 2N-NaBr 용액에 37℃, 2시간 침적한 후, 표피를 진피로 부터 박리하여 미리 조정한 0.14% L-DOPA용액 (0.1M 인산 완충액으로 pH를 7.2로 일정하게 함.) 2ml에 피험약물 1ml를 첨가하여 박리한 표피를 37℃, 3시간 침적하여 멜라노사이트의 염색(DOPA염색)을 행한다.

이 판정은 1㎟의 멜라노사이트 수를 5군데 현미경으로 계측하여 1㎟당 세포수의 평균을 산출한 후, 어떤 시료도 첨가하지 않는 Blank와 비교 그 억제율을 산출한 것으로, 실험결과 도 2에서와 같이 자외선 유발에 대해 코직산, 알부틴 보다 우수한 멜라닌 억제 효과와 색소침착 소실속도를 보였다.

실시예 4

전술한 방법에 의해 추출된 상황버섯 추출물을 이용하여 방선균에 대한 멜라닌 생성 억제작용을 측정한 것으로 사용된 균주는 Streptomyces bikiniensis (NRRL B-1049, KCTC-9172)이다.

S. bikiniensis NRRL B-1049 KCTC-9172를 배양 Prpavizas VDYA agar slant 배지 (V-8 juice 200ml, glucose 2g, Yeast EX. 2g, CaCO3 1g, Agar 20g, D-Water 800ml, pH=7.2)에서 28℃ 2주 동안 배양시켜 포자를 생성시킨 후 멸균수로 포자 현탁액을 만들었다. 0.2%의 Yeast EX. 를 첨가한 ISP No. 7 평판배지에 포자 현탄액 0.2ml씩을 도포한 후 배지표면에 시료를 적신 페이퍼 디스크에 시료양을 30㎍/paper disc로 도포하고 28℃에서 배샹하였다. 48시간 배향 후 생성된 멜라닌 생성 저해환의 크기를 멜라닌 생성 저해물질로 알려진 4-하이드옥시아니솔을 대조구로 하여 멜라닌 생성 저해여부를 표 2에 의해 관찰하였다.

실시예의 결과 본 발명에 따른 초고주파 추출방법에 의해 추출한 자연산 상황버섯 추출물은 안전하고 우수한 멜라닌 생성 저해 효과를 나타내었다.

물 질	저해환지름(mm)	저해율(%)
인공재배 상황버섯 0.5% 수용액	18.0±1.5	30.8
비타민C 0.5% 수용액	8.0±1.5	69.2
알부틴 0.5% 수용액	N.D	-
감초 추출물 0.5% 수용액	22.0±1.5	15.4
코직산 0.5% 수용액	24.0±1.5	7.7
자연산상황버섯0.5%수용액	열수 추출물	13.0±1.5	50.0
	30% 에탄올 추출물	16.0±1.5	38.5
	30% 프로필렌글리콜 추출물	16.0±1.5	38.5
	30% 1.3-부틸렌글리콜 추출물	14.0±1.5	46.2
	30% 이소프로판올 추출물	11.5±1.5	55.8
	60% 프로필렌글리콜,1.3-부틸렌글리콜,이소프로판올, 물,에탄올 혼합물	8.0±1.5	69.2

실시예 5

전술한 방법에 의해 추출된 자연산 상황버섯 추출물을 이용하여 항산화력을 측정한 것으로 자동산화가 잘 되는 물질인 리놀레닉산을 이용하여 지질과산화에 대하여 자동산화 억제정도와 Funita et. al 의 DPPH 유리기 억제효과(Frdee Radical Scavenging)이다.

항산화 효과는 2mg/ml의 리놀레닉산과 10mg/ml Tween 20, 0.2M 인산완충액 (pH 7.4), 시료를 첨가하여 0.1ml로 만든 후 37℃, 24시간 배양 후, 80% 에탄올 0.1ml, 30% 암모니움티오시아네이트 0.1ml, 20mM의 황산제일철암모니움 -3.5% 염산 0.1ml를 첨가하고 3분후 500nm에서 흡수파장을 측정하여 항산화 효과 시료를 넣지 않은 대조군와 비교하여 항상화 효과를 %로 측정하였다.

Free Radical Scavenging 효과는 0.1mlM DPPH Methanolic acid 1.0ml와 Ethanolic시료 1.0ml를 37℃에서 30분 후 516nm에서 흡광도를 측정하여 무첨가 시료와 비교하여 표 3에서와 같이 억제율을 구하였다.

즉, 표 3에서 알 수 있는 바와 같이 초고주파 추출방법에 의한 자연산 상황버섯 추출물은 리놀레닉산에 대한 항산화 효과와 DPPH 유리기 억제효과(Frdee Radical Scavenging) 모두 우수한 효과는 나타내었다.

물 질	항산화 효과 (%)	Free Radical Scavenging Activity (%)
인공재배 상황버섯 1.0% 에탄올용액	79.8	67.3
비타민E 1.0% 에탄올용액	43.3	36.5
알부틴 1.0% 에탄올용액	N.D	N.D
녹차 추출물 1.0% 에탄올용액	83.1	88.6
당근추출물 1.0% 에탄올용액	17.0	N.D
은행잎 추출물 1.0% 에탄올 용액	68.0	69.5

자연산상황버섯1.0%에타올용액	열수 추출물	91.6	84.9
	30% 에탄올 추출물	90.4	82.5
	30% 프로필렌글리콜 추출물	90.9	82.0
	30% 1.3-부틸렌글리콜 추출물	91.0	83.4
	30% 이소프로판올 추출물	80.5	80.3
	60% 프로필렌글리콜,1.3-부틸렌글리콜,이소프로판올, 물,에탄올 혼합물	94.7	87.1

실시예 6,7

본 실시예에서는 전술한 방법에 의해 추출된 자연산 상황버섯 추출물을 이용하여 미백크림을 제조한 것으로, 표 4에 조성물 및 제조방법을 기재하였다.

성 분	실시예 6	실시예 7	비교예 1.(중량부)
제 1 상
세토스테아릴알콜	30.	3.0	3.0
밀납	1.0	1.0	1.0
자기유화형 모노스테아린산글리세린	3.0	3.0	3.0
롤리소르베이트 60	1.0	1.0	1.0
소르비탄 스테아레이트	0.4	0.4	0.4
방부제	적 량	적 량	적 량
항산화제	적 량	적 량	적 량
미네랄오일	10.0	10.0	10.0
벤조페논	-	0.2	-
옥시벤존	-	0.3	-
옥틸메톡시신나메이트	-	0.5	-
스쿠알란	5.0	5.0	5.0
제 2 상
정제수	전량합이 100이 되도록 함.
히아루론산 나트륨	5.0	5.0	5.0
프로필렌 글리콜	5.0	5.0	5.0
자연산 상황버섯 추출물	20.0	18.0	-
제 3 상
멜라닌생성억제 호르몬	-	5.0	-
감초추출물	-	5.0	-
알부틴	-	1.0	-
쌀추출물	-	5.0	-

상기의 조성물을 갖는 미백크림의 제조는, 제 1 상과 제 2 상을 각각 별도의 용기에서 75~85℃로 균일하게 용해 시킨 후, 제 2 상에 제 1 상을 첨가하고 호모 믹서로 5분간 3600rpm, 패들 믹서로 20분간 25rpm으로 교반하여 유화하였다. 얻어진 혼합물을 다시 40~50℃로 냉각하고 제 3 상을 가한 후, 다시 패들 믹서로 25rpm 으로 교반한 후 25℃까지 냉각하여 미백크림을 제조하였다.

실시예 8,9

본 실시예에서는 전술한 방법에 의해 추출된 자연산 상황버섯 추출물을 이용하여 미백화장수을 제조한 것으로, 표 6에 조성물 및 제조방법을 기재하였다.

성 분	실시예 8	실시예 9	비교예 2.(중량부)
제 1 상
정제수	전량합이 100이 되도록 함.
글리세린	5.0	5.0	5.0
히아루론산 나트륨	5.0	5.0	5.0
에틸렌디아민 테트라아세트산 이나트륨	0.05	0.05	0.05
프로필렌 글리콜	5.0	5.0	5.0
자연산 상황버섯 추출물	5.0	5.0	-
옥시벤존	-	0.2	-
옥틸메톡시 신나메이트	-	0.5	-
멜라닌생성억제 호르몬	-	5.0	-
감초추출물	-	5.0	-
알부틴	-	1.0	-
쌀추출물	-	5.0	-
제 2 상
에탄올	3.0	3.0	3.0
방부제	적 량	적 량	적 량

항산화제	적 량	적 량	적 량
폴리옥시에틸렌 경화피마자유(40E.O)	0.7	0.7	0.7

상기의 조성물을 갖는 미백화장품의 제조는, 제 1 상과 제 2 상을 실온에서 균일화 시킨 후, 제 1 상을 교반봉으로 교반하면서 제 2 상을 서서히 투입하여 미백화장수를 각각 제조하였다.

이와 같은 성분 및 제조방법에 의해 만들어진 실시예 6에서 얻어진 미백크림으로 자연산 상황버섯 추출물과 멜라닌 합성저해 호르몬, 감초추출물, 알부틴, 쌀추출물, 자외선 차단제함유 미백크림의 기미 주근깨에 대한 피부 외용제로서의 효과를 알아보기 위해 이중맹검법에 따라 Well Control Test를 실시한 결과에 대해 색차계(Minolta社, Chromameter C R-300)를 이용하여 L값 (명도)을 산출하였다.

실험 방법으로는 팔 위족부위에 자외선을 0.88J/㎠, 1회/1일 3회 조사한 후 시료를 2회/일, 30일간 도포하여 도포 전.후의 L값에 따른 미백효과(표 6.)와 시간의 경과에 따라 주위 정상 부위의 L값과의 차이인 △L값을 구하여 색소침착의 소실속도를 도 3에 의해 비교한다.

미백효과 L(%) =｜(도포전의 L값-도포후의 L값)/도포전의 L값｜ ×100(표6.)

표 6에 의해 자연산 상황버섯 추출물과 다른 미백효과성분, 자외선 차단제가 함께 사용됨으로서 피부의 흑화현상을 방지할 뿐 만 아니라 피부 얼룩을 제거하여 미백효과에 있어 뛰어난 상승효과를 유도한다는 사실을 알 수 있다.

	미백효과 L(%)
실시예 6	79.9
실시예 7	94.0
비교예 1	35.0

또한 실시예 8과 실시예 9와 같은 성분 및 제조방법에 의해 만들어진 미백화장수에 대한 항산화 효과를 측정한 결과이며, 이 결과 표 7에서와 같이 실시예 우수한 항산화 효과와 함께 유리기 억제작용이 있음을 알수 있다.

	황산화효과효과 L(%)	Fre RadicalScavenging(%)
실시예 8	82.9	91.1
실시예 9	81.3	88.5
비교예 2	54.0	55.4

이상에서 상술한 바와 같이 본 발명은, 여러 종류의 당과 플라보노이드 성분, 섬유질, 이소플라본 등과 같은 성분의 함유율이 인공재배 상황버섯 보다 월등히 높으며, 강도가 매우 높은 자연산 상황버섯을 사용하되, 추출물의 추출방법을 건조 분쇄하여 열수추출, 에탄올수용액,1,3-부틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 이소프로판올을 용매를 이용하여 60~80℃ 고온에서 일정 기간동안 반응조에 질소가스를 주입하면서 교반, 용출시킨 후 감압하에 초고주파 처리과정을 거쳐 활성탄으로 여과하는 방법으로 추출물을 획득함으로써 강도가 매우 높은 자연산 상황버섯의 추출 효율을 높이는 한편, 이 추출방법에 의해 추출된 추출물과, 이 추출물에 1종 이상의 자외선 흡수제 혹은 자외선 산란제와, 1종 이상의 멜라닌 합성을 저해하는 펩타이드, 감초추출물, 알부틴, 쌀추출물, 비타민C 등을 배합한 미백화장품을 제조하여 자외선에 의한 피부의 흑화 또는 색소 침착의 방지와 피부 등의 멜라닌 생성을 억제하여 피부의 색조와 기미.주근깨를 개선하는 효과와 항산화 효과에 의한 피부 노화방지 기능에 높은 효과를 얻을 수 있는 것이다.

Claims

높은 강도를 갖는 자연산 상황버섯의 추출방법에 있어서,

상기 자연산 상황버섯을 중량의 변화가 없을 때까지 건조시킨 후 분쇄기로서 분쇄하고, 상기 분쇄된 자연산 상황버섯 20g을 30% 1,3-부틸렌글리콜 수용액 60g에 가하여 20~40kg/㎠ 감압하에 60℃에서 48시간 물중탕과 동시에 24시간 초고주파 처리하고, 400mesh로 1차여과 및 0.45㎛ 제균 여과지로 2차 여과 후 활성탄 칼럼을 통과시켜 이취제거 및 탈색한 것을 특징으로 하는 자연산 상황버섯 추출물의 추출방법.
높은 강도를 갖는 자연산 상황버섯의 추출방법에 있어서,

상기 자연산 상황버섯을 중량의 변화가 없을 때까지 건조시킨 후 분쇄기로서 분쇄하고, 상기 분쇄된 자연산 상황버섯 20g을 30% 에탄올 수용액 60g에 가하여 5일간 방치하고, 20~40kg/㎠ 감압하에 60℃에서 에탄올을 증발시킨 후 24시간 초고주파 처리를 거쳐 0.45㎛ 제균 여과지로 여과 후 활성탄 칼럼을 통과시켜 이취제거 및 탈색한 것을 특징으로 하는 자연산 상황버섯 추출물의 추출방법.
높은 강도를 갖는 자연산 상황버섯의 추출방법에 있어서,

상기 자연산 상황버섯을 중량의 변화가 없을 때까지 건조시킨 후 분쇄기로서 분쇄하고, 상기 분쇄된 자연산 상황버섯 20g을 30% 프로필렌글리콜 수용액, 또는 30% 이소프로판올 수용액 60g에 가하여 20~40kg/㎠ 감압하에 60℃에서 48시간 물중탕하면서 24시간 초고주파 처리하고 0.45㎛ 제균 여과지로 여과 후, 활성탄 칼럼을 통과시켜 이취제거 및 탈색한 것을 특징으로 하는 자연산 상황버섯 추출물의 추출방법.
높은 강도를 갖는 자연산 상황버섯의 추출방법에 있어서,

상기 자연산 상황버섯을 중량의 변화가 없을 때까지 건조시킨 후 분쇄기로서 분쇄하고, 상기 분쇄된 자연산 상황버섯 20g에 증류수 80g을 가하여 20~40kg/㎠ 감압하에 80℃에서 48시간 물중탕하면서 24시간 초고주파 처리하고 0.45㎛ 제균 여과지로 여과 후 활성탄 칼럼을 통과시켜 이취제거 및 탈색한 것을 특징으로 하는 자연산 상황버섯 추출물의 추출방법.
높은 강도를 갖는 자연산 상황버섯의 추출방법에 있어서,

상기 자연산 상황버섯을 중량의 변화가 없을 때까지 건조시킨 후 분쇄기로서 분쇄하고, 상기 분쇄된 자연산 상황버섯 20g을 에탄올, 1.3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 이소프로판올 및 증류수의 동일부피 혼합액 60g을 가하여 20~40kg/㎠ 감압하에 60℃에서 48시간 물중탕하면서 24시간 초고주파 처리하고 0.45㎛ 제균 여과지로 여과 후 활성탄 칼럼을 통과시켜 이취제거 및 탈색한 것을 특징으로 하는 자연산 상황버섯 추출물의 추출방법.
상황버섯 추출물이 함유된 화장품 제조방법에 있어서,

세토스테아릴알콜 3.0중량부, 밀납 1.0중량부, 자기유화형 모노스테아린산글리세린 3.0중량부, 롤리소르베이트 60 1.0중량부, 소르비탄 스테아레이트 0.4중량부, 방부제 1.6중량부, 항산화제 5.0중량부, 미네랄오일 10중량부, 스쿠알란 5.0중량부, 히아루론산 나트륨 5.0중량부, 프로필렌 글리콜 5.0중량부, 정제수 40중량부, 자연산 상황버섯 추출물 20중량부의 조성비로 이루어진 것을 특징으로 하는 자연산 상황버섯 추출물을 이용한 화장품 제조방법.
상황버섯 추출물이 함유된 화장품 제조방법에 있어서,

세토스테아릴알콜 3.0중량부, 밀납 1.0중량부, 자기유화형 모노스테아린산글리세린 3.0중량부, 롤리소르베이트 60 1.0중량부, 소르비탄 스테아레이트 0.4중량부, 항산화제 1.6중량부, 미네랄오일 10중량부, 벤조페논 0.2중량부, 옥시벤존 0.3중량부, 옥틸메톡시신나메이트 0.5중량부, 스쿠알란 5.0중량부, 히아루론산 나트륨 5.0중량부, 프로필렌 글리콜 5.0중량부, 정제수 30중량부, 자연산 상황버섯 추출물 18중량부, 멜라닌생성저해 펩타이드 5.0, 감초추출물 5.0중량부, 알부틴 1.0중량부, 쌀추출물 5.0중량부의 조성비로 이루어진 것을 특징으로 하는 자연산 상황버섯 추출물을 이용한 화장품 제조방법.
상황버섯 추출물이 함유된 화장품 제조방법에 있어서,

글리세린 5.0중량부, 히아루론산 나트륨 5.0중량부, 에틸렌디아민 테트라아세트산 이나트륨 0.05중량부, 프로필렌 글리콜 5.0중량부, 정제수 75중량부, 자연산 상황버섯 추출물 5.0중량부, 에탄올 3.0중량부, 항산화제 1.25중량부, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유 0.7중량부의 조성비로 이루어진 것을 특징으로 하는 자연산 상황버섯 추출물을 이용한 화장품 제조방법.
상황버섯 추출물이 함유된 화장품 제조방법에 있어서,

글리세린 5.0중량부, 히아루론산 나트륨 5.0중량부, 에틸렌디아민 테트라아세트산 이나트륨 0.05중량부, 프로필렌 글리콜 5.0중량부, 정제수 59중량부, 자연산 상황버섯 추출물 5.0중량부, 옥시벤존 0.2중량부, 옥틸메톡시 신나메이트 0.5중량부, 멜라닌 생성저해 펩타이드 5.0중량부, 감초추출물 5.0중량부, 알부틴 1.0중량부, 쌀추출물 5.0중량부, 에탄올 3.0중량부, 항산화제 0.55중량부, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유 0.7중량부의 조성비로 이루어진 것을 특징으로 하는 자연산 상황버섯 추출물을 이용한 화장품 제조방법.