KR19980067506A - 항균성 미생물제제, 그 제조방법 및 처리방법 - Google Patents

항균성 미생물제제, 그 제조방법 및 처리방법 Download PDF

Info

Publication number
KR19980067506A
KR19980067506A KR1019970003568A KR19970003568A KR19980067506A KR 19980067506 A KR19980067506 A KR 19980067506A KR 1019970003568 A KR1019970003568 A KR 1019970003568A KR 19970003568 A KR19970003568 A KR 19970003568A KR 19980067506 A KR19980067506 A KR 19980067506A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
microbial
antimicrobial
wye
medium
microbial agent
Prior art date
Application number
KR1019970003568A
Other languages
English (en)
Other versions
KR100197077B1 (ko
Inventor
서형원
Original Assignee
서형원
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to KR1019970003568A priority Critical patent/KR100197077B1/ko
Application filed by 서형원 filed Critical 서형원
Priority to JP53415898A priority patent/JP3428658B2/ja
Priority to IDW990809A priority patent/ID22852A/id
Priority to CA002279489A priority patent/CA2279489A1/en
Priority to CN98802311A priority patent/CN1246890A/zh
Priority to AU58821/98A priority patent/AU735602B2/en
Priority to EP98902271A priority patent/EP1015555A1/en
Priority to PCT/KR1998/000015 priority patent/WO1998035017A1/en
Priority to US09/155,650 priority patent/US6280719B1/en
Publication of KR19980067506A publication Critical patent/KR19980067506A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100197077B1 publication Critical patent/KR100197077B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/28—Streptomyces
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886—Streptomyces

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 식물의 곰팡이 병원균을 제어함으로써 식물의 생장을 증진시킬 수 있는 항균성 미생물제제, 그 제조방법 및 처리방법에 관한 것이다. 본 발명의 항균성 미생물제제는 스트렙토마이세스 속 (Streptomyces spp.) WYE 20 (KCTC 8768P)과 WYE 324 (KCTC 8769P) 중의 적어도 하나의 신규한 항균성 미생물 균주를 포함하고 있으며, 이들 균주의 생존성 및 활성을 안정한 상태로 유지시킬 수 있는 미생물 전달매체를 포함하고 있어서, 특히 라이족토니아 솔라니와 피토프쏘라 캡사이시 제어 활성이 뛰어나며, 식물체, 특히 오이, 고추 및 잔디에 여러 가지 방법으로 처리될 수 있으며, 환경오염문제를 전혀 유발하지 않는다.

Description

항균성 미생물제제, 그 제조방법 및 처리방법
본 발명은 항균성을 가지고 있는 미생물제제, 그 제조방법 및 처리방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 식물이 성장하고 있는 토양의 근권에 착생하여 식물체에 질병을 유발하는 곰팡이 병원균을 제어함으로써 식물 생장을 증진시킬 수 있는 항균성 미생물제제와 그 제조방법 및 처리방법에 관한 것이다.
토양에 존재하는 곰팡이류의 병원균들은 농업과 원예산업에 커다란 경제적 손실을 야기하고 있다. 특히 라이족토니아 솔라니(Rhizoctonia solani)는 병원성이 매우 강하며 광범위한 숙주 식물체에 씨앗썩음병, 뿌리썩음병, 모잘록병 등의 씨들링 질병 (Seedling Diseases)과 잎, 잎자루, 줄기등에 폴리어 질병 (foliar diseases)을 일으켜 그 피해로 인한 경제적손실이 매우 크다. 일예로서, 라이족토니아 솔라니 AG 1 (IB) 는 오이, 고추 등을 비롯한 일반 농작물 뿐만아니라 골프장 그린 잔디인 벤트그라스(bentgrass)에 라이족토니아 브라운 패치를 일으키고, 라이족토니아 솔라니 AG 2-2 (IV) 는 골프장 페어웨이 (fairway) 잔디에 라지패치를 일으키는 등 그 피해 면적과 피해의 정도가 막대하다. 또한 피토프쏘라 캡사이시(Phytophthora capsici)는 고추역병을 일으키며 병원성이 매우 강한 병원균으로서, 이 균주에 의해 일단 감염이 되면 고추역병의 발생을 막을 수가 없을 정도로 치명적인 손실을 일으키는데, 특히 고추 수확기전 고온 다습한 시기에 지상부 식물체의 전부위에서 발병하여 식물체를 고사시킴으로써 재배농가에 치명적인 경제적 손실을 일으킨다. 이처럼 라이족토니아 솔라니와 피토프쏘라 캡사이시는 병원성이 매우 강하고 균핵 또는 포자를 형성하여 열악한 환경조건에서도 장기간 동안 잠복하고 있다가 발병조건이 되면 병이 재발하는 등 그 피해가 반복적이고 광범위하게 진행된다. 따라서, 라이족토니아 솔라니와 피토프쏘라 캡사이시로 인한 식물체의 질병 방제를 위하여 복합살균제를 주기적으로 사용하고 있으나 살균제의 집중적인 사용에 의한 약제 내성 균주의 출현과 고추연작으로 인한 역병균의 다량 증식, 다년생인 잔디의 경우 내성 병원균의 잠복 등으로, 고추역병과 잔디의 브라운 및 라지 패치의 효과적인 방제가 더욱 어려워지고 있다.
반복적인 화학 합성농약의 사용은 잔류독성과 환경오염문제를 야기할 뿐만아니라, 농약을 살포한다 해도 이미 성장이 이루어진 작물에 살포하는 경우에는 성장 식물체에 가려 토양 침투가 어려워 토양에 잠복하는 병원균을 효과적으로 제어하지 못한다. 따라서, 피토프쏘라 캡사이시에 의한 고추역병을 비롯하여 라이족토니아 솔라니에 의한 일반농작물과 잔디의 병해를 지속적이고 효과적으로 제어하기 위하여 미생물, 특히 근권에 착생하는 특정의 미생물을 이용하여 병원균을 지속적으로 제어함으로써 식물의 발병을 억제하고 제어하는 것이 합리적이고 경제적이며 환경보호측면에서도 효과적이며, 이러한 목적으로 최근 미생물을 이용한 미생물 비료들이 많이 개발되고 있다.
이와 관련한 종래 기술로서, 먼저 EP 공개 제 0294053호에는 식물의 생장을 촉진하는 조성물로서 N-아실 락탐 화합물과 미생물 균주를 포함하는 조성물이 개시되어 있고, 미합중국특허 제 4,595,589호에는 토탄 (peat)을 주성분으로 하는 현탁액 상태의 미생물 전달매체 조성물과 미생물 균주를 포함하는 조성물을 이용하여 식물의 생장을 촉진하고 병해를 방지하는 방법이 개시되어 있으며, 미합중국특허 제 5,403,584호에는 초탄 (peat moss), 모래와 옥수수를 주성분으로 하는 미생물 전달매체와 미생물 균주를 포함하는 조성물을 상기와 같은 용도로 이용하는 방법이 개시되어 있다. 이중 EP 특허는 화학적으로 합성된 화합물을 이용하고 있는 데서 오는 문제점을 여전히 안고 있고, 상기 미국 특허에 개시되어 있는 조성물은 모두 자연에서 얻어지는 물질들로 이루어지므로 환경오염 문제를 해결하는데는 도움이 되지만 그 성분상의 문제로 인해 멸균 후 분말상으로 제조되기가 용이하지 않고 현탁액상으로도 안정하게 유지되기가 곤란하여 식물의 종자에 직접 처리하는 경우에 그다지 효과적이지 않다. 또한, 항균성을 가지고 있는 미생물 균주를 포함하는 미생물 제제에서, 가장 중요한 요소인 항균성 미생물 균주의 항균성이 일정 수준 이상으로 높아야 하며 이러한 활성이 안정하게 유지될 수 있어야 하나, 현재까지의 미생물 제제에서는 그다지 만족할만한 결과를 거두지 못하였다.
따라서, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 식물의 질병, 특히 라이족토니아 솔라니와 피토프쏘라 캡사이시에 의한 식물 병해에 대해 방지 활성을 갖는 신규의 미생물 균주를 분리하여 이를 포함하는 항균성 미생물제제를 제공하는 것이다.
본 발명이 이루고자 하는 다른 기술적 과제는 상기와 같은 미생물제제의 제조방법으로서 식물의 종자나 뿌리 또는 토양 처리에 적합하며 항균성 미생물 균주를 생존상태로 유지하기에 적합한 항균성 미생물제제의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명이 이루고자 하는 또 다른 기술적 과제는 상기 항균성 미생물제제를 간편하게 처리하는 방법을 제공하는 것이다.
상기 기술적 과제를 이루기 위하여 본 발명에서는 식물의 곰팡이 병원균을 제어함으로써 식물의 생장을 증진시킬 수 있는 항균성 미생물제제에 있어서, 스트렙토마이세스 속 (Streptomyces spp.) WYE 20 (KCTC 8768P)과 스트렙토마이세스 속 WYE 324 (KCTC 8769P) 중의 적어도 하나의 항균성 미생물 균주를 포함하는 항균성 미생물제제가 제공된다.
여기에서, 상기 식물은 특별히 제한되지는 않으나, 밭작물로서 특히 오이, 고추와 잔디인 것이 바람직하다.
바람직하기로는, 상기 항균성 미생물제제는 상기 항균성 미생물 균주에 대한 미생물 전달매체를 더 포함한다.
바람직하기로는, 상기 미생물 전달매체는 밀기울 40 내지 65 중량%, 키토산 1 내지 5 중량%, 톱밥 30 내지 55 중량%, 키틴 1 내지 3 중량% 및 목화씨에서 유도된 단백질 배지 1 내지 3 중량%를 포함한다. 보다 바람직하기로는, 상기 미생물 전달매체는 미생물 전달매체 전체 중량에 대하여 0.2 내지 3.5중량% 포자생성배지를 더 포함한다. 이러한 배지로는, 포자를 생성할 수 있는 것이면 특별히 제한되지 않으나, ATCC #5 배지나 YGM 배지를 이용하는 것이 바람직하다.
상기 항균성 미생물 균주는 상기 미생물 전달매체 1g당 콜로니 형성단위 (colony forming unit:cfu)로서 1.0x105-1010개, 바람직하기로는 107-108개 포함되어 있는 것이 바람직하다.
바람직하기로는, 상기 미생물 전달매체는 1.0 내지 3.0 중량%의 펙틴, 0.1-0.6중량%의 콜로이드키틴과 나머지량의 물을 포함하며, 액체형이다. 상기 항균성 미생물 균주는 상기 액체형 미생물 전달매체 1ml당 cfu로서 105-1010개, 바람직하기로는 107-108개 포함되어 있는 것이 바람직하다.
상기 다른 기술적 과제를 이루기 위하여 본 발명에서는, 스트렙토마이세스 속 WYE 20 (KCTC 8768P)과 스트렙토마이세스 속 WYE 324 (KCTC 8769P) 중의 적어도 하나의 항균성 미생물 균주를 배양하여 균체를 얻는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제의 제조방법이 제공된다.
바람직하기로는, 상기 배양은 25 내지 33℃에서 3 내지 7일동안 진탕하에 이루어진다.
상기 균체를 얻은 다음, 균체를 동결건조시켜 균체분말을 제조하거나 또는 적절한 미생물 전달매체와 혼합하는 단계를 더 실시하는 것이 바람직하다.
본 발명의 일태양에 있어서 본 발명의 상기 다른 기술적 과제는, 밀기울 40 내지 65 중량%, 키토산 1 내지 5 중량%, 톱밥 30 내지 55 중량%, 키틴 1 내지 3 중량% 및 목화씨에서 유도된 단백질 배지 1 내지 3 중량%를 균일하게 혼합하고 멸균하여 미생물 전달매체를 형성하는 단계, 상기 미생물 전달매체에 스트렙토마이세스 속 WYE 20 (KCTC 8768P)과 스트렙토마이세스 속 WYE 324 (KCTC 8769P) 중의 적어도 하나의 항균성 미생물 균주 배양액을 혼합하여 25 내지 33℃에서 5-14일간 배양하는 단계 및 상기 배양단계에서 얻은 결과물을 무균적으로 건조시키는 단계를 포함하는 항균성 미생물제제의 제조방법에 의해 달성된다.
바람직하기로는, 상기 건조단계 후, 얻어진 결과물을 무균적으로 분쇄하는 단계를 더 포함한다.
바람직하기로는, 상기 미생물 전달매체의 형성단계 후, 상기 미생물 전달매체를 펠릿형으로 성형한 다음 얻어진 펠릿에 대해 포자생성배지를 전체 중량에 대하여 0.2 내지 3.5 중량%의 양으로 코팅하는 단계를 더 포함한다.
상기 항균성 미생물 균주의 혼합단계에서, 상기 항균성 미생물 균주가 상기 미생물 전달매체 1g당 cfu로서 1.0×105-1010개, 보다 바람직하기로는 107-108개 혼합한다
상기 미생물 전달매체의 형성단계에서 멸균은 121℃에서 30-40분간 습열멸균인 것이 바람직하다.
본 발명의 다른 태양에 있어서 본 발명의 다른 기술적 과제는, 1.0 내지 3.0 중량%의 펙틴, 0.1 내지 0.6중량%의 콜로이드키틴과 나머지 량의 물을 균일하게 혼합한 후 멸균하여 액체형 미생물 전달매체를 형성하는 단계와 상기 미생물 전달매체에 스트렙토마이세스 속 WYE 20 (KCTC 8768P)과 스트렙토마이세스 속 WYE 324 (KCTC 8769P) 중의 적어도 하나의 항균성 미생물 균주 배양액을 혼합하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제의 제조방법에 의해 달성된다.
바람직하기로는, 상기 항균성 미생물 균주가 상기 액체형 미생물 전달매체 1ml당 cfu로서 1.0×105-1010개, 바람직하기로는 107-108개 혼합된다.
상기 본 발명의 또 다른 기술적 과제는, 미생물제제를 처리하는 방법에 있어서, 식물의 종자, 팟팅 배합물, 식물체, 식물체가 생장하고 있는 토양 중 적어도 하나에 대해 상기 미생물제제를 코팅, 혼합 또는 분무하는 것을 특징으로 하는 미생물제제의 처리방법에 의해 달성된다.
본 발명의 항균성 미생물제제는 항균성 미생물 균주로서 신규의 스트렙토마이세스 속 균주인 WYE 20 (KCTC 8768P)과 WYE 324 (KCTC 8769P) 중의 적어도 하나를 포함하는 것을 특징으로 하고 있으나, 본 발명의 균주와 유사한 항균성을 가지고 있는 균주와 함께 상기 미생물 전달매체를 사용하여 얻은 미생물제제도 본 발명의 범위에 속하는 것으로 이해되어야 한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명하고자 한다.
1. 본 발명에서 이용된 배지의 종류 및 그 조성
본 발명에서는 다음과 같은 배지들이 이용되었으며, 이들은 모두 통상의 배지멸균방법에 따라 사용전 121oC에서 15분간 멸균되었다.
1) CYD (casamino acid/yeast extract/dextrose) 한천배지는 증류수 1.0 리터당 카사미노산 (Difco) 0.5g/l, 이스트 추출물 (Difco) 0.8g/l, 덱스트로오스 0.4 g/l, K2HPO42.0g/l 및 한천 18g/l로 제조하였으며, pH는 7.2-7.4로 조정하였다.
2) WYE (water/yeast extract) 한천배지는 이스트 추출물 0.25g/l, K2HPO42.0g/l 및 한천 18g/l로 제조하였으며, pH는 7.2-7.4로 조정하였다.
3) 키틴 (chitin) 한천배지는 1리터의 증류수에 4-6g의 콜로이드 키틴 (Hsu and Lockwood., Powdered chitin agar as a selective medium for enumeration of actinomycetes in water and soil. Applied Microbiology. p. 422-426, 1975), 6g의 (NH4)2SO4, 2g의 K2HPO4, 0.4g의 MgSO41W7H2O, 0.3g의 NaCl, 0.1g의 CaCO3,1.0ml의 미량염용액 및 20g의 한천으로 제조하였으며, pH는 7.0-7.2로 조정하였다. 여기에서, 미량염용액은 증류수 100ml에 0.1g의 FeSO41W7H2O, 0.1g의 MnCl21W4H2O와 0.1g의 ZnSO41W7H2O로 제조하였다.
4) 라미나린 (laminarin) 한천배지는 키틴한천 배지의 콜로이드 키틴 대신에 라미나린 (0.25w/v%)으로 제조하였으며, pH는 7.2-7.4로 조정하였다.
5) 변형된 벤넷 (modified bennett) 액체배지는 1리터의 증류수에 2g의 이스트 추출물, 2g의 비프 추출물, 2g의 펩톤, 10g의 글루코오스와 니스타틴 5㎍/ml로 제조하였으며, pH는 6.5-7.5 로 조정하였다.
6) 변형된 벤넷 한천배지는 변형된 벤넷 액체배지에 2.0w/v%의 한천으로 제조하였다.
7) ISP #2 배지: Difco 사에서 제조된 배지를 사용하였다.
8) ISP #3 배지: Difco 사에서 제조된 배지를 사용하였다.
9) ISP #4 배지: Difco 사에서 제조된 배지를 사용하였다.
10) 포자생성 (ATCC #5; 세균 및 세균파지 ATCC 카탈로그 17판) 액체배지: 1리터의 증류수에 1.0g의 이스트 추출물, 1.0g의 비프 추출물, 2.0g의 트립토스, 0.01g의 FeSO4, 10g의 글루코스로 제조하였다.
11) YGM (이스트 추출물/글루코스/무기염액) 배지: 1리터의 증류수에 6g의 이스트 추출물, 10g의 글루코스, 무기염 (5.3g의 Na2HPO4, 1.98g의 KH2PO4, 0.2g의 MgSO41W7H2O, 0.2g의 NaCl, 0.05g의 CaCl21W2H2O)과 1.0 ml의 미량원소액으로 (Pridham Gottlieb, The utilization of carbon compounds by some actinomycetes as an aid for species determination. J. Bacteriol. 56:107-114. 1948) 제조하였다. 미량원소액은 증류수 100ml에 0.64g의 CuSO41W5H2O, 0.11g의 FeSO41W7H2O, 0.79g의 MnCl21W4H2O, 0.15g의 ZnSO41W7H2O로 제조하였다.
2. 스트렙토마이세스 속 균주 WYE 20과 WYE 324의 동정방법
스트렙토마이세스 균주 WYE 20과 WYE 324는 버기스 매뉴얼 (Bergey's Mannual of Systematic Bacteriology (1989))과 국제 스트렙토마이세스 프로젝트 (International Streptomyces Project (ISP) (1974)) 및 윌리암 등의 방법 (Williams, S.T. 등, A probability matrix for identification of Streptomyces, J. Gen. Micorbiol. 129: 1815-1830, 1983, Numerical classification of Streptomyces and related genera, J.Gen. Microbiol. 129: 1743-1813, 1983)에 근거한 형태학적, 생리학적 및 화학적 특성을 조사하여 동정하였다. 배양상 특성과 형태학적 특성은 ISP 배지를 이용하여 배양한 후 광학 현미경 및 전자현미경을 이용하여 균사 및 포자를 관찰함으로써 이루어졌다.
3. 접종용 균주 배양액 제조 및 균주의 보관
50ml의 변형된 벤넷 액체배지가 들어 있는 500ml 삼각플라스크에 CYD 한천배지상의 포자를 접종한 후 25oC-33oC, pH 6.5-7.5, 130-300rpm으로 1-4일간 진탕배양 하여 얻은 배양액을 접종용 균주 배양액으로 이용하였다.
균주보관을 위해 CYD 한천배지를 이용하여 25oC 에서 포자가 형성될 때까지 균주를 배양한 후 4oC에서 보관하였고, 4주마다 주기적으로 계대배양 하였다. 장기보관방법으로는 121℃에서 15분간 멸균한 15-30% 글리세롤에 포자 현탁액을 만들어 -70℃에서 저장보관 하는 방법을 이용하였다.
4. 진탕배양법을 이용한 균사 및 포자 세포의 생산
스트렙토마이세스 속 균주 WYE 20과 WYE 324의 균사 및 포자 세포 생산은 200ml의 변형된 벤넷 액체배지나 200ml의 YGM 배지가 들어 있는 1.0리터 삼각 플라스크에 상기 균주 배양액을 8ml 접종한 후 25oC-33oC, pH 6.5-7.5, 130-300rpm으로 진탕하면서 3-7일간 배양함으로써 이루어졌다. 이 배양액을 4,000rpm 에서 10분간 원심분리한 후 무균조작하여 균사와 포자세포를 회수하였다.
5. 미생물 전달매체에 의한 균사 및 포자세포의 생산 및 항균성 미생물제제 제조
(1) 분말형 미생물 전달매체 및 이를 이용한 균사 및 포자세포의 생산과 분말형 미생물제제의 제조.
먼저, 밀기울 40 내지 65 중량%, 키토산 1 내지 5 중량%, 톱밥 30 내지 55 중량%, 키틴 1 내지 3 중량% 및 목화씨로부터 유도된 단백질 배지로서 파마메디아(Pharmamedia, The Budkeye Oilseed Products Company, 포트워쓰, 텍사스, 미국) 1 내지 3 중량%를 균일하게 혼합하였다. 이렇게 하여 얻은 분말 조성물을 사출성형기를 이용하여 펠릿형으로 제조한 후 포자생성배지로서 ATCC #5 배지 또는 YGM 배지 0.2 내지 3.5중량%를 균일하게 분무한 다음 121℃에서 30-40분간 습열멸균하였다.
이때, 포자생성배지를 0.2중량% 미만으로 첨가하는 경우에는 포자생성배지의 첨가효과가 거의 나타나지 않으며, 3.5중량%를 초과하여 첨가하는 경우에는 미생물 배지의 고농도로 인하여 미생물의 초기성장이 저해된다.
상기의 멸균한 미생물 전달매체에 전술한 방법으로 액체배양하여 회수한 항균성 미생물 균체 배양액 (105-107cfu/ml) 100 내지 200ml를 균일하게 접종하였다. 이어서, 30℃에서 미생물의 생장 정도에 따라 5-14일간 배양한 후 수확하여, 자외선으로 멸균한 멸균실(라미나 플로우 (laminar flow)) 안에서 건조시키고, 알코올로 표면살균한 분쇄기를 이용하여 분말화하여 고농도의 분말형 미생물제제를 제조하였다.
(2) 액체형 미생물 전달매체 및 이를 이용한 균사 및 포자세포의 생산과 액체형 미생물제제의 제조.
1.0 내지 3.0 중량%의 펙틴, 0.1 내지 0.6중량%의 콜로이드키틴과 나머지 량의 물을 균일하게 혼합한 후 멸균하여 액체형 미생물 전달매체를 형성한 다음, 전술한 방법으로 액체배양하여 회수한 항균성 미생물 균체 배양액을 혼합하여 액체형 미생물제제를 제조하였다.
6. 곰팡이 병원균
항균성 시험을 위한 곰팡이 병원균으로는, 피씨움 얼티멈 (Pythium ultimum), 피씨움 그라미니콜라 (Pythium graminicola), 라이족토니아 솔라니 (Rhizoctonia solani), 라이족토니아 솔라니 AG 1 (IB), 라이족토니아 솔라니 AG 2-2 (IV), 푸사리움 옥시스포룸 (Fusarium oxysporum), 푸사리움 삼부싱텀 (Fusarium sambucinctum), 푸사리움 솔라니 (Fusarium solani), 피토프쏘라 캡사이시 (Phytophthora capsici), 피토프쏘라 파라시티카 (Phytophthora parasitica), 스클레로티니아 스클레로티오룸 (Sclerotinia sclerotiorum), 스클레로티움 세피보룸 (Sclerotinia sclerotiorum) 및 베르티실륨 다흘리애 (Verticillium dahliae)를 사용하였다.
이들 곰팡이 균주를 PDA (Potato Dextrose Agar, Difco) 배지나 CMA (Corn Meal Agar, Difco) 배지상에서 25oC 조건으로 배양한 다음 4℃에서 보관하였다.
7. 미생물제제의 세포수 결정
분말형 미생물제제 1.0g 을 멸균된 증류수 99ml에 넣고 10 분간 혼합하여 균질의 현탁액을 만든 후 연속희석 및 도말법으로 CMA 배지상에서 단위 g당의 콜로니 형성단위 (colony forming unit:cfu) 로서 세포수를 결정하였다. 액체형 미생물제제의 세포수도 이와 동일한 방법으로 결정하였다.
8. 항균성 미생물제제의 활성 분석
항균성 미생물제제의 식물 생장촉진활성과 곰팡이 병원균 제어활성을 알아보기 위하여 본 발명의 항균성 미생물제제를 오이, 고추종자에 처리하고 토양이나 적당한 폿트에 파종한 후 발아율, 발아한 식물의 생장과 생장 증진 및 발병율 감소를 측정하고, 잔디에 대해서도 발병제어 능력 등을 비처리 대조군과 비교하여 평가하였다.
이하, 실시예를 참고로 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 단, 본 발명이 하기 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
실시예 1: 항균성 미생물균주의 분리
본 발명의 항균성 미생물제제의 제조시 이용할 수 있도록 항균성이 우수한 미생물 균주를 분리하기 위해 충청북도 괴산군 지역에 위치한 네 곳에서 근권 토양시료를 채취하였다. 이들 토양시료를 멸균된 증류수에 현탁한 후 연속희석 및 도말법으로 WYE 한천배지상에서 배양하여 생성되는 단일 콜로니 들에 대해 라이족토니아 솔라니와 피토프쏘라 캡사이시에 대해 항균성여부, 곰팡이 세포벽 분해효소 생산 여부, 뿌리 착생 생장 여부, 저온생장성 여부 (4℃, 8℃), 대량생산여부 등 복합적인 측면을 고려하여 본 발명에 따른 두 종류의 균주를 분리하였다. 순수분리는 WYE 한천배지를 이용하여 25oC에서 포자를 형성하도록 4-10일간 배양한 후 형성된 단일 콜로니를 새로운 WYE 한천배지에 계대배양하는 방식을 통해 완성하였다. 순수분리한 균주를 WYE 20과 WYE 324로 명명하고 CYD 사면 배지에 접종후 25oC 및 30oC에서 배양하여 포자를 형성시킨 후 4oC에서 보관하였으며 4주마다 계대배양하였다.
실시예 2: 분리된 항균성 미생물 균주의 동정 및 특성분석
실시예 1에서 얻은 항균성 항균성 미생물 균주를 동정하기 위하여, 상기 버기스 매뉴얼 등의 방법에 따라 형태학적, 생리학적 및 화학적 특성에 대한 분석실험을 실시하였다. 이들 결과는 표 1 내지 표 5에 나타나 있다.
[표 1]
배 지 생장 정도 고공 균사 기질 균사 포자 색깔
WYE 20 WYE 324 WYE 20 WYE 324 WYE 20 WYE 324 WYE 20 WYE 324
ISP #2 양호 양호 왕성함 왕성함 밝은 황색 밝은 황색 회색빛핑크 회색빛핑크
ISP #3 양호 양호 왕성함 왕성함 연한 황색 연한 황색 회색빛핑크 회색빛핑크
ISP #4 양호 양호 왕성함 왕성함 연한 황색 연한 황색 회색빛핑크 회색빛핑크
[표 2a]
특 성 균주 WYE 20 균주 WYE 324
포자 특성:포자 사슬 형태포자 표면 형태포자 군체 색깔포자 모양 나선형 (Spirales)스무드 (smooth)회색빛 핑크(ISP #2, #3, #4)실린더형 나선형 (Spirales)스무드(smooth)회색빛 핑크(ISP #2, #3, #4)실린더형
확산성 피그먼트 생산 - -
멜라닌 생산 + (갈색) + (갈색)
항균 활성:아스퍼질러스 나이거바실러스 써틸리스 NCIB 3610스트렙토마이세스 뮤리너스캔디다 알비칸스사카로마이세스 세레비지애CBS 1172마이크로코커스 루테우스 NCIB 196 +++--+ +++--+
레씨시네이스 활성(lechthinase 활성) + +
팩틴 분해능 - -
스킴 밀크 가수분해 + +
전분 가수분해 + +
질산염 환원력 + +
H2S 생산 +4주 -
항생제 저항력 (㎍/ml):올레안도마이신 (100)네오마이신 (50)리팜피신 (50)린코마이신 (100)노보비오신 (100)카나마이신 (100)앰피실린 (100)스트렙토마이신 (100)카수고마이신 (100)테트라사이클린 (100)클로람페니콜 (100) -1mm저해존+-2mm저해존+--2mm저해존+-3mm저해존++-주석: -: 4 mm 이상 저해 -1mm저해존+-+--3mm저해존+-2mm저해존-1mm저해존+-3mm저해존주석: +: 생장 저해존 없음
[표 2b]
특 성 균주 WYE 20 균주 WYE 324
분해활성 여부:산틴 (xanthine)엘라스틴아르부틴자일란 (xylan)L-타이로신알란토인 (allantoin) -+-+++ -+-+++
45oC 생장 여부 - -
pH 4.3 에서의 생장 여부 - -
특 성 균주 WYE 20 균주 WYE 324
생장저해물질의 존재하에서의생장 여부, (%, w/v):NaCl (7.0)아지드 나트륨 (0.01)페놀 (0.1)텔루르 칼륨 (0.001)크리스탈 바이올렛 (0.0001)네올린 (0.5)네올린 (1.0)트윈 20 (0.5)트윈 20 (1.0)리조랙스 (0.1)리조랙스 (1.0)고추탄 (0.1)스미랙스 (0.1)리도밀 엠지 (0.125)리도밀 엠지 (0.25)앙콜 (0.1) --++++++++++-+-- --++-+++++++-±--
질소원 이용 (0.1 % w/v):아스파라긴DL-α-아미노-n-부티릭산L-시스테인L-발린L-페닐알라닌L-히스티딘L-하이드록시프롤린L-아르기닌L-메티오닌질산칼륨L-세린L-트레오닌 +-±±-+++±-++ +-++±++++-++
[표 2c]
특 성 균주 WYE 20 균주 WYE 324
탄소원 이용 (1.0 % w/v):슈크로오스메조-이노시톨만니톨L-람노오스라피노오스D-멜레지토오스아도니톨D-멜리바이오스덱스트란자일리톨L-아라비노오스D-과당D-갈락토오스D-포도당D-살리신D-자일로오스소보스(sorbose)D-락토오스D-만노오스트리할로오스말토오스셀로바이오스이눌린초산 나트륨 (0.1)시트르산 나트륨 (0.1)말론산 나트륨 (0.1)프로피온산 나트륨 (0.1)피루브산 나트륨 (0.1) +--+-+-±±±±+++±+++++++-++±++ +----+-±--±+++++++++++-++±++
디아미노피멜산 LL LL
[표 3]
지방산 분포 Streptomycesspp. WYE 20
함 량 (%)
1 회 2 회 3 회 4 회 최소값 최대값 평균값
포화지방산
14:0 0.33 0.30 0.53 0.53 0.30 0.53 0.42
15:0 1.52 1.54 1.13 1.19 1.13 1.54 1.35
16:0 5.09 5.22 5.95 6.03 5.09 6.03 5.57
17:0 0.30 0.31 - - nd nd nd
불포화지방산
16:1 cis 9 6.42 6.25 5.45 5.80 5.45 6.42 5.98
17:1 cis 9 1.08 1.06 0.65 0.63 0.63 1.08 0.86
메칠기 가지 존재
13:0 anteiso 0.14 0.14 - - nd nd nd
14:0 iso 1.30 1.23 2.40 2.26 1.23 2.40 1.80
15:0 iso 7.19 7.09 7.58 7.21 7.09 7.58 7.27
15:0 anteiso 27.95 27.48 30.94 32.13 27.48 32.13 29.63
16:1 iso H 2.80 2.69 3.01 2.98 2.69 3.01 2.87
16:0 iso 15.01 15.17 17.71 17.09 15.01 17.71 16.25
16:0 9? CH3 3.42 3.42 2.77 2.69 2.69 3.42 3.08
17:1 anteiso C 7.24 7.25 5.56 5.82 5.56 7.25 6.47
17:0 iso 1.83 1.93 1.85 1.65 1.65 1.93 1.82
17:0 anteiso 11.78 12.35 10.77 10.63 10.63 12.35 11.38
17:0 10 CH3 0.23 0.27 - - nd nd nd
18:1 iso H 0.99 1.02 0.62 0.59 0.59 1.02 0.81
하이드록실기 가지 존재
17:0 iso 2OH 0.40 0.41 - - nd nd nd
17:0 3OH 0.27 0.32 - - nd nd nd
싸이클로프로판
17:0 싸이클로프로판 3.30 3.27 2.30 2.23 2.23 3.30 2.78
Unknown 17.595 SM 0.78 0.82 0.50 0.55 0.50 0.82 0.66
주: 1회, 2회: 트립티카아제 소이 브로쓰 (TSB) 에서 수확한 세포이용.
3회, 4회: 트립티카아제 소이 한천 (TSA) 에서 배양한 세포이용.
- : 감지되지 않았음. nd: 결정하지 않음.
[표 4]
지방산 분포 Streptomycesspp. WYE 324
함 량 (%)
1 회 2 회 3 회 4 회 최소값 최대값 평균값
포화지방산
14:0 0.28 0.26 0.42 0.45 0.26 0.45 0.35
15:0 2.22 2.19 1.23 1.25 1.23 2.22 1.72
16:0 4.34 4.40 5.89 6.19 4.34 6.19 5.21
17:0 0.40 0.43 - - nd nd nd
불포화지방산
15:1 B 0.20 0.15 - - nd nd nd
16:1 cis 9 6.40 6.39 5.66 5.54 5.54 6.40 6.00
17:1 cis 9 1.40 1.43 0.78 0.71 0.71 1.43 1.08
메칠기 가지
13:0 iso 0.08 0.10 - - nd nd nd
13:0 anteiso 0.13 0.14 - - nd nd nd
14:0 iso 1.64 1.62 2.18 2.30 1.62 2.30 1.94
15:0 iso 7.48 7.48 8.15 8.10 7.48 8.15 7.80
15:0 anteiso 30.25 30.10 31.65 31.76 30.10 31.76 30.94
16:1 iso H 2.59 2.57 3.34 3.23 2.57 3.34 2.93
16:0 iso 14.05 14.06 16.67 16.69 14.05 16.69 15.37
16:0 9? CH3 3.56 3.56 3.29 3.12 3.12 3.56 3.38
17:1 anteiso C 6.68 6.65 5.97 5.90 5.90 6.68 6.30
17:0 iso 1.77 1.82 2.14 2.16 1.77 2.16 1.97
17:0 anteiso 10.78 10.95 10.68 10.72 10.68 10.95 10.78
17:0 10 CH3 0.18 0.18 - - nd nd nd
18:1 iso H 0.49 0.50 - - nd nd nd
하이드록실기 가지 존재
17:0 iso 2OH 0.50 0.51 - - nd nd nd
17:0 3OH 0.24 0.19 - - nd nd nd
싸이클로프로판
17:0 싸이클로프로판 3.15 3.14 1.95 1.89 1.89 3.15 2.53
Unknown 17.595 SM 0.68 0.69 - - nd nd nd
주: 1회, 2회: TSB에서 수확한 세포이용.
3회, 4회: TSA에서 배양한 세포이용.
- : 감지되지 않았음. nd: 결정하지 않음.
[표 5]
구 분 StreptomycesWYE 20 Streptomyces colombiensisATCC 27425 StreptomycesWYE 324 Streptomyces goshikiensisATCC 23914
포자사슬: 렉티플렉스블스/rectiflexibles - + - -
포자사슬: 레티나큘리아페티/retinaculiaperti - - - -
포자사슬: 나선형/spirales + + + +
포자사슬: 버티씰라티 (verticillati) - - - -
포자표면: 스무드 (smooth) + + + +
포자표면: 로거스 (rugose) - - - -
포자 색깔 : 빨강색 (red) - + - +
포자 색깔 : 회색 (Gray) - - - -
포자 색깔 : 녹색 (Green) - - - -
확산성 피그먼트 : 빨간색/오랜지색 - - - -
확산성 피그먼트 : 노란색/갈색 - - - -
멜라닌 생산 + + + +
균사 절단 (fragmentation) - - - -
DL-α-아미노-n-뷰티릭산(0.1%, w/v) 이용 여부 - - - -
L-히스티딘 (0.1%, w/v) 이용 여부 + - + -
L-하이드록시프롤린 (0.1%, w/v) 이용 여부 + + + -
레씨시네이스 (Lecithinase) 활성 + + + +
펙틴 가수분해 - - - -
질산염 (nitrate) 환원력 + + + +
H2S 생산 + + - -
바실러스 써틸리스 NCIB 항균력 + + + +
스트렙토마이세스 뮤리너스 항균력 + + + +
아스퍼질러스 나이거 항균력 + + + +
산틴 (xanthin) 분해능 - + - +
알란토인 (allantoin) 분해능 + + + +
아르부틴 분해능 - + - -
네오마이신 (50 μg/ml) 내성 여부 + + + +
리팜피신 (50 μg/ml) 내성 여부 - - - -
45℃ 생장 여부 - - - -
NaCl (7%, w/v) 존재에서의 생장 여부 - - - -
아지드 나트륨(0.01%, w/v) 존재에서의 생장여부 - - - -
페놀 (0.1%, w/v) 존재에서의 생장 여부 + + + +
D-자일로스 (1.0%, w/v) 이용 여부 + - + -
메조-이노시톨 (1.0%, w/v) 이용 여부 - - - -
만니톨 (1.0%, w/v) 이용 여부 - - - -
D-과당 (1.0%, w/v) 이용 여부 + + + +
L-람노오스 (1.0%, w/v) 이용 여부 + - - -
라피노오스 (1.0%, w/v) 이용 여부 - - - -
이눌린 (1.0%, w/v) 이용 여부 - - - -
아도니톨 (1.0%, w/v) 이용 여부 - - - -
셀로바이오스 (1.0%, w/v) 이용 여부 + + + +
전술한 버기스 매뉴얼과 ISP, 윌리암 등의 방법에 따라 표 1 내지 표 5에 나타나 있는 결과를 분석한 결과 본 발명에서 얻은 두 종류의 균주가 스트렙토마이세스 속에 속하는 것으로 동정되었다. 즉, WYE 20은 형태학적, 생리학적 및 화학적 특성을 분석한 결과 클러스터 (Cluster) 61에 속하는 스트렙토마이세스 콜롬비엔시스(Streptomyces colombiensis)에 가깝지만 새로운 균주인 것으로 동정되었다. 또한, WYE 324도 분석결과 클러스터 61에 속하는 스트렙토마이세스 고시키엔시스 (Streptomyces goshikiensis)에 가깝지만 새로운 균주인 것으로 동정되었다. 한편, 이들 균주 WYE 20과 WYE 324는 1997년 1월 9일자로 부다페스트 조약에 따른 국제기탁기관인 대한민국 대전광역시 소재의 생명공학연구소 내 유전자은행 (Korean Collection for Type Cultures, Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology)에 기탁번호 KCTC 8768P와 KCTC 8769P로 각각 기탁되었다.
실시예 3: 최적성장온도범위 측정실험
특정 온도에서의 성장 및 최적성장온도범위를 알아보기 위하여 실시예 2에서 동정된 스트렙토마이세스 속 WYE 20과 WYE 324를 변형된 벤넷 한천배지에 접종한 후 4oC, 8oC, 27oC, 37oC 및 45oC에서 3주 동안 배양하면서 그 성장상태를 1주마다 관찰하였다. 그 결과를, 성장하는 속도에 따라 양호하게 성장 (+); 서서히 성장 (±); 성장 못함 (-) 등으로 평가하여 표 6에 나타내었다.
[표 6]
균 주 4℃ 8℃ 27℃ 37℃ 45℃
7일 21일 7일 14일 7일 14일 7일 14일 7일 14일
WYE 20 ± + + + + + ± + - -
WYE 324 - ± ± + + + ± + - -
상기 표 6에 잘 나타나 있듯이, WYE 20은 4oC 에서는 1주일 후 서서히 자라기 시작하여 3주일이 경과하면 양호하게 자라는 반면, 균주 WYE 324는 4oC에서 3주일이 경과되어야 서서히 자라기 시작하였다. 균주 WYE 20은 8oC와 27oC에서 모두 양호하게 자랐으며, 균주 WYE 324의 경우, 8oC에서는 1주일 후 서서히 자라기 시작하여 2주일 경과 후부터 양호한 성장을 나타내었으며, 27oC에서는 양호하게 자랐다. 두 균주는 모두 37oC에서 배양시 1주일 경과시 서서히 자라기 시작하고 2주일 배양시 양호하게 자랐으나, 45oC에서는 자라지 못하였다.
실시예 4: 효소의 활성 및 길항성 분석
(1) 효소의 활성 측정
키티나제 (chitinase)와 β-1,3-글루카나제 (β-1,3-glucanase)가 곰팡이 병원균 균사를 공격하여 죽이는데 중요한 역할을 하는 효소로 알려져 있다. 따라서, 본 발명의 신규 균주에 대해 다음과 같이 이들 효소 활성을 측정하였다.
콜로이드 키틴을 유일한 탄소원으로 포함하는 키틴 한천 배지에 균주를 접종한 후 30oC에서 14일간 배양하여 콜로니 형성여부 및 그 형성 속도를 관찰함으로써 키티나제 활성을 확인하였다. 그 결과, 본 발명의 WYE 20과 WYE 324는 모두 키티나제 활성을 나타내었다.
이어서, β-1,3-글루카나제 활성을 측정하기 위하여 라미나린을 유일한 탄소원으로 하는 라미나린 한천배지에 균주를 접종한 후 27oC에서 7일간 배양하여 콜로니 형성여부 및 그 형성속도를 관찰하였다. 그 결과, 본 발명의 WYE 20과 WYE 324는 모두 매우 높은 β-1,3-글루카나제 활성을 가지는 것으로 나타났다.
(2) 대조쌍 길항성 분석
순수분리한 균주 WYE 20과 WYE 324의 길항성은 플래이트 대조쌍 실험을 통해 곰팡이 병원균의 생장저해 정도를 알아봄으로써 측정하였다.
본 발명의 균주를 CMA 배지에 접종한 후 30oC 에서 6-10 일간 배양하였다. 이 플래이트의 중앙에, 왕성하게 자란 병원균 곰팡이 균사를 포함하는 PDA (Photato Dextrose Agar) 블록을 접종하여 25℃에서 24시간 내지 192시간 배양하였다. 한편, 대조실험용으로는 동일한 PDA 블록을 본 발명의 균주가 접종되지 않은 CMA 플래이트에 접종하여 마찬가지 방식으로 배양하였다. 본 발명의 균주에 의한 곰팡이 병원균의 성장저해효과로서 실시된 길항성 실험에 대한 결과는 3회의 반복실험을 통한 평균치로서 하기 표 7에 나타내었다.
[표 7]
곰팡이 병원균 대조쌍 길항성 측정
WYE 20 WYE 324
피씨움 울티멈1 + +
피씨움 그라미니콜라2 ++ ++
푸사리움 옥시스포룸 ++ ++
푸사리움 삼부싱텀 ++ nt
푸사리움 솔라니 ++ ++
라이족토니아 솔라니 ++ ++
라이족토니아 솔라니 AG 1 (IB) ++ ++
라이족토니아 솔라니 AG 2-2 (IV) ++ ++
피토프쏘라 캡사이시 ++ ++
피토프쏘라 파라시티카 ++ ++
스클레로티니아 스클레로티오룸 ++ ++
스틀레로티움 세피보룸3 ++ ++
베르티실륨 다흘리애3 ++ nt
1:24 시간,236 시간,3:192 시간, 그 나머지는 모두 96시간 배양 후 관찰
++: 1.0 cm 이상 생장저해영역을 나타냄
+: 콜로니 부근에 분명한 생장저해영역을 나타냄
-: 매우 약한 길항성을 나타내거나 길항성을 나타내지 않음
n.t.: 시험되지 않음.
상기 표 7에 잘 나타나 있듯이, 균주 WYE 20과 WYE 324는 피씨움 울티멈에 대해 콜로니 부근에 분명한 생장저해영역을 나타내었으며, 균주 WYE 20은 피씨움 그라미니콜라, 푸사리움 옥시스포룸, 푸사리움 삼부싱텀, 푸사리움 솔라니, 라이족토니아 솔라니, 라이족토니아 솔라니 AG 1 (IB), 라이족토니아 솔라니 2-2 (IV), 피토프쏘라 캡사이시, 피토프쏘라 파라시티카, 스클레로티니아 스클레로티오룸, 스클레로티움 세피보룸 및 베르티실룸 다흘리애에 대해, 균주 WYE 324는 피씨움 그라미니콜라, 푸사리움 옥시스포룸, 푸사리움 솔라니, 라이족토니아 솔라니, 라이족토니아 솔라니 AG 1 (IB), 라이족토니아 솔라니 2-2 (IV), 피토프쏘라 캡사이시, 피토프쏘라 파라시티카, 스클레로티니아 스클레로티오룸 및 스클레로티움 세피보룸 등에 대해 강한 길항성을 나타내었다.
실시예 5: 분말형 미생물제제의 제조
본 발명의 미생물 균주의 생존성을 유지하기에 적합하며 식물의 종자, 뿌리 또는 토양 처리를 가능하게 하는 분말형 미생물제제 생산을 위하여, 먼저 적절한 분말형 미생물 전달매체를 제조하였다.
이를 위해 밀기울, 키토산, 톱밥, 키틴, 파마메디아의 혼합비율을 변화시켜 가면서 혼합하여 분말조성물을 만든 후 이를 펠릿형으로 성형하였다. 하기 표 8에 나타나 있는 비율로 균일하게 혼합하여 펠릿형으로 성형하였다. 이 과정에서 펠릿성형성을 조사하여, 성형과정에서 부스러짐 현상 없이 펠릿으로 성형이 되는 경우에는 양호로, 부스러짐 현상이 일어나 펠릿으로 성형되기가 곤란한 경우는 저조로, 그 결과를 하기 표 8에 나타내었다. 또한, 각각의 경우에 제조된 미생물 전달매체에 대해 통기성의 정도와 세포생장정도도 조사하여 상대적인 결과를 3등급으로 나누어 그 결과를 표 8에 기재되어 있는 바와 같이 저조, 보통 및 양호로 판정하였다.
위와 같이 하여 제조된 미생물 전달매체 전술한 방법으로 액체배양하여 얻은 항균성 미생물 균주 시료를 균일하게 접종하였다 (105-107cfu/ml: cuf(colony forming unit)). 이를 30℃에서 배양하면서 미생물의 생장 정도에 따라 5-14일간 배양한 후 자외선으로 멸균한 라미나 플로우 (laminar flow) 안에서 건조시키고, 알코올로 표면 살균된 분쇄기를 이용하여 분말화하여 고농도 분말형 미생물제제를 제조하였다. 이때, 항균성 미생물 균주는 분말형 미생물 전달매체 1g에 대해 cfu로서 1.0×105-1010개 존재하도록 조정하였다. 이렇게 하여 얻은 시료를 각각의 미생물 균주에 대해 다시 2개의 군으로 나누어 4℃와 25℃에서 3개월간 보관하였다. 보관 과정에서 1개월 간격으로 미생물 균주의 생존성과 생존 미생물의 재생장 활성을 측정하였다. 구체적 방법으로는, 상기 최종적으로 얻은 시료에 대해 각각 1g을 채취하여 멸균된 증류수 9ml에 용해한 후 그 상등액에 대해 콜로니 형성단위(cfu)를 측정하고 생존세포의 재생장정도를 측정하여 그 결과를 하기 표 9에 나타내었다.
비교를 위해, 미생물 전달매체의 각 성분에 대한 조성을 하기 표 8에 기재되어 있는 바와 같은 비율로 혼합한 것을 제외하고는 전술한 방법과 동일한 방법으로 미생물 전달매체를 제조하고, 이 전달매체에 대한 여러 가지 특성을 전술한 방법과 동일한 방법으로 평가하여 그 결과를 하기 표 9에 나타내었다.
[표 8]
(단위: 중량%)
구 분 밀기울 키토산 톱밥 키틴 파마메디아 펠릿성형여부 통기정도 세포생장정도
실험군 1 65 1 30 2 1 양호 보통 보통
실험군 2 65 1 30 1 2 양호 보통 보통
실험군 3 65 2 30 2 1 양호 보통 보통
실험군 4 65 1 30 1 3 양호 보통 보통
실험군 5 65 1 30 3 1 양호 보통 보통
실험군 6 63 5 30 1 1 양호 보통 보통
실험군 7 60 5 30 2 3 양호 보통 보통
실험군 8 50 1 45 2 2 양호 양호 양호
실험군 9 45 5 45 2 3 양호 양호 양호
실험군 10 45 3 55 1 1 양호 양호 양호
실험군 11 40 3 55 1 1 양호 양호 양호
실험군 12 40 1 55 3 1 양호 양호 양호
실험군 13 40 1 50 1 3 양호 양호 양호
대조군 1 90 2 5 2 1 양호 저조 저조
대조군 2 80 5 10 3 2 양호 저조 저조
대조군 3 70 3 25 1 1 양호 저조 저조
대조군 5 30 5 60 2 3 저조 양호 nt
대조군 5 20 5 70 2 3 저조 양호 nt
대조군 6 10 5 80 2 3 저조 양호 nt
nt: 시험되지 않음
[표 9]
(단위: 중량%)
구 분 밀기울 키토산 톱밥 키틴 파마메디아 WYE 20 또는WYE324의초기 세포수(cfu/g) 3개월 후 WYE 20 또는WYE 324의 세포수 (cfu/g) 생존세포의재생장정도
4℃ 저장 25℃ 저장
실험군 1 65 1 30 2 2 1.2x107 1.0x106 2.3x105 양호
실험군 2 65 2 30 1 2 1.9x107 1.5x106 2.9x105 양호
실험군 3 65 2 30 2 1 1.3x107 1.4x106 2.5x105 양호
실험군 4 65 1 30 1 3 2.1x107 1.7x106 3.6x105 양호
실험군 5 65 1 30 3 1 2.0x107 1.2x106 3.1x105 양호
실험군 6 63 5 30 1 1 2.7x107 1.1x106 2.7x105 양호
실험군 7 60 5 30 2 3 1.5x107 1.3x106 3.3x105 양호
실험군 8 50 1 45 2 2 1.6x108 2.1x107 2.1x106 양호
실험군 9 45 5 45 2 3 2.6x108 1.1x107 2.5x106 양호
실험군 10 45 3 50 1 1 2.1x108 1.0x107 3.1x106 양호
실험군 11 40 3 55 1 1 1.9x108 1.6x107 3.5x106 양호
실험군 12 40 1 55 3 1 1.8x108 1.9x107 2.4x106 양호
실험군 13 40 1 55 1 3 2.2x108 1.3x107 1.9x106 양호
상기 표 8 및 표 9로부터, 미생물 전달매체의 각각의 성분이 본 발명에서 한정된 범위내에서 혼합되어 있는 경우에는 (실험군 1 내지 13) 펠릿으로의 성형성이 양호하고, 통기성 및 세포생장성도 보통 이상으로 유지될 수 있지만, 본 발명에서 한정된 범위를 벗어나는 범위로 혼합되어 있는 경우에는 (대조군 1 내지 6), 펠릿으로의 성형성, 통기성 또는 세포생장성 중 어느 하나가 특히 저조한 것으로 나타났다.
또한, 미생물 전달매체의 제조시 포자생성배지의 코팅효과를 알아보기 위해 실험군 1-13의 각각의 미생물 전달매체에 대해 포자생성배지로서 YGM 배지를 표 10에 나타나 있는 비율로 분무코팅한 다음 121℃에서 30-40분간 습열멸균하였다. 이렇게 하여 제조된 미생물 전달매체를 이용하여 미생물제제를 제조한 후, 그 특성을 평가하여 하기 표 10에 나타내었다.
[표 10]
(단위: 중량%)
구 분 밀기울 키토산 톱밥 키틴 파마메디아 YGM* WYE20 또는WYE324의 초기 세포수(cfu/g) 3개월 후 WYE 20 또는 WYE 324의 세포수 (cfu/g) 생존세포의재생장정도
4℃ 저장 25℃ 저장
실험군 14 65 1 30 2 2 0.2 1.1x107 1.2x106 2.4x105 양호
실험군 15 65 2 30 1 2 0.5 1.4x107 1.4x106 2.9x105 양호
실험군 16 65 2 30 2 1 1.0 1.6x107 1.6x106 2.6x105 양호
실험군 17 65 1 30 1 3 1.5 2.0x107 1.9x106 4.2x105 양호
실험군 18 65 1 30 3 1 1.8 2.2x107 1.3x106 3.2x105 양호
실험군 19 63 5 30 1 1 2.0 1.7x107 2.1x106 3.7x105 양호
실험군 20 60 5 30 2 3 3.5 1.1x107 2.3x106 3.4x105 양호
실험군 21 50 1 45 2 2 3.5 1.2x108 2.3x107 2.3x106 양호
실험군 22 45 5 45 2 3 2.5 1.6x108 2.1x107 2.5x106 양호
실험군 23 45 3 50 1 1 2.0 2.2x108 1.3x107 3.2x106 양호
실험군 24 40 3 55 1 1 1.5 2.9x108 2.1x107 3.6x106 양호
실험군 25 40 1 55 3 1 0.5 1.4x108 1.9x107 2.6x106 양호
실험군 26 40 1 55 1 3 0.2 1.2x108 1.3x107 2.9x106 양호
YGM*: 나머지 성분 모두의 합에 대한 중량%임
상기 표 9 및 표 10으로부터, 실험군의 미생물 전달매체를 이용하여 제조되는 미생물제제는 세포를 안정한 상태로 장기간 유지할 수 있는 특성이 우수하다는 것을 알 수 있다. 즉, 실험군의 모든 시료의 미생물 균주세포수가 3개월 후에도 미생물제제로서의 역가를 나타내는데 필요한 최소값이라 할 수 있는 105cfu/g 이상으로 유지되었으며, 특히 실험군 14 내지 26의, 포자생성배지를 코팅처리하여 제조된 미생물 전달매체를 이용하는 경우에는 이와 같은 활성이 보다 증진되는 것으로 나타났다.
이와같이 하여 제조된 분말형 미생물제제는 상온저장능력이 뛰어나 상온에서 3개월 후에도 최소한의 미생물제제 활성을 유지하는데 필요한 미생물 균주 개체수인 105cfu/g 이상의 세포수를 유지하고 있는 것으로 관찰되었다.
실시예 6: 액체형 미생물제제의 제조
20g의 펙틴, 2g의 콜로이드키틴과 나머지 량의 물을 균일하게 혼합하여 1리터의 현탁액을 형성한 다음 통상의 방법으로 121℃에서 15분간 멸균하였다. 이어서, 멸균된 액체형 미생물 전달매체에 전술한 방법으로 액체배양하여 얻은 항균성 미생물 균주 KCTC 8768P와 KCTC 8769P의 균사 및 포자를 균일하게 혼합하여 (1.2×107cfu/ml: cuf(colony forming unit)) 액체형 미생물제제를 제조하였다.
이렇게 하여 얻은 액체형 미생물제제를 4℃에서 보관하였다. 액체형 미생물제제는 종자나 모판에 육묘중인 묘종의 관주처리에 적합하고 물에 희석하여 분무처리하기에도 매우 효과적이다.
실시예 7: 항균성 미생물제제의 활성
실시예 5(특히, 실시예 5의 실험군 22)의 분말형 미생물제제와 실시예 6에 따라 제조되어 4℃에서 보관된 액체형 미생물제제의 활성은 식물체나 종자 또는 뿌리에 직접처리하거나 묘포나 모판, 폿트, 팟팅(potting) 배합물이나 토양에 혼합하여 간접적으로 사용하는 방법을 통해 식물의 생장촉진과 곰팡이 병원균에 대한 제어기능의 여부로서 측정하였다.
(1) 오이 재배를 통한 스트렙토마이세스 속 WYE 20 (KCTC 8768P)의 라이족토니아 솔라니 모잘록병 제어 활성 분석
오이 식물을 대상으로 폿트 씨들링 분석을 통하여 WYE 20 (KCTC 8768P)의 라이족토니아 솔라니 모잘록병 제어 활성을 측정하였다.
상기 실시예 6에서 제조된 액체형 미생물제제 20ml (WYE20 1.2×107cfu/ml)에 오이 종자를 3시간 침지처리한 다음 폿트에 파종하였다. 비처리 대조군으로는 종자를 멸균수에 3시간 침지한 것과 액체형 미생물 전달매체에 3시간 침지한 것을 이용하였다.
팟팅 배합물로는 호투스 (Hortus, 영국)를 121oC에서 60분간 멸균후 상온으로 식혀 12시간 방치한 후 다시 121oC에서 60분간 멸균하는 방법으로 3회 멸균한 후 처리 실험군 및 비처리 대조군의 오이 종자 파종에 이용하였다.
병원균으로서는, PDB (Potato dextrose broth: Difco)에서 14일간 배양 (25oC)한 라이족토니아 솔라니를 회수하여, 비처리 대조군의 경우에 발병율이 약 60% 가 되도록 멸균한 상토에 혼합하여 이병토양을 만든 후, 위에서 기술한 방법으로 준비한 처리 실험군 및 대조군의 오이 종자를 파종하여 각각의 미생물제제 활성을 측정하였다.
파종 폿트로는 지름 9cm 의 일회용 종이컵을 이용하였고, 폿트당 3개의 종자를 파종하였으며 처리군별로 6개의 컵을 준비하였다. 파종을 마친 폿트를 랜덤블록배열 방식으로 유리온실에 배열하고, 습도는 40-60 %가 유지되도록 조절하였으며 필요에 따라 주기적으로 물을 공급하였다. 또한 온도는 25oC - 30oC로 유지되도록 하였으며, 빛은 자연광을 이용하였다.
주기적으로 종자의 발아와 모잘록병의 발병을 관찰 기록하였으며 최종결과를 표 11에 나타내었다.
[표 11]
처 리 구 분 파종한오이 종자수 발아한오이 종자수 (%) 건전한식물체수 (%) 생체중량(g)/지상부식물체
7일 14일 18일
무병원균+ 무처리 대조군 18 18bx(100) 18bx(100) 2.61bx
라이족토니아 솔라니+ 비처리 대조군 18 7a ( 39) 7a ( 39) 1.73a
라이족토니아 솔라니+ 액체형 미생물 전달매체 처리 대조군 18 8a ( 44) 8a ( 44) 1.75a
라이족토니아 솔라니+ 액체형 미생물제제처리 실험군 18 18b (100) 18b (100) 2.51b
x동일 칼럼의 비처리 대조군과 처리 실험군의 결과치를 비교할 때 통계적으로
p = 0.05 범위에서 차이가 나는 경우 서로 다른 알파벳으로 (a,b) 나타냄.
표 11에 나타나 있는 바와 같이, 본 발명의 WYE 20, 즉 본 발명의 미생물제제로 처리된 오이 종자의 경우, 라이족토니아 솔라니에 의한 오이 모잘록병의 발병을 100% 억제하였다. 또한 비처리 대조군의 경우 라이족토니아 솔라니에 의한 생장장해가 매우 심각하게 나타났지만, 본 발명의 미생물제제로 처리한 처리 실험군의 경우는 라이족토니아 솔라니에 의한 생장장해를 나타내지 않았다. 이는, 본 발명의 미생물제제가 곰팡이 병원균 라이족토니아 솔라니의 제어와 식물체의 생장촉진에 매우 효과적임을 나타내는 것이다.
(2) 골프장 그린 잔디의 라이족토니아 브라운 패치 (Rhizoctonia Brown Patch) 제어 활성 분석
골프장 그린 잔디의 라이족토니아 브라운 패치 발병제어 시험을 실시하므로써 본 발명의 미생물제제의 활성을 측정하였다.
본 실시예에서 사용된 미생물제제의 항균성 미생물 균주로서는 전술한 진탕배양법으로 제조한 포자 및 균사 세포배양액을 수확하여 이용하였는데, 처리 직전, 액체형 미생물제제의 스트렙토마이세스 균주 WYE 20 또는 WYE 324의 세포수는 2.0 x 105cfu/ml로 조정하여 분무처리하였다. 실험군 및 대조군으로서, 시험블록 (1.5m × 1.5m)을 설정하고 처리구분별로 4개씩, 두 개의 인접한 그린에 각각 시험구(시험구 1 및 2)를 설치하여 실험을 실시하였다. 이때, 시험구는 랜덤블록배열방식으로 설정하였다. 실험군 블록에 대해서는, 균주 WYE 20 또는 WYE 324를 포함하는 액체형 미생물제제를 1996년 6월 25일 부터 1996년 8월 23일까지 7 - 10일 간격으로 시험구당 2.5 리터 분무하였으며, 대조군 블록에 대해서는 동일량의 물을 분무하였다. 시험기간동안에는 화학살균제를 사용하지 않았다. 그린의 라이족토니아 브라운 패치 발병을 주기적으로 관찰 기록하고 발병율을 하기 표 12 (시험구 1) 및 표 13 (시험구 2)에 나타내었다.
[표 12]
처리구분 라이족토니아 브라운 패치 발병율 (%)
7/25/96 8/6/96 8/23/96
비처리 대조군실험군(WYE 20)실험군 (WYE 324) 10.18ax3.38b0.00c 14.6ax9.2b5.2c 59ax24b24b
x동일 칼럼의 비처리 대조군과 처리 실험군의 결과치를 비교할 때 통계적으로
p = 0.05 범위에서 차이가 나는 경우 서로 다른 알파벳으로 (a,b,c) 나타냄.
[표 13]
처리구분 라이족토니아 브라운 패치 발병율 (%)
7/25/96 8/6/96 8/19/96
비처리 대조군실험군(WYE 20)실험군(WYE 324) 5.6ax0.0b0.0b 9.3ax0.8b0.0b 28.3ax5.3b0.7c
x동일 칼럼의 비처리 대조군과 처리 실험군의 결과치를 비교할 때 통계적으로
p = 0.05 범위에서 차이가 나는 경우 서로 다른 알파벳으로 (a,b,c) 나타냄.
표 12 (시험구1) 와 표 13 (시험구2)에 나타나 있는 바와 같이, 본 발명의 미생물제제(각각 WYE 20 또는 WYE 324를 포함하는 것)로 처리한 경우 각각의 시험구1과 시험구2에서 라이족토니아 브라운 패치 발병율이 크게 감소되었다. 이는 본 발명의 미생물제제가 그린 잔디의 라이족토니아 브라운 패치 발병제어에 매우 효과적임을 나타내는 것이다.
(3) 골프장 페어웨이 잔디의 라이족토니아 라지 패치 (Rhizoctonia Large Patch) 제어 활성 분석
전술한 진탕배양법으로 제조한 포자 및 균사 세포배양액을 수확하여 실시예 6의 액체형 미생물제제를 제조하였다. 라이족토니아 솔라니 AG 2-2 (IV)가 감염된 토양을 페어웨이 잔디에 접종한 후 일정한 크기로 잘라 직경 25cm의 폿트에 이식하였다. 이들 폿트에 대해 상기 미생물제제를 분무처리하였다. 처리 직전, 스트렙토마이세스 균주 WYE 20의 세포수는 2.0 x 106cfu/ml로 조정하고, 폿트당 200ml씩 1주일 간격으로 2회 연속 분무처리하였다. 같은 양의 물을 같은 조건에서 분무한 폿트를 비처리 대조군으로 삼았다. 처리구분별 3개의 폿트를 준비하였으며 랜덤블록배열 방식으로 배열하고, 자연적인 발병을 유도하기 위하여 9월초에서 10월초까지 골프장의 야외 자연조건에 방치하였다. 주기적으로 라이족토니아 라지 패치 발병을 관찰한 결과, 본 발명의 미생물제제로 처리된 실험군 폿트의 잔디는 라지 패치 발병이 크게 억제되었으며, 비처리 대조군 폿트의 잔디에서는 라이족토니아 라지 패치 발병이 관찰 되었다. 따라서, 본 발명의 미생물제제 WYE 20이 라이족토니아 라지패치 발병제어에 효과적임을 알 수 있다.
(4) 고추 재배를 통한 미생물제제의 고추역병 제어 활성 분석
고추 식물을 대상으로 폿트 씨들링 분석을 통하여 본 발명의 미생물제제(WYE 20 또는 WYE 324 포함)의 고추역병 제어 활성을 측정하였다.
멸균수에 2일간 침지하여 두었던 고추 종자를 본 발명의 액체형 미생물제제에 18시간 동안 침지 처리하였다 (실험군). 종자 처리 직전, 미생물제제의 스트렙토마이세스 균주 WYE 20과 WYE 324의 세포수를 각각 1.2 x 107cfu/ml 과 1.7 x 107cfu/ml로 조정하였다. 비처리 대조군으로는 2일간 멸균수에 침지시킨 고추 종자를 18시간 동안 새로운 멸균수에 침지시킨 것을 이용하였다. 한편, 실시예 6의 방법에 따라 제조된 액체 미생물 전달매체에 18시간 침지시킨 것과도 비교하였다.
상기 오이 재배를 통한 실험방법에서와 마찬가지로, PDB (Potato dextrose broth: Difco) 에서 14-21일간 배양 (25oC)된 피토프쏘라 캡사이시를 회수하여, 비처리 대조군의 발병율이 약 80% 이상이 되도록 멸균된 상토에 혼합하여 이병토양을 만든 후, 상기 실험군과 대조군의 고추 종자를 파종하여 본 발명의 미생물제제의 고추 역병 제어 활성을 측정하였다.
파종 폿트로는 지름 9cm 의 일회용 종이컵을 이용하였고, 폿트당 3개의 종자를 파종하였으며 처리군별로 14개씩의 파종 폿트를 준비하였다. 파종한 폿트를 랜덤블록배열 방식으로 유리온실에 배열하고 습도를 80%로 유지하였으며 필요에 따라 주기적으로 물을 공급하였다. 또한 온도는 25oC-32oC를 유지시켰으며, 빛은 자연광을 이용하였다.
주기적으로 종자의 발아와 고추역병의 발병을 관찰 기록하여 표 14에 나타내었다.
[표 14]
처 리 구 분 파종한 고추종자수 발아한 고추종자수(발아율: %) 역병 발생 묘종수 (발병율: %)
14 일 14 일 18 일
무병원균+ 비처리 대조군 42 37(88ax) 0( 0cx) 0( 0cx)
피토프쏘라 캡사이시+ 비처리 대조군 42 34(81a) 28(82a) 33(97a)
피토프쏘라캡사이시+ 액체 미생물 전달매체처리 대조군 42 35(83a) 29(83a) 34(97a)
피토프쏘라 캡사이시 +미생물제제(WYE 20)처리 실험군 42 34(81a) 12(35b) 26(76b)
피토프쏘라 캡사이시+ 미생물제제(WYE 324)처리 실험군 42 36(86a) 22(61c) 28(78b)
x동일 칼럼의 비처리 대조군과 처리 실험군의 결과치를 비교할 때 통계적으로
p = 0.05 범위에서 차이가 나는 경우 서로 다른 알파벳으로 (a,b,c) 나타냄.
표 14에 나타나 있는 바와 같이, 본 발명의 미생물제제(WYE 20 또는 WYE 324)로 처리한 고추 종자의 경우 피토프쏘라 캡사이시에 의한 고추역병의 발병이 크게 억제되었으며 통계적 유의성을 나타내었다. 이는 본 발명의 미생물제제가 고추 역병균인 피토프쏘라 캡사이시의 활성을 억제하는데 매우 효과적임을 나타내는 것이다.
(5) 고추 재배를 통한 미생물제제의 생장촉진 활성 분석
고추 식물을 대상으로 폿트 씨들링 분석을 통하여 본 발명의 미생물제제의 고추 식물 생장촉진 활성을 측정하였다.
멸균수에 2일간 침지시킨 고추 종자를 상기 실시예 5에 따라 제조된 분말형 미생물제제로 처리하였다 (1000개 종자/4g). 종자 처리 직전, 미생물제제의 스트렙토마이세스 균주 WYE 20과 WYE 324의 세포수는 각각 1.2 x 107cfu/ml 과 1.7 x 107cfu/ml가 되도록 조정하여 처리하였다. 비처리 대조군으로는 같은 방법으로 멸균수에 침지처리한 고추 종자를 이용하였다. 한편, 본 발명의 항균성 미생물 균주가 함유되지 않은 동일한 조성의 분말형 전달매체 (1000개 종자/4g)로 처리한 고추 종자에 대해서도 동일한 실험을 실시하여 그 결과를 비교하였다.
고추 종자의 파종은 상기 오이 재배 실험에서와 마찬가지 방법으로 실시하였다.
파종 폿트로는 지름 9cm의 일회용 종이컵을 이용하였고, 폿트당 1개의 종자를 파종하였으며 처리군별로 121개씩의 컵을 준비하였다. 파종한 폿트를 랜덤블록배열 방식으로 온실에 배열하고 습도를 40-60%로 유지하였으며 필요에 따라 주기적으로 물을 공급하였다. 미생물제제로 처리한 실험군의 폿트에 대해 4주 재배후 전술한 진탕배양법으로 제조한 균사 및 포자 세포배양액을 15ml씩 접종하였으며, 대조군 폿트에 대해서는 동일한 양의 물을 관주처리하였다. 또한, 온도는 25oC-32oC로 유지되도록 하였으며 빛은 자연광을 이용하였다.
9주간 재배한 후 고추 식물의 생장상태를 측정하여 표 15에 나타내었다.
[표 15]
처 리 구 분 고추 묘종수 고추 묘종의 지상부 높이 (cm) (평균값)
비처리 대조군 121 23.7ax
분말형 미생물 전달매체처리 대조군 121 24.5a
미생물제제(WYE 20) 처리 실험군 121 27.4b
미생물제제(WYE 324) 처리 실험군 121 28.6b,c
x동일 칼럼의 비처리 대조군과 처리 실험군의 결과치를 비교할 때 통계적으로
p = 0.05 범위에서 차이가 나는 경우 서로 다른 알파벳으로 (a,b,c) 나타냄.
표 15에 나타나 있는 바와 같이, 본 발명의 미생물제제로 처리된 고추는 비처리 대조군과 비교할 때 생장이 크게 증진되었다. 이는 본 발명의 미생물제제가 식물체의 생장 촉진에도 매우 효과적이라는 것을 나타내는 것이다.
(6) 노지 고추 재배를 통한 미생물제제의 활성 분석
고추 식물을 대상으로 노지 포장시험을 실시하여 본 발명의 미생물제제의 활성을 측정하였다.
멸균수에 2일간 침지시킨 고추 종자를 실시예 6에서 제조된 액체형 미생물제제에 3시간 침지한 후 고추 종자만을 회수하여, 실시예 5 (특히 실험군 22)에서 제조된 분말형 미생물제제 (1000개 종자/4g)로 다시 처리하였다. 종자 처리 직전의 미생물제제의 스트렙토마이세스 균주 WYE 20과 WYE 324의 세포수를 각각 1.2 x 107cfu/ml 과 1.7 x 107cfu/ml로 조정하였다 (실험군). 비처리 대조군으로는 멸균수에 2일간 침지한 고추종자를 멸균수에 3시간 더 침지시킨 후 미생물이 첨가되지 않은 동일한 전달매체로 처리한 종자를 이용하였다. 이들 실험군과 비처리 대조군의 종자를 모두 묘포에 파종하여 물을 주기적으로 공급하고 온도를 20oC-35oC로 유지하였다. 고추묘가 1.5- 2.0cm 크기로 자랐을 때, 25개의 씨들링 폿트 (5cm x 5cm, 깊이 6cm) 당 분말형 미생물제제 2.5g (즉, 폿트 1개당 미생물제제 0.1g)을 모래와 흙으로 된 배합토양과 혼합하여 폿트마다 채워넣은 후 고추묘를 모판에 이식하였다. 비처리 대조군의 경우에는 본 발명의 미생물 균주가 함유되지 않은 동일한 분말형 전달매체만을 함유하는 배합토양을 사용하였다. 필요에 따라 물을 추가로 공급하면서 온도가 18℃-35℃로 유지되는 비닐하우스에서 재배하였다. 폿트는 랜덤블록배열 방식으로 배열하였다. 대조군 및 실험군의 고추묘를 비닐하우스에서 11주간 재배한 후 노지에 정식하였다. 노지 정식 7일전, 전술한 액체배양 방법으로 제조한 포자 및 균사를 물에 희석하여 1.2-1.7 x 105cfu/ml 이 되도록 조정하여, 실험군의 폿트 1개당 10 ml씩의 양으로 관주처리하였다. 대조군에 대해서는 동일한 양의 물을 관주처리하였다.
식물의 성장 및 질병발생에 대해 노지 정식 후 주기적으로 관찰 기록하였으며 평균값과 발병율(%)을 표 16 (노지1)과 표 17 (노지2)에 나타내었다.
[표 16]
처리구분 정식한 식물체수 식물체 크기 (cm)정식후 62일 역병 발병율 (%)
정식후 62일 정식후 101일
비처리 대조군미생물제제(WYE 20)처리 실험군미생물제제(WYE 324)처리 실험군 1,3401,3401,340 78.5ax86.0b90.5c 28.4ax23.5b8.7c 98.6ax89.2b76.1c
x동일 칼럼의 비처리 대조군과 처리 실험군의 결과치를 비교할 때 통계적으로
p = 0.05 범위에서 차이가 나는 경우 서로 다른 알파벳으로 (a,b,c) 나타냄.
[표 17]
처리구분 정식한 식물체수 역병 발병율 (%)
정식후 82일 정식후 101일
비처리 대조군미생물제제(WYE 20)처리 실험군미생물제제(WYE 324)처리 실험군 860860860 26ax0b0b 42.4ax7.6b2.0c
x동일 칼럼의 비처리 대조군과 처리 실험군의 결과치를 비교할 때 통계적으로
p = 0.05 범위에서 차이가 나는 경우 서로 다른 알파벳으로 (a,b,c) 나타냄.
표 16 (노지1) 과 표 17 (노지2)에 나타나 있는 바와 같이, 본 발명의 미생물제제로 처리한 경우에는 고추작물의 성장이 크게 촉진되었으며 역병 발병율이 매우 감소되었다. 이는 본 발명의 미생물제제가 실제 노지 포장 시험에서도 고추 역병 제어 및 생장촉진활성이 매우 높은 수준으로 나타낸다는 것을 의미한다.
이상 살펴 본 바와 같이, 본 발명의 항균성 미생물제제는 신규의 항균성 균주를 포함하고 있어서, 특히 라이족토니아 솔라니나 피토프쏘라 캡사이시에 의한 발병을 억제하는 활성이 뛰어나며, 이러한 항균성 균주를 안정한 상태로 저장할 수 있다. 또한, 액체형과 분말형으로 제조되어 여러 가지 방식으로 식물체에 처리될 수 있으며, 미생물 자체와 자연친화적인 물질 들을 이용하고 있어서 환경오염의 문제를 전혀 일으키지 않는다.

Claims (21)

  1. 식물의 곰팡이 병원균을 제어함으로써 식물의 생장을 증진시킬 수 있는 미생물제제에 있어서,
    스트렙토마이세스 속 (Streptomyces spp.) WYE 20 (KCTC 8768P)과 스트렙토마이세스 속 WYE 324 (KCTC 8769P) 중 적어도 하나의 항균성 미생물 균주를 포함하는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제.
  2. 제1항에 있어서, 상기 식물은 밭작물 또는 잔디인 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제.
  3. 제2항에 있어서, 상기 밭작물이 오이와 고추인 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제.
  4. 제1항에 있어서, 상기 항균성 미생물 균주에 대한 미생물 전달매체를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제.
  5. 제4항에 있어서, 상기 미생물 전달매체는 밀기울 40 내지 65 중량%, 키토산 1 내지 5 중량%, 톱밥 30 내지 55 중량%, 키틴 1 내지 3 중량% 및 목화씨에서 유도된 단백질 배지 1 내지 3 중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제.
  6. 제5항에 있어서, 상기 미생물 전달매체는 상기 미생물 전달매체 전체 중량에 대하여 0.2 내지 3.5중량%의 포자생성배지를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서, 상기 항균성 미생물 균주는 상기 미생물 전달매체 1g당 콜로니 형성단위 (colony forming unit:cfu)로서 1.0x105-1010개 포함되어 있는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제.
  8. 제4항에 있어서, 상기 미생물 전달매체는 1.0 내지 3.0 중량%의 펙틴, 0.1 내지 0.6중량%의 콜로이드키틴과 나머지량의 물을 포함하며, 액체형인 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제.
  9. 제8항에 있어서, 상기 항균성 미생물 균주는 상기 액체형 미생물 전달매체 1ml당 cfu로서 105-1010개 포함되어 있는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제.
  10. 식물의 곰팡이 병원균을 제어함으로써 식물의 생장을 증진시킬 수 있는 항균성 미생물제제의 제조방법에 있어서,
    스트렙토마이세스 속 WYE 20 (KCTC 8768P)과 스트렙토마이세스 속 WYE 324 (KCTC 8769P) 중의 적어도 하나의 항균성 미생물 균주를 배양하여 균체를 얻는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제의 제조방법.
  11. 제10항에 있어서, 상기 배양은 25 내지 33℃에서 3 내지 7일 동안 진탕하에 이루어지는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제의 제조방법.
  12. 제10항에 있어서, 상기 균체를 얻은 다음 상기 균체를 동결건조시켜 균체분말을 제조하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제의 제조방법.
  13. 제10항에 있어서, 상기 균체를 얻은 다음 상기 균체를 적절한 미생물 전달매체와 혼합하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제의 제조방법.
  14. 식물의 곰팡이 병원균을 제어함으로써 식물의 생장을 증진시킬 수 있는 항균성 미생물제제의 제조방법에 있어서,
    밀기울 40 내지 65 중량%, 키토산 1 내지 5 중량%, 톱밥 30 내지 55 중량%, 키틴 1 내지 3 중량% 및 목화씨에서 유도된 단백질 배지 1 내지 3 중량%를 균일하게 혼합하고 멸균하여 미생물 전달매체를 형성하는 단계,
    상기 미생물 전달매체에 스트렙토마이세스 속 WYE 20 (KCTC 8768P)과 스트렙토마이세스 속 WYE 324 (KCTC 8769P) 중의 적어도 하나의 항균성 미생물 균주 배양액을 혼합하여 25 내지 33℃에서 5-14일간 배양하는 단계, 및
    상기 배양단계에서 얻은 결과물을 무균적으로 건조시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제의 제조방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 건조단계 후 얻어진 결과물을 무균적으로 분쇄하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제의 제조방법.
  16. 제14항에 있어서, 상기 미생물 전달매체의 형성단계 후 상기 미생물 전달매체를 펠릿형으로 성형한 다음 얻어진 펠릿에 대해 포자생성배지를 전체 중량에 대하여 0.2 내지 3.5중량%의 양으로 코팅하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제의 제조방법.
  17. 제14항에 있어서, 상기 항균성 미생물 균주의 혼합단계에서 상기 항균성 미생물 균주가 상기 미생물 전달매체 1g당 cfu로서 1.0×105-1010개 혼합되는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제의 제조방법.
  18. 제14항에 있어서, 상기 미생물 전달매체의 형성단계에서 상기 멸균은 121℃에서 30-40분간 습열멸균방식으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제의 제조방법.
  19. 식물의 곰팡이 병원균을 제어함으로써 식물의 생장을 증진시킬 수 있는 항균성 미생물제제의 제조방법에 있어서,
    1.0 내지 3.0 중량%의 펙틴, 0.1 내지 0.6중량%의 콜로이드키틴과 나머지 량의 물을 균일하게 혼합한 후 멸균하여 액체형 미생물 전달매체를 형성하는 단계 및
    상기 미생물 전달매체에 스트렙토마이세스 속 WYE 20 (KCTC 8768P)과 스트렙토마이세스 속 WYE 324 (KCTC 8769P) 중의 적어도 하나의 항균성 미생물 균주 배양액을 혼합하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제의 제조방법.
  20. 제19항에 있어서, 상기 항균성 미생물 균주가 상기 액체형 미생물 전달매체 1ml당 cfu로서 1.0×105-1010개 혼합되는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제의 제조방법.
  21. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항균성 미생물제제를 처리하는 방법에 있어서, 식물의 종자, 팟팅 배합물, 식물체, 식물체가 생장하고 있는 토양 중 적어도 하나에 대해 상기 미생물제제를 코팅, 혼합 또는 분무사용하는 것을 특징으로 하는 항균성 미생물제제의 처리방법.
KR1019970003568A 1997-02-05 1997-02-05 항균성 미생물제제, 그 제조방법 및 처리방법 KR100197077B1 (ko)

Priority Applications (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1019970003568A KR100197077B1 (ko) 1997-02-05 1997-02-05 항균성 미생물제제, 그 제조방법 및 처리방법
IDW990809A ID22852A (id) 1997-02-05 1998-01-24 Bahan-bahan biokontrol antifungi, proses untuk membuatnya dan memperlakukannya
CA002279489A CA2279489A1 (en) 1997-02-05 1998-01-24 Antifungal biocontrol agents, a process for preparing and treating the same
CN98802311A CN1246890A (zh) 1997-02-05 1998-01-24 抗真菌生物控制剂,制备和处理该控制剂的方法
JP53415898A JP3428658B2 (ja) 1997-02-05 1998-01-24 抗菌性微生物製剤、その製造方法及び処理方法
AU58821/98A AU735602B2 (en) 1997-02-05 1998-01-24 Antifungal biocontrol agents, a process for preparing and treating the same
EP98902271A EP1015555A1 (en) 1997-02-05 1998-01-24 Antifungal biocontrol agents, a process for preparing and treating the same
PCT/KR1998/000015 WO1998035017A1 (en) 1997-02-05 1998-01-24 Antifungal biocontrol agents, a process for preparing and treating the same
US09/155,650 US6280719B1 (en) 1997-02-05 1998-02-24 Antifungal biocontrol agents, a process for preparing and treating the same

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1019970003568A KR100197077B1 (ko) 1997-02-05 1997-02-05 항균성 미생물제제, 그 제조방법 및 처리방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR19980067506A true KR19980067506A (ko) 1998-10-15
KR100197077B1 KR100197077B1 (ko) 1999-06-15

Family

ID=19496479

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1019970003568A KR100197077B1 (ko) 1997-02-05 1997-02-05 항균성 미생물제제, 그 제조방법 및 처리방법

Country Status (9)

Country Link
US (1) US6280719B1 (ko)
EP (1) EP1015555A1 (ko)
JP (1) JP3428658B2 (ko)
KR (1) KR100197077B1 (ko)
CN (1) CN1246890A (ko)
AU (1) AU735602B2 (ko)
CA (1) CA2279489A1 (ko)
ID (1) ID22852A (ko)
WO (1) WO1998035017A1 (ko)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100411185B1 (ko) * 2000-12-21 2003-12-18 한국생명공학연구원 신균주 스트렙토마이세스 속 ａｇ－ｐ（ｋｃｔｃ８９６５ｐ）및 이를 이용한 식물병 방제제
KR100416522B1 (ko) * 2000-10-28 2004-01-31 박지웅 잔디의 생육촉진용 조성물 및 이를 이용한 잔디생육촉진방법
KR20050040156A (ko) * 2003-10-27 2005-05-03 학교법인 건국대학교 신규한 방선균속 (Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ.)에속하는 신규균주 및 그 균주의 배양액을 포함하는농용미생물제제
KR100726864B1 (ko) * 2006-04-27 2007-06-11 한국생명공학연구원 식물 병원균에 대한 항균 활성을 갖는 스트렙토마이세스그리세오푸스쿠스 ｖｓｇ―１６ ｋｃｔｃ 10930ｂｐ 및이를 이용한 식물 병원균 방제제
KR100967143B1 (ko) * 2009-05-07 2010-07-05 김의수 식물발육촉진 및 토질개선용 비료 및 이의 제조방법
KR101101783B1 (ko) * 2010-02-08 2012-01-05 주식회사 해강바이오 항균활성과 살충력이 우수한 신규한 스트렙토마이세스속 균주 및 이의 배양방법과 배양물을 이용한 제제

Families Citing this family (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2001234500A1 (en) * 2000-01-21 2001-07-31 Entomos, L.L.C. Materials and methods for biological control of soilborne pathogens
KR100397796B1 (ko) * 2000-08-31 2003-09-13 서형원 항균성 미생물제제와 그의 용도
US6524577B1 (en) 2000-09-27 2003-02-25 Agraquest, Inc. Strain of Streptomyces for controlling plant diseases
KR20020031961A (ko) * 2000-10-25 2002-05-03 이재호 길항미생물인 스트렙토마이세스 카슈겐시스 지비에이-0927균주, 이를 포함하는 미생물 제제, 및 이를 이용한 난시들음병 및 오이 흑성병 병해를 방제하는 방법
US6995007B2 (en) * 2001-12-21 2006-02-07 University Of Massachusetts Antifungal bacterium ATCC PTA-4838
AU2003303847A1 (en) * 2003-01-27 2004-08-23 Plant Research International B.V. Compositions comprising lignosulfonates for improving crop yields and quality
US7294501B2 (en) * 2003-12-08 2007-11-13 Universite De Sherbrooke Geldanamycin-producing strains, uses thereof and methods of producing same
US8591926B2 (en) * 2004-07-13 2013-11-26 William Brower Formulation and method for treating plants to control or suppress a plant pathogen
CA2573860A1 (en) * 2004-07-13 2006-02-16 William Brower Formulation and method for treating plants to control or suppress a plant pathogen
FI119597B (fi) * 2004-12-31 2009-01-15 Verdera Oy Stabiilit mikrobisiirrosteet ja menetelmät niiden valmistamiseksi
US20070251352A1 (en) * 2006-05-01 2007-11-01 Pruitt Judith G Pelletized Feed Material for Biomass Generator
KR101048728B1 (ko) * 2009-06-09 2011-07-14 (주)한국바이오케미칼 스트렙토마이세스 블라스트마이세티쿠스 케이비시 케이―１ 및 이를 이용한 식물병 방제제
US8551762B2 (en) 2009-07-07 2013-10-08 Nch Corporation System and apparatus for feeding, solubilizing, growing and discharging a biological material
US8961893B2 (en) * 2009-07-07 2015-02-24 Nch Corporation Automated chemical diluter system having disposable components
WO2011154959A1 (en) * 2010-06-09 2011-12-15 Patel, Babubhai C. Advance method of preparation of bacterial formulation using pseudomonas fluorescens for controlling various diseases of crop plant
FR2980334B1 (fr) 2011-09-26 2015-05-29 Polyor Sarl Renforecement azote d'engrais foliaires therapeutiques
MX2020003135A (es) 2013-06-26 2021-03-25 Indigo Ag Inc Poblaciones endofitas derivadas de semillas, composiciones y metodos de uso.
CA3209979A1 (en) 2013-09-04 2015-03-12 Indigo Ag, Inc. Agricultural endophyte-plant compositions, and methods of use
EP3068212B1 (en) 2013-11-06 2019-12-25 The Texas A&M University System Fungal endophytes for improved crop yields and protection from pests
WO2015100432A2 (en) 2013-12-24 2015-07-02 Symbiota, Inc. Method for propagating microorganisms within plant bioreactors and stably storing microorganisms within agricultural seeds
CA3101008A1 (en) 2013-12-24 2015-07-02 Indigo Ag, Inc. Plants containing beneficial endophytes
US9364005B2 (en) 2014-06-26 2016-06-14 Ait Austrian Institute Of Technology Gmbh Plant-endophyte combinations and uses therefor
PT3099172T (pt) * 2014-01-31 2021-11-08 Agbiome Inc Agentes modificados de controlo biológico e seus usos
AU2015278238B2 (en) 2014-06-20 2018-04-26 The Flinders University Of South Australia Inoculants and methods for use thereof
EP3763214A3 (en) 2014-06-26 2021-03-31 Indigo Ag, Inc. Endophytes, associated compositions, and methods of use thereof
KR101629288B1 (ko) * 2014-09-16 2016-06-13 주식회사 한울 식물 병원균에 대한 항진균 활성 및 대취 분해능을 갖는 스트렙토미세스 헤이롱지안제시스 균주와 이를 함유한 미생물 제제
WO2016054222A1 (en) * 2014-09-30 2016-04-07 Auburn University Use of pectin or pectin-related saccharides to enhance efficacy of plant growth-promoting rhizobacteria (pgpr) strains for promoting growth and health in plants and animals
MX2017013864A (es) 2015-05-01 2018-04-24 Indigo Agriculture Inc Composiciones endofitas en complejo aisladas y metodos para mejorar los rasgos de plantas.
MX2017013866A (es) 2015-05-01 2018-04-13 Indigo Agriculture Inc Composiciones endofitas en complejo diseñadas y metodos para mejorar los rasgos de plantas.
WO2016200987A1 (en) 2015-06-08 2016-12-15 Indigo Agriculture, Inc. Streptomyces endophyte compositions and methods for improved agronomic traits in plants
US11751515B2 (en) 2015-12-21 2023-09-12 Indigo Ag, Inc. Endophyte compositions and methods for improvement of plant traits in plants of agronomic importance
WO2018102733A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Indigo Ag, Inc. Modulated nutritional quality traits in seeds
CA3086288A1 (en) 2016-12-23 2018-06-28 The Texas A&M University System Fungal endophytes for improved crop yields and protection from pests
WO2018160245A1 (en) 2017-03-01 2018-09-07 Indigo Ag, Inc. Endophyte compositions and methods for improvement of plant traits
CN111432631A (zh) 2017-03-01 2020-07-17 靛蓝股份公司 内生植物组合物和用于改进植株性状的方法
US10323226B2 (en) 2017-03-30 2019-06-18 Nch Corporation Feed material for biomass generator
US11882838B2 (en) 2017-04-27 2024-01-30 The Flinders University Of South Australia Bacterial inoculants
CN109082389B (zh) * 2018-07-25 2021-09-07 广东植物龙生物技术股份有限公司 一种兼具生物肥料与生物农药潜力的土壤链霉菌
CN110885769B (zh) * 2019-10-16 2022-09-02 西北农林科技大学 一株链霉菌、抑菌药物及其应用
CN111349571B (zh) * 2020-02-23 2022-05-03 闽南师范大学 一种烟草专用复合菌菌液及其制备方法
EP4245842A4 (en) * 2020-11-16 2024-06-26 Industry Foundation of Chonnam National University COMPOSITION FOR FIGHTING PLANT DISEASE COMPRISING A CULTURE FLUID OF THE STREPTOMYCES SP STRAIN. JCK-6141 OR STRAIN CULTURE FLUID EXTRACT, PREPARATION METHOD THEREFOR AND METHOD FOR CONTROLLING PLANT DISEASES
CN116555043A (zh) * 2023-03-12 2023-08-08 西南大学 一种可防治辣椒疫病的白色链霉菌及其应用
CN116240115B (zh) * 2023-03-12 2024-05-03 西南大学 一种可防治辣椒疫病的灰色链霉菌及其应用

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FI821099A0 (fi) * 1982-03-30 1982-03-30 Risto Tahvonen Fungistatiskt foerfarande
FI82878C (fi) * 1988-04-14 1991-05-10 Kemira Oy Fungistatiskt foerfarande.
EP0672114A1 (en) * 1992-03-13 1995-09-20 Research Corporation Technologies, Inc. Nematocidal and fungicidal streptomyces dicklowii biopesticide
US5403584A (en) * 1993-06-30 1995-04-04 Idaho Research Foundation, Inc. Use of Streptomyces WYEC 108 to control plant pathogens
US5527526A (en) * 1993-06-30 1996-06-18 Idaho Research Foundation, Inc. Use of streptomyces bacteria to control plant pathogens

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100416522B1 (ko) * 2000-10-28 2004-01-31 박지웅 잔디의 생육촉진용 조성물 및 이를 이용한 잔디생육촉진방법
KR100411185B1 (ko) * 2000-12-21 2003-12-18 한국생명공학연구원 신균주 스트렙토마이세스 속 ａｇ－ｐ（ｋｃｔｃ８９６５ｐ）및 이를 이용한 식물병 방제제
KR20050040156A (ko) * 2003-10-27 2005-05-03 학교법인 건국대학교 신규한 방선균속 (Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ.)에속하는 신규균주 및 그 균주의 배양액을 포함하는농용미생물제제
KR100726864B1 (ko) * 2006-04-27 2007-06-11 한국생명공학연구원 식물 병원균에 대한 항균 활성을 갖는 스트렙토마이세스그리세오푸스쿠스 ｖｓｇ―１６ ｋｃｔｃ 10930ｂｐ 및이를 이용한 식물 병원균 방제제
KR100967143B1 (ko) * 2009-05-07 2010-07-05 김의수 식물발육촉진 및 토질개선용 비료 및 이의 제조방법
KR101101783B1 (ko) * 2010-02-08 2012-01-05 주식회사 해강바이오 항균활성과 살충력이 우수한 신규한 스트렙토마이세스속 균주 및 이의 배양방법과 배양물을 이용한 제제

Also Published As

Publication number Publication date
AU5882198A (en) 1998-08-26
CN1246890A (zh) 2000-03-08
WO1998035017A1 (en) 1998-08-13
US6280719B1 (en) 2001-08-28
JP3428658B2 (ja) 2003-07-22
EP1015555A1 (en) 2000-07-05
KR100197077B1 (ko) 1999-06-15
CA2279489A1 (en) 1998-08-13
AU735602B2 (en) 2001-07-12
JP2000513582A (ja) 2000-10-17
ID22852A (id) 1999-12-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100197077B1 (ko) 항균성 미생물제제, 그 제조방법 및 처리방법
RU2127521C1 (ru) Штамм актиномицета streptomyces lydicus для защиты растений от грибковой инфекции, композиция для защиты растений от грибковой инфекции (варианты), способ снижения чувствительности растения к грибковой инфекции (варианты)
US5968503A (en) Use of streptomyces bacteria to control plant pathogens and degrade turf thatch
US5994117A (en) Use of Bacillus Subtilis as an endophyte for the control of diseases caused by fungi
KR100868901B1 (ko) 바실러스 아밀로리쿼파시엔스 균주 및 이를 함유하는 제제
US5527526A (en) Use of streptomyces bacteria to control plant pathogens
HU220582B1 (hu) Készítmény és eljárás növénybetegségek elleni védelemhez
WO1984000977A1 (en) Method for screening bacteria and application thereof for field control of diseases caused by gaeumannomyces graminis
JP2829325B2 (ja) 抗菌・抗線虫剤、植物細胞活性剤及びそのための微生物
KR100397796B1 (ko) 항균성 미생물제제와 그의 용도
KR100361473B1 (ko) 식물질병을생물학적으로제어하기위한미생물
KR20080019831A (ko) 유도전신저항성 바실러스 메가테리움 ｈｋ-ｉｓｒ1 균주 및이의 배양액을 포함하는 미생물 제제와 이를 이용한인삼병 방제 방법
KR100294023B1 (ko) 작물의병해방제용균주,이를함유하는미생물제제및그용도
WO2000015761A1 (en) Novel bacterial strains and methods of controlling fungal pathogens
US5968504A (en) Fungus Gliocladium catenulatum for biological control of plant diseases
KR0153138B1 (ko) 향균성 미생물제제 및 그 제조방법
KR0183518B1 (ko) 식물생장 촉진성 조성물 및 이를 포함하는 미생물제제
KR20010015511A (ko) 작물의 병해 방제용 균주, 이를 함유하는 미생물제제 및그 용도
KR0183517B1 (ko) 식물생장 촉진성 조성물 및 이를 포함하는 미생물제제
KR100361135B1 (ko) 식물병원균의 길항미생물,이것을 포함하는 미생물제제 및 이것을 이용한 식물병원균의 방제방법
KR100189507B1 (ko) 미생물 전달매체 및 그 제조 방법
KR20010109531A (ko) 식물병원균의 길항미생물, 이것을 포함하는 미생물 제제 및 이것을 이용한 식물병원균의 방제방법
CN118028118A (zh) 一株具有抑制土传疫霉菌及增强大豆抗倒伏性能的角毛壳菌及其应用
KR20020064386A (ko) 세균성 무름병 병원균에 대하여 항균 활성을 갖는 신규한바실러스 에스피균주 및 이를 이용한 세균성 무름병의방제 방법
KR20020064385A (ko) 감자 더뎅이 병원균에 대하여 항진균 활성을 갖는 신규한바실러스 에스피균주 및 이를 이용한 감자 더뎅이병원균의 방제 방법

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20110223

Year of fee payment: 13

LAPS Lapse due to unpaid annual fee