KR20020064385A

KR20020064385A - 감자 더뎅이 병원균에 대하여 항진균 활성을 갖는 신규한바실러스 에스피균주 및 이를 이용한 감자 더뎅이병원균의 방제 방법

Info

Publication number: KR20020064385A
Application number: KR1020010004755A
Authority: KR
Inventors: 구정모; 김학응
Original assignee: 주식회사 제노바이오텍
Priority date: 2001-02-01
Filing date: 2001-02-01
Publication date: 2002-08-09

Abstract

본 발명은 감자 더뎅이 병원균에 대하여 항진균 활성을 갖는 신규한 바실러스 에스피(Bacillussp.) 균주 및 이를 이용한 감자 더뎅이 병원균의 방제 방법에 관한 것으로, 감자 더뎅이 병원균인 스트렙토마이세스 스카비에스(Streptomyces scabies)와 스트렙토마이세스 아시디스카비에스(Streptomyces acidisscabies)에 대하여 항진균활성을 가지는 대사산물을 생산하는 신규 바실러스 에스피(Bacillussp.) GENO-101 균주는 단간균으로서 세포크기가 1.0 × 2.9㎛ 정도이며, 운동성이 있고, 그람염색에 포지티브 반응을 나타내며, 타원형의 포자를 중앙에 형성하는 것으로 특징지워지며, 바실러스 에스피 GENO-101 균주 또는 이의 배양액(이 균주의 대사산물) 혹은 활성성분의 추출정제물을 감자재배에 이용함으로써 감자 더뎅이 병원균인 스트렙토마이세스 스카비에스(Streptomyces scabies)와 스트렙토마이세스 아시디스카비에스(Streptomyces acidisscabies)의 생육을 억제하여 감자 더뎅이병의 발병율을 감소 또는 발병을 예방시키는 방제효과를 얻을 수 있다.

Description

감자 더뎅이 병원균에 대하여 항진균 활성을 갖는 신규한 바실러스 에스피 균주 및 이를 이용한 감자 더뎅이 병원균의 방제 방법{The new Bacillus sp. having an antibacterial effect against the sheath blight disease and the prevention method of sheath blight disease utilizing thereof}

본 발명은 감자 재배시 발병하는 감자 더뎅이 병원균, 특히 스트렙토마이세스 스카비에스 (Streptomyces scabies)와 스트렙토마이세스 아시디스카비에스 (Streptomyces acidisscabies)에 대하여 강력한 항진균활성을 가지는 대사산물을생산할 뿐만 아니라 우수한 토양 정착성과 감자 더뎅이 병원균에만 활성을 나타내는 활성의 특이성을 갖는 새로운 바실러스속 균주 및 상기의 새로운 바실러스속 균주 또는 이 균주의 대사산물을 감자에 살포하거나 감자 재배시에 살포하여 감자 재배시 발병하는 병원균을 방제하는 방법에 관한 것이다.

항생물질에 관한 연구는 1929년 플레밍(Fleming)에 의해 스타필로코커스 오레우스(Staphylococcus aureus)에 대하여 생육을 저해하는 페니실리움 노타툼 (Penicillum notatum)의 항진균 작용이 발견된 이후 활발히 진행되었고, 이에 따라 여러 병원성 미생물에 유효한 각종의 항생물질이 개발되었다. 인체 및 식물체에 대한 병원성 곰팡이 감염의 치료 및 방제를 위한 항진균성 항생물질에 대한 연구는 1950년 엘리자베스(Elizabeth)와 브라운(Brown)에 의하여 칸디다 엘비칸스(Candida albicans)에 활성을 나타내는 펀지시딘(Fungicidin)이라는 물질을 분리하면서 시작되었다.

또한, 국내에서는 벼도열병균, 회색감자 더뎅이병균 및 캔디다균 등에 효과가 있는, 특히 벼도열병에 대하여 활성을 나타내는 항진균성 항생물질이 분리되었다 (김시관, 김창환, 1989, 아세톡시시클로헥시미드의 생리활성 및 그 생산 균주, 한국산업미생물학회지, 17:307-312).

한편, 현재 많이 사용되고 있는 유기합성계 농약은 잔류 농약이 토양으로 유입되고 있고, 농약 중독증 등의 부작용이 발생되고 있는 실정이다. 특히, 농약 중독의 경우에는 해마다 많은 사람이 생명을 잃고 있으며, 생태계 파괴까지도 유발되고 있어서 환경오염 문제와 더불어 농약의 잔류 독성 문제는 커다란 사회문제로 부각되고 있다.

그러나, 생물체로부터 생산되는 대사산물로서의 항생물질은 병원균에 대해서만 항진균 활성을 나타내고 인간, 가축, 식물 등에는 거의 영향을 끼치지 않으며, 환경에 잔류되지 않는다.

따라서, 상기와 같이 생물체로부터 생산되는 항생물질은 환경친화적이고 잔류 독성이 없다는 이점에 의하여 유기합성계 농약의 대안으로 부각되고 있다.

천연물, 생물 농약은 자연 상태의 토양에서 분리된 미생물에서 유래한 것으로서 유기합성농약에 비하여 독성에 관한 문제가 거의 없으며, 그린라운드 실행시 요구되는 엄격한 환경 규제를 만족할 수 있는 생물 농약의 중요성에 기초하여 그 연구 개발이 급속히 진행되고 있고, 일본의 경우에는 천연물 농약 개발에 집중적인 연구와 투자를 행하여 폴리옥신, 가주가마이신, 발리다마이신이 1960년도 후반에 개발되어 산업화되었으며, 미국의 경우에는Bacillus, Pseudomonas, Trichoderma등 20여종의 미생물 원제가 작물 질병 바제 용도로 이미 특허 등록되어 있다.

한편, 감자는 가지과에 속하는 1년생 식물로서 땅속 줄기의 첫부분에 전분이 집적하여 비대한 것으로 그 속에 전분립이 쌓여 있는 데 이를 식용하고, 찌거나 삶아서 이용하기도 하고 수프나 감자 전분 포테이토 칩 등의 가공품의 원료로 많이 이용되고 있으며, 감자의 성분은 수확시기에 따라 다르지만 성장함에 따라 수분 및 당분 함량은 감소하고 전분함량이 현저하게 증가하고 단백질 함량도 다소 증가한다.

감자는 수분함량이 약 80% 정도로 가장 많으며, 탄수화물 함량은 15% 정도로거의 대부분이 전분이고 단백질은 2% 정도 함유되어 있으며, 예로 부터 구황식품으로 사용되어 왔지만 최근에는 다양한 형태의 음식물로 개발되어 그 사용량이 날로 증가하고 있다.

그러나, 감자의 재배시 스트렙토마이세스 스카비에스 (Streptomyces scabies)와 스트렙토마이세스 아시디스카비에스 (Streptomyces acidisscabies)에 의하여 감자 더뎅이병의 발생이 빈번히 일어나고, 감자 더뎅이병이 발생되면 감자의 생육이 잘 이루어지지 않을 뿐만 아니라 감자의 형태 손상이 크게 일어나고 발병된 감자를 식용하였을 경우에는 확실하게 밝혀진 바는 없지만 인체에 악영향을 미치게 된다.

감자 더뎅이병은 품종에 따라 차이가 있기는 하지만 평균 30 ∼ 40%의 발병율을 나타내며, 심한 경우 60 ∼ 70%에 으르러 상품성을 저하시키고, 이에 따라 농가 소득에 큰 피해를 입히고 있으며, 건전 종서 생산 및 수량 감소를 초래하는 피해를 주고 있다.

종래에는 식용감자의 재배시 감자 더뎅이병이 발병하였을 경우에 또는 발병 예방을 위하여 유기합성계 농약을 사용하므로 재배되는 감자에 농약이 잔류하게 되어 인체에 해를 미치는 경우가 있어 이에 대한 대책이 절실히 요구되고 있는 실정이다.

이에 본 발명자 등은 감자재배시 발병하는 감자 더뎅이 병원균, 특히 스트렙토마이세스 스카비에스 (Streptomyces scabies)와 스트렙토마이세스 아시디스카비에스 (Streptomyces acidisscabies)에 대하여 항진균활성을 가지면서 인간, 가축,식물 등에 거의 영향을 미치지 않는 대사산물을 생산하는 미생물을 찾기 위하여 노력한 결과, 바실러스 에스피 GENO-101 균주가 감자의 감자 더뎅이병을 예방 및 방제하는 대사산물을 생산하면서도 인체 등에 해를 미치지 않으며, 토양 정착성이 우수하고 감자 더뎅이 병원균에만 특이적으로 작용하는 활성의 특이성이 우수함을 발견하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 감자재배시 발병하는 더뎅이병 병원균, 특히 스트렙토마이세스 스카비에스 (Streptomyces scabies)와 스트렙토마이세스 아시디스카비에스 (Streptomyces acidisscabies)에 대하여 항진균활성을 가지면서도 인체에 해를 미치지 않는 대사산물을 생산하고, 토양 정착성이 우수하고 감자 더뎅이 병원균에만 특이적으로 작용하는 활성의 특이성이 우수한 신규한 미생물 균주를 제공하는 데 있다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 미생물 균주 또는 이 균주로부터 생산되는 대사산물인 항진균물질을 씨감자의 근권에 처리하거나 감자재배시 살포하여 상기 병원균으로부터 감자를 방제하는 방법을 제공하는 데 있다.

상술한 목적들 뿐만 아니라 용이하게 표출되는 또 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명에서는 토양으로부터 균주를 분리하고 배양하여 배양액을 얻고, 이를 감자 더뎅이 병원균의 발병균을 피검균으로 하여 항균활성을 측정하고 동물실험을 행한 결과, 감자의 더뎅이병을 예방 및 방제하는 효과가 우수한 대사산물을 생산하면서도 토양 정착성이 우수하고 감자 더뎅이 병원균에만 특이적으로 작용하는 활성의 특이성이 우수하며, 인체 등에 해를 미치지 않아 부작용없이 감자 더뎅이병을 예방 및 방제하는 효과를 얻을 수 있었다.

도 1은 감자 재배시 발생하는 감자 더뎅이 병원균에 대한 본 발명의 바실러스속 균주가 생산하는 대사산물의 항진균효과를 나타낸 사진이며,

도 2는 감자 재배시 발생하는 감자 더뎅이 병원균에 대한 항진균효과를 나타내는 본 발명의 신규한 바실러스속 균주의 토양 정착성 및 활성의 특이성을 나타내는 사진이다.

본 발명에 따른 감자 재배시 발병하는 더뎅이병 병원균, 특히 스트렙토마이세스 스카비에스 (Streptomyces scabies)와 스트렙토마이세스 아시디스카비에스 (Streptomyces acidisscabies)에 대하여 항진균활성을 가지는 대사산물을 생산하는 신규 바실러스 에스피(Bacillussp.) GENO-101 균주는 단간균으로서 세포크기가 1.0 × 2.9㎛ 정도이며, 운동성이 있고, 그람염색에 포지티브 반응을 나타내며, 타원형의 포자를 중앙에 형성하는 것으로 특징지워진다.

또한, 본 발명에 따른 감자재배시 발생하는 감자 더뎅이병을 방제하는 방법은 상기 미생물 균주 또는 이로부터 생산되는 대사산물 혹은 활성성분의 추출물을 감자 재배시에 살포하거나 씨감자 근권을 처리하는 것으로 특징지워진다.

본 발명의 바실러스속 에스피(Bacillussp.) GENO-101 균주는 토양으로부터 분리된 것이다. 상기 균주를 액체배지에 배양하여 얻은 배양액은 감자에 발병하는 더뎅이병 병원균, 특히 스트렙토마이세스 스카비에스 (Streptomyces scabies)와 스트렙토마이세스 아시디스카비에스 (Streptomyces acidisscabies)가 일으키는 감자 더뎅이병에 대하여 강력한 항진균 활성을 가진다.

따라서, 본 발명의 균주 또는 그 배양액 혹은 배양액으로부터 추출된 활성성분을 감자 재배시에 살포하거나 씨감자 근권을 처리하면, 병원성 곰팡이로부터 감자를 방제할 수 있다.

이하에서는, 본 발명을 실시예에 의하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 하기의 실시예는 본 발명을 설명하기 위하여 제시되는 것이며, 본 발명의 범위를 제한하기 위한 것은 아니다.

실시예 1 : 본 발명의 미생물 균주의 선별

대전시 근교 토양으로부터 분리한 균주를 NB 액체배지(육즙 0.3%, 펩톤 0.5%)에 백금이로 1회 접종하고, 30℃에서 5일 동안 진탕배양하였다.

배양액을 12,000 X g에서 20분간 원심분리한 후, 스트렙토마이세스 스카비에스(Streptomyces scabies)를 피검균으로 사용하여 페이퍼 디스크(paper disc)법으로 배양 상등액의 항균활성을 측정하였다. 분리 균주들 중에서 항균 활성이 가장 좋은 균주를 선별하여 동정한 결과, 새로운 바실러스 에스피(Bacillussp.)임을 확인하였다. 이것을 바실러스 에스피 GENO-101(Bacillussp.GENO-101)이라 명명하고, 이 균주를 2000년 11월 17일자로 사단법인한국종균협회의 한국미생물보존센터에 기탁하여 수탁번호(수탁번호:KFCC-11234)를 부여받았다.

균주의 동정은 Bergey's manual of determinative bacteriology, Microbiological methods, Manual of methods for general bacteriology, Microbiology a laboratory manual, Bergey's manual of systematic bacteriology 및 식품공학실험 등에 수록되어 있는 일반적인 세균동정법과 MIDI방법을 이용하여 행하였다.

본 발명의 바실러스 에스피 GENO-101(Bacillussp.GENO-101) 균주의 동정 결과 및 배양특성을 다음의 표들에 나타내었다.

본 발명 바실러스 에스피 GENO-101 균주의 배양학적 특성

콜로니 형태	원형
콜로니 표면	매끄러움
콜로니 모서리	파상
콜로니 에리베이션	돌출
콜로니 흐림도	불투명면
콜로니 색깔	짙은 크림색
콜로니 광택성	빛나지 않음

뉴트리언트(Nutrient) 한천 평판 배지에서의 콜로니 형태는 원형이었고, 색깔은 크림색이었으며, 표면은 광택이 나면서 매끄러운 상태이었고, 뉴트리언트 액체 배지에서 균체의 생육은 좋았고, 펠리클(pellicle)을 형성하지 않으며, 균체의 침전현상은 나타났다.

본 발명 바실러스 에스피 GENO-101 균주의 형태학적 특성.

형 태	단간균
세포 크기	1.2 × 2.6㎛
운 동 성	+
프라겔라(Flagella)	+
포자 형성	+
그람 염색	+

상기 표 2에 기재된 바와 같이, 본 발명의 바실러스 에스피 GENO-101 균주는 단간균이며, 세포 크기가 1.2 × 2.9㎛이고, 운동성이 있고, 그람 염색에 포지티브 반응을 나타내며, 타원형의 포자를 중앙에 형성하였다.

본 발명 바실러스 에스피 GENO-101 균주의 생리학적 특성.

성장 온도 범위	20 ∼ 50℃
성장 pH 범위	4 ∼ 9
성장 NaCl 한계	＜8%
카탈라제	+
옥시다제	+
유레아제	+
리파제(트윈 80 하이드로라이시스)	+
β-갈락토시다제	+
알기닌 디하이드로라제	+
전분 가수분해	+
카제인 가수분해	+
셀룰로오스 가수분해	+
에스쿨린 가수분해	-
인돌형성	+
TSI 한천배지에서의 H₂S 형성	+
슈크로오스로부터 레반 형성	+
펩톤으로부터 NH₃형성	-
알기닌으로부터 NH₃형성	+
젤라틴 액화	+
사이트레이트 이용	+
메틸레드 테스트	+
질소환원	+
탈질소	+
우유반응 : 응고	-
우유반응 : 펩토니제이션	+
O-F 테스트	발효
티로신 분해	-
페닐알라닌 디아미나제	+

* 상기 표에서 +는 양성을 나타내고, -는 음성을 나타낸다.

상기 표 3에서 나타낸 바와 같이, 본 발명 바실러스 에스피 GENO-101 균주의 생육 온도 범위는 20 ~ 50℃이고, 생육 pH 범위는 4 ~ 9이며, 염농도 8%까지 생육이 가능하다. 그리고, 카탈라제 양성 및 전분, 카제인, 셀룰로오스 분해능이 있었다.

실시예 2 : 본 발명 균주의 대량생산조건 및 감자 더뎅이 병원균인 스트렙토마이세스 스카비에스( Streptomyces scabies )와 스트렙토마이세스 아시디스카비에스( Streptomyces acidisscabies )에 대한 방제효과 검토

100ml의 삼각 플라스크에 NB 배지 20ml를 첨가하고, 사면 배양한 분리 균주를 백금이로 1회 접종한 후, 30℃에서 24시간 진탕배양한 균주를 종균으로 사용하였으며, NB배지 20ml에 종균 배양액 1.0%(v/v)씩 접종하고 진탕배양하면서, 24시간 간격으로 배양액을 취하여 원심분리한 후 배양상등액의 항균활성을 측정하고 균체량을 측정하여 배양시간에 따른 영향을 평가하였다.

또한, 종균 배양액을 NB배지 20ml에 종균 배양액 1.0%(v/v)씩 접종하고, 각각 온도를 달리하여 120시간 동안 진탕배양한 후 원심분리하여 배양상등액의 항균활성을 측정하고 균체량을 측정하여 배양온도에 따른 영향을 평가하며, 항생 물질 생산을 위한 최적 pH를 검토하기 위하여 기본 배지의 pH를 4 ~ 10까지 조절하고 종균 배양액을 1.0%(v/v)씩 접종하여, 37에서 진탕배양시킨 후 원심분리하여 배양상등액의 항균활성을 측정하고 균체량을 측정하여 초기 pH에 따른 영향을 평가하였다.

뿐만 아니라, 탄소원에 따른 항생물질의 생산을 검토하기 위하여 기본 배지에 각종의 탄소원을 1.0%(v/v)씩 첨가하고 종균 배양액을 1.0%(v/v)씩 접종하여, 37℃에서 48시간 동안 진탕배양시킨 후 원심분리하여 배양상등액의 항균활성을 측정하고 균체량을 측정하여 탄소원의 영향을 평가하였고, 탄소원으로 슈크로오즈 2.0%가 첨가된 기본 배지에 각종의 유기질소원과 무기질소원을 1.0%(v/v)씩 첨가하고 종균 배양액을 1.0%(v/v)씩 접종하여, 37℃에서 48시간 동안 진탕배양시킨 후 원심분리하여 배양상등액의 항균활성을 측정하고 균체량을 측정하여 질소원의 영향을 평가하였으며, 각종의 무기염류들을 탄소원으로 슈크로오즈 2.0%, 질소원으로 이스트 추출물 1.0%가 첨가된 기본 배지에 각각 0.1%(v/v)씩 첨가하고 종균 배양액을 1.0%(v/v)씩 접종하여, 37℃에서 48시간 동안 진탕배양시킨 후 원심분리하여 배양상등액의 항균활성을 측정하고 균체량을 측정하여 무기염류의 영향을 평가하였다.

본 발명 바실러스 에스피 GENO-101 균주의 항균활성 측정은 피검균으로 스트렙토마이세스 스카비에스(Streptomyces scabies)를 선택하여 다음과 같은 컵 방법(Cup method)으로 수행하였다. 즉, NB 배지(Difco Co.) 15ml를 멸균한 후 45 ∼ 50℃로 냉각하고, 냉각된 배지에 피검균 현탁액을 각각 0.5ml 접종하여 30℃에서 48시간 동안 배양한 후 중층하였다. 이와 같이 만든 평판 배지의 표면에 컵(내경 6mm, 외경 8mm, 높이 10mm)을 올려놓고 분리 균주의 배양 상등액을 넣어 30℃에서 48시간 동안 배양한 다음, 형성된 생육 저지환의 직경을 측정하였다.

그 결과를 도 1 및 도 2의 사진으로 확인할 수 있었으며, 배지 및 배양조건 변화와 함께 감자 더뎅이 병원균인 스트렙토마이세스 스카비에스(Streptomyces scabies)와 스트렙토마이세스 아시디스카비에스(Streptomyces acidisscabies)에 대한 방제 효과를 표 4 내지 표 9에 기재하였다.

또한, 배양액을 12,000 X g에서 20분간 원심분리하고, 분리된 균체를 증류수로 1회 세척하여 100 ∼ 105℃에서 항량이 될 때까지 건조시킨 후, 무게를 측정하여 균체량을 측정하였다.

배 양 시 간	균체의 DW(g/ml)	배양 후 pH	클리어존(cm)
24시간	0.005	6.90	1.6
48시간	0.002	6.89	2.0
72시간	0.001	6.79	1.5
96시간	0.001	6.75	1.4

표 4로부터 알 수 있는 바와 같이 균체의 생육은 2일 이후에는 정지기에 도달하였으며, 항생물질의 생산은 2일이 경과한 균체의 생육이 정지기에 도달한 후인 2일에서 최대를 나타내었고 2일 이후에는 점차 감소하였다. 따라서, 본 발명에서는 1일간 배양한 균체를 종균으로 사용하였으며, 항생물질의 생산을 위한 배양은 2일 동안 행하였다.

배양 온도(℃)	균체의 DW(g/ml)	클리어존(cm)
0	-	-
25	0.006	1.6
30	0.004	1.7
37	0.003	2.1
50	0.001	1.4

배양 온도에 따른 균체의 생육과 활성을 검토한 결과, 표 5로부터 알 수 있는 바와 같이 생육은 25℃, 항생물질의 생산은 37℃에서 최대가 되었다.

초 기 pH	DW(g/ml)	배양 후 pH	클리어존(cm)
3	ㆍ	ㆍ	ㆍ
4	ㆍ	ㆍ	ㆍ
5	0.002	6.75	1.3
6	0.003	6.97	1.6
7	0.004	7.04	1.7
8	0.003	6.95	2.2
9	0.002	6.91	1.6

탄소원	균체의 DW(mg/ml)	클리어존(cm)
대조군	1.68	13.0
아라비노스	2.75	12.3
C.M.C	3.69	10.2
덱스트린	4.86	11.2
프락토오즈	2.41	10.5
갈락토오즈	2.96	10.8
락토오즈	3.83	10.2
말토오즈	2.63	11.2
만니톨	2.87	12.0
라피노오스	3.57	11.2
가용성 전분	4.48	13.3
슈크로오즈	2.67	14.9
자일로오즈	2.49	11.5
글루코오즈	3.97	12.4

질소원	균체의 DW(mg/ml)	클리어존(cm)
대조군	2.12	15.8
비프 익스트렉트	5.30	11.8
말트 익스트랙트	1.30	12.3
펩톤	2.22	14.7
트립톤	5.61	14.5
소이빈 밀	6.51	13.1
이스트 익스트랙트	1.12	16.5
KNO₃	0.71	11.0
NaNO₂	0.67	11.0
NH₄Cl	0.70	11.0
NH₃CO₂	0.65	10.0
NH₄NO₃	1.01	11.0
(NH₄)₂SO₄	0.80	11.0

무기염류	균체의 DW(mg/ml)	클리어존(cm)
대조군	3.30	17.9
BaCl₂.2H₂O	2.82	16.0
NaCl	4.05	21.0
ZnSO₄.7H₂O	1.15	17.0
KCl	3.85	15.5
CuSO₄.7H₂O	6.35	12.0
MgSO₄.7H₂O	5.09	11.3
K₂HPO₄	3.90	12.6
MnCl₂.4H₂O	1.14	11.9
CaCl₂	6.21	12.4

실시예 3: 경구독성시험

7 ∼ 8 주령의 특정 병원체 부재(specific pathogens free) ICR 마우스로서 체중 25 ∼ 29g의 암컷 6마리와 체중 34 ∼ 38g의 수컷6마리를 온도 22 ± 1℃, 습도 55 ± 5%, 조명 12L/12D의 동물실내에서 사육하였다. 마우스는 실험에 사용되기 전 1주일 정도 순화시켰다. 실험동물용 사료((주)제일제당, 마우스 및 랫드용) 및 음수는 멸균한 후 공급하였으며 자유섭취시켰다.

실시예 2에서 얻은 균주의 배양 상등액을 마우스 체중 20g 당 0.2㎖씩 경구투여하였다. 시료는 1회 경구 투여하였으며, 투여 후 10일 동안 다음과 같이 부작용 또는 치사 여부를 관찰하였다. 즉, 투여당일은 투여 후 1시간, 4시간, 8시간, 12시간 뒤에, 그리고 투여 익일부터 10일째까지는 매일 오전, 오후 1회 이상씩 일반증상의 변화 및 사망동물의 유무를 관찰하였다. 또한, 투여 10일째에 동물을 치사시켜 해부한 후 육안으로 내부 장기를 검사하였다. 투여당일부터 1일 간격으로 체중의 변화를 측정하여 약물에 의한 동물의 체중 감소 현상을 관찰하였다.

본 실험은 본 발명 균주의 배양 상등액에 대하여 경구경로에서의 급성독성의 정도를 파악함으로써 독성에 대한 기초 자료를 도출함을 목적으로 실시하여 아래와 같은 결과를 얻었다.

급성 경구독성의 경우는 본 발명 균주 배양 상등액 1,000㎎/kg의 투여량에서 10일동안 치사동물이 관찰되지 않았다. 10일 후 생존동물에 대한 부검을 실시한 바, 특별한 병변 육안 소견이 없었으며, 투여 익일부터 10일간 어떠한 체중의 감소 없이 정상적인 체중의 증가가 관찰되었다.

결론적으로, 본 발명 균주 배양 상등액은 상기의 농도로 경구투여시 독성이 관찰되지 않았다.

상술한 바와 같이 본 발명에서는 토양으로부터 균주를 분리하고 배양하여 배양액을 얻고, 이를 감자 더뎅이 병원균의 발병균을 피검균으로 하여 황균활성을 측정하고 동물실험을 행한 결과, 감자의 더뎅이병을 예방 및 방제하는 효과가 우수한 대사산물을 생산하면서도 토양 정착성이 우수하고 감자 더뎅이 병원균에만 특이적으로 작용하는 활성의 특이성이 우수하며, 인체 등에 해를 미치지 않아 부작용없이 감자 더뎅이병을 예방 및 방제하는 효과를 얻을 수 있었다.

Claims

감자 더뎅이 병원균인 스트렙토마이세스 스카비에스(Streptomyces scabies)와 스트렙토마이세스 아시디스카비에스(Streptomyces acidisscabies)에 대하여 항진균활성을 가지는 대사산물을 생산하는 신규 바실러스 에스피(Bacillussp.) GENO-101 균주는 단간균으로서 세포크기가 1.0 × 2.9㎛ 정도이며, 운동성이 있고, 그람염색에 포지티브 반응을 나타내며, 타원형의 포자를 중앙에 형성하고 토양 정착성이 우수하고 감자 더뎅이 병원균에만 특이적으로 작용하는 활성의 특이성이 우수 바실러스 에스피 GENO-101(Bacillussp.GENO-101, 미생물 수탁번호 KFCC-11234) 균주.
바실러스 에스피 GENO-101(Bacillussp.GENO-101) 균주 또는 이의 배양액 혹은 활성성분의 추출물을 감자재배시에 살포하거나 씨감자의 근권에 처리하는 것을 특징으로 하는 감자 더뎅이 병원균으로부터 감자를 방제하는 방법.