JPS63273470A - 抗菌活性を有する微生物菌株 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、抗菌活性を有する枯草菌（バチルス・ズブチ
リス、Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔ１１ｉｓ）株に関す
る。

枯草菌は、胞子形成性、好気性、高弾性で鞭毛をもつ細
菌である・。これは様々な生物学的コントロール研究の
ための研究対象となっていて、有望な結果が様々な試験
において、例えばリゾクトニア（Ｒｈ！ｚｏｃｔｏｎｉ
ａ）及びピチウム（Ｐｙｔｈｉｕｇ＋）の立枯れ病〔オ
ルセン（Ｏｌｓｅｎ）、１９６４年；オルセン及びベー
カー（Ｂａｋｅｒ）、１９６８年；ブロードベント（Ｉ
ｌｒｏａｄｂｅｎｔ）ら、１９７１年〕、リンゴの木に
おける葉痕のネクトリア・ガリゲナ（Ｎｅｃｔｒｊａｇ
ａｌ　Ｉ　Ｉｇｅｎａ）感染〔スウィンバーン（Ｓｗｌ
ｎｂｕｒｎｅ）、１９７３年〕、小麦におけるフサリウ
ム（Ｐｕｓａｒ−ｉｕｎ＋）苗胴貼れ病〔チャン（Ｃｈ
ａｎｇ）及びコントロール（Ｋｏ＋ｕｃｄａｈｌ）、１
９６８年〕に関し報告されており、しかも枯草菌は簡単
な増殖培地を必要とするのみで容易かつ安価に産生しう
るという利点を有している。

我々は、サラトン・ボニングトン（Ｓｕｔｔｏｎ　Ｂｏ
−ｎｎｌｎｇｔｏ口）の耕作地で栽培されたソラマメ植
物の葉表面から、細菌のスクリーニング中に枯草菌の新
株を単離した。新株は様々なバイオアッセイにおいて驚
くべきほどの抗菌活性を有していることが見出された。

以上のように、本発明は枯草菌株（ＪＢ３）〔そのサン
プルは、ナショナルψコレクションズ・オブ・インダス
トリアル・バクテリア社（ＮａＬ−ｉｏｎａｌ　　Ｃｏ
１１ｅｃｔｉｏｎｓ　　ｏｌ’　　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａ
ｌ　　Ｂａｃｔｅｒｉａ　　Ｌｉｄ。

ＮＣＩＢ）、ドーリ−！リサーチ・ステーション（Ｔｏ
ｒｙ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　５ｔａｔ１ｏｎ）、Ｐ、０．
ボックス３１．１３５アビ−やロード、Ａ８９　８ＤＧ
、スコツトランドに１９８６年１２月２２日付で受託番
号ＮＣＩＢ１２３７５として寄託された〕、又は抗菌活
性をもつその変異体もしくは誘導体を提供するものであ
る。

ＪＢＢ株の特に有効な変異体又は誘導体はＪＢ３．６株
であって、そのサンプルは１９８６年１２月２２日付で
受託番号ＮＣＩＢ１２３７６としてＮＣＩＢに寄託され
た。

ＪＢ３のもう１つの特に有効な変異体又は誘導体はＲ１
株であって、そのサンプルは１９８７年１２月２４日付
で受託番号ＮＧＩＢ１２６１６としてＮＣＩＢに寄託さ
れた。

本発明は、植物の病気、動物及びヒトの微生物感染を抑
制し、並びに一般的な微生物汚染を抑制するための、上
記株又はその誘導体もしくは変異体、あるいはこれらの
株又はその誘導体もしくは変異体から得られる抗菌物質
の用法にも関する。

新株は場合により他の微生物株と混合して使用すること
ができる。

新株は植物園疾患を抑制するのに特に有用である。植物
に適用する場合、株類は適切な担体又は希釈剤を含有し
た組成物中に配合させておくことができる。投与時にお
いて植物葉の湿潤性を保持させるために、組成物はゴム
質又は界面活性剤を含有していてもよい。

インビトロバイオアッセイにおいて、新株は様々な病原
菌に対して抗菌活性を有し、経管の著しい湾曲、菌糸端
（ｈｙｐｈａｌ　ｔｉｐ）の溶解及びその後の菌類の死
を生じさせることが判明した。今までに試験された菌類
としては、下記のものがある；アルタナリア種（Ａｌｔ
ｅｒｎａｒｉａ　ｓｐｐ、）ボトリチス種（ＢｏＬｒｙ
ｔｉｓ　ｓｐｐ、）レブトスファエリア種（Ｌｅｐｔｏ
ｓｐｈａｅｒｌａ　ｓｐｐ、）リゾクトニア種（Ｒｈｉ
ｚｏｃｔｏｎｅａ　ｓｐｐ、）スフレロチニア種（Ｓｃ
ｌｅｒｏｔｌｎｌａ　ｓｐｐ、）アスコキタ種（Ａｓｃ
ｏｃｈｙｔａ　ｓｐｐ、）カンジダ種（Ｃａｎｄｌｄａ
　ｓｐｐ、）植物全体に関する実験により、サビ菌感染
病〔例えば、プツシニア種（Ｐｕｃｃｆｎｉａ　ｓｐｐ
、））の抑制が可能であることを証明した。

抗菌活性は、下記のような生物に対するインビトロ試験
において見出された： スタフィロコツカス種（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
　ｓｐｐ、）ストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃ
ｏｃｃｕｓ　ｓｐｐ、）無傷のソラマメ及び大麦植物に
関する温室試験において枯草菌株の懸濁液を散布した場
合には、葉がその後にボトリチス・ファバエ（ＢｏＬｒ
ｙＬｉｓｒａｂａｅ）又はプツシニア拳ホルディ（Ｐｕ
ｃｃｉｎｉａ　ｈｏ−ｒｄｅｌ）でそれぞれ接種された
ときに症状の進行を有効に防止した。

抗菌活性は、胞子形成過程と通常関連した栄養制限条件
下で生じる。葉面上の湿潤及び乾燥サイクルが枯草菌の
生育及び胞子形成のサイクルを誘起させた後、抗菌活性
を生じさせるものと予想される。枯草菌の抗菌活性とは
異なり、新しい活性は非常に安定であって、オートクレ
ーブ処理後でも活性を残存させている。

大きな抗菌活性は、単に合成培地上での純粋（アゼニッ
ク）培養産物（アーチファクト）として得られる。しか
しながら、この活性は現実には葉裏面上で最も得られや
すいのである。検出可能な抗菌活性を示さない細菌の若
い培養物（１２〜１８時間）は、感染葉に投与された場
合に病気を有効に抑制した。顕微鏡検査によれば、病原
体はインビトロで観察された場合と同様の偏った増殖性
を示した。

新株について下記のような特徴が留意された８３０℃に
おける試験 胞子形状：楕円形又は円柱形（最大増殖温度５０℃） 明確に膨張した胞子嚢ニー 優勢な胞子位置：中　央 ロッド幅、μｍ１ 細胞内小球体（ａ）− 嫌気的増殖（ａ）（＋）（弱い陽性） ５％ＮａＣ１中での増殖　　　　＋ ７％ＮａＣ１中での増殖　　　　士 ｐＨ５，７グロス中での増殖　　士 グルコースからの酸くｂ）＋ グルコースからのガス（ｂ）− ＶＰ（アセトイン）　　　　　　　十 卵黄寒天透明性　　　　　　　　− カゼイン分解　　　　　　　　　十 ゼラチン分解　　　　　　　　　十 デンプン加水分解　　　　　　　十 ＮＯ−からＮＯ２−への変換　十 エスタリン加水分解　　　　　　十 コゼル（Ｋｏｓｃｒ）のクエン酸　　　十モラー（Ｍｏ
ｌｌｃｒ）のアルギニン ジヒドロラーゼ　　　　　　　− ｖｐブロスのｐＨ５，２ （ａ）グルコース寒天上 （ｂ）ペプトン水糖、アンドレード（Ａｎｄｒａｄｅ）
の指示薬 酸は３０℃において下記炭素源から産生された：グリセ
ロール、Ｌ−アラビノース、リボース、Ｄ−キシロース
、ガラクトース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、
Ｄ−マンノース、イノシトール、マンニトール、ソルビ
トール、α−メチル−Ｄ−グルコシド、Ｎ−アセチルグ
ルコサミン、アミグダリン、アルブチン、サリシン、セ
ロビオース、マルトース、ラクトース、メリビオース、
スクロース、トレハロース、イヌリン、Ｄ−ラフィノー
ス、デンプン、グリコーゲン、β−ゲンチオビオース、
Ｄ−マンノース 本発明は、下記例により、及び例４Ｂの結果を示した添
付図面により説明される。

例１　新株の単離 細菌をサラトン・ボニングトンにおけるノッチンガム農
業大学（Ｎｏｔｔｌｎｇｈａｍ　Ｌ］ｎＩｖｃｒｓ１ｔ
ｙ　ＳｃｈｏｏｌｏｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ）で栽培
されたソラマメ耗作地から単離した。

予備実験では、耕作地から採取された葉において、チョ
コレート斑点病（ボトリチス・ファバエ）の進行度の点
で著しい差異を示した。このことは、葉表面の微生物相
における差異を反映していたのであろう。したがって、
植物病原体に対して有効な拮抗体の単離は、限られた病
気の進行しか示さない葉で行なった。

二葉性の葉を分離し、各対のうち１つの小葉にボトリチ
ス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ　ｃｉｎｅｒｃａ）及
びボトリチス・ファバエを接種した。接種２４時間後、
微生物を病気の程度の低い小葉とは反対のもう１つの小
葉から単離し、抗菌活性について試験した。連続的単離
は、無菌蒸留水５０ｍ１中で３０分間小葉２〜３枚を振
盪した後に行なった。細菌は、閑増殖を抑制するために
ニスタチンを含有した栄養寒天上で洗浄物を培養するこ
とにより単離した。４８〜７２時間のインキュベート後
、個々のコロニーからの細胞をｖ８液寒天プレートの−
面上に線条接種し、３０℃で３日間増殖させた。

寒天の反対側にボトリチス・シネレアのプラグを接Ｆｉ
したところ、インキュベート後抗菌活性はコントロール
との比較による菌増殖阻害領域で示された。かかる抗菌
活性は、後で枯草菌と確認された１種の細菌のいくつか
のコロニーと関連していた。これらコロニーのうちの１
つは、ＪＢ３と命名された。

ＪＢ３の純粋培養物から得られる細菌細胞の連続希釈物
を栄養寒天上で培養した。１〜５０の分離コロニーを有
するプレートを単一細胞培養物の単離用に選択した。全
部で２２個のかかる単離物を得、抗菌活性について試験
した。ボトリチス・シネレアの分生子で接種したｖ８寒
天プレート上への点接種は、個々のコロニーから行なっ
た。

７２時間のインキュベート後、菌増殖阻害領域を測定し
た。１つの単離物（ＪＢ３．６と命名されている）は試
験された他のいずれの単離物よりも非常に大きな阻害領
域を形成しており、これが次の試験で広汎に使用された
。

例２　インビトロ抗菌性バイオアッセイ枯草菌株ＪＢ３
．６及び試験菌の同時接種をポテトデキストロース寒天
プレート上で行なった。

１ｃｍ長の２つの枯草菌線条接種を各プレートの正反対
の側から１ｃｍの箇所で行なった。試験菌の０、　５８
１１１菌糸体プラグを中央においた。コントロールプレ
ートは枯草菌接種をうけなかった。プレートを２５℃で
１２日間までインキュベートした。

菌糸体プラグの中心から直角に枯草菌線条接種箇所まで
至るライン上における各菌コロニーの直径を毎日測定し
た。菌増殖性の低下率は、対応コントロールプレートに
おいて菌が全体を覆うようになった時点、即ちコントロ
ールコロニーの直径が９０＋＋＋ｍになった時点で、試
験コロニーの直径から計算した。結果は第１表に示され
ている。

同様の試験において、枯草菌株ＪＢ３．６の活性は下記
菌類に対しても証明された： ボトリチス・アリイ（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ　ａｌｌｌｌ）
ボトリチス争エリブチ力 （Ｂｏｔｒｙｔｌｓ　ｅｌｌｌｐｔｌｃａ）ボトリチス
・ナルシッシコラ （Ｂｏｔｒｙｔｉｓ　ｎａｒｃｌｓｓｌｃｏｌａ）ボト
リチス参ツリバエ（Ｂｏｔｒｙｔｌｓ　ｔｕｌｉｐａｅ
）アスコクチア・ファバエ（Ａｓｃｏｃｈｔｙａ　ｆａ
ｂａｃ）クラドスポリウム・ヘルバルム （Ｃｌａｄ’ｏｓｐｏｒｉｕｍ　　ｈｅｒｂａｒｕｓ）
サツカロマイセス・セレビシアエ （Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｌｓｉａｅ
）カンジダ−アルビカンス（Ｃａｎｄｌｄａ　ａｌｂｌ
ｃａｎｓ）例３　インビトロ抗菌性バイオアッセイ栄養
寒天プレートに試験細菌を接種し、かつ枯草菌株ＪＢ３
．６を°線条接種した。プレートを３０℃で２４時間イ
ンキュベートし、枯草菌線条接種箇所周囲における阻害
領域の存否を記録した。

枯草菌は、下記細菌に対して試験された場合に阻害領域
を形成した： スタフィロコッカス・アウレウス （Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｅｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）スト
レプトコッカス・ラクチス （Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　Ｉａｃｔｉｓ）ストレ
プトコッカス・アガラクチアエ （Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ａｇａｌａｃｔｌａｅ
）ミクロコツカスφルテウス （Ｍｌｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　１ｕｔｃｕｓ）ミクロコツ
カス・ロセウム （Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｒｏｓｅｕｓ）バチルス・
メガｒリウム （Ｂａｃｌｌｌｕｓ　ｓｅｇａｔｅｒｉｕｍ）バートＡ ４つの同様の耕作地（ＩＸ２ｍ）に１ｍのガードの列を
設けて各々の処理のために用いた。下記処理が行なわれ
た。

Ａ、植物は、コントロールとして、０回目において、栄
養液中で混合されたボトリチス・ファバ工の単離胞子懸
濁液（胞子１０５ｍ１−１）を散布することにより接種
された。

Ｂ、植物は、０回目において、ボトリチスφファバエ及
び枯草菌細胞（ＪＢ３゜６）（１８時間培養物）の懸濁
液で接種された。

Ｃ９植物は、７日目において、Ｂの後に枯草菌細胞（１
８時間培養物）の再度の散布によって接種された。

Ｄ、植物は、０回目において、ボトリチス・ファバエ及
び枯草菌細胞（７２時間培養物）の懸濁液で接種された
。

Ｅ、植物は、７日目において、Ｄの後に枯草菌細胞（７
２時間培養物）の再度の散布によって接種された。

実験はランダムなブロックとして考えられた。

接種前に５本の植物を各処理ブロック内からランダムに
選択し、標識をつけた。病気の評価は、葉３〜５におい
て褐色／黒色に変化した葉の面積を測定することによっ
て、これらの植物に関して行なった。次いで、病気率％
の平均値を評価した。

９の操作は、耕作地全体についてやや主観的な評点を与
えるよりも正確であると考えられた。第２表に示した結
果が得られた。

これらの結果は、有意差のある抑制レベルが２日目まで
に達成され、枯草菌の１８時間又は７２時間培養物を用
いた実験の１４日間にわたり維持されたことを示してい
る。記録は、多数のコントロール地の葉が病気率１００
％に達して枯れた１４日０後に止めた。しかしながら、
この期間後に行なわれた観察では、数週間にわたり枯草
菌で処理された地区において更に病気の進行を示さなか
った。４０目までに、７２時間細菌培養物は、抗生物質
の産生が生じる前に限定的感染を起こした１８時間培養
物よりも有効に抑制した。接種された組織の顕微鏡検査
では、菌経管の典型的湾曲を示していた。７日目の枯草
菌による２回目の散布では抑制上で有意の改善を示さな
かったが、これはおそらくこの段階前において病原体が
死滅していたことを反映しているのであろう。

パートＢ ポリテン（ｐｏｌｙｔｈｃｎｃ）製トンネル内でのボト
リチス感染抑制に関する枯草菌３．６の効力を更に下記
のようにして試験した。頭上噴霧潅水系を病気の進行に
とって非常に適した環境を設定するために取付け、しか
もポリトンネル内で生じうる倒伏問題を少なくさせるた
めにツルナシインゲン変種を用いた。４つの同様の耕作
地を各処理のために用いた。生物学的抑制剤の適用時期
について試験した。枯草菌３．６は、ボトリチス−７ア
バエ胞子懸濁液の適用の３０前、同時及び７日後に耕作
地に適用した。７日目までに病気が症状を進行させ始め
た。更に行なった処理では、細菌生存数をモニターする
ために枯草菌Ｒ１のリファンピシン耐性株（例７参照）
を用いた。生物学的抑制に関するデータは、接種後の時
間に対する感染率の図である香付図面中に示されている
。平均病気評点は、同様の４つの耕作地の各々でランダ
ムに選択された１０本の植物において感染した４番目の
葉の面積を表わしている。優れた抑制効果は、細菌が事
前に予防的に及び病原体と同時に適用された場合に得ら
れた。抑制剤は、感染後に適用された場合であっても著
しい病気抑制効果を有していた。抑制は、コントロール
地の多数のか（枯れた実験３６日目までの期間中維持さ
れた。

例５　トマトのクラドスポリウム・フルブム感染の抑制 ４週令のトマト苗木に枯草菌ＪＢ３．６の存在又は非存
在下で腐菓病原体を接種した。植物にバチルス７２時間
培養物を散布し、乾燥させ、しかる後タラトスボリウム
（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ）胞子懸濁液を散布した。

透明ポリテン袋で４８時間囲った後、植物を温室中で３
週間栽培した。感染した葉面積率は葉１〜３に関して調
べ、得られたデータは第３表に示されている。枯草菌は
、実験が生物学的抑制剤にとって不利な条件下で行なわ
れた場合であっても感染を抑制したことは明らかである
。

例えば、このクラドスポリウムに関する接種操作では植
物全体への反復散布を必要とするため、抑制剤の洗浄除
去の可能性が考慮されねばならない。

更には、この閑の極端な半バイオトロピズム性のために
、病気の症状が現われるまでに長時間を要する。

第３表 トマトのクラドスポリウム・フルブム感染の進行におけ
る枯草菌ＪＢ３，６の効果 葉Ｎｏ、　　　面積率８ コントロール　　＋枯草菌ＪＢ３．６ １　　　　２６、８　　　　　　５．　７２　　　　　
５、　９　　　　　　２．　１３　　　　　０、４　　
　　　　０．　１ａ−植物１５例の平均 例６　エントウのアスコキタ伊ビシ感染の抑紳３週令の
エントウ植物に斑点病原菌アスコキタφビシ（Ａｓｃｏ
ｃｈｙｔａ　ｐｌｓｌ）を散布接種した。全体の半分は
、枯草菌ＪＢ３．６の７２時間培養物の同時接種をうけ
た。１０日間の栽培後に感染率を葉１〜５及び茎で調べ
たが、得られたデータ（第４表）は病気率の明らかな低
下を示している。抑制はより若い葉及び茎において最も
強かった。処理をうけた植物はかなり大きくなりがちで
あったが、これはおそらく茎全体でほとんど病変のなか
ったことを反映しているのであろう。エントウ植物には
極端な非湿潤性があることから、これらの発見は得に重
要である。

第４表 エントウのアスコキタ争ビシ感染の進行における枯草菌
ＪＢ３．６の効果 葉Ｎｏ、　　　面積率３ コントロール　　＋枯草菌ＪＢ３．６ １　　　　１００．０　　　　　９２．３２　　　　１
００、　０　　　　　８７．７３　　　　　９８、　３
　　　　　２６．　９４　　　　　７５．８　　　　　
１８．５５　　　　　３６、７　　　　　　２．７茎　
　　　　　　２８．３　　　　　　　　０．　９ａ−植
物３６例の平均 例７　小麦のティク−オール（立枯病）の抑制ガウエマ
ンノマイセス・グラミニス（Ｇａｕｃｍａｎ−ｎｏｌｌ
ｙｃｅｓ　ｇｒａｍｌｎｉｓ）により生じる小麦のティ
ク−オール（ｔａｋｅ−ａｌｌ）　　（立枯病）に関す
る予備実験を行なった。枯草菌Ｒ１（枯草菌３．６由来
リファンピシン耐性株）は、土壌中での拮抗剤の残留性
に関する将来の実験を行なえるように、これらの実験で
用いた。最初の生物学的抑制に関する小規模実験では、
約５×１０７Ｃｆｕ／種子で被覆した小麦種子を用いた
。被覆種子及び未処理種子を、オート麦粒上で増殖させ
たガウェマンノマイセスを配合した配合土にまいた。４
週間のインキュベート後、植物を破壊して根及び茎のテ
ィク−オール感染について調べた。得られた結果は第５
表に掲載されており、抑制困難なこの病気に対して有意
の低下率を示している。

リファンピシン耐性株は、リファンピシン５μｇ含有の
オキソイド・マルトディスク（ＯｘｏｌｄＭｕｌ　Ｌｏ
ｄｉｓｃ）を用いて寒天拡散バイオアッセイにより単離
した。枯草菌ＪＢ３．６の２４時間栄養ブロス培養物の
１ｍｌアリコートをマルトディスク含有栄養寒天プレー
ト上に拡散し、乾燥させた。阻害領域で増殖する単一コ
ロニーを選択した。これらの株の１つをＲ１と命名した
。

第５表 小麦のティク−オール（立枯病）の進行における枯草ｉ
Ｒ１の種子適用の効果 植物の率８ 未処理　　　　　　　　　　　　　７７．８８ＤＷｂ洗
浄　　　　　　　　　　６６．７１％メチルセルロース
　　　　　　７７．８２．５％メチルセルロース　　　
　５０．０ＳＤＷ中の枯草菌Ｒ１１６，７ １％メチルセルロース中の　　　　２８．６枯草菌Ｒ１ ２６５％メチルセルロース　　　　１４６３中の枯草菌
Ｒ１ ａ−植物１２例の平均 す−無菌蒸留水 例８　菜種のベロノスボラ感染の抑制 ベロノスポラ（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ）により生じる
べと病感染は、バイオトロピズム性菌病の一例である。

それ自体では、この病原体に対するインビトロパイオア
、ツセイを行なうことができない。したがって、予備実
験では、枯草菌ＪＢ３．６の適用による菜種の病気率を
低下させうる可否について試験するために行なった。子
葉にベロノスボラの胞子嚢を散布し、枯草菌の７２時間
培養物の同時適用を全体の半分について行なった。植物
を５日間透明プラスチック製培養器中でインキュベート
し、感染した子葉の面積率を調べた。病気率は、拮抗剤
によってコントロールの半分以下に低下した。

菜種上のベロノスボラはさして重要ではない病原体であ
る。しかしながら、他のべと病（例えば、ブドウのつる
）並びに非常に類似したフィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈ
ｔｈｏｒａ）及びピチウム（ＰＦｔｈｉｕａ＋）は、現
存の方法で調整することが困難であることから、深刻な
経済的損害を与える。

例９　穀物のウドノコ病の抑制 穀物におけるウドノコ病〔エリシフエ・グラミニス（Ｅ
ｒｙｓｌｐｈｅ　ｇｒａｍｌｎｌｓ））は、おそらく英
国において最も大きな経済的損害を与える病気であろう
。広域植物育生計画及び化学的制御方法があるにもかか
わらず、これらの高度に分化した病原体はなおも甚大な
損害を与えている。それらのバイオトロピズム性はイン
ビトロバイオアッセイの実施を妨げている。小麦のウド
ノコ病抑制に関する温室試験が行なわれた。小麦植物に
対する枯草菌ＪＢ３．６の７２時間培養物の適用は、ウ
ドンコ病菌接種直前に３回の散布によって行なった。植
物を接種後１４日１に調べたところ、結果（第６表）は
枯草菌の適用が葉における病気症状を有意に減少させた
ことを示している。

第６表 小麦のウドノコ病感染の進行におけ る枯草菌ＪＢ３．６の効果 葉Ｎｏ、　　　面積率 コントロール　　士枯草菌ＪＢ３．６ １、　　　５１，０　　　　　　１６．６２　　　　３
２．８　　　　　　　８．８穀物病の生物学的抑制に関
する問題は、細菌培養物が穀物葉を効果的に湿潤させる
ことができずかつ抑制剤の表面流出が生じうろことであ
る。このことは結果の再現性に関する問題まで発展しう
る。我々は、これらの問題が界面活性剤のような°ステ
ィッカー（ｓｔｌｃｋｅｒ）”化合物を細菌培養物に加
えることによって克服されうることを明らかにした。こ
れらの化合物は葉からの抑制剤の流出を防止することが
できる。１種のかかる化合物エチランＣＤ１０７を用い
て得られた結果は第７表に示されている。温室試験にお
いて、小麦植物に枯草菌ＪＢ３．６の７２時間培養物を
ウドンコ病菌接種直前に散布した。数本の植物に０．１
％エチランＣＤ１０７含有培養物を散布した。植物を接
種後１０日０に調べたところ、その結果はエチランＣＤ
１０７の添加が病気の抑制を有意に改善したことを示し
ている。

第７表 枯草菌ＪＢ３．６による小麦ウドノコ病感染参考文献 ブロープント拳ビー（Ｂｒｏａｄｅｎｔ　Ｐ）　、ベー
カー・ケー・エフ（Ｂａｋｅｒ　Ｋ、Ｆ、）　、ウォー
ターワース・ワイ（Ｗａｔｅｒｗｏ、ｒｔｈ　Ｙ、）、
１９７１年、オーストラリア土壌中の根病原菌に拮抗す
る細菌及びアクチノマイセテス、オーストラリアンψジ
ャーナル・オブφバイオロジカル会サイエンス （Ａｕｓｔｒａｌｌａｎ　Ｊｏｕｒｎｏｌ　ｏｆ　Ｉｌ
ｌｌｏｌｏｇｔＣａｌ　５ｃｉｅｎｃｅ）、第２４巻、
第９２５−９４４頁； チャン・アイ・ピー（Ｃｈａｎｇ、１．Ｐ、）　、コン
メダール・チー（Ｃｏｍｍｅｄａｈｌ　Ｔ、）　、１９
６８年、穀粒を拮抗性微生物で被覆することによるトウ
モロコシ苗胴枯れ病の生物学的抑制、フィトパソロジー
（Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ）　、第５８巻、第１
３９５−１４０１頁； オルセン壷シー・エム（ＯＩｓｅｎ、Ｃ，Ｍ、）、１９
６４年、土壌中のりジフトニア・ソラニ（Ｒｈｌｚｏｃ
ｔｏｎｌａ　５ｏｌａｎｌ）に関する微生物の拮抗作用
、博士論文、カリフォルニア・バークレー大学、第１５
２頁； オルセン―シー参エム、ベーカー〇ケー・エフ、１９６
８年、土壌の選択的熱処理及び枯草菌によるリゾクトニ
ア・ソラニの阻害に関するその効果、フィトパソロジー
、第５８巻、第７９−８７頁；スウィンバーン・チー参
アール（Ｓｗｌｎｂｕｒｎｅ、Ｔ。

Ｒ）、１９７３年、ネクトリア・ガリゲナ（Ｎｅｃｔｒ
−Ｉａ　ｇａｌｌｌｇｅｎａ）感染によるリンゴ菓痕の
微生物相、トランザクションズ・オブ・ザ・ブリティッ
シュ０ミコロジカル０ソサエテ−（ＴｒａｎｓａｃＬｌ
ｏｎｓ　ｏｒｔｈｅ　Ｂｒ１ｔｉｓｈ　Ｍｙｃｏｌｏｇ
ｌｃａｌ　５ｏｃｉｅｔｙ）、第６０巻、第３８９−４
０３頁；

【図面の簡単な説明】

図は、ボトリチス・ファバエが接種された豆類に枯草菌
を散布した場合の経時的な葉の感染率について示してい
る。 出願人代理人　　佐　　藤　　−雄 手続打口正書（方式） ％式％ ２、発明の名称 抗菌活性を有する微生物菌株 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 アグリカルチュラル、ジエネティックス、カンパニー、
リミテッド ４、代　理　人（郵便番号１００） 昭和６３年３月３１日 （発送日　昭和６３年４月２６日） ６、補正の対象

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、枯草菌株ＪＢ３（そのサンプルは、ナショナル・コ
   レクションズ・オブ・インダストリアル・バクテリア・
   リミテッド（ＮＣＩＢ）に１９８６年１２月２２日付で
   受託番号ＮＣＩＢ１２３７５として寄託された）又は抗
   菌活性をもつその誘導体もしくは変異体。 ２、枯草菌株ＪＢ３．６（そのサンプルは、ＮＣＩＢに
   １９８６年１２月２２日付で受託番号ＮＣＩＢ１２３７
   ６として寄託された）又は抗菌活性をもつその誘導体も
   しくは変異体。 ３、枯草菌株Ｒ１（そのサンプルは、 ＮＣＩＢに１９８７年１２月２４日付で受託番号ＮＣＩ
   Ｂ１２６１６として寄託された）又は抗菌活性をもつそ
   の誘導体もしくは変異体。 ４、枯草菌株ＪＢ３、ＪＢ３．６もしくはＲ１又はそれ
   らの誘導体もしくは変異体、あるいはかかる株類のいず
   れかから単離された抗菌物質、並びにそれらのための担
   体又は希釈剤を含んでなる抗菌剤組成物。 ５、ゴム質又は界面活性剤を更に含有する、特許請求の
   範囲第４項記載の組成物。 ６、微生物感染又は微生物汚染の抑制のために使用され
   る、特許請求の範囲第１項〜第５項のうちいずれか一項
   に記載の枯草菌株又は抗菌剤組成物。 ７、植物又はそれらの環境に、枯草菌株ＪＢ３、ＪＢ３
   ．６もしくはＲ１又は抗菌活性をもつそれらの誘導体も
   しくは変異体、あるいは特許請求の範囲第４項又は第５
   項に記載の抗菌剤組成物を適用することからなる、植物
   における微生物感染の抑制方法。