KR102535211B1 - 밤꿀 추출물 및 양배추즙을 포함하는 위장관 보호용 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents

밤꿀 추출물 및 양배추즙을 포함하는 위장관 보호용 조성물 및 이의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 밤꿀 추출물 및 양배추즙을 포함하는 위장관 보호용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 키누렌산(kynurenic acid)의 함량이 증가된 밤꿀 추출물 또는 이의 분획물과 양배추즙을 혼합하여 위장관 보호효과가 개선된 위장관 보호용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

Description

밤꿀 추출물 및 양배추즙을 포함하는 위장관 보호용 조성물 및 이의 제조방법{Composition for gastrointestinal protection comprising chestnut honey extract and cabbage juice and manufacturing method thereof}
본 발명은 밤꿀 추출물 및 양배추즙을 포함하는 위장관 보호용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
밤꿀(chestnut honey)은 밤나무의 꽃으로부터 얻어진 꿀로서, 주로 호남, 영남, 경기지방에서 밤꽃이 피는 6월~7월쯤 많이 채취된다. 일반 잡꿀이나 아카시아꿀에 비해 색이 진하고, 향이 강하며, 약간 쓴맛이 나는 것이 특징이다. 밤꿀은 짙은 갈색이나 검은색을 띠는데, 일반적으로 짙은 색의 꿀은 페놀 및 플라보노이드 함량이 높아 항균 및 항산화 활성이 우수하다고 알려져 있다. 밤꿀은 기침과 가래 증상을 완화시켜 기관지 건강에 도움을 주어 감기 예방에도 좋으며, 항균작용이 있어 식중독을 예방하고, 헬리코박터 파일로리균의 억제 작용을 통해 만성 위염과 위궤양 증상의 개선 및 예방에 도움을 준다. 또한, 칼륨과 철분 등이 많이 함유되어 있어 위와 간을 좋게 하는 효과가 있으며, 면역력 강화에 효과가 좋은 플라보노이드가 풍부한데, 페놀과 플라보노이드 같은 항산화, 항균 물질이 아카시아꿀보다 10배 정도 많다고 알려져 있다. 플라보노이드는 식물이 병원체에 대한 방어와 자외선 차단의 보호를 위해 만들어내는 성분으로, 강력한 항산화 효과가 있어 건강기능식품의 원료로 많이 사용된다. 플라보노이드는 항산화, 항암 효과로 인해 당뇨와 비만 같은 성인병이나 알츠하이머, 치매와 같은 뇌질환, 심장병 및 암에도 탁월한 효능이 있는 것으로 알려져 있다. 또한, 밤꿀은 피부노화와 미용에 도움이 되는 단백질, 미네랄, 비타민, 강력한 항산화 물질이 다량 함유되어 있으며, 미네랄과 비타민이 풍부하여 숙취해소나 만성피로에도 도움을 준다.
또한, 밤꿀은 위점막 보호효과에 대해 보고된 바 있으며, 그 기전에 대해서는 알려져 있지 않다. 밤꿀에 함유된 알칼로이드는 약 16종 이상인 것으로 알려져 있으며, 그 중 키누렌산(kynurenic acid)은 밤꿀의 주요 특이 성분으로, 위장관 보호효과가 있다고 보고된 바 있다.
한편, 양배추는 지중해 연안과 소아시아가 원산지인 쌍떡잎식물 양귀비목 겨자과의 한해살이풀로, 전 세계에서 재배되며, 양배추의 비타민 U는 특히 위염, 위궤양 등 위장병에 특효가 있다고 알려져 있다. 양배추에는 수분 93.3%, 탄수화물 5.6%, 총 식이섬유 1.4%, 단백질 0.6%, 지방 0.1% 등이 함유되어 있으며, 탄수화물의 경우 프락토스 2.1%, 글루코스 1.8%, 수크로스 0.5% 등이 함유되어 양배추의 감미를 나타낸다. 또한, 양배추에는 혈액을 응고시키는 비타민 K와 각종 비타민, 변비에 좋은 식이섬유가 많이 들어있어 장운동을 활발히 하는 효과가 있으며, 양배추에 함유된 글루코시놀레이트(glucosinolate)는 암 예방, 면역기능 활성화, 항산화 효능 증가 등의 활성을 나타내고, S-메틸메티오닌(S-metylmethionine)은 항염증, 통증억제, 지방축적 억제 등의 효능이 보고되었다.
한국건강기능식품협회에 따르면 2019년 국내 건강기능식품 시장 규모는 4조 6천억원을 넘어섰으며, 연평균 7% 수준의 성장세를 보이고 있다. 최근 바쁜 현대인들의 생활패턴을 고려한 건강음료의 선호도가 높아지고 있으며, 채소를 주재료로 하는 다양한 건강음료의 소비가 꾸준히 증가하고 있다. 이에 본 발명자는 위장관 보호효과를 강화시킨 밤꿀 추출물 및 양배추즙을 포함하는 조성물을 개발하였다.
H. Sahin, Protective effects of aqueous extracts of some honeys against HCl/ethanol-induced gastric ulceration in rats, J. Food biochem., 2019, 43(12):e13054. G B Alavin, Kynurenic acid protects against gastroduodenal ulceration in mice injected with extracts from poisonous Atlantic shellfish, Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry., 1989, 13(3-4):569-72.
본 발명은 위장관 보호효과가 증진된 조성물 및 이의 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 밤꿀 추출물 및 양배추즙을 포함하는 위장관 보호용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 다른 측면에서 본 발명은 밤꿀 추출물 및 양배추즙을 포함하는 위장관 보호용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 다른 측면에서 본 발명은 1) 밤꿀 추출물을 제조하는 단계; 2) 밤꿀 추출물을 동결건조하는 단계; 3) 양배추를 세척 및 절단하는 단계; 4) 양배추를 물 중탕하는 단계; 5) 양배추 중탕액을 살균처리하는 단계; 6) 양배추 중탕액을 여과하여 양배추즙을 제조하는 단계; 및 7) 상기 밤꿀 추출물 및 상기 양배추즙을 혼합하는 단계;를 포함하는 위장관 보호용 조성물의 제조방법을 제공한다.
상기 밤꿀 추출물 및 양배추즙은 1:9 내지 9:1의 중량비로 혼합된다.
상기 밤꿀 추출물은 물 또는 C1~C4의 알킬 알코올 추출물이다.
상기 밤꿀 추출물은 20배수의 10% 에탄올로 6시간 동안 추출한 추출물이다.
상기 밤꿀 추출물은 키누렌산(kynurenic acid)을 함유한다.
본 발명에 따른 밤꿀 추출물 및 양배추즙을 포함하는 조성물은 밤꿀의 기능성 성분이 강화된 밤꿀 추출물 또는 이의 분획물과 양배추즙을 유효성분으로 포함함으로써 단일 성분일 때보다 우수한 위장관 보호효과를 구현할 수 있으며, 양배추즙에 밤꿀 추출물을 추가함으로써 맛과 향을 개선하고 기호도를 증가시켜 거부감 없이 누구나 용이하게 섭취할 수 있다.
또한, 밤꿀 성분을 함유함으로써 양봉산업의 고부가가치 확대에 기여할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 위장관 손상 모델에서의 위장관 보호효과 분석 결과를 나타낸다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 위 손상 모델에서의 위 조직의 헤마톡실린(Hematoxylin) & 에오신(Eosin) (H&E) 염색(×100) 사진을 나타낸 것이다. (A) 정상군(normal), (B) vehicle, (C) 스티렌정 투여군, (D) 밤꿀 투여군, (E) 밤꿀 추출물 투여군, (F) 양배추즙 투여군, (G) 양배추즙 및 밤꿀 혼합 투여군, (H) 양배추즙 및 밤꿀 추출물 혼합 투여군.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 염증 억제 효과 분석 결과를 나타낸다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 급성 위손상 Sprague-Dawley Rat 모델에서의 위 손상면적 분석 결과를 나타낸다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 급성 위손상 Sprague-Dawley Rat 모델에서의 위 손상면적 사진을 나타낸다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 급성 위손상 Sprague-Dawley Rat 모델에서의 조직병리학적 검사 결과를 나타낸다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 급성 위손상 Sprague-Dawley Rat 모델에서의 위 조직 사진을 나타낸다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명은 밤꿀 추출물 및 양배추즙을 포함하는 위장관 보호용 약학 조성물을 제공한다.
상기 밤꿀 추출물 및 양배추즙은 1:9 내지 9:1의 중량비로 혼합되는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 1:1 또는 9:1의 중량비로 혼합되는 것일 수 있다.
상기 밤꿀 추출물은 물 또는 C1~C4의 알킬 알코올 추출물일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 바람직하게는 에탄올 추출물일 수 있고, 더욱 바람직하게는 10% 내지 30% 에탄올 추출물일 수 있으며, 더욱 더 바람직하게는 10% 에탄올 추출물일 수 있다.
상기 밤꿀 추출물은 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들의 조정제물 또는 정제물 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 추출방법은 특별히 제한되지 않으며, 유효성분이 파괴되지 않거나 최소화된 조건에서 실온 또는 가온하여 추출할 수 있다.
상기 밤꿀 추출물의 추출시간은 1시간 내지 24시간일 수 있고, 바람직하게는 1시간 내지 12시간, 더욱 바람직하게는 2시간 내지 8시간일 수 있다. 추출 시간이 1시간 미만일 경우 추출물의 활성이 저하되어 효능이 떨어질 수 있으며, 24시간을 초과하는 경우 추출시간에 비해 추출물의 활성 증가 효과가 미미하고, 추출 효율이 떨어져 경제적이지 않을 수 있다.
상기 밤꿀 추출물은 상기 밤꿀 중량 대비 5배 내지 30배 중량비의 용매를 가하여 추출될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 바람직하게는 10배 내지 20배 중량비일 수 있다.
일 예로, 상기 밤꿀 추출물은 20배수의 10% 에탄올로 6시간 동안 추출한 추출물일 수 있다.
상기 밤꿀 추출물은 키누렌산(kynurenic acid)을 함유한다.
상기 양배추즙은 양배추를 물 중탕한 후 여과하여 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 통상의 식물 착즙액의 제조방법에 따라 제조될 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어 "위장관"은 위장(stomach) 및 장(intestine)을 포함하며, 섭취된 음식물을 흡수 가능한 작은 입자로 분해하여 혈액 및 림프로 이동시키는 기능을 갖는 기관을 의미한다.
또한, 본 발명에서 "위장관 보호"는 위장관 질환에 대한 예방, 개선 및 치료 효과를 의미하며, 상기 위장관 질환은 위염, 위궤양, 위장관 출혈, 발작성 위염, 미란성 위염, 출혈성 위염, 담즙 역류성 위염, 만성 표재성 위염, 위축성 위염, 화생성 위염, 비후성 위염, 위점막 손상, 십이지장염, 십이지장궤양, 과민성 대장 증후군, 궤양성 대장염, 크론병, 식후 조기팽만감, 복부팽만감, 상복부통증, 변비, 오심, 구토, 과민성장증후군, 위식도 역류, 위마비, 기능성소화불량, 위궤양 장염, 위암, 장폐색증 또는 기능성 소화불량일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다.
상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 상기 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용할 수 있다. 상세하게는, 제형화할 경우 통상 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제로는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 첨가하여 조제될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제를 포함한다. 비수성 용제 및 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 오일, 에틸올레이트와 같은 주사가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
상기 본 발명의 약학 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있는데, 본 발명의 용어 "약제학적으로 유효한 양"이란 의학적 치료 또는 예방에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 중증도, 약물의 활성, 환자의 연령, 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 사용된 본 발명 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율 치료기간, 사용된 본 발명의 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 단독으로 투여하거나 공지된 위장질환에 대한 치료 및 예방 효과를 나타내는 것으로 알려진 성분과 병용하여 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하다.
또한, 다른 측면에서 본 발명은 밤꿀 추출물 및 양배추즙을 포함하는 위장관 보호용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 상기 건강기능식품 조성물은 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 각종 식품, 건강기능식품, 식품 첨가제 등을 모두 포함하는 의미로 사용된다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 밤꿀 추출물 및 양배추즙의 혼합물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 정제, 캡슐제, 분말, 과립, 액상, 환, 액제, 시럽, 즙, 현탁액, 유제, 또는 점적제 등의 형태로 제조 및 가공할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물은 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄검 등을 포함한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 하나 이상의 성분을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.
상기와 같은 방식으로 제제화된 본 발명의 건강기능식품 조성물은 기능성식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가될 수 있다.
본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 차류, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있다.
또한, 다른 측면에서 본 발명은 1) 밤꿀 추출물을 제조하는 단계; 2) 밤꿀 추출물을 동결건조하는 단계; 3) 양배추를 세척 및 절단하는 단계; 4) 양배추를 물 중탕하는 단계; 5) 양배추 중탕액을 살균처리하는 단계; 6) 양배추 중탕액을 여과하여 양배추즙을 제조하는 단계; 및 7) 상기 밤꿀 추출물 및 상기 양배추즙을 혼합하는 단계;를 포함하는 위장관 보호용 조성물의 제조방법을 제공한다.
상기 밤꿀 추출물은 바람직하게는 20배수의 10% 에탄올로 6시간 동안 추출한 추출물일 수 있다.
본 발명에 따른 밤꿀 추출물 및 양배추즙을 포함하는 위장관 보호용 조성물은 위 손상을 감소시키고, 위장관 보호효과가 더욱 강화된 효과가 있다.
이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지도록, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.
<제조예 1> 밤꿀 추출물 제조
밤꿀 5 g을 환류(reflux) 추출기를 이용하여 추출한 후 동결건조기로 건조하여 밤꿀 추출물을 제조하였으며, 추출 조건은 하기 표 1과 같다.
No. 용매 추출 시간 밤꿀 무게 대비 추출가수량
1 물 3h 10배수
2 물 6h 10배수
3 10% EtOH 3h 10배수
4 10% EtOH 6h 10배수
5 30% EtOH 3h 10배수
6 30% EtOH 6h 10배수
7 물 3h 20배수
8 물 6h 20배수
9 10% EtOH 3h 20배수
10 10% EtOH 6h 20배수
11 30% EtOH 3h 20배수
12 30% EtOH 6h 20배수
<제조예 2> 양배추즙 제조
먼저, 양배추를 잘 다듬어서 선별한 후 세척하였다. 양배추를 절단한 후 양배추와 물을 7:3 중량비로 하여 100℃에서 3시간 동안 중탕하였다. 양배추 중탕액을 100℃에서 90분 동안 살균처리한 후 여과하여 양배추즙을 제조하였다.
<제조예 3> 밤꿀 추출물 및 양배추즙의 혼합물 제조
밤꿀 추출물 및 양배추즙을 각각 1:9, 1:1, 9:1의 중량비로 혼합하여 혼합물을 제조하였다.
<실시예 1> 키누렌산 함량 분석
밤꿀, 밤꿀 동결건조물 및 상기 제조예 1에서 제조한 밤꿀 추출물(No.1 내지 No.12)을 대상으로 키누렌산 함량을 분석하였다.
먼저, 검체 100 mg을 메탄올에 용해하여 100 mg/mL로 조제한 후(100,000 ppm) 초음파 진탕기로 20분간 녹인 후 멤브레인 필터(PVDF, 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 사용하였다.
표준물질인 키누렌산(kynurenic acid; 이하, KA로 약기함) 1.2 mg을 메탄올에 1 mg/mL가 되게 용해한 후 희석하여(250, 125, 62.5, 31.25, 15.625 ppm) 표준원액으로 하고, 초음파 진탕기로 20분간 녹인 후 멤브레인 필터(PVDF, 0.45 μm)로 여과하여 표준용액으로 사용하였다.
키누렌산 함량 분석을 위한 고속액체크로마토그래피(HPLC) 조건은 하기 표 2 및 표 3과 같다.
조건
기기 PerkinElmer Flexar QUATERNARY Pump, Shelton, CT 06484 USAPerkinElmer PDA LC Detector, Shelton, CT 06484 USA
컬럼 YMC Pack Pro C18 column (25 ㎝ × 4.6 ㎜, 5 ㎛)
컬럼 오븐 온도 30℃
주입량 10 ㎕
이동상 Gradient 조건 [water(0.2% TFA) : ACN]
유속 1 ㎖/min
검출기 파장 240 ㎚
TFA : 트리플루오로아세트산(Trifluoroacetic acid)
ACN : 아세토나이트릴(Acetonitrile)
시간(분) 용매
water(%) ACN(%)
0 95 5
10 82 18
20 82 18
30 60 40
35 0 100
40 0 100
45 95 5
55 95 5
키누렌산 함량은 하기와 같이 계산하였다.
키누렌산 함량 (㎎/g) = C × V / W
C : 시험용액 중의 키누렌산 농도 (㎎/㎖), V : 시험용액의 전량 (㎖), W : 시료채취량 (g).
키누렌산 함량 (㎎/㎏)
밤꿀 A(담양) 710.6396
밤꿀 B(함평) 625.6098
아카시아꿀 A 불검출
아카시아꿀 B 불검출
상기 표 4는 밤꿀과 아카시아꿀에서의 키누렌산 함량 분석 결과를 나타낸 것으로, 키누렌산은 아카시아꿀에서는 검출되지 않았으며, 밤꿀에서만 특이하게 검출되는 물질임을 확인할 수 있었다.
키누렌산 함량 (㎎/g)
밤꿀 0.77±0.08
밤꿀 동결건조물 0.76±0.09
밤꿀
추출물		 No.1 0.82±0.07
No.2 0.88±0.01
No.3 0.87±0.04
No.4 0.89±0.02
No.5 0.86±0.01
No.6 0.85±0.02
No.7 0.86±0.03
No.8 0.84±0.07
No.9 0.84±0.01
No.10 0.93±0.03
No.11 0.89±0.03
No.12 0.90±0.03
상기 표 5는 키누렌산 함량 분석 결과를 나타낸 것으로, 20배수의 10% 에탄올로 6시간 동안 추출한 샘플 No.10의 키누렌산 함량이 0.93±0.03 ㎎/g으로 가장 높은 것을 확인하였다.
<실시예 2> 키누렌산 함량에 따른 위장관 보호효과 분석
1. 시험군 구성
인도메타신(Indomethacin) 투여에 의한 급성 위손상 Sprague-Dawley Rat 모델에서 키누렌산 함량에 따른 위장관 보호효과를 분석하기 위해 하기 표 6과 같이 시험군을 구성하였다.
군 성별 위손상 유발여부 시험물질 투여량(g/㎏)
F1 M N - -
F2 M Y - -
F3 M Y 스티렌정 100(㎎)
F4 M Y 밤꿀 1.5
F5 M Y 밤꿀 추출물 1.5
F6 M Y 양배추즙 13.5
F7 M Y 양배추즙 + 밤꿀 13.5 + 1.5
F8 M Y 양배추즙 + 밤꿀 추출물 13.5 + 1.5
2. 시험물질 조제
시험물질의 경우, 적량을 칭량한 후 부형제에 희석하여 사용하였다. 위 손상 유발물질인 인도메타신(Indomethacin)의 경우, 탄산수소나트륨 주사액(8.4%)을 멸균주사용수를 이용하여 5%로 희석한 후 적량을 칭량하여 희석된 부형제에 넣고 약 15분 이상 vortex하여 용해시켰다.
3. 시험방법
시험물질 투여 48시간 전부터 모든 동물을 절식한 다음, 투여 당일 측정한 체중을 기준으로 15 mL/kg으로 산출하여 각각의 시험물질을 단회 경구투여하였다. 시험물질 투여 30분째에 미리 조제해 놓은 Indomethacin을 80 mg/kg의 용량으로 경구투여하였다. 경구투여시 동물을 경배부 피부 고정법으로 고정하고, 경구투여용 존데를 이용하여 위 내에 직접 투여하였다. Indomethacin 투여 5시간째에 디에틸 에테르(Diethyl ether)로 마취한 후, 위를 적출하여 위 점막면을 디지털카메라로 촬영하였다.
4. 관찰 및 검사항목
(1) 위 손상 병변 사진 촬영 및 면적 분석
디지털카메라로 촬영한 병변 발생 위 점막면에서 손상된 부위의 면적을 ImageJ software (NIH, Bethesda, MD)를 이용하여 분석하고, 위 손상 억제율을 산출하였다.
(2) 조직병리학적 검사
고정된 조직은 삭정, 탈수, 파라핀 포매, 박절 등 일반적인 조직처리 과정을 거쳐 조직병리학적 검사를 위한 검체를 제작한 뒤, Hematoxylin & Eosin (H&E) 염색을 실시하고, 광학 현미경(Olympus BX53, Japan)을 이용하여 조직병리학적 변화를 관찰하였다.
(3) ELISA 분석
적출한 위는 사진 촬영 후 ELISA 분석 전까지 -70℃ 이하로 설정되어 있는 초저온 냉동고에 보관하였다. ELISA 분석은 MPO 항목에 대하여 분석을 수행하였다.
(4) 통계학적 분석
본 실험의 결과에 대하여 자료의 정규성을 가정하고, 모수적인 다중비교(parametric multiple comparison procedures)를 이용하여 분석하며, 모수적 일원분산분석(One-way ANOVA) 결과가 유의하였을 경우, Dunnett's multiple comparison test를 이용하여 사후검정을 실시하였다. 통계학적 분석은 Prism 7.04 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA)을 이용하여 실시하였으며, p값이 0.05 미만일 경우, 통계학적으로 유의한 것으로 판정하였다.
5. 시험결과
도 1을 참조하면, 키누렌산의 함량이 약 20% 증가한 밤꿀 추출물은 같은 용량의 밤꿀에 비해 위장관 보호효과가 유의하게 크게 나타나지 않았다. 한편, 밤꿀 또는 양배추즙을 각각 단독 투여했을 때보다 밤꿀과 양배추즙을 혼합하거나, 또는 키누렌산을 포함하는 밤꿀 추출물과 양배추즙의 혼합한 경우 뛰어난 위장관 보호효과를 나타냄을 알 수 있었다.
도 2를 참조하면, 정상군(A)에 비해 인도메타신(Indomethacin)으로 위 손상을 유발한 모델(B)은 위점막 상피세포가 많이 파괴된 것을 볼 수 있었다. 밤꿀 단독 투여군(D), 밤꿀 추출물 단독 투여군(E) 또는 양배추즙 단톡 투여군(F)에 비해 양배추즙과 밤꿀 혼합 투여군(G)과 양배추즙과 밤꿀 추출물 혼합 투여군(H)의 경우 스티렌정 투여군(C)이나 정상군(A)의 위장 상피세포 형상과 유사함을 볼 수 있었다. 이를 통해 밤꿀 또는 양배추즙 단독 투여가 아닌 밤꿀 또는 밤꿀 추출물과 양배추즙의 혼합에 의해서 위장상피 세포에 보호효과가 있음 알 수 있다.
도 3을 참조하면, 염증반응에 의해서 나타나는 미에로페록시다제(myeloperoxidase; MPO)에 대하여 밤꿀 또는 양배추즙을 각각 투여했을 때보다 밤꿀과 양배추즙을 혼합하거나, 또는 키누렌산을 포함하는 밤꿀 추출물과 양배추즙을 혼합한 경우 뛰어난 염증 억제 효과를 나타냄을 알 수 있다.
<실시예 3> 밤꿀 추출물 및 양배추즙의 혼합비에 따른 위장관 보호효과 분석
1. 시험군 구성
인도메타신(Indomethacin) 투여에 의한 급성 위손상 Sprague-Dawley Rat 모델에서 시험물질의 위장관 보호효과를 분석하기 위해 하기 표 7과 같이 시험군을 구성하였다.
군 성별 위손상 유발여부 시험물질 투여량(g/㎏)
G1 M N - -
G2 M Y - -
G3 M Y 스티렌정 100(mg)
G4 M Y 양배추즙 4.5
G5 M Y 밤꿀 추출물 0.5
G6 M Y 양배추즙 + 밤꿀 추출물 4.5 + 0.5
G7 M Y 양배추즙 + 밤꿀 추출물 2.5 + 2.5
G8 M Y 양배추즙 + 밤꿀 추출물 0.5 + 4.5
2. 시험물질 조제
스티렌정의 경우, 100 mg을 칭량한 후 부형제에 희석하여 사용하였다. 양배추즙과 밤꿀 추출물 혼합군인 G6 내지 G8은 상기 표 7에 따른 농도로 사용하였다. 위 손상 유발물질인 Indomethacin의 경우, 탄산수소나트륨 주사액(8.4%)을 멸균주사용수를 이용하여 5%로 희석한 후 적량 칭량하여 희석된 부형제에 넣고 약 15분 이상 vortex하여 용해시켰다.
3. 시험방법
시험물질 투여 48시간 전부터 모든 동물을 절식한 다음, 투여 당일 측정한 체중을 기준으로 5 mL/kg으로 산출하여 각각의 시험물질을 단회 경구투여하였다. 시험물질 투여 30분째에 미리 조제해 놓은 Indomethacin을 80 mg/kg의 용량으로 경구투여하였다. 투여시 동물을 경배부 피부 고정법으로 고정하고, 경구투여용 존데를 이용하여 위 내에 직접 투여하였다.
4. 관찰 및 검사항목
(1) 위 손상 병변 사진 촬영 및 면적 분석
Indomethacin 투여 5시간째에 디에틸 에테르(Diethyl ether)로 마취한 후, 위를 적출하여 위 점막면을 디지털카메라로 촬영하였다. 디지털카메라로 촬영한 병변 발생 위 점막면에서 손상된 부위의 면적을 ImageJ software (NIH, Bethesda, MD)를 이용하여 분석하고, 위 손상 억제율을 산출하였다.
(2) 조직병리학적 검사
고정된 조직은 삭정, 탈수, 파라핀 포매, 박절 등 일반적인 조직처리 과정을 거쳐 조직병리학적 검사를 위한 검체를 제작한 뒤, Hematoxylin & Eosin (H&E) 염색을 실시하고, 광학 현미경 (Olympus BX53, Japan)을 이용하여 조직병리학적 변화를 관찰하였다.
(3) 통계학적 분석
본 시험의 결과에 대하여 모수적인 다중비교(parametric multiple comparison procedures) 혹은 비모수적인 다중비교(non-parametric multiple comparison procedures)를 사용하였다. 모수적인 다중비교의 경우, 자료의 정규성을 가정하고, 모수적 일원분산분석(One-way ANOVA)으로 검정하였으며, 그 결과가 유의할 경우, Dunnett’s multiple comparison test를 이용하여 사후검정을 실시하여 시험군간 유의한 차이를 분석하였다. 비모수적인 다중비교의 경우, Kruskal-Wallis’H-test로 검정하여, 그 결과가 유의할 경우 사후분석인 Mann Whitney U test를 이용하여 시험군간 유의한 차이를 분석하였다. 통계학적 분석은 Prism 7.04 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA)을 이용하여 실시하였으며, p값이 0.05 미만일 경우, 통계학적으로 유의한 것으로 판정하였다.
5. 시험결과
위 손상 면적 분석 결과(하기 표 8, 도 4 및 도 5), Indomethacin을 80 mg/kg의 용량으로 경구 투여한 유발대조군(G2), 양배추즙 단독 투여군(G4) 및 밤꿀 추출물 단독 투여군(G5)의 손상면적 수준은 정상대조군(G1) 대비 통계학적으로 유의하게 높았으며(p<0.001 또는 p<0.01), 모든 시험물질 투여군(G3 내지 G8)의 손상면적 수준은 유발대조군(G2) 대비 통계학적으로 유의하게 낮았다(p<0.001). 양배추즙 단독 투여군(G4) 및 밤꿀 추출물 단독 투여군(G5)의 손상면적 수준은 스티렌정 투여군(G3) 대비 통계학적으로 유의하게 높았으며(p<0.01 또는 p<0.05), G7 및 G8의 손상 수준은 양성대조군인 스티렌정 투여군(G3) 대비 감소하는 경향을 보였다.
군 위 손상면적(%)
G1 0.00±0.00
G2 5.43±2.36
G3 0.34±0.24
G4 2.41±0.87
G5 2.23±0.82
G6 0.53±0.32
G7 0.03±0.01
G8 0.10±0.12
조직병리학적 검사 결과(하기 표 9, 도 6 및 도 7), 유발대조군(G2), 양배추즙 단독 투여군(G4) 및 밤꿀 추출물 단독 투여군(G5)의 상피 세포 소실(Epithelial cell loss) 수준은 정상대조군(G1)에 비하여 유의하게 높았으며, 스티렌정 투여군(G3) 및 G6 내지 G8의 상피 세포 소실 수준은 유발대조군(G2)에 비하여 유의하게 낮았다(p<0.01). 유발대조군(G2) 및 양배추즙 단독 투여군(G4)의 출혈(Hemorrhage) 수준은 정상대조군(G1)에 비하여 유의하게 높았으며(p<0.01 또는 p<0.05), G8의 출혈 수준은 유발대조군(G2)에 비하여 유의하게 낮았다(p<0.05). 유발대조군(G2)의 미란(Erosion) 수준은 정상대조군(G1)에 비하여 유의하게 높았으며(p<0.01), 스티렌정 투여군(G3), G6 내지 G8의 미란 수준은 유발대조군(G2)에 비하여 유의하게 낮았다(p<0.01 또는 p<0.05). 또한, G7 및 G8의 상피 세포 소실, 출혈 및 미란 수준은 양성대조군인 스티렌정 투여군(G3)과 유사한 경향으로 나타났다.
유발대조군(G2)은 정상대조군(G1)에 비해 위점막 상피세포가 많이 파괴된 것을 볼 수 있으며, G3 내지 G5에 비해 G6 내지 G8이 정상대조군(G1)이나 스티렌정 투여군(G3)의 위장 상피세포의 형상과 유사함을 볼 수 있다. 이로 인해 밤꿀 추출물 또는 양배추즙 단독 투여가 아닌 혼합에 의해서 위장상피 세포에 보호효과가 있음 알 수 있다.
상피 세포 손실 출혈 미란
G1 0.0±0.0 0.0±0.0 0.0±0.0
G2 2.4±0.5 2.2±1.3 3.0±1.0
G3 0.6±0.5 0.4±0.5 0.0±0.0
G4 1.4±0.5 1.4±0.9 1.4±1.3
G5 1.4±0.5 1.0±0.7 1.2±1.3
G6 1.0±0.7 0.6±0.5 0.6±1.3
G7 0.6±0.5 0.4±0.5 0.2±0.4
G8 0.6±0.5 0.2±0.4 0.2±0.4
상기 결과와 같이, 본 시험 조건하에서 Indomethacin 투여에 의한 급성 위손상 Sprague-Dawley Rat 모델에 시험물질을 투여하였을 때, 양배추즙 및 밤꿀 추출물을 혼합하여 투여시 손상 면적 수준은 유발대조군에 비하여 유의하게 감소하였으며, 조직병리학적 검사 결과의 일부 항목에서도 유의한 차이가 관찰되었다. 또한, G7 및 G8은 양성대조군인 스티렌정 투여군(G3)과 유사한 경향을 나타내었다.
따라서, 양배추즙과 밤꿀 추출물의 혼합물의 경구 투여는 Indomethacin 투여로 위손상이 유발된 Sprague-Dawley rat 모델에서 양성대조물질인 스티렌정과 유사한 억제효과를 나타났던 것으로 사료된다.
이상의 설명은 본 발명을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로, 본 발명에 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가지는 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 변형이 가능할 것이다. 따라서, 본 명세서에 개시된 실시예들은 본 발명을 한정하기 위한 것이 아니라 설명하기 위한 것이고, 이러한 실시예에 의하여 본 발명의 사상과 범위가 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 보호범위는 아래의 청구범위에 의하여 해석되어야 하며, 그와 동등한 범위 내에 모든 기술은 본 발명의 권리범위에 포함하는 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (12)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 밤꿀 추출물 및 양배추즙을 1:9 내지 9:1의 중량비로 포함하는 위장관 보호용 건강기능식품 조성물
  7. 삭제
  8. 제6항에 있어서, 상기 밤꿀 추출물은 키누렌산(kynurenic acid)을 함유하는 것을 특징으로 하는 위장관 보호용 건강기능식품 조성물
  9. 제6항에 있어서, 상기 밤꿀 추출물은 물 또는 C1~C4의 알킬 알코올 추출물인 것을 특징으로 하는 위장관 보호용 건강기능식품 조성물
  10. 제6항에 있어서, 상기 밤꿀 추출물은 밤꿀 무게 대비 추출가수량 20배수의 10% 에탄올로 6시간 동안 추출한 것을 특징으로 하는 위장관 보호용 건강기능식품 조성물
  11. 1) 밤꿀 추출물을 제조하는 단계;
    2) 밤꿀 추출물을 동결건조하는 단계;
    3) 양배추를 세척 및 절단하는 단계;
    4) 양배추를 물 중탕하는 단계;
    5) 양배추 중탕액을 살균처리하는 단계;
    6) 양배추 중탕액을 여과하여 양배추즙을 제조하는 단계; 및
    7) 상기 밤꿀 추출물 및 상기 양배추즙을 혼합하는 단계;를 포함하고,
    상기 밤꿀 추출물 및 양배추즙은 1:9 내지 9:1의 중량비로 혼합되는 것인 위장관 보호용 건강기능식품 조성물의 제조방법
  12. 제11항에 있어서, 상기 밤꿀 추출물은 밤꿀 무게 대비 추출가수량 20배수의 10% 에탄올로 6시간 동안 추출한 것을 특징으로 하는 위장관 보호용 건강기능식품 조성물의 제조방법
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PL445996A1 (pl) * 2023-09-04 2025-03-10 Uniwersytet Medyczny W Lublinie Zastosowanie kwasu kynureninowego w profilaktyce zaburzeń rytmu serca wywołanych przez kofeinę oraz żywność funkcjonalna i sposób otrzymywania żywności funkcjonalnej

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