KR102503839B1 - 핵염기 함량이 증가된 땅콩새싹 추출물의 제조방법 - Google Patents
핵염기 함량이 증가된 땅콩새싹 추출물의 제조방법 Download PDFInfo
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Abstract
핵염기 함량이 증가된 땅콩새싹 추출물의 제조방법과 상기 제조방법으로 제조한 땅콩새싹 추출물 및 이를 포함하는 골다공증 치료 또는 예방용 약제학적 조성물과, 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
Description
본 발명은 핵염기 함량이 증가된 땅콩새싹 추출물의 제조방법에 관한 것이다.
최근 의학의 발전과 생활수준의 향상과 더불어 인간의 평균수명은 점점 증가하고 있고 전세계는 이미 고령화 사회에 진입하였으며, 이에 따라 뇌혈관질환, 심장 및 심혈관질환, 근 골격계 질환, 종양 및 암 등의 노화와 연관성이 높은 질환의 발생도 증가하고 있다. 따라서 건강관리가 더욱 중요하게 되었고, 현대인들은 질병의 치료뿐만 아니라 기능성식품을 통한 질병의 예방에도 많은 관심을 기울이고 있다. 기능성식품의 소재로는 인체에 대한 안정성과 생리적 효능을 가지고 있는 천연유래 소재를 선호하는 경향이 높아지고 있다.
땅콩은 콩과 땅콩 속의 일년생의 초본식물로, 땅콩에서 땅콩새싹으로 발아할 때 외부의 환경으로부터 보호하기 위하여 이로운 영양소를 생합성 한다. 땅콩새싹은 항염, 항균 및 항산화 작용, 심혈관 질환, 암, 알츠하이머 같은 다양한 질병의 예방에 도움을 준다고 알려져 있다. 이와 같이 땅콩새싹은 약용식품 소재로 생리활성 효능이 탁월하여 다양한 제품들이 생산되고 있는 반면, 효율적인 땅콩 추출법에 관한 연구는 미흡한 실정이다.
본 발명자들은 땅콩새싹의 소재 특징을 고려하여 적은 비용으로 핵염기 함량이 증가된 땅콩 추출물의 제조방법을 개발하기 위한 노력 끝에 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 핵염기 함량이 증가된 땅콩새싹 추출물을 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조한 땅콩새싹 추출물 및 상기 추출물을 포함하는 골다공증 치료 또는 예방용 약제학적 조성물과, 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것을 목적으로 한다.
일 양상은 핵염기 함량이 증가된 땅콩새싹 추출물의 제조방법을 제공한다.
다른 일 양상은 상기 제조방법으로 제조한 땅콩새싹 추출물 및 이를 이용한 골다공증 치료 또는 예방용 약제학적 조성물과, 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
일 양상에 제조방법은 땅콩새싹 추출물로부터 뼈 건강의 유효성분인 핵염기(nucleobase) 함량을 증가시킬 수 있으며, 우라실과 아데닌의 총 함량을 증가시킬 수 있음을 확인하였으며, 적은 비용과 간편한 공정으로 땅콩새싹으로부터 골다공증 치료, 예방 또는 개선에 유효한 생리활성 물질을 추출할 수 있는 최적추출법을 제공할 수 있다.
또한, 이에 따라 제조된 추출물은 골다공증의 치료, 예방, 또는 개선을 위한 의약품 또는 건강기능식품으로 이용될 수 있으며, 식용 가능한 천연물 유래 추출물을 그 유효성분으로 하므로, 부작용이나 세포 독성에 대한 문제가 없는 장점이 있다. 또한, 상기 추출물은 골다공증 예방 또는 개선에 현저한 효과를 나타내는 유제품, 식음료, 또는 건강기능식품으로 이용할 수 있다.
도 1(a)는 본 발명에 따른 땅콩새싹 추출물 중에 포함된 우라실(Uracil)과 아데닌(Adenine)의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다. 도 1(b) 및 도 1(c)는 각각 우라실(Uracil)과 아데닌(Adenine)을 표준물질로 하여 작성한 검량선을 나타낸다.
도 2(a) 내지 (d)는 각각 에탄올 추출 용매의 농도%(v/v), 이소프로판올 추출 용매의 농도%(v/v), 에탄올 추출 용매의 pH, 또는 땅콩새싹의 발아 기간에 따른 땅콩새싹 추출물의 수득률(%)(w/w)을 나타낸다.
도 3은 에탄올 추출 용매의 농도%(v/v)에 따른 땅콩새싹 추출물로부터 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 4는 이소프로판올 추출 용매의 농도%(v/v)에 따른 땅콩새싹 추출물로부터 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 5는 추출 용매의 pH에 따른 땅콩새싹 추출물로부터 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 6은 땅콩새싹의 발아 기간(생장일별)에 따른 땅콩새싹 추출물로부터 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 7(a)는 발아 10일 후의 땅콩새싹을 pH 4, 5, 또는 7로 조절한 30% 에탄올 또는 30% 이소프로판올로 추출하여 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 7(b)는 발아 14일 후의 땅콩새싹을 pH 4, 5, 7로 조절한 30% 에탄올 또는 30% 이소프로판올로 추출하여 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 7(c)는 발아 17일 후의 땅콩새싹을 pH 4, 5, 또는 7로 조절한 30% 에탄올 또는 30% 이소프로판올로 추출하여 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 2(a) 내지 (d)는 각각 에탄올 추출 용매의 농도%(v/v), 이소프로판올 추출 용매의 농도%(v/v), 에탄올 추출 용매의 pH, 또는 땅콩새싹의 발아 기간에 따른 땅콩새싹 추출물의 수득률(%)(w/w)을 나타낸다.
도 3은 에탄올 추출 용매의 농도%(v/v)에 따른 땅콩새싹 추출물로부터 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 4는 이소프로판올 추출 용매의 농도%(v/v)에 따른 땅콩새싹 추출물로부터 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 5는 추출 용매의 pH에 따른 땅콩새싹 추출물로부터 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 6은 땅콩새싹의 발아 기간(생장일별)에 따른 땅콩새싹 추출물로부터 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 7(a)는 발아 10일 후의 땅콩새싹을 pH 4, 5, 또는 7로 조절한 30% 에탄올 또는 30% 이소프로판올로 추출하여 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 7(b)는 발아 14일 후의 땅콩새싹을 pH 4, 5, 7로 조절한 30% 에탄올 또는 30% 이소프로판올로 추출하여 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 7(c)는 발아 17일 후의 땅콩새싹을 pH 4, 5, 또는 7로 조절한 30% 에탄올 또는 30% 이소프로판올로 추출하여 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한, 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다. 본 명세서에 참고문헌으로 기재되는 모든 간행물의 내용은 본 발명에 전체가 참고로 통합된다.
본 발명의 일 양상은
땅콩새싹을 추출 용매로 추출하여 땅콩새싹 추출물을 수득하는 단계를 포함하고,
상기 추출 용매는 탄소수 1 내지 3의 알코올을 포함하고, pH가 4 내지 5인 것을 특징으로 하는,
핵염기 함량이 증가된 땅콩새싹 추출물의 제조방법을 제공한다.
상기 탄소수 1 내지 3의 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 또는 이소프로판올일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 일 구체예에서 알코올은 에탄올 또는 이소프로판올일 수 있다.
상기 추출 용매는 알코올을 10 내지 100%(v/v)의 함량으로 포함할 수 있다. 상기 추출 용매 중 알코올 함량은 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100%(v/v)이거나, 또는 이들 값을 상한 또는 하한으로 하는 범위로 포함하는 것일 수 있다.
일 구체예에서 상기 추출 용매는 알코올을 20 내지 40%(v/v)의 함량으로 포함할 수 있다. 다른 일 구체예에서 상기 추출 용매는 알코올을 25 내지 35%(v/v)의 함량으로 포함할 수 있다. 다른 일 구체예에서 상기 추출 용매는 상기 추출 용매는 알코올을 30%(v/v)의 함량으로 포함할 수 있다. 상기 농도 범위로 추출 용매를 포함함에 따라 핵염기 함량이 증가된 땅콩새싹 추출물을 제조할 수 있다.
상기 추출 용매는 물 또는 유기용매를 추가로 포함하는 혼합물일 수 있다.
일 구체예에서 상기 추출 용매는 산을 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 산은 염산, 인산, 황산, 질산, 아세트산 및 붕산 등의 무기산 또는 구연산, 말산, 타르타르산, 주석산, 젖산, 사과산, 토실산, 호박산, 아스코르빈산, 글루타민산, 알긴산, 말레산 및 아디프산 등의 유기산일 수 있다.
일 구체예에서 상기 추출 용매는 탄소수 1 내지 3의 알코올, 물, 및 산의 혼합물일 수 있다.
일 구체예에서 상기 추출 용매는 탄소수 1 내지 3의 알코올, 물 및 산을 1 내지 4 : 5 내지 8 : 0.005 내지 0.02의 부피비(%)로 포함하는 혼합물일 수 있다.
일 구체예에서 상기 추출 용매는 탄소수 1 내지 3의 알코올, 물 및 산을 3 : 7: 0.005 내지 0.01의 부피비(%)로 포함하는 혼합물일 수 있다.
예를 들어, 상기 추출 용매는 에탄올과 물을 30:70로 혼합하고, 혼합물 부피 1 mL를 기준으로 1N 염산을 0.0005 내지 0.001 mL를 추가하여 제조한 pH 4 내지 5의 용매일 수 있다.
추출 용매 중 알코올, 물 및 산을 상기 부피비 범위로 포함함에 따라 핵염기 함량이 증가된 땅콩새싹 추출물을 제조할 수 있다.
일 구체예에서 상기 추출 용매 중 포함되는 산은 염산일 수 있다.
땅콩은 콩과에 속하는 1년생 초본 식물이다. 본 발명에 따른 땅콩새싹(Peanut sprout)은 땅콩을 발아시켜 새싹이 난 상태의 땅콩을 말한다. 상기 새싹땅콩의 원료는 재배한 것 또는 시판되는 것 등을 제한 없이 사용할 수 있다.
일 구체예에서 상기 땅콩새싹은 생체 또는 건체일 수 있다. 상기 건체란 땅콩새싹를 온도 40 내지 70℃의 건조기에서 10 내지 24시간 건조시킨 것을 말한다.
상기 땅콩새싹은 발아 후 2일 내지 20일 된 것일 수 있으며, 일 구체예에서 바람직하게는 발아 후 10일 내지 17일 된 것일 수 있다. 상기 범위를 벗어나서 발아된 땅콩새싹을 사용할 경우에는 땅콩새싹 추출물로부터 얻어지는 핵염기의 함량이 감소할 수 있다.
본 명세서에서 핵염기(nucleobase)는 땅콩새싹 추출물로부터 얻어지는 유효성분으로서 골다공증의 치료, 예방, 또는 개선에 효과적일 수 있다.
일 구체예에서 상기 핵염기는 우라실(Uracil), 아데닌(Adenine), 또는 이들의 조합일 수 있다. 우라실 및 아데닌은 땅콩새싹으로부터 얻을 수 있는 유효성분 중 골다공증의 치료, 예방, 또는 개선에 이용될 수 있는 대표적인 성분이다.
일 구체예에 따른 상기 제조방법은 우라실 및 아데닌의 총 함량이 증가된 땅콩새싹 추출물을 제조할 수 있다.
일 구체예에 따른 상기 제조방법에서 땅콩새싹은 땅콩새싹 분쇄물로 제공될 수 있다. 일 구체예에서 상기 땅콩새싹 분쇄물을 추출 용매로 추출하여 땅콩새싹 추출물을 수득할 수 있다. 상기 추출 용매는 탄소수 1 내지 3의 알코올을 포함하고, pH가 4 내지 5일 수 있다.
일 구체예에서 상기 추출 용매로 추출된 땅콩새싹 추출물은 여과 단계 또는 농축 단계를 추가로 더 포함할 수 있다.
일 구체예에서 상기 핵염기 함량이 증가된 땅콩새싹 추출물의 제조방법은,
땅콩새싹을 분쇄하여 분쇄물을 얻는 단계;
상기 분쇄물을 추출 용매로 추출하여 추출액을 수득하는 단계;
상기 추출액을 여과하여 여과액을 수득하는 단계; 및
상기 여과액을 감압농축하는 단계를 포함할 수 있다.
일 구체예에서 상기 추출 용매는 30% 에탄올 또는 30% 이소프로판올일 수 있다.
일 구체예에서 상기 땅콩새싹은 발아 후 10일 내지 17일 된 것 일 수 있다.
상기 추출물의 추출온도는, 4℃내지 150℃에서 수행될 수 있다. 또한, 상기 추출시간은 12시간 내지 120시간일 수 있다. 상기 추출온도가 4℃보다 낮은 경우 추출이 잘 안 될 수 있으며, 150℃를 넘는 경우 추출물이 변성될 수 있다. 상기 추출시간이 12시간보다 낮은 경우 유효성분이 일부 추출되지 않을 수 있으며, 120시간을 넘길 경우 유효성분 이외의 불순물 성분이 함께 추출될 수 있으므로 바람직하지 않다.
상기 땅콩새싹 추출물은 땅콩을 껍질과 함께 갈아 추출 용매로 추출 후, 땅콩 찌꺼기를 제거하고, 필터 페이퍼로 여과한 다음 여액을 감압농축기, 진공회전농축기 또는 진공건조기를 사용하여 농축한 후, 실온에서 보관할 수 있다.
상기 추출물을 원료로부터 추출하여 수득할 때, 추출 방법으로는 용매 추출법, 초음파 추출법, 여과법 및 환류 추출법 등 종래 알려진 통상적인 추출 방법을 모두 사용할 수 있으며, 바람직하게는 용매 추출법이나 환류 추출 법을 이용함으로써 제조할 수 있다. 상기 추출물은 식물체 등을 추출 용매로 추출하거나 추출 용매로 추출하여 제조한 추출물에 추가로 분획용매를 가하여 분획하여 제조할 수 있다. 상기 추출 과정은 수회 반복할 수 있으며, 이후에 농축 또는 동결건조 등의 단계를 추가적으로 거칠 수 있다. 구체적으로, 수득한 추출물을 감압 농축하여 농축액을 얻고, 상기 농축액을 동결건조시킨 후 분쇄기를 이용하여 고농도의 추출 분말을 제조할 수 있다.
상기 땅콩새싹 추출물의 제조방법은 필요에 따라 통상의 추출기기, 초음파분쇄 추출기 또는 분획기를 추가로 이용할 수 있다.
다른 일 양상은 상기 제조방법으로 제조된 땅콩새싹 추출물을 제공한다.
다른 일 양상은 상기 제조방법으로 제조된 땅콩새싹 추출물을 유효성분으로 포함하는 골다공증 치료 또는 예방용 약제학적 조성물을 제공한다.
다른 일 양상은 상기 제조방법으로 제조된 땅콩새싹 추출물을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
일 구체예에 따른 약제학적 조성물 또는 건강기능식품은 골다공증에 대한 치료, 예방, 또는 개선 효과를 나타낼 수 있다.
일 구체예에 따른 약제학적 조성물 또는 건강기능식품은 조골세포 분화를 촉진하는 것일 수 있다. 상기 약제학적 조성물은 골밀도를 증가시키는 것일 수 있다.
본 명세서에서 골다공증이란 조골세포의 미분화, 발현 저조, 미발현 등 조골세포의 비정상으로 인해 야기되는 모든 질병을 포함하며, 특별히 인간의 노화로 진행되는 골조직의 약화만을 의미하지는 않는다.
본 발명에 따른 땅콩새싹 추출물을 유효성분으로 포함하는 약제학적 조성물 또는 건강기능식품은 인간을 포함한 동물에 적용될 수 있다.
상기 골다공증 치료 또는 예방용 약제학적 조성물의 투여량은 투여방법, 복용자의 연령, 성별, 환자의 중증도, 상태, 체내에서 활성 성분의 흡수도, 불활성률 및 병용되는 약물을 고려하여 결정할 수 있으며, 1일 유효성분을 기준으로 하였을 때 0.1 mg/kg(체중) 내지 500 mg/kg(체중), 0.1 mg/kg(체중) 내지 400 mg/kg(체중) 또는 1 mg/kg(체중) 내지 300 mg/kg(체중)으로 투여할 수 있으며, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 땅콩새싹 추출물은 상기 골다공증 치료 또는 예방용 약제학적 조성물 내에 단독으로 사용될 수 있으며, 그 외 약학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다. 이 경우, 상기 골다공증 치료 또는 예방용 약제학적 조성물 내 땅콩새싹 추출물의 함량은 0.001 중량% 내지 99.9 중량%, 0.1 중량% 내지 99 중량% 또는 1 중량% 내지 50 중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 조성물의 사용태양 및 사용방법에 따라 상기 화합물의 함량은 바람직한 함량으로 적절히 조절하여 사용될 수 있다.
상기 약학적으로 허용되는 담체의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이트, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀 및 생리식염수로 이루어진 군에서 선택된 1 이상을 들 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 약학적으로 허용 가능한 담체라면 모두 사용 가능하다.
또한, 땅콩새싹 추출물을 포함하는 골다공증 치료 또는 예방용 약제학적 조성물은 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, pH 조절제, 영양제, 비타민, 전해질, 알긴산 및 그의 염, 펙트산 및 그의 염, 보호성 콜로라이드, 글리세린, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 골다공증 치료 또는 예방용 약제학적 조성물은 상기 유효성분 이외에 공지의 골다공증 치료 효과가 있는 것으로 당업계에 알려진 물질, 예컨대, 인간 부갑상선 호르몬(hPTH), 성장 호르몬, 에스트로겐, 비스포스포네이트, 칼시토닌 등의 물질을 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 땅콩새싹 추출물을 약제로 사용하는 경우 투여방법은 경구 또는 비경구를 모두 포함한다. 또한, 상기 골다공증 치료 또는 예방용 약제학적 조성물의 제형은 사용방법에 따라 달라질 수 있으며, 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 본 발명이 속하는 기술분야에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화될 수 있다.
일 구체예에 따른 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여를 위한 것일 수 있다.
경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 연질 또는 경질 캡슐제, 환제, 산제, 현탁화제, 시럽제, 주사제 및 과립제 등이 포함되고, 이러한 제제는 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 제조될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 비경구투여를 위한 형태는 크림, 로션제, 연고제, 경고제, 액제, 에어로솔제, 유동엑스제, 엘릭서, 침제, 향낭, 패취제 또는 주사제 등의 형태일 수 있다.
본 발명의 땅콩새싹 추출물을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품은 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 생체조절기능을 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다.
상기 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 건강기능식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체를 더욱 포함할 수 있다.
본 발명의 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물은 본 발명의 새싹땅콩 추출물을 전체 식품 중량의 0.001 내지 99 중량%로 포함될 수 있다.
이하, 본 발명을 구체적으로 설명하기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 추출 용매의 종류 및 농도에 따른 땅콩새싹 추출물의 제조
땅콩새싹 생체 시료 100g에 추출 용매 500 mL를 넣어 함께 분쇄기에 넣고 분쇄한 후 12시간 동안 상온에서 교반하여 추출하고, 여과하였다. 동일한 조건으로 2회에 걸쳐 추출을 반복한 후 감압농축하여 추출물을 획득하였다.
이 때, 추출 용매로는 에탄올 또는 이소프로판올을 사용하였다. 각각의 추출 용매의 농도는 30, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100%(v/v)로 조정하였다.
실시예 2. 추출 용매의 pH에 따른 땅콩새싹 추출물의 제조
땅콩새싹 생체 시료 100g에 추출 용매로 30% 에탄올 500 mL를 넣어 함께 분쇄기에 넣고 분쇄한 후 12시간 동안 상온에서 교반하여 추출하고, 여과하였다. 동일한 조건으로 2회에 걸쳐 추출을 반복한 후 감압농축하여 추출물을 획득하였다.
이 때, 추출 용매의 pH는 염산을 첨가하여 각각 pH 3, 4, 5, 6, 또는 7로 조정하였다. 에탄올과 물을 30:70로 혼합하고, 혼합물 부피 1 mL를 기준으로 1N 염산을 각각 0.1, 0.011, 0.0006, 0.0003, 0 mL를 추가하여 각각 pH 3, 4, 5, 6, 또는 7을 갖는 추출 용매를 제조하였다.
실시예 3. 땅콩새싹의 발아 기간(생장일별)에 따른 땅콩새싹 추출물의 제조
땅콩새싹 생체 시료 100g에 추출 용매로 100% 이소프로판올 500 mL를 넣어 함께 분쇄기에 넣고 분쇄한 후 12시간 동안 상온에서 교반하여 추출하고, 여과하였다. 동일한 조건으로 2회에 걸쳐 추출을 반복한 후 감압농축하여 추출물을 획득하였다.
이 때, 땅콩새싹은 2, 4, 7, 9, 10, 12, 14, 17, 또는 20일간 발아한 것을 사용하였다.
제조예 1: 땅콩새싹 추출물의 핵염기(Nucleobase) 함량 분석 방법
땅콩새싹 추출물에 포함된 골다공증 개선 유효성분인 핵염기의 함량을 측정하기 위해 전처리 과정을 거쳤다. 이와 같은 전처리 과정은 추출물 중에 포함된 염기성을 띄고 있는 핵염기의 함량을 증대시켜서 분석을 용이하게 한다.
(1) 땅콩새싹 추출물의 전처리 과정
실시예 1 내지 3에서 제조된 땅콩새싹 추출물 약 1 g을 증류수에 현탁하여 pH 4로 산성화하였다. 이어서, 에틸아세테이트(EA)를 첨가하여 층 분리를 실시하고 분획물 중 물 층을 취하였다. 얻어진 물 층에 포함된 산성물질을 제거하기 위해 물 층을 pH 10으로 염기성화하고 다시 에틸아세테이트(EA)를 첨가하고 층 분리를 실시하여 핵염기(nucleobases)가 함유된 EA층을 확보하였다.
(2) 핵염기의 함량 분석
실시예 1 내지 3에서 제조된 땅콩새싹 추출물 약 1 g을 위와 같은 전처리 과정을 거쳐 확보한 후에 이를 각각 50% 메탄올 2 mL에 녹이고 HPLC를 이용하여 정량 분석을 실시하였다. 추출물에 포함된 핵염기 중에 상대적으로 함유량이 높은 우라실(Uracil)과 아데닌(Adenine)을 표준물질로 하여 검량선을 작성하였다. 이를 이용하여 땅콩새싹 추출물 중에 포함된 우라실과 아데닌의 함량을 환산하여 나타내었다.
표 1은 우라실과 아데닌의 HPLC 분석조건을 나타낸다.
[표 1]
도 1(a)는 본 발명에 따른 땅콩새싹 추출물 중에 포함된 우라실(Uracil)과 아데닌(Adenine)의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다. 도 1(b) 및 도 1(c)는 각각 우라실(Uracil)과 아데닌(Adenine)을 표준물질로 하여 작성한 검량선을 나타낸다.
시험예 1: 땅콩새싹 추출물의 수득률 측정 결과
실시예 1 내지 3에서 제조된 추출물로부터 땅콩새싹 추출물의 수득률을 측정하였다. 도 2(a) 내지 (d)는 각각 에탄올 추출 용매의 농도%(v/v), 이소프로판올 추출 용매의 농도%(v/v), 에탄올 함유 추출 용매의 pH, 또는 땅콩새싹의 발아 기간별 땅콩새싹 추출물의 수득률(%)(w/w)을 나타낸다.
(1) 에탄올 추출물의 수득률
실시예 1에서 에탄올 30, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100%(v/v)을 이용하여 추출물을 제조한 결과, 땅콩새싹 생채 약 100 g당 3 내지 4 g의 땅콩새싹 추출물을 수득하였다.
(2) 이소프로판올 추출물의 수득률
실시예 1에서 이소프로판올 30, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100%(v/v)을 이용하여 추출물을 제조한 결과, 땅콩새싹 생채 약 100 g당 3 내지 5 g의 땅콩새싹 추출물을 수득하였다.
(3) pH별 추출물의 수득률
실시예 2에서 pH가 3, 4, 5, 6, 또는 7인 30% 에탄올 추출 용매를 이용하여 땅콩새싹 추출물을 제조한 결과, 땅콩새싹 생채 약 100 g당 3 내지 5 g의 추출물을 수득하였다.
(4) 땅콩새싹의 발아 기간별(생장일별) 추출물의 수득률
실시예 3에서 2, 4, 7, 9, 10, 12, 14, 17, 또는 20 일 동안 발아시킨 땅콩새싹을 이용하여 땅콩새싹 추출물을 제조한 결과, 땅콩새싹 생채 약 100 g당 1 내지 5 g의 추출물을 수득하였다.
시험예 2: 땅콩새싹 추출물의 핵염기(Nucleobase) 함량 분석 결과
실시예 1 내지 3에서 제조된 땅콩새싹 추출물을 이용하여 제조예 1과 같은 방법으로 땅콩새싹 추출물에 포함된 핵염기의 함량(우라실 및 아데닌의 함량)을 측정하였다.
(1) 에탄올 추출물에 포함된 핵염기 함량
실시예 1에서 에탄올 30, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100%(v/v)을 이용하여 땅콩새싹 추출물을 제조하고 제조예 1과 같이 전처리하여 각 추출물에 포함된 핵염기 함량을 측정하였다.
도 3은 에탄올 추출 용매의 농도%(v/v)에 따른 땅콩새싹 추출물로부터 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 3에서와 같이, 30% 에탄올 추출물에서 우라실 및 아데닌 합의 최고 함량(93.6 ㎍/g)을 보였다.
(2) 이소프로판올 추출물에 포함된 핵염기 함량
실시예 1에서 이소프로판올 30, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100%(v/v)을 이용하여 제조한 땅콩새싹 추출물을 제조하고 제조예 1과 같이 전처리하여 각 추출물에 포함된 핵염기 함량을 측정하였다.
도 4는 이소프로판올 추출 용매의 농도%(v/v)에 따른 땅콩새싹 추출물로부터 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 4에서와 같이, 30% 이소프로판올 추출물에서 우라실 및 아데닌 합의 최고 함량(107.1 ㎍/g)을 보였다.
(3) pH별 추출물에 포함된 핵염기 함량
실시예 2에서 pH가 각각 3, 4, 5, 6, 또는 7인 30% 에탄올 추출 용매를 이용하여 땅콩새싹 추출물을 제조하고 제조예 1과 같이 전처리하여 각 추출물에 포함된 핵염기 함량을 측정하였다.
도 5는 추출 용매의 pH에 따른 땅콩새싹 추출물로부터 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 5에서와 같이, pH 4 추출물에서 우라실 및 아데닌 합의 최고 함량(116.7 ㎍/g)을 보였다.
위의 결과와 같이 pH가 4 내지 5인 추출 용매를 이용하여 제조한 땅콩새싹 추출물이 높은 핵염기의 함량을 보였다.
(4) 땅콩새싹의 발아 기간별(생장일별) 추출물에 포함된 핵염기 함량
실시예 3에서 2, 4, 7, 9, 10, 12, 14, 17, 또는 20일간 발아한 땅콩새싹을 이용하여 땅콩새싹 추출물을 제조하고 제조예 1과 같이 전처리하여 각 추출물에 포함된 핵염기 함량을 측정하였다.
도 6은 땅콩새싹의 발아 기간(생장일별)에 따른 땅콩새싹 추출물로부터 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 6에서와 같이, 발아 12일차 추출물에서 우라실 및 아데닌 합의 최고 함량(137.8 ㎍/g)을 보였다.
위의 결과와 같이 10 내지 17일 동안 발아한 땅콩새싹에 포함된 핵염기의 함량이 그 외의 기간 동안 발아한 경우보다 상대적으로 높았다.
시험예 3: 10~17일차 발아 땅콩새싹을 pH 4, 5, 7로 조절한 30% 에탄올 또는 30% 이소프로판올로 추출한 추출물에 포함된 핵염기의 함량
시험예 1 내지 2에서 확인한 최적 추출 용매인 30% 에탄올 또는 이소프로판올 (pH 4, pH 5)를 사용하여 발아 10, 14, 17일 후의 땅콩새싹을 추출한 후 추출물에 포함된 핵염기의 함량으로서 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 도 7에 나타내었다.
도 7(a)는 발아 10일 후의 땅콩새싹을 pH 4, 5, 또는 7로 조절한 30% 에탄올 또는 30% 이소프로판올로 추출하여 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 7(b)는 발아 14일 후의 땅콩새싹을 pH 4, 5, 또는 7로 조절한 30% 에탄올 또는 30% 이소프로판올로 추출하여 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
도 7(c)는 발아 17일 후의 땅콩새싹을 pH 4, 5, 또는 7로 조절한 30% 에탄올 또는 30% 이소프로판올로 추출하여 얻은 우라실과 아데닌의 총 함량(㎍/g)을 나타낸다.
상기 도 7(a) 내지 (c)의 결과로부터 pH 7로 조절한 조건에서보다 pH 4 내지 5로 조절한 30% 에탄올 또는 30% 이소프로판올을 이용하여 높은 함량의 우라실과 아데닌을 땅콩새싹 추출물로부터 얻을 수 있음을 확인하였다.
본 연구는 산업통상자원부와 한국산업기술진흥원이 지원하는 광역협력권산업 육성사업으로 수행된 연구결과이다(P0008626).
본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로, 상기 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.
Claims (20)
- 땅콩새싹을 추출 용매로 추출하여 땅콩새싹 추출물을 수득하는 단계를 포함하고,
상기 추출 용매는 탄소수 1 내지 3의 알코올을 포함하고, pH가 4 내지 5이고,
상기 알코올은 에탄올 또는 이소프로판올이고,
상기 추출 용매는 알코올을 30%(v/v)의 함량으로 포함하고,
상기 땅콩새싹은 발아 후 10일 내지 17일 된 것이고,
핵염기가 우라실(Uracil), 아데닌(Adenine), 또는 이들의 조합인 것을 특징으로 하는,
핵염기 함량이 증가된 땅콩새싹 추출물의 제조방법. - 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 청구항 1에 있어서, 상기 추출 용매는 산을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
- 삭제
- 청구항 1에 있어서, 상기 추출 용매는 탄소수 1 내지 3의 알코올, 물 및 산을 1 내지 4 : 5 내지 8 : 0.005 내지 0.02의 부피비(%)로 포함하는 혼합물인 것을 특징으로 하는 제조방법.
- 청구항 1에 있어서, 상기 추출 용매는 탄소수 1 내지 3의 알코올, 물 및 산을 3 : 7: 0.005 내지 0.01의 부피비(%)로 포함하는 혼합물인 것을 특징으로 하는 제조방법.
- 청구항 6, 및 8 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 산은 염산인 것을 특징으로 하는 제조방법.
- 삭제
- 청구항 1에 있어서, 상기 땅콩새싹은 생체 또는 건체인 것을 특징으로 하는 제조방법.
- 삭제
- 청구항 1에 있어서,우라실 및 아데닌의 총 함량이 증가된 땅콩새싹 추출물의 제조방법.
- 청구항 1에 있어서,
땅콩새싹을 분쇄하여 분쇄물을 얻는 단계;
상기 분쇄물을 추출 용매로 추출하여 추출액을 수득하는 단계;
상기 추출액을 여과하여 여과액을 수득하는 단계; 및
상기 여과액을 감압농축하는 단계;를 포함하는, 핵염기의 함량이 증가된 땅콩새싹 추출물의 제조방법. - 청구항 15에 있어서, 상기 추출 용매는 30% 에탄올 또는 30% 이소프로판올을 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
- 삭제
- 청구항 1의 제조방법으로 제조된 땅콩새싹 추출물.
- 청구항 1의 제조방법으로 제조된 땅콩새싹 추출물을 유효성분으로 포함하는 골다공증 치료 또는 예방용 약제학적 조성물.
- 청구항 1의 제조방법으로 제조된 땅콩새싹 추출물을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품.
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| KR1020200109143A KR102503839B1 (ko) | 2020-08-28 | 2020-08-28 | 핵염기 함량이 증가된 땅콩새싹 추출물의 제조방법 |
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Publications (2)
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|---|---|
| KR20220028314A KR20220028314A (ko) | 2022-03-08 |
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| KR102140163B1 (ko) | 2017-06-07 | 2020-08-03 | 단국대학교 천안캠퍼스 산학협력단 | 새싹땅콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 골다공증 치료 또는 예방용 약제학적 조성물 |
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2020
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