KR102499651B1 - 에리트로포이에틴-유래 분자를 함유하는 국소 적용을 위한 미용 제형 - Google Patents

에리트로포이에틴-유래 분자를 함유하는 국소 적용을 위한 미용 제형 Download PDF

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Abstract

본 발명은 인간 피부의 미용 처리를 위해 디자인된 미용 제형 및 새로운 펩티드 관련 실체에 관한 것이다. 더욱 상세히, 본 발명은 CD90 양성 조직 세포를 표적화하고, 에리트로포이에틴 (EPO) 의 부분적 서열에 해당하거나 그로부터 유래하지만, 혈구생성을 실질적으로 유발하지 않고, 조직 재생 및 보호 효과를 유발하는 펩티드에 관한 것이다.
특히, 본 발명은 지질 구조 및 혈관구조 이완을 유발하고 표적화되는 피부 세포로의 폴리펩티드 실체의 경피 수송을 촉진하는 제제와 기능적 관련되는 EPO-유래 조직 보호성 펩티드를 공개한다.

Description

에리트로포이에틴-유래 분자를 함유하는 국소 적용을 위한 미용 제형
본 발명은 인간 피부의 미용 처리를 위해 디자인된 미용 제형 및 새로운 펩티드 관련 실체에 관한 것이다. 더욱 상세히, 본 발명은 CD90 양성 조직 세포를 표적화하고, 에리트로포이에틴 (erythropoietin) (EPO) 의 부분적 서열에 해당하거나 그로부터 유래하지만, 혈구생성을 실질적으로 유발하지 않고, 조직 재생 및 보호 효과를 유발하는 펩티드에 관한 것이다.
특히, 본 발명은 지질 구조 및 혈관구조 이완을 유발하고 표적화되는 피부 세포로의 폴리펩티드 실체의 경피 수송을 촉진하는 제제와 기능적으로 관련되는 EPO-유래 조직 보호성 펩티드를 공개한다.
클러스터 분화 90 (Cluster Differentiation 90) (CD90) 은 세포 부착 분자이고, 분자량이 25-35 KDa 인 면역글로불린 슈퍼패밀리의 가장 작은 구성원이다. CD90 은 또한 흉선세포 분화 항원-1 (thymocyte differentiation antigen-1) (Thy-1) 로서 알려져 있고, 글리코실포스파티딜이노시톨 (GPI) 모티프를 통해 세포 표면에 고정된 당단백질이다. 인간에서, CD90 은 간엽 줄기 세포 (MSC), 혈구생성 줄기 세포 (HSC) 및 각질세포 줄기 세포 (KSC) 를 포함하는 줄기 세포 상에서 및 다양한 수준으로 비-림프 조직 예컨대 섬유아세포, 뉴런 및 활성화된 내피 세포 상에서 발현된다. 각질세포는 피부의 최외층인 표피에서 우세한 세포 유형에 해당하고, 거기에서 발견되는 세포의 90% 를 구성한다. 피부의 기저층에서 발견되는 상기 각질세포는 "기저 세포" 또는 "기저 각질세포" 로서 언급된다.
CD90 발현 피부 세포는 손상된 피부 조직을 복구하는데 도움이 되는 성장 인자, 사이토카인 및 세포외 매트릭스 성분을 합성 및 방출함으로써 염증 및 상처 치유에서 기능한다. 예를 들어, 단핵구 CD90 리간드는 염증 동안 활성화된 내피 세포 상의 CD90 에 결합하여 염증, 조직 손상 및 감염 부위로 면역 세포 이동을 집중시킨다.
에리트로포이에틴 (EPO) 은 초기에 저산소증에 반응하는 적혈구 생산의 조절인자로서 확인된 다면발현성 사이토카인 당단백질이다. 성숙한 인간 165 아미노산-길이 EPO 단백질 서열은 하기 SEQ ID NO: 1
Figure 112019058050170-pct00001
로 표시되고, 컴팩트한 구형 구조를 형성하는 4 개의 α-나선으로 이루어진다. 인간 재조합 에리트로포이에틴 (포유류 세포에서 발현됨) 은 함께 당단백질의 총 분자량의 약 40% 를 구성하는 3 개의 N-연결 및 1 개의 O-연결 올리고당 사슬을 함유한다. N-연결 글리코실화는 위치 24, 38 및 83 에 위치하는 아스파라긴 잔기 (Asn) 에서 발생하지만, O-연결 글리코실화는 위치 126 에 위치하는 세린 잔기 (Ser) 에서 발생한다.
고전적 원래의 이해에 따르면, EPO 은 EPO 수용체 분자를 이합체화시켜 EPO 수용체-연합된 Janus 티로신 키나아제 2 (Jak2) 및 이차 신호전달 분자 예컨대 Stat5 의 활성화를 초래함으로써 혈구생성을 유도한다 (Brines and Cerami, Nat Rev Neurosci, 2005;6:484-94). 재조합 EPO 은 다양한 기원의 빈혈의 치료에 널리 사용된다.
EPO 은 또한 조직 보호 특성을 나타낸다. 중추 신경계에서, EPO 및 EPO 수용체는 뉴런, 신경교 세포 및 뇌혈관구조 내피에 의해 발현된다. EPO 은 시험관 내에서　및 외상, 뇌졸중, 허혈, 염증 및 간질 발작과 관련된 신경 손상의 동물 모델에서 신경영양 및 신경보호 효과가 있는 것으로 밝혀졌다. EPO 의 유익한 효과는 또한 뇌졸중, 정신분열증 및 진행성 다발성 경화증의 임상 연구에서 입증되었다. EPO 은 세포 사멸을 방지함으로써 직접적으로, 및 염증 과정을 조절하고 신경 발생 및 혈관 신생을 자극함으로써 간접적으로 뉴런을 보호한다 (Wang et al., Stroke 2004;35:1732-7).
에리트로포이에틴의 세포 보호 효과의 일부는 정준 에리트로포이에틴 수용체 및 공통 베타 수용체인, βcR 을 함유하는 이종이합체에의 결합을 통해 매개되는 것으로 밝혀졌다 (Brines et al., Proc Natl Acad Sci USA 2004; 101: 14907-14912). 흥미롭게도, 카르바밀화된 에리트로포이에틴은 이러한 이종수용체에 결합하여 조직 보호성 효과를 발휘하지만, 그것은 고전적 에리트로포이에틴 수용체에는 결합하지 않고 적혈구생성을 자극하지 않는다. βcR 은 적혈구생성에 요구되지 않는다. 비혈구생성 세포에 의해 발현된 EpoR 와의 조합으로 βcR 은 조직 보호성 수용체를 구성하여, 조직 보호성 이종수용체를 생성한다고 추정된다.
피부 및 다른 조직에서의 EPO 의 조직 재생 및 상처 치유 촉진 효과는 전신 및 국소 적용 형태에 의해 생체 내 및 시험관 내에서 수 차례 입증되었다 (예를 들어: Giri et al, Drug Design, Development and Therapy 2015:9; Guenter et al., J Transplant Ste Cell Biol 2(1): 4, 2015; Hamed et al., Wound Rep Reg (2014) 22 23-33; WO 2004/001023; WO 2005/063965; WO 2009/083203).
그러나, 피부 결함 및 손상의 재생과 관련하여, EPO 및 그 유사체의 유용성을 이들 폴리펩티드가 피부를 관통하지 않으므로 결함이 있거나 손상된 피부 상처에의 이러한 화합물의 직접 적용으로 제한하는 일부 문제가 명백해졌다. 정맥내, 피하 또는 근육내 주사에 의해 적용되지 않는 한, 단백질 에리트로포이에틴 또는 유사체는 체내에 들어갈 수 없다.
피부에의 EPO 단독의 국소 적용은 실패할 것이며, 그 이유는 EPO 은 그 자체로는 피부 투과성이 없기 때문이다. 이것은 분자의 적용 가능성을 심각하게 제한한다. 이러한 경우에도 전신 적용은 어쨌든 재생 잠재력을 갖지만, 국소 무손상 피부 또는 조직 재생이 아닌 혈구의 종래의 증식 및 성숙을 지지하는지 여부는 논란의 여지가 있다. 사용된 300 단위 EPO/㎏ 체중의 피하 주사도 피부 재생을 유도할 수 없었던 것으로 보고된다.
또한, 상처에는 몇 분 내에 EPO 을 불활성화시키는 것으로 알려진 프로테이나아제가 풍부하므로, EPO 은 신속한 단백질가수분해 붕괴에 의해 야기되는 EPO 의 짧은 반감기로 인해 상처 재생을 향상시키기 위해 국소적으로 적용될 수 있는 잠재성이 제한된다. 당해 기술 분야에 공지된 EPO-단편 또는 변이체 또는 유도체도 마찬가지이다. 이들 EPO 유도체 또는 단편 또는 변이체 중 일부는 조직 보호에 효과적인 것으로 알려져 있다 (예를 들어, EP 2 933 264, EP 2 371 855, WO 2007/019545 참조).
이러한 EPO 유래된 폴리펩티드의 제한된 이용가능성은 노화된 피부에 존재하는 피부 상태, 흉터가 많은 조직 또는 심지어는 염증성 상태 예컨대 신경피부염 또는 습진 (피부의 가장 표면적인 영역조차 비교적 온전함) 의 상황에서 특히 딜레마이다. EPO 및 그것의 유사체의 미용 활성 조차도 달성될 수 없다.
본 발명의 목적은 기울기 및 시간의 충격 방식보다는 가까운 기하학적 거리로 피부 세포에의 EPO 및 EPO 단편, 유사체, 모방체, 변이체 및 유도체의 적용가능성을 확립 및 개선하는 것이다.
그러므로, 상기 한계를 극복하기 위해서, 예를 들어, 피부 노화 및 병리학적 사건에 기초한 피부 세포에 대한 외부 및 내부 영향에 의해 야기된 피부 손상을 제거 또는 약화시키는 피부 세포의 생리 및 생물학적 기능을 유발 및 수행하는, 조직-보호 특성을 보이고 피부 조직에서의 적격 세포를 효율적으로 표적화할 수 있는 새로운 화학적 실체의 개발이 필요하다.
이러한 목적은 적혈구생성 활성을 결여하고 피부 조직에서의 CD90 양성 및 기타 적격 세포를 표적화할 수 있는 피부 조직 보호성 EPO 유사체 또는 변이체를 포함하는 새로운 화학적 실체를 제공함으로써 달성된다. 이러한 신규한 화학적 실체는 피부 세포의 국소 미세환경에서 기능적으로 효과적이도록 정확히 맞춤조정되고 국소 미용 투여에 의해 피부에 투여될 수 있다.
본 발명의 첫번째 양태에서, 하기를 포함하는 피부에의 국소 투여를 위한 미용 제형 또는 조성물이 제공된다:
(i) 40 개 이하 및 7 개 이상, 바람직하게는 10 - 40 개, 더욱 바람직하게는 10 - 30 개의 아미노산으로 이루어지는 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP),
여기에서 조직 보호성 펩티드는
- EPO 수용체 (EpoR) 및/또는 공통 β 수용체 (βcR) 의 아고니스트 예컨대 에리트로포이에틴 (EPO) 펩티드 단편, EPO 펩티드 변이체, EPO 유사체 또는 EPO 모방체에서 유래하는 펩티드, 또는 EpoR 및/또는 βcR 에 대한 결합에 관여되는 아미노산 잔기로 구성되는 펩티드이고,
- CD90 발현 피부 세포를 표적화하고,
- 혈구생성/적혈구생성 효능을 유발하지 않거나 본질적으로 유발하지 않음, 및
(ii) 지질 화합물 또는 지질 구조, 바람직하게는 적어도 스핑고지질 및/또는 인지질, 예컨대 세라미드 또는 포스파티딜콜린,
여기에서 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 는 혼합물, 이온 상호작용, 공유 결합에 의해 지질 화합물 또는 지질 구조에 연결 또는 회합되거나, 또는 미셀 또는 리포솜 구조를 형성함으로써 그안에 포매 또는 캡슐화됨.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 미용 제형 또는 조성물은 혈관구조 이완을 유발하고/하거나 수용체 세포로의 조직 보호성 폴리펩티드의 수송을 촉진하는 제제를 부가적으로 포함한다. 예를 들어, 유발제는 CD90 발현 피부 세포에서 산화 질소 (NO) 및/또는 아세틸콜린 형성을 자극한다. 유발제는 공유 결합에 의해 본 발명에 따른 조직 보호성 폴리펩티드에 직접 연결되어, 아래 더욱 상세히 명시된 바와 같은 접합체 분자를 형성할 수 있다.
상기 조직 보호성 폴리펩티드 및 임의로 본 발명에 따른 유발제 및 관련된 화합물과 조합된 지질 구조는, 이론에 구속되지 않으면서, 오직 단일 성분의 특성만을 갖지 않는 특이적 특성을 갖는 종류의 트랜스포터 분자 복합체를 형성한다는 것이 발견되었다. 본 발명에 따른 이러한 제형 중 지질-펩티드-유발제 분자-복합체는 당해 효과적 화합물을 당해 피부 세포, 예를 들어 CD90 양성 피부 세포의 미세환경 내로 당업계의 표준 미용 베이스 제형보다 훨씬 더 양호하게 명백히 수송한다.
더욱이, 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 는 상기 유발제와의 조합으로 본 발명의 지질 제형에서 그것이 부재하는 동일한 제형에서보다 조직 보호 및 항-염증에 관해 더욱 효과적 (약 2-3 배) 이라는 것이 밝혀질 수 있었다. 따라서, 유발제는, 바람직하게는 스핑고지질 또는 인지질 구조와의 조합으로 이러한 맥락에서 양성 및 향상 효과를 유발하고, 본 발명에 따른 조직 보호성 폴리펩티드의 용량의 감소를 가능하게 해준다. 본 발명에 따른 폴리펩티드에 의해 야기되는 요망되지 않는 부작용은 최소화될 수 있다.
이미 언급된 바와 같이, 이러한 제형 또는 조성물에서 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 는, 바람직하게는 이러한 폴리펩티드의 N-말단 및/또는 C-말단에서 공유 결합에 의해, 명시된 바와 같은 유발/이완제에 연결되어 향상된 조직 보호성 효능을 보이는 접합체 분자를 형성한다. 공유 결합에 의해 제공된 유발/혈관구조 이완제에 그렇게 근접하는 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 는, 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 및 유발/혈관구조 이완제를 공유 결합에 의해 함께 연결하지 않은 제형과 비교할 때, 적어도 5 - 50%, 바람직하게는 10 - 35% 만큼 추가로 더욱 효과적이다.
지질, 폴리펩티드 및 유발제 (여기에서 성분들은 혼합물로서 입수가능함) 로 구성되는 본 발명의 제형은 이미 매우 효과적이지만, 상기 성분, 바람직하게는 본 발명에 따른 폴리펩티드 및 유발제가, 공유적으로, 또는 적어도 이온 상호작용에 의해 함께 연결되는 경우에 피부-보호성 효과는 추가로 개선될 수 있다.
상기 본 발명의 미용 제형 또는 조성물에서 지질 화합물 또는 지질 구조는 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 와 혼합에 의해 또는 이온 상호작용 또는 반 데르 발스 힘에 의해 회합된다. 바람직한 구현예에서 지질 화합물은 따라서 단층 또는 이중층, 예컨대 조직 보호성 폴리펩티드가 포매 또는 캡슐화되어 있는 미셀 또는 리포솜 구조를 형성한다.
본 발명에 따른 조직 보호성 펩티드의 지질 환경의 기초는, 예를 들어, 인지질 화합물 예컨대 포스파티딜콜린, 또는 스핑고지질 화합물, 예컨대 세라미드에 의해 제공될 수 있다. 그러나 기타 지질 화합물 또는 구조가 적합하다. 지질 성분은 혈관 이완, 조직 재생/복구 및 경피 투과를 촉진 또는 향상시킨다.
일부 경우에, 지질 화합물 또는 지질 구조를 조직 보호성 폴리펩티드에 공유 결합에 의해 연결시켜, 당해 표적 세포로의 더 가까운 근접성을 제공하는 것이 유리할 수 있다.
본 발명에 따른 유발/혈관구조 이완제는 아미노산, 바람직하게는 L-형태의 아미노산, 예컨대 L-아르기닌, L-페닐알라닌, L-시트룰린 등을 포함한다. 동일 또는 상이한 아미노산의 2, 3 또는 4 개의 아미노산 단위로 이루어지는 폴리펩티드는 효과를 강화시킬 수 있다는 것이 발견되었다.
바람직한 구현예에서, 이러한 본 발명의 미용 제형에서 유발제는 아르기닌, 페닐알라닌, 라이신, 글루타민, 티로신, 트립토판, 발린, 프롤린, 시트룰린, 크레아틴, 타우린, 및 둘 이상의 동일 또는 상이한 상기 아미노산을 포함하거나 그것으로 이루어지는 폴리펩티드로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 또는 아미노산 유도체로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
1 개 초과의 단위를 포함하는 특이적 아미노산 실체는, 예를 들어 하기와 같다:
- 아르기닌, 또는 1 - 3 개의 아르기닌 분자로 이루어지는 펩티드,
- 시트룰린, 또는 1 - 3 개의 시트룰린 분자로 이루어지는 펩티드,
- 적어도 1 개의 L-아르기닌 및 1 개의 시트룰린 분자로 이루어지는 펩티드,
- 콜린 및/또는 비타민 B5, 및/또는 비타민 E, 및
- 적어도 1 개의 아르기닌 분자 및/또는 적어도 1 개의 L-시트룰린에 공유적으로 연결된 콜린 및/또는 비타민 B5, 및/또는 비타민 E 로 이루어지는 화합물,
- 페닐알라닌, 라이신, 글루타민, 티로신, 트립토판, 발린, 크레아틴, 또는 각각의 상기 아미노산 1 - 3 개로 이루어지는 폴리펩티드, 및
- 둘 이상의 상이한 상기 아미노산을 포함하는 폴리펩티드.
원칙적으로, 위에서 및 아래에서 명시된 바와 같은 본 발명에 따른 모든 조직 보호성 폴리펩티드는 본 발명에 따른 미용 제형에서 사용하기에 적합하다.
하나의 구현예에서, 본 발명에 따른 조직 보호성 폴리펩티드는 7 - 40 개의 아미노산 잔기로 이루어진다. 특히, 그것은 7 - 30, 또는 11 - 15 개의 아미노산 잔기로 이루어진다. 본 발명의 바람직한 조직 보호성 폴리펩티드는 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15 개의 아미노산 잔기를 포함한다.
예를 들어, 제형 및 조성물에서 및 본 발명에 따른 아래에서 명시된 접합체 분자에서 조직 보호성 폴리펩티드는 하기 알려진 아미노산 서열을 포함한다:
Figure 112019058050170-pct00002
또는 그의 단편.
폴리펩티드 SEQ ID NOs: 3, 5 및 7 은 인간 EPO 서열 (SEQ NO: 1) 의 단편이다. 기타 펩티드는 EPO 및 EPOR 의 경계면, 나선 구조/면에서 유래하거나, 또는 합성 또는 상이한 자연적 모티프를 포함하거나, 또는 전장 리간드 잠재적으로 바람직하지 않은 혈구생성 효과를 거의 또는 전혀 갖지 않는 타입 I 사이토카인 수용체 리간드의 단편과 공통 서열을 공유한다. (예를 들어 WO 2009/094172).
본 발명에 따른 미용 제형은 원칙적으로 또한 전장 EPO 서열과 함께 작용한다고 언급되어야 한다. 그러나 공개된 폴리펩티드의 사용은 상이한 이유로 더욱 유리하다.
추가의 구현예에서, 본 발명에 따른 미용 제형 및 접합체 분자는, 40 개 이하, 바람직하게는 20 개 이하, 및 7 개 이상, 특히 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15 개의 아미노산 잔기로 이루어지고, 에리트로포이에틴 수용체 (EpoR) 및/또는 공통 β 수용체 (βcR) 에 결합할 수 있고, 바람직하게는 5 개의 아미노산 잔기 LERAL 의 코어 서열을 포함하는 당해 조직 보호성 폴리펩티드를 포함한다.
바람직한 구현예에서, 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 는 11-머 (11-mer) 아미노산 서열 QEQLERALNSS (SEQ ID NO: 21) 의 변이체를 포함하거나 그것으로 이루어지며, 상기 아미노산 서열의 1 - 4 개의 아미노산 잔기, 바람직하게는 2, 3 또는 4 개의 아미노산 잔기는 보존적 또는 비-보존적 아미노산 잔기 치환에 의해 대체된다.
특히, 본 발명은 코어 서열 LERAL 을 포함하고, 서열 SEQ ID NO: 2 로부터 당해 돌연변이에 의해 유도되고, 하기 서열 식에 의해 제시되는 일반 아미노산 서열을 포함하거나 그것으로 이루어지는 단리된 폴리펩티드를 제공한다:
Figure 112019058050170-pct00003
식에서
X 1 , X 3 , X 4 는 서로 독립적으로 Q 또는 N 이고,
X 2 는 E 또는 D 이고,
X 5 , X 6 은 서로 독립적으로 S 또는 T 이고,
상기 폴리펩티드는 피부-보호성 활성을 갖고, 혈구생성 또는 적혈구생성 효능을 유발하지 않거나 본질적으로 유발하지 않음.
코어 서열 LERAL 및 코어 서열의 왼쪽 및 오른쪽의 각각의 서열 트리플렛 (X 1 X 2 X 3 ) 및 (X 4 X 5 X 6 ) 에 하나의 아미노산 치환을 갖는 변이체가 바람직하며, 그 이유는 그것이 우수하고 추가로 향상된 피부 조직 보호 효능을 유발하기 때문이다.
본 발명의 또다른 바람직한 구현예에서, 이러한 서열 (SEQ ID NO: 31) 의 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 변이체는 7 개의 아미노산의 코어 서열을 갖고 하기 일반 서열 식으로 제시되는 11-머 일반 아미노산 서열을 포함하거나 그것으로 이루어진다:
Figure 112019058050170-pct00004
,
식에서 X 1 , X 2 , X 5 , X 6 은 위에서 명시된 바와 같은 의미를 가짐.
이들 폴리펩티드는 본 발명에 따른 미용 제형을 사용하는 국소 미용 피부 처리에서 우수한 효능을 보이고 피부에 잘 순응한다는 것이 밝혀졌다.
일반 서열 식 SEQ ID NO: 31 에 속하는 폴리펩티드
Figure 112019058050170-pct00005
는 예를 들어 EP 2371855 로부터 비경구 적용되는 치료적 적용에서 조직 보호성 효과를 보이는 화합물로서 알려져 있다.
이러한 일반 서열에 속하는 하기 단리된 폴리펩티드는 본 출원의 발명자들에 의해 잘 연구되었다:
Figure 112019058050170-pct00006
.
이들 4 가지 아미노산 서열을 포함하거나 그것으로 이루어지는 폴리펩티드가 가장 유리하고, 본 발명의 바람직한 구현예에 해당한다. 이들은 "펩티드 0" 으로서 알려진 기준과 비교할 때 피부, 예컨대 여드름, 주름 또는 피부 파열의 미용 처리 및 심지어는 노화 방지에서 분명히 더 높은 효능을 보인다.
본 발명의 또다른 바람직한 구현예에서, 당해 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 변이체는 하기 7-머 아미노산 서열로 제시되는 7 개의 아미노산으로 이루어진다:
Figure 112019058050170-pct00007
,
식에서 X 3 , X 4 는 위에서 명시된 바와 같은 의미를 가짐.
본 발명의 또다른 바람직한 구현예에서, 당해 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 변이체는 하기 7-머 아미노산 서열로 제시되는 9 개의 아미노산으로 이루어진다:
Figure 112019058050170-pct00008
,
식에서 X 2 , X 3 , X 4 , X 5 는 위에서 명시된 바와 같은 의미를 가짐.
바람직한 본 발명의 미용 제형은 위에서 명시된 바와 같은 폴리펩티드 서열 중 적어도 하나를, 바람직하게는 적어도 하나의 유발/혈관구조 이완제 및/또는 지질 화합물 또는 지질 구조와 함께 포함한다.
제형 또는 조성물에 대안적으로, 본 발명은 미용 용도에 적합한 접합체 분자를 제공한다.
따라서, 본 발명의 하나의 양태에서, 공유 결합에 의해 적어도 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 와 유발/혈관구조 이완제 사이에 형성되는 접합체 분자가 제공된다.
두번째 양태에서, 공유 결합에 의해 적어도 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 와 지질 화합물 또는 지질 구조 사이에 형성되는 접합체 분자가 제공된다. 그리고 마지막으로, 공유 결합에 의해 적어도 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP), 유발/혈관구조 이완제, 및 지질 화합물 또는 지질 구조 사이에 형성되는 접합체 분자가 제공되며, 각각의 이들 대안물에서 접합체 분자의 성분은 위에서, 아래에서 및 청구항에서 명시된 바와 같이 적용된다.
위에서 이미 언급된 바와 같이, 그러한 접합체 분자를 포함하는 미용 제형에서 지질 환경, 예컨대 미셀 또는 리포솜, 또는 또다른 단층 또는 이중층 구조는 피부 세포로의, 바람직하게는 적격 표적-지향 세포, 바람직하게는 피부 조직의 CD90+ 세포로의 상기 조직 보호성 폴리펩티드, 및 임의로 그에 연결된 두번째 세포-활성제의 투과를 촉진하는 것이 가능하다. 접합체 분자의 지질 성분은 혈관 이완, 조직 재생/복구 및 경피 수송 및 투과를 또한 촉진 또는 향상시킨다.
또다른 양태에서, 공유 결합에 의해 적어도 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 와 유발/혈관구조 이완제 사이에 접합체 분자가 형성되며, 여기에서 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 는 위에서 및 청구항에서 제시된 아미노산 서열로 표시되는 폴리펩티드 중 하나이고, 유발제는 상기 세포에서 산화 질소 및/또는 아세틸콜린 생산을 직접 또는 간접 자극할 것이다. 이러한 접합체 분자에서, 상기 조직 보호성 폴리펩티드는, 바람직하게는 공유 결합에 의해, 상기 유발/혈관구조 이완제에 연결된다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 공유적으로 연결된 명시된 바와 같은 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 와 명시된 바와 같은 유발제 사이의 이러한 접합체 분자는 지질 화합물, 예컨대 포스파티딜콜린 또는 세라미드에 이온 상호작용 또는 반 데르 발스 힘에 의해 회합 또는 연결되거나, 또는 미셀 또는 리포솜 구조 내에 포매된다.
바람직한 구현예에서, 이러한 본 발명의 접합체 분자에서 유발/혈관구조 이완제는 하기로 이루어지는 군으로부터 선택된다:
- L-아르기닌, 또는 1 - 3 개의 L-아르기닌 분자로 이루어지는 펩티드,
- L-시트룰린, 또는 1 - 3 개의 L-시트룰린 분자로 이루어지는 펩티드,
- 적어도 1 개의 L-아르기닌 및 1 개의 L-시트룰린 분자로 이루어지는 펩티드,
- 콜린 및/또는 비타민 B5, 및
- 적어도 1 개의 L-아르기닌 분자 및/또는 적어도 1 개의 L-시트룰린 분자에 공유적으로 연결된 콜린 및/또는 비타민 B5 로 이루어지는 화합물,
- 페닐알라닌, 라이신, 글루타민, 티로신, 트립토판, 발린, 크레아틴, 또는 각각의 상기 아미노산 1 - 3 개로 이루어지는 폴리펩티드, 및
- 둘 이상의 상이한 상기 아미노산을 포함하는 폴리펩티드.
본 발명에 따른 접합체 분자는 하기 구조로 표시될 수 있다:
Figure 112019058050170-pct00009
식에서
P 는 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP), 바람직하게는 본원에 명시된 바와 같은 아미노산 서열 중 임의의 것의 폴리펩티드를 나타내고,
A 는 하나 이상의 동일 또는 상이한 유발제를 나타내고,
바람직하게는 A 는 L-아르기닌, L-시트룰린, 콜린, 비타민 B5 를 나타내고,
L 은 하나 이상의 동일 또는 상이한 지질 성분 또는 구조를 나타내고,
- 는 공유 결합을 나타내고,
Figure 112019058050170-pct00010
는 이온 상호작용 또는 반 데르 발스 힘을 나타내고,
n, n' 는 정수 0, 1, 2, 3, 4, 5 - 10 을 나타내고,
m, m' 는 정수 0 및 1 을 나타내고,
적어도 n 또는 n' 또는 m 또는 m' = 1 임.
본 발명에 따른 접합체 분자의 바람직한 구현예는 하기 군으로부터 선택될 수 있다:
P - 아르기닌
P - 아르기닌-아르기닌
P - 아르기닌-아르기닌-아르기닌
아르기닌 - P - 아르기닌
아르기닌-아르기닌 - P - 아르기닌-아르기닌
P - 콜린
P - 아르기닌 - 콜린 - 비타민 B5
P - 콜린 - 비타민 B5
P - 아르기닌-아르기닌 - 콜린
P - 아르기닌-아르기닌 - 콜린 - 비타민 B5
P - 시트룰린
P - 시트룰린 - 시트룰린
P - 아르기닌-아르기닌 - 시트룰린
P - 아르기닌-아르기닌 - 시트룰린 - 시트룰린
아르기닌-아르기닌 - P - 아르기닌-아르기닌 - 콜린
아르기닌-아르기닌 - P - 아르기닌-아르기닌 - 콜린 - 비타민 B5
시트룰린 - 아르기닌 - P - 아르기닌 - 시트룰린,
시트룰린 - 시트룰린 - 아르기닌 - 아르기닌 - P - 아르기닌 - 아르기닌 - 시트룰린 - 시트룰린,
시트룰린 - 시트룰린 - 아르기닌 - 아르기닌 - P - 아르기닌 - 아르기닌 - 시트룰린 - 시트룰린 - 비타민 B5,
여기에서 P 는 본원에 명시된 바와 같은 당해 조직 보호성 폴리펩티드를 나타내고, " - " 는 공유 결합을 나타내고,
특히 P 는 하기 아미노산 서열로 제시되는 폴리펩티드 중 하나를 의미한다:
Figure 112019058050170-pct00011
.
위에서 이미 개요서술된 바와 같이, 특정 아미노산 서열을 포함하는 위에서 및 청구항에서 명시된 바와 같은 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 는 위에서 및 청구항에서 명시된 바와 같은 유발제에 연결되어, 본 발명의 접합체 분자를 형성한다.
본 발명에 따른 바람직한 접합체 분자는 하기와 같다:
Figure 112019058050170-pct00012
,
식에서 R 은 유발/혈관구조 이완제이고, 바람직하게는 (L-아르기닌)n, (L-시트룰린)m, 콜린 및 비타민 B5 로 이루어지는 군으로부터 선택되고, n, m 은 서로 독립적으로 1 , 2 및 3 임.
본 발명의 결과는 하기와 같이 요약될 수 있다:
· 본원에 명시된 바와 같은 조직 보호성 폴리펩티드, 접합체 분자 및 제형은 표면적인 피부 층을 통해 능동적으로, 지원되는 방식으로 또는 수동적으로 투과하지 않는다.
· 피부의 하나 이상의 영역에서 제어되는 표적 수용력 또는 체류 선호도가 존재하고, 피부의 특정 세포에 대한 제어되는 표적화가 달성된다.
· 조직 보호성 폴리펩티드, 접합체 분자 및 제형은 단백질가수분해 붕괴의 유의하게 감소된 백분율을 갖고, 피부에 의해 잘 용인된다.
· 조직 보호성 폴리펩티드, 접합체 분자 및 제형은 그들의 기능을 피부의 표적에서 발휘할 수 있다.
· 피부 노화 또는 여드름 또는 UV 조사에 의한 피부 자극에 대한 미용 효과가 가시적이다.
· 보호 분자인, 본 발명의 조직 보호성 폴리펩티드, 접합체 분자 및 제형을 사용하여 암 개시의 위험이 반대로 전환된다.
· 다중인과관계 상호작용 및 상호작용하는 능력에 기반하고 본 교시에 모순되는 조직 복구 및 조직 재생을 달성하는 복합체 상호작용 유발 실체가 생성된다.
· 바람직하게는 세라미드 및/또는 포스파티딜콜린 또는 유사한 스핑고지질 또는 인지질에 기반하는, 본 발명에 따른 지질 조성물은 표준 미용 지질 제형과 비교할 때, 단독으로 및, 무엇보다, 명시된 바와 같은 유발/혈관구조 이완제와의 조합으로, 폴리펩티드의 피부 복구, 피부 재생 및 피부 회춘을 유의하게 지지한다.
새롭게 합성된 본 발명의 폴리펩티드 ("펩티드 1 - 4") 는 SEQ ID NO: 21 에 의해 표시되는 알려진 폴리펩티드 ("펩티드 0") 와 비교할 때 적어도 일부 생리적 및 물리적 특성에 관하여 향상된 효능을 보인다.
본 출원에서 사용되는 용어 "펩티드 접합체" 는 조직 보호성 펩티드 및 지질 화합물 및/또는 유발제 사이의 임의의 종류의 연결을 의미한다. 원칙적으로 연결은, 바람직하게는 펩티드와 유발제 사이의, 공유 결합이다. 그러나, 또한 지질 화합물이 본 발명에 따른 펩티드에 공유 결합을 통해 커플링될 수 있다. 본 출원에서 사용되는 용어 펩티드 - 접합체는 더 강한 이온성 또는 반 데르 발스 상호작용에 기반하는 두 개의 실체 사이의 결합을 또한 포함한다. 후자는 단층 및 이중층의 지질 구조, 예컨대 미셀 및 리포솜의 (자가)생성을 선호한다. 이 용어는 반 데르 발스 결합 (이온 상호작용) 에 의해 서로에게 연결된 펩티드 및 또다른 기능적으로 상이한 분자, 예를 들어 지질 화합물 및/또는 유발제에 의해 형성되는 기능적으로 효과적인 구축물을 표현적으로 포함한다. 일반적으로 펩티드 구조 내의 임의의 기능적 활성 기 (예컨대 -OH, -NH2) 는 당업계에 알려진 방법에 따라 지질 화합물 또는 유발/혈관구조 이완제의 기능적 활성 기와의 공유 결합에 의한 연결에 사용될 수 있다. 바람직하게는, 펩티드의 N-말단 및/또는 C-말단에서의 또는 거기서 가까운 부근에서의 당해 기가 결합에 사용된다.
본원에서 사용되는, 용어 "조직 보호성 펩티드" 는 표적화되는 조직에 세포 손상, 및 내부 및 외부 영향에 의해 야기되는 세포 노화에 대한 보호 효과를 유발하는 펩티드를 의미한다. 보호 효과는 조직 결함이 방지되거나 세포의 원래의 무손상 상태가 회복될 때 나타난다.
용어 "유발제" 또는 "유발/혈관구조 이완제" 는 혈관구조 이완을 자극하고/하거나 CD90 발현 피부 세포로의 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 의 수송을 지지하는 제제를 의미하고, 본 발명에 따라 선택된 아미노산, 바람직하게는 L-형태의 아미노산, 및 특정 비타민을 포함한다.
본원에서 사용되는, 용어 "EPO 변이체/유사체/단편/ 모방체" 는 선천 인간 에리트로포이에틴과 비교할 때 더 짧은 및/또는 상이한 아미노산 서열을 갖는 펩티드를 의미하고, EPO 수용체 (EpoR) 및 공통 β 수용체 (cβR) (이들 수용체는 이종수용체를 형성함) 에 결합하거나 그들과 상호작용한다. 그러한 펩티드는 조직 보호 또는 조직 재생 효능을 발휘하고, 혈구생성 효과를 발휘하지 않거나 유의한 혈구생성 효과를 발휘하지 않는다.
용어 "혈구생성 활성/효능" 은 혈액 세포 성분 예컨대 적혈구계, 림프계, 및 골수성 세포에서 임의의 유의한 증가를 의미한다. 추가로 혈구생성 활성은 단리된 펩티드 또는 펩티드 유사체가 혈관활성 작용 (예를 들어, 혈관 수축), 혈소판 과다활성화, 응혈 촉진 활성 및 혈소판 또는 에리트로포이에틴 의존성 세포의 증식 또는 생산의 자극으로부터 선택되는 활성을 보유하는지 여부를 나타낸다.
본원에서 사용되는, 포스파티딜콜린 (phosphatidylcholine) (PC) 은 콜린을 헤드 기로서 통합하는 인지질의 클래스이다. 더욱 상세히, 그것은 콜린 헤드 기 및 글리세로인산과, 다양한 지방산으로 구성된다. 일반적으로, 하나는　포화 지방산 (예를 들어 팔미트산 또는 헥사데칸산, H3C-(CH2)14-COOH; 또는 헵타데칸산 H3C-(CH2)15-COOH) 이고; 다른 하나는 불포화 지방산 (예를 들어 올레산, 또는 9Z-옥타데센산, 레시틴에서와 같음) 이다. PC 은 생물학적 막의 주요 성분이고,　여러 가지 쉽게 입수가능한 공급원, 예컨대 계란 노른자　또는　콩으로부터 용이하게 얻을 수 있다. 포스파티딜콜린은 섭취되는 보충제로 사용되었지만, 그것은 또한 국소 피부 크림에 성분으로서 포함되고, 더 매끄러운 피부를 생성하고, 피부의 수분 수준을 증가시키고, 피부 및 모발을 조절하고, 피부 재생을 지지하고, 콜린 및 리놀레산 둘 모두를 공급할 수 있다.
본원에서 사용되는, 세라미드는 스핑고지질의 일반적인 부류에 속하고, 피부의 주요 성분이고, 특히 각질층의 표피의 상부층에 존재한다. 그들의 위치 및 표피에서의 그들의 기능에 따라 여러 유형의 세라미드가 존재한다. 용어 세라미드는 지방산 또는 지방산 유도체에 그들의 아민 관능기를 통해 결합되는, 스핑가닌, 4-히드록시-스핑가닌 또는 파이토-스핑고신과 같은, 스핑고신 패밀리를 구성하는 지질만을 포함한다. 피부의 각질세포간 시멘트질의 지질, 및 특히 세라미드는 라멜라 이중 층, 또는 라멜라에 배열되고, 장벽 전체를 유지하는 목적을 위해 및 그것의 보호, 항-투과 또는 항-자극 역할 등을 유지하기 위해 각질층의 응집에 참여한다.
본원에서 사용되는, 리포솜은 수성 내부 구획을 벌크 수성 상으로부터 분리하는 지질 이중층으로 구성된다. 본원에서 사용되는 미셀은 지방산 코어 및 극성 표면, 또는 극성 코어와 표면 상의 지방산 (역 미셀) 을 갖는 폐쇄된 지질 단층이다.
본 발명의 EPO 펩티드를 포스파티딜콜린 및 세라미드에 결합시킬 때 무손상 피부를 통한 제어되는 투과 및 피부 내에서의 지속성이 놀랍게도 발견된다. 이것은 이온성 (반 데르 발) 상호작용 및 미셀 형성을 통해 본 발명에 따른 에리트로포이에틴 또는 EPO 펩티드에 연결되는 경우, 피부에서 EPO 유사체의 지질 층 지속성을 향상시키는 지질 구조이다. 이러한 조합은 피부층 내에서 지질 구조 및 국소적인 재흡수를 생성하지만 더 깊은 영역으로의 재흡수는 허용하지 않는다. 포스파티딜콜린, 레시틴 및 세라미드의 조합된 존재는 이러한 친유성 물리화학적 특성을 에리트로포이에틴 및 그것의 펩티드 유사체에 부가하며, 이는 그렇지 않으면 무손상 피부 내로 단백질 에리트로포이에틴의 무손상 피부 층의 접근성의 결여로 인해 부재할 수 있는 작용 방식이 일어나는 것을 허용하는 동시에 비특이적인 기울기 기반 분포를 허용하는 대신 피부 영역을 표적화한다.
본 발명의 조성물은 라멜라 구조를 형성하는 지질 성분을 함유하고, ~ 40%-50% 또는 그 이상의 농도에서도 비독성인 포스파티딜콜린, 레시틴, 세라미드 및 트리글리세라이드를 포함한다. 세라미드 및/또는 포스파티딜콜린은 본 발명에 따른 지질 조성물의 바람직한 성분이다 (5-70%).
본 발명의 폴리펩티드 접합체는 피부의 하나 이상의 영역에서 제어되는 표적 수용력 또는 체류 선호도를 제공하고 피부의 특정 세포에 대한 제어되는 표적화를 제공한다. 또한 이러한 층에서의 지속성 및 세포막에 대한 결합이 가능한다.
이것은 일반적으로 사용되는 EPO 유래 펩티드의 양을 100-400 단위/㎏ 체중에서 5-12 단위/㎏ 체중으로 또는 심지어 1 단위/㎏ 체중 미만으로 감소시키는 것을 허용하고, 약 100 ㎠ 의 특정 피부 영역을 표적화한다.
치료적 범위는 0.1-0.5 단위/㎏ 체중으로 내려가고 있지만, 안전하게 40 단위/㎏ 체중까지 확장될 수 있다. 따라서 이상적인 범위는 종래의 적용 형태의 0.1% 이하이다. 이는 약물 안전성과 EPO 및 그것의 유사체의 부작용의 감소에 유의하게 기여한다.
본 출원에서 사용되는 용어 "펩티드 접합체/접합체 분자" 는 조직 보호성 펩티드 및 지질 화합물 및/또는 유발제 사이의 임의의 종류의 연결을 의미한다. 원칙적으로 연결은, 바람직하게는 펩티드와 유발제 사이의, 공유 결합이다. 그러나, 또한 지질 화합물이 본 발명에 따른 펩티드에 공유 결합을 통해 커플링될 수 있다. 본 출원에서 사용되는 용어 펩티드 - 접합체는 더 강한 이온성 또는 반 데르 발스 상호작용에 기반하는 두 개의 실체 사이의 결합을 또한 포함한다. 후자는 단층 및 이중층의 지질 구조, 예컨대 미셀 및 리포솜의 (자가)생성을 선호한다. 이 용어는 반 데르 발스 결합 (이온 상호작용) 에 의해 서로에게 연결된 펩티드 및 또다른 기능적으로 상이한 분자, 예를 들어 지질 화합물 및/또는 유발제에 의해 형성되는 기능적으로 효과적인 구축물을 표현적으로 포함한다. 일반적으로 펩티드 구조 내의 임의의 기능적 활성 기 (예컨대 -OH, -NH2) 는 당업계에 알려진 방법에 따라 지질 화합물 또는 유발제의 기능적 활성 기와의 공유 결합에 의한 연결에 사용될 수 있다. 바람직하게는, 펩티드의 N-말단 및/또는 C-말단에서의 또는 거기서 가까운 부근에서의 당해 기가 결합에 사용된다.
본원에서 사용되는, 용어 "조직 보호성 펩티드" 는 표적화되는 조직에 세포 손상, 및 내부 및 외부 영향에 의해 야기되는 세포 노화에 대한 보호 효과를 유발하는 펩티드를 의미한다. 보호 효과는 조직 결함이 방지되거나 세포의 원래의 무손상 상태가 회복될 때 나타난다.
본원에서 사용되는, 용어 "EPO 변이체/유사체/단편/모방체" 는 선천 인간 에리트로포이에틴과 비교할 때 더 짧은 및/또는 상이한 아미노산 서열을 갖는 펩티드를 의미하고, EPO 수용체 (EpoR) 및 공통 β 수용체 (cβR) (이들 수용체는 이종수용체를 형성함) 에 결합하거나 그들과 상호작용한다. 그러한 펩티드는 조직 보호 또는 조직 재생 효능을 발휘하고, 혈구생성 효과를 발휘하지 않거나 유의한 혈구생성 효과를 발휘하지 않는다.
또한 EPO 의 조직 특이적 효과 및 그에 따른 조직 보호 및 재생 분자로서의 그것의 요망되는 조직 재생 활성을 달성하는 것은 본 발명에 따라 표적 영역에 도달하는 능력에 연결될 뿐만 아니라 아주반트의 단일 또는 복합체 혼합물인 소위 "구경꾼" 또는 EPO 및 그것의 유사체와 화학적으로 또는 구조적으로 독립적인 또는 적어도 상이한 공동-신호 상에서이다.
이러한 단일-인과관계의 결여는 단일 분자 단독으로서 EPO 의 사용의 하는 경우 무손상 및 또는 심지어는 개방된 피부 (상처) 적용에서 실패 또는 제한된 기능을 초래했다. 상이한 분자 (단일 개체 또는 복수의 개체) 에 대한 연결 조건에서 직렬, 삼중, 사중 및 추가 다중의 이러한 비로서 에리트로포이에틴 및/또는 그것의 유사체의 새로운 제형을 제조함으로써 이들 제한을 극복하는 것이 본 발명의 목적이다. 이들 분자는 화학적으로 가역적으로 또는 비-가역적으로 연결될 수 있거나 또는 미셀 방식 또는 캡슐화 형태로 사용되거나 또는 EPO 은 담체 분자, 나노- 또는 마이크로구조에 가역적으로 또는 비-가역적으로 결합된다.
붕괴에 대한 저항성 뿐만 아니라, 무손상 피부 또는 특이적 표적화된 조직에서 제어가능한 동적 이용가능성을 생성하고, 알려지지 않은 활성 또는 종래에 가능하지 않았던 활성을 촉발시키는 동시에 사용의 특이성 및 안전성을 증가시키는 다수의 이점이 존재한다. 이러한 방법론 (사용 방법) 또는 새로운 복합체 화학적 실체는 피부에 뿐만 아니라 선택된 특화 및 전략에 따라 인간 또는 동물 신체 내부의 더 깊은 이종성 내부 표적에도 적용가능하다.
비타민은 본 발명의 조직 보호성 펩티드 접합체를 포함하는 에리트로포이에틴 구조와의 조합으로 이온성 결합을 겪고, 캐스케이드 활성을 유발하는데 관련된다. 조직 복구에 대한 유도되는 표적화가 가능하지 않은 경우에 EPO 또는 그것의 유사체의 조직 보호 특성은 효과적일 수 없다. 특히 노화된 피부 또는 개방 상처에서도 EPO 단독은 활성을 보일 수 없다.
따라서 본 발명에 따른 펩티드 접합체의 비타민 A 와의 조합은 신경원성 재생을, 비타민 B1-6 와의 조합은 영양 재생을, 비타민 C 와의 조합은 뉴런 발아 및 상처 봉합을, 그리고 비타민 B12 와의 조합은 항-염증 활성을 지지한다.
모든 이들 활성은 예 또는 아니오 답변을 유발한다. 이는 이들 분자의 조합된 존재가 방아쇠를 예로 돌리는 것을 의미하며, 인자 중 하나 단독은 그것만으로는 이러한 효과를 달성할 수 없으며, 이러한 세포 표적을 "아니오" 답변으로 남겨 둔다.
따라서 본 발명에 따르면 국소 미용 적용에서 피부 보호 효과를 향상시키기 위해서 위에서 및 청구항에서 명시된 바와 같은 조직 보호성 펩티드를 비타민 예컨대 비타민 A, B1-6, B12, 및 C 와 조합하는 것이 유리하다.
유리한 적용은 광채나는 피부의 개선 및 혈관의 이완에 의한 피부 복구의 촉진을 포함한다. 이는 당해 피부 세포에서 산화 질소의 이용가능성을 유발하는 다양한 제제에 의해 달성될 수 있다.
산화 질소는 다양한 산화 질소 신타아제 (NOS) 효소에 의해 L-아르기닌, 산소, 및 NADPH 로부터 내생적으로 생합성된다. 혈관의 내피는 산화 질소를 사용하여 주변 평활근에 이완하라는 신호를 보내서, 혈관 확장 및 증가하는 혈류를 초래한다. 반대로, L-아르기닌은 대사되어 산화질소를 방출한다. 산화 질소 (NO) 는 구아닐일 사이클라아제를 지속적으로 자극하여 cGMP 를 생성한다. cGMP 는 혈관구조 벽에 있는 근육 세포의 이완을 유도한다. 이는 또한 나머지 펩티드 구조에 의해 표적화되는 CD90+ 세포의 위치이다. 구조가 피부를 투과하고 피부의 혈관구조 영역에 도달하게 하는 것은 포스파티딜콜린 및 세라미드 복합체이다.
이러한 목적을 위해 L-아르기닌은 본 발명의 조직-특이적 펩티드에 연결되고/되거나 미셀 또는 리포솜 구조로 포스파티딜콜린 및/또는 세라미드와 혼합되어, 본 특허 출원에서 공개된 바와 같은 펩티드 접합체를 수득할 수 있다. 본 발명의 미용 제형에 상기 펩티드 접합체에 더하여 유리 L-아르기닌 및 기타 아미노산을 첨가하는 것이 또한 유리하다.
아르기닌 뿐만 아니라 기타 아미노산, 예컨대 L-페닐알라닌, L-라이신, L-트립토판, L-프롤린, L-글루타민은 상기 지질 화합물, 바람직하게는 세라미드, 및 포스파티딜콜린 (레시틴) 과 혼합되어 특정 피부 세포, 본원에서 CD90 양성 피부 세포의 미세환경에 대한 가까운 인접성을 제공하고, 그들을 본 발명에 따른 조직 보호성 폴리펩티드와 같은 표적화 분자에 민감하게 만든다는 것이 놀랍게도 밝혀졌다. 흥미롭게도, 피부 미용을 위해 사용되는 표준 지질 제형에 비해, 본 발명에 따른 지질 제형은 단독으로 CD90 세포 표적화 펩티드 없이 이미 조직 보호성이다 (사용되는 표준 지질 조성물에 따라 동일한 조건 하에 표준 지질 조성물에 비해 5-15% 개선). 그러나, 본 발명에 따른 조직 보호성 폴리펩티드와의 조합으로, 이러한 효과는 상기 조직 보호성 펩티드가 없는 본 발명의 지질 조성물에 비해 10% 까지 추가로 향상되고, 미용 처리에서 통상 제공되는 당해 조직 보호성 폴리펩티드가 없는 표준 지질 조성물에 비해 25% 까지 추가로 향상된다. 이들 제형 혼합물의 효과는 본 발명에 따른 접합체 분자 (여기에서 조직 보호성 폴리펩티드는 유발제, 예컨대 당해 아미노산 분자, 예컨대 L-아르기닌에 공유 결합에 의해 연결됨) 에 의해 달성될 수 있는 것과 비슷하다. 그러므로 본 발명에 따른 접합체 분자는 표준 미용 제품에서 사용되는 지질 조성물과 함께 제형화되는 경우에 접합체 분자의 두 가지 당해 성분의 혼합물에 비해 오직 이점을 제공하지만, 접합체 분자의 사용은 종종 불필요하고 본 발명에 의해 공개되는 지질 화합물/조성물이 사용될 때 접합체 분자의 성분들의 혼합물에 의해 대체될 수 있다.
이 영역에서 혈관은 국소적으로 이용가능한 cGMP 를 제공함으로써 국소적으로 존재하는 포스포디에스테라아제에 대한 효과를 길항시킨다. 이러한 유리한 미세환경은 피부에 더 양호하게 영양을 공급하기 위해서 유도가능하다. 그러나 개선된 혈관구조 영양소 및 산소 공급 뿐만 아니라 폐기물 제거로 인해 상보적 미세환경 인자는 국소 영역에 더 잘 도달할 수 있으므로, 본 발명의 이중 효과는 국소 CD90+ 조직 복구 활성의 극적인 증가이다.
이미 언급된 바와 같이, 피부 조직 표적화에 대한 EPO 및 EPO 유사체, 예컨대 본 발명의 당해 펩티드 및 펩티드 접합체의 효과는 지질 구조 예컨대 포스파티딜콜린 또는 세라미드에 결합 또는 포매되는 경우에 유의하게 향상된다. 글루코스 등의 당 분자가 본 발명에 따른 제형에 제공되는 경우에, 유사한 효과가 관찰될 수 있다. 이것에 의해, 분자는 분자 상에 백팩처럼 놓여지고, 그 후 신체 내부에 (당) 또는 피부 내로 우선적으로 수송된다. 이것은 더 작은 양을 사용하고 뇌 또는 근육 뿐만 아니라 염증 영역과 같은 에너지 소비 조직을 표적화하는 것을 허용한다. 당 실체는 EPO 및 그것의 유사체를 높은 대사 활성을 갖는 조직 예컨대 뇌 또는 근육으로 수송한다.
L-아르기닌은 대사적으로 다용도인 아미노산 중 하나이다. 산화 질소의 합성에서의 그것의 역할에 더하여,　L-아르기닌은 폴리아민, 프롤린, 글루타메이트, 크레아틴, 아그마틴 및 우레아의 합성을 위한 전구체로서의 역할을 한다. 여러 인간 및 실험 동물 연구는 외인성　l-아르기닌 섭취는 보통의 식이 소비보다 많은 용량으로 섭취될 때 여러 가지 유익한 약리 효과를 갖는다는 것을 보여줬다. 그러한 효과는 혈관 및 심장 질환의 위험의 감소, 발기 부전의 감소, 면역 반응의 개선 및 위산 과다증의 저해를 포함한다. 그러나, l-아르기닌에 대한 현재의 관심은 주로 중요한 신호 분자 산화 질소 (NO) 와의 그것의 밀접한 관계에 초점을 두고 있다. l-아르기닌은 신경 전달, 혈관이완, 세포독성 및 면역력을 포함하는 인체의 다양한 생리적 과정에서 중요한 역할을 하는, NO 의 생합성에서의 유일한 기질이다. 아르기닌, 바람직하게는 L-아르기닌은 본 발명에 따라 펩티드에 정면에 및 말단에 및 또한 예를 들어 1 내지 10 개 이상의 분자, 바람직하게는 1 - 3 개의 다수의 아르기닌으로서 첨가된다.
콜린은 아세틸콜린의 합성에 사용된다. NO 이외의 이러한 분자는 평활근 세포 이완에 관여한다. 따라서 혈관구조 벽에서 CD90+ 세포 표적화는 아르기닌의 조합된 효과를 향상시킨다. 비타민 B5 는 아세틸콜린 신경 전달 물질을 만들기 위해 콜린의 대사에 필수적이다. 그러므로, 콜린의 효과는 그것을 비타민 B5 와 조합하여 향상될 수 있다. 요힘빈 (C21H26N2O3) 은 매끄러운 혈관 세포에서 알파 2 아드레날린성 수용체를 차단하여 혈관구조 이완을 초래하는 천연 화합물이다. 요힘빈은 본 발명에 따른 구조의 포스파티딜콜린, 세라미드 또는 지질 부분에 첨가될 수 있다.
본 발명에 따른 본원에 공개된 바와 같은 폴리펩티드 접합체 분자 및 단리된 폴리펩티드는 피부에 적용되는 국소 제형으로 바람직하게는 0.001 내지 9.999 ㎍ 의 EPO 유래 조직 보호성 펩티드/㎠ 범위, 더욱 바람직하게는 20 내지 50 단위/㎠ 범위, 그러나 이상적으로는 100 단위/㎠ 이하로 사용될 수 있다. 더 높은 농도에서 미세혈관신생이 관련 부작용으로 유도된다.
본 발명에 따른 폴리펩티드의 합성:
본 발명의 조직 보호성 폴리펩티드는 화학적 합성을 수반하는 것 및 폴리펩티드를 생산하는 세포로부터의 정제를 수반하는 것을 포함하는 표준 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 폴리펩티드의 화학적 합성 기술은 당업계에 잘 알려져 있다 (예를 들어, Vincent, Peptide and Protein Drug Delivery, New York, N.Y., Decker, 1990 참조). 세포로부터의 폴리펩티드 정제 기술은 아래 제공된 실시예에 예시되어 있다. 정제 기술의 추가적인 예는 당업계에 잘 알려져 있다 (예를 들어, Ausubel, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley, 1987-2002 참조). 세포로부터 폴리펩티드를 얻는 것은 폴리펩티드를 생산하는 재조합 핵산 기술을 사용하여 촉진된다. 폴리펩티드를 생산하기 위한 재조합 핵산 기술은 폴리펩티드를 코딩하는 재조합 유전자를 세포에 도입, 또는 생산하고 폴리펩티드를 발현시키는 것을 수반한다. 재조합 유전자는 폴리펩티드 발현을 위한 조절 요소와 함께 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 함유한다. 재조합 유전자는 세포 게놈에 존재할 수 있거나 또는 발현 벡터의 일부일 수 있다. 세포에서 재조합 유전자의 발현은 발현 벡터의 사용을 통해 촉진된다. 바람직하게는, 재조합 유전자에 더하여 발현 벡터는 숙주 세포에서의 자율 복제를 위한 복제 원점, 선별 마커, 제한된 수의 유용한 제한 효소 부위, 및 높은 카피 수에 대한 잠재성을 포함한다.
본 발명의 일부 조직 보호성 폴리펩티드의 관용 어세이
달력 제 35 주에 30 명의 피험자에게 패치 시험을 수행했다. 그 후 처리된 피험자 30 명 중 22 명은 달력 제 39 주에 동일한 영역에서 이러한 패치 시험을 반복했다. 펩티드 0-4 를 포함하는 본 발명에 따른 동일한 지질 조성물로 반복적으로 처리된 22 명의 피험자에 추가적으로, 이 시험에 추가적 피험자 (신규) 가 합류했다. 이 연구의 목적은 첫번째 처리 후 2, 3 및 4 주 후에 시험 물질에 대한 2 차 피부 자극 알레르기 감작을 검출하는 것이었다. 시험 물질은 동일한 농도의 펩티드를 피부에 적용하여 적용되었다. 패치는 패널리스트의 피부와 시험 물질의 접촉을 국소 영역으로 제한하고, 폐쇄 조건으로 인해 노출이 과장된다. 피부를 24, 48 및 72 시간에 검사했다.
결론: ICDRG (International Contact Dermatitis Research Group) 의 국제적으로 인정된 가이드라인에 따라 24 h, 48 h 및 72 시간 동안 패치 시험을 수행한 후에 30 명 중 임의의 패널리스트의 시험 영역에서 어떠한 피부 질환의 증거도 발견되지 않았다. 또한, 2 차 자극을 받은 22 명의 피험자 중에서도 그러했다. 제품의 사용이 2 차 (반복적) 자극 효과로 인한 원치 않는 피부 반응을 전혀 야기하지 않을 것이라는 결론을 내릴 수 있다.
본 발명에 따른 미용 시험에서 사용되는 폴리펩티드:
합성 펩티드:
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EPO-단편:
Figure 112019058050170-pct00014
및 전장 EPO.
미용 적용 시험 (일반):
맹검 관찰에서 20 명의 사용자 케이스 중 45% 는 개선된 주름 감소 (56%), 온도기록 열 측정에 의해 당해 영역에서 입증되는 증가된 혈류 (35% 증가), 및 따라서 혈관구조 회춘의 지속적인 개선을 보였다. 응용 분야는 입술의 광채를 증가시키는 피부를 위한 미용 제형인 광채를 증가시키는 피부 밤이다. 발기 부전에 관한 남성 건강 영역의 또다른 응용 분야에서, 크림은 음경의 피부에 국소적으로 도포되고 혈관구조 복구 및 혈관구조 유입을 목표로 한다.
이러한 효과를 강화시키기 위해, 상당한 양의 아르기닌 (10 - 100 ㎎/g 제형) 이 첨가되었다. 이러한 조합된 접근법의 이점은 CD90+ 약물 치료 및 피부 미용, 회춘 뿐만 아니라 더 높은 농도에서 발기 부전의 혈관구조 결손을 복구하기 위한 혈관구조 공급 효과이다.
본 발명에 따라 효능을 개선하기 위해 자연적인 산화 질소 형성 및 피부 내 이용가능성을 증가시키는 자연 유래 화합물과 펩티드 접합체를 조합하는 것이 또한 가능하다. 본 발명에 따른 미용 제형은 바람직하게는 비타민, 예컨대 비타민 C, D, E, A 및 B12, 및 천연 식품 공급원, 예컨대, 예를 들어, 시금치, 사탕무, 샐러리, 마늘, 아루굴라 상추, 아이스버그 상추, 당근, 파슬리, 양배추, 무, 콜라드 그린, 포도씨 추출물, 테스토스테론이 에스트로겐으로 전환되는 것을 차단하는 천연 물질, 프로시아니딘 그룹에서 유래하는 화합물이 강화될 수 있다. 따라서, 질소 내피 배출량은 200% 만큼 증가될 수 있고, 자연적 광채, 피부 회춘 및 복구는 유의하게 (대조군에 비해 45%) 향상되었다.
미용 제형에 추가로 아주반트 및 첨가제를 첨가하여 본 발명에 따른 조직 보호성 펩티드 및 펩티드 접합체의 기재된 효과를 확대 또는 향상시킬 수 있다. 그러한 제제는, 예를 들어 하기와 같다:
· 피크노제놀 또는 Q10 (코엔자임)
· 인삼 추출물,
· 퀘르세틴 추출물, 즉 플라보노이드, 레스베라트롤, 프로시아니딘, 탄닌, 차 카테킨, 게니스테인은 피부의 산화 질소 수준을 증가시킨다. 피페린은 레스베라트롤 (후추 추출물) 을 향상시킨다. 피부 식품 케르세틴 추출물은 예를 들어 양파, 마늘, 향신료, 사과, 포도 및 적포도주 (자연적 공급원으로서), 견과류, 및 시금치로부터 수득된다. 연어, 목초로 사육한 붉은 고기, 동물 기관, 달걀 노른자는 합성에 대안적인 공급원이다.
· 니아신은 산화 질소 신타아제, 및 따라서 기준선 NO 수준을 증가시킨다.
· 카이엔 고추 (또는 다른 핫 칠리) 로부터의 알칼로이드 추출물.
· 산화 질소를 증가시키기 위한 항산화 물질이 풍부한 카페인 없는 커피 추출물.
· 생 카카오는 실제로 다른 많은 NO 부스팅 항산화 물질과 함께 피크노제놀 및 포도씨 추출물 (프로토시아니딘) 과 동일한 산화 질소 부스팅 활성 화합물을 함유한다.
· 이카리인은 허브 (에피메디움, 흥분 염소 잡초) 의 플라보노이드이다. 허브는 본 발명에 따라 피부에 직접적으로 테스토스테론 강화 활성을 부여할 수 있도록 국소적으로 첨가된다. 이카리인은 산화 질소 생산을 지지하고, 포스포디에스테라아제 5 (PDE-5) 의 중간 저해제이다.
· 오메가-3' 및 오메가-6' 지방산은 로션에 첨가되는 경우에 항-염증 기능을 지지하고, 혈류 및 산화 질소 수준을 증가시킨다.
펩티드 전달 제형
이러한 혁신의 제형은 임의의 크림 또는 로션과 조합될 수 있다. 그 목적을 위해, 종래의 크림 또는 로션 (최종 99% 질량/질량) 을, '유발 인자 복합체' 로서 언급되는, 본 발명의 조직 보호성 폴리펩티드, 명시된 바와 같은 하나 이상의 유발/이완제 및 본원에 기재된 스핑고지질 또는 인지질에 기반하는 지질 화합물 또는 구조 (0.5 - 3%, 예를 들어 1% w/w) 를 포함하는 조성물과 혼합한다. 최종 혼합물 중 작은 분율로 인해, 유발 인자 복합체는 크림 또는 로션의 전체적 물리적 특성, 예를 들어 에멀전 안정성 또는 보습 특성을 변화시키지 않는다.
유발 인자 복합체는 하기 성분을 감소하는 농도로 함유한다: 물, 에탄올, 글리세롤, 비타민 E 아세테이트, 수소첨가된 레시틴, 콜레스테롤, L-아르기닌, L-페닐알라닌, L-라이신, L-알라닌-글루타민, L-트립토판, L-티로신, L-발린, L-프롤린, L-타우린, 세라미드 NG, 세라미드 NP, 올레산, 팔미트산, 소듐 아스코르베이트, 페녹시에탄올, 겨자씨유, EDTA, 올리고펩티드.
예를 들어, 유발 복합체는 하기로 구성된다 (표 1)
Figure 112019058050170-pct00015
본 발명은 로션에 기반하는 펩티드 전달 제형 (낮은 지질 함량) 및 크림에 기반하는 제형 (높은 지질 함량) 을 포함한다. 크림은 전형적으로 건조한 피부에 최적이며, 그 이유는 피부를 촉촉하게 유지하는 것을 돕기 때문이다. 로션은 기름기가 더 적고, 피부에 더욱 쉽게 흡수되고, 정상 피부에 최적이다. 그러나, 본 발명에서 제시되는 조직-보호 및 유발/혈관구조 이완제와의 조합으로 로션 및 크림은 둘다 최적 전체적 피부 개선을 위해 최적화된다. 결과적으로, 조직 보호성 펩티드 전달 제형은 크림 또는 로션에 제한되지 않고, 피부 유형에 따라 선택될 수 있다.
NDS 크림: NDS 크림은 크림 베이스 (99% 질량/질량) 및 유발 인자 복합체 (1% 질량/질량) 로 이루어진다.
크림 베이스: 크림 베이스는 물, 헬리안투스 안누우스 (helianthus annuus) 종자유, 펜틸렌 글리콜, 스쿠알렌, 옥틸도데카놀, 아르가니아 스피노사 커넬 오일, 에틸헥실 스테아레이트, 페르세아 그라티시마 (persea gratissima) (아보카도) 오일, 트리베헤닌, 폴리글리세롤-3 폴리리시놀레에이트, 소르비탄 올레에이트, 시어 버터, 소르비톨, 오에노테라 비엔니스 (oenothera biennis) (달맞이꽃) 기름, 및 토코페릴 아세테이트를 함유한다.
iARP 로션: iARP 로션은 로션 베이스 (99% 질량/질량) 및 유발 인자 복합체 (1% 질량/질량) 로 이루어진다.
로션 베이스: 로션 베이스는 물, 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드, 펜틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 수소첨가된 포스파티딜콜린 및 글리세린을 함유한다.
cerasome 9041: Cerasome 9041 은 lipoid GmbH 로부터 구입했고, 다음 표에 따른 성분을 함유한다 (표 2)
Figure 112019058050170-pct00016
PEPHA® AGE: Pepha AGE 는 세네데스무스 루베센스 (Scenedesmus rubescens) (담수 녹색 조류) 추출물이고, DSM Nutritional Products GmbH 로부터 구입했다. 이러한 추출물은 콜라겐 III 의 생산을 향상시키고 일광화상-유도되는 피부 손상을 약화시키는 것으로 알려져 있다. 추출물은 아미노산, 비타민 B3, 조류 당류 및 아연을 포함한다.
효능 시험
인간 피부 환경에서 본 발명의 제형의 효능을 평가하기 위해, 홍반 회복 어세이 및 미용 피부 개선 어세이를 수행했다.
미용 피부 개선 어세이:
이 어세이에서, 본 발명의 제형의 적용시 미용 안면 피부 외관을 모니터링했다. 그 목적을 위해, 상업적으로 입수가능한 첨단 안면 피부 이미징 및 데이터 분석 플랫폼인 Canfield Bio Visia™ 를 이용했다 (여기를 참조: https://www.canfieldsci.com/imaging-systems/visia-complexion-analysis/ ). 이 플랫폼은 i) 고도로 표준화된, ii) 높은 재현성, iii) 정량적, iv) 비침습성, 및 vi) 피험자 또는 시험자 편견이 없는 피부 특성 분석의 가능성을 제공한다. 그것은 상이한 각도에서 얼굴의 여러 사진을 기록하고, 흡수/반사 스펙트럼을 기록한다 (도면 참조: Canfield VISIA 안면 피부 분석 플랫폼). 이 데이터를 사용하여, 플랫폼은 '반점', '주름', '모공', '매끄러움', 'UV 반점', 및 '갈색 반점' 을 포함하는 피부 특성의 여러 파라미터를 정량화한다 (도면 참조: 피부 파라미터 1-3). 내장형 소프트웨어는 피부 특색 표준의 대형 데이터베이스와 비교하여 모든 파라미터를 표준화하고, 개별 피험자간 비교를 허용하기 위해 0% - 100% 범위의 값을 반환한다.
건강한 피험자는 본 발명의 제형 또는 대조군을 함유하는 미용 크림을 맹검 방식으로 받았으며, 즉 피험자는 제공된 미용 크림의 정체를 알지 못했다. 피험자는 하루에 한 번 저녁에 크림을 적용하고 얼만큼 적용할지에 대해 지시받았다. 피험자 피부 특성을 적용의 시작 전 및 1 개월 후 (31 ± 3 일) 에 평가했다. 대조군으로서, 계절 및 생활방식 변화와 관련된 피부 특성 변화를 설명하기 위해, 손 외부 표면의 품질도 모니터링했다. 미용 처리 및 내부 대조군을 위해 얼굴의 왼쪽 및 오른쪽을 사용하는 가설적인 옵션을 사용하여 주요한 교란요인로서 피험자 순응을 배제하지는 않았다. 예를 들어, 비-순응 피험자는 단지 얼굴의 양쪽 반면 (half) 에 크림을 바르고, 실수로 적용 및 대조군 반면을 바꾸거나, 또는 또다른 화장품을 대조군 측에 적용하기로 결정할 수 있다. 대조군 측에서는 아니지만 적용 측에서는 적용-유도되는 피부 특성의 현저한 개선이 기이한 전체적 얼굴 외관에서 분명해질 수 있었으며, 그에 따라 그러한 어세이 지침을 따르지 않는 피험자에게 강한 인센티브를 제시할 수 있었다. 그럼에도 불구하고, 외부 손 표면 피부 특성은 모든 피험자에서 통계적으로 유의하게 변화하지 않았으며, 이는 어세이 지속시간이 전체적 피부 특성의 임의의 생활방식 또는 계절 변화와 상관 관계가 없음을 시사한다.
대조적으로, 본 발명의 제형의 적용은 대조군에 비해 피부 특성을 통계적으로 유의하게 개선시켰다. 각 피험자 및 파라미터에 대해 데이터가 쌍을 형성하므로 (적용 전, 1 개월 후), 차이 (1 개월 후 파라미터 값 - 적용 전 파라미터 값) 는 피험자내 정규화를 허용하고, 양호한 피험자간 비교가능성을 허용한다. 덱스판테놀, 비타민 B5 의 프로비타민은 미용 피부 관리 크림 및 의료용 피부 처리 둘 모두에 일반적으로 사용되고, 또한 피부에서 조직 보호성 효과를 발휘한다. 따라서 그것은 대조군 기준으로 선택되었다. 그러나, 본 발명의 진보된 펩티드-전달 제형은 측정된 피부 파라미터, 예컨대 반점, 주름 및 매끄러움을 개선함에 있어서 더 우수하게 수행했다 (도면 참조). 더욱이, 본 발명의 조직 보호성 펩티드 (NEQLERALNST, NEQLERALNTS, QDQLERALNST 또는 QDQLERALNTS) 를 함유하는 제형은 전술한 QEQLERALNSS 펩티드를 함유하는 제형보다 훨씬 우수하게 수행했다. 예를 들어, 본 발명의 4 가지 신규한 조직 보호성 펩티드 중 임의의 하나를 함유하는 제형은 QEQLERALNSS 펩티드를 함유하는 제형보다 더 큰 정도로 반점을 통계적으로 유의하게 감소시켰다.
도면 1: 시험된 폴리펩티드 (펩티드 0, 1, 2, 3 및 4) 의 효능을 보여준다. 반점 및 주름 파라미터는 제형 적용 1 개월 후에 변화한다. 반점 및 주름의 감소는 미용 유익이다. 막대는 평균 변화 및 평균 변화의 표준 편차를 나타낸다. GraphPad Prism 7 에서 일방 ANOVA 를 사용하여 통계적 분석을 수행했다. 유의성 수준은 0.05 (*) 및 0.01 (**) 이다. 덱스판테놀 (최종 5% 질량/질량) 및 펩티드를 크림에 의해 전달했다.
도면 2: 시험된 폴리펩티드 (펩티드 0 , 1, 2, 3 및 4) 의 효능을 보여준다. UV 반점, 갈색 반점, 모공 및 매끄러움 파라미터는 제형 적용 1 개월 후에 변화한다. UV 반점, 갈색 반점 또는 모공의 감소 및 매끄러움의 증가는 미용 유익이다. 막대는 평균 변화 및 평균 변화의 표준 편차를 나타낸다. GraphPad Prism 7 에서 일방 ANOVA 를 사용하여 통계적 분석을 수행했다. 유의성 수준은 0.05 (*) 및 0.01 (**) 이다. 덱스판테놀 (최종 5% 질량/질량) 및 펩티드를 크림에 의해 전달했다.
홍반 연구:
임의의 제형에 의해 발휘되는 조직-보호의 효능을 측정하는 또다른 수단은 UVB 광-유도되는 홍반 예컨대 일반적 일광화상으로부터의 피부 회복의 속도이다. 홍반은 피부의 복구 과정과 관련되는 국소 충혈 (표면 모세 혈관에서의 혈류 증가) 로 인한 피부의 발적이 증가되는 피부 자극이다. 복구 과정이 빠를수록, 충혈이 더 빨리 종료되므로, 피부 발적이 더 빨리 정상 수준으로 감소된다. 따라서, 발적은 피부의 손상 상태에 관한 대용물로서 측정될 수 있다.
이러한 어세이에서, 건강한 피험자는 왼쪽 팔에 약 1×1 ㎠ 의 피부 영역에 두 배의 최소 홍반 용량 (MED) 을 받았다. 사전에, MED 은 Waldmann UV 802 L 장치의 UV6 램프 (280-360 ㎚) 에 의해 방출되는 UV 광의 증가하는 강도에 기타 피부 영역을 노출시킴으로써 각 피험자에 대해 개별적으로 결정되었다.
두 배의 MED 에 노출 직후에 각각의 1×1 ㎠ 영역을 20 ㎕ 의 제형으로 처리하거나 또는 처리하지 않고 놔두었다. 이 어세이에서 사용한 제형은 로션에 의해 전달된 덱스판테놀 (5% 질량/질량) 또는 조직 보호성 펩티드 (QEQLERALNSS, NEQLERALNST, NEQLERALNTS, QDQLERALNST, 또는 QDQLERALNTS) 였다. 덱스판테놀, 비타민 B5 의 프로비타민은 미용 피부 관리 크림 및 의료용 피부 처리 둘 모두에 일반적으로 사용되고, 또한 피부에서 조직 보호성 효과를 발휘한다. 따라서 그것은 대조군 기준 처리로서 선택되었다.
광 2 배 MED 노출 전 및 6 시간 후에, Konica Minolta 에 의해 제조된 '색도계 CR-400' 을 사용하여 노출된 부위에서 피부 발적을 분광적으로 측정했다. 노출 6 시간 후 모든 피험자의 모든 영역의 발적을 측정된 발적 값으로 나누어서 노출 전의 동일한 영역의 발적으로 정규화했다.
모든 시험된 크림은 미처리 피부와 비교할 때 2 배 MED-유도되는 피부 발적 (홍반) 을 제한했다. 조직 보호성 펩티드 QEQLERALNSS 와 조합된 본 발명의 펩티드-전달 제형은 덱스판테놀보다 더욱 효율적으로 홍반을 제한했다. 더욱이, 본 발명의 조직 보호성 펩티드 (NEQLERALNST, NEQLERALNTS, QDQLERALNST 또는 QDQLERALNTS) 를 함유하는 제형은 상술된 QEQLERALNSS 펩티드를 함유하는 제형보다 훨씬 양호하게 수행했다 (도면 참조). 따라서, 신규한 펩티드를 함유하는 이들 제형으로 처리된 피부 영역은 후에 더 낮은 정규화된 피부 발적 값을 보였다.
도면 3: 6 시간 이내 노출 전 및 후에 UV 광-유도되는 홍반으로부터의 피부 회복의 이미지를 보여준다.
도면 4: 적색 광 흡수로서 측정된 염증의 면에서의 6 시간 이내 UV 광-유도되는 홍반으로부터의 회복을 보여준다. 적색 광 흡수 값을 나눗셈에 의해 UV 광 노출 전 동일한 피부 영역의 값으로 정규화시켰다. 정규화된 적색 광 흡수 값 1 은 UV 광 노출 전 피부 상태를 나타낸다. 정규화된 적색 광 흡수 값의 1 로의 감소는 향상된 피부 보호 및 회복을 나타낸다. 막대는 평균 변화 및 평균 변화의 표준 편차를 나타낸다. GraphPad Prism 7 에서 일방 ANOVA 를 사용하여 통계적 분석을 수행했다. 유의성 수준은 0.05 (*) 및 0.01 (**) 이다. 덱스판테놀 (최종 5% 질량/질량) 및 펩티드를 iARP 로션에 의해 전달했다.
여드름 시험 1
피험자는 얼굴 및 목에 중증 여드름이 있는 25 세 여성이었다. 그녀를 대조군 지질 (덱스판테놀/판테놀) 에 기반하는 표준 미용 제형 (그러나 본 발명에 따른 폴리펩티드는 함유하지 않음) 으로 1 주 동안 처리했다. 1 주 후에 여드름이 약간 감소했다. 그 후 본 발명에 따른 미용 제형 (또한 본 발명에 따른 폴리펩티드는 함유하지 않음) 을 적용했다. 제형은 덱스판테놀 대신 세라미드 및 레시틴, 및 아미노산 예컨대 L-아르기닌을 함유했다. 1 주 후에 선행 기술의 판테놀 제형에 비해 가시적 개선이 관찰될 수 있었다 (도 5, 아래쪽 이미지). 그 후 피험자를 이제 "펩티드 0" 을 포함하는 본 발명의 제형으로 처리했다. 제 3 주에 여드름의 약간의 그러나 가시적인 감소가 관찰될 수 있었다 (도 5, 중간 이미지). 그 후 추가의 처리 동안 추가적 개선이 검출가능하지 않았다. 3 주 후에 피험자를 이제 기준 폴리펩티드 ("펩티드 0") 대신 "펩티드 4" 를 포함하는 동일한 제형으로 처리했다. 1 주 후에 유의한 개선이 관찰될 수 있었다. 8 주 처리 후에 여드름은 완전히 역전되었고, 피부는 깨끗하게 되었다 (도 5, 위쪽 이미지).
전체적 피부-보호 활성에서의 상대적 미용 적절성
표준 미용 지질 조성물 < 아르기닌을 함유하지 않는 본 발명의 지질/아미노산 조성물 < 아르기닌을 함유하는 본 발명의 지질/아미노산 조성물; EPO < EPO 단편 1-3 < 펩티드 0, 1 < 펩티드 3 < 펩티드 2 < 펩티드 4
여드름 시험 2
여드름을 앓고 있는 피험자를 각각 5 명씩 포함하는 4 개의 시험 군 ("펩티드, 0, 2, 3 및 4" 에 상응함) (총, 20 명의 피험자) 을 본 발명의 제형 (유발 인자 복합체를 함유하는 "iARP - 로션") 으로 1 주 동안 매일 2 회 처리했다. 피험자의 관련 피부 영역에서 바람직하지 않은 또는 심지어는 병리학적 병변이 관찰되지 않았다. 따라서, 모든 로션 샘플 제품 (펩티드 0, 2, 3 또는 4 를 함유함) 의 실제 적용은 피부 - 자극 또는 감작 효과에 의해 야기되는 임의의 원치 않는 피부 반응을 유발하지 않았다는 결론을 내릴 수 있다.
그러나 다양한 펩티드는 동일한 제형을 사용하여 다양한 효과를 초래했다 (표 3 및 4). 그들은 펩티드 0 (보여지는 임의의 효과가 없음) 과 비교할 때 물리화학적 영향 (펩티드 4 는 제형 및 점조도를 안정화시킴), 또는 펩티드 3 의 개선된 항히스타민 특성 둘 모두를 갖는다. 펩티드 2, 3 및 4 는 전체적 제품 평가에서 펩티드 0 과 비교할 때 우수했다. 펩티드 2 및 3 은 우수하게 개선된 전체적 피부 관용 적합성을 보였다. 펩티드 4 는 여전히 좋은 점수를 받았으나, 제품 점조도와 조합하면 점수가 200 이었으며, 이에 비해 펩티드 0 은 점수가 120-140 이었다 (두 점수의 합계). 본 발명에 따른 제형을 함유하는 펩티드 2 는 가장 높은 제품 전체 점수를 받았다. 모든 제형은 여드름에 적용된 펩티드 0 기반 제형에 비해 20% 우수했다.
표 3:
Figure 112019058050170-pct00017
표 4:
Figure 112019058050170-pct00018
일반적 관찰:
본 발명의 제형은 대조군 지질 (덱스판테놀) 에 비해 개선된 기능적 결과를 초래하는 핵심 성분을 피부에 수송하는 상승작용적 조성물이다. 알려진 EPO 모방체 펩티드가 그들의 구조에서 변화되어 이전 펩티드로부터 알려진 그들의 수용체 결합 활성이 감소되는 경우에 안전성의 큰 상승이 달성된다. 이것은 핵심 영양소 및 영양 인자를 피부 내생적 줄기 세포 주위의 영역 (미세환경) 으로 가져오기 위해서 여전히 그들을 핵심 영양소 및 혈관확장 화합물 (예를 들어 아르기닌 및 본 발명에 따른 다른 것들) 이 충전된 CD 90 세포 미세환경을 표적화하는 트랜스포터 분자로서 사용하는 것에 의해 설명된다. 이는 피부 세포가 피부 복구 및 피부 건강에서 그들의 생리적 역할을 할 수 있는 것을 보장한다. 특히 지질 구조 예컨대 세라미드를 포함하도록 개발된 제형은 분자를 피부에 결합시키고, 피부 외부에서의 이용가능성을 방지한다.
일반적으로, 또한 본 발명에 따른 미용 제형 및 조성물, 특히 아미노산 예컨대 아르기닌을 포함하고 세라미드/포스파티딜 유래 지질에 기반하는 제형 중 활성 성분으로서, 알려진 EPO 단편 (1- 3, 상기 참조) 및 전장 인간 EPO 은 홍반 및 여드름 연구에서 양성 효과를 보인다.
SEQUENCE LISTING <110> ASC Regenity Ltd. <120> Cosmetic formulations for topical applications containing erythropoietin-derived molecules <130> ASC-CFEpo-WO <140> EPPCT/2017/001289 <141> 2017-11-07 <150> EP 16 002 375.0 <151> 2016-11-10 <160> 84 <170> BiSSAP 1.3.6 <210> 1 <211> 166 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> human erythropoietin (hEPO) <400> 1 Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu 1 5 10 15 Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His 20 25 30 Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe 35 40 45 Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp 50 55 60 Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu 65 70 75 80 Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp 85 90 95 Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu 100 105 110 Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala 115 120 125 Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg 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heamtopoietic property <400> 5 Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu 1 5 10 15 Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg 20 25 <210> 6 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic, derived from interface of EPO and EPO receptor, or the helix structure, or share consensus sequence with fragments of type I cytokine receptor, all having no significant heamtopoietic property <400> 6 Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu 1 5 10 15 Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg 20 <210> 7 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic, derived from interface of EPO and EPO receptor, or the helix structure, or share consensus sequence with fragments of type I cytokine receptor, all having no significant heamtopoietic property <400> 7 Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys Pro Gln 1 5 10 15 Gly Gly <210> 8 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic, derived from interface of EPO and EPO receptor, or the helix structure, or share consensus sequence with fragments of type I cytokine receptor, all having no significant heamtopoietic property <400> 8 Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg 1 5 10 15 <210> 9 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic, derived from interface of EPO and EPO receptor, or the helix structure, or share consensus sequence with fragments of type I cytokine receptor, all having no significant heamtopoietic property <400> 9 Trp Glu His Val Asn Ala Ile Gln Glu Ala Arg Arg Leu Leu 1 5 10 <210> 10 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic, derived from interface of EPO and EPO receptor, or the helix structure, or share consensus sequence with fragments of type I cytokine receptor, all having no significant heamtopoietic property <400> 10 His Ala Asp Arg Glu Leu Glu Lys Ile Gly Ala 1 5 10 <210> 11 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 0': EPO derived synthetic peptide having tissue protective property, known from EP 2371855 <400> 11 Gln Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Ser 1 5 10 <210> 12 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 2': new synthetic peptide with tissue-protective property, variant of "Peptide 0 <400> 12 Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser 1 5 10 <210> 13 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 1': new synthetic peptide with tissue-protective property, variant of "Peptide 0 <400> 13 Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr 1 5 10 <210> 14 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 4': new synthetic peptide with tissue-protective property, variant of "Peptide 0 <400> 14 Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser 1 5 10 <210> 15 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 3': new synthetic peptide with tissue-protective property, variant of "Peptide 0 <400> 15 Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr 1 5 10 <210> 16 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> new synthetic 11-mer peptides with tissue-protective property, variants of "Peptide 0; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = Q or N <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = E or D <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = Q or N <220> <221> VARIANT <222> 9 <223> Xaa = Q or N <220> <221> VARIANT <222> 10 <223> Xaa = S or T <220> <221> VARIANT <222> 11 <223> Xaa = S or T <400> 16 Xaa Xaa Xaa Leu Glu Arg Ala Leu Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 17 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> new synthetic 11-mer peptides with tissue-protective property, variants of "Peptide 0; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = Q or N <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = E or D <220> <221> VARIANT <222> 10 <223> Xaa = S or T <220> <221> VARIANT <222> 11 <223> Xaa = S or T <400> 17 Xaa Xaa Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Xaa Xaa 1 5 10 <210> 18 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> new synthetic 7-mer peptides with tissue-protective property, variants of "Peptide 0; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = Q or N <220> <221> VARIANT <222> 7 <223> Xaa = Q or N <400> 18 Xaa Leu Glu Arg Ala Leu Xaa 1 5 <210> 19 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> new synthetic 9-mer peptides with tissue-protective property, variants of "Peptide 0; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = E or D <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = Q or N <220> <221> VARIANT <222> 8 <223> Xaa = Q or N <220> <221> VARIANT <222> 9 <223> Xaa = S or T <400> 19 Xaa Xaa Leu Glu Arg Ala Leu Xaa Xaa 1 5 <210> 20 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 0' plus vasculature relaxation stimulating agent at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R(arginine) or citrulline, or choline at 3'-end <400> 20 Gln Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Ser Xaa 1 5 10 <210> 21 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 0' plus vasculature relaxation stimulating agents at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R(arginine) if Xaa(13) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(13) = citrullien, or Xaa = choline if Xaa(13) = vitamin B5 at 3'end <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = R(arginine) if Xaa(12) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(12) = citrulline, or Xaa = viatmin B5 if Xaa(12) = choline at 3'-end <400> 21 Gln Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Ser Xaa Xaa 1 5 10 <210> 22 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 0' plus vasculature relaxation stimulating agents at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R(arginine) at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = R(arginine); or Xaa = choline if Xaa(14) = Vitamin B5 at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 14 <223> Xaa = R(arginine) or citrulline or cholin or viatmin B5 at 3'-end <400> 22 Gln Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Ser Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 23 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 0' plus vasculature relaxation stimulating agents at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R (arginine) at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = R (arginine) at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 14 <223> Xaa = citrulline or choline-vitaminB5 at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 15 <223> Xaa = citrulline at 3'-end if Xaa(14) is not choline <400> 23 Gln Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Ser Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 24 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 0' plus vasculature relaxation stimulating agents (here: arginine) at 5'- and 3' end; <400> 24 Arg Gln Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Ser Arg 1 5 10 <210> 25 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 0' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <400> 25 Arg Arg Gln Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Ser Arg Arg 1 5 10 15 <210> 26 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 0' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = citrulline <220> <221> VARIANT <222> 15 <223> Xaa = citrulline <400> 26 Xaa Arg Gln Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Ser Arg Xaa 1 5 10 15 <210> 27 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 0' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 16 <223> Xaa = choline or choline-vitaminB5 <400> 27 Arg Arg Gln Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Ser Arg Arg Xaa 1 5 10 15 <210> 28 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 0' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = citrulline at 5' end <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = citrulline at 5' end <220> <221> VARIANT <222> 18 <223> Xaa = citrulline at 3' end <220> <221> VARIANT <222> 19 <223> Xaa = citrulline at 3' end <400> 28 Xaa Xaa Arg Arg Gln Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Ser Arg 1 5 10 15 Arg Xaa Xaa <210> 29 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 0' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = citrulline at 5'-end <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = citrulline at 5'-end <220> <221> VARIANT <222> 18 <223> Xaa = citrulline at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 19 <223> Xaa = citrulline at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 20 <223> Xaa = viatminB5 <400> 29 Xaa Xaa Arg Arg Gln Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Ser Arg 1 5 10 15 Arg Xaa Xaa Xaa 20 <210> 30 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 1' plus vasculature relaxation stimulating agent at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R(arginine) or citrulline, or choline at 3'-end <400> 30 Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Xaa 1 5 10 <210> 31 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 1' plus vasculature relaxation stimulating agents at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R(arginine) if Xaa(13) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(13) = citrullien, or Xaa = choline if Xaa(13) = vitamin B5 at 3'end <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = R(arginine) if Xaa(12) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(12) = citrulline, or Xaa = viatmin B5 if Xaa(12) = choline at 3'-end <400> 31 Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Xaa Xaa 1 5 10 <210> 32 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 1' plus vasculature relaxation stimulating agents at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R(arginine) at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = R(arginine); or Xaa = choline if Xaa(14) = Vitamin B5 at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 14 <223> Xaa = R(arginine) or citrulline or cholin or viatmin B5 at 3'-end <400> 32 Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 33 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 1' plus vasculature relaxation stimulating agents at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R (arginine) at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = R (arginine) at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 14 <223> Xaa = citrulline or choline-vitaminB5 at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 15 <223> Xaa = citrulline at 3'-end if Xaa(14) is not choline <400> 33 Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 34 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 1' plus vasculature relaxation stimulating agents (here: arginine) at 5'- and 3' end; <400> 34 Arg Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Arg 1 5 10 <210> 35 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 1' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <400> 35 Arg Arg Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Arg Arg 1 5 10 15 <210> 36 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 1' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = citrulline <220> <221> VARIANT <222> 15 <223> Xaa = citrulline <400> 36 Xaa Arg Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Arg Xaa 1 5 10 15 <210> 37 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 1' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 16 <223> Xaa = choline or choline-vitaminB5 <400> 37 Arg Arg Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Arg Arg Xaa 1 5 10 15 <210> 38 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 1' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = citrulline at 5' end <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = citrulline at 5' end <220> <221> VARIANT <222> 18 <223> Xaa = citrulline at 3' end <220> <221> VARIANT <222> 19 <223> Xaa = citrulline at 3' end <400> 38 Xaa Xaa Arg Arg Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Arg 1 5 10 15 Arg Xaa Xaa <210> 39 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 1' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = citrulline at 5'-end <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = citrulline at 5'-end <220> <221> VARIANT <222> 18 <223> Xaa = citrulline at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 19 <223> Xaa = citrulline at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 20 <223> Xaa = viatminB5 <400> 39 Xaa Xaa Arg Arg Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Arg 1 5 10 15 Arg Xaa Xaa Xaa 20 <210> 40 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 2' plus vasculature relaxation stimulating agent at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R(arginine) or citrulline, or choline at 3'-end <400> 40 Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Xaa 1 5 10 <210> 41 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 2' plus vasculature relaxation stimulating agents at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R(arginine) if Xaa(13) = R; or Xaa = citrulline if Xaa(13) = citrulline; or Xaa = choline if Xaa(13) = vitamin B5 at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = R(arginine) if Xaa(12) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(12) = citrulline, or Xaa = viatmin B5 if Xaa(12) = choline at 3'-end <400> 41 Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Xaa Xaa 1 5 10 <210> 42 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 2' plus vasculature relaxation stimulating agents at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R(arginine) at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = R(arginine); or Xaa = choline if Xaa(14) = Vitamin B5 at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 14 <223> Xaa = R(arginine) or citrulline or cholin or viatmin B5 at 3'-end <400> 42 Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 43 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 2' plus vasculature relaxation stimulating agents at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R (arginine) at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = R (arginine) at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 14 <223> Xaa = citrulline or choline-vitaminB5 at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 15 <223> Xaa = citrulline at 3'-end if Xaa(14) is not choline <400> 43 Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 44 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 2' plus vasculature relaxation stimulating agents (here: arginine) at 5'- and 3' end; <400> 44 Arg Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Arg 1 5 10 <210> 45 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 2' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <400> 45 Arg Arg Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Arg Arg 1 5 10 15 <210> 46 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 2' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = citrulline <220> <221> VARIANT <222> 15 <223> Xaa = citrulline <400> 46 Xaa Arg Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Arg Xaa 1 5 10 15 <210> 47 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 2' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 16 <223> Xaa = choline or choline-vitaminB5 <400> 47 Arg Arg Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Arg Arg Xaa 1 5 10 15 <210> 48 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 2' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = citrulline at 5' end <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = citrulline at 5' end <220> <221> VARIANT <222> 18 <223> Xaa = citrulline at 3' end <220> <221> VARIANT <222> 19 <223> Xaa = citrulline at 3' end <400> 48 Xaa Xaa Arg Arg Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Arg 1 5 10 15 Arg Xaa Xaa <210> 49 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 2' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = citrulline at 5'-end <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = citrulline at 5'-end <220> <221> VARIANT <222> 18 <223> Xaa = citrulline at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 19 <223> Xaa = citrulline at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 20 <223> Xaa = viatminB5 <400> 49 Xaa Xaa Arg Arg Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Arg 1 5 10 15 Arg Xaa Xaa Xaa 20 <210> 50 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 3' plus vasculature relaxation stimulating agent at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R(arginine) or citrulline, or choline at 3'-end <400> 50 Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Xaa 1 5 10 <210> 51 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 3' plus vasculature relaxation stimulating agents at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R(arginine) if Xaa(13) = R; or Xaa = citrulline if Xaa(13) = citrulline; or Xaa = choline if Xaa(13) = vitamin B5 at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = R(arginine) if Xaa(12) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(12) = citrulline, or Xaa = viatmin B5 if Xaa(12) = choline at 3'-end <400> 51 Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Xaa Xaa 1 5 10 <210> 52 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 3' plus vasculature relaxation stimulating agents at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R(arginine) at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = R(arginine); or Xaa = choline if Xaa(14) = Vitamin B5 at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 14 <223> Xaa = R(arginine) or citrulline or cholin or viatmin B5 at 3'-end <400> 52 Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 53 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 3' plus vasculature relaxation stimulating agents at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R (arginine) at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = R (arginine) at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 14 <223> Xaa = citrulline or choline-vitaminB5 at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 15 <223> Xaa = citrulline at 3'-end if Xaa(14) is not choline <400> 53 Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 54 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 3' plus vasculature relaxation stimulating agents (here: arginine) at 5'- and 3' end; <400> 54 Arg Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Arg 1 5 10 <210> 55 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 3' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <400> 55 Arg Arg Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Arg Arg 1 5 10 15 <210> 56 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 3' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = citrulline <220> <221> VARIANT <222> 15 <223> Xaa = citrulline <400> 56 Xaa Arg Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Arg Xaa 1 5 10 15 <210> 57 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 3' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 16 <223> Xaa = choline or choline-vitaminB5 <400> 57 Arg Arg Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Arg Arg Xaa 1 5 10 15 <210> 58 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 3' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = citrulline at 5' end <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = citrulline at 5' end <220> <221> VARIANT <222> 18 <223> Xaa = citrulline at 3' end <220> <221> VARIANT <222> 19 <223> Xaa = citrulline at 3' end <400> 58 Xaa Xaa Arg Arg Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Arg 1 5 10 15 Arg Xaa Xaa <210> 59 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 3' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = citrulline at 5'-end <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = citrulline at 5'-end <220> <221> VARIANT <222> 18 <223> Xaa = citrulline at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 19 <223> Xaa = citrulline at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 20 <223> Xaa = viatminB5 <400> 59 Xaa Xaa Arg Arg Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Arg 1 5 10 15 Arg Xaa Xaa Xaa 20 <210> 60 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 4' plus vasculature relaxation stimulating agent at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R(arginine) or citrulline, or choline at 3'-end <400> 60 Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Xaa 1 5 10 <210> 61 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 4' plus vasculature relaxation stimulating agents at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R(arginine) if Xaa(13) = R; or Xaa = citrulline if Xaa(13) = citrulline; or Xaa = choline if Xaa(13) = vitamin B5 at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = R(arginine) if Xaa(12) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(12) = citrulline, or Xaa = viatmin B5 if Xaa(12) = choline at 3'-end <400> 61 Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Xaa Xaa 1 5 10 <210> 62 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 4' plus vasculature relaxation stimulating agents at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R(arginine) at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = R(arginine); or Xaa = choline if Xaa(14) = Vitamin B5 at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 14 <223> Xaa = R(arginine) or citrulline or cholin or viatmin B5 at 3'-end <400> 62 Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 63 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 4' plus vasculature relaxation stimulating agents at 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = R (arginine) at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 13 <223> Xaa = R (arginine) at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 14 <223> Xaa = citrulline or choline-vitaminB5 at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 15 <223> Xaa = citrulline at 3'-end if Xaa(14) is not choline <400> 63 Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 64 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 4' plus vasculature relaxation stimulating agents (here: arginine) at 5'- and 3' end; <400> 64 Arg Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Arg 1 5 10 <210> 65 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 4' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <400> 65 Arg Arg Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Arg Arg 1 5 10 15 <210> 66 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 4' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = citrulline <220> <221> VARIANT <222> 15 <223> Xaa = citrulline <400> 66 Xaa Arg Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Arg Xaa 1 5 10 15 <210> 67 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 4' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 16 <223> Xaa = choline or choline-vitaminB5 <400> 67 Arg Arg Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Arg Arg Xaa 1 5 10 15 <210> 68 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 4' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = citrulline at 5' end <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = citrulline at 5' end <220> <221> VARIANT <222> 18 <223> Xaa = citrulline at 3' end <220> <221> VARIANT <222> 19 <223> Xaa = citrulline at 3' end <400> 68 Xaa Xaa Arg Arg Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Arg 1 5 10 15 Arg Xaa Xaa <210> 69 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 4' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- and 3' end; <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = citrulline at 5'-end <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = citrulline at 5'-end <220> <221> VARIANT <222> 18 <223> Xaa = citrulline at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 19 <223> Xaa = citrulline at 3'-end <220> <221> VARIANT <222> 20 <223> Xaa = viatminB5 <400> 69 Xaa Xaa Arg Arg Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser Arg 1 5 10 15 Arg Xaa Xaa Xaa 20 <210> 70 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 0' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- end <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = R (arginine) or citrulline or choline or vitamin B5 <400> 70 Xaa Gln Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Ser 1 5 10 <210> 71 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 1' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- end <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = R (arginine) or citrulline or choline or vitamin B5 <400> 71 Xaa Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr Arg 1 5 10 <210> 72 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 2' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- end <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = R (arginine) or citrulline or choline or vitamin B5 <400> 72 Xaa Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser 1 5 10 <210> 73 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 3' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- end <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = R (arginine) or citrulline or choline or vitamin B5 <400> 73 Xaa Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr 1 5 10 <210> 74 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 4' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- end <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = R (arginine) or citrulline or choline or vitamin B5 <400> 74 Xaa Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser 1 5 10 <210> 75 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 0' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- end <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = R (arginine) or citrulline or choline or vitamin B5 <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = R (arginine) if Xaa(1) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(1) = citrulline, or Xaa = choline if Xaa(1) is choline , or Xaa = vitamineB5 if Xaa(1) is vitamineB5 <400> 75 Xaa Xaa Gln Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Ser 1 5 10 <210> 76 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 1' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- end <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = R (arginine) or citrulline or choline or vitamin B5 <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = R (arginine) if Xaa(1) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(1) = citrulline, or Xaa = choline if Xaa(1) is choline , or Xaa = vitamineB5 if Xaa(1) is vitamineB5 <400> 76 Xaa Xaa Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr 1 5 10 <210> 77 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 2' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- end <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = R (arginine) or citrulline or choline or vitamin B5 <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = R (arginine) if Xaa(1) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(1) = citrulline, or Xaa = choline if Xaa(1) is choline , or Xaa = vitamineB5 if Xaa(1) is vitamineB5 <400> 77 Xaa Xaa Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser 1 5 10 <210> 78 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 3' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- end <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = R (arginine) or citrulline or choline or vitamin B5 <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = R (arginine) if Xaa(1) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(1) = citrulline, or Xaa = choline if Xaa(1) is choline , or Xaa = vitamineB5 if Xaa(1) is vitamineB5 <400> 78 Xaa Xaa Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr 1 5 10 <210> 79 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 4' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- end <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = R (arginine) or citrulline or choline or vitamin B5 <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = R (arginine) if Xaa(1) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(1) = citrulline, or Xaa = choline if Xaa(1) is choline , or Xaa = vitamineB5 if Xaa(1) is vitamineB5 <400> 79 Xaa Xaa Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser 1 5 10 <210> 80 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 0' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- end <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = R (arginine) or citrulline or choline or vitamin B5 <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = R (arginine) if Xaa(1) and Xaa(3) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(1) and Xaa(3) = citrulline, or Xaa = choline if Xaa(1) and Xaa(3) is choline , or Xaa = vitamineB5 if Xaa(1) and Xaa(3) is vitamineB5 <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = R (arginine) if Xaa(1) and Xaa(2) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(1) and Xaa(2) = citrulline, or Xaa = choline if Xaa(1) and Xaa(2) is choline , or Xaa = vitamineB5 if Xaa(1) and Xaa(2) is vitamineB5 <400> 80 Xaa Xaa Xaa Gln Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Ser 1 5 10 <210> 81 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 1' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- end <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = R (arginine) or citrulline or choline or vitamin B5 <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = R (arginine) if Xaa(1) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(1) = citrulline, or Xaa = choline if Xaa(1) is choline , or Xaa = vitamineB5 if Xaa(1) is vitamineB5 <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = R (arginine) if Xaa(1) and Xaa(2) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(1) and Xaa(2) = citrulline, or Xaa = choline if Xaa(1) and Xaa(2) is choline , or Xaa = vitamineB5 if Xaa(1) and Xaa(2) is vitamineB5 <400> 81 Xaa Xaa Xaa Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr 1 5 10 <210> 82 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 2' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- end <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = R (arginine) or citrulline or choline or vitamin B5 <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = R (arginine) if Xaa(1) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(1) = citrulline, or Xaa = choline if Xaa(1) is choline , or Xaa = vitamineB5 if Xaa(1) is vitamineB5 <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = R (arginine) if Xaa(1) and Xaa(2) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(1) and Xaa(2) = citrulline, or Xaa = choline if Xaa(1) and Xaa(2) is choline , or Xaa = vitamineB5 if Xaa(1) and Xaa(2) is vitamineB5 <400> 82 Xaa Xaa Xaa Asn Glu Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser 1 5 10 <210> 83 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 3' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- end <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = R (arginine) or citrulline or choline or vitamin B5 <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = R (arginine) if Xaa(1) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(1) = citrulline, or Xaa = choline if Xaa(1) is choline , or Xaa = vitamineB5 if Xaa(1) is vitamineB5 <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = R (arginine) if Xaa(1) and Xaa(2) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(1) and Xaa(2) = citrulline, or Xaa = choline if Xaa(1) and Xaa(2) is choline , or Xaa = vitamineB5 if Xaa(1) and Xaa(2) is vitamineB5 <400> 83 Xaa Xaa Xaa Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Ser Thr 1 5 10 <210> 84 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 'Peptide 4' plus vasculature relaxation stimulating agents at 5'- end <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = R (arginine) or citrulline or choline or vitamin B5 <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = R (arginine) if Xaa(1) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(1) = citrulline, or Xaa = choline if Xaa(1) is choline , or Xaa = vitamineB5 if Xaa(1) is vitamineB5 <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa = R (arginine) if Xaa(1) and Xaa(2) = R, or Xaa = citrulline if Xaa(1) and Xaa(2) = citrulline, or Xaa = choline if Xaa(1) and Xaa(2) is choline , or Xaa = vitamineB5 if Xaa(1) and Xaa(2) is vitamineB5 <400> 84 Xaa Xaa Xaa Gln Asp Gln Leu Glu Arg Ala Leu Asn Thr Ser 1 5 10

Claims (22)

  1. 하기를 포함하는, 피부 복구, 피부의 회춘, 자연적 피부 광채, 주름의 감소, 피부의 노화 방지, 및 건조하고 파열된 피부의 방지 및 개선을 위해, 피부에의 국소 투여를 위한 미용 제형 또는 조성물:
    (i) 코어 서열 LERAL 을 포함하는, 적어도 하나의 단리된 피부 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP),
    여기에서 피부 조직 보호성 폴리펩티드는 EPO 수용체 (EpoR) 및/또는 공통 β수용체 (βcR) 의 아고니스트이고, CD90 발현 피부 세포를 표적화하고, 혈구생성/적혈구생성 활성을 유발하지 않고, EPO 펩티드 변이체임, 여기에서 EPO 펩티드 변이체는 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 11-머 (11-mer) 아미노산 서열 중 하나임:
    Figure 112022096736223-pct00033

    (ii) 스핑고지질, 세라미드, 인지질 및 포스파티딜콜린으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 지질 화합물,
    여기에서 피부 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 는 이온 상호작용 또는 공유 결합에 의해 지질 화합물에 연결 또는 회합되거나, 또는 그와 혼합되거나 또는 미셀 또는 리포솜 구조를 형성함으로써 그안에 포매 또는 캡슐화됨, 및
    (iii) 혈관구조 이완을 자극하고/하거나 CD90 발현 피부 세포로의 피부 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 의 수송을 지지하는 적어도 하나의 유발제,
    여기에서 유발제는 CD90 발현 피부 세포에서 산화 질소 (NO) 및/또는 아세틸콜린 형성을 자극하고, 콜린 또는 비타민 B5 이거나, 또는 아르기닌, 페닐알라닌, 및 시트룰린으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산, 또는 이 군으로부터 선택되는 둘 이상의 동일 또는 상이한 아미노산을 포함하거나 그것으로 이루어지는 폴리펩티드를 포함하거나 그것으로 이루어짐.
  2. 제 1 항에 있어서, 유발제는 공유 결합에 의해 피부 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 에 N-말단 및/또는 C-말단 연결되어, 접합체 분자를 형성하는, 미용 제형 또는 조성물.
  3. 하기를 포함하는, 피부 복구, 피부의 회춘, 자연적 피부 광채, 주름의 감소, 피부의 노화 방지, 및 건조하고 파열된 피부의 방지 및 개선을 위해, 피부에의 국소 투여를 위한 미용 제형 또는 조성물:
    (i) 코어 서열 LERAL 을 포함하는, 적어도 하나의 단리된 피부 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP),
    여기에서 피부 조직 보호성 폴리펩티드는 EPO 수용체 (EpoR) 및/또는 공통 β수용체 (βcR) 의 아고니스트이고, CD90 발현 피부 세포를 표적화하고, 혈구생성/적혈구생성 활성을 유발하지 않고, EPO 펩티드 변이체임, 여기에서 EPO 펩티드 변이체는 하기 11-머 (11-mer) 일반 아미노산 서열임:
    X1X2 QLERALN X5X6 (SEQ ID NO: 33),
    X1 은 Q 또는 N이고, X2 는 E 또는 D이고, X5, X6 는 서로 독립적으로 S 또는 T이고,
    단, 서열 QEQLERALNSS (SEQ ID NO: 21) 은 제외됨, 및
    (ii) 스핑고지질, 세라미드, 인지질 및 포스파티딜콜린으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 지질 화합물,
    여기에서 피부 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP)는 이온 상호작용 또는 공유 결합에 의해 지질 화합물에 연결 또는 회합되거나, 또는 그와 혼합되거나 또는 미셀 또는 리포솜 구조를 형성함으로써 그안에 포매 또는 캡슐화됨, 및
    (iii) 혈관구조 이완을 자극하고, CD90 발현 피부 세포에서 산화 질소 (NO) 형성을 자극하는 적어도 하나의 유발제,
    여기에서 유발제는 콜린 또는 비타민 B5 이거나, 또는 아르기닌, 페닐알라닌, 및 시트룰린으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산, 또는 이 군으로부터 선택되는 둘 이상의 동일 또는 상이한 아미노산을 포함하거나 그것으로 이루어지는 폴리펩티드를 포함하거나 그것으로 이루어짐,
    여기에서 EPO-펩티드 변이체, 유발제, 및 지질 화합물은, 표적화된 CD90 발현 피부 세포의 미세환경에 대한 조성물 또는 제형의 성분의 가까운 인접성에 영향을 미치는 트랜스포터 분자 복합체를 형성하여, 그들을 EPO-펩티드 변이체에 민감하게 만들고, 이로써 이의 조직 보호성 효능을 향상시킴.
  4. 제 3 항에 있어서, EPO 펩티드 변이체는 공유 결합에 의해 유발제에 N-말단 및/또는 C-말단 연결되어, 접합체 분자를 형성하는, 미용 제형 또는 조성물.
  5. 코어 서열 LERAL 을 포함하고, 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 11-머 아미노산 서열 중 하나로 이루어지는, 에리트로포이에틴 수용체 (EpoR) 및/또는 공통 β 수용체 (βcR) 에 결합할 수 있는, 단리된 피부 조직 보호성 폴리펩티드:
    Figure 112022096736223-pct00027
    ,
    여기에서 상기 펩티드는 피부의 미용 처리에 효과적임.
  6. 피부에의 국소 투여를 위한 미용 제형 또는 조성물에서, 단리된 피부 조직 보호성 폴리펩티드 (tpP) 의 효능을 향상시키는 방법:
    여기에서 피부 조직 보호성 폴리펩티드는 코어 서열 LERAL을 포함하고, EPO 수용체 (EpoR) 및/또는 공통 β수용체 (βcR) 의 아고니스트이고, CD90 발현 피부 세포를 표적화하고, 혈구생성/적혈구생성 활성을 유발하지 않고, EPO 펩티드 변이체임, 여기에서 EPO 펩티드 변이체는 하기 11-머 (11-mer) 일반 아미노산 서열이고:
    X1X2X3 LERAL X4X5X6 (SEQ ID NO: 31),
    여기에서 X1, X3, X4 는 서로 독립적으로 Q 또는 N 이고, X2 는 E 또는 D 이고, X5, X6 는 서로 독립적으로 S 또는 T이고,
    미용 제형 또는 조성물의 피부 보호성 효능을 향상시키는 것은, 유발제, 및 지질 화합물을 제공하여, EPO-펩티드 변이체와 분자 복합체를 형성함으로써 달성되고, 이는 EPO-펩티드 변이체의 CD90 발현 피부 세포의 미세 환경으로의 수송을 지지하고, 상기 세포를 EPO-펩티드 변이체에 민감하게 만들고,
    여기에서 유발제는 혈관구조 이완을 자극하고, CD90 발현 피부 세포에서 산화 질소 (NO) 형성을 자극하고, 콜린 또는 비타민 B5 이거나, 또는 아르기닌, 페닐알라닌, 및 시트룰린으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산, 또는 이 군으로부터 선택되는 둘 이상의 동일 또는 상이한 아미노산을 포함하거나 그것으로 이루어지는 폴리펩티드를 포함하거나 그것으로 이루어지고,
    지질 화합물은 스핑고지질, 세라미드, 인지질 및 포스파티딜콜린으로 이루어지는 군으로부터 선택됨.
  7. 제 6 항에 있어서, EPO 펩티드 변이체는 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 11-머 아미노산 서열 중 하나인, 방법:
    NEQLERALNTS (SEQ ID NO: 23),
    NEQLERALNST (SEQ ID NO: 25),
    QDQLERALNTS (SEQ ID NO: 27),
    QDQLERALNST (SEQ ID NO: 29),
    QEQLERALNSS (SEQ ID NO: 21).
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