KR20230130405A - 독활 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물 - Google Patents
독활 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 독활 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 독활 추출물은 사람의 모유두 세포(Dermal papilla cell)의 성장을 촉진하여 모발의 생장 및 건강한 두피 생육을 촉진함으로써 탈모의 진행을 완화시키고, 모발의 양모/육모, 성장을 촉진하는 효과가 있다. 따라서 본 발명의 독활 추출물은 탈모방지 또는 발모촉진용 약학 조성물 혹은 기능성 화장료 조성물에 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 독활 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물 관한 것이다.
인간의 두피에는 약 8~9만개의 모발이 있지만 보통 일반인들은 매일 50~70개까지의 머리카락이 빠지는 것은 정상적인 것이나, 머리를 감거나 취침 후에 별다른 이유 없이 약 100개 이상 과도하게 머리카락이 빠지는 경우 탈모증을 의심해 볼 수 있다. 이러한 탈모의 원인은 아직까지 정확하게 밝혀지지 않았지만, 일반적으로 유전적 요인, 호르몬의 불균형, 과도한 스트레스, 지루성 피부염, 두피의 혈액순환불량(두피 근육의 긴장), 식사 습관, 영양 및 철분 결핍, 머리 당기기(견인성 탈모증), 아토피성 체질, 모발공해(잦은 파마, 염색, 헤어드라이기 사용 등), 대기오염, 감염 및 염증성 질환, 화학적 요인(알코올, 마약, 흡연), 출산, 갱년기 장애 등에 기인하는 것으로 알려져 있다.
인체에 있어서 모발은 피부에 있는 모낭에서 자라나며 모발이 자라나는 모낭은 안쪽뿌리 상피집, 바깥뿌리 상피집, 털 줄기, 털 바탕질 등으로 구성된 복잡한 기관으로 일생동안 성장기, 퇴행기, 휴지기 등의 주기가 지속적으로 반복되는 특징이 있다. 특히 모낭을 형성하는 세포 중 진피유두 세포는 모발의 성장에 있어서 중요한 역할을 하며, 모낭의 성장기에 진피유두를 둘러싸고 있는 기질의 각질세포를 포함한 모낭의 구성세포들의 증식이 일어난다. 모낭의 퇴행기에는 모낭의 성장이 중단되며 세포사멸 (apoptosis)과 진피유두의 응축 및 세포외기질의 재구성이 일어나고 모낭이 다시 성장기로 들어가기 위해 준비하는 단계인 휴지기에는 융기부위를 포함한 영구적 으로 지속되는 부분만이 남아있게 된다.
모발은 모근과 모간으로 나뉘며, 모근을 둘러싸고 있는 모낭에서 모발이 생장한다. 모낭에서 생물학적 특성을 조절하는 두 가지 중요한 요소는 모낭상피인 외측모근초 세포 (ORS)와 중간엽 유래의 모유두 (DP)이며, 모주기의 반복을 통하여 모발이 성장하고 탈락하게 된다. 모발은 크게 성장기(anagen), 퇴화기(catagen), 휴지기(telogen)의 3단계를 거치며, 각질층에서 모발은 각각 표피와 모낭의 증식 및 분화를 통하여 만들어지고 탈락되는데 모낭 하부의 결직초 (DP)에는 중간엽 유래의 전이증폭세포가 존재하여 성장기 모낭의 모유두를 유지하는 역할을 한다고 알려져 있다. 다양한 호르몬(testosterone), 사이토카인(cytokines) 및 성장인자(growth factors)가 모발 형태 발생과 모발 성장 조절에 관여한다고 알려져 있다. 모낭의 수와 크기의 증가는 성장기에 관찰되었는데, 휴지기의 모낭은 진피층(dermis)에 위치하는 것과 달리 성장기에는 모낭이 깊은 피하조직(subcutis)에 위치하므로 모낭의 수와 크기의 증가는 성장기와 밀접하게 연관되어 있다.
최근 외모를 중시하는 경향이 두드러지면서 탈모에 대한 관심도 증가하고 있다. 이러한 탈모의 원인으로는 혈액 순환 불량설, 남성호르몬 작용 과잉설, 피지분비 과잉설, 과산화물과 세균 등에 의한 두피기능 저하설, 유전적 요인, 노화, 스트레스 등등이 논의되어 왔으나 아직까지 탈모에 대한 명확한 원인은 알려지지 않았다.
현재 미국 식품의약품안전청(FDA)으로부터 승인을 받은 대표적인 탈모치료제로는 합성의약품으로 도포용 미녹시딜과 경구용 프로페시아가 있는데, 이들은 몇 가지 부작용들이 지속적으로 보고되고 있다. 프로페시아는 남성호르몬 (testosterone)에서 탈모의 원인물질인 dihydrotestosterone(DHT)으로 변환되는 과정을 억제하여 효과를 나타내지만 남성의 성욕을 감소시킬 수 있다는 문제가 제기되고 있으며 미녹시딜은 고혈압 치료제로 개발되다가 모낭 활성을 통한 모발 성장 촉진이 보고되면서 양모제로 개발되었지만 다양한 피부질환 등의 부작용이 보고되고 있다.
지금까지 연구된 모발성장에 유용한 천연물에는 콩(Glycine linne, isoflavone), 생강 (Zingiber officinale, 6-gingerol), 고추 (Capsicum annuum), 알로에 (Aloe arborescens), 감초 (Glycyrrhiza glabra), 차나무(Camellia sinensis), 은행나무(Ginkgo biloba), 아보카도(Persea americana), 백하수오(Polygonum multiflorum) 등이 보고되어 있으나, 이와 같은 천연물을 활용하려는 노력에도 불구하고 의약품 대비 낮은 활성으로 인해 발모촉진제 또는 탈모억제제의 상용화는 아직 미미한 수준이다.
본 발명의 목적은 독활(Aralia cordata) 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모방지 또는 발모촉진용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 독활(Aralia cordata) 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모방지 또는 발모촉진용 건강기능식품 조성물을 제공하는 데 있다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 독활(Aralia cordata) 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 데 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 독활(Aralia cordata) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 탈모방지 또는 발모촉진용 화장료 조성물을 제공한다.
이어서, 본 발명은 독활(Aralia cordata) 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모방지 또는 발모촉진용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
나아가, 본 발명은 독활(Aralia cordata) 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 독활 추출물은 사람의 모유두 세포(Dermal papilla cell)의 성장을 촉진하여 모발의 생장 및 건강한 두피 생육을 촉진함으로써 탈모의 진행을 완화시키고, 모발의 양모/육모, 성장을 촉진하는 효과가 있다. 따라서 본 발명의 독활 추출물은 탈모방지 또는 발모촉진용 약학 조성물 혹은 기능성 화장료 조성물에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 추출 용매에 따른 독활 추출물의 세포 증식률 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 독활 추출물이 C57BL/6 마우스의 모발 생장에 미치는 효과를 나타낸 사진 및 단면도이다.
도 3은 독활 추출물이 인간 모유두세포(human hair dermal papilla cell, hDPC)의 세포 증식에 미치는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 독활 추출물이 인간 모유두세포(human hair dermal papilla cell, hDPC)의 세포 주기 변화에 미치는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 독활 추출물 처리에 따른 인간 모유두세포(human hair dermal papilla cell, hDPC)에서 세포주기 관련 단백질 발현 측정 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 독활 추출물 처리에 따른 인간 모유두세포(human hair dermal papilla cell, hDPC)에서 세포주기 관련 유전자 발현 측정 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 독활 추출물이 C57BL/6 마우스의 모발 생장에 미치는 효과를 나타낸 사진 및 단면도이다.
도 3은 독활 추출물이 인간 모유두세포(human hair dermal papilla cell, hDPC)의 세포 증식에 미치는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 독활 추출물이 인간 모유두세포(human hair dermal papilla cell, hDPC)의 세포 주기 변화에 미치는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 독활 추출물 처리에 따른 인간 모유두세포(human hair dermal papilla cell, hDPC)에서 세포주기 관련 단백질 발현 측정 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 독활 추출물 처리에 따른 인간 모유두세포(human hair dermal papilla cell, hDPC)에서 세포주기 관련 유전자 발현 측정 결과를 나타낸 도이다.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 구현예로 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 다만, 하기 구현 예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 당업자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다. 본 발명은 후술하는 특허 청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.
또한, 본 명세서에서 사용되는 용어(Terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시 예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 “포함”한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 '%'는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (w/w) %, 고체/액체는 (w/v) %, 그리고 액체/액체는 (v/v) %이다.
이하, 본 발명에 대하여 보다 상세하게 설명하도록 한다.
본 발명은 독활(Aralia cordata) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 탈모방지 또는 발모촉진용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 상기 독활 추출물은 정제수, 탄소수 1 내지 4의 알콜, 아세톤(Acetone), 에테르(Ether), 벤젠(Benzene), 클로로포름(Chloroform), 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(Methylene chloride), 헥산(Hexane) 및 시클로헥산 (Cyclohexane)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 용매로 추출된 것일 수 있으며, 바람직하게는 주정 또는 에탄올로 추출된 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 20 내지 40% 주정 또는 에탄올로 추출된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 추출물은 초음파추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 열수추출법, 실온추출법, 가온추출법, 용출법, 압착법 또는 초임계추출법 등의 방법으로 추출되는 것일 수 있다.
본 발명의 추출물의 제조방법에는 제한이 없으며, 공지되어 있는 어떠한 방법도 이용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 조성물에 포함되는 추출물은 상기한 열수 추출 또는 용매 추출법으로 추출된 1차 추출물을, 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말상태로 제조할 수 있다. 또한 상기 1차 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(Thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(High performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획을 얻을 수도 있다. 따라서, 본 발명에 있어서 추출물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.
또한, 상기 독활 추출물은 모유두 세포의 성장을 유도 또는 촉진시키는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 독활 추출물은 Bcl-2, p53 및 CCNB1의 발현을 억제하고, ERK의 발현을 증가시키는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물은, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.
또한, 상기 화장료 조성물은 본 발명의 독활 추출물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.
본 발명의 독활 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 있어서, 통상적으로 함유되는 화장료 조성물에 본 발명의 독활 추출물이 0.1 내지 50 중량%, 바람직하게는 1 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있다.
본 발명의 독활 추출물을 피부 외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
이어서, 본 발명은 독활(Aralia cordata) 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모방지 또는 발모촉진용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 상술한 독활 추출물을 포함하기 때문에, 상술한 본 발명의 독활 추출물과 중복된 내용은 중복된 내용의 기재에 의한 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 유효성분인 독활 추출물을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 향미제는 천연 향미제(타우마틴), 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 하기 약학적 조성물과 동일한 방식으로 제제화 되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알콜 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있다.
또한, 상기 건강기능식품 조성물은 유효성분인 독활 추출물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강식품 및 건강기능성식품 조성물은 천연 과일쥬스 및 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 독활 추출물을 함유하는 건강식품 및 건강기능성식품 조성물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 정제, 환제, 과립제, 캡슐제, 액상제제, 음료 등 다양한 형태로 제제화되어 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명에서 '건강기능식품 조성물'이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다. 본 발명의 건강 기능성 식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전처에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다. 상기 '식품 첨가물 공전'에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료 제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다. 예를 들어, 정제 형태의 건강 기능성 식품은 본 발명의 유효성분을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강 기능성 식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다. 캅셀 형태의 건강 기능성 식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질 캅셀에 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캅셀 기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다. 환 형태의 건강 기능성 식품은 본 발명의 유효성분과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다. 과립 형태의 건강 기능성 식품은 본 발명의 유효성분의 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.
본 발명에 따른 독활 추출물을 함유하는 건강기능성식품 조성물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 독활 추출물의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강식품 및 건강기능성식품 중의 상기 조성물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 유지를 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 독활 추출물을 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
나아가, 본 발명은 독활(Aralia cordata) 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 약학 조성물은 상술한 독활 추출물을 포함하기 때문에, 상술한 본 발명의 독활 추출물과 중복된 내용은 중복된 내용의 기재에 의한 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
상기 "예방"은 병리학적 현상의 발생 빈도 또는 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다. 예방은 완전할 수 있으며 또는 부분적일 수도 있다. 이 경우에는 개체 내의 탈모 증상이 상기 조성물을 사용 하지 않은 경우와 비교하여 감소하는 현상을 의미할 수 있다.
상기 "치료"는 치료하고자 하는 대상 또는 세포의 천연 과정을 변경시키기 위하여 임상적으로 개입하는 모든 행위를 의미하며, 임상 병리 상태가 진행되는 동안 또는 이를 예방하기 위하여 수행할 수 있다. 목적하는 치료효과는 질병의 발생 또는 재발을 예방하거나, 증상을 완화시키거나, 질병에 따른 모든 직접 또는 간접적인 병리학적 결과를 저하시키거나, 전이를 예방하거나, 질병 진행 속도를 감소시키거나, 질병 상태를 경감 또는 일시적 완화시키거나, 예후를 개선시키는 것을 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서 사용되는 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 건강상태, 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여, 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명에서 "개체"는 탈모증을 예방 또는 치료를 목적으로 하는 개체이면 특별히 한정되지 않고, 인간을 포함하는 동물, 예를 들어 비-영장류(예를 들면, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 래트 및 마우스) 및 영장류(예를 들면, 원숭이, 예를 들어 사이노몰구스(cynomolgous) 원숭이 및 침팬지)를 비롯한 포유동물을 나타낸다. 때에 따라서는 인간을 제외하는 개체일 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 약학적으로 유효한 양의 독활 추출물을 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기에서 약학적으로 유효한 양이란 탈모 증상을 예방, 개선 및 치료하기에 충분한 양을 말한다. 상기에서 "약학적으로 허용되는"이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다.
또한, 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 생리식염수, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이트, 프로필렌글리콜 및 리퀴드 파라핀으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용 가능하다. 상기 성분들은 상기 유효성분인 독활 추출물에 독립적으로 또는 조합하여 추가될 수 있다.
또한, 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함될 수 있으며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 독활 추출물은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있으며, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.
경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명의 독활 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 또는 생물학적 반응조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 독활 추출물을 유효성분으로 포함하는 외용제의 제형으로 제공할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물을 피부외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 유화제, 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 활성제, 친유성 활성제 또는 지질 소낭 등 피부 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물이 피부 외용제로 제공될 경우, 이에 제한되는 것은 아니나, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제 등의 제형일 수 있다.
또한, 본 발명의 독활 추출물의 인체에 대한 효과적인 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로 약 0.001-100 mg/kg/일이며, 바람직하게는 0.01-35 mg/kg/일이다. 몸무게가 70㎏인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.07-7000 mg/일이며, 바람직하게는 0.7-2500 ㎎/일이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.
이하, 본 발명의 실시예를 첨부된 도면을 참고하여 보다 상세하게 설명하도록 한다. 그러나, 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐, 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아닐 것이다.
<실시예> 독활 추출물의 제조
말린 독활(Aralia cordata) 100g을 0%(물), 30%, 50% 70% 100% 에탄올을 사용하여 실온에서 24시간 동안 추출한 후, 감압농축 하였다. 제조된 독활 추출물은 동결건조 하였으며, -20°C에서 보관하였다.
<실험예 1> 독활 추출물이 인간 모유두 세포(HHDPC) 성장에 미치는 영향
독활 추출물이 인간 모유두 세포의 세포성장에 미치는 영향을 조사하기 위하여, 인간 모유두 세포(Human dermal papilla cells, hDPCs)를 사용하여 평가하였다.
인간 모유두 세포(Sciencell Co., Cat. No. 2400) 5% fetal bovine serum (FBS), 1% penicillin/streptomycin 및 1% mesangial cell growth supplement가 포함된 mesenchymal stem cell medium(MSCM)에서 37°C, 5% CO2 조건으로 배양하였다. 세포 증식은 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 분석을 사용하여 평가하였다. 간단히 말해서, 96well plate에 1×104 cell/mL로 세포를 분주하고 독활 물 추출물과 다양한 농도(30%, 50%, 70% 및 100%)의 독활 에탄올 추출물을 농도별 (0, 12.5, 25, 50 and 100 μg/mL)로 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 10 μL의 MTT 시약을 각 웰에 첨가하였으며 37℃, 5% CO2 습윤 조건 하에서 2시간 동안 배양한 후, 분광광도계(Tecan, Switzerland)를 사용하여 540 nm에서 광학 밀도를 측정하였다.
도 1에 나타낸 바와 같이 독활 추출물 (0, 30, 50, 70 및 100%)은 모두 세포의 증식을 촉진하였으며, 특히 독활 30% 및 100% 에탄올 추출물을 처리하는 경우 세포 증식이 유의하게 증가하는 것으로 나타났다. 또한, 독활 30% 에탄올 추출물은 6.25 및 12.5 μg/mL 농도에서 대조군보다 각각 137.3 ± 9.82% 및 134.4 ± 7.44% 높은 증식률을 보였다. 독활 100% 에탄올 추출물은 대조군에 비해 증식을 25 μg/mL 농도에서는 21.6 ± 6.58% 증가시켰지만 고농도(50 및 100 μg/mL)에서 세포독성을 나타냈다. 이러한 결과는 독활 에탄올 추출물이 생체 내에서 모낭의 증식과 모발 성장을 촉진함을 시사한다. 이후 실험부터는 세포 독성이 없고 세포 증식 촉진 효과가 우수한 독활 30% 에탄올 추출물을 사용하였다.
<실험예 2> 독활 추출물에 의한 C57BL/6 마우스에서의 모발 생장 효과
2-1. 모발 성장 정도 측정
독활 추출물의 C57BL/6 마우스에서의 모발 생장 효과를 측정하기 위해, 독활 추출물 처리에 따른 모발 성장 정도를 측정하였으며 모든 동물 실험은 세명대학교 동물윤리위원회(SMECAE 091101)의 승인을 받아 진행되었다. 구체적으로, 20~22g의 6주령 수컷 C57BL/6 마우스(SLC, Shizuoka, Japan) 실험 전 7일 동안 일정한 온도(22 ± 2°C) 및 광주기(12시간 명주기 및 12시간 암주기) 환경에서 표준 식단을 급여하였다. 모든 마우스는 rompun(Bayer, Leverkusen, Germany)과 zoletil(Virbac, Carros, France)의 혼합물을 복강 내로 주사하여 마취시킨 후 왁싱 레진을 사용하여 등 부위 털을 모낭세포로부터 완전히 제거하였다. 마우스를 각각 10마리의 동물로 구성된 4개의 실험 그룹으로 무작위로 할당하고 30% 에탄올(vehicle 대조군), 5% 미녹시딜(양성 대조군), 1mg/mL 또는 10mg/ml 독활 추출물 투여군으로 나누었다. 각 시료는 3주 동안 하루에 한 번 마우스 등 피부에 국소적으로 도포하고 21일까지 마우스의 변화를 관찰하였고, 그 중에서 18일까지의 변화를 도 2A에 나타내었다.
그 결과, 시료 처리 7일 후(D7) 모든 실험군은 검은색 색소 침착을 나타내어 모낭이 휴지기에서 성장기로의 전환된 것으로 나타났다. 그러나 독활 30% 에탄올 추출물을 처리한 마우스의 등 피부에서만 새롭게 다시 자란 모발이 관찰되었다. 또한, 시료 처리 14일 후 10 mg/mL 독활 추출물 투여군의 등 피부털은 대조군 수준으로 회복된 반면, 대조군과 미녹시딜 그룹에서는 제모 부위에 베어 패치가 여전히 관찰되었다.
2-2. 조직학적 분석
이어서, 마우스의 피부 조직의 대표적인 종단면을 분석하였다. 구체적으로, 각 실험군의 피부조직을 4% 파라포름알데히드(Sigma-Aldrich, MO, USA)에 고정한 다음, 자동 조직 프로세서(Leica ASP 300; Leica Microsystems, Wetzler, Germany)를 이용하여 조직을 탈수하고 파라핀에 포매(embedded)하였다. 이후 조직을 4μm로 박절하여 파라핀 절편을 제작하고, 헤마톡실린과 에오신으로 염색한 후 광학현미경 검사(Olympus CX 31; Olympus Tokyo, Japan)를 통해 조직학적 특성을 평가하였으며 그 결과를 도 2B에 나타내었다.
그 결과, 독활 추출물 처리군에서 모낭 수가 증가하는 것이 관찰되었다. 미녹시딜 그룹과 1mg/mL 독활 추출물 처리군에서는 모낭이 초기-중기 성장기에 있었고 10mg/mL 독활 추출물 처리군에서는 초기 성장기에 있었지만 대조군의 모낭은 휴지기에 남아 있었다.
이러한 결과는 본 발명에 따른 독활 추출물의 국소 적용이 휴지기에서 초기 성장기로의 전환을 촉진함으로써 모낭 형성을 자극하고 모발 성장을 촉진함을 시사한다.
<실험예 3> 독활 추출물이 세포 주기에 미치는 영향
3-1. 세포 증식률 측정
독활 추출물의 세포 주기에 미치는 영향을 평가하기 위해, hDPCs(1 x 104 cells/well)를 mesenchymal stem cell medium(MSCM)에 24 시간동안 배양한 후, 다양한 농도(0, 3.125, 6.25, 12.5㎍/mL)의 독활 30% 에탄올 추출물 또는 미녹시딜을 처리 후 각각 24 시간, 72시간이 경과하였을 때 세포 증식률을 측정하였다.
도 3에 나타낸 바와 같이, 같이 독활 추출물 처리 72시간 후 세포 증식능은 대조군보다 12.6% 더 높았으며, 미녹시딜 처리군에서는 처리시간과 농도가 증가함에 따라 세포 증식이 증가하였다.
3-2. 세포 주기 변화 관찰
이어서, 세포 주기의 변화를 조사하기 위해 배양 후 24 시간, 72 시간에 각 실험군의 세포를 채취하여 PBS로 세척하고 차가운 70% 에탄올에 고정한 후 -20℃에서 밤새 보관하였다. 고정 후, 세포를 PBS 및 Tali® Cell Cycle Solution으로 실온에서 30분 동안 세척하였다. 세포 주기 단계는 Tali® 이미지 기반 세포측정기(Thermo Fisher Scientific, MA, USA)를 사용하여 분석하였다.
도 4에 나타낸 바와 같이, 독활 추출물 처리 후 24시간, 72시간 세포주기 관찰 결과, G0/G1기의 세포 수가 증가하였으며, S기(DNA 합성기)의 세포 비율이 감소하는 것으로 나타났다. 또한, sub-G1기 세포의 비율은 미녹시딜 처리군과 비교하여 현저히 감소하는 것으로 나타났다. 이러한 결과는 본 발명에 따른 독활 추출물이 인간 모유두 세포의 세포 주기를 조절하여 모발 성장을 촉진한다는 것을 시사한다.
3-3. 세포주기 조절 관련 유전자/단백질 발현 조절
독활 추출물의 유전자 또는 단백질 수준에서 Bcl-2, p38, p53, CCNB1 및 ERK 발현에 미치는 영향을 평가하였다.
구체적으로 p38, p53 및 ERK의 단백질 수준은 웨스턴 블롯을 수행하여 측정하였으며, 각 특정 항체의 결합은 향상된 화학발광방법 (Amersham Biosciences, Pittsburgh, PA, USA) 을 사용하여 시각화되었다. 해당 시그널은 제조사(대한과학, Korea)의 설명서에 따라 UV 트랜스 조명으로 검출됐다. 면역블롯의 밴드 밀도는 Multi Gauge Ver. 3.0 소프트웨어(Fujifilm, Tokyo, Japan)를 사용하여 분석되었다. 이어서, Bcl-2, p38, p53 및 CCNB1의 mRNA 수준은 realtime RT-PCR을 수행하여 측정하였으며, 사용된 Primer sequence는 표 1에 나타내었다. relative gene의 Fold change는 2-ΔΔCt 방법을 사용하여 계산되었다.
도 5 및 도 6에 나타낸 바와 같이 배양된 모유두 세포에서 p-ERK/ERK 비율과 p-p53/p53 비율을 증가시켰고 p38 발현을 감소시켰다(도 5). 세포에 독활 추출물 처리 후 24 시간이 경과했을 때 p53과 p38의 발현이 증가하였으나, 72 시간이 경과하였을 때는 p53과 p38의 발현이 감소하였고, ERK의 발현은 약 1.4배 증가하였다.(도 5). 또한, 독활 추출물의 처리에 의해 Bcl-2, p38, p53 및 CCNB1(Cyclin B)의 유전자 발현이 감소하는 반면 ERK의 유전자 발현은 증가하였다(도 6). 독활 추출물은 p38 MAPK 발현의 변화를 유도했지만 이는 모발 성장에 영향을 미치지 않았다.
따라서, 이러한 결과는 본 발명에 따른 독활 추출물이 ERK의 발현을 증가시키고, 세포사멸 관련 유전자의 발현을 억제하여 hDPC의 apoptosis를 억제함으로써 모발 성장기를 유지함을 나타낸다.
이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 구체적인 실시예를 상세하게 설명되었으나, 본 발명의 사상을 이해하는 당업자는 동일한 사상의 범위 내에서 다른 구성요소를 추가, 변경, 삭제 등을 통하여, 퇴보적인 다른 발명이나 본 발명 사상의 범위 내에 포함되는 다른 실시예를 용이하게 제안할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상술한 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구의 범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구의 범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
Claims (6)
- 독활(Aralia cordata) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 탈모방지 또는 발모촉진용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 독활 추출물은 20 내지 40% 에탄올로 추출된 것을 특징으로 하는, 탈모방지 또는 발모촉진용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 독활 추출물은 모유두 세포의 성장을 유도 또는 촉진시키는 것을 특징으로 하는, 탈모방지 또는 발모촉진용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 독활 추출물은 Bcl-2, p53 및 CCNB1의 발현을 억제하고, ERK의 발현을 증가시키는 것인, 탈모방지 또는 발모촉진용 화장료 조성물.
- 독활(Aralia cordata) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 탈모방지 또는 발모촉진용 건강기능식품 조성물.
- 독활(Aralia cordata) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 탈모증 예방 또는 치료용 약학 조성물.
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