KR102378386B1 - 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물은, 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 연어 유래 DNA 단편을 유효성분으로 포함하거나 또는 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 연어 유래 DNA 단편과 프로테오글리칸을 유효성분으로 포함하거나 또는 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 연어 유래 DNA 단편, 프로테오글리칸, 참마추출물과 마늘추출물을 유효성분으로 포함하는 것이 특징이다.
본 발명에 의해, 피부 미백능을 높여줌과 동시에 피부주름개선효능도 갖는 화장료 조성물 및 이의 제조방법이 제공된다.

Description

피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법{A Cosmetic for whitening or wrinkle improvement of skin and manufacturing method thereof}

본 발명은 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 연어 유래 DNA 단편을 유효성분으로 포함함으로써, 피부 미백능을 높여줌과 동시에 피부주름개선효능도 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.

주름이 형성되는 원인은 자연적 노화에 의한 주름의 생성과 자외선 노출(광노화)에 의한 주름의 생성으로 크게 나눌 수 있는데, 두 가지 원인에 의한 주름 형성 메커니즘은 아직까지 정확하게 밝혀져 있지 않은 상태이다.

자연적 노화와 광노화에 의한 피부변화와 관련되어 발견되는 공통적인 현상은 진피 내의 주 구성단백질인 콜라겐 및 엘라스틴의 감소 및 변형이 있으며, 이는 주름의 생성 및 피부의 탄력저하에 직접적으로 관여하는 것으로 알려져 있다.

또한, 사람의 피부색은 멜라닌 색소를 만드는 멜라노사이트(melanocyte)에 의해 결정되며, 이 멜라노사이트에서 타이로시나제 등의 여러 효소가 작용하여 생성되는 멜라닌이라는 흑색색소는 유전적 요인 호르몬 분비 및 스트레스 등과 관련된 생리적 요인 및 자외선 조사 등과 같은 환경적 요인에 영향을 받는다.

멜라닌은 피부에 존재하여 자외선 등으로부터 신체를 보호하는 중요한 기능을 가지고 있지만, 멜라닌이 과잉 생산됨으로써 기미 또는 주근깨 등을 형성할 뿐 아니라 피부 노화를 촉진하며 피부암 유발에도 중요한 작용을 하는 것으로 알려져 있다.

멜라닌의 주요한 기능은 이러한 유해라디칼을 제거하여 이에 의한 손상으로부터 피부를 보호하는 것이다. 따라서 멜라닌의 양이 많다는 것은 물리적 또는 화학적 독성 물질로부터 피부를 보호할 수 있는 효과적인 대응 체계를 가지고 있다는 것을 의미한다.

이렇듯, 기미 주근깨 또는 색소 침착 등과 같은 피부 색소 이상 침착 증상과 자외선 노출 등에 의해 발생된 과도한 멜라닌 색소 침착을 치료 또는 경감시켜 주기 위해서, 이전부터 아스코르빈산, 코지산, 알부틴, 하이드로퀴논, 글루타치온 또는 이들의 유도체 타이로시나제 저해활성을 가진 물질들을 화장료나 의약품에 배합 사용하여 왔는데, 이들은 불충분한 미백효과, 피부에 대한 안전성 문제, 화장료에 배합시 제형 및 안정성 문제 등으로 인해 그 사용이 제한되고 있다.

따라서, 인체에 무해하면서 피부미백효과 및 피부주름개선효과가 극대화된 새로운 화장료 조성물 개발이 더욱 필요한 실정이다.

1. 대한민국 공개특허공보 제10-2009-0055079호 '야생 참마 추출물을 함유하는 피부노화 방지용 화장료 조성물' 2. 대한민국 등록특허공보 제10-1458758호 '미백활성 및 항산화활성을 가지는 마늘 추출물, 그 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물'

본 발명의 목적은 피부 미백능을 높여줌과 동시에 피부주름개선효능도 갖는 화장료 조성물 및 이의 제조방법을 제공하는 데 있다.

본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제들은 이상에서 언급한 기술적 과제들로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 다른 기술적 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명의 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물은, 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 연어 유래 DNA 단편을 유효성분으로 포함하는 것이 특징이며, 보다 바람직하게는 프로테오글리칸을 더 포함하는 것을 특징으로 더욱 바람직하게는 상기 연어 유래 DNA단편과 상기 프로테오글리칸이 1 : 2~10 중량비로 이루어지는 것이 특징이다.

또는 바람직하게, 프로테오글리칸, 참마추출물과 마늘추출물을 더 포함하는 것을 특징으로, 더욱 바람직하게는 상기 연어 유래 DNA 단편, 프로테오글리칸, 참마추출물 및 마늘추출물이 1 : 2~10 : 0.5~1 : 0.5~1 중량비로 구성되는 것이 특징이다.

또 다른 본 발명인 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물의 제조방법, 연어 정자 또는 정소를 용해액에 넣고 용해시킨 후 원심분리한 다음 얻은 침전물1을 다시 상기 용해액에 넣고 용해시킨 후 이를 원심분리한 다음 얻은 침전물2를 정제수에 용해시켜 용해물1을 제조하는 제1단계, 상기 용해물1에 아세트산을 넣고 혼합하여 혼합물1을 제조하는 제2단계, 상기 혼합물1에 염화나트륨 용액을 넣고 혼합하여 혼합물2를 제조하는 제3단계, 상기 혼합물2를 원심분리한 후, 상층액은 제거하고 남은 침전물3을 에탄올에 넣고 용해시켜 용해물2를 제조하는 제4단계, 상기 용해물2를 원심분리한 후, 상층액은 제거하고 남은 침전물4를 정제수에 넣고 용해시켜 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 DNA단편이 포함된 복합체를 제조하는 제5단계 및 상기 제5단계의 DNA단편이 포함된 복합체를 포함하는 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물을 제조하는 제6단계를 포함하는 것이 특징이며, 상기 제6단계의 조성물에는 프로테오글리칸 분말을 정제수에 넣고 혼합하여 제조한 프로테오글리칸 수용액을 더 넣고 혼합하거나, 또는 프로테오글리칸 수용액, 참마추출물과 마늘추출물을 더 넣고 혼합하여 제조하는 것이 특징이다.

본 발명에 의해, 피부 미백능을 높여줌과 동시에 피부주름개선효능도 갖는 화장료 조성물 및 이의 제조방법이 제공된다.

도 1은 본 발명의 실시예 1에 따른 화장료 조성물의 제조공정도를 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명의 실시예 2에 따른 화장료 조성물의 제조공정도를 나타낸 도면이다.
도 3은 본 발명의 실시예 3에 따른 화장료 조성물의 제조공정도를 나타낸 도면이다.
도 4는 본 발명의 화장료 조성물의 유효성분인 연어 유래 DNA 단편을 나타낸 도면이다.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 바람직한 실시예 및 실험예를 상세하게 설명하며, 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있는 공지 기능 및 구성에 대한 상세한 설명은 생략한다.

본 발명의 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물은 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 연어 유래 DNA 단편을 포함하는 것이 특징이며, 바람직하게 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 연어 유래 DNA 단편과 프로테오글리칸을 포함하는 것이 특징이며, 더욱 바람직하게는 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 연어 유래 DNA 단편, 프로테오글리칸, 참마추출물 및 마늘추출물을 유효성분으로 포함하는 것이 특징이다.

설명하면, 연어 유래 DNA 단편은 연어의 정자 또는 정소로부터 분리한 것으로써, 이는 인산, 4종류의 염기, 데옥시리보오스와 같은 생체 고분자들로 이루어져 있는 것으로, 이는 세포의 필수 구성성분들로서 주름 개선 및 미백효과등을 목적으로 화장품 등 여러 용도로 사용되고 있다.

그러나, 종래 이들 DNA 단편을 분리하는 방법들은 RNA까지 모두 포함하고 있는 복합물질이어서 목적하는 염기가 혼재하는 문제가 있거나, 수율이 낮고 유기용매 사용으로 산업적으로 이용하기 어렵거나, 유기용매 사용으로 오히려 피부에 자극을 줄 수 있는 문제점이 있다.

이에, 본 발명에서는 상기와 같은 문제점은 해결하면서 주름개선능 및 미백효능이 높은 DNA 단편을 추출해 내기 위해 여러연구를 한 결과, 초원심분리를 이용한 순수정제 기술을 도입하는 것이 가장 적합함을 확인하였으며, 이를 통해 도출해낸 DNA단편은 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖음을 확인하였으며, 단편크기는 16,656bp인 것이 특징이다.

프로테오글리칸(proteoglycan)은 단백질과 복합된 산성 점액성 다당류로, 그 안에 포함된 당분자가 질소를 가지고 있으며, 코어단백질(core protein)이라는 폴리펩티드 사슬 1개에 하나 이상의 글리코사미노글리칸(glycosaminoglycan, GAG)이라는 당사슬이 결합한 구조를 갖고 있다. 이러한 프로테오글리칸은 청정지역 연어의 코연골에서 추출 정제하여 미백용 미용소재로 사용되고 있는 고분자물질로써 통상 화장료소재로 사용되고 있던 프로테오글리칸의 경우 초산(Acetic Acid)을 이용하여 추출되며, 이럴 경우 화장료 소재로서의 기능이 제한적일 수 밖에 없게 된다.

이에, 본 발명에서는 상기 프로테오글리칸으로 열 및 효소처리 없이 코어단백질 양쪽 말단(N말단, C말단)이 비변성(生) 상태(즉, 활성화 된 상태)로 활성화를 갖도록 추출한 프로테오글리칸을 적용하는 것이 좋으며, 이러한 프로테오글리칸은 중량평균 분자량이 90만Da이상~120만Da이하를 갖는 것을 적용하는 것이 바람직하다.

참마는 마과(Dioscoreaceae)에 속한 참마(Dioscorea japonica)의 근경을 의미하는 것으로, 갑산성종, 심장염 및 해독·건위·화상·동상·요통·유종 등의 약재와 강장제 및 지사제로도 쓰인다. 이러한 참마의 주성분인 뮤신과 프로테오글리칸 성분이 DNA 단편의 구조적 안정성을 유지시켜 주어 DNA 단편으로 부터 발현되는 효능에 시너지 효과를 나타내도록 한다. 이에, 본 발명에서는 상기와 같은 효능을 나타내는 참마를 화장료 소재로 사용하기 위해, 90~100%(v/v) 에탄올 용매로 추출하여 얻은 참마 추출물을 적용하는 것이 좋다.

마늘은 식물분류학적으로 백합목 백합과 알리움속(ALLium sativum for peiinense Makino, Aliumscorodoprassum L.)에 속하는 다년생 구근 식물로 주로 56~68% 정도의 수분, 26~30% 탄수화물로 구성되어 있으며, 마늘의 독특한 맛과 향은 마늘의 유기황화합물 중의 하나인 알리신(allicin)에 의한 것으로 알려져 잇으며, 이 알리신은 물에 대한 용해도가 매우 낮은 화합물로, 항암, 항균, 해독 효과등을 나타내어 DNA단편성분을 유효성분으로 하는 화장품에서 나타나는 부작용을 방지해주는 역할을 한다. 그럼에도 불구하고 마늘은 자극성이 심하여 그대로 사용하기 어려운 문제가 있다. 이에, 본 발명에서는 상기와 같은 효능을 나타내는 마늘을 화장료 소재로 사용하기 위해, 90~100%(v/v) 에탄올 용매로 추출하여 얻은 마늘 추출물을 적용하는 것이 좋다.

이하, 상기 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물의 제조방법에 관하여 도 1 내지 도 3의 내용을 토대로 구체적으로 설명하면 다음과 같다.

<본 발명의 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물의 제조공정>

1. 제1단계; 용해물1 제조(S10)

본 단계에서는 연어 정자 또는 정소를 용해액에 넣고 용해시킨 후 원심분리한 다음 얻은 침전물1을 다시 상기 용해액에 넣고 용해시킨 후 이를 원심분리한 다음 얻은 침전물2를 정제수에 용해시켜 용해물1을 제조하는 것이 특징이다.

설명하면, 상기 연어 정자 또는 정소에는 여러 DNA 단편구조가 포함되어 있으며, 기존에는 여기서 분리되어 얻은 DNA 중합체 단편을 화장품 소재로 적용하기도 하였다. 그러나 기존에 알려진 DNA 중합체 단편은 일반적인 추출방식을 통해 얻은 것으로써 그 효능의 근거 또는 유효 유전자 단편에 대한 정보에 대해서는 전무한 것이 사실이다.

이에, 본 발명의 발명자들은 여러 연구를 한 결과, 상기 DNA 단편 중에서도 유효성이 있는 단편을 특정하고 그 특정 염기서열에 대한 효능검증을 하여 total DNA 중에서도 특히 세포질 내 미량 DNA 단편에 대한 효능을 확인하고 그 높은 유효성을 증명하기 위해 특정 초 원심분리를 이용한 순수정제방법을 도입하게 된 것이다.

이에, 본 단계에서는 먼저 연어 정자 또는 정소를 대상으로 이를 특정 용해액에 넣고 용해시킨 후 원심분리를 하여 침전물을 획득한 것으로 이 작업을 2~3회 반복하여 최종 용해물1을 제조한다.

이때, 상기 용해액은 0.05~1 M sucrose, 5~20 mM EDTA, 20~35 mM Tris-HCl, pH 7.5로 구성되어 있는 것을 특징으로, 상기 1차 침전물1 획득시에는 1,000~1,500 rpm 에서 10~20분동안 원심분리방식을 적용하며, 2차 침전물2 획득시에는 1,000~1,500 rpm 에서 10~20분동안 원심 분리하고 상층액을 다시 12,000~15,000 rpm에서 30~40분동안 원심분리하여 남은 침전물2를 획득하는 것으로 상기 rpm 조건 및 시간 조건을 벗어날 경우에는 침전물 수득이 제대로 이루어지지 않아 소수 DNA를 추출해 내기 어렵게 된다.

이렇게 생성된 상기 침전물2는 침전물2 1g 당 정제수 0.5~5 ml를 넣고 혼합하여 완전히 용해시켜 용해물1을 제조한다.

이때, 침전물 1g당 정제수의 함량이 0.5ml 미만으로 함유될 경우에는 완전용해가 어렵게 되어 특정 DNA추출이 어렵게 되며 5 ml를 초과할 경우에는 별도의 건조과정을 거쳐야 하는 등 DNA 변형이 일어날 우려가 있게 된다.

2. 제2단계; 혼합물1 제조(S20)

본 단계에서는 상기 용해물1에 아세트산(Acetic acid)을 넣고 혼합하여 혼합물1을 제조하는 것이 특징이다.

설명하면, 상기 용해물 1로부터 DNA단편을 생성하기 위한 것으로 10~15%(v/v)의 아세트산을 상기 용해물1과 동량으로 넣고 혼합한 후, 4~5℃에서 4~5시간동안 반응시켜 혼합물 1을 제조한다.

이때, 상기 용해물1과 상기 아세트산의 반응 조건을 4℃미만 또는 4시간 미만으로 반응시킬 경우 제대로 반응이 이루어지지 않아 본 발명이 원하는 DNA단편을 추출해 내기 어려우며 5℃를 초과하거나 또는 5시간 초과하여 반응시킬 경우 DNA 변형이 일어날 우려가 있게 된다.

3. 제3단계; 혼합물2 제조(S30)

본 단계에서는 상기 혼합물1에 염화나트륨(NaCl) 용액을 넣고 혼합하여 혼합물2를 제조하는 것이 특징이다.

설명하면, 상기 혼합물 1로부터 최종 DNA단편을 생성하기 위한 것으로 10~15%(v/v)의 염화나트륨을 상기 혼합물1과 동량으로 넣고 혼합한 후, 15~30℃에서 1~2시간동안 반응시켜 혼합물 2를 제조한다.

이때, 상기 혼합물 1과 상기 염화나트륨의 반응 조건을 15℃미만 또는 1시간 미만으로 반응시킬 경우 제대로 반응이 이루어지지 않아 본 발명이 원하는 DNA단편을 추출해 내기 어려우며 30℃를 초과하거나 또는 2시간 초과하여 반응시킬 경우 DNA 변형이 일어날 우려가 있게 된다.

4. 제4단계; 용해물2 제조(S40)

본 단계에서는 상기 제조한 혼합물 2의 불순물을 제거하기 위한 것으로, 상기 혼합물2를 원심분리한 후, 상층액은 제거하고 남은 침전물3을 에탄올에 넣고 용해시켜 용해물2를 제조하는 것이 특징이다.

설명하면, 에탄올은 살균 목적으로 흔히 사용되는 용매로써, 순수 DNA 단편을 추출해내는데 반드시 적용되는 과정이다.

이때, 사용되는 에탄올은 100%(v/v)인 것으로 불순물 제거에 가장 적합하다.

또한, 상기 에탄올은 상기 침전물3 1g당 5~15 ml를 적용하는 것으로써, 이때 에탄올의 함량이 5 ml미만으로 함유될 경우에는 불순물이 완전히 제거되기 어려우며 15ml를 초과할 경우에는 초과 함량에 따른 상승효과를 기대하기 어렵다.

5. 제5단계; DNA단편이 포함된 복합체 제조(S50)

본 단계에서는 상기 용해물2를 원심분리한 후, 상층액은 제거하고 남은 침전물4를 정제수에 넣고 용해시켜 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 DNA단편이 포함된 복합체를 제조하는 것이 특징이다.

설명하면, 상기 에탄올에 혼합된 DNA 단편을 회수하기 위하여 상기 용해물 2를 10,000~15,000rpm을 0.5~2 시간동안 수행하여 침전물 1~2g을 획득하고 이를 정제수 0.5~5ml에 넣고 용해시켜 도 4에서 확인되며 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 연어 유래 DNA 단편 복합체를 제조한다.

이러한 상기 DNA 단편 복합체는 평균 단편크기가 16,656bp 이며, 건조 후 에는 흰색분말형태로 이루어져 정제수에 잘 용해되는 물질이다. 이는 주름개선능이 뛰어나며, 미백효과 뿐만 아니라 피부재생 및 항산화 효과 등 화장료 소재로 사용하기에 매우 적합하다.

6. 제6단계; 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물 제조(S60)

본 단계에서는 상기 제5단계의 DNA단편이 포함된 복합체를 포함하는 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물을 제조하는 것이 특징이다.

설명하면, 상기 DNA 단편 복합체는 화장료 조성물의 유효성분으로 단독으로 사용되기도 한다. 이때 상기 DNA 단편 복합체는 5~10 중량%로 포함되며 나머지 정제수로 이루어져 본 발명의 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물을 제조하기도 하는데 이때 상기 DNA 단편 복합체의 함량이 5 중량% 미만으로 함유될 경우에는 본 발명이 목적하는 피부미백효과 또는 피부 주름개선효과는 다소 미흡하게 나타나 적합하지 않으며 10 중량%를 초과할 경우에는 초과 함량에 따른 상승효과를 기대하기 어려우며 오히려 DNA 단편 복합체의 부작용인 MPP 효소활성이 높아져 오히려 피부탄력을 떨어뜨릴 우려가 있게 된다.

또한, 본 단계에서는 추가적으로 프로테오글리칸을 더 포함하여 이루어지기도 한다. 이때, 상기 프로테로글리칸은 세정, 탈지, 탈취처리된 연어 코연골을 알칼리 용매로 추출하여 코어단백질의 N말단 및 C말단이 동시에 활성화된 프로테오글리칸 분말을 얻은 후, 이를 물에 넣고 혼합하여 프로테오글리칸 수용액을 제조하는 것으로써, 바람직하게는 상기 코어단백질의 양말단이 활성화된 프로테오글리칸은 90만Da이상~120만Da이하 분자량을 갖는 것이 특징이다.

설명하면, 프로테오글리칸(proteoglycan)은 통상의 방법인 초산(Acetic Acid)을 용매로 하여 추출공정시 코어단백질 N말단에 프로테인의 변성이 일어나 코어단백질 한쪽이 불활성화 되기 때문에 구조적인 결함이 발생하여 다른 재료들과의 결합이 잘 이루어지지 않게 된다. 이에 본 단계에서는 상기 프로테오글리칸의 구성성분인 코어단백질의 양말단이 활성화되도록 하기 위해 기존 프로테오글리칸과 다른 추출방법인 알칼리 성분의 용매로 추출하여 얻게 되며, 이때 90만Da이상~120만Da이하 분자량을 갖는 프로테오글리칸이 생성되며, 이로 인해 상기 프로테오글리칸의 N말단에는 여러 물질들이 결합할 수 있게 된다.

이렇게 생성된 상기 프로테오글리칸은 통상 분말형태로 이루어져 있는 것으로써, 다른 재료들과 잘 혼합할 수 있도록 하기 위해 수용액 상태로 제조하여 사용하는 것이 바람직하다. 이에 본 단계에서는 상기 프로테오글리칸 분말을 물에 녹여 프로테오글리칸 수용액을 제조하는 것으로써 이때, 상기 프로테오글리칸은 수용액 전체 중량을 기준으로 1~10 중량%로 포함되는 것을 특징으로 1 중량%미만으로 함유될 경우에는 상기 프로테오글리칸의 효능이 미약하여 본 발명이 목적하는 효능을 얻기 어려우며, 10중량%를 초과할 경우에는 프로테오글리칸의 용해가 완전히 이루어지지 않을 우려가 있게 된다.

이렇게 제조된 프로테오글리칸 수용액은 상기 연어 유래 DNA단편이 포함된 복합체와 혼합하여 상기 조성물의 유효성분으로 적용될 경우 보다 상승된 효과를 갖는 화장료 조성물을 나타낼 수 있게 된다.

이때, 상기 연어 유래 DNA단편이 포함된 복합체와 상기 프로테오글리칸 수용액은 1 : 2~10 중량비로 이루어지는 것을 특징으로, 상기 프로테오글리칸 수용액의 함량이 2 중량비 미만으로 함유될 경우에는 상승된 미백효과 또는 주름개선능을 얻기 어려우며 10 중량비를 초과할 경우에는 다른 재료들과의 결합력이 떨어져 보다 상승된 효과를 얻지 못하거나 피부 흡수율이 떨어져 오히려 본 발명이 목적하는 효과를 얻지 못하게 된다.

또한, 본 단계에서는 상기 프로테오글리칸 수용액 외에도 추가적으로 참마추출물과 마늘추출물을 더 포함하는 것을 특징으로, 더욱 바람직하게는 상기 연어 유래 DNA 단편, 프로테오글리칸, 참마추출물 및 마늘추출물이 1 : 2~10 : 0.5~1 : 0.5~1 중량비로 구성되는 것이 특징이다.

여기서 참마 추출물은 뮤신이 다량 함유되어 있는 추출물이며, 상기 마늘 추출물은 알리닌이 다량 함유되어 있는 추출물인 것으로 함께 사용할 경우 보다 극대화된 효과를 나타낼 수 있게 된다.

이때, 상기 참마 추출물은 상기 연어 유래 DNA 단편 중량을 기준으로 0.5 중량비 미만으로 함유될 경우에는 상기 DNA Degradation현상을 방지하기 어려워 DNA 단편의 효과를 극대화 시키기 어렵게 되며 1 중량비를 초과할 경우에는 너무 과도한 함량으로 인해 끈적임이 강하여 발림성을 떨어뜨려 화장료 소재로 사용하기 어렵게 된다.

또한, 상기 마늘 추출물은 상기 연어 유래 DNA 단편 중량을 기준으로 0.5 중량비 미만으로 함유될 경우에는 상기 DNA 단편 처리에 따른 MPP 효소 활성을 낮추기 어려우며 1 중량비를 초과할 경우에는 너무 과도한 함량으로 인해 오히려 피부에 자극을 주어 화장료 소재로 사용하기 어렵게 된다.

이러한 상기 최종 본 발명의 화장료 조성물은 상기 유효성분들 이외에 통상의 화장료에 배합되는 성분, 예를 들면 유지류, 탄화수소, 납류, 지방산, 합성 에스테르류 등, 알코올류, 분체, 계면활성제, 증점제, 고분자화합물, 겔화제, 자외선 흡수제, 자외선 산란제, 산화 방지제, 색소, 안료, 방부제, 향료, 약제 또는 물 등을 본 발명의 효과를 손상하지 않는 범위에서 적절히 선택하여 사용할 수 있다.

유지류로서는 호호바유, 피마자유, 올리브유, 대두유, 야자유, 팜유, 카카오유, 밍크유, 터틀유(turtle oil) 등을 들 수 있다.

탄화수소류로서는 유동 파라핀, 바셀린, 마이크로 크리스탈린 왁스, 스쿠알렌 등을 들 수 있다.

납류로서는 밀랍, 라놀린, 카르나우바 왁스, 칸데릴라 왁스(candelilla wax) 등을 들 수 있다.

지방산으로서는 미리스틴산, 팔미틴산, 스테아린산, 올레인산, 이소스테아린산, 라우린산 등을 들 수 있다.

합성 에스테르류로서는 미리스틴산이소프로필, 팔미틴산이소프로필, 올레인산부틸, 미리스틴산미리스틸, 미리스 틴산옥틸도데실, 모노스테아린산프로필렌글리콜, 락트산미리스틸, 사과산이소스테아릴, 모노스테아린산글리세린, 염화디스테아릴디메틸암모늄 등을 들 수 있다.

유지류, 탄화수소, 납류, 지방산, 합성 에스테르류는 통상 합쳐서 화장료 조성물 당 0~30w/w%의 비율로 배합될 수있다.

알코올류로서는 에탄올, 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 라우릴알코올, 세탄올, 스테아릴알코올, 올레일알코올 등을 들 수 있다. 알코올류는 통상 화장료조성물 당 0~25 w/w%의 비율로 배합될 수 있다.

계면활성제로서는 폴리글리세린지방산에스테르류, 소르비탄지방산에스테르류, 폴리옥시에틸렌지방산에스테르류, 폴리옥시에틸렌소르비탄지방산에스테르류, 폴리옥시에틸렌알킬에테르류, 야자유지방산모노에탄올아미드, 폴리옥 시에틸렌 경화 피마자유, 라우릴황산나트륨, 피로글루타민산이소스테아린산폴리옥시에틸렌글리세릴, 알킬벤젠술 폰산나트륨, 폴리옥시에틸렌스테아릴에테르, 디알킬술포숙신산, 브롬화세틸피리디늄, 염화-n-옥타데실트리메틸 암모늄, 모노알킬인산, N-아실술타민산, N-아실글루타민, 자당 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌소르비탄모노스 테아레이트, 폴리옥시에틸렌라우릴에테르황산나트륨, 폴리옥시에틸렌 환원 라놀린, 슈거에스테르 등을 들 수 있다. 계면활성제는 통상 화장료 조성물 당 0~10 w/w%의 비율로 배합될 수 있다.

증점제로서는 카르복시비닐 폴리머, 메틸폴리실록산, 덱스트란, 카르복시메틸셀룰로오스, 카라긴난, 히드록시프 로필메틸셀룰로오스 등을 들 수 있다. 증점제는 통상 화장료 조성물 당 0~5 w/w%의 비율로 배합될 수 있다.

추가 보습제로서는 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 피로글루타민산, 아세틸글루타민산, 프로시아니딘등을 들 수 있다. 보습제는 통상 화장료 조성물 당 0~25 w/w%의 비율로 배합될 수 있다.

방부제로서는 안식향산, 살리실산, 디히드로아세트산 혹은 그들의 염류, 파라옥시안식향산에스테르류의 페놀류, 트리클로산 할로카본, 1,2-헥산다이올, 에틸헥실글리세린, 카프릴릴글라이콜, 하이드록시아세토페논 등을 1종 이상 혼용하여 사용한다. 방부제는 통상 화장료 조성물 당 0~2.0 w/w%의 비율로 배합될 수 있다.

향료는 통상 화장료에 사용하는 것이면 어떤 향료를 사용해도 된다.

안료로서는 산화철, 이산화티탄, 산화아연, 카올린, 탤크 등을 들 수 있다. 안료는 통상 화장료 조성물 당 0~5 w/w% 의 비율로 배합될 수 있다.

약제로서는 소맥 배아유, 비타민 A, 비타민 B2, 비타민 E, 아스코르빈산-2-인산마그네슘 혹은 나트륨, D-판토테닐알코올, 글리시리진산(glycyrrhizinate)디칼륨, 글루타티온(glutathione), UV 흡수제, 킬레이트제, 식물 추출물, 미생물 대사물/추출물 등을 들 수 있다. 약제는 통상 화장료 조성물 당 0~5 w/w%의 비율로 배합될 수 있다.

물로서는 수돗물, 미네랄 워터, 소금물(salt water), 해수, 해양 심층수, 초순수, 극지(極地) 얼음 유래 물, 미네랄 함유수(mineral-containing water), 정제수 등을 들 수 있다. 물은 임의의 비율로 배합된다.

이렇게 구성된 상기 화장료 조성물은 여러 가지 제형으로 이루어져 실 사용될 수 있는데 이때, 구체적인 예로는 스킨, 로션, 크림, 에센스, 세럼, 썬크림, 메이크업 프라이머, 메이크업 베이스, 파운데이션, 컨실러, 비비크림, 또는 씨씨(Color Correction) 크림, 팩트, 미스트 및 메이크업 픽서 제형 중 어느 하나일 수 있다.

이하에서는 실시예 및 실험예를 들어 본 발명에 관하여 더욱 상세하게 설명할 것이나, 이들 실시예 및 실험예는 단지 설명의 목적을 위한 것으로 본 발명의 보호 범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.

<실시예 1> 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물 1 제조

용해액 1 (0.25 M sucrose, 10 mM EDTA, 30 mM Tris-HCl, pH 7.5)에 DNA 추출을 위한 시료(연어 정자) 20 중량%를 넣어 용해시켰다.

상기 용해시킨 시료는 1000rpm에서 15분동안 원심분리한 후 상층액을 제거하여 침전물 1을 제조하였다.

그 다음 상기 침전물 1을 상기 용해액 1에 다시 넣어 용해시킨 후, 용해된 시료는 1000rpm에서 다시 10분 동안 원심하여 침전물을 제거하고 남은 상층액은 12,000rpm에서 30분동안 원심분리 한 후 상층액은 제거하고 남은 침전물2를 제조하였다.

그 다음 상기 침전물 2 1g을 정제수 1 ml에 넣고 용해시켜 용해물1을 제조하였다.

그 다음 상기 정제수에 용해된 용해물1은 10%(v/v) 아세틱에씨드를 상기 용해된 침전물과 동량의 부피 (V:V =1:1)로 혼합하여 4℃에서 4시간동안 반응시켜 혼합물 1을 제조하였다.

그 다음 상기 혼합물 1은 10%(v/v) NaCl 용액과 (V:V =1:1)으로 혼합하여 25℃ 상온에서 1시간동안 반응시켜 혼합물 2를 제조하였다.

그 다음 상기 혼합물 2를 12,000rpm을 1시간동안 수행하여 상층액은 제거하고 남은 침전물 3을 제조하였다.

그 다음 상기 남은 침전물3 1g에 100%(v/v) 에탄올 10 ml를 넣고 용해하여 불순물을 제거된 용해물 2를 제조하였다

그 다음 상기 용해물 2를 12,000rpm 조건하에 1시간동안 원심분리를 수행하여 침전물 4를 획득하였다.

그 다음 침전물 4 1g을 정제수 1ml에 넣고 용해시켜 도 4에서 확인되며 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 연어 유래 DNA 단편 복합체를 제조하였다.

그 다음 DNA 단편 복합체 10g과 정제수 90g을 혼합하여 본 발명의 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물 1을 제조하였다.

<실시예 2> 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물 2 제조

세정 및 탈지, 탈취처리된 연어의 코연골에서 수산화나트륨을 용매로 하여 알칼리 추출하고, 중화 및 여과 그리고 농축공정을 거쳐 저온 스프레이드라이 방식으로 건조시켜 전 제조공정에서 열처리 하지 않는 cold processsing 방식을 적용하여 프로테오글리칸 분말을 제조하였다. 그 다음 프로테오글리칸 분말 1g을 물 99g에 넣고 혼합하여 프로테오글리칸 수용액(중량평균 분자량이 90만Da이상~120만Da이하)을 제조하였다.

그 다음 상기 실시예 1의 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 연어 유래 DNA 단편 복합체 5g, 상기 프로테오글리칸 수용액 15g, 정제수 80g을 넣고 혼합하여 본 발명의 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물 2를 제조하였다.

<실시예 3> 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물 3 제조

참마 100 g을 98%(v/v)에탄올 용매 1L에 넣고 75℃에서 3 시간동안 추출하여 참마추출물을 제조하였다.

마늘 100 g을 98%(v/v)에탄올 1L를 넣고 75℃에서 3 시간동안 추출하여 마늘추출물을 제조하였다.

그 다음 실시예 1의 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 연어 유래 DNA 단편 복합체 2.5g, 상기 실시예 2에서 제조한 프로테오글리칸 수용액 10g, 상기 참마 추출물 2.5g, 상기 참마 추출물 2.5g, 정제수 82.5g을 넣고 혼합하여 본 발명의 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물 3을 제조하였다.

<비교예 1> 화장료 조성물 4 제조

DNA 정제실험 SDS 10%(v/v)를 포함하는 변성 솔루션에 DNA 추출을 위한 시료(연어 정자) 20 중량%를 넣어 용해시켜 용해액을 제조하였다.

12,000rpm 조건하에 원심분리를 수행하여 침전물을 제거하고 남은 상층액을 수득하였다.

그 다음 상기 상층액에 Nacl 10%(v/v)를 첨가한 후, 1 시간동안 반응시킨 후, 12,000rpm 조건하에 원심분리를 수행하여 침전물을 획득하였다.

그 다음 상기 침전물을 건조한 후, 이를 정제수에 넣고 용해시켰다.

정제수에 용해된 침전물은 10%(v/v) 아세틱에씨드를 용해물과 동량의 부피 (V:V =1:1)로 혼합하여 4℃에서 4시간 동안 반응시켰다.

반응한 용액은 10%(v/v) NaCl 용액에 (V:V =1:1)으로 혼합하여 25℃ 상온에서 1시간 반응시켰다.

그 다음 최종 반응물은 12,000rpm 조건하에 15분동안 원심분리를 수행하여 상층액은 제거하고 남은 침전물은 100%(v/v) 에탄올에 넣고 용해하여 불순물을 제거하였다.

그 다음, 에탄올에 혼합된 DNA 단편을 회수하기 위하여 12,000rpm 조건하에 15분 동안 원심분리를 수행하여 침전물 1g을 획득하고 정제수 1ml에 넣고 용해시켜 도 4에서 확인되는 연어 유래 DNA 단편 복합체를 제조하였다.

그 다음 DNA 단편 복합체 10g과 정제수 90g을 혼합하여 화장료 조성물 4를 제조하였다.

<비교예 2> 화장료 조성물 5 제조

상기 실시예 2와 같은 방법으로 제조하되, 상기 실시예 1의 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 연어 유래 DNA 단편 복합체 대신 상기 비교예 1에서 수득한 DNA 단편 복합체를 적용하여 화장료 조성물 5를 제조하였다.

<비교예 3> 화장료 조성물 6 제조

상기 실시예 3과 같은 방법으로 제조하되, 상기 실시예 1의 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 연어 유래 DNA 단편 복합체 대신 상기 비교예 1의 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 연어 유래 DNA 단편 복합체 5g, 상기 실시예 2에서 제조한 프로테오글리칸 수용액 10g, 상기 참마 추출물 2.5g, 상기 참마 추출물 2.5g, 정제수 80g을 넣고 혼합하여 화장료 조성물 6을 제조하였다.

(제형 1, 2 제조) 본 발명의 피부미백용 또는 피부주름개선용 에센스 또는 크림 제조

상기 실험예 2,3의 조성물을을 적용함과 동시에 하기 표 1의 조성비율대로 부가재료들을 혼합하여 에센스 제형 또는 크림제형의 화장품을 제조하였다. 원활한 혼합을 위해 교반기를 사용하며, 교반속도는 500~1,500 rpm, 20~45℃, 30~1시간정도로 적용하여 본 발명의 화장품들을 제조하였다.

	성분원료	기능	함량(wt%)
제형1 (실시예2의 화장료 조성물2 포함)	정제수	용제	91.90
	실시예2의 화장료 조성물 2	주성분	6.00
	1,2-헥산다이	보존제	2.00
	잔탄검	점증제	0.10
제형2 (실시예3의 화장료 조성물3 포함)	정제수	용제	69.00
	부틸렌글라이콜	보습제	5.00
	글리세린	보습제	5.00
	하이드로제네이티드레시틴	유화제	2.00
	폴리솔베이트60	유화제	1.00
	카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	피부유연화제	10.00
	실시예 3의 화장료 조성물 3	주성분	6.00
	1,2-헥산다이올	보존제	2.00

<실험예 1> DNA 단편 분석

1. 실험방법

실시예 1 및 비교예 2의 A T G C의 함량을 확인하기 위하여 실시예 1 또는 비교예 1의 용해물을 각각 0.8%(v/v) 아가로즈겔에 전기영동하고 아가로즈 겔로부터 각각의 DNA Band를 회수하여 동일 농도의 시료를 제조하여 유전자염기서열 분석을 의뢰하였다. 염기서열의 결과로서 A/T/G/G 함량을 확인하였다

2. 실험결과

도 4에 된 바와 같이, 실시예 2의 방법으로 수득한 DNA 단편을 대상으로 동일하게 아세틱에씨드 처리를 하였을 때 수득되는 DNA 단편의 크기는 16,656bp인 반면, 비교예 1로부터 수득되는 DNA 단편의 크기는 700~1,000bp인 것으로 도 3에 도시되어 있듯이 비교예 1에서 확인되지 않는 DNA 단편을 실시예 2의 DNA단편에서는 얻을 수 있음을 확인하였다.

이에, 분석결과 실시예 1의 DNA 단편은 A 4740 bp/ T 4388bp/ G 2703bp/C 4834bp가 조합되어진 유전자 단편이 확인되었으며, 이는 비교예1과 비교하였을때 상동성이 없는 유전자 염기서열임을 확인하였다.(서열번호 1)

<실험예 2> 미백효과 확인

1. 실험방법

미백효과를 확인하기 위해 Tyrosinase 저해활성을 확인한 것으로, 측정은 67 mM sodium phosphate buffer (pH 6.8) 80 μl에 10 mM L-DOPA (Sigma, USA)를 녹인 기질액 40 μl 및 시료용액 40 μl의 혼합액에 200 U/ml mushroom tyrosinase 40 μl을 첨가하여 37℃에서 10분간 반응시켜 반응액 중에 생성된 DOPA chrome을 492 nm에서 측정하였다. Tyrosinase 저해활성은 실시예들 및 비교예들로 제조된 시료용액의 흡광도 감소율로 나타내었다.

저해율(%)＝(1－ 시료첨가군의 흡광도 ) × 100

2. 실험결과

	정제수	알부틴	실시예1	실시예2	실시예3	비교예1	비교예2	비교예3
Tyrosinase 저해율(%)	0	80	50	58	72	45	53	63

상기 표 2에 나타나 있듯이, 서열이 다른 DNA 단편을 포함한 비교예1의 화장료 조성물 보다 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 DNA단편을 포함하는 실시예 1의 화장료 조성물의 경우 티로시나아제(Tyrosinase)의 함량이 높게 나타남을 확인하였다. 즉, 본 발명의 실시예 1의 경우에는 초원심 분리를 이용한 순수정제방법을 적용함에 따라 생체 단 0.2%만 존재하는 genomic DNA외 소수 DNA를 효과적으로 수득할 수 있게 되었고, 이를 통해 수득된 DNA 단편 구조가 높은 미백효과를 나타낸 것으로 판단된다.

또한, 실시예 2 또는 비교예 2의 경우에는 프로테오글리칸을 더 포함함에 따라 더 상승된 미백효과를 갖는 화장료 조성물이 생성되었음을 확인하였다.

또한, 비교예 3의 경우에는 미백효과가 비교예 2보다는 상승되긴 하였으나, 그 효과가 실시예 3보다는 떨어지는 반면, 실시예 3의 경우에는 미백효과가 가장 우수하게 나타난 것으로써, 이는 마늘 추출물에 포함된 알리신이라는 물질에 의해 DNA 단편으로 인해 발생될 수도 있는 MPP효소의 활성을 낮춰줄수 있으면서, 참마추출물에 포함되어 있는 뮤신이라는 성분이 프로테오글리칸과 결합되어 본 발명의 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 DNA 단편의 저하(Degradation)현상을 방지하고 오히려 그 효과를 극대화시켜주어 조성물을 안정화시켜줌에 따라, 미백효능이 최대 상승되어 나타난 것으로 판단된다.

<실험예 3> 항주름효과 확인

1. 실험방법

Elastase는 단백질인 엘라스틴을 분해하는 효소이다. Elastase는 엘라스틴 뿐만아니라 콜라겐을 분해할 수 있는 가수 분해 효소이다.

피부의 진피조직 속에서는 콜라겐과 피부의 탄력성에 관련된 엘라스틴이 그물망 구조로 형성하고 있는데, 엘라스틴이 elastase에 의해 분해되어 피부의 그물망 구조 결합이 끊어짐으로, elastase가 주름생성의 주원인 효소로 알려져 있다.

이에, 항주름효과를 확인하기 위해 Elastase 저해활성을 확인한 것으로, Elastase 저해활성측정은 n-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide을 기질로 사용하여 37도에서 30분간 반응하였다. 반응 후 기질로부터 생성되는 p-nitroanilide의 생성량을 445 nm에서 측정하였다. 실시예들 및 비교예들로 제조된 시료용액을 일정 농도가 되도록 조제하여 40 μ씩 96 well plate에 분주하여 준비하였다.

준비된 각각의 웰에 50 mM tris-HCl buffer (pH 8.6)에 녹인 2.5U/mL porcine pancreas elastase용액을 40 μ씩 각각 첨가한 후, 50 mM tris-HCl buffer (pH 8.6)에 녹인 n-succinyl-(L-Ala)3-p₁ nitroanilide (0.5 mg/mL)을 첨가하여 기질로 사용하였고 반응시간은 30분으로서 그 생성물을 측정하였다.

Elastase 저해활성은 각 실시예들 및 비교예들 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율을 아래와 같은 식으로 계산하여 그 활성을 확인 하였다.

효소활성 저해(%)=(1 - 시료첨가군 흡광도/무첨가군 흡광도)×100

2. 실험결과

	정제수	레티놀	실시예1	실시예2	실시예3	비교예1	비교예2	비교예3
Elastase 저해율(%)	0	30	13	18	42	10	13	33

상기 표 3에 나타나 있듯이, 서열이 다른 DNA 단편을 포함한 비교예1의 화장료 조성물 보다 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 DNA단편을 포함하는 실시예 1의 화장료 조성물의 경우 엘라스테이즈(Elastase)의 함량이 높게 나타남을 확인하였다.

또한, 실시예 2 또는 비교예 2의 경우에는 프로테오글리칸을 더 포함함에 따라 더 상승된 항주름효과를 갖는 화장료 조성물이 생성되었음을 확인하였다.

또한, 비교예 3의 경우에는 항주름효과가 비교예 2보다는 상승되긴 하였으나, 그 효과가 실시예 3보다는 떨어지는 반면, 실시예 3의 경우에는 항주름효과가 레티놀 성분보다도 더 높게 상승되어 가장 우수하게 나타남을 확인하였다.

<실험예 4> 항산화효과 확인

1. 실험방법

항산화효과를 확인하기 위해 DPPH radical scavenging ability 를 측정하였다. DPPH radical scavenging에 대한 실험은 각 시료용액(실시예들 및 비교예들) 100 μ에 0.2 mM의 DPPH 용액 50 μ를 넣고 교반 한 후 10분간 방치한 다음 517 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 시료용액의 첨가구와 무첨가구 사이의 흡광도의 차이는 하기 계산식을 통하여 백분율로 나타냈다.

전자공여능(%)=(1 - 시료첨가군 흡광도/무첨가군 흡광도)×100

2. 실험결과

	정제수	비타민C	실시예1	실시예2	실시예3	비교예1	비교예2	비교예3
전자공여능 (%)	0	95	58	58	82	30	30	48

상기 표 4에 나타나 있듯이, 서열이 다른 DNA 단편을 포함한 비교예1의 화장료 조성물이 항산화능이 30%로 나타난 반면 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 DNA단편을 포함하는 실시예 1의 화장료 조성물의 경우 항산화등이 58%로 월등히 높게 나타남을 확인하였다.

또한, 비교예 3의 경우에는 항산화효과가 비교예 2보다는 상승되긴 하였으나, 그 효과가 실시예 3보다는 월등히 떨어지는 반면, 실시예 3의 경우에는 항산화효과가 비타민C와 유사하게 나타나는 바, 항산화효과가 매우 우수하게 나타남을 확인하였다.

<실험예 5> 사용감 확인

1. 실험방법

사용감을 평가하기 위해, 20~40세 성인 여성 30명으로 구성된 품평단을 대상으로 사용감에 대한 설문을 실시하였다. 제형 1,2 및 비교제형 1,2의 화장료 조성물을 스킨사용 후 순차적으로, 제형 1,2 또는 비교제형 1,2를 아침에 사용하도록 한 후 설문항목에 5점 척도(점수가 높을수록 우수함)로 답하게 하는 방식으로 평가하여 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다. 여기서 비교제형 1,2는 상기 제형 1,2의 성분들 중 실시예 2,3의 조성물 대신 각각 비교예 2,3의 조성물들을 적용한 것이다.

2. 실험결과

상기 실험결과, 하기 표 5와 같이 나타났다.

구분	발림성	지속성	끈적임 (수치가 높을수로 끈적임이 적음)
제형1	4.0	4.5	4.7
제형2	4.5	4.7	4.9
비교제형1	1.5	2.5	2.2
비교제형2	0.5	2.0	2.0

상기 표 5에 나타나 있듯이, 비교제형 1,2의 화장품은 발림성이 떨어지며, 끈적임이 강하여 전반적인 사용감이 낮게 나타나는 반면, 제형 1,2의 화장품은 발림성 및 지속성이 우수한 평가를 받았으며, 끈적임 역시 적음을 알 수 있는 바, 본 발명의 유효성분들이 화장료 소재로써 적합함을 알 수 있었다.

이와 같이 실시예 1을 통해 수득된 DNA단편이 손상없이 조성물에 포함될 수 있도록 프로테오글리칸과 참마 추출물, 마늘 추출물을 추가적으로 혼합함에 따라 주름개선효과, 항산화, 미백 실험을 진행 하였을 때 가장 좋은 효과가 나타난 것으로 이는 마늘의 주성분인 알리인이 DNA단편처리에 따른 부작용을 미연에 방지해줌과 동시에 참마의 주성분인 뮤신과 프로테오글리칸성분이 DNA 단편의 구조적 안정성을 유지 시켜주면서 시너지 효과로서 적은 농도의 최대 효과를 나타낸 것으로 판단된다. 따라서, 본 발명에 의해, 피부 미백능을 높여줌과 동시에 피부주름개선효능도 갖으면서 사용감이 우수한 화장품을 제공할 수 있음을 알 수 있다.

상기의 본 발명은 바람직한 실시예 및 실험예를 중심으로 살펴보았으며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 본질적 기술 범위 내에서 상기 본 발명의 상세한 설명과 다른 형태의 실시예들을 구현할 수 있을 것이다. 여기서 본 발명의 본질적 기술범위는 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

<110> Shanghai Shanzhen Biological R&D Co. E&B Research InC. DNATURE, CO., LTD. <120> A Cosmetic for whitening or wrinkle improvement of skin and manufacturing method thereof <130> p-2111 <160> 1 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 16656 <212> DNA <213> salmon testis DNA scrap <400> 1 gctcgcgtag cttaactaaa gcataacact gaagctgtta agacggaccc tagaaagtcc 60 cgcaagcaca aaggcttggt cctgacttta ctatcagctt taactgtact tacacatgca 120 agtctccgca ttcctgtgag gatgccctta atcccctgcc cggggacgag gagccggcat 180 caggcgcgcc ccggcagccc acgacgcctt gctaagccac acccccaagg aaactcagca 240 gtgataaata ttaagccatg agcgaaagct tgacttagtt aaggttaaga gggccggtaa 300 aactcgtgcc agccaccgcg gttatacgag aggccctagt tgataactac cggcgtaaag 360 agtggttatg gaaaatattt aataaagccg aacaccccct cagccgtcat acgcacctgg 420 gagcacgaag acctaccgcg aaagcagctt taattatgcc tgaccccacg acagctaaga 480 aacaaactgg gattagatac cccactatgc ctagccgtaa accttgatag aaatatacaa 540 ttgatatccg ccagggaact acaagcgcca gcttaaaacc caaaggactt ggcggtgcct 600 cagacccacc tagaggagcc tgttctagaa ccgataaccc ccgttcaacc tcaccacctc 660 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ccaccctaac acgatttttc gcctttcact tcctattccc tttcgtcatc 14940 gcagctgcta cagtccttca cctcctattc cttcacgaga caggatctaa taacccggca 15000 ggaattaact ccgatgccga taaaatctcg tttcaccctt acttctcgta caaagacctc 15060 ctagggttcg tagccatact tcttggtcta acatcgttag ccctctttgc accaaacctc 15120 ctgggggacc cggacaattt tacgcccgcc aacccactgg tcaccccgcc tcatatcaaa 15180 cccgaatgat atttcctatt cgcttacgca atcctacgct ctatccccaa caaacttgga 15240 ggggtactcg cccttttatt ctcaatcctt gtccttatag ttgtccccat cctgcataca 15300 tctaaacaac gaggattgac ctttcgaccg ctaacccaat tcttattttg agctttagta 15360 gcagatatgc tcatcctaac ctgaatcgga ggtatacccg tagaacatcc gttcattatt 15420 atcggccaag ttgcctcagt aatctacttc accatcttcc tagttctttc cccattagcc 15480 ggctgggcag aaaataaagc cctccaatga gcctgcccta gtagctcagc gccagagcgc 15540 cggtcttgta atccggaagt cggaggttaa aaccctccct agtgctcaga gagaggagat 15600 tttaactccc gcccttaact cccaaagcta agattctaag ttaaactact ctctggcggc 15660 tacatcccgc acatttgtaa atgctataac ttgtaaaccc aatgttatac tacactatgt 15720 ataatattac atattatgta tttacccata tataatactg cacgtgagta gtacattata 15780 tgtattatca acatatactt attttaaccc ctcatacatc agcactaatc caaggtttac 15840 attaagcaaa acacgtgata ataaccaact aagttgtctg caactgatta attgccgcat 15900 caataaacct ccaactaaca cgggctccgt ctttacccac caactttcag catcagtcct 15960 gcttaatgta gtaagaaccg accaacgata tatcagtagg catactctta atgatggtca 16020 gggacagaaa tcgtattagg tcgcatctcg tgaattattc ctggcatttg gttcctaagt 16080 caagggctat ccttaagaaa ccaccccctg aaagccgaat gtaaagcatc tggttaatgg 16140 tgtcaatctt attgctcgtt acccaccaag ccgggcgttc tcttatatgc atagggttct 16200 cttttttttt ttttcctttc agcttgcata tacaagtgca agcaaagaaa tctaacaagg 16260 tcgaaccaga tcttgaattc cagagaaccc atgtatcatg gtggaatgat attctataaa 16320 gaatcacata cttggatatc aagtgcataa ggtcagttat tttcttcaca gatatctaag 16380 atctccccgg cttctgcgcg gtaaaccccc ctacccccct aaagctgaaa gatccttatg 16440 ttcctgttaa acccctaaac caggaagtct caaatcagcg taatattttt atatacatta 16500 atgaactttt gatgcacttt atagcatttg gcaccgacaa cgctgtaatg cgtataattt 16560 cataattaaa gtatacatta ataaactttt cgtccccttt cacacactca gcaccgacaa 16620 cgctattatc agcgccattt tcccgcaccg cccgct 16656

Claims (10)

1. 삭제
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제
5. 삭제
6. 삭제
7. 연어 정자 또는 정소를 0.05~1 M sucrose, 5~20 mM EDTA, 20~35 mM Tris-HCl, pH 7.5로 구성된 용해액에 넣고 용해시킨 후 원심분리한 다음 얻은 침전물1을 다시 상기 용해액에 넣고 용해시킨 후 이를 원심분리한 다음 얻은 침전물2를 정제수에 용해시켜 용해물1을 제조하는 제1단계;
   상기 용해물1에 아세트산을 넣고 혼합하여 혼합물1을 제조하는 제2단계;
   상기 혼합물1에 염화나트륨 용액을 넣고 혼합하여 혼합물2를 제조하는 제3단계;
   상기 혼합물2를 원심분리한 후, 상층액은 제거하고 남은 침전물3을 에탄올에 넣고 용해시켜 용해물2를 제조하는 제4단계;
   상기 용해물2를 원심분리한 후, 상층액은 제거하고 남은 침전물4를 정제수에 넣고 용해시켜 서열번호 1로 표현되는 염기서열을 갖는 DNA단편이 포함된 복합체를 제조하는 제5단계 및,
   상기 제5단계의 DNA단편이 포함된 복합체를 포함하는 피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물을 제조하는 제6단계;를 포함하는,
   피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물의 제조방법.
   
8. 제7항에 있어서,
   상기 제6단계의 조성물 제조시, 프로테오글리칸 분말을 정제수에 넣고 혼합하여 제조한 프로테오글리칸 수용액을 더 넣고 혼합하여 제조하는 것이 특징인,
   피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물의 제조방법.
   
9. 제8항에 있어서,
   상기 제6단계의 조성물 제조시, 참마추출물과 마늘추출물을 더 넣고 혼합하여 제조하는 것이 특징인,
   피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물의 제조방법.
   
10. 제7항 내지 제9항 중 선택된 어느 한 항의 제조방법에 의해 제조되어 피부 미백능 및 피부 주름개선능을 갖는 것이 특징인,
    피부미백용 또는 피부주름개선용 화장료 조성물.

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