KR20010038295A

KR20010038295A - 어류의 정원세포로부터 ｄｎａ 추출방법

Info

Publication number: KR20010038295A
Application number: KR1019990046220A
Authority: KR
Inventors: 박한오; 이인우
Original assignee: 박한오; 주식회사 바이오니아
Priority date: 1999-10-23
Filing date: 1999-10-23
Publication date: 2001-05-15
Also published as: CN1210288C; JP2001186899A; KR100320753B1; US6759532B2; US20020082416A1; CN1302810A

Abstract

본 발명은 어류의 정원세포로부터 데옥시리보핵산(DNA)을 다량으로 추출하는 방법에 관한 것으로, 어류의 정원세포로부터 DNA를 추출하는 방법으로서, a) 세포를 파쇄하고 분리하여 유백색의 콜로이드를 얻고, b) 단계 a)의 혼합물을, 1가 이온으로 이루어진 염을 1M이상 함유하는 pH 8 내지 pH 12의 알칼리 용액으로 처리시키고, c) 단계 b)의 혼합물에 에탄올을 가하여 DNA를 침전시키는 단계를 포함하여 구성됨을 특징으로 한다. 본 발명에 의하면 오염발생물질을 사용하지 않고 어류의 DNA를 쉽고 효율적으로 얻을 수 있다. 또한, 본 발명의 방법으로 남는 부산물에는 작물 토양 개선효과가 있는 질산염, 인산염, 각종 유기물 등이 포함되어 있어 액체 질소질 비료로 이용될 수 있어 경제적이다.

Description

어류의 정원세포로부터 ＤＮＡ 추출방법{Method for Extracting DNA from Fish Sperm}

본 발명은 어류의 정원세포로부터 데옥시리보핵산(DNA)을 대량으로 추출하는 방법에 관한 것이다.

데옥시리보핵산(DNA)은 유전 정보를 암호하는 생체 고분자로서 모든 생명체에 널리 존재한다. 데옥시리보핵산은 인산, 4종류의 염기, 데옥시리보오스로 이루어진 생체 고분자로서 고유의 물리화학적, 생물학적 특징으로 말미암아, 생화학 실험 재료, 화장품, 의약품, 식품첨가물 등의 여러 가지 용도로 사용되고 있다.

또한, 오징어 정원세포는 우리나라에서 대량 소비되고 있는 오징어를 가공하는 과정에서 대량으로 얻어지는 부산물이다. 오징어는 포획 후 대부분이 마른 오징어나 오징어포 등으로 가공되는데 여기서 오징어 내장이 대량의 부산물로 발생하게 된다. 이들 중 오징어 알과 정원세포는 음식점 등의 기본 반찬으로 부분적으로 활용되고 있다. 이중 오징어의 정원세포는 DNA가 풍부하여 다른 샘플에서보다 쉽게 DNA를 얻을 수 있는 가능성이 높다. DNA는 전통적으로 청어나 연어의 정원 세포에서 추출되었고, 명태의 정원세포로부터 음이온 계면활성제와 염화나트륨을 사용하여 DNA를 추출하는 방법이 한국 특허 제 35973 호에 제시되어 있다.

DNA를 대량으로 추출하기 위한 종래의 방법으로서는, 페놀을 사용하는 방법(미국 특허 3,838,148), 음이온 계면활성제와 고농도의 염화나트륨을 사용하는 방법(한국 특허 제 35972 호)등이 제시되어 있다. 이러한 방법들은 추출 과정에서 공해 물질을 다량으로 발생시킴으로써 이러한 공해 물질을 처리하기 위해서 많은 비용이 또한 발생되었다. 본 발명에서는 이러한 문제를 해결하기 위하여 공해 물질을 전혀 발생시키지 않고 폐액을 비료로서 활용할 수 있도록 하였다.

따라서, 본 발명자는 정원세포에 다량의 DNA가 함유되어 있음에 착안하여 고농도의 염을 함유하는 알칼리 용액을 사용함으로써 훨씬 경제적으로 DNA를 정제할 수 있음을 알고 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 어류의 정원세포로부터 인체에 유해한 페놀, 음이온 계면활성제인 SDS(Sodium Dodecyl Sulphate), 작물토양에 해로운 염화나트륨등의 환경 오염 물질을 사용하지 않고 오히려 토양 부활 개선재로 알려진 물질을 사용하여 정제중 생기는 부산물 전부를 식물 영양원으로 사용할 수 있으며, 종래 방법보다 더 간편하고 쉽게 DNA를 추출하는 방법을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 방법에 의해 생성된 부산물을 함유하는 액체 질소질 비료를 제공하는 것이다.

도 1은 pH, 아세트산 무수화물, 황산암모늄 처리에 따른 아가로즈 겔 전기영동 사진,

도 2는 에탄올 농도에 따른 아가로즈 겔 전기영동 사진,

도 3은 핵산분해효소 처리에 따른 아가로즈 겔 전기영동 사진이다.

도 4는 명태의 정원세포로 분리된 DNA의 아가로즈 겔 전기영동 사진이다.

본 발명을 상세히 설명하면 본 발명은 어류의 정원세포로부터 DNA를 추출하는 방법으로서, a) 어류의 정원세포를 파쇄하고 분리하여 유백색의 콜로이드를 얻고, b) 단계 a)의 혼합물을 1가 이온으로 이루어진 염을 1M이상 함유하는 pH 8 내지 pH12의 알칼리 용액으로 처리시키고, c) 단계 b)의 혼합물에 에탄올을 가하여 DNA를 침전시키는 단계를 포함하여 구성된다.

또한, 본 발명은 어류의 가공 부산물인 정원 세포로부터 DNA를 추출하는 방법으로서, a) 상기 세포를, 1가 이온으로 이루어진 염을 1M이상 함유하는 pH 8 내지 pH 12의 알칼리 용액중에서 파쇄하고, b) 단계 a) 혼합물에 무수화물을 가함으로써 아실화 반응시키고, c) 단계 c)의 혼합물에 에탄올을 가하여 DNA를 침전시키는 단계를 포함하여 구성된다.

본 발명에 있어서, 상기 어류의 정원세포로는 다양한 종류가 사용될 수 있으나 우리나라에서 값싸고 손쉽게 대량으로 구입할 수 있는 오징어, 명태의 정원세포가 사용될 수 있으며, 이들의 정원세포에는 다량의 DNA가 함유되어 있다.

어류의 정원세포를 증류수와 함께 분쇄기에서 분쇄하여 콜로이드 상태로 만든 후 체로 걸러서 분쇄되지 않은 조직을 제거해낸 후, 여기에 고농도의 염을 함유하는 알칼리 용액을 가할 수 있다. 또한 본 발명은 고농도의 염을 함유하는 알칼리 용액하에서 어류의 정원세포를 파쇄할 수 있으며, 더욱 본 발명내에서 어류의 정원세포를 증류수와 함께 파쇄하고, 고농도의 염 용액으로 처리하여 준 다음에, pH 8 내지 pH12의 알칼리 용액으로 처리하는 것을 순서대로 수행할 수도 있다.

단계 a)이후, 단계 b)전에 아실화 반응시키는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 아실화 반응은 무수화물을 가하는 것에 의해 수행된다. 무수화물(anhydride)로서는 바람직하게 아세트산 무수화물(acetic anhydride)이 사용되고, 프로필산 무수화물(propyric anhydride), 부틸산 무수화물(butyric anhydride)이 사용될 수 있다.

상기 염으로서는 질산나트륨(sodium nitrite), 탄산나트륨(sodium carbonite), 인산나트륨(sodium phosphate) 등이 사용될 수 있다.

상기 a) 단계 후에, RNA를 분해하는 단계를 더 포함할 수도 있다. RNA 분해는 알칼리 처리하거나 또는 RNA 분해효소(RNase)에 의해 수행될 수 있다.

본 발명의 작용기작을 상세히 설명하면, 세포를 파쇄하게 되면 고농도의 염에 의해 핵산 결합 단백질들은 강한 양전하를 띄게 됨으로써 DNA에 붙어 있는 상태가 약화되어 핵산결합단백질은 DNA로부터 분리되게 된다. 프로타민과 같은 DNA와 결합되어 있는 핵산 결합 단백질들은 리신 함량이 매우 높다. 리신기는 아민기를 함유하고 있어 고농도의 염에 의해 아민기는 양전하를 띄게 된다. 핵산 결합 단백질내의 양전하를 띈 아민기는 알칼리 용액에 의해 탈양성자화(deprotonized)되어 반응성이 매우 큰 작용기가 되어 무수화물과 반응하여 DNA와의 이온결합성 친화력을 잃게 된다(Roger L. Lundbland and Claudia M. Noyes., Chemical Reagents for Protein Modification, Vol I CRC Press, Inc., 1984, page 130 - 131; Riordan, J. F. and Vallee, B. L., Acetylation, Meth. Enzymol., 11, page 565 - 570, 1967). 또한 알칼리 용액은 RNA를 가수분해시킬 수 있다. 따라서, RNase를 처리하지 않아도 상관없다. 상기 탈양성자화된 아민기를 무수화물과 반응시키면 단백질의 아민기와 RNA의 아민기는 아실화되어 양전하가 사라져서 상기 염농도가 제거되어도 핵산 결합 단백질은 DNA에 다시 붙지 않게 된다. 그후, 에탄올을 가하면 DNA는 섬유상으로 용액에서 분리되는데 이를 수득하여 70% 에탄올로 세척하고 건조시켜 백색의 DNA 섬유를 얻게 된다.

이때 얻어지는 부산물을 사용하기 위해서 사용된 염기와 동일한 당량의 질산 또는 인산을 가하여 pH를 중성으로 조절한 후 단순 증류한다. 이때 회수되는 에탄올은 본 공정에 재사용될 수 있다. 증류 후에 남은 부산물에는 90% 이상의 질산염과 각종 유기물, 인산 염 등이 포함되어 있어 바로 비료로서 사용될 수 있다. 질산나트륨은 질소 함량이 16%로 토질을 약 알칼리성으로 만들어 주는 토양 부활제로서 알려져 있다. 따라서, 환경문제를 일으키는 오염물질이 전혀 없이 경제적으로 DNA를 추출하고, 남는 부산물은 액체 질소질 비료로서 사용될 수 있어 매우 경제적이다.

본 발명으로 정제된 DNA는 도 1 내지 도 4에 나타난 바와 같이 본 발명의 실시예에 의해 DNA가 효율적으로 분리됨을 알 수 있고, 이를 리보핵산 가수분해효소(RNAse A)와 핵산 가수분해효소(DNAse I)로 각각 처리한 후 한천 전기 영동 겔에서 확인하여 본 결과 순수한 DNA로 구성되어 있음을 확인할 수 있었다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 구체적으로 설명하나 본 발명이 이에 한정되지 않는다.

실시예 1

4M NaNO₃, 0.1M NaCO₃, 20mM EDTA를 함유하는 용액(용액 1; pH 약 11) 300ml과 4M NaNO₃, 0.1M NaHCO₃, 20mM EDTA를 함유하는 용액(용액 2; pH 약 8.3) 300ml에 각각 25g의 오징어 정원세포를 넣고 가정용 믹서로 5분 으깨어 주고 냉장실에서 1시간 깨주어서 세포 추출물을 회수하였다. 여기에 2ml의 아세트산 무수화물(acetic anhydride)을 가하고 4℃에서 1시간동안 아실화(acylation)반응을 시켰다. 선택적으로 단백질을 제거시키기 위해서 아세트산 무수화물을 처리하기 전 또는 후에 황산암모늄(ammonium sulfate)을 최종농도 50%가 되게 가하여 침전시키는 반응을 수행하였다. 그후, 최종농도가 20 - 80%가 되게 에탄올을 첨가하여 4℃에서 30분간 저어주고 원심분리하여 DNA 침전물을 회수하였다. 이를 다시 70% 에탄올 5 ml로 두 번 세척한 후 진공 중에 에탄올을 건조하여 DNA를 얻었다. 상기 회수된 DNA를 TE(Tris-EDTA) 완충액에 녹여 1.8% 아가로즈 겔 전기영동하고, TE 용액중의 DNA 시료 0.1ml를 1.9ml의 증류수에 가하여 OD 값을 측정하였다. 그 결과를 도 1 및 표 1로 나타내었다.

도 1에서, 레인 1은 용액 1을 사용하여 얻은 정원세포 추출물을 바로 전기영동한 결과를 나타내고, 레인 2는 레인1과 동일하나 용액 2를 사용한 결과를 나타내고, 레인 3은 용액 1을 사용하여 얻은 정원세포 추출물에 아세트산 무수화물을 처리한 후 바로 전기영동한 결과를 나타내고, 레인 4는 레인 3과 동일하나 용액 2를 사용한 결과를 나타내고, 레인 5는 용액 1을 사용하여 얻은 정원세포 추출물을 황산암모늄(ammonium sulfate)으로 단백질을 침전시키고 남은 상등액을 에탄올 침전시킨 결과를 나타내고, 레인 6은 레인 5와 동일하나 용액 2를 사용한 결과를 나타내고, 레인 7은 용액 1을 사용하여 얻은 정원세포 추출물에 아세트산 무수화물 처리 후 황산암모늄으로 침전시키고 남은 상등액을 에탄올 침전시킨 결과를 나타내고, 레인 8은 레인 7과 동일하나 용액 1대신 용액 2를 사용한 결과를 나타내고, 레인 9는 용액 1을 사용하여 얻은 정원세포 추출물에 아세트산 무수화물을 처리한 후 20%의 에탄올로 침전한 결과를 나타내고, 레인 10은 레인 9와 같으나 40% 에탄올로 침전한 결과를 나타내고, 레인 11은 레인 9와 같으나 60% 에탄올로 침전한 결과를 나타내고, 레인 12와 15는 레인 9와 같으나 80% 에탄올로 침전한 결과를 나타내고, 레인 13은 용액 1을 사용하여 얻은 정원세포 추출물을 아세트산 무수화물을 처리하지 않고 에탄올 침전시킨 결과를 나타내고, 레인 14는 레인 13과 같으나 용액 2를 사용한 결과를 나타내고, 레인 16은 레인 15와 같으나 용액 2를 사용한 결과를 나타낸다.

실시예 1에 의해 분리된 DNA의 측정된 OD 값

	4M NaNO₃, 0.1 M Na₂CO₃,20mM EDTA	4M NaNO₃, 0.1 M NaHCO₃,20mM EDTA
	EtOH20 %	EtOH40 %	EtOH60 %	EtOH80 %	EtOH20 %	EtOH40 %	EtOH60 %	EtOH80 %
OD 260nm	0.0578	0.1716	0.0888	0.2434	0.3195	0.6353	0.3408	0.3300
OD 280nm	0.0276	0.0824	0.0424	0.1589	0.2888	0.4175	0.2096	0.1820
OD 260/OD 280	2.09	2.08	2.09	1.53	1.11	1.52	1.63	1.81
EtOH시상등액의 성상	맑음	맑음	맑음	맑음	탁함	탁함	탁함	탁함
TE에 녹지 않는 침전물 형성유무	없음	없음	없음	미량	미량	미량	미량	미량

상기 도 1에 나타난 바와 같이 아세트산 무수화물을 처리하지 않았을 때보다 처리하였을 때 DNA가 더욱 잘 분리되었고, 고 알칼리성 용액(pH 11)인 용액 1로 실험한 것이 약 알칼리성 용액(pH 8.3)인 용액 2로 실험한 것보다 DNA 추출효율이 높았다. 단백질을 침전시키기 위해서 황산암모늄을 사용하였을 때 사용하지 않았을 때와 비교하여 큰 차이가 나지 않았다. 표 1의 OD 값을 보면 약 알칼리성의 pH 약 8.3인 용액 2보다 고 알칼리성인 pH 11의 용액 1이 고순도의 DNA를 얻을 수 있었다.

실시예 2

4M NaNO₃, 0.1M Na₂CO₃로 구성된 용액(용액 1; pH 약 11) 500ml과 4M NaNO₃, 0.1M NaHCO₃로 구성된 용액(용액 2; pH 약 8.3) 500ml에 각각 51g의 오징어 정원세포를 넣고 가정용 믹서로 5분 으깨어 주고 냉장실에서 초음파분쇄기(sonicator)로 1시간 깨주어서 세포 추출물을 회수하였다. 여기에 2ml의 아세트산 무수화물(acetic anhydride)을 가하고 4℃에서 1시간동안 아실화(acylation)반응을 시킨 후, 다시 2ml의 아세트산 무수화물을 넣고 초음파 분쇄기(Sonicator)로 15분 정도 깨준 후 다시 1시간 아실화반응을 시켜주었다. 여기에 에탄올을 최종농도가 20, 30, 40, 50, 60, 70%가 되게 첨가하고 최종 부피가 20ml가 되게 한 후(표 2 참조), 4℃에서 30분간 저어주고 원심분리하여 DNA 침전물을 회수하였다. 이를 다시 70% 에탄올 5 ml로 두 번 세척한 후 진공 중에 에탄올을 건조하여 DNA를 얻었다. 여기에 TE 완충액(pH 8.0) 5ml을 가하여 녹인 후 1.8% 아가로즈 겔 전기영동 하였다. TE 용액중의 DNA 시료 0.1ml를 1.9ml의 증류수에 녹여 OD값을 측정하였다. 그 결과를 도 2와 표 3으로 나타내었다.

에탄올 농도에 따른 시료 용량

에탄올 농도	20%	30%	40%	50%	60%	70%
에탄올 용량	4 ml	6 ml	8 ml	10 ml	12 ml	14 ml
시료 용량	16 ml	14 ml	12 ml	10 ml	8 ml	6 ml

도 2에서, 레인 1과 레인 4는 용액 1을 사용한 결과를 나타내고, 레인 2와 레인 5는 용액 2를 사용한 결과를 나타내고, 레인 3과 레인 6은 핵산가수분해효소 작용을 억제하는 20mM EDTA가 제거된 용액 1을 사용한 결과를 나타낸다.

에탄올 농도에 따른 측정된 OD 값

	4M NaNO₃, 0.1 M Na₂CO₃,
	EtOH20 %	EtOH30 %	EtOH40 %	EtOH50 %	EtOH60 %	EtOH70 %
OD 260nm	0.4988	0.7562	0.4234	1.5054	1.1180	0.9714
OD 280nm	0.2396	0.3650	0.2041	1.0277	0.7676	0.6759
OD 260 /OD 280	2.08	2.07	2.08	1.47	1.46	1.44
EtOH 침전시킨 침전물을 TE에 녹였을 때 성상	맑음	맑음	맑음	탁함	탁함	탁함
TE에 녹지 않는 침전물 형성 유무	미량	미량	미량	미량	미량	미량

도 2와 표 3에 나타난 바와 같이 에탄올 농도 20%, 30%, 40%는 순도는 높게 나타났지만 회수율이 낮았고, 40%, 50%, 60%에서는 상대적으로 순도는 낮았지만 회수율은 높게 나타났다. 또한, 세포추출물을 바로 전기영동하였을 때는(레인 1-3) 단백질 성분과 DNA가 엉겨 그대로 웰 내에 남아있는 것을 알 수 있었으며, 아실화 반응을 시켰을 경우에는 DNA가 단백질로부터 효과적으로 분리되는 것을 알 수 있었다.

실시예 3

상기 실시예 1 및 실시예 2에서 얻어진 DNA가 순수하게 추출 및 분리되었는지 확인하기 위해서 DNase와 RNase 효소실험을 하였다. 상기 실시예 1 및 2에서 얻어진 DNA 시료 10㎕와, 10배농축 반응완충액(10 mM Tris, pH 7.6, 10 mM MgCl₂, 50 mM NaCl, 1 mM Dithiothreitol(DTT)) 10㎕, 효소(DNase 또는 RNase) 10㎕, D.W. 70㎕를 섞어 총 100㎕가 되도록 한 후 36.7℃에서 2시간 30분 반응시키고 저온창고에 밤새 방치한 후, 1.8% 아가로스 겔 전기영동하였다. 그 결과를 도 3에 제시하였다. 도 3에 도시된 바와 같이 DNase를 처리한 결과 DNA로 추정되는 밴드가 거의 남아 있지 않았고, RNase를 처리하였을 경우에는 DNA가 그대로 남아 있음을 알 수 있었다.

실시예 4

4M NaNO₃, 0.1M Na₂CO₃를 함유하는 용액(pH 약 11) 300ml에 25g의 명태 정원세포를 넣고 가정용 믹서로 5분 으깨어 주고 냉장실에서 1시간 초음파분쇄기로 깨주어서 세포 추출물을 회수하였다. 여기에 2ml의 아세트산 무수화물(acetic anhydride)을 가하고 4℃에서 1시간동안 아실화(acylation)반응을 시켰다. 여기에 2ml의 아세트산 무수화물(acetic anhydride)을 가하고 4℃에서 2시간 동안 아실화(acylation)반응을 시켰다. 그후, 최종농도가 50 - 60 %가 되게 에탄올을 첨가하여 4℃에서 30분간 저어주고 원심분리하여 DNA 침전물을 회수하였다. 이를 다시 70% 에탄올로 한 번 세척한 후 에탄올을 건조시켜 DNA를 얻었다. 상기 회수된 DNA를 TE(pH 8.0) 완충액에 녹였다. 얻어진 DNA가 순수하게 추출 및 분리되었는지 확인하기 위해서 DNase 효소실험을 하였다. 상기 얻어진 DNA 시료 10㎕와, 10배농축 반응완충액(10 mM Tris, pH 7.6, 10 mM MgCl₂, 50 mM NaCl, 1 mM Dithiothreitol(DTT)) 10㎕, 증류수 70㎕를 섞어 총 100㎕가 되도록 한 후 36.7℃에서 밤새 반응(16시간) 시키고 난 후 1.8% 아가로스 겔에 전기 영동 하였다. 그 결과를 도 4로 나타내었다. 도 4에 제시된 바와 같이 DNase를 처리한 밴드에서는 DNA로 추정되는 밴드가 거의 남아있지 않은 것을 알 수 있었다. 도 4에서 레인 1은 명태 정원세포로부터 추출된 DNA를 나타내고, 레인 2는 상기 명태 정원세포로부터 추출한 핵산을 DNase로 가수분해시킨 결과를 나타낸다. 또한 OD 값을 측정하였을 때, 상온에서 아실화반응을 시켰을 경우에는 OD260/280=1.93, DNA 농도(mg/ml)가 1.15이었고, 저온에서 아실화반응을 시켰을 경우에는 OD260/280=1.96, DNA 농도(mg/ml)가 1.05이어서, 저온에서 아실화 반응을 시키는 것이 추출 효율이 좋았다.

상기한 바와 같이, 본 발명에 의하면, 오염물질을 사용하지 않고 어류의 DNA가 쉽고 효율적으로 분리될 수 있다. 또한 본 발명의 방법으로 남는 부산물에는 질산염, 인산염, 각종유기물 등이 포함되어 있어 바로 액체비료성분으로 이용될 수 있어 매우 경제적이다.

Claims

어류의 정원세포로부터 DNA를 추출하는 방법으로서,

a) 세포를 파쇄하고 분리하여 유백색의 콜로이드를 얻고, b) 단계 a)의 혼합물을, 1가 이온으로 이루어진 염을 1M이상 함유하는 pH 8 내지 pH12의 알칼리 용액으로 처리시키고, c) 단계 b)의 혼합물에 에탄올을 가하여 DNA를 침전시키는 단계를 포함하여 구성됨을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 추출원이 오징어 정원세포 또는 명태 정원세포인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 단계 a)와 단계 b)를 동시에 수행하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 또는 제 3 항에 있어서, 단계 b)이후의 혼합물을 아실화 반응시키는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 4 항에 있어서, 상기 아실화 반응은 혼합물에 무수화물을 가하는 것으로 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 5 항에 있어서, 상기 무수화물이 아세트산 무수화물인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 염은 질산나트륨, 탄산나트륨, 인산나트륨으로 이루어지는 군중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 세포 파쇄 방법으로 회전칼날형 분쇄기 또는 초음파분쇄기를 이용하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, RNA를 분해하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 9 항에 있어서, RNA 분해는 알칼리 처리, 또는 RNA 분해효소에 의해 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
어류의 가공 부산물인 정원 세포로부터 DNA를 추출하는 방법으로서,

a) 상기 세포를, 1가 이온으로 이루어진 염을 1M이상 함유하는 pH 8 내지 pH 12의 알칼리 용액중에서 파쇄하고, b) 단계 a) 혼합물에 무수화물을 가함으로써 아실화 반응시키고, c) 단계 c)의 혼합물에 에탄올을 가하여 DNA를 침전시키는 단계를 포함하여 구성됨을 특징으로 하는 방법.
제 11 항에 있어서, 세포 파쇄 방법으로 회전칼날형 분쇄기 또는 초음파분쇄기를 이용하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 따라 생성된 부산물로부터 에탄올을 증발시키고 남은 부산물을 함유하는 액체비료.