KR102367760B1

KR102367760B1 - 항-포스포리파아제 d4 항체를 포함하는 의약

Info

Publication number: KR102367760B1
Application number: KR1020167002746A
Authority: KR
Inventors: 도모히데 야마자키; 마유키 엔도; 고지 이시다
Original assignee: 에스비아이 바이오테크 가부시키가이샤
Priority date: 2013-07-30
Filing date: 2014-07-30
Publication date: 2022-02-24
Also published as: AU2014297217A1; CN105745226A; US20160168266A1; JP2019214621A; JP6431523B2; CN105745226B; MX2016001193A; CA2919736A1; EP3027656A1; DK3027656T3; WO2015016386A1; ES2736324T3; AU2014297217B2; SG10201800592SA; RU2016106708A; BR112016002001A2; CA2919736C; BR112016002001B1; JP2016534022A; EP3027656B1

Abstract

본 출원은 포스포리파아제 D4 (PLD4) 에 결합하는 항체를 포함하는 의약 및 활성화 B 세포의 검출 및 억제용 상기 의약을 이용하는 방법을 제공한다. 본 출원은 나아가 활성-억제 작용으로부터 자가면역 질환 및 알레르기증 치료에 관한 것이다. 이들 문제점을 해결하기 위해, 본 출원은 활성 성분으로서 포스포리파아제 D4 (PLD4) 단백질의 세포외 도메인에 결합하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편을 제공한다.

Description

항-포스포리파아제 D4 항체를 포함하는 의약 {MEDICAMENT COMPRISING ANTI-PHOSPHOLIPASE D4 ANTIBODY}

본 발명은 포스포리파아제 D4 에 결합하는 항체의 용도에 관한 것이다. 이하, "포스포리파아제 D" 는 PLD 로 약칭될 수 있고, "포스포리파아제 D4" 등은 PLD4 등으로 약칭될 수 있다.

PLD 는 포스파티딜 콜린의 가수분해에 의해 포스파티드산 및 콜린을 생성하는 반응을 촉매작용하고, 각종 세포간 시그널링을 야기하는 효소이다. 생성된 포스파티드산이 지질 시그널 분자로서 기능한다고 여겨져왔다.

PLD1 및 PLD2 는 2 유형의 포유동물 PLD 로서 공지된 바, 이는 이미 공지되어 있고, 포스파티딜 이노시티드-결합 Phox 상동 도메인 (PX 도메인) 및 포스파티딜 이노시티드-결합 플렉스트린 상동 도메인 (PH 도메인) 을 그의 N-말단 영역에 함유한다. 양 도메인은 PLD 의 막 국소화에 관여된다.

PLD1 및 PLD2 는 추가로 2 개의 His-x-Lys-x-x-x-x-Asp 서열 (HKD 모티프) 을 포함한다. HKD 모티프는 PLD 활성을 위한 필수적인 도메인이다.

PLD1 및 PLD2 에 의해 생성된 포스파티드산은 세포골격 재건, 엑소사이토시스, 포식작용, 암화, 세포 부착, 화학주성 등에 관여하는 것으로 제시된 바 있고, 주로 신경계, 면역계 등에 작용한다.

인간 Hu-K4 및 마우스 SAM9 (이제 공식적으로 PLD3 로 지칭) 는 PX 및 PH 도메인이 결핍되어 있고, 2 개의 HKD 모티프가 있음에도 불구하고 PLD 활성을 나타내지 않는다. 추가 3 개의 PLD 패밀리 멤버, 즉 PLD4, PLD5 및 PLD6 가 존재하나, 이들 비고전적인 PLD 에 대해서는 거의 알려지지 않았다.

Cerebellar Development Transcriptome Database (CDT-DB) 에서 마우스 소뇌 발달시 유전자 발현 패턴을 연구한 결과, 발달 동안 제어된 전사 생성물 PLD4 가 동정되었다 (비특허 문헌 1 참조). PLD4 의 염기성 특징은 보고된 바 없다. 글리코실화되거나 그렇지 않은 PLD4 의 효소 활성이 측정될 필요가 있다.

PLD4 는 SEQ ID NO: 1 에 나타낸 바 506 개의 아미노산 서열을 갖고, SEQ ID NO: 44 의 cDNA 염기 서열에 의해 인코딩된다 (비특허 문헌 1 및 2). PLD4 단백질은 C-말단 영역에 보존된 2 개의 HKD 모티프 (His-x-Lys-x-x-x-x-Asp 아미노산 서열, x 는 다른 아미노산을 나타냄) 로 구성된 2 개의 잠정 PDE 영역 (포스포디에스테라아제 모티프) 및 추정상 인산화부 (Thr 472) 를 갖는다. PLD4 단백질의 구조는 유형 II 트랜스멤브레인 단백질로서 추정된다. 나아가, PLD4 는 PX 및 PH 도메인이 없으나, 고전적 PLD 패밀리의 PLD1 및 PLD2 는 N-말단 영역에 이를 갖는다.

한편, PLD4 는 2 개의 HKD 모티프를 갖기 때문에 PLD 패밀리에 속하나, PX 도메인 및 PH 도메인이 결핍되어 있고, 그 대신에 추정 트랜스멤브레인을 갖는다 (비특허 문헌 3).

PLD4 mRNA 의 발현은, 1 주령의 마우스의 뇌량 및 소뇌 백질을 포함한 백질 영역 주변에 우선적으로 국소화된 소세포 무리에서 낮은 수준 내지 중간 수준으로 발견되었다. 이들 PLD4 mRNA-발현 세포는 Iba1-양성 미세아교세포로서 동정되었다 (비특허 문헌 3). 그러나, 마우스 소뇌의 PLD4-양성 세포는 10일령 마우스에서 분산된다. 이는, PLD4 발현이 마우스 소뇌의 초기 생후 발달 동안 일시적으로 제한되는 것을 시사했다.

마우스에서의 미엘린 형성은 출생 후 1 주 때 뇌량 및 소뇌 백질에서 시작된다. 이때, PLD4 는 백질에 존재하는 아메바형 (활성화 상태) 미세아교세포에서 고발현되고, 그에 따라 이때 백질 내 PLD4-발현 세포가 미엘린 형성에 관여한다는 가능성이 존재한다고 또한 여겨져 왔다. 특히, PLD4 는 식포에서 축적된다는 사실이 또한 밝혀졌고, PLD4 가 포식작용에 관여하는 가능성이 있다는 점이 시사되었다. 활성화 상태인 아메바형 미세아교세포, 각종 사이토킨 및 성장 인자가 분비되고 동시에 포식작용이 활성화된다. 발육기의 마우스의 뇌 백질에서 과잉의 희소돌기아교세포 (축삭 주변을 둘러쌈으로써 미엘린을 형성하는 중추 신경계 아교세포) 가 아포토시스를 겪는다는 점을 믿어왔다. 아메바형 미세아교세포에서 희소돌기아교세포가 분해 및 제거되어 시그널 분자를 분비하고 이로써 미엘린-형성 환경을 백질 내 조절할 수 있는 가능성이 있다. PLD4 가 미엘린 형성을 비롯한 이들 프로세스에 관여된다고 제안된 바 있다.

마우스 PLD4 mRNA 의 발현이 또한 비(非)뉴런 조직에서 관찰되고 주로 비장에서 분포된다. PLD4 단백질의 강 발현이 비장의 적색 속질의 변연대 주위에서 검출되고, 세포하 (subcellular) 막 분획에서 수집된 비장의 PLD4 단백질은 고 N-글리코실화된다. PLD4 가 이종 세포 시스템에서 발현되는 경우, PLD4 는 소포체 및 골지체에서 국소화된다. 이종 발현된 PLD4 는 PLD 효소 활성을 나타내지 않았다 (비특허 문헌 3).

시간적 공간적으로 제한된 PLD4 의 발현 패턴으로부터, PLD4 가 생후 조기 뇌 발달 동안 미세아교세포 및 비장 변연대 세포 간 통상 기능에 있어서 주요 역할을 할 수 있음이 시사되었다.

다른 한편, 본 발명자들은 PLD4 가 정지기의 pDC (plasmacytoid Dendritic Cell; 형질세포형 수지 세포) 에서 (정지 pDC), 특이적으로 고발현된다는 점을 알아냈다 (특허 문헌 1). 본 발명잘들은 나아가 PLD4-특이적 항체가 pDC 활성 억제에 이용될 수 있다는 점을 보고했다.

나아가, PLD4 는 일본인의 전신성 경화증의 신규 감수성 유전자 중 하나로서 보고된 바 있다 (비특허 문헌 4). 그러나, 유럽에서의 동일한 분석 결과, PLD4 와의 유의한 상관관계가 밝혀지지 않았고, PLD4 와 자가면역 질환, 예컨대 전신성 경화증 사이의 관계를 나타내는 강력한 결과는 획득되지 않았다.

면역 메카니즘은 두 그룹으로 대략적으로 분류된다. 그 하나는 "선천적 면역 (자연적 면역)" 으로, 이는 병원체와 같은 외래 물질을 탐지하고 초기 공격을 수행하는 것이며, 나머지 하나는 외래 물질로부터 유래된 항원 펩티드 등의 제시인 정보 교환을 통한 "획득 면역"이다. 호중구, 대식세포, 수지상 세포 (DC), NK (Natural Killer; 자연 살해) 세포 등은 주로 "선천적 면역"에 관여하고, 상기 수지상 세포 등에 의해 제시된 항원 펩티드 등의 정보가 전달되는 T 세포 및 B 세포는 "획득 면역"에 관여된다. 항원 펩티드의 정보 전달에 의해 활성화된 T 세포는 세포-매개 면역으로서 직접적인 방식으로 병원체를 특이적으로 인지 및 공격할 수 있고, 상기와 같은 방식으로 활성화된 B 세포는 항체 생성 (체액 면역) 에 의한 간접적인 방식으로 병원체를 특이적으로 인지 및 공격할 수 있다.

"선천적 면역"에서, 병원체에 보편적으로 존재하는 병원체-연관 분자 패턴 (pathogen-associated molecular pattern; PAMP) (LPS, CpG DNA, 지단백질, RNA 등) 이 Toll (톨) 형 수용체 (TLR) 을 통해 인지되고, 염증성 사이토킨의 분비가 NF-kB 를 통해 촉진되거나, 또는 인터페론 (IFN) 의 분비가 IFR (Interferon regulatory factor; 인터페론 조절 인자) 을 통해 촉진된다. TLR 은 세포하 국소화 부위에 의해 2 그룹으로 대략적으로 분류된다: 세포 표면 상에 발현되는 그룹 및 엔도솜 및 소포체 (ER) 에서 발현되는 그룹. pDC 에서, IRF7 는 엔도솜 및 소포체에 국소화된 TLR7 및 TLR9 를 통해 활성화되어 IFN-α 생성을 유도한다. 이들 TLR 이 세포 표면이 아닌 세포 내에서 발현되는 이유가 자가면역 질환 발병 위험성을 줄이기 위해 시사된 바 있다. TLR7 및 TLR9 는 단일-가닥 RNA 및 DNA 를 각각 리간드로서 인지한다. 외래 병원체 박테리아뿐 아니라 숙주도 또한 이들 핵산을 보유하고 그에 따라 핵산을 인지하고 면역 세포를 활성화시키는 수용체들이 항상 자가면역 질환을 유도한다는 점이 암시된 바 있다.

다른 한편, "획득 면역"에서 중요한 역할을 하는 B 세포 (B 림프구) 는 면역글로불린 Ig 수용체를 그 표면 상에 발현하는 림프구이다. B 세포는 골수에서 조혈간 세포로부터 생성되고, pre-B 세포 및 성숙 B 세포로 분화된 다음 미경험 (naive) B 세포 (성숙, 무감작 (unprimed) B 세포) 로 성숙된다. 미경험 B 세포는 상기 T 세포를 통한 자극뿐 아니라 또한 직접적인 항원 자극에 의해 활성화되고 나아가 분화 및 증식에 의해 항체-생성 세포로 되어 IgM, IgD, IgA, IgE, IgG (IgG1, IgG2, IgG2b, IgG3 등과 같은 하위부류를 비롯함) 과 같은 항체들을 생성 및 분비한다. 특이적 외래 항원을 인지하는 B 세포 수용체 (BCR) 에 덧붙여, 상기 TLR 은 B 세포에서 발현된다는 점이 알려져 있다. 예를 들어, B 세포의 증식 및 항체 생성을 야기하는 것으로 공지된 LPS 는 TLR4 의 리간드이고 상기 TLR7 및 TLR9 가 또한 B 세포에서 발현된다는 점은 기존에 공지된 바 있다. 이러한 B 세포가 상기 자가면역 질환뿐 아니라 알레르기성 질환도 또한 그의 항체-생성 능력의 과반응으로 인해 유도시킬 가능성을 갖고 있는 것으로 제시된 바 있다.

IgG, 면역글로불린 G 는 4 개의 펩티드 사슬 (2 개의 동일한 중쇄 및 2 개의 동일한 경쇄) 로 이루어진 항체 이소타입 (isotype) 이다. IgG 는 B 세포에 의해 생성되고, 적응 면역에서 중요한 역할을 한다. IgG 를 생성하지 않은 미경험 B 세포는 형질모세포로 분화되고 종국에는 형질 세포로 분화된다. 형질모세포 및 형질 세포는 다량의 항체를 생성할 수 있다. 통상적으로, 골수성 수지상 세포 (DC) 는 BAFF/APRIL 와 같은 막 분자 및/또는 IL-12 및 IL-6 으로의 자극에 의한 B 세포 성장 및 분화를 촉진하는 것으로 밝혀진 바 있다 (비특허 문헌 5, 6 및 7). 게다가, 형질세포형 DC (pDC) 는 미경험 B 세포의, IFN-α 및 IL-6 를 생성하는 항체-분비 형질모세포 및 형질 세포로의 성숙 및 분화를 유도한다 (비특허 문헌 8). IgG 의 가변 영역은 바이러스, 박테리아 및 진균 등의 각종 병원체를 포획하여, 이러한 감염으로부터 신체 보호를 도모한다.

SLE 는 고전적인 면역 복합-매개 자가면역 질환으로서 여겨진다. 면역 복합체 (IC) 는 핵산, 및 그의 연관 단백질, 예컨대 dsDNA, 리보뉴클레오단백질, 및 히스톤에 대항하는 생성된 자가-항체의 결과로서 순환 형성되거나 또는 제자리 형성된다. 이러한 IC 는 신장염, 관절염, 피부 발진, 및 혈관염과 같은 질환-특징적 임상 증상을 갖는 염증을 야기한다. SLE 환자의 혈액은 미경험 B 세포의 감소 및 기억 B 세포, 형질모세포 및 형질세포 증가를 특징으로 한다 (비특허 문헌 9, 10 및 11). 따라서, 자가 반응성 항체-분비 형질모세포의 조작을 통해 형질 세포로의 분화 및 항체 생성의 억제는 자가면역 질환 치유의 촉망되는 전술을 도모할 것이다.

PBMC 에서, B 세포의 각종 서브세트, 예컨대 미경험 B 세포, 기억 B 세포 및 형질모세포가 존재한다. PBMC 에서 B 세포 서브세트 대부분은 미경험 B 세포이다. 미경험 B 세포는 외래 항원에 의해 노출되지 않은 것이다. 기억 B 세포는 1차 감염에 의해 형성되고 형질모세포로의 분화에 의한 신속한 항체-매개 면역 반응에 있어서 중요한 것이다. 형질모세포는 다량의 항체를 분비하고 CD19+CD27+IgD-CD38+ 에 의해 표지되는 것이다.

일단 외래 항원에 노출되면, 미경험 B 세포는 활성화 B 세포가 된다. 활성화 B 세포는 추가로 기억 B 세포 및/또는 나아가 항체를 분비하는 형질모세포로 분화된다. 이러한 변화를 "성숙"이라 칭한다.

B 세포 성숙은 다중의 상들에서 발생한다. 초기의, 항원-독립 상은 독특한 항원에 결합할 수 있는 성숙한 B 세포를 유도한다. 이러한 성숙 단계는 생체 내 골수 및 비장에서 일어난다. B 세포 성숙의 항원-의존 상은 항원 결합 및 공동-자극에 의한 B 세포 활성화 후에 일어난다. 이들 시그널은 기억 B 세포 또는 항체-분비 형질모세포로의 B 세포 성숙을 촉진한다. B 세포 성숙의 항원-의존 상은 활성화 B 세포 증식, 항체 친화도 성숙 및 항체 클래스 스위칭을 포함한다. 이들 성숙은 2 차 림프 조직의 종자 중심에서 일어난다.

시험관 내 실험 조건에서, pDC 는 IFN-α 및 IL-6 방출을 통해 활성화 B 세포의 Ig-분비 형질모세포로의 성숙을 유도한다는 점이 보고되어 있다. CpG2216 는 pDC 를 활성화시켜 IFN-α 생성을 유도하고 B 세포를 성숙 개시시킨다. pDC 로부터의 IFN-α 은 IL-6 의 존재 하에서 활성화 B 세포의 형질모세포로의 성숙을 추가로 지지한다.

[인용 문헌]

[특허 문헌]

[PTL 1] PCT/JP2013/052781

[비특허 문헌]

[NPL 1] Tao et al., Nat. Methods 2(8), pp 591-598 (2005)

[NPL 2] Clark et al., Genome Res. 13(10), pp 2265-2270 (2003)

[NPL 3] Plos ONE www.plosone.org, November 2010, Volume 5, Issue 11, e13932

[NPL 4] ARTHRITIS & RHEUMATISM Vol. 65, No. 2, February 2013, pp 472-480

[NPL 5] Balazs et al., 2002, Immunity, 17, 341-352

[NPL 6] Litinskiy et al., 2002, Nat Immunol, 3, 822-829

[NPL 7] MacLennan and Vinuesa, 2002, Immunity, 17, 235-238

[NPL 8] Jego et al, 2003, Immunity, 19, 225-234

[NPL 9] Odendahl et al., 2000, JI, 165, 5970-5979

[NPL 10] Arce et al., 2001, JI, 167, 2361-2369

[NPL 11] Wei et al., 2007, JI, 178, 6624-6633

[개요]

[기술적 문제]

본 발명이 해결해야 할 문제는 PLD4 와 결합하는 항체를 이용하여 활성화 B 세포를 조절하고, 이로써 유발된 질환 증상을 개선시키는 것이다.

[과제의 해결 수단]

PLD4 에 대한 연구를 통해, 본 발명자들은 이전에 보고된 바 있는 정지기의 pDC 세포에 더하여 PLD4 발현이 또한 활성화 B 세포에서 유도되었음을 증명했다. 그에 따라, 본 발명자들은 활성화 B 세포에 대한 PLD4 항체의 영향을 조사하였다. 항-PLD4 항체의 생성 및 정제 방법은 특허 문헌 1 의 방법으로써 실시된다.

즉, 본 발명은 후술되는 항-PLD4 항체를 이용하는 제 2 용도에 관한 것이다.

(1) 포스포리파아제 D4 (PLD4) 단백질에 결합하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편을 활성 성분으로서 포함하는, 활성화 B 세포의 억제를 위한 약학적 조성물.

(2) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SYWMH (SEQ ID NO: 2), CDR2 로서 서열 DIYPGSDSTNYNEKFKS (SEQ ID NO: 3) 및 CDR3 로서 서열 GGWLDAMDY (SEQ ID NO: 4) 을 갖는 약학적 조성물.

(3) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASQDISNYLN (SEQ ID NO: 5), CDR2 로서 서열 YTSRLHS (SEQ ID NO: 6) 및 CDR3 로서 서열 QQGNTLPW (SEQ ID NO: 7) 을 갖는 약학적 조성물.

(4) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SYWMH, CDR2 로서 서열 DIYPGSDSTNYNEKFKS 및 CDR3 로서 서열 GGWLDAMDY 을 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASQDISNYLN, CDR2 로서 서열 YTSRLH 및 CDR3 로서 서열 QQGNTLPW 을 갖는 약학적 조성물.

(5) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 TYWMH (SEQ ID NO: 8), CDR2 로서 서열 AIYPGNSETSYNQKFKG (SEQ ID NO: 9) 및 CDR3 로서 서열 GYSDFDY (SEQ ID NO: 10) 을 갖는 약학적 조성물.

(6) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 HASQGIRSNIG (SEQ ID NO: 11), CDR2 로서 서열 HGTNLED (SEQ ID NO: 12) 및 CDR3 로서 서열 VQYVQFP (SEQ ID NO: 13) 을 갖는 약학적 조성물.

(7) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 TYWMH, CDR2 로서 서열 AIYPGNSETSYNQKFKG 및 CDR3 로서 서열 GYSDFDY 을 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 HASQGIRSNIG, CDR2 로서 서열 HGTNLED 및 CDR3 로서 서열 VQYVQFP 을 갖는 약학적 조성물.

(8) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 DYNLH (SEQ ID NO: 14), CDR2 로서 서열 YIYPYNGNTGYNQKFKR (SEQ ID NO: 15) 및 CDR3 로서 서열 GGIYDDYYDYAIDY (SEQ ID NO: 16) 을 갖는 약학적 조성물.

(9) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASENIYSHIA (SEQ ID NO: 17), CDR2 로서 서열 GATNLAH (SEQ ID NO: 18) 및 CDR3 로서 서열 QHFWGTP (SEQ ID NO: 19) 을 갖는 약학적 조성물.

(10) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 DYNLH, CDR2 로서 서열 YIYPYNGNTGYNQKFKR 및 CDR3 로서 서열 GGIYDDYYDYAIDY 을 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASENIYSHIA, CDR2 로서 서열 GATNLAH 및 CDR3 로서 서열 QHFWGTP 을 갖는 약학적 조성물.

(11) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SYYLY (SEQ ID NO: 20), CDR2 로서 서열 LINPTNSDTIFNEKFKS (SEQ ID NO: 21) 및 CDR3 로서 서열 EGGYGYGPFAY (SEQ ID NO: 22) 을 갖는 약학적 조성물.

(12) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 TSSQTLVHSNGNTYLH (SEQ ID NO: 23), CDR2 로서 서열 KVSNRFS (SEQ ID NO: 24) 및 CDR3 로서 서열 HSTHVP (SEQ ID NO: 25) 을 갖는 약학적 조성물.

(13) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SYYLY, CDR2 로서 서열 LINPTNSDTIFNEKFKS 및 CDR3 로서 서열 EGGYGYGPFAY 을 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 TSSQTLVHSNGNTYLH, CDR2 로서 서열 KVSNRFS 및 CDR3 로서 서열 HSTHVP 을 갖는 약학적 조성물.

(14) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SYGMS (SEQ ID NO: 26), CDR2 로서 서열 TISSGGSYIYYPESVKG (SEQ ID NO: 27) 및 CDR3 로서 서열 LYGGRRGYGLDY (SEQ ID NO: 28) 을 갖는 약학적 조성물.

(15) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RSSKSLLHSDGITYLY (SEQ ID NO: 29), CDR2 로서 서열 QMSNLAS (SEQ ID NO: 30) 및 CDR3 로서 서열 AQNLEL (SEQ ID NO: 31) 을 갖는 약학적 조성물.

(16) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SYGMS, CDR2 로서 서열 TISSGGSYIYYPESVKG 및 CDR3 로서 서열 LYGGRRGYGLDY 을 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RSSKSLLHSDGITYLY, CDR2 로서 서열 QMSNLAS 및 CDR3 로서 서열 AQNLEL 을 갖는 약학적 조성물.

(17) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SHYYWT (SEQ ID NO: 32), CDR2 로서 서열 YISYDGSNNYNPSLKN (SEQ ID NO: 33) 및 CDR3 로서 서열 EGPLYYGNPYWYFDV (SEQ ID NO: 34) 을 갖는 약학적 조성물.

(18) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASQDIDNYLN (SEQ ID NO: 35), CDR2 로서 서열 YTSRLHS (SEQ ID NO: 36) 및 CDR3 로서 서열 QQFNTLP (SEQ ID NO: 37) 을 갖는 약학적 조성물.

(19) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SHYYWT, CDR2 로서 서열 YISYDGSNNYNPSLKN 및 CDR3 로서 서열 EGPLYYGNPYWYFDV 을 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASQDIDNYLN, CDR2 로서 서열 YTSRLHS 및 CDR3 로서 서열 QQFNTLP 을 갖는 약학적 조성물.

(20) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SHYYWS (SEQ ID NO: 38), CDR2 로서 서열 YISYDGSNNYNPSLKN (SEQ ID NO: 39) 및 CDR3 로서 서열 EGPLYYGNPYWYFDV (SEQ ID NO: 40) 을 갖는 약학적 조성물.

(21) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASQDIDNYLN (SEQ ID NO: 41), CDR2 로서 서열 YTSRLHS (SEQ ID NO: 42) 및 CDR3 로서 서열 QQFNTLP (SEQ ID NO: 43) 을 갖는 약학적 조성물.

(22) 상기 (1) 에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 중쇄의 가변 영역에서, CDR1 으로서 서열 SHYYWS, CDR2 로서 서열 YISYDGSNNYNPSLKN 및 CDR3 로서 서열 EGPLYYGNPYWYFDV 을 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASQDIDNYLN, CDR2 로서 서열 YTSRLHS 및 CDR3 로서 서열 QQFNTLP 을 갖는 약학적 조성물.

(23) 수탁 번호 NITE BP-1211, NITE BP-1212, NITE BP-1213 및 NITE BP-1214 의 하이브리도마 mp5B7, mp7B4, mp13D4 및 mp13H11 중 임의의 것에 의해 생성된 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편을 활성 성분으로서 포함하는, 활성화 B 세포를 억제하기 위한 약학적 조성물.

(24) 상기 (1) 내지 (23) 중 어느 하나에 있어서, 추가로 자가면역 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물.

(25) 상기 (1) 내지 (23) 중 어느 하나에 있어서, 추가로 알레르기성 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물.

(26) PLD4 의 세포외 도메인에 결합하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편을 시험될 세포와 접촉시키고, 상기 세포에 결합하는 상기 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편을 검출하는 단계를 포함하는, 활성화 B 세포의 검출 방법.

(27) PLD4 의 세포외 도메인에 결합하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편을 포함하는, 활성화 B 세포의 검출용 시약.

(28) 하기의 성분들 중 어느 하나를 활성화 B 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, 활성화 B 세포의 억제 방법:

(a) PLD4 와 결합하고, 활성화 B 세포를 억제하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편, 및

(b) (a) 의 모노클로날 항체의 상보성 결정 영역이 이식된 면역글로불린, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편.

(29) 하기의 성분들 중 어느 하나를 생체에 투여하는 단계를 포함하는, 생체에서 활성화 B 세포의 억제 방법:

(a) PLD4 와 결합하고, 활성화 B 세포의 활성을 억제하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편, 및

(30) 상기 (28) 또는 (29) 에 있어서, 활성화 B 세포의 활성은 항체-생성 활성인 방법.

(31) 활성 성분으로서 하기의 성분들 중 어느 하나를 포함하는 활성화 B 세포의 억제제:

(32) 상기 (31) 에 있어서, 활성화 B 세포의 활성이 항체-생성 활성인 활성화 B 세포의 억제제.

"활성화 B 세포"는 BCR 및 TLR 을 통한 직접적인 자극뿐 아니라 T 세포를 통한 자극에 의해 증식 및 항체 생성 및 분비 활성을 프로세싱하는 B 세포를 포함할 수 있다.

"항원-결합 영역을 포함하는 단편"이란, 이에 제한되는 것은 아니나 팝파인 또는 펩신으로의 부분 소화 (digestion) 로써 수득된 Fab, Fab', F(ab')₂ 단편 등을 포함할 수 있다. 더욱이, 항원-결합 영역을 포함하는 단편은 또한 모노클로날 항체의 CDR (상보성 결정 영역) 이 이식된 가변 영역을 포함하는 면역글로불린의 단편을 포함할 수 있다. 이들 항체 단편은 항원과의 결합 친화도를 갖는 항체 분자로서 이용될 수 있다는 점이 익히 공지되어 있다. 다르게는, 요구되는 항원-결합 활성이 유지되는 한, 유전자 재조합에 의해 구축된 항체가 이용될 수 있다. 유전자 재조합에 의해 구축된 항체의 예에는 키메라 항체, CDR-이식 항체, 단쇄 Fv (scFv), 디아체 (디아체들), 선형 항체 및 항체 단편으로부터 형성된 다특이적 항체 등을 포함할 수 있다. 모노클로날 항체 기반의 이들 항체, 또는 모노클로날 항체를 생성하는 항체-생성 세포를 수득하는 방법이 공지되어 있다.

“자가면역 질환”은 그 자신의 신체 조직을 외래 물질로서 오해하여 면역 기능의 공격에 의해 야기된 질환이다. 기관-특이적 자가면역 질환은 길랭-바레 증후군 (Guillain-Barre syndrome), 중증근육 무력증, 만성 위염 (만성 위축 위염), 자가면역 간염, 원발성 쓸개관 간경화증, 원발성 경화성 담관염, 자가면역 췌장염, 대동맥염 증후군, 굿파스처 증후군, 급속 진행 사구체 신염, 거대적혈모구 빈혈, 자가면역용혈빈혈, 자가면역성호중구 감소증, 특발혈소판감소 자색반병, 바세도우병 (Basedow disease), 하시모토 갑상선염 (Hashimoto thyroiditis), 1차 갑상선 기능부전, 특발성 애디슨병, 제 1 형 당뇨병, 궤양성 대장염, 크론병, 복강 질환 등을 포함하고; 및 전신성 자가면역 질환은 관절 류마티즘, 전신 홍반 루푸스, 항인지질 항체 증후군, 다발근육염, 피부경화증, 쇼그렌 증후군 (Sjogren’s syndrome), 혈관염 증후군, 림프증식성 자가면역 증후군 (ALPS) 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.

"알레르기성 질환”은 외래 물질에 대한 비정상적인 면역 반응에 의해 야기된 질병이고, 이는 아토피 피부염, 기관지천식, 꽃가루병, 알레르기비염, 두드러기, 영아 천식, 알레르기성 위창자염, 접촉성 피부염, 혈청병, 혈관자색반 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.

[본 발명의 이득 효과]

본 발명은 PLD4 를 특이적으로 인지하는 항체 또는 그의 단편을 이용하여 활성화 B 세포의 억제에 기인하는 치료적 방법, 및 이의 치료 효과를 갖는 의약을 제공한다.

본 발명은 활성화 B 세포-억제 활성을 이용함으로써 자가면역 질환 또는 알레르기성 질환을 앓는 환자에게 예방적 및 치료적 효과를 발휘할 것으로 추가 기대될 수 있다.

[도면의 간단한 설명]

[도 1]

도 1 은 인간 B 세포 (CD19+) 의 항-PLD4 항체로의 염색을 나타내는 FACS 분석도이다. PLD4 단백질은 TLR9 리간드, CpG2006 로의 자극에 의해 CD19+ B 세포 상에서 유도되었다. 활성화 B 세포 (CD19+) 에서의 PLD4 의 유도는 TLR9 리간드 (CpG2006) 에 의해 검출될 수 있다. 모노클로날 항체 11G9.6 및 5B7 을 이용하여 PLD4 를 검출하였다. 마우스 IgG2b, κ 를 음성 대조군으로서 이용하였다.

[도 2]

도 2 는 항 PLD4 항체 및 항-CD19 항체로의 인간 PBMC 의 염색을 나타내는 FACS 분석도이다. PLD4+ 세포는 활성화 B 세포 (CD19+) 에서 TLR9 리간드 자극에 의해 증가되었다. 마우스 IgG1, κ 를 음성 대조군으로서 이용하였다.

[도 3]

도 3 은 TLR9 리간드 자극 유무하, 인간 PBMC 의 항-PLD4 항체 및 항-CD19 항체로의 염색을 나타내는 FACS 분석도이다. PLD4+ TLR9 리간드-자극된 B 세포 (CD19+) 의 유의한 증가가 항-PLD4 항체 (5B7, 13D4, 13H11 및 11G9.6) 로 검출될 수 있다. 마우스 IgG2b, κ 를 음성 대조군으로서 이용하였다.

[도 4]

도 4 는 지시된 각 항-PLD4 키메라 항체에 의한 PLD4+ 활성화 B 세포의 감소를 나타내는 FACS 분석도이다. 항-PLD4 키메라 항체들 (ch3B4, ch13D4, ch13H11, ch5B7 및 ch11G9.6) 과의 PBMC 의 공동-배양은 TLR9 리간드의 존재 하에서 PLD4+ 활성화 B 세포를 감소시켰다. 그러나, 항체가 첨가되지 않은 경우 (NoAb) 및 비특이적 항체를 이용한 경우 (대조군 Ig), CpG2006 첨가에 의한 B 세포의 활성화가 억제될 수 없었다.

[도 5]

도 5 는 도 4 에서의 억제 효과를 수치화한 도표이다. PLD4 를 발현하고 대조군 Ig 로 처리한 활성화 B 세포 그룹을 100% 로 간주하고 PLD4 를 발현하고 각 항-PLD4 키메라 항체로 처리한 활성화 B 세포 그룹에서의 변화를 나타낸다.

[도 6]

도 6 은 유세포분석기의 결과이다. PBMC 를 재조합 인간 IL-6 및 TLR9 리간드의 존재 하 지시된 키메라 PLD4 항체와 배양했다. 형질모세포 집단 (CD19+CD27+IgD-CD38+) 은, 대조군 Ig 처리와 비교시 ch3B4, ch5B7, ch13D4, ch13H11, 또는 ch11G9.6 로의 처리에 의해 감소되었다.

[도 7]

도 7 은 도 6 의 배양 상청액의 ELISA 분석 결과이다. 형질모세포로부터의 인간 IgG 생성은 대조군 Ig 처리와 비교시 ch3B4, ch5B7, ch13D4, ch13H11, 또는 ch11G9.6 로의 처리에 의해 감소되었다.

[구현예 설명]

본 발명자들은 PLD4 이 B 세포 활성화로 발현이 유도된 분자임을 새롭게 발견했다.

본 발명자들은 인간 PLD4 의 발현, 세포하 국소화, 구조 및 기능을 이전에 보고한 바 있다 (특허 문헌 1). 본 발명에서, PLD4 발현은 pDC 뿐 아니라 활성화 B 세포에 의해서도 유도된다는 점이 추가로 밝혀냈다. 항-PLD4 항체는 활성화 B 세포를 억제한다는 점을 추가로 새롭게 알아냈다. 이러한 발견은 항-PLD4 항체가 이미 보고된 바 있는 pDC 활성 억제뿐 아니라 B 세포 활성 억제에 의한 자가면역 질환에 대해 치료 효과를 갖는 가능성을 강화시킨다.

단백질, 예컨대 CD19, CD20, CD22 및 BAFF-R 은 B 세포의 표면에서 발현된다. CD19 는 pro-B 세포와 같은 초기 단계에서 항체-분비 형질 세포로 B 세포 상에서 발현되고, 성숙 B 세포에서 보조 수용체 제어 활성화로서 작용한다. CD20 은 pre B 세포에서 활성화 B 세포로 발현되고, CD22 는 성숙 B 세포의 세포 표면 상 발현되고, BAFF-R 의 발현은 B 세포의 광범위한 분화에서 관찰된다. 따라서, 이들 단백질을 인지하는 항체는 활성화 B 세포뿐 아니라 무감작 미경험 B 세포를 억제한다는 염려가 존재한다. 그러나, 본 발명의 항-PLD4 항체는 미경험 B 세포에 영향을 미치지 않고 활성화 B 세포를 억제하는 것을 특징으로 한다.

본 발명에서 사용된 항-PLD4 항체는 이전에 보고된 것과 동일하다 (특허 문헌 1). 간략히, 면역원으로서, PLD4 의 세포외 도메인을 포함하는 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 1 로 나타낸 아미노산 서열에서 54 에서 506 위치에 해당하는 아미노산 서열) 을 인코딩하는 재조합 PLD4-Ig 융합 단백질을 이용하여, PLD4 에 대항하는 항체가 하기와 같이 수득되었다.

<항-인간 PLD4 모노클로날 항체의 제작>

1) 면역화

면역원으로서, 상기 재조합 PLD4-Ig 융합 단백질을 이용했다. PLD4-Ig 융합 단백질을, 3 마리의 BALB/c 마우스의 등 피하조직에 투여했다. 애쥬번트 (adjuvant) 로서, 프로인트 완전 및 불완전 애쥬번트 (SIGMA) 를 이용했다. 제 1 투여 부피는 200 ㎍/마우스이고, 제 2 내지 제 4 투여 부피는 50 ㎍/마우스였다.

2) 항혈청 역가 (titer) 의 확인

제 3 및 제 4 면역화 후 채혈하고, 항-혈청 역가를 ELISA 로써 평가했다.

PLD4-Ig 융합 단백질을, 96 웰 마이크로타이터 플레이트에 고체화했다. 항혈청을 1000-배로부터 3-배 증가로 계단 희석하고, 729000-배 까지의 계단 희석물을 제조했다. 항원-코팅된 플레이트에, 각 50 ㎕ 의 각 샘플을 첨가하고, 1차 반응을 행하였다. 세정 후, 2차 반응을 HRP-라벨링된 항-마우스 IgG (κ, λ) 항체로 행하고, OPD (오르토페닐렌 디아민) 로 발색 검출했다 (490 nm).

3) 세포 융합

항-혈청 역가 증가가 관찰된 마우스로부터 비장 세포를 추출했다. 추출된 비장 세포 및 마우스 골수 세포 (P3U1) 를 PEG 방법으로써 융합하고, 융합된 비장 세포를 선택적으로 HAT 배지에서 배양했다.

<CAL-1 세포를 이용한 하이브리도마의 FACS 스크리닝>

HAT 선택적 배양에 의해 수득된 융합된 비장 세포의 각 클론으로부터 생성된 항체를 FACS 로 평가했다. 결과적으로, 하이브리도마 배양 상청액에서 3B4, 5B7, 7B4, 8C11, 10C3, 11D10, 13D4, 13H11, 14C1 및 11G9.6 는 인간 PLD4 와 양호하게 반응했다.

상기 하이브리도마로부터 생성된 각각의 모노클로날 항체에서, 가변 영역 내의 CDR 영역 (CDR; CDR1, CDR2 및 CDR3) 및 FW 영역 (Frame work regions) 및 가변 영역의 서열을 Kabat 넘버링 시스템의 분석법에 따라 결정하였다 (Kabat et al, 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health Publication No. 91-3242, 5th ed., United States Department of Health and Human Services, Bethesda, MD).

수득된 마우스 11G9.6 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 74 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 75 이다. 마우스 11G9.6 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 및 SEQ ID NO: 4 이다.

수득된 마우스 3B4 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 76 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 77 이다. 마우스 3B4 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10 이다.

수득된 마우스 5B7 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 78 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 79 이다. 마우스 5B7 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 및 SEQ ID NO: 16 이다.

수득된 마우스 7B4 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 80 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 81 이다. 마우스 7B4 의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 및 SEQ ID NO: 16 이다. 7B4 항체는 5B7 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역 내 동일 CDR 서열을 갖는 항체이다.

수득된 마우스 8C11 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 82 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 83 이다. 마우스 8C11 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21 및 SEQ ID NO: 22 이다.

수득된 마우스 10C3 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 84 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 85 이다. 마우스 10C3 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 및 SEQ ID NO: 28 이다.

수득된 마우스 11D10 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 86 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 87 이다. 마우스 11D10 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 및 SEQ ID NO: 28 이다. 11D10 항체는 10C3 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역에서 동일 CDR 서열을 갖는 항체이다. 그러나, 이의 중쇄 이소타입은 상이하다 (10C3 은 마우스 IgG2a 의 불변 영역을 갖고, 11D10 은 마우스 IgG2b 의 불변 영역을 갖는다).

수득된 마우스 13D4 항체 의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 88 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 89 이다. 마우스 13D4 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 및 SEQ ID NO: 34 이다.

수득된 마우스 13H11 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 90 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 91 이다. 마우스 13H11 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 및 SEQ ID NO: 40 이다.

수득된 마우스 14C1 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 92 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 93 이다. 마우스 14C1 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 및 SEQ ID NO: 40 이다. 14C1 항체는 13H11 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역에서 동일 CDR 서열을 갖는 항체이다. 그러나, 이의 중쇄 이소타입은 상이하다 (13H11 는 마우스 IgG2b 의 불변 영역을 갖고, 14C1 은 마우스 IgG1 의 불변 영역을 갖는다).

마우스 11G9.6 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 94 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 95 이다. 마우스 11G9.6 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 및 SEQ ID NO: 7 이다.

마우스 3B4 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 96 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 97 이다. 마우스 3B4 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 및 SEQ ID NO: 13 이다.

마우스 5B7 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 98 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 99 이다. 마우스 5B7 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 및 SEQ ID NO: 19 이다.

마우스 7B4 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 100 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 101 이다. 마우스 7B4 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 및 SEQ ID NO: 19 이다.

마우스 8C11 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 102 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 103 이다. 마우스 8C11 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 및 SEQ ID NO: 25 이다.

마우스 10C3 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 104 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 105 이다. 마우스 10C3 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 및 SEQ ID NO: 31 이다.

마우스 11D10 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 106 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 107 이다. 마우스 11D10 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 및 SEQ ID NO: 31 이다.

마우스 13D4 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 108 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 109 이다. 마우스 13D4 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36 및 SEQ ID NO: 37 이다.

마우스 13H11 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 100 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 111 이다. 마우스 13H11 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42 및 SEQ ID NO: 43 이다.

마우스 14C1 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 112 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 113 이다. 마우스 14C1 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42 및 SEQ ID NO: 43 이다.

본 발명에서 더욱 바람직한 모노클로날 항체의 예는 하기에 의해 생성된 모노클로날 항체를 포함할 수 있다:

하이브리도마 mp5B7, mp7B4, mp13D4 및 mp13H11.

하이브리도마 mp5B7, mp7B4, mp13D4 및 mp13H11

는 National Institute of Technology and Evaluation, International Patent Organism Depositary 에서 2012 년 1 월 27 일자로 accession No. NITE ABP-1211, NITE ABP-1212, NITE ABP-1213 및 NITE ABP-1214 로 수탁되었다. 수탁증의 상세 사항은 하기와 같이 기술될 것이다.

(1) 수탁 기관의 명칭 및 주소

명칭: National Institute of Technology and Evaluation, Advanced Industrial Science and Technology, International Patent Organism Depositary

주소: 2-5-8 Kazusa Kamatari Kisarazu-shi, Chiba Ibaraki, 292-0818, Japan

(2) 수탁일: 2012 년 1 월 27 일

(3) 수탁 번호 NITE BP-1211 (하이브리도마 mp5B7)

NITE BP-1212 (하이브리도마 mp7B4)

NITE BP-1213 (하이브리도마 mp13D4)

NITE BP-1214 (하이브리도마 mp13H11)

특히, 더욱 바람직한 항체는,

이의 가변 영역을 구성하는 CDR 의 서열로서, 하기의 조합을 갖는 항체:

중쇄 CDR1: DYNLH, CDR2: YIYPYNGNTGYNQKFKR, 및 CDR3: GGIYDDYYDYAIDY, 및

경쇄 CDR1: RASENIYSHIA, CDR2: GATNLAH, 및 CDR3: QHFWGTP;

중쇄 CDR1: SHYYWT, CDR2: YISYDGSNNYNPSLKN, 및 CDR3: EGPLYYGNPYWYFDV, 및

경쇄 CDR1: RASQDIDNYLN, CDR2: YTSRLHS, 및 CDR3: QQFNTLP; 및

이의 가변 영역을 구성하는 CDR 의 서열로서, 하기의 조합을 갖는 항체이다:

중쇄 CDR1: SHYYWS, CDR2: YISYDGSNNYNPSLKN, 및 CDR3: EGPLYYGNPYWYFDV, 및

경쇄 CDR1: RASQDIDNYLN, CDR2: YTSRLHS, 및 CDR3: QQFNTLP.

PLD4 를 인지하는 키메라 항체 또는 인간화 항체는 이를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 이용한 유전자 공학으로써 제조할 수 있다. 특허 문헌 1 에 기재된 바와 같이, 예를 들어 각 활성 키메라 항체 (ch3B4Ab, ch5B7Ab, ch7B4Ab, ch8C11Ab, ch10C3Ab, ch11D10Ab, ch13D4Ab, ch13H11Ab, ch14C1Ab, ch11G9.6Ab 등) 는 당업자에 의해 상기 마우스 모노클로날 항체 (3B4, 5B7, 7B4, 8C11, 10C3, 11D10, 13D4, 13H11, 14C1, 11G9.6 등) 의 각 CDR 영역을 이용하여 용이하게 제조할 수 있다.

본 발명자들은 PLD4 에 대한 모노클로날 항체가 PLD4-발현 세포에 대항해 CDC (보체 의존성 세포독성) 활성 및 ADCC (항체-의존성 세포 세포독성) 활성을 갖는다는 점을 입증했다. 따라서, 본 발명에 따른 항-PLD4 모노클로날 항체는 PLD4-발현 세포에 대해 세포독성 작용을 갖는다.

즉, 본 발명은 활성화 B 세포의 억제제에 관한 것으로서, 이때 상기 억제제는 활성 성분으로서 PLD4 의 세포외 도메인에 결합하는 항체를 포함한다. 다르게는, 본 발명은 항체 생성 억제 방법을 제공하며, 이때 상기 방법은 PLD4 의 세포외 도메인에 결합하는 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 본 발명은 추가로 활성화 B 세포의 억제를 위한 약학적 조성물의 제조에 있어서 PLD4 의 세포외 도메인에 결합하는 항체의 용도에 관한 것이다.

본 발명에서, 필요시 개질된 항체가 이용될 수 있다. 본 발명에 따르면, PLD4 의 세포외 도메인을 인지하는 항체는 활성화 B-세포 억제 작용을 갖는다. 즉, 항체 그 자체는 활성화 B 세포에 대항하는 세포독성 작용을 가질 가능성이 존재한다고 여겨져 왔다. 강렬한 이펙터 작용을 보이는 항체의 서브클래스가 공지되어 있다. 다르게는, 활성화 B 세포에 대한 억제 작용이 세포독성제로 항체를 개질함으로써 추가 증가될 수 있다. 세포독성제로서, 하기의 물질들이 언급될 수 있다.

톡신: 슈도모나스 엔도톡신 (Pseudomonas Endotoxin; PE), 디프테리아 톡신, 리신

방사성 동위원소: Tc99m, Sr89, I131, Y90

항암제: 칼시케아마이신 (calicheamicin), 미토마이신 (mitomycin), 파클리탁셀 (paclitaxel).

단백질을 함유하는 톡신은 항체 또는 그의 단편 상에 2작용 시약에 의해 결합될 수 있다. 다르게는, 항체를 인코딩하는 유전자를 톡신을 인코딩하는 유전자와 콘쥬게이트 (conjugating) 함으로써, 2 개의 융합 단백질이 또한 수득될 수 있다. 항체에 방사성동위원소를 결합하는 방법이 또한 공지되어 있다. 예를 들어, 킬레이트제를 이용하여 방사성 동위원소로 항체를 라벨링하는 방법이 공지되어 있다. 나아가, 항암제가 항체에 글리칸 또는 2작용 시약 등을 이용하여 결합될 수 있다.

본 발명에서, 구조가 인위적으로 개질된 항체가 활성 성분으로서 이용될 수 있다. 예를 들어, 세포독성 작용 및 항체의 안정성을 개선하기 위한 각종 변형 방법이 공지되어 있다. 구체적으로, 중쇄의 글리칸이 개질된 면역글로불린이 공지되어 있다 (Shinkawa, T. et al. J. Biol. Chem. 278:3466-3473. 2003). 글리칸 개질에 의해, 면역글로불린의 ADCC (항체 의존성 세포-매개 세포독성) 활성이 증가되었다.

본 발명에서, 하나 이상의 모노클로날 항체가 이용될 수 있다. 예를 들어, PLD4 의 세포외 도메인을 인지하는 몇몇 종류의 모노클로날 항체가 조합되어 본 발명에 사용될 수 있다.

후술되는 바, 항-PLD4 항체는 활성화 B 세포의 획득된 면역 항체-생성 활성에 대한 억제 작용을 갖는다는 점이 입증될 수 있다. B 세포는 BCR 리간드 또는 TLR 리간드 (바람직하게, TLR4 리간드, TLR7 리간드 또는 TLR9 리간드) 의 자극에 의해 다량의 항체를 생성한다. 항-PLD4 항체는, B 세포 상 상기 리간드의 자극 전후, 또는 리간드의 자극과 동시에 제공되고, 항-PLD4 항체가 대조군으로서 제공되지 않은 B 세포를 이용하여, B 세포로부터 유래된 획득 면역 항체 생성능이 비교된다. 항체-생성능은 B 세포의 배양 상청액에 함유된 분비 면역글로불린을 측정함으로써 평가될 수 있다. 비교 결과로서, 상청액 중 B 세포로부터 유래된 획득 면역 항체의 양이 항-PLD4 항체의 첨가에 의해 유의하게 감소시, 시험된 항-PLD4 항체가 B 세포의 항체-생성 능력에 대한 억제 작용을 갖는점이 입증될 수 있다. 항체의 측정 방법이 공지되어 있다. B 세포는 생체 내 체액 면역 (분비 항체) 을 도모하는 세포이다. 따라서, 체액 면역은 B 세포의 항체-생성능을 억제함으로써 조절될 수 있다.

PLD4 의 세포외 도메인을 인지하는 항체가 그 항체가 유래된 유기체 종과 상이한 숙주에 투여되는 경우, 상기 숙주에 의해 외래 물질로서 인지되기 곤란한 형태로 프로세싱되는 것이 바람직하다. 예를 들어, 후술되는 분자로 프로세싱함으로써, 면역글로불린은 외래 물질로서 인지되기 곤란할 수 있다. 후술되는 바와 같은 면역글로불린 분자의 프로세싱 기술이 공지되어 있다:

- 불변 영역이 결핍된 항원-결합 영역을 포함하는 단편 (Monoclonal Antibodies: Principles and Practice. third edition, Academic Press Limited. 1995; Antibody Engineering, A Practical Approach, IRL PRESS, 1996);

- 숙주 면역글로불린의 불변 영역 및 모노클로날 항체의 항원-결합 영역으로 구성된 키메라 항체 (Experimental manual for genetic expression, Kodansha Ltd. 1994 (edited by Isao Ishida and Tamie Ando)); 및

- 숙주 면역글로불린에서 상보성-결정 영역 (CDR) 이 모노클로날 항체의 CDR 에 의해 이 치환된 CDR-치환 항체 (Experimental manual for genetic expression, Kodansha Ltd. 1994 (edited by Isao Ishida and Tamie Ando)).

다르게는, 인간 면역글로불린의 가변 영역이 또한 파아지 디스플레이 방법에 의해 수득될 수 있다 (McCafferty J. et al., Nature 348:552-554, 1990; Kretzschmar T et. al., Curr Opin Biotechnol. 2002 Dec; 13(6):598-602.). 파아지 디스플레이 방법에서, 인간 면역글로불린의 가변 영역을 인코딩하는 유전자가 파아지 유전자에 혼입된다. 공급원으로서 각종 유형의 면역글로불린 유전자를 이용하여, 파아지 라이브러리도 또한 제조될 수 있다. 파아지는 파아지 그 자체를 구축하는 단백질의 융합 단백질로서 상기 가변 영역을 발현한다. 파아지 표면 상 파아지에 의해 발현된 가변 영역은 항원에 대한 결합 활성을 유지한다. 따라서, 항원 결합 파아지, 또는 항원 발현 세포 등을 선택함으로써, 표적 결합 활성을 갖는 가변 영역을 발현하는 파아지가 파아지 라이브러리로부터 스크리닝될 수 있다. 나아가, 표적 결합 활성을 갖는 가변 영역을 인코딩하는 유전자가 상기에서와 같이 선택된 파아지 입자에서 유지된다. 즉, 파아지 디스플레이 방법에서, 지표로서 가변 영역의 결합 활성을 이용하여, 표적 결합 활성을 갖는 가변 영역을 인코딩하는 유전자가 수득될 수 있다.

본 발명에 따른 B 세포 활성 억제 방법 또는 B 세포 활성 억제제에서, PLD4 의 세포외 도메인을 인지하는 항체 또는 그의 적어도 항원-결합 영역을 포함하는 항체 단편이 단백질 또는 이를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드로서 투여될 수 있다. 폴리뉴클레오티드를 투여하기 위해, 표적 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드가 배열된 벡터가 표적 단백질이 발현될 수 있도록 적절한 프로모터의 제어 하에 사용되는 것이 바람직하다. 벡터 내, 인핸서 및 터미네이터가 또한 배열될 수 있다. 면역글로불린을 구성하는 중쇄 및 경쇄의 유전자를 유지하고, 면역글로불린 분자가 발현될 수 있는 벡터는 공지되어 있다. 면역글로불린이 발현될 수 있는 벡터는 세포로의 도입에 의해 투여될 수 있다. 생체로의 투여에 있어서, 생체 투여에 의해 세포를 감염시킬 수 있는 벡터가 직접 투여될 수 있다. 다르게는, 벡터는 생체에서 분리된 림프구에 도입된 다음 상기 벡터가 생체로 복귀될 수 있다 (ex vivo).

본 발명을 기반으로 하는 B 세포 활성 억제제 또는 B 세포 활성 억제 방법에서, 생체에 투여되는 모노클로날 항체의 양은 체중 1 kg 당 면역글로불린으로서 통상 0.5 mg 내지 10 mg, 예를 들어, 1 mg 내지 50 mg, 바람직하게 2 mg 내지 10 mg 이다. 항체의 생체로의 투여 간격은 치료 기간 동안 생체에서 면역글로불린의 효과적인 농도가 유지될 수 있도록 적절히 조절될 수 있다. 구체적으로, 예를 들어, 항체는 1 내지 2 주 간격으로 투여될 수 있다. 임의의 투여 경로가 이용될 수 있다. 당업자는 치료를 위해 효과적인 투여 경로를 적절히 선택할 수 있다. 구체적으로, 경구 또는 비경구 투여가 언급될 수 있다. 정맥내 주사, 근육내 주사, 복강내 주사 또는 피하 주사 등에 의해, 예를 들어 항체는 전신 또는 국소 투여될 수 있다. 본 발명에서 비경구 투여에 적합한 제형은 주사, 좌제, 스프레이 등을 포함한다. 나아가, 세포에 제공시, 면역글로불린은 통상 1 ㎍/ml, 바람직하게 10 ㎍/mL 이상, 더욱 바람직하게 50 ㎍/mL 이상, 및 추가 바람직하게 0.5 mg/mL 이상의 양으로 배양액에 제공된다.

본 발명을 기반으로 하는 B 세포 활성 억제제 또는 B 세포 활성 억제 방법에서, 모노클로날 항체는 생체에 임의 방법에 의해 투여될 수 있다. 모노클로날 항체는 약학적으로 허용가능한 담체와 통상 조합될 수 있다. 모노클로날 항체는 필요시, 증후제, 안정화제, 방부제 및 가용화제와 같은 첨가제와 조합될 수 있다. 이러한 담체 또는 첨가제는 락토오스, 시트르산, 스테아르산, 마그네슘 스테아레이트, 수크로오스, 전분, 탈크, 겔라틴, 아가, 식물성 오일, 에틸렌 글리콜 등을 포함한다. "약학적으로 허용되는" 이라는 용어는 각 국가의 정부의 감독 당국에 의해 승인되어 있는 것이거나, 또는 각국의 약전 또는 동물, 포유동물, 특히 인간에서 사용하기 위해 일반적으로 인지되어 있는 약전에 열거된 것을 지칭한다. 본 발명에서 B 세포 활성 억제제는 또한 동결 건조 분말 형태 또는 정제로 1 회 이상의 용량으로 공급될 수 있다. 나아가, 용해에 사용되는, 주사용 멸균수, 생리염수, 또는 완충액이 동결 건조 분말 또는 정제와 조합될 수 있어, 조성물은 투여 전 원하는 농도를 수득할 것이다.

나아가, 면역글로불린을 발현하는 벡터로서 투여하기 위해, 중쇄 및 경쇄는 상이한 플라스미드로서 공동트랜스펙션되고, 각 플라스미드는 체중 1 kg 당 0.1 내지 10 mg, 예를 들어 1 내지 5 mg 로 투여될 수 있다. 더욱이, 1 내지 5 ㎍ 벡터/10⁶ 개의 세포가 세포로의 시험관 내 도입에 사용된다. 본 발명을 이하에 실시예로 보다 상세히 설명할 것이다.

본 설명에서 인용된 관련 문헌 전부는 본원에서 참조로서 삽입되어 있다.

본 발명을 이제 실시예로 보다 상세히 설명할 것이다. 그러나, 본 발명이 실시예에 제한되는 것이 아닌 점에 주의해야 한다.

[실시예]

실시예 1

인간 PBMC (1 x 10⁷ 세포/ml) 를 CpG2006, TLR9 의 리간드, (최종 농도 1 μM) 로 자극하고, CO₂ 인큐베이터 (37℃, 5% CO₂) 내 24 웰 플레이트에서 약 20 시간 동안 인큐베이션하였다. 동시에, 자극받지 않은 인간 PBMC (1 x 10⁷ 세포/ml) 를 또한 약 20 시간 동안 CO₂ 인큐베이터 (37℃, 5% CO₂) 에서 배양했다.

인간 PBMC 을, FACS 버퍼 (1% FBS/PBS) 로 5 배 희석한 FcR 블록킹 시약 (FcR Blocking Reagent; Miltenyi) 으로 4℃ 에서 20 분 처리했다. 세정 후, 염색을 5B7, 11G9.6 또는 마우스 IgG2b, κ, 1차 항체, (각 10 ㎍/ml) 로 4℃ 에서 15 분간 수행했다. 2 차 항체 및 후속 항체들을, FcR 블록킹 시약이 25-배 희석되도록 FACS 버퍼로 희석하였다. PE-라벨링된 항-마우스 Ig (BD) (2 차 항체) 를 100-배 희석하고, 여기에 용액을 첨가하고 혼합했다. 게다가, FACS 상 B 세포를 분획하기 위해, APC-라벨링된 항-인간 CD 19 항체 (Biolegend) 를 FcR 블록킹 시약 함유 FACS 버퍼로 30-배 희석하고, 4℃ 에서 15 분 동안 염색하였다. FACS Calibur (BD) 를 이용하여, 데이타를 통합했다. 생세포를 X 축: FSC 및 Y 축: SSC 의 도트 플롯 상에 게이트 (gate) 하였다. 데이타를 생 세포 게에트에서 세포수가 100,000 카운트가 될 때까지 데이타를 통합했다. B 세포: 항-마커 분자 항체-양성 세포를 게이트하였다. 게이트된 세포를 X 축: PLD4 의 막대그래프 상에서 분석하고, 마우스 IgG2b, κ 로의 염색 결과를 그 위에 가로놓았다. 결과적으로, 항-PLD4 항체는 비자극된 것에는 거의 결합하지 않았으나, TLR9 리간드로의 자극에 의해 활성화 B 세포에 선택적으로 결합하였다 (도 1). 이는 PLD4 가 활성화 B 세포에서 발현됨을 나타낸다.

실시예 2

<각 모노클로날 항체에 의한 B 세포로의 결합 시험>

인간 PBMC 을 약 20 시간 동안 1 μM 의 최종 농도로 CpG2006 로 자극하였다. 세포를 수집하고, FcR 블록킹 시약으로 4℃ 에서 20 분간 처리하였다. 세정 후, 각 10 ㎍/ml 의 3B4, 5B7, 13D4, 13H11, 11G9.6, 마우스 IgG1, κ 또는 마우스 IgG2b, κ, 1차 항체로, 4℃ 에서 15 분간 염색했다. PE-라벨링된 항-마우스 Ig, 2차 항체로 4℃ 에서 15 분간 염색을 행했다. B 세포 그룹의 게이팅을 위해, APC-라벨링된 항-인간 CD19 항체로 4℃ 에서 15 분간 이중 염색을 행했다. X 축: FSC 및 Y 축: SSC 의 도트 플롯 상에서 생세포 그룹을, 항-PLD4 항체의 CD19+ B 세포와의 결합에 의해 분석했다 (도 2 및 도 3). 결과적으로, 시험된 항-PLD4 모노클로날 항체 전부는 TLR9 에 의해 자극된 B 세포에 결합되었다. 즉, 항-PLD4 모노클로날 항체 전부에 의해, PLD4 발현이 B 세포에서 활성화-의존적 방식으로 유도되었음이 확인되었다.

실시예 3

<활성화 B 세포에 대한 항-PLD4 키메라 항체의 세포독성 활성>

TLR9 리간드 (1 μM) 로의 자극에 의해 유도된 PLD4+ 활성화 B 세포의 빈도를 지표로서 이용했다. 인간 PBMC 를 CpG2006 및 각 항-PLD4 키메라 항체 또는 대조군 Ig 로 약 16 시간 동안 배양했다. 배지로서, RPM11640 (SIGMA) 을 이용했다 (10% FBS (Equitech-bio), 5 ml 의 200 mM L-글루타민 (GIBCO), 5 ml 의 Pen-Strep (GIBCO), 5 ml 의 나트륨 피루베이트 (GIBCO), 및 0.5 ml 의 50 mM 2-ME (SIGMA) 포함). 세포를 수집하고, FcR 블록킹 시약으로 4℃ 에서 20 분 동안 처리했다. 세정 후, 세포를 5B7 또는 13D4, 3B4 또는 마우스 IgG2b, κ, 1차 항체로 4℃ 에서 15 분간 (각 10 ㎍/ml) 로써 추가 염색했다. PBMC 를 키메라 3B4 항체 (ch3B4), 키메라 3D4 항체 (ch3D4), 또는 키메라 13H11 항체 (ch13H11) 로 처리한 샘플을, 5B7 로 염색하고, PBMC 를 키메라 5B7 항체 (ch5B7) 또는 키메라 11G9.6 항체 (ch11G9.6) 로 처리한 샘플을 13D4 로 염색했다. ADCC 를 위해 처리된 항-PLD4 항체 클론 및 염색에 사용된 항-PLD4 항체 클론은 서로 경쟁하지 않음이 입증된 바 있다. 항-PLD4 의 결합은, PE-라벨링된 항-마우스 Ig, 2차 항체에 의해 4℃ 에서 15 분간 발견되었다. B 세포의 게이팅을 위해, APC-라벨링된 항-인간 CD19 항체로 4℃ 에서 15 분간 이중 염색을 행했다 (도 4). 각 키메라 항-PLD4 항체로 처리된 PLD4+ 활성화 B 세포의 집단을 대조군 항체로 처리한 PLD4+ 활성화 B 세포의 것과 비교했다 (도 5). 결과적으로, 키메라 항-PLD4 항체 전부는 대조군 Ig 처리와 비교시 활성화 PLD4 + B 세포를 감소시켰다 (대조군 Ig 로 처리한 경우를 100% 로 간주했을 때, ch3B4: 70.2%, ch13D4: 56.0%, ch13H11: 55.3%, ch5B7: 25.8%, ch11G9.6: 66.4%).

실시예 4

<활성화 B 세포에 대한 키메라 항-PLD4 항체의 저해 효과>

항-인간 PLD4 항체의 B 세포 성숙 및 B 세포 활성화를 통한 Ig 생성에 대한 효과를 측정하기 위해, 전체 인간 PBMC 를 ch3B4, ch5B7, ch13D4, ch13H11, ch11G9.6, 또는 대조군 Ig 로 24 시간 처리했다. 이어서, PBMC 를 CpG2216 (1 μM) 및 재조합 인간 IL-6 (B 세포 활성화 유도를 위해) 의 존재 하에서 추가 배양해, B 세포 성숙을 도모했다. 활성화 B 세포의 7 일간의 배양 결과로, 활성화 B 세포 내 형질모세포, CD19+CD27+IgD-CD38+ 를, PE-라벨링된 항-인간 CD19 항체를 이용한 유세포분석기에 의해 분석했다. 인간 IgG 생성을 측정하기 위해, 배양된 활성화 B 세포를, PBS 로의 2 회 세정 후, 50 ng/ ml 의 PMA (포르볼 미리스테이트 아세테이트; Phorbol myristate acetate) 로 재자극시켰다. 2 일 후, 인간 IgG 생성을 ELISA 로써 배양 상청액에서 측정했다. 활성화 B 세포 내 형질모세포는, 대조군 Ig 처리와 비교시 ch3B4, ch5B7, ch13D4, ch13H11, 또는 ch11G9.6 로의 처리에 의해 감소되었다 (도 6). 또한, 인간 IgG 생성도 대조군 Ig 처리와 비교하면, ch3B4, ch5B7, ch13D4, ch13H11, 또는 ch11G9.6 로의 처리에 의해 감소되었다 (도 7). 이들 결과는, 키메라 항-인간 PLD4 Ab 로의 처리가 Ab-분비 활성화 인간 B 세포를 감소시킨다는 점을 나타낸다.

[산업상 이용가능성]

상기 실시예에서 나타낸 바, 항-PLD4 항체는 활성화 B 세포를 인지 및 억제한다. 따라서, 항체는 면역 작용에 연루된 질환 (자가면역 질환 및 알레르기성 질환)의 예방 및 치료에 유용하다.

<본 발명에 따른 항-PLD4 모노클로날 항체의 서열 정보 설명>

1. 항-PLD4 마우스 11G9.6 항체

수득된 항-PLD4 마우스 11G9.6 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 74 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 75 이다. 마우스 11G9.6 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 및 SEQ ID NO: 4 이다.

항-PLD4 마우스 11G9.6 항체 (504 bp) 의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열 [대문자: 마우스 11G9.6 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG2b 중쇄 불변 영역] (SEQ ID NO: 74)

마우스 11G9.6 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (168 a. a.) [대문자: 마우스 11G9.6 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG2b 중쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다 (SEQ ID NO: 75).

11G9.6 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1

(SEQ ID NO: 2)

11G9.6 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR2

(SEQ ID NO: 3)

11G9.6 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR3

(SEQ ID NO: 4)

수득된 항-PLD4 마우스 11G9.6 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 38 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 39 이다. 마우스 11G9.6 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41 및 SEQ ID NO: 42 이다.

항-PLD4 마우스 11G9.6 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열 (421 bp) [대문자: 마우스 11G9.6 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역] (SEQ ID NO: 94)

마우스 11G9.6 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (140 a. a.) [대문자: 마우스 11G9.6 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Igκ 경쇄 불변 영역] 밑줄 친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다 (SEQ ID NO: 95).

11G9.6 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1

(SEQ ID NO: 5)

11G9.6 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR2

(SEQ ID NO: 6)

11G9.6 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR3

(SEQ ID NO: 7)

2. 항-PLD4 마우스 3B4 항체

수득된 항-PLD4 마우스 3B4 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 76 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 77 이다. 마우스 3B4 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 및 SEQ ID NO: 10 이다.

항-PLD4 마우스 3B4 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열 (437 bp) [대문자: 마우스 3B4 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG1 중쇄 불변 영역]

마우스 3B4 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (145 a. a.) [대문자: 마우스 3B4 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG1 중쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다.

3B4 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1

TYWMH

3B4 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR2

AIYPGNSETSYNQKFKG

3B4 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR3

GYSDFDY

수득된 항-PLD4 마우스 3B4 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 96 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 97 이다. 마우스 3B4 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 및 SEQ ID NO: 13 이다.

항-PLD4 마우스 3B4 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열 (459 bp) [대문자: 마우스 3B4 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역]

마우스 3B4 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (153 a. a.) [대문자: 마우스 3B4 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다.

3B4 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1

HASQGIRSNIG

3B4 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR2

HGTNLED

3B4 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR3

VQYVQFP

3. 항-PLD4 마우스 5B7 항체

수득된 항-PLD4 마우스 5B7 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 78 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 79 이다. 마우스 5B7 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 및 SEQ ID NO: 16 이다.

항-PLD4 마우스 5B7 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열 (475 bp) [대문자: 마우스 5B7 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG2b 중쇄 불변 영역]

마우스 5B7 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (158 a. a.) [대문자: 마우스 5B7 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG2b 중쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다.

5B7 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1

DYNLH

5B7 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR2

YIYPYNGNTGYNQKFKR

5B7 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR3

GGIYDDYYDYAIDY

수득된 항-PLD4 마우스 5B7 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 98 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 99 이다. 마우스 5B7 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 및 SEQ ID NO: 19 이다.

항-PLD4 마우스 5B7 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열 (467 bp) [대문자: 마우스 5B7 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역]

마우스 5B7 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (155 a. a.) [대문자: 마우스 5B7 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다.

5B7 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1

RASENIYSHIA

5B7 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR2

GATNLAH

5B7 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR3

QHFWGTP

4. 항-PLD4 마우스 7B4 항체

수득된 항-PLD4 마우스 7B4 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 80 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 81 이다. 마우스 7B4 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 및 SEQ ID NO: 16 이다.

항-PLD4 마우스 7B4 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열 (470 bp) [대문자: 마우스 7B4 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG2b 중쇄 불변 영역]

마우스 7B4 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (156 a. a.) [대문자: 마우스 7B4 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG2b 중쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다.

7B4 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1

DYNLH

7B4 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR2

YIYPYNGNTGYNQKFKR

7B4 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR3

GGIYDDYYDYAIDY

수득된 항-PLD4 마우스 7B4 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 100 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 101 이다. 마우스 7B4 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 및 SEQ ID NO: 19 이다.

항-PLD4 마우스 7B4 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열 (454 bp) [대문자: 마우스 7B4 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역]

마우스 7B4 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (151 a. a.) [대문자: 마우스 7B4 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다.

7B4 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1

RASENIYSHIA

7B4 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR2

GATNLAH

7B4 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR3

QHFWGTP

5. 항-PLD4 마우스 8C11 항체

수득된 항-PLD4 마우스 8C11 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 82 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 83 이다. 마우스 8C11 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21 및 SEQ ID NO: 22 이다.

항-PLD4 마우스 8C11 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열 (462 bp) [대문자: 마우스 8C11 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG2b 중쇄 불변 영역]

마우스 8C11 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (154 a. a.) [대문자: 마우스 8C11 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG2b 중쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다.

8C11 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1

SYYLY

8C11 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR2

LINPTNSDTIFNEKFKS

8C11 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR3

EGGYGYGPFAY

수득된 항-PLD4 마우스 8C11 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 102 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 103 이다. 마우스 8C11 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 및 SEQ ID NO: 25 이다.

항-PLD4 마우스 8C11 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열 (457 bp) [대문자: 마우스 8C11 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역]

마우스 8C11 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (152 a. a.) [대문자: 마우스 8C11 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다.

8C11 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1

TSSQTLVHSNGNTYLH

8C11 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR2

KVSNRFS

8C11 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR3

HSTHVP

6. 항-PLD4 마우스 10C3 항체

수득된 항-PLD4 마우스 10C3 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 84 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 85 이다. 마우스 10C3 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 및 SEQ ID NO: 28 이다.

항-PLD4 마우스 10C3 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열 (450 bp) [대문자: 마우스 10C3 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG2a 중쇄 불변 영역]

마우스 10C3 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (150 a. a.) [대문자: 마우스 10C3 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG2a 중쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다.

10C3 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1

SYGMS

10C3 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR2

TISSGGSYIYYPESVKG

10C3 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR3

LYGGRRGYGLDY

수득된 항-PLD4 마우스 10C3 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 104 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 105 이다. 마우스 10C3 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 및 SEQ ID NO: 31 이다.

항-PLD4 마우스 10C3 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열 (423 bp) [대문자: 마우스 10C3 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역]

마우스 10C3 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (141 a. a.) [대문자: 마우스 10C3 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다.

10C3 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1

RSSKSLLHSDGITYLY

10C3 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR2

QMSNLAS

10C3 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR3

AQNLEL

7. 항-PLD4 마우스 11D10 항체

수득된 항-PLD4 마우스 11D10 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 86 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 87 이다. 마우스 11D10 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 및 SEQ ID NO: 28 이다.

항-PLD4 마우스 11D10 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열 (450 bp) [대문자: 마우스 11D10 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG2b 중쇄 불변 영역]

마우스 11D10 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (150 a. a.) [대문자: 마우스 11D10 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG2b 중쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다.

11D10 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1

SYGMS

11D10 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR2

TISSGGSYIYYPESVKG

11D10 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR3

LYGGRRGYGLDY

수득된 항-PLD4 마우스 11D10 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 106 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 107 이다. 마우스 11D10 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 및 SEQ ID NO: 31 이다.

항-PLD4 마우스 11D10 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열 (423 bp) [대문자: 마우스 11D10 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역]

마우스 11D10 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (141 a. a.) [대문자: 마우스 11D10 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다.

11D10 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1

RSSKSLLHSDGITYLY

11D10 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR2

QMSNLAS

11D10 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR3

AQNLEL

8. 항-PLD4 마우스 13D4 항체

수득된 항-PLD4 마우스 13D4 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 88 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 89 이다. 마우스 13D4 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 및 SEQ ID NO: 34 이다.

항-PLD4 마우스 13D4 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열 (472 bp) [대문자: 마우스 13D4 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG2b 중쇄 불변 영역]

마우스 13D4 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (157 a. a.) [대문자: 마우스 13D4 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG2b 중쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다.

13D4 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1

SHYYWT

13D4 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR2

YISYDGSNNYNPSLKN

13D4 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR3

EGPLYYGNPYWYFDV

수득된 항-PLD4 마우스 13D4 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 108 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 109 이다. 마우스 13D4 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36 및 SEQ ID NO: 37 이다.

항-PLD4 마우스 13D4 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열 (404 bp) [대문자: 마우스 13D4 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역]

마우스 13D4 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (134 a. a.) [대문자: 마우스 13D4 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다.

13D4 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1

RASQDIDNYLN

13D4 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR2

YTSRLHS

13D4 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR3

QQFNTLP

9. 항-PLD4 마우스 13H11 항체

수득된 항-PLD4 마우스 13H11 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 90 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 91 이다. 마우스 13H11 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 및 SEQ ID NO: 40 이다.

항-PLD4 마우스 13H11 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열 (471 bp) [대문자: 마우스 13H11 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG2b 중쇄 불변 영역]

마우스 13H11 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (157 a. a.) [대문자: 마우스 13H11 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG2b 중쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다.

13H11 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1

SHYYWS

13H11 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR2

YISYDGSNNYNPSLKN

13H11 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR3

EGPLYYGNPYWYFDV

수득된 항-PLD4 마우스 13H11 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 110 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 111 이다. 마우스 13H11 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42 및 SEQ ID NO: 43 이다.

항-PLD4 마우스 13H11 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열 (414 bp) [대문자: 마우스 13H11 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역]

마우스 13H11 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (138 a. a.) [대문자: 마우스 13H11 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다.

13H11 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1

RASQDIDNYLN

13H11 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR2

YTSRLHS

13H11 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR3

QQFNTLP

10. 항-PLD4 마우스 14C1 항체

수득된 항-PLD4 마우스 14C1 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 92 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 93 이다. 마우스 14C1 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 및 SEQ ID NO: 40 이다.

항-PLD4 마우스 14C1 항체의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열 (470 bp) [대문자: 마우스 14C1 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG1 중쇄 불변 영역]

마우스 14C1 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (156 a. a.) [대문자: 마우스 14C1 VH 가변 영역, 소문자: 마우스 IgG1 중쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다.

14C1 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR1

SHYYWS

14C1 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR2

YISYDGSNNYNPSLKN

14C1 항체의 중쇄 가변 영역 내 CDR3

EGPLYYGNPYWYFDV

수득된 항-PLD4 마우스 14C1 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 112 이고, 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 113 이다. 마우스 14C1 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1, CDR2 및 CDR3 의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42 및 SEQ ID NO: 43 이다.

항-PLD4 마우스 14C1 항체의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열 (465 bp) [대문자: 마우스 14C1 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역]

마우스 14C1 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (155 a. a.) [대문자: 마우스 14C1 VL 가변 영역, 소문자: 마우스 Ig κ 경쇄 불변 영역] 밑줄친 서열은 이의 시그널 서열을 나타내고, 두줄 밑줄은 이의 CDR 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3) 을 나타낸다.

14C1 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR1

RASQDIDNYLN

14C1 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR2

YTSRLHS

14C1 항체의 경쇄 가변 영역 내 CDR3

QQFNTLP

제조된 키메라 11G9.6 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열 및 염기 서열은 후술된 서열 번호와 같다.

중쇄

SEQ ID NO: 120 (염기 서열)

SEQ ID NO: 121 (아미노산 서열)

경쇄

SEQ ID NO: 122 (염기 서열)

SEQ ID NO: 123 (아미노산 서열)

11. 항-PLD4 키메라 11G9.6 항체의 중쇄의 핵산 서열 (1401 bp) [대문자: 키메라 11G9 VH 가변 영역, 소문자: 인간 IgG1 중쇄 불변 영역] (SEQ ID NO: 120)

gtaaatga

12. 항-PLD4 키메라 11G9.6 항체의 중쇄의 아미노산 서열 (466 a. a.) [대문자: 키메라 11G9 VH 가변 영역, 소문자: 인간 IgG1 중쇄 불변 영역] (SEQ ID NO: 121)

13. 항-PLD4 키메라 11G9.6 항체의 경쇄의 핵산 서열 (705 bp) [대문자: 키메라 11G9 VL 가변 영역, 소문자: 인간 Ig κ 경쇄 불변 영역] (SEQ ID NO: 122)

14. 항-PLD4 키메라 11G9.6 항체의 경쇄의 아미노산 서열 (234 a. a.) [대문자: 키메라 11G9 VL 가변 영역, 소문자: 인간 Ig κ 경쇄 불변 영역] (SEQ ID NO: 123)

<PLD4-관련 분자의 cDNA 및 단백질 서열>

> 인간 PLD4 cDNA (1521 bp) (SEQ ID NO: 44)

> 인간 PLD4 단백질 (506 아미노산) (SEQ ID NO: 1)

> 시노몰거스 원숭이 PLD4 cDNA (1521 bp) (SEQ ID NO: 63)

> 시노몰거스 원숭이 PLD4 단백질 (506 아미노산) (SEQ ID NO: 129)

> 레서스 원숭이 PLD4 cDNA (1521 bp) (SEQ ID NO: 124)

> 레서스 원숭이 PLD4 단백질 (506 아미노산) (SEQ ID NO: 130)

> 마우스 PLD4 cDNA (1512 염기쌍) (SEQ ID NO: 131)

> 마우스 PLD4 단백질 (503 아미노산) (SEQ ID NO: 132)

> 인간 PLD3 cDNA 서열 (SEQ ID NO: 55)

> 인간 PLD3 단백질 (490 아미노산) (SEQ ID NO: 127)

> 인간 PLD5 cDNA (1338 염기쌍) (SEQ ID NO: 56)

> 인간 PLD5 단백질 (445 아미노산) (SEQ ID NO: 128)

> 인간 PLD4-Ig 융합 단백질 cDNA (2142 bp) (SEQ ID NO: 125)

> 인간 PLD4-Ig 융합 단백질 (713 아미노산) (SEQ ID NO: 126)

수탁 번호

NITE ABP-1211

NITE ABP-1212

NITE ABP-1213

NITE ABP-1214

서열 목록 자유 텍스트

SEQ ID NO: 45: 순방향 프라이머

SEQ ID NO: 46: 역방향 프라이머

SEQ ID NO: 47: 순방향 프라이머

SEQ ID NO: 48: 역방향 프라이머

SEQ ID NO: 49: 순방향 프라이머

SEQ ID NO: 50: 역방향 프라이머

SEQ ID NO: 51: 순방향 프라이머

SEQ ID NO: 52: 역방향 프라이머

SEQ ID NO: 53: 순방향 프라이머

SEQ ID NO: 54: 역방향 프라이머

SEQ ID NO: 70: 앵커 프라이머

SEQ ID NO: 70: n 은 데옥시이노신

SEQ ID NO: 71: AUAP 프라이머

SEQ ID NO: 72: 프라이머

SEQ ID NO: 73: 프라이머

SEQ ID NO: 114: 프라이머

SEQ ID NO: 115: 프라이머

SEQ ID NO: 116: 프라이머

SEQ ID NO: 117: 프라이머

SEQ ID NO: 118: 프라이머

SEQ ID NO: 119: 프라이머

[서열 목록]

National Institute of Technology and Evaluation, Advanced Industrial Science and Technology, International Patent Organism Depositary

NITEBP-1211

20120127

NITEBP-1212

20120127

NITEBP-1213

20120127

NITEBP-1214

20120127

SEQUENCE LISTING <110> SBI BIOTECH CO., LTD. <120> MEDICAMENT COMPRISING ANTI PHOSPHOLIPASE D4 ANTIBODY <130> W7064-00 <150> JP 2013-158258 <151> 2013-07-30 <160> 132 <170> PatentIn version 3.4 <210> 1 <211> 506 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(506) <400> 1 Met Leu Lys Pro Leu Trp Lys Ala Ala Val Ala Pro Thr Trp Pro Cys 1 5 10 15 Ser Met Pro Pro Arg Arg Pro Trp Asp Arg Glu Ala Gly Thr Leu Gln 20 25 30 Val Leu Gly Ala Leu Ala Val Leu Trp Leu Gly Ser Val Ala Leu Ile 35 40 45 Cys Leu Leu Trp Gln Val Pro Arg Pro Pro Thr Trp Gly Gln Val Gln 50 55 60 Pro Lys Asp Val Pro Arg Ser Trp Glu His Gly Ser Ser Pro Ala Trp 65 70 75 80 Glu Pro Leu Glu Ala Glu Ala Arg Gln Gln Arg Asp Ser Cys Gln Leu 85 90 95 Val Leu Val Glu Ser Ile Pro Gln Asp Leu Pro Ser Ala Ala Gly Ser 100 105 110 Pro Ser Ala Gln Pro Leu Gly Gln Ala Trp Leu Gln Leu Leu Asp Thr 115 120 125 Ala Gln Glu Ser Val His Val Ala Ser Tyr Tyr Trp Ser Leu Thr Gly 130 135 140 Pro Asp Ile Gly Val Asn Asp Ser Ser Ser Gln Leu Gly Glu Ala Leu 145 150 155 160 Leu Gln Lys Leu Gln Gln Leu Leu Gly Arg Asn Ile Ser Leu Ala Val 165 170 175 Ala Thr Ser Ser Pro Thr Leu Ala Arg Thr Ser Thr Asp Leu Gln Val 180 185 190 Leu Ala Ala Arg Gly Ala His Val Arg Gln Val Pro Met Gly Arg Leu 195 200 205 Thr Arg Gly Val Leu His Ser Lys Phe Trp Val Val Asp Gly Arg His 210 215 220 Ile Tyr Met Gly Ser Ala Asn Met Asp Trp Arg Ser Leu Thr Gln Val 225 230 235 240 Lys Glu Leu Gly Ala Val Ile Tyr Asn Cys Ser His Leu Ala Gln Asp 245 250 255 Leu Glu Lys Thr Phe Gln Thr Tyr Trp Val Leu Gly Val Pro Lys Ala 260 265 270 Val Leu Pro Lys Thr Trp Pro Gln Asn Phe Ser Ser His Phe Asn Arg 275 280 285 Phe Gln Pro Phe His Gly Leu Phe Asp Gly Val Pro Thr Thr Ala Tyr 290 295 300 Phe Ser Ala Ser Pro Pro Ala Leu Cys Pro Gln Gly Arg Thr Arg Asp 305 310 315 320 Leu Glu Ala Leu Leu Ala Val Met Gly Ser Ala Gln Glu Phe Ile Tyr 325 330 335 Ala Ser Val Met Glu Tyr Phe Pro Thr Thr Arg Phe Ser His Pro Pro 340 345 350 Arg Tyr Trp Pro Val Leu Asp Asn Ala Leu Arg Ala Ala Ala Phe Gly 355 360 365 Lys Gly Val Arg Val Arg Leu Leu Val Gly Cys Gly Leu Asn Thr Asp 370 375 380 Pro Thr Met Phe Pro Tyr Leu Arg Ser Leu Gln Ala Leu Ser Asn Pro 385 390 395 400 Ala Ala Asn Val Ser Val Asp Val Lys Val Phe Ile Val Pro Val Gly 405 410 415 Asn His Ser Asn Ile Pro Phe Ser Arg Val Asn His Ser Lys Phe Met 420 425 430 Val Thr Glu Lys Ala Ala Tyr Ile Gly Thr Ser Asn Trp Ser Glu Asp 435 440 445 Tyr Phe Ser Ser Thr Ala Gly Val Gly Leu Val Val Thr Gln Ser Pro 450 455 460 Gly Ala Gln Pro Ala Gly Ala Thr Val Gln Glu Gln Leu Arg Gln Leu 465 470 475 480 Phe Glu Arg Asp Trp Ser Ser Arg Tyr Ala Val Gly Leu Asp Gly Gln 485 490 495 Ala Pro Gly Gln Asp Cys Val Trp Gln Gly 500 505 <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ser Tyr Trp Met His 1 5 <210> 3 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Asp Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ser <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Gly Gly Trp Leu Asp Ala Met Asp Tyr 1 5 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Ser 1 5 <210> 25 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 His Ser Thr His Val Pro 1 5 <210> 26 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Ser Tyr Gly Met Ser 1 5 <210> 27 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Pro Glu Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 28 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Leu Tyr Gly Gly Arg Arg Gly Tyr Gly Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 29 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 <210> 30 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 31 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Ala Gln Asn Leu Glu Leu 1 5 <210> 32 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Ser His Tyr Tyr Trp Thr 1 5 <210> 33 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn 1 5 10 15 <210> 34 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Glu Gly Pro Leu 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aacttctcat ctcacttcaa ccgtttccag cccttccacg gcctctttga tggggtgccc 900 accactgcct acttctcagc gtcgccacca gcactctgtc cccagggccg cacccgggac 960 ctggaggcgc tgctggcggt gatggggagc gcccaggagt tcatctatgc ctccgtgatg 1020 gagtatttcc ccaccacgcg cttcagccac cccccgaggt actggccggt gctggacaac 1080 gcgctgcggg cggcagcctt cggcaagggc gtgcgcgtgc gcctgctggt cggctgcgga 1140 ctcaacacgg accccaccat gttcccctac ctgcggtccc tgcaggcgct cagcaacccc 1200 gcggccaacg tctctgtgga cgtgaaagtc ttcatcgtgc cggtggggaa ccattccaac 1260 atcccattca gcagggtgaa ccacagcaag ttcatggtca cggagaaggc agcctacata 1320 ggcacctcca actggtcgga ggattacttc agcagcacgg cgggggtggg cttggtggtc 1380 acccagagcc ctggcgcgca gcccgcgggg gccacggtgc aggagcagct gcggcagctc 1440 tttgagcggg actggagttc gcgctacgcc gtcggcctgg acggacaggc tccgggccag 1500 gactgcgttt ggcagggctg a 1521 <210> 45 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> forward primer <400> 45 atggactggc ggtctctg 18 <210> 46 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> reverse primer <400> 46 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tacctggcga gtgcgccccc acccctgtgt 900 ccaagtggcc gcactccaga cctgaaggct ctactcaacg tggtggacaa tgcccggagt 960 ttcatctacg tcgctgtcat gaactacctg cccactctgg agttctccca ccctcacagg 1020 ttctggcctg ccattgacga tgggctgcgg cgggccacct acgagcgtgg cgtcaaggtg 1080 cgcctgctca tcagctgctg gggacactcg gagccatcca tgcgggcctt cctgctctct 1140 ctggctgccc tgcgtgacaa ccatacccac tctgacatcc aggtgaaact ctttgtggtc 1200 cccgcggatg aggcccaggc tcgaatccca tatgcccgtg tcaaccacaa caagtacatg 1260 gtgactgaac gcgccaccta catcggaacc tccaactggt ctggcaacta cttcacggag 1320 acggcgggca cctcgctgct ggtgacgcag aatgggaggg gcggcctgcg gagccagctg 1380 gaggccattt tcctgaggga ctgggactcc ccttacagcc atgaccttga cacctcagct 1440 gacagcgtgg gcaacgcctg ccgcctgctc tga 1473 <210> 56 <211> 1338 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> gene <222> (1)..(1338) <400> 56 atgggagagg atgaggatgg actctcagaa aaaaattgcc aaaataaatg tcgaattgcc 60 ctggtggaaa atattcctga aggccttaac tattcagaaa atgcaccatt tcacttatca 120 cttttccaag gctggatgaa tttactcaac atggccaaaa agtctgttga catagtgtct 180 tcccattggg atctcaacca cactcatcca tcagcatgtc agggtcaacg tctttttgaa 240 aagttgctcc agctgacttc gcaaaatatt gaaatcaagc tagtgagtga tgtaacagct 300 gattcaaagg tattagaagc cttgaaatta aagggagccg aggtgacgta catgaacatg 360 accgcttaca acaagggccg gctgcagtcc tccttctgga tcgtggacaa acagcacgtg 420 tatatcggca gtgccggttt ggactggcaa tccctgggac agatgaaaga actcggtgtc 480 atcttctaca actgcagctg cctggtccta gatttacaaa ggatatttgc tctatatagt 540 tcattaaaat tcaaaagcag agtgcctcaa acctggtcca aaagactcta tggagtctat 600 gacaatgaaa agaaattgca acttcagttg aatgaaacca aatctcaagc atttgtatcg 660 aattctccaa aactcttttg ccctaaaaac agaagttttg acatagatgc catctacagt 720 gtgatagatg atgccaagca gtatgtgtac atcgctgtca tggactacct gcctatctcc 780 agcacaagca ccaaaaggac ttactggcca gacttggatg caaaaataag agaagcatta 840 gttttacgaa gcgttagagt tcgactcctt ttaagcttct ggaaggaaac tgatcccctt 900 acgtttaact ttatttcatc tcttaaagcg atttgcactg aaatagccaa ctgcagtttg 960 aaagttaaat tttttgatct ggaaagagag aatgcttgtg ctacaaaaga acaaaagaat 1020 cacacctttc ctaggttaaa tcgcaacaag tacatggtga cagatggagc agcttatatt 1080 ggaaattttg attgggtagg gaatgatttc actcagaatg ctggcacggg ccttgttatc 1140 aaccaggcag atgtgaggaa caacagaagc atcattaagc aacttaaaga tgtgtttgaa 1200 agggactggt attcaccgta tgccaaaacc ttacagccaa ccaaacagcc gaactgctca 1260 agcctgttca aactcaaacc cctctccaac aaaactgcca cagacgacac aggcggaaag 1320 gatccccgga acgtatga 1338 <210> 57 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> forward primer <400> 57 tttaagcttg ccgccaccat gaagcctaaa ctgatgtac 39 <210> 58 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> reverse primer <400> 58 tttgaattct cacttatcgt cgtcatcctt gtaatcgagc aggcggcagg cgttgcc 57 <210> 59 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> forward primer <400> 59 tttaagcttg ccgccaccat gggagaggat gaggatgga 39 <210> 60 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> reverse primer <400> 60 tttgaattct cacttatcgt cgtcatcctt gtaatctacg ttccggggat cctttcc 57 <210> 61 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> 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gggcttccgt gacgatgtcc 120 tgcaaggctt ctggcgacag ctttaccacc tactggatgc actgggtaaa acagaggcct 180 ggacagggtc tagaatggat tggtgctatc tatcctggaa atagtgaaac tagctacaac 240 cagaagttca agggcaaggc caaactgact gcagtcacat ccgccagcac tgcctatatg 300 gagttcacta gcctgacaaa tgaggactct gcggtctatt actgtacggg gggttattcc 360 gactttgact actggggcca aggcaccact ctcacagtct cctcagccaa aacgacaccc 420 ccatctgtct atccact 437 <210> 77 <211> 145 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 77 Met Glu Cys Asn Trp Ile Leu Pro Phe Ile Leu Ser Val Ile Ser Gly 1 5 10 15 Val Ser Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ser Arg 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Thr Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Ser Phe 35 40 45 Thr Thr Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Glu Thr Ser Tyr Asn 65 70 75 80 Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Glu Phe Thr Ser Leu Thr Asn Glu Asp Ser Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Thr Gly Gly 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cttcccacca 420 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtg 459 <210> 97 <211> 153 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 97 Met Met Val Leu Ala Gln Phe Leu Ala Phe Leu Leu Leu Trp Phe Pro 1 5 10 15 Gly Ala Gly Cys Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser 20 25 30 Val Ser Leu Gly Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Gly 35 40 45 Ile Arg Ser Asn Ile Gly Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Phe 50 55 60 Lys Gly Leu Ile Phe His Gly Thr Asn Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Arg Gly Ser Gly Ala Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Asn 85 90 95 Ser Leu Glu Ser Glu Asp Phe Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Gln Tyr Val 100 105 110 Gln Phe Pro Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Arg Arg 115 120 125 Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln 130 135 140 Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val 145 150 <210> 98 <211> 467 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 98 atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt 60 gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgtat ctgtgggaga aactgtcgcc 120 atcacatgtc gagcaagtga gaatatttac agtcatatag catggtatca gcagaaagag 180 ggaaaatctc ctcagcgcct ggtctatggt gcaacaaact tagcacatgg tgtgccatca 240 aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag tattccctca agatcaacag ccttcagtct 300 gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggggta ctccgtggac gttcggtgga 360 ggcaccaagc tggaaatcaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 420 tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttctt 467 <210> 99 <211> 155 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 99 Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15 Asp Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser 20 25 30 Val Ser Val Gly Glu Thr Val Ala Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn 35 40 45 Ile Tyr Ser His Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Glu Gly Lys Ser Pro 50 55 60 Gln Arg Leu Val Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala His Gly Val Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn 85 90 95 Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His 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musculus <400> 104 atgaggttct ctgctcagct tctggggctg cttgtgctct ggatccctgg atccactgcg 60 gaaattgtga tgacgcaggc tgcattctcc aatccagtca ctcttggaac atcagcttcc 120 atctcctgca ggtctagtaa gagtctccta catagtgatg gcatcactta tttgtattgg 180 tatctgcaga agccaggcca gtctcctcag ctcctgattt atcagatgtc caaccttgcc 240 tcaggagtcc cagacaggtt cagtagcagt gggtcaggaa ctgatttcac actgagaatc 300 agcagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgtg ctcaaaatct agaactttac 360 acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc 420 atc 423 <210> 105 <211> 141 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 105 Met Arg Phe Ser Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Trp Ile Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Ala Glu Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Phe Ser Asn Pro 20 25 30 Val Thr Leu Gly Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser 35 40 45 Leu Leu His Ser Asp Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys 50 55 60 Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala 65 70 75 80 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr 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gatggaactg ttaaactcct gatctactac acatcaagat tacactcagg agtcccatca 240 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctggaacaa 300 gaagatattg ccacttactt ttgccaacag tttaatacgc ttcctcggac gttcggtgga 360 ggcaccaagc tggaaatcaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttc 414 <210> 111 <211> 138 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 111 Met Met Ser Ser Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gln 1 5 10 15 Gly Thr Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser 20 25 30 Ala Ser Leu Gly Gly Ser Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp 35 40 45 Ile Asp Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val 50 55 60 Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Phe Asn 100 105 110 Thr Leu Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 115 120 125 Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe 130 135 <210> 112 <211> 465 <212> 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caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 720 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 780 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 840 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 900 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 960 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 1020 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1080 cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1140 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1200 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1260 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1320 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1380 tccctgtctc cgggtaaatg a 1401 <210> 121 <211> 466 <212> PRT <213> Chimaera sp. <400> 121 Met Lys Val Leu Ser Leu Leu Tyr Leu Leu Thr Ala Ile Pro Gly Ile 1 5 10 15 Leu Ser Gln 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Gln Glu Gln Leu Arg Gln Leu 465 470 475 480 Phe Glu Arg Asp Trp Ser Ser Arg Tyr Ala Val Gly Leu Asp Gly Gln 485 490 495 Ala Pro Gly Gln Asp Cys Val Trp Gln Gly 500 505 <210> 130 <211> 506 <212> PRT <213> Macaca mulatta <400> 130 Met Leu Lys Pro Leu Arg Arg Ala Ala Val Thr Pro Met Trp Pro Cys 1 5 10 15 Ser Met Leu Pro Arg Arg Leu Trp Asp Arg Glu Ala Gly Thr Leu Gln 20 25 30 Val Leu Gly Val Leu Ala Met Leu Trp Leu Gly Ser Met Ala Leu Thr 35 40 45 Tyr Leu Leu Trp Gln Val Arg Cys Pro Pro Thr Trp Gly Gln Val Gln 50 55 60 Pro Arg Asp Val Pro Arg Ser Trp Gly His Gly Ser Ser Leu Ala Leu 65 70 75 80 Glu Pro Leu Glu Ala Glu Val Arg Lys Gln Arg Asp Ser Cys Gln Leu 85 90 95 Val Leu Val Glu Ser Ile Pro Gln Asp Leu Pro Phe Ala Ala Gly Ser 100 105 110 Leu Ser Ala Gln Pro Leu Gly Gln Ala Trp Leu Gln Leu Leu Asp Thr 115 120 125 Ala Gln Glu Ser Val His Val Ala Ser Tyr Tyr Trp Ser Leu Thr Gly 130 135 140 Pro Asp Ile Gly Val Asn Asp Ser Ser Ser Gln Leu Gly Glu Ala Leu 145 150 155 160 Leu Gln Lys Leu Gln Gln Leu Leu Gly Arg Asn Ile Ser Leu Ala Val 165 170 175 Ala Thr Ser Ser Pro Thr Leu Ala Arg Lys Ser Thr Asp Leu Gln Val 180 185 190 Leu Ala Ala Arg Gly Ala Gln Val Arg Arg Val Pro Met Gly Arg Leu 195 200 205 Thr Arg Gly Val Leu His Ser Lys Phe Trp Val Val Asp Gly Arg His 210 215 220 Ile Tyr Met Gly Ser Ala Asn Met Asp Trp Arg Ser Leu Thr Gln Val 225 230 235 240 Lys Glu Leu Gly Ala Val Ile Tyr Asn Cys Ser His Leu Ala Gln Asp 245 250 255 Leu Glu Lys Thr Phe Gln Thr Tyr Trp Val Leu Gly Val Pro Lys Ala 260 265 270 Val Leu Pro Lys Thr Trp Pro Gln Asn Phe Ser Ser His Ile Asn Arg 275 280 285 Phe Gln Pro Phe Gln Gly Leu Phe Asp Gly Val Pro Thr Thr Ala Tyr 290 295 300 Phe Ser Ala Ser Pro Pro Ala Leu Cys Pro Gln Gly Arg Thr Pro Asp 305 310 315 320 Leu Glu Ala Leu Leu Ala Val Met Gly Ser Ala Gln Glu Phe Ile Tyr 325 330 335 Ala Ser Val Met Glu Tyr Phe Pro Thr Thr Arg Phe Ser His Pro Arg 340 345 350 Arg Tyr Trp Pro Val Leu Asp Asn Ala Leu Arg Ala Ala Ala Phe Ser 355 360 365 Lys Gly Val Arg Val Arg Leu Leu Val Ser Cys Gly Leu Asn Thr Asp 370 375 380 Pro Thr Met Phe Pro Tyr Leu Arg Ser Leu Gln Ala Leu Ser Asn Pro 385 390 395 400 Ala Ala Asn Val Ser Val Asp Val Lys Val Phe Ile Val Pro Val Gly 405 410 415 Asn His Ser Asn Ile Pro Phe Ser Arg Val Asn His Ser Lys Phe Met 420 425 430 Val Thr Glu Lys Ala Ala Tyr Ile Gly Thr Ser Asn Trp Ser Glu Asp 435 440 445 Tyr Phe Ser Ser Thr Thr Gly Val Gly Leu Val Val Thr Gln Ser Pro 450 455 460 Gly Ala Gln Pro Ala Gly Ala Thr Val Gln Glu Gln Leu Arg Gln Leu 465 470 475 480 Phe Glu Arg Asp Trp Ser Ser Arg Tyr Ala Val Gly Leu Asp Gly Gln 485 490 495 Ala Pro Gly Gln Asp Cys Val Trp Gln Gly 500 505 <210> 131 <211> 1512 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 131 atggacaaga agaaagagca cccagagatg cggataccac tccagacagc agtggaggtc 60 tctgattggc cctgctccac atctcatgat ccacatagcg gacttggcat ggtactgggg 120 atgctagctg tactgggact cagctctgtg actctcatct tgttcctgtg gcaaggggcc 180 acttctttca ccagtcatcg gatgttccct gaggaagtgc cctcctggtc ctgggagacc 240 ctgaaaggag acgctgagca gcagaataac tcctgtcagc tcatccttgt ggaaagcatc 300 cccgaggact tgccatttgc agctggcagc cccactgccc agcccctggc ccaggcttgg 360 ctgcagcttc ttgacactgc tcgggagagc gtccacattg cctcgtacta ctggtccctc 420 actggactgg acattggagt caatgactcg tcttctcggc agggagaggc ccttctacag 480 aagttccaac agcttcttct caggaacatc tctgtggtgg tggccaccca cagcccaaca 540 ttggccaaga catccactga cctccaggtc ttggctgccc atggtgccca gatacgacaa 600 gtgcccatga aacagcttac tgggggtgtt ctacactcca aattctgggt tgtggatggg 660 cgacacgtct acgtgggcag cgccaacatg gactggcggt ccctgactca ggtgaaggaa 720 cttggtgcaa tcatctacaa ctgcagcaac ctggctcaag accttgagaa aacattccag 780 acctactggg tgctagggac tccccaagct gttctcccta aaacctggcc tcggaacttc 840 tcatcccaca tcaaccgctt ccatcccttg cggggtccct ttgatggggt tcccaccacg 900 gcctatttct cggcctcccc tccctccctc tgcccgcatg gccggacccg ggatctggac 960 gcagtgttgg gagtgatgga gggtgctcgc cagttcatct atgtctcggt gatggagtat 1020 ttccctacca cgcgcttcac ccaccatgcc aggtactggc ccgtgctgga caatgcgcta 1080 cgggcagcgg ccctcaataa gggtgtgcat gtgcgcttac tggtcagctg ctggttcaac 1140 acagacccca ccatgttcgc ttatctgagg tccctgcagg ctttcagtaa cccctcggct 1200 ggcatctcag tggatgtgaa agtcttcatc gtgcctgtgg gaaatcattc caacatcccg 1260 ttcagccgcg tgaaccacag caagttcatg gtcacagaca agacagccta tgtaggcacc 1320 tctaactggt cagaagacta cttcagccac accgctggtg tgggcctgat tgtcagccag 1380 aagaccccca gagcccagcc aggcgcaacc accgtgcagg agcagctgag gcaactcttt 1440 gaacgagact ggagttccca ctatgctatg gacctagaca gacaagtccc gagccaggac 1500 tgtgtctggt ag 1512 <210> 132 <211> 503 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 132 Met Asp Lys Lys Lys Glu His Pro Glu Met Arg Ile Pro Leu Gln Thr 1 5 10 15 Ala Val Glu Val Ser Asp Trp Pro Cys Ser Thr Ser His Asp Pro His 20 25 30 Ser Gly Leu Gly Met Val Leu Gly Met Leu Ala Val Leu Gly Leu Ser 35 40 45 Ser Val Thr Leu Ile Leu Phe Leu Trp Gln Gly Ala Thr Ser Phe Thr 50 55 60 Ser His Arg Met Phe Pro Glu Glu Val Pro Ser Trp Ser Trp Glu Thr 65 70 75 80 Leu Lys Gly Asp Ala Glu Gln Gln Asn Asn Ser Cys Gln Leu Ile Leu 85 90 95 Val Glu Ser Ile Pro Glu Asp Leu Pro Phe Ala Ala Gly Ser Pro Thr 100 105 110 Ala Gln Pro Leu Ala Gln Ala Trp Leu Gln Leu Leu Asp Thr Ala Arg 115 120 125 Glu Ser Val His Ile Ala Ser Tyr Tyr Trp Ser Leu Thr Gly Leu Asp 130 135 140 Ile Gly Val Asn Asp Ser Ser Ser Arg Gln Gly Glu Ala Leu Leu Gln 145 150 155 160 Lys Phe Gln Gln Leu Leu Leu Arg Asn Ile Ser Val Val Val Ala Thr 165 170 175 His Ser Pro Thr Leu Ala Lys Thr Ser Thr Asp Leu Gln Val Leu Ala 180 185 190 Ala His Gly Ala Gln Ile Arg Gln Val Pro Met Lys Gln Leu Thr Gly 195 200 205 Gly Val Leu His Ser Lys Phe Trp Val Val Asp Gly Arg His Val Tyr 210 215 220 Val Gly Ser Ala Asn Met Asp Trp Arg Ser Leu Thr Gln Val Lys Glu 225 230 235 240 Leu Gly Ala Ile Ile Tyr Asn Cys Ser Asn Leu Ala Gln Asp Leu Glu 245 250 255 Lys Thr Phe Gln Thr Tyr Trp Val Leu Gly Thr Pro Gln Ala Val Leu 260 265 270 Pro Lys Thr Trp Pro Arg Asn Phe Ser Ser His Ile Asn Arg Phe His 275 280 285 Pro Leu Arg Gly Pro Phe Asp Gly Val Pro Thr Thr Ala Tyr Phe Ser 290 295 300 Ala Ser Pro Pro Ser Leu Cys Pro His Gly Arg Thr Arg Asp Leu Asp 305 310 315 320 Ala Val Leu Gly Val Met Glu Gly Ala Arg Gln Phe Ile Tyr Val Ser 325 330 335 Val Met Glu Tyr Phe Pro Thr Thr Arg Phe Thr His His Ala Arg Tyr 340 345 350 Trp Pro Val Leu Asp Asn Ala Leu Arg Ala Ala Ala Leu Asn Lys Gly 355 360 365 Val His Val Arg Leu Leu Val Ser Cys Trp Phe Asn Thr Asp Pro Thr 370 375 380 Met Phe Ala Tyr Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Ser Asn Pro Ser Ala 385 390 395 400 Gly Ile Ser Val Asp Val Lys Val Phe Ile Val Pro Val Gly Asn His 405 410 415 Ser Asn Ile Pro Phe Ser Arg Val Asn His Ser Lys Phe Met Val Thr 420 425 430 Asp Lys Thr Ala Tyr Val Gly Thr Ser Asn Trp Ser Glu Asp Tyr Phe 435 440 445 Ser His Thr Ala Gly Val Gly Leu Ile Val Ser Gln Lys Thr Pro Arg 450 455 460 Ala Gln Pro Gly Ala Thr Thr Val Gln Glu Gln Leu Arg Gln Leu Phe 465 470 475 480 Glu Arg Asp Trp Ser Ser His Tyr Ala Met Asp Leu Asp Arg Gln Val 485 490 495 Pro Ser Gln Asp Cys Val Trp 500

Claims

포스포리파아제 D4 (PLD4) 단백질에 결합하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편을 활성 성분으로서 포함하는, 자가면역 질환 또는 알레르기의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물로서,
모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편이:
(A) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SYWMH (SEQ ID NO: 2), CDR2 로서 서열 DIYPGSDSTNYNEKFKS (SEQ ID NO: 3) 및 CDR3 로서 서열 GGWLDAMDY (SEQ ID NO: 4) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASQDISNYLN (SEQ ID NO: 5), CDR2 로서 서열 YTSRLH (SEQ ID NO: 6) 및 CDR3 로서 서열 QQGNTLPW (SEQ ID NO: 7) 를 갖거나;
(B) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 TYWMH (SEQ ID NO: 8), CDR2 로서 서열 AIYPGNSETSYNQKFKG (SEQ ID NO: 9) 및 CDR3 로서 서열 GYSDFDY (SEQ ID NO: 10) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 HASQGIRSNIG (SEQ ID NO: 11), CDR2 로서 서열 HGTNLED (SEQ ID NO: 12) 및 CDR3 로서 서열 VQYVQFP (SEQ ID NO: 13) 를 갖거나;
(C) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 DYNLH (SEQ ID NO: 14), CDR2 로서 서열 YIYPYNGNTGYNQKFKR (SEQ ID NO: 15) 및 CDR3 로서 서열 GGIYDDYYDYAIDY (SEQ ID NO: 16) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASENIYSHIA (SEQ ID NO: 17), CDR2 로서 서열 GATNLAH (SEQ ID NO: 18) 및 CDR3 로서 서열 QHFWGTP (SEQ ID NO: 19) 를 갖거나;
(D) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SYYLY (SEQ ID NO: 20), CDR2 로서 서열 LINPTNSDTIFNEKFKS (SEQ ID NO: 21) 및 CDR3 로서 서열 EGGYGYGPFAY (SEQ ID NO: 22) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 TSSQTLVHSNGNTYLH (SEQ ID NO: 23), CDR2 로서 서열 KVSNRFS (SEQ ID NO: 24) 및 CDR3 로서 서열 HSTHVP (SEQ ID NO: 25) 를 갖거나;
(E) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SYGMS (SEQ ID NO: 26), CDR2 로서 서열 TISSGGSYIYYPESVKG (SEQ ID NO: 27) 및 CDR3 로서 서열 LYGGRRGYGLDY (SEQ ID NO: 28) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RSSKSLLHSDGITYLY (SEQ ID NO: 29), CDR2 로서 서열 QMSNLAS (SEQ ID NO: 30) 및 CDR3 로서 서열 AQNLEL 을 갖거나;
(F) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SHYYWT (SEQ ID NO: 32), CDR2 로서 서열 YISYDGSNNYNPSLKN (SEQ ID NO: 33) 및 CDR3 로서 서열 EGPLYYGNPYWYFDV (SEQ ID NO: 34) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASQDIDNYLN (SEQ ID NO: 35), CDR2 로서 서열 YTSRLHS (SEQ ID NO: 36) 및 CDR3 로서 서열 QQFNTLP (SEQ ID NO: 37) 를 갖거나;
(G) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SHYYWS (SEQ ID NO: 38), CDR2 로서 서열 YISYDGSNNYNPSLKN (SEQ ID NO: 39) 및 CDR3 로서 서열 EGPLYYGNPYWYFDV (SEQ ID NO: 40) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASQDIDNYLN (SEQ ID NO: 41), CDR2 로서 서열 YTSRLHS (SEQ ID NO: 42) 및 CDR3 로서 서열 QQFNTLP (SEQ ID NO: 43) 를 갖는 약학적 조성물.
제 1 항에 있어서, 자가면역 질환이 활성화 B 세포의 활성에 의해 유발된 것인 약학적 조성물.
제 2 항에 있어서, 활성화 B 세포의 활성이 항체 생성인 약학적 조성물.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편이:
(A) SEQ ID NO: 75 의 아미노산 36 내지 153 으로 표시되는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 95 의 아미노산 21 내지 127 로 표시되는 경쇄 가변 영역을 갖거나;
(B) SEQ ID NO: 77 의 아미노산 20 내지 135 로 표시되는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 97 의 아미노산 21 내지 127 로 표시되는 경쇄 가변 영역을 갖거나;
(C) SEQ ID NO: 79 의 아미노산 20 내지 142 로 표시되는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 99 의 아미노산 21 내지 127 로 표시되는 경쇄 가변 영역을 갖거나;
(D) SEQ ID NO: 81 의 아미노산 20 내지 142 로 표시되는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 101 의 아미노산 21 내지 127 로 표시되는 경쇄 가변 영역을 갖거나;
(E) SEQ ID NO: 83 의 아미노산 20 내지 139 로 표시되는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 103 의 아미노산 20 내지 131 로 표시되는 경쇄 가변 영역을 갖거나;
(F) SEQ ID NO: 85 의 아미노산 20 내지 140 으로 표시되는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 105 의 아미노산 21 내지 131 로 표시되는 경쇄 가변 영역을 갖거나;
(G) SEQ ID NO: 87 의 아미노산 20 내지 140 으로 표시되는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 107 의 아미노산 21 내지 131 로 표시되는 경쇄 가변 영역을 갖거나;
(H) SEQ ID NO: 89 의 아미노산 19 내지 142 로 표시되는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 109 의 아미노산 21 내지 127 로 표시되는 경쇄 가변 영역을 갖거나;
(I) SEQ ID NO: 91 의 아미노산 19 내지 142 로 표시되는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 111 의 아미노산 21 내지 127 로 표시되는 경쇄 가변 영역을 갖거나;
(J) SEQ ID NO: 93 의 아미노산 19 내지 142 로 표시되는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 113 의 아미노산 21 내지 127 로 표시되는 경쇄 가변 영역을 갖는 약학적 조성물.
자가면역 질환 또는 알레르기의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물로서, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편을 활성 성분으로서 포함하고, 모노클로날 항체가 각각 수탁 번호 NITE BP-1211, NITE BP-1212, NITE BP-1213 및 NITE BP-1214 의 하이브리도마 mp5B7, mp7B4, mp13D4 및 mp13H11 중 어느 하나에 의해 생성되는 약학적 조성물.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편을 포함하는 약학적 조성물로서, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편이 추가로 키메라화 또는 인간화되는 약학적 조성물.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편이 SEQ ID: 121 로 제시된 중쇄 및 SEQ ID: 123 으로 제시된 경쇄를 갖는 약학적 조성물.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 자가면역 질환이 길랭-바레 증후군 (Guillain-Barre syndrome), 중증근육 무력증, 만성 위염 (만성 위축 위염), 자가면역 간염, 원발성 쓸개관 간경화증, 원발성 경화성 담관염, 자가면역 췌장염, 대동맥염 증후군, 굿파스처 증후군, 급속 진행 사구체 신염, 거대적혈모구 빈혈, 자가면역용혈빈혈, 자가면역성호중구 감소증, 특발혈소판감소 자색반병, 바세도우병 (Basedow disease), 하시모토 갑상선염 (Hashimoto thyroiditis), 1차 갑상선 기능부전, 특발성 애디슨병, 제 1 형 당뇨병, 궤양성 대장염, 크론병, 복강 질환, 관절 류마티즘, 전신 홍반 루푸스, 항인지질 항체 증후군, 다발근육염, 피부경화증, 쇼그렌 증후군 (Sjogren’s syndrome), 혈관염 증후군, 또는 림프증식성 자가면역 증후군 (ALPS) 인 약학적 조성물.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 알레르기가 아토피 피부염, 기관지천식, 꽃가루병, 알레르기비염, 두드러기, 영아 천식, 알레르기성 위창자염, 접촉성 피부염, 혈청병, 또는 혈관자색반인 약학적 조성물.
PLD4 의 세포외 도메인에 결합하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편을 시험될 세포와 접촉시키고, 세포에 결합하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편을 검출하는 단계를 포함하는, 활성화 B 세포의 시험관 내 검출 방법으로서,
모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편이:
(A) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SYWMH (SEQ ID NO: 2), CDR2 로서 서열 DIYPGSDSTNYNEKFKS (SEQ ID NO: 3) 및 CDR3 로서 서열 GGWLDAMDY (SEQ ID NO: 4) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASQDISNYLN (SEQ ID NO: 5), CDR2 로서 서열 YTSRLH (SEQ ID NO: 6) 및 CDR3 로서 서열 QQGNTLPW (SEQ ID NO: 7) 를 갖거나;
(B) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 TYWMH (SEQ ID NO: 8), CDR2 로서 서열 AIYPGNSETSYNQKFKG (SEQ ID NO: 9) 및 CDR3 로서 서열 GYSDFDY (SEQ ID NO: 10) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 HASQGIRSNIG (SEQ ID NO: 11), CDR2 로서 서열 HGTNLED (SEQ ID NO: 12) 및 CDR3 로서 서열 VQYVQFP (SEQ ID NO: 13) 를 갖거나;
(C) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 DYNLH (SEQ ID NO: 14), CDR2 로서 서열 YIYPYNGNTGYNQKFKR (SEQ ID NO: 15) 및 CDR3 로서 서열 GGIYDDYYDYAIDY (SEQ ID NO: 16) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASENIYSHIA (SEQ ID NO: 17), CDR2 로서 서열 GATNLAH (SEQ ID NO: 18) 및 CDR3 로서 서열 QHFWGTP (SEQ ID NO: 19) 를 갖거나;
(D) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SYYLY (SEQ ID NO: 20), CDR2 로서 서열 LINPTNSDTIFNEKFKS (SEQ ID NO: 21) 및 CDR3 로서 서열 EGGYGYGPFAY (SEQ ID NO: 22) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 TSSQTLVHSNGNTYLH (SEQ ID NO: 23), CDR2 로서 서열 KVSNRFS (SEQ ID NO: 24) 및 CDR3 로서 서열 HSTHVP (SEQ ID NO: 25) 를 갖거나;
(E) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SYGMS (SEQ ID NO: 26), CDR2 로서 서열 TISSGGSYIYYPESVKG (SEQ ID NO: 27) 및 CDR3 로서 서열 LYGGRRGYGLDY (SEQ ID NO: 28) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RSSKSLLHSDGITYLY (SEQ ID NO: 29), CDR2 로서 서열 QMSNLAS (SEQ ID NO: 30) 및 CDR3 로서 서열 AQNLEL 을 갖거나;
(F) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SHYYWT (SEQ ID NO: 32), CDR2 로서 서열 YISYDGSNNYNPSLKN (SEQ ID NO: 33) 및 CDR3 로서 서열 EGPLYYGNPYWYFDV (SEQ ID NO: 34) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASQDIDNYLN (SEQ ID NO: 35), CDR2 로서 서열 YTSRLHS (SEQ ID NO: 36) 및 CDR3 로서 서열 QQFNTLP (SEQ ID NO: 37) 를 갖거나;
(G) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SHYYWS (SEQ ID NO: 38), CDR2 로서 서열 YISYDGSNNYNPSLKN (SEQ ID NO: 39) 및 CDR3 로서 서열 EGPLYYGNPYWYFDV (SEQ ID NO: 40) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASQDIDNYLN (SEQ ID NO: 41), CDR2 로서 서열 YTSRLHS (SEQ ID NO: 42) 및 CDR3 로서 서열 QQFNTLP (SEQ ID NO: 43) 를 갖거나;
(H) 상기 (A) 내지 (G) 의 모노클로날 항체 중 어느 하나가 추가로 키메라화 또는 인간화된 것인, 활성화 B 세포의 시험관 내 검출 방법.
PLD4 의 세포외 도메인에 결합하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편을 포함하는, 활성화 B 세포의 검출제로서,
모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편이:
(A) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SYWMH (SEQ ID NO: 2), CDR2 로서 서열 DIYPGSDSTNYNEKFKS (SEQ ID NO: 3) 및 CDR3 로서 서열 GGWLDAMDY (SEQ ID NO: 4) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASQDISNYLN (SEQ ID NO: 5), CDR2 로서 서열 YTSRLH (SEQ ID NO: 6) 및 CDR3 로서 서열 QQGNTLPW (SEQ ID NO: 7) 를 갖거나;
(B) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 TYWMH (SEQ ID NO: 8), CDR2 로서 서열 AIYPGNSETSYNQKFKG (SEQ ID NO: 9) 및 CDR3 로서 서열 GYSDFDY (SEQ ID NO: 10) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 HASQGIRSNIG (SEQ ID NO: 11), CDR2 로서 서열 HGTNLED (SEQ ID NO: 12) 및 CDR3 로서 서열 VQYVQFP (SEQ ID NO: 13) 를 갖거나;
(C) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 DYNLH (SEQ ID NO: 14), CDR2 로서 서열 YIYPYNGNTGYNQKFKR (SEQ ID NO: 15) 및 CDR3 로서 서열 GGIYDDYYDYAIDY (SEQ ID NO: 16) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASENIYSHIA (SEQ ID NO: 17), CDR2 로서 서열 GATNLAH (SEQ ID NO: 18) 및 CDR3 로서 서열 QHFWGTP (SEQ ID NO: 19) 를 갖거나;
(D) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SYYLY (SEQ ID NO: 20), CDR2 로서 서열 LINPTNSDTIFNEKFKS (SEQ ID NO: 21) 및 CDR3 로서 서열 EGGYGYGPFAY (SEQ ID NO: 22) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 TSSQTLVHSNGNTYLH (SEQ ID NO: 23), CDR2 로서 서열 KVSNRFS (SEQ ID NO: 24) 및 CDR3 로서 서열 HSTHVP (SEQ ID NO: 25) 를 갖거나;
(E) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SYGMS (SEQ ID NO: 26), CDR2 로서 서열 TISSGGSYIYYPESVKG (SEQ ID NO: 27) 및 CDR3 로서 서열 LYGGRRGYGLDY (SEQ ID NO: 28) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RSSKSLLHSDGITYLY (SEQ ID NO: 29), CDR2 로서 서열 QMSNLAS (SEQ ID NO: 30) 및 CDR3 로서 서열 AQNLEL 을 갖거나;
(F) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SHYYWT (SEQ ID NO: 32), CDR2 로서 서열 YISYDGSNNYNPSLKN (SEQ ID NO: 33) 및 CDR3 로서 서열 EGPLYYGNPYWYFDV (SEQ ID NO: 34) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASQDIDNYLN (SEQ ID NO: 35), CDR2 로서 서열 YTSRLHS (SEQ ID NO: 36) 및 CDR3 로서 서열 QQFNTLP (SEQ ID NO: 37) 를 갖거나;
(G) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SHYYWS (SEQ ID NO: 38), CDR2 로서 서열 YISYDGSNNYNPSLKN (SEQ ID NO: 39) 및 CDR3 로서 서열 EGPLYYGNPYWYFDV (SEQ ID NO: 40) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASQDIDNYLN (SEQ ID NO: 41), CDR2 로서 서열 YTSRLHS (SEQ ID NO: 42) 및 CDR3 로서 서열 QQFNTLP (SEQ ID NO: 43) 를 갖거나;
(H) 상기 (A) 내지 (G) 의 모노클로날 항체 중 어느 하나가 추가로 키메라화 또는 인간화된 것인, 활성화 B 세포의 검출제.
하기 (a) 또는 (b) 성분 중 어느 하나를 활성화 B 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, 활성화 B 세포의 활성의 시험관 내 억제 방법으로서:
(a) 인간 PLD4 에 결합하고, 활성화 B 세포의 활성을 억제하는 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편;
(b) (a) 의 모노클로날 항체의 상보성 결정 영역이 이식된 면역글로불린, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편,
여기서 모노클로날 항체, 또는 그의 항원-결합 영역을 포함하는 단편이:
(A) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SYWMH (SEQ ID NO: 2), CDR2 로서 서열 DIYPGSDSTNYNEKFKS (SEQ ID NO: 3) 및 CDR3 로서 서열 GGWLDAMDY (SEQ ID NO: 4) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASQDISNYLN (SEQ ID NO: 5), CDR2 로서 서열 YTSRLH (SEQ ID NO: 6) 및 CDR3 로서 서열 QQGNTLPW (SEQ ID NO: 7) 를 갖거나;
(B) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 TYWMH (SEQ ID NO: 8), CDR2 로서 서열 AIYPGNSETSYNQKFKG (SEQ ID NO: 9) 및 CDR3 로서 서열 GYSDFDY (SEQ ID NO: 10) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 HASQGIRSNIG (SEQ ID NO: 11), CDR2 로서 서열 HGTNLED (SEQ ID NO: 12) 및 CDR3 로서 서열 VQYVQFP (SEQ ID NO: 13) 를 갖거나;
(C) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 DYNLH (SEQ ID NO: 14), CDR2 로서 서열 YIYPYNGNTGYNQKFKR (SEQ ID NO: 15) 및 CDR3 로서 서열 GGIYDDYYDYAIDY (SEQ ID NO: 16) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASENIYSHIA (SEQ ID NO: 17), CDR2 로서 서열 GATNLAH (SEQ ID NO: 18) 및 CDR3 로서 서열 QHFWGTP (SEQ ID NO: 19) 를 갖거나;
(D) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SYYLY (SEQ ID NO: 20), CDR2 로서 서열 LINPTNSDTIFNEKFKS (SEQ ID NO: 21) 및 CDR3 로서 서열 EGGYGYGPFAY (SEQ ID NO: 22) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 TSSQTLVHSNGNTYLH (SEQ ID NO: 23), CDR2 로서 서열 KVSNRFS (SEQ ID NO: 24) 및 CDR3 로서 서열 HSTHVP (SEQ ID NO: 25) 를 갖거나;
(E) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SYGMS (SEQ ID NO: 26), CDR2 로서 서열 TISSGGSYIYYPESVKG (SEQ ID NO: 27) 및 CDR3 로서 서열 LYGGRRGYGLDY (SEQ ID NO: 28) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RSSKSLLHSDGITYLY (SEQ ID NO: 29), CDR2 로서 서열 QMSNLAS (SEQ ID NO: 30) 및 CDR3 로서 서열 AQNLEL 을 갖거나;
(F) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SHYYWT (SEQ ID NO: 32), CDR2 로서 서열 YISYDGSNNYNPSLKN (SEQ ID NO: 33) 및 CDR3 로서 서열 EGPLYYGNPYWYFDV (SEQ ID NO: 34) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASQDIDNYLN (SEQ ID NO: 35), CDR2 로서 서열 YTSRLHS (SEQ ID NO: 36) 및 CDR3 로서 서열 QQFNTLP (SEQ ID NO: 37) 를 갖거나;
(G) 중쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 SHYYWS (SEQ ID NO: 38), CDR2 로서 서열 YISYDGSNNYNPSLKN (SEQ ID NO: 39) 및 CDR3 로서 서열 EGPLYYGNPYWYFDV (SEQ ID NO: 40) 를 갖고, 경쇄의 가변 영역에서 CDR1 으로서 서열 RASQDIDNYLN (SEQ ID NO: 41), CDR2 로서 서열 YTSRLHS (SEQ ID NO: 42) 및 CDR3 로서 서열 QQFNTLP (SEQ ID NO: 43) 를 갖거나;
(H) 상기 (A) 내지 (G) 의 모노클로날 항체 중 어느 하나가 추가로 키메라화 또는 인간화된 것인, 활성화 B 세포의 활성의 시험관 내 억제 방법.
제 12 항에 있어서, 활성화 B 세포의 활성이 항체 생성인, 활성화 B 세포의 활성의 시험관 내 억제 방법.
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