CN105745226B - 包含抗-磷脂酶d4抗体的药物 - Google Patents

Abstract

本申请提供药物包含与磷脂酶D4(PLD4)结合的抗体以及使用所述药物检测及抑制活化的B细胞的方法。本申请还针对来自活性‑阻遏功能的自身免疫疾病及变应病的治疗。为了解决这些问题，本申请提供与磷脂酶D4(PLD4)蛋白的细胞外结构域结合的单克隆抗体，或其含有抗原‑结合区的片段作为活性成分。

Description

包含抗-磷脂酶D4抗体的药物

【技术领域】

本发明涉及与磷脂酶D4结合的抗体的使用。在下文中，“磷脂酶 D”可缩写为PLD和“磷脂酶D4”等可缩写为PLD4等。

【背景技术】

PLD是催化通过水解磷脂酰胆碱产生磷脂酸和胆碱的反应，和导 致各种细胞内信号传导的酶。已相信产生的磷脂酸发挥脂质信号分子 的功能。

PLD1和PLD2已知为2种类型的哺乳动物PLD，其之前已知道， 及在其N-端区含有磷脂酰肌醇酯-结合Phox同源性结构域(PX结构 域)和磷脂酰肌醇酯-结合普列克底物蛋白同源性结构域(PH结构域)。 2个结构域涉及PLD的膜定位。

PLD1和PLD2还含有2His-x-Lys-x-x-x-x-Asp序列(HKD基序)。 HKD基序是对于PLD活性必要的结构域。

由PLD1和PLD2产生的磷脂酸已被提示涉及细胞骨架重建，胞 吐，吞噬，癌化，细胞粘接，趋化性等，及主要作用于神经系统，免 疫系统等。

人Hu-K4和小鼠SAM9，其现在被官方地命名为PLD3，缺乏PX 和PH结构域，及不显示PLD活性，尽管具有2HKD基序。尽管还 有3种PLD家族成员，PLD4，PLD5和PLD6，关于这些非-典型PLD 知道很少。

作为在小脑发育转录组数据库(CDT-DB)中搜索小鼠小脑发育 中的基因表达模式的结果，鉴定了发育期间控制的转录产物，PLD4 (见非专利文献1)。PLD4的基本特征未被报道。有或无糖基化的 PLD4的酶促活性需要测定。

PLD4具有SEQ ID NO:1中显示的506个氨基酸序列，及由SEQ ID NO:44的cDNA碱基序列编码(非专利文献1和2)。PLD4蛋白 具有由2个C-端区保守的HKD基序(His-x-Lys-x-x-x-x-Asp氨基酸 序列,x表示其他氨基酸)及推定的磷酸化位点(Thr 472)构成的2 个暂定PDE区(磷酸二酯酶基序)。PLD4蛋白的结构被估计为II 型跨膜蛋白。此外，PLD4不具有PX和PH结构域，在典型PLD家 族中的PLD1和PLD2在N-端区具有它们。

另一方面，PLD4属于PLD家族，因为具有2个HKD基序，但 缺乏PX结构域和PH结构域，及代之以具有推定的跨膜结构域(非 专利文献3)。

已在优先位于1周龄小鼠的白质区包括胼胝体及小脑白质周围的 小细胞群集中发现低至中等水平的PLD4mRNA表达。表达这些PLD4 mRNA的细胞已被鉴定为Iba1-阳性小胶质细胞(非专利文献3)。但 是，小鼠小脑中的PLD4-阳性细胞在10日龄小鼠中是分散的。提示 在小鼠小脑中在早期出生后发育期间PLD4表达暂时受局限。

小鼠中的髓磷脂形成在出生之后1周开始于胼胝体及小脑白质。 此时，PLD4在存在于白质中的变形虫样(活化的状态)小胶质细胞 中高度表达，由此也已相信，有此时在白质中的表达PLD4的细胞涉 及髓磷脂形成的可能性。尤其是，也已揭示，PLD4在食物泡中蓄积， 及已揭示，有PLD4涉及吞噬的可能性。在处于活化的状态的变形虫 样小胶质细胞中，各种细胞因子和生长因子分泌及同时吞噬活化。其 已相信，在发育时期中的小鼠的脑白质中，剩余少突胶质细胞(中枢 神经系统神经胶质细胞,其通过围绕轴突形成髓磷脂)经历凋亡。有 少突胶质细胞被分解及在变形虫样小胶质细胞中被移出而分泌信号分 子和由此调整白质中的髓磷脂-形成环境的可能性。已提示，PLD4涉 及这些过程包括髓磷脂形成。

小鼠PLD4mRNA的表达也在非-神经元组织中观察到，和主要分 布在脾脏中。在脾红髓的边缘区域周围检测到PLD4蛋白的强表达， 及自亚细胞膜级分收集的脾PLD4蛋白是高度N-糖基化的。当PLD4 在异源细胞系统中表达时，PLD4定位于内质网和高尔基体中。异源 性地表达的PLD4未显示PLD酶活性(非-专利文献3)。

自在时空地受局限的PLD4的表达模式，已提示PLD4可在早期 出生后脑发育期间在小胶质细胞和脾边缘区域细胞之中，在常见的功 能中起到作用。

另一方面，本发明人发现，PLD4在静止时期的pDC(类浆细胞 树状细胞)(静止pDC)中特别高度表达(专利文献1)。本发明人 还报道，PLD4-特异性抗体可用于阻遏pDC活性。

而且，PLD4已在日本被报道为系统性硬化的新感受性基因之一 (非-专利文献4)。但是，作为欧洲的相同的分析的结果，未发现与 PLD4的显著关联，及未获得显示PLD4和自身免疫疾病诸如系统性 硬化之间的关系的强结果。

免疫机理被粗略分类为2组。一组是“先天性免疫(天然免疫)”， 其检测外源物质诸如病原体及实施初始攻击，及另一组是通过信息交 换的“获得性免疫”，其为源于外源物质的抗原肽等的呈递。嗜中性粒 细胞，巨噬细胞，树突细胞(DC)，NK(自然杀伤)细胞等主要涉 及“先天性免疫”，及传递了由以上树突细胞等呈递的抗原肽等的信息 的T细胞和B细胞涉及“获得性免疫”。通过抗原肽的信息的传递活化 的T细胞能如细胞-介导的免疫以直接方式特异性识别及攻击病原体， 及以与以上相同的方式活化的B细胞能通过产生抗体以间接方式特异 性识别和攻击病原体(体液免疫)。

在“先天性免疫”中，普遍地存在于病原体中的病原体-关联的分子 模式(PAMP)(LPS,CpG DNA,脂蛋白,RNA等)通过Toll-样受 体(TLR)识别，及炎性细胞因子的分泌经NF-kB被促进，或干扰素 (IFN)的分泌经IRF(干扰素调控因子)被促进。TLR由亚细胞定 位位点粗略被分类为2组：在细胞表面表达的组和在内体和内质网 (ER)中表达的组。在pDC中，IRF7经在内体和内质网定位的中 TLR7和TLR9被活化而诱导IFN-α产生。为何这些TLR未在细胞表 面表达，但在细胞内表达的原因已提示是为降低自身免疫疾病初现的 风险。TLR7和TLR9分别识别单链RNA和DNA作为配体。不仅外 源病原性细菌、而且宿主保持这些核酸，由此其已提示识别核酸及活 化免疫细胞的受体总是诱导自身免疫疾病。

另一方面，在“获得性免疫”中显示重要作用的B细胞(B淋巴细 胞)是在其表面表达免疫球蛋白Ig受体的淋巴细胞。B细胞在骨髓中 由造血干细胞产生，及分化为前-B细胞和未成熟的B细胞，然后成熟 为幼稚B细胞(成熟,未接触抗原的B细胞)。幼稚B细胞由不仅通 过以上T细胞刺激，而且直接抗原刺激活化，及还通过分化和增殖成 为抗体-产生细胞而产生及分泌抗体诸如IgM，IgD，IgA，IgE，IgG (包括亚类诸如IgG1,IgG2,IgG2b,IgG3等)。已知道，除了识别特 定外源抗原的B细胞受体(BCR)之外，以上TLR在B细胞中表达。 例如，已之前知道，已知导致B细胞的增殖和抗体产生的LPS是 TLR4的配体，及以上TLR7和TLR9也在B细胞中表达。该B细胞 已被提示具有诱导不仅以上自身免疫疾病，而且过敏性疾病(由于其 抗体-产生能力的过反应)的可能性。

IgG，免疫球蛋白G是由4个肽链，即2个相同重链和2个相同 轻链组成的抗体同种型。IgG由B细胞产生，及对于适应性免疫起到 关键作用。不产生IgG的幼稚B细胞分化为成浆细胞，及最终分化为 浆细胞。成浆细胞和浆细胞可产生大量的抗体。常规地，骨髓样树突细胞(DC)已显示通过用IL-12和IL-6和/或膜分子诸如BAFF/APRIL 刺激而引发B细胞生长和分化(非-专利文献5,6和7)。此外，类浆 细胞DC(pDC)诱导幼稚B细胞成熟和分化为抗体-分泌成浆细胞和 浆细胞产生IFN-α和IL-6(非-专利文献8)。IgG的可变区捕获各种 病原体诸如病毒，细菌和真菌，导致身体免于该感染的保护。

SLE被认为是典型免疫复合物-介导的自身免疫疾病。免疫复合物 (IC)在循环中或原位形成，作为产生的针对核酸和它们的关联的蛋 白，诸如dsDNA，核糖核蛋白和组蛋白的自身抗体的结果。该IC导 致具有疾病-特征性临床症状的发炎诸如肾炎，关节炎，皮肤疹，及血 管炎。来自SLE患者的血通过幼稚B细胞及增加的记忆B细胞，成 浆细胞和浆细胞的减少表征(非-专利文献9,10和11)。因此，分化 为浆细胞的阻遏和通过自身-反应性抗体-分泌成浆细胞的操作的抗体 产生会导致治愈自身免疫疾病的有前途的策略。

在PBMC中，有各种B细胞子集，诸如幼稚B细胞，记忆B细 胞，及成浆细胞。PBMC中的多数B细胞子集是幼稚B细胞。幼稚B 细胞是未被外源抗原暴露的B细胞。记忆B细胞是由原发感染形成、 且通过分化为成浆细胞而在快速抗体-介导的免疫应答中关键的B细 胞。成浆细胞是分泌大量的抗体及由CD19+CD27+IgD-CD38+标记的 B细胞。

一旦被外源抗原暴露，幼稚B细胞成为活化的B细胞。活化的B 细胞还分化为记忆B细胞，及/或也分化为分泌抗体的成浆细胞。此变 化被称为“成熟”。

B细胞成熟经多期发生。起初，抗原-独立期诱导可与唯一抗原结 合的成熟B细胞。此成熟阶段发生在活体的骨髓和脾脏中。B细胞成 熟的抗原-依赖性期在B细胞由抗原结合及共刺激活化后发生。这些信 号促进B细胞成熟为记忆B细胞或抗体-分泌成浆细胞。B细胞成熟 的抗原-依赖性期涉及活化的B细胞增殖，抗体亲和性成熟，及抗体类 切换。那些成熟发生在二级淋巴样组织的生发中心。

已报道，体外实验条件，pDC通过释放IFN-α和IL-6诱导活化 的B细胞成熟为Ig-分泌成浆细胞。CpG2216活化pDC而诱导IFN-α 产生和B细胞而起始成熟。来自pDC的IFN-α还在IL-6的存在下支 持活化的B细胞成熟为成浆细胞。

【引用文献列表】

【专利文献】

[PTL 1]PCT/JP2013/052781

【非专利文献】

[NPL 1]Tao et al.,Nat.Methods 2(8),pp591-598(2005)

[NPL 2]Clark et al.,Genome Res.13(10),pp2265-2270(2003)

[NPL 3]Plos ONE www.plosone.org,November 2010,Volume 5, Issue 11,e13932

[NPL 4]ARTHRITIS&RHEUMATISM Vol.65,No.2,February 2013,pp472-480

[NPL 5]Balazs et al.,2002,Immunity,17,341-352

[NPL 6]Litinskiy et al.,2002,Nat Immunol,3,822-829

[NPL 7]MacLennan and Vinuesa,2002,Immunity,17,235-238

[NPL 8]Jego et al,2003,Immunity,19,225-234

[NPL 9]Odendahl et al.,2000,JI,165,5970-5979

[NPL 10]Arce et al.,2001,JI,167,2361-2369

[NPL 11]Wei et al.,2007,JI,178,6624-6633

【发明内容】

【发明要解决的技术课题】

本发明要解决的技术课题是使用与PLD4结合的抗体调控活化的 B细胞及改善由此导致的疾病的症状。

【解决课题的技术方案】

通过对PLD4的研究，本发明人确证，除了之前已报道的处于静 止期的pDC细胞之外，PLD4表达也在活化的B细胞中被诱导。本发 明人因此检查了PLD4抗体对活化的B细胞的影响。产生及纯化抗 -PLD4抗体的方法由专利文献1的方法实施。

即，本发明涉及使用以下描述的抗-PLD4抗体的二次用途。

(1)抑制活化的B细胞的药物组合物，其中所述药物组合物包 含与磷脂酶D4(PLD4)蛋白结合的单克隆抗体，或其含有抗原-结合 区的片段作为活性成分。

(2)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在重链的可变区中具有序列SYWMH(SEQ ID NO:2)作为CDR1，序列DIYPGSDSTNYNEKFKS(SEQ ID NO:3) 作为CDR2和序列GGWLDAMDY(SEQ ID NO:4)作为CDR3。

(3)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在轻链的可变区中具有序列RASQDISNYLN (SEQ ID NO:5)作为CDR1，序列YTSRLHS(SEQID NO:6)作 为CDR2和序列QQGNTLPW(SEQ ID NO:7)作为CDR3。

(4)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在重链的可变区中具有序列SYWMH作为 CDR1，序列DIYPGSDSTNYNEKFKS作为CDR2和序列GGWLDAMDY作为CDR3，及在轻链的可变区中具有序列 RASQDISNYLN作为CDR1，序列YTSRLH作为CDR2和序列 QQGNTLPW作为CDR3。

(5)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在重链的可变区中具有序列TYWMH(SEQ ID NO:8)作为CDR1，序列AIYPGNSETSYNQKFKG(SEQ ID NO:9) 作为CDR2和序列GYSDFDY(SEQ ID NO:10)作为CDR3。

(6)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在轻链的可变区中具有序列HASQGIRSNIG (SEQ ID NO:11)作为CDR1，序列HGTNLED(SEQID NO:12) 作为CDR2和序列VQYVQFP(SEQ ID NO:13)作为CDR3。

(7)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在重链的可变区中具有序列TYWMH作为 CDR1，序列AIYPGNSETSYNQKFKG作为CDR2和序列GYSDFDY 作为CDR3，及在轻链的可变区中具有序列HASQGIRSNIG作为 CDR1，序列HGTNLED作为CDR2和序列VQYVQFP作为CDR3。

(8)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在重链的可变区中具有序列DYNLH(SEQ ID NO:14)作为CDR1，序列YIYPYNGNTGYNQKFKR(SEQ ID NO: 15)作为CDR2和序列GGIYDDYYDYAIDY(SEQ ID NO:16)作为 CDR3。

(9)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在轻链的可变区中具有序列RASENIYSHIA (SEQ ID NO:17)作为CDR1，序列GATNLAH(SEQID NO:18) 作为CDR2和序列QHFWGTP(SEQ ID NO:19)作为CDR3。

(10)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在重链的可变区中具有序列DYNLH作为 CDR1，序列YIYPYNGNTGYNQKFKR作为CDR2和序列 GGIYDDYYDYAIDY作为CDR3，及在轻链的可变区中具有序列 RASENIYSHIA作为CDR1，序列GATNLAH作为CDR2和序列 QHFWGTP作为CDR3。

(11)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在重链的可变区中具有序列SYYLY(SEQ ID NO:20)作为CDR1，序列LINPTNSDTIFNEKFKS(SEQ ID NO:21) 作为CDR2和序列EGGYGYGPFAY(SEQ ID NO:22)作为CDR3。

(12)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在轻链的可变区中具有序列 TSSQTLVHSNGNTYLH(SEQ ID NO:23)作为CDR1，序列KVSNRFS(SEQ ID NO:24)作为CDR2和序列HSTHVP(SEQ ID NO: 25)作为CDR3。

(13)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在重链的可变区中具有序列SYYLY作为 CDR1，序列LINPTNSDTIFNEKFKS作为CDR2和序列 EGGYGYGPFAY作为CDR3，及在轻链的可变区中具有序列 TSSQTLVHSNGNTYLH作为CDR1，序列KVSNRFS作为CDR2和 序列HSTHVP作为CDR3。

(14)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在重链的可变区中具有序列SYGMS(SEQ ID NO:26)作为CDR1，序列TISSGGSYIYYPESVKG(SEQ ID NO:27) 作为CDR2和序列LYGGRRGYGLDY(SEQ ID NO:28)作为CDR3。

(15)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在轻链的可变区中具有序列 RSSKSLLHSDGITYLY(SEQ ID NO:29)作为CDR1，序列QMSNLAS(SEQ ID NO:30)作为CDR2和序列AQNLEL(SEQ ID NO:31)作为CDR3。

(16)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在重链的可变区中具有序列SYGMS作为 CDR1，序列TISSGGSYIYYPESVKG作为CDR2和序列 LYGGRRGYGLDY作为CDR3，及在轻链的可变区中具有序列 RSSKSLLHSDGITYLY作为CDR1，序列QMSNLAS作为CDR2和 序列AQNLEL作为CDR3。

(17)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在重链的可变区中具有序列SHYYWT(SEQ ID NO:32)作为CDR1，序列YISYDGSNNYNPSLKN(SEQ ID NO:33) 作为CDR2和序列EGPLYYGNPYWYFDV(SEQ ID NO:34)作为 CDR3。

(18)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在轻链的可变区中具有序列RASQDIDNYLN (SEQ ID NO:35)作为CDR1，序列YTSRLHS(SEQ ID NO:36) 作为CDR2和序列QQFNTLP(SEQ ID NO:37)作为CDR3。

(19)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在重链的可变区中具有序列SHYYWT作为 CDR1，序列YISYDGSNNYNPSLKN作为CDR2和序列 EGPLYYGNPYWYFDV作为CDR3，及在轻链的可变区中具有序列 RASQDIDNYLN作为CDR1，序列YTSRLHS作为CDR2和序列 QQFNTLP作为CDR3。

(20)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在重链的可变区中具有序列SHYYWS(SEQ ID NO:38)作为CDR1，序列YISYDGSNNYNPSLKN(SEQ ID NO:39) 作为CDR2和序列EGPLYYGNPYWYFDV(SEQ ID NO:40)作为 CDR3。

(21)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在轻链的可变区中具有序列RASQDIDNYLN (SEQ ID NO:41)作为CDR1，序列YTSRLHS(SEQ ID NO:42) 作为CDR2和序列QQFNTLP(SEQ ID NO:43)作为CDR3。

(22)根据以上(1)的药物组合物，其中所述单克隆抗体或其含 有抗原-结合区的片段在重链的可变区中具有序列SHYYWS作为 CDR1，序列YISYDGSNNYNPSLKN作为CDR2和序列 EGPLYYGNPYWYFDV作为CDR3，及在轻链的可变区中具有序列 RASQDIDNYLN作为CDR1，序列YTSRLHS作为CDR2和序列 QQFNTLP作为CDR3。

(23)抑制活化的B细胞的药物组合物，其中所述药物组合物包 含由保藏号NITEBP-1211，NITE BP-1212，NITE BP-1213和NITE BP-1214的杂交瘤mp5B7，mp7B4，mp13D4和mp13H11的任一种 产生的单克隆抗体，或其含有抗原-结合区的片段作为活性成分。

(24)根据以上(1)～(23)之任一项的药物组合物，其还用于 预防或治疗自身免疫疾病。

(25)根据以上(1)～(23)之任一项的药物组合物，其还用于 预防或治疗过敏性疾病。

(26)检测活化的B细胞的方法，所述方法包括使与PLD4的细 胞外结构域结合的单克隆抗体或其含有抗原-结合区的片段接触待测 试的细胞及检测与细胞结合的单克隆抗体或其含有抗原-结合区的片 段的步骤。

(27)检测活化的B细胞的试剂，其中所述试剂包含与PLD4的 细胞外结构域结合的单克隆抗体或其含有抗体-结合区的片段。

(28)抑制活化的B细胞的方法，所述方法包括使以下任一组分 接触活化的B细胞的步骤：

(a)与PLD4结合及抑制活化的B细胞的单克隆抗体，或其含 有抗原-结合区的片段，以及

(b)移接了(a)中的单克隆抗体的互补性-决定区的免疫球蛋白， 或其含有抗原-结合区的片段。

(29)抑制活体中活化的B细胞的方法，所述方法包括向活体施 用以下任一组分的步骤：

(a)与PLD4结合及抑制活化的B细胞的活性的单克隆抗体， 或其含有抗原-结合区的片段，以及

(b)移接了(a)中的单克隆抗体的互补性-决定区的免疫球蛋白， 或其含有抗原-结合区的片段。

(30)方法根据(28)以上或(29)以上，其中所述活化的B细 胞的活性是抗体-产生活性。

(31)抑制活化的B细胞的剂，其中所述剂包含以下组分作为活 性组分：

(a)与PLD4结合及抑制活化的B细胞的单克隆抗体，或其含 有抗原-结合区的片段，以及

(b)移接了(a)中的单克隆抗体的互补性-决定区的免疫球蛋白， 或其含有抗原-结合区的片段。

(32)抑制活化的B细胞的剂根据(31)以上，其中活化的B细 胞的活性是抗体-产生活性。

“活化的B细胞”可包括由不仅通过BCR和TLR直接刺激，而且 通过T细胞刺激具有增殖和抗体产生和分泌的活性的B细胞。

“含有抗原-结合区的片段”可包括由用木瓜蛋白酶或胃蛋白酶的 部分消化获得的Fab，Fab’，F(ab’)₂片段等，但不限于此。此外，含 有抗原-结合区的片段也可包括含有移接了单克隆抗体的CDR(互补 性-决定区)的可变区的免疫球蛋白的片段。熟知的是，这些抗体片段 可用作与抗原具有结合亲和力的抗体分子。或者，只要维持需要的抗 原-结合活性，可使用由基因重组构建的抗体。由基因重组构建的抗体 的例可包括自抗体片段等形成的嵌合抗体，CDR-移接的抗体，单链 Fv(scFv)，双抗体(双抗体)，线性抗体和多特异性抗体。知道基 于单克隆抗体或产生单克隆抗体的抗体-产生细胞获得这些抗体的方 法。

“自身免疫疾病”是通过通过将个体的自身身体组织误解为外源物 质而免疫功能的攻击导致的疾病。器官-特异性自身免疫疾病包括 Guillain-Barre综合征，重症肌无力，慢性胃炎(慢性萎缩性胃炎)， 自身免疫肝炎，主要胆道硬化，主要硬化胆管炎，自身免疫胰腺炎， 主动脉炎综合征，古德帕斯丘综合征，快速进行性肾小球肾炎，巨成 红细胞贫血，自身免疫溶血贫血，自身免疫中性粒细胞减少症，特发 性血小板减少性紫癜，Basedow病，桥本甲状腺炎，原发性甲状腺功 能减退，特发性Addison氏病，1型糖尿病，溃疡性结肠炎，克罗恩 病，腹腔疾病等；及系统性自身免疫疾病包括关节风湿病，系统性红 斑狼疮，抗-磷脂抗体综合征，多发性肌炎，硬皮病，斯耶格伦综合征， 血管炎综合征，自身免疫淋巴组织增生性综合征(ALPS)等，但不限 于此。

“过敏性疾病”是由针对外源物质的异常免疫反应导致的疾病，及 包括特应性皮炎，支气管哮喘，花粉病，过敏性鼻炎，荨麻疹，婴儿 哮喘，过敏性胃肠炎，接触性皮炎，血清病，血管紫癜等，但不限于 此。

【发明效果】

本发明提供可归因于使用特异性识别PLD4的抗体和其片段，及 具有其治疗效果的药物阻遏活化的B细胞的治疗性方法。

本发明可还预期通过使用活化的B细胞-抑制活性而对患自身免 疫疾病或过敏性疾病的患者具有预防和治疗效果。

【附图说明】

图1是显示人B细胞(CD19+)用抗-PLD4抗体染色的FACS分 析图。通过用TLR9配体，CpG2006刺激在CD19+B细胞上诱导PLD4 蛋白。活化的B细胞(CD19+)中PLD4的诱导可由TLR9配体 (CpG2006)检测。单克隆抗体11G9.6和5B7用于检测PLD4。小鼠 IgG2b,κ被用作阴性对照。

图2是显示人PBMC用抗-PLD4抗体和抗-CD19抗体的染色的 FACS分析图。通过用TLR9配体刺激而PLD4+细胞在活化的B细胞 (CD19+)中增加。小鼠IgG1,κ被用作阴性对照。

图3是显示在TLR9配体刺激的存在或缺失下人PBMC用抗 -PLD4抗体和抗-CD19抗体染色的FACS分析图。PLD4+TLR9配体- 刺激的B细胞(CD19+)的显著增加可用抗-PLD4抗体(5B7,13D4, 13H11和11G9.6)检测。小鼠IgG2b,κ被用作阴性对照。

图4是显示由指示的各抗-PLD4嵌合抗体的PLD4+活化的B细胞 的减少的FACS分析图。PBMC与抗-PLD4嵌合抗体(ch3B4,ch13D4, ch13H11,ch5B7和ch11G9.6)的共培养在TLR9配体的存在下减少 PLD4+活化的B细胞。但是，在未添加抗体的情况(NoAb)和使用 非特异性抗体的情况(对照Ig)中，通过添加CpG2006的B细胞活 化可不被抑制。

图5是以数表示图4中的抑制效应的图。表达PLD4及用对照Ig 处理的活化的B细胞组被认为是100％，及显示表达PLD4及用各抗 -PLD4嵌合抗体处理的活化的B细胞组中的变化。

图6是流式细胞术的结果。将PBMC用指示的嵌合PLD4抗体， 在TLR9配体和重组人IL-6的存在下培养。相比对照Ig处理，通过 用ch3B4，ch5B7，ch13D4，ch13H11或ch11G9.6处理而成浆细胞群 (CD19+CD27+IgD-CD38+)减少。

图7是图6的培养上清液的ELISA测定的结果。相比对照Ig处 理，通过用ch3B4，ch5B7，ch13D4，ch13H11或ch11G9.6处理而自 成浆细胞的人IgG产生减少。

【实施方式】

本发明人新发现，PLD4是其表达随B细胞的活化被诱导的分子。

本发明人之前报道了人PLD4的表达，亚细胞定位，结构和功能 (专利文献1)。在本发明中，还发现，PLD4的表达不仅在pDC而 且在活化的B细胞中被诱导。还新发现，抗-PLD4抗体抑制活化的B 细胞。该发现不仅加强抗-PLD4抗体通过阻遏pDC活性(这之前已报 道)，而且B细胞活性对自身免疫疾病具有治疗效果的可能性。

蛋白诸如CD19，CD20，CD22和BAFF-R在B细胞的表面表达。 CD19在自几乎所有阶段的B细胞诸如原-B细胞至抗体-分泌浆细胞上 表达，及发挥控制成熟B细胞中的活化的辅助受体的功能。CD20自 前B细胞至活化的B细胞表达，CD22在成熟B细胞的细胞表面表达， 及在B细胞的长分化阶段中观察到BAFF-R的表达。因此，注意到， 识别这些蛋白的抗体不仅抑制活化的B细胞，而且抑制未接触抗原的 幼稚B细胞。但是，本发明的抗-PLD4抗体，表征为抑制活化的B细 胞而不影响幼稚B细胞。

本发明中使用的抗-PLD4抗体与之前报道的那些相同(专利文献 1)。简言之，使用编码含有PLD4的细胞外结构域的氨基酸序列(对 应于SEQ ID NO:1显示的氨基酸序列中的第54～506位的氨基酸序 列)的重组PLD4-Ig融合蛋白作为免疫原，如下获得针对PLD4的抗体。

<抗-人PLD4单克隆抗体的产生>

【(1)免疫】

作为免疫原，使用以上重组PLD4-Ig融合蛋白。将PLD4-Ig融合 蛋白施用于3只BALB/c小鼠的背部下皮。作为佐剂，使用完全和不 完全的弗氏佐剂(SIGMA)。第1次施用的体积是200μg/小鼠，及第 2至第4次施用的体积是50μg/小鼠。

【(2)抗-血清滴度的确认】

在第3和第4免疫之后收集血，和由ELISA评价抗-血清滴度。

将PLD4-Ig融合蛋白转化进96孔微孔板上的固相。抗血清自 1000-倍以3-倍增量连续稀释，和制备达729000-倍的稀释系列。向抗 原-包被的板，添加各50μl的各样品，及实施第1级反应。在洗涤之 后，第2级反应用HRP-标记的抗-小鼠IgG(κ,λ)抗体实施，和显色用OPD(邻苯二胺)检测(490nm)。

【(3)细胞融合】

从观察到抗-血清滴度增加的小鼠提取脾细胞。提取的脾细胞和小 鼠骨髓瘤细胞(P3U1)由PEG方法融合，和将融合的脾细胞在HAT 培养基中选择性地培养。

<使用CAL-1细胞的杂交瘤的FACS筛选>

由FACS评价自各由HAT选择性培养获得的融合的脾细胞的克 隆产生的抗体。因而，杂交瘤培养上清液中的3B4，5B7，7B4，8C11， 10C3，11D10，13D4，13H11，14C1和11G9.6与人PLD4良好反应。

在自以上杂交瘤产生的各单克隆抗体中，根据Kabat编号系统的 分析方法测定可变区中的CDR区(CDR；CDR1,CDR2和CDR3)和 FW区(框架工作区)和可变区的序列(Kabat etal,1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest,National Institutesof Health Publication No.91-3242,5th ed.,United States Department of Healthand Human Services,Bethesda,MD)。

获得的小鼠11G9.6抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO: 74，及氨基酸序列是SEQ ID NO:75。小鼠11G9.6抗体的重链可变区 之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:2， SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4。

获得的小鼠3B4抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO: 76，及氨基酸序列是SEQ ID NO:77。小鼠3B4抗体的重链可变区之 内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10。

获得的小鼠5B7抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO: 78，及氨基酸序列是SEQ ID NO:79。小鼠5B7抗体的重链可变区之 内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:14， SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16。

获得的小鼠7B4抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO: 80，及氨基酸序列是SEQ ID NO:81。小鼠7B4抗体的重链可变区之 内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:14， SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16。7B4抗体是与5B7抗体在重和轻 链的可变区具有相同的CDR序列的抗体。

获得的小鼠8C11抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO: 82，及氨基酸序列是SEQ ID NO:83。小鼠8C11抗体的重链可变区 之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:20， SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22。

获得的小鼠10C3抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO: 84，及氨基酸序列是SEQ ID NO:85。小鼠10C3抗体的重链可变区 之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:26， SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28。

获得的小鼠11D10抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO: 86，及氨基酸序列是SEQ ID NO:87。小鼠11D10抗体的重链可变区 之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:26， SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28。11D10抗体是与10C3抗体在重和 轻链的可变区具有相同的CDR序列的抗体。但是，它们的重链同种 型不同(10C3具有小鼠IgG2a的恒定区和11D10具有小鼠IgG2b的 恒定区)。

获得的小鼠13D4抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO: 88，及氨基酸序列是SEQ ID NO:89。小鼠13D4抗体的重链可变区 之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:32， SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34。

获得的小鼠13H11抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO: 90，及氨基酸序列是SEQ ID NO:91。小鼠13H11抗体的重链可变区 之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:38， SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40。

获得的小鼠14C1抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO: 92，及氨基酸序列是SEQ ID NO:93。小鼠14C1抗体的重链可变区 之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:38， SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40。14C1抗体是与13H11抗体在重和 轻链的可变区具有相同的CDR序列的抗体。但是，它们的重链同种 型不同(13H11具有小鼠IgG2b的恒定区和14C1具有小鼠IgG1的 恒定区)。

小鼠11G9.6抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:94，及 氨基酸序列是SEQID NO:95。小鼠11G9.6抗体的轻链可变区之内的 CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7。

小鼠3B4抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:96，及氨 基酸序列是SEQ IDNO:97。小鼠3B4抗体的轻链可变区之内的 CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ IDNO:11，SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13。

小鼠5B7抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:98，及氨 基酸序列是SEQ IDNO:99。小鼠5B7抗体的轻链可变区之内的 CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ IDNO:17，SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19。

小鼠7B4抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:100，及 氨基酸序列是SEQID NO:101。小鼠7B4抗体的轻链可变区之内的 CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQID NO:17，SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19。

小鼠8C11抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:102，及 氨基酸序列是SEQID NO:103。小鼠8C11抗体的轻链可变区之内的 CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQID NO:23，SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:25。

小鼠10C3抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:104，及 氨基酸序列是SEQID NO:105。小鼠10C3抗体的轻链可变区之内的 CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQID NO:29，SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:31。

小鼠11D10抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:106， 及氨基酸序列是SEQID NO:107。小鼠11D10抗体的轻链可变区之 内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:29， SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:31。

小鼠13D4抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:108，及 氨基酸序列是SEQID NO:109。小鼠13D4抗体的轻链可变区之内的 CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQID NO:35，SEQ ID NO:36和SEQ ID NO:37。

小鼠13H11抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:100， 及氨基酸序列是SEQID NO:111。小鼠13H11抗体的轻链可变区之 内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:41， SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43。

小鼠14C1抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:112，及 氨基酸序列是SEQID NO:113。小鼠14C1抗体的轻链可变区之内的 CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQID NO:41，SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43。

在本发明中更优选的单克隆抗体的例可包括由杂交瘤mp5B7， mp7B4，mp13D4和mp13H11产生的单克隆抗体。

杂交瘤mp5B7，mp7B4，mp13D4和mp13H11于2012年1月27 日，在独立行政法人制品评价技术基盘机构专利生物保藏中心，以保 藏号NITE ABP-1211下，NITE ABP-1212，NITEABP-1213和NITE ABP-1214保藏。特定保藏信息描述如下。

(1)保藏机构的名称和地址

名称：独立行政法人制品评价技术基盘机构专利生物保藏中心

地址：

292-0818，日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8

(2)保藏日：2012年1月27日

(3)保藏号：NITE BP-1211(杂交瘤mp5B7)

NITE BP-1212(杂交瘤mp7B4)

NITE BP-1213(杂交瘤mp13D4)

NITE BP-1214(杂交瘤mp13H11)

尤其是，更优选的抗体是具有如下组合的抗体：

重链CDR1：DYNLH，CDR2：YIYPYNGNTGYNQKFKR，及 CDR3：GGIYDDYYDYAIDY，以及

轻链CDR1：RASENIYSHIA，CDR2：GATNLAH，及CDR3： QHFWGTP

作为构成其可变区的CDR的序列；

具有以下组合的抗体：

重链CDR1：SHYYWT，CDR2：YISYDGSNNYNPSLKN，及 CDR3：EGPLYYGNPYWYFDV，以及

轻链CDR1：RASQDIDNYLN，CDR2：YTSRLHS，及CDR3： QQFNTLP

构成其可变区的CDR的序列；以及

具有以下组合的抗体：

重链CDR1：SHYYWS，CDR2：YISYDGSNNYNPSLKN，及 CDR3：EGPLYYGNPYWYFDV，以及

轻链CDR1：RASQDIDNYLN，CDR2：YTSRLHS，及CDR3： QQFNTLP，

作为构成其可变区的CDR的序列。

识别PLD4的嵌合抗体或人源化的抗体可使用编码其的多核苷酸 由遗传加工产生。如描述于专利文献1，例如，各有活性的嵌合抗体 (ch3B4Ab,ch5B7Ab,ch7B4Ab,ch8C11Ab,ch10C3Ab,ch11D10Ab, ch13D4Ab,ch13H11Ab,ch14C1Ab,ch11G9.6Ab等)可由本领域技术 人员通过使用以上小鼠单克隆抗体(3B4,5B7,7B4,8C11,10C3, 11D10,13D4,13H11,14C1,11G9.6等)的各CDR区容易产生。

本发明人确证，针对PLD4的单克隆抗体具有针对表达PLD4的 细胞的CDC(补体依赖性细胞毒性)活性和ADCC(抗体-依赖性细 胞毒性)活性。因此，本发明的抗-PLD4单克隆抗体针对表达PLD4 的细胞具有细胞毒性作用。

即，本发明涉及抑制活化的B细胞的剂，其中所述剂包含与PLD4 的细胞外结构域结合的抗体作为活性组分。或者，本发明提供抑制抗 体产生的方法，所述方法包括施用与PLD4的细胞外结构域结合的抗 体的步骤。本发明还涉及与PLD4的细胞外结构域结合的抗体在生产 抑制活化的B细胞的药物组合物中的用途。

在本发明中，可使用根据需要修饰的抗体。根据本发明，识别 PLD4的细胞外结构域的抗体具有抑制活化的B细胞的作用。即，已 相信，有抗体本身针对活化的B细胞具有细胞毒性作用的可能性。知 道显示强效应子作用的抗体亚类。或者，对活化的B细胞的抑制效应 可还通过用细胞毒性剂修饰抗体而增加。作为细胞毒性剂，可提及以 下物质。

毒素：假单胞菌属(Pseudomonas)内毒素(PE)，白喉毒素， 赖氨酸

放射性同位素：Tc99m，Sr89，I131，Y90

抗癌剂：加利刹霉素，丝裂霉素，紫杉醇

含有蛋白的毒素可由双官能剂结合到抗体或其片段等。或者，通 过缀合编码抗体的基因与编码毒素的基因，也可获得二者的融合蛋白。 也知道放射性同位素与抗体结合的方法。用放射性同位素标记抗体的 方法，例如，知道使用螯合剂。而且，抗癌剂可使用聚糖或双官能剂 等结合到抗体。

在本发明中，可将结构经人工修饰的抗体用作活性组分。例如， 知道改善抗体的细胞毒性作用和稳定性的各种修饰方法。具体地，知 道重链的聚糖经修饰的免疫球蛋白(Shinkawa,T.et al.J.Biol.Chem. 278:3466-3473.2003)。通过聚糖的修饰，免疫球蛋白的ADCC(抗 体依赖性细胞-介导的细胞毒性)活性增加。

在本发明中，可使用一种或更多单克隆抗体。例如，识别PLD4 的细胞外结构域的几种类型的单克隆抗体可组合及用于本发明。

如下所述，可确证抗-PLD4抗体对活化的B细胞的获得性免疫抗 体-产生活性具有抑制作用。B细胞通过刺激BCR配体或TLR配体(优 选TLR4配体,TLR7配体或TLR9配体)产生大量的抗体。在刺激B 细胞的以上配体之前及之后或与用配体刺激同时提供抗-PLD4抗体，及使用抗-PLD4抗体未被作为对照提供的B细胞，比较了产生源于B 细胞的获得性免疫抗体的能力。抗体-产生能力可通过测量在B细胞的 培养上清液中含有的分泌型免疫球蛋白评价。比较的结果，当通过添 加抗-PLD4抗体显著地降低上清液中源于B细胞的获得性免疫抗体的 量时，可确证测试的抗-PLD4抗体对B细胞的抗体-产生能力具有抑 制作用。知道测量抗体的方法。B细胞是在活体内产生体液免疫(分 泌抗体)的细胞。因此，体液免疫可通过抑制B细胞的抗体-产生能力 来调整。

当将识别PLD4的细胞外结构域的抗体施用于不同于抗体所来源 的生物物种的宿主时，期望将其加工为难以被该宿主识别为外源物质 的形式。通过加工为以下描述的分子，例如，免疫球蛋白可难被识别 为外源物质。知道以下描述的加工免疫球蛋白分子的技术：

●缺乏恒定区的含有抗原-结合区的片段(Monoclonal Antibodies: Principlesand Practice.third edition,Academic Press Limited.1995； Antibody Engineering,A Practical Approach,IRL PRESS,1996)；

●由单克隆抗体的抗原-结合区和宿主免疫球蛋白的恒定区构成的 嵌合抗体(Experimental manual for genetic expression,Kodansha Ltd. 1994(由Isao Ishida和Tamie Ando编辑))；以及

●CDR-取代的抗体，其中宿主免疫球蛋白中的互补性-决定区 (CDR)被单克隆抗体的CDR取代(Experimental manual for genetic expression,Kodansha Ltd.1994(由Isao Ishida和Tamie Ando编 辑))。

或者，人免疫球蛋白的可变区基因也可由噬菌体展示方法获得 (McCaffertyJ.et al.,Nature 348:552-554,1990；Kretzschmar T et. al.,Curr OpinBiotechnol.2002Dec；13(6):598-602.)。在噬菌体展示 方法中，将编码人免疫球蛋白的可变区的基因合入噬菌体基因。使用 各种类型的免疫球蛋白基因作为源，也可创建噬菌体库。噬菌体作为 构建噬菌体本身的蛋白的融合蛋白表达该可变区。由噬菌体在噬菌体 表面表达的可变区维持与抗原的结合活性。因此，通过选择与抗原结 合的噬菌体或表达抗原的细胞等，可自噬菌体库筛选表达具有靶结合 活性的可变区的噬菌体。而且，编码具有靶结合活性的可变区的基因 保持在如上选择的噬菌体粒子中。即，在噬菌体展示方法中，使用可 变区的结合活性作为指标，可获得编码具有靶结合活性的可变区的基 因。

在本发明的抑制B细胞活性的剂或抑制B细胞活性的方法中，识 别PLD4的细胞外结构域的抗体或其含有至少抗原-结合区的抗体片 段可作为蛋白或编码其的多核苷酸施用。为了施用多核苷酸，期望使 用编码靶蛋白的多核苷酸设置在适当的启动子控制下，从而靶蛋白可 表达的载体。在载体中，也可设置增强子和终止子。知道维持构成免 疫球蛋白的重和轻链的基因及免疫球蛋白分子可表达的载体。免疫球 蛋白可表达的载体可通过导入细胞来施用。为施用到活体，可通过施 用到活体感染细胞的载体可直接施用。或者，载体被导入自活体分离 的淋巴细胞，然后载体可返回到活体(离体)。

在基于本发明的抑制B细胞活性的剂或抑制B细胞活性的方法 中，施用于活体的单克隆抗体的量正常是0.5mg～10mg，例如1mg～ 50mg，优选2mg～10mg免疫球蛋白/kg体重。向活体的抗体施用间隔 可适当地调整，以便可维持在处理时期期间活体中免疫球蛋白的有效 浓度。具体，例如，抗体可以1～2周的间隔施用。可使用任何施用途 径。本领域技术人员可为治疗适当地选择有效施用途径。具体地，可 提及口腔或肠胃外施用。由静脉内注射，肌内注射，腹膜内注射或皮 下注射等，例如，抗体可为全身或局部施用。对于肠胃外施用适合的 制剂在本发明中包括注射，栓剂，喷雾剂等。此外，当向细胞提供时， 免疫球蛋白在培养液中以正常1μg/ml，优选10μg/mL或更高，更优选 50μg/mL或更高，及还优选0.5mg/mL或更高的量提供。

在基于本发明的抑制B细胞活性的剂或抑制B细胞活性的方法 中，单克隆抗体可由任何方法施用于活体。单克隆抗体与药学可接受 的载体正常组合。单克隆抗体可根据需要与添加剂组合，诸如增稠剂， 稳定剂，防腐剂和溶解剂。该载体或添加剂包括乳糖，柠檬酸，硬脂 酸，硬酯酸镁，蔗糖，淀粉，滑石，明胶，琼脂，植物油，乙二醇等。 术语“药学可接受的”是指被各国政府机构批准，或其对动物，哺乳动 物及，尤其是人的使用被列于各国药典或通常被认可的药典。抑制B 细胞活性的剂在本发明中也可以冷冻干燥粉或片剂形式，以一个或更 多剂量供给。而且，可将用于溶解的灭菌的注射用水，生理学盐溶液 或缓冲溶液与冷冻干燥粉或片剂组合，以便组合物在施用之前会获得 期望的浓度。

而且，为作为表达免疫球蛋白的载体施用，重链和轻链作为不同 质粒共转染，和各质粒可以0.1～10mg，例如1～5mg/kg体重施用。 此外，1～5μg载体/10⁶细胞用于体外导入细胞。以下以由实施例方式 更详细描述本发明。

本说明书中引用的全部相关的领域文献通过引用在本文合并。

现在由实施例方式更详细描述本发明。但是，应注意，本发明不 限于该实施例。

【实施例】

【实施例1】

将人PBMC(1×10⁷细胞/ml)由CpG2006，TLR9的配体，(1μM 的终浓度)刺激，及在24孔板中在CO₂温育器(37℃,5％CO₂)中 温育约20小时。平行地，未受刺激的人PBMC(1×10⁷细胞/ml)也 在CO₂温育器(37℃,5％CO₂)中培养约20小时。

将人PBMC用经FACS缓冲剂(1％FBS/PBS)稀释5倍的FcR 阻断试剂(Miltenyi)于4℃处理20分钟。在洗涤之后，用5B7，11G9.6 或小鼠IgG2b，κ，第一抗体，(各10μg/ml)于4℃实施染色15分钟。 将第二抗体和随后抗体用FACS缓冲剂稀释，从而FcR阻断试剂会被 稀释25-倍。将PE-标记的抗-小鼠Ig(BD)，第二抗体，稀释100- 倍，和向其中添加溶液及混合。此外，为在FACS上分级分离B细胞， 将APC-标记的抗-人CD 19抗体(Biolegend)用含有FcR阻断试剂 的FACS缓冲剂稀释30-倍，及于4℃实施染色15分钟。使用FACS Calibur(BD)，将数据合并。将活细胞在X轴：FSC和Y轴：SSC 的点图上选通。将数据合并，直到活细胞选通中的细胞数计数成为 100,000个。将B细胞：抗-标志物分子抗体-阳性细胞选通。在X轴： PLD4的直方图上分析选通的细胞，及在其上覆盖用小鼠IgG2b，κ 的染色结果。因而，抗-PLD4抗体难以与非-刺激的B细胞结合，但 与通过用TLR9配体刺激活化的B细胞选择性地结合(图1)。此显 示，PLD4在活化的B细胞上表达。

【实施例2】

<B细胞被各单克隆抗体的结合测试>

将人PBMC用1μM终浓度的CpG2006刺激约20小时。收集细 胞，及用FcR阻断试剂于4℃处理20分钟。在洗涤之后，用各10μg/ml 的3B4，5B7，13D4，13H11，11G9.6，小鼠IgG1，κ或小鼠IgG2b， κ，第一抗体，于4℃实施染色15分钟。用PE-标记的抗-小鼠Ig，第 二抗体，于4℃实施染色15分钟。为B细胞组的选通，用APC-标记 的抗-人CD19抗体于4℃实施复染色15分钟。通过抗-PLD4抗体与 CD19+B细胞的结合分析X轴：FSC和Y轴：SSC的点图上的活细胞组(图2和图3)。因而，全部测试的抗-PLD4单克隆抗体结合到由 TLR9刺激的B细胞。即，确证，由全部抗-PLD4单克隆抗体，在B 细胞中以活化-依赖性方式诱导PLD4的表达。

【实施例3】

<针对活化的B细胞的抗-PLD4嵌合抗体的细胞毒性活性>

将通过用TLR9配体(1μM)刺激诱导的PLD4+活化的B细胞的 频度用作指标。将人PBMC与CpG2006和各抗-PLD4嵌合抗体或对 照Ig培养约16小时。作为培养基，使用RPM11640(SIGMA)(包 括10％FBS(Equitech-bio)，5ml的200mM L-谷氨酰胺(GIBCO)， 5ml的Pen-Strep(GIBCO)，5ml的丙酮酸钠(GIBCO)，及0.5ml 的50mM 2-ME(SIGMA))。收集细胞，及用FcR阻断试剂于4℃ 处理20分钟。在洗涤之后，将细胞还由5B7或13D4，3B4或小鼠 IgG2b，κ，第一抗体，于4℃染色15分钟(各10μg/ml)。将PBMC 用嵌合3B4抗体(ch3B4)，嵌合3D4抗体(ch3D4)，或嵌合13H11 抗体(ch13H11)处理的样品用5B7染色，及将PBMC用嵌合5B7 抗体(ch5B7)或嵌合11G9.6抗体(ch11G9.6)处理的样品用13D4 染色。已确证，为ADCC处理的抗-PLD4抗体克隆和为染色使用的抗 -PLD4抗体克隆彼此不竞争。由PE-标记的抗-小鼠Ig，第二抗体，于 4℃实施染色15分钟而发现抗-PLD4的结合。为B细胞的选通，用 APC-标记的抗-人CD19抗体于4℃实施复染色15分钟(图4)。将 用各嵌合抗-PLD4抗体处理的PLD4+活化的B细胞群与用对照抗体处 理的PLD4+活化的B细胞的群比较(图5)。因而，相比用对照Ig 处理，全部嵌合抗-PLD4抗体减少活化的PLD4+B细胞(当用对照Ig 处理时，被认为是100％,ch3B4：70.2％,ch13D4：56.0％,ch13H11： 55.3％,ch5B7：25.8％,ch11G9.6：66.4％)。

【实施例4】

<针对活化的B细胞的嵌合抗-PLD4抗体的抑制性效应>

为了测定抗-人PLD4抗体通过B细胞活化对B细胞成熟和Ig产 生的效应，将全人PBMC用ch3B4，ch5B7，ch13D4，ch13H11，ch11G9.6 或对照Ig处理24h。然后，将PBMC在CpG2216(1μM)和重组人 IL-6的存在下进一步培养，以诱导B细胞活化，导致B细胞成熟。在活化的B细胞培养7天的结果中，由流式细胞术，用PE-标记的抗- 人CD19抗体分析活化的B细胞中的成浆细胞， CD19+CD27+IgD-CD38+。为了测量人IgG产生，在用PBS洗涤2次 之后，将培养的活化的B细胞用50ng/ml的PMA(佛波醇肉豆蔻酸 酯乙酸盐)再刺激。2天后，在培养上清液中由ELISA测量人IgG产 生。相比用对照Ig处理，通过用ch3B4，ch5B7，ch13D4，ch13H11 或ch11G9.6处理而活化的B细胞中的成浆细胞减少(图6)。而且， 相比对照Ig处理，通过用ch3B4，ch5B7，ch13D4，ch13H11或ch11G9.6 处理而人IgG产生减少(图7)。这些结果指示，用嵌合抗-人PLD4Abs 处理而减少Ab-分泌活化的人B细胞。

【工业实用性】

如显示于以上例，抗-PLD4抗体识别及抑制活化的B细胞。因此， 该抗体对于预防和治疗免疫功能中涉及的疾病(自身免疫疾病和过敏 性疾病)有用。

<本发明的抗-PLD4单克隆抗体的序列信息的解释>

【1.抗-PLD4小鼠11G9.6抗体】

获得的抗-PLD4小鼠11G9.6抗体的重链可变区的核酸序列是 SEQ ID NO:74，及氨基酸序列是SEQ ID NO:75。小鼠11G9.6抗体 的重链可变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4。

抗-PLD4小鼠11G9.6抗体的重链可变区的核酸序列(504bp)[大 写字母：小鼠11G9.6VH可变区，小写字母：小鼠IgG2b重链恒定区] (SEQ ID NO:74)

ATGAGATCACAGTTCTCTATACAGTTACTGAGCACACAG AACCTCACCTTGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTA GCAACAGCTACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCA GCCTGGGGCTGAACTGGTGAAGCCTGGGACTTCAGTGAAAA TGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGA TGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCGGGACAAGGCCTTGAGTGG ATTGGAGATATTTATCCTGGTAGTGATAGTACTAACTACAAT GAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACACTGACTGTAGACACATC CTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGA GGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGAGGAGGGTGGTTGG ATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCT CCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggc

小鼠11G9.6抗体的重链可变区的氨基酸序列(168a.a.)[大写 字母：小鼠11G9.6VH可变区，小写字母：小鼠IgG2b重链恒定区] 加下划线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1, CDR2和CDR3)(SEQ ID NO:75)。

MRSQFSIQLLSTQNLTLGWSCIILFLVATATGVIISQVQLQQPGAELVKPGTSVKMSCK ASGYTFT

WVKQRPGQGLEWIG

KATLTVDTSSSTA YMQLSSLTSEDSAVYYCAR

WGQGTSVTVSSakttppsvyplapkg

11G9.6抗体的重链可变区中的CDR1

(SEQ ID NO:2)

11G9.6抗体的重链可变区中的CDR2

(SEQ ID NO:3)

11G9.6抗体的重链可变区中的CDR3

(SEQ ID NO:4)

获得的抗-PLD4小鼠11G9.6抗体的轻链可变区的核酸序列是 SEQ ID NO:38，及氨基酸序列是SEQ ID NO:39。小鼠11G9.6抗体 的轻链可变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:40，SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42。

抗-PLD4小鼠11G9.6抗体的轻链可变区的核酸序列(421bp)[大 写字母：小鼠11G9.6VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区] (SEQ ID NO:94)

ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCT GTTTTCAAGGTACCAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTA CATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGACAGAGTCACCATCA GTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGCAATTATTTAAACTGGT ATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACT ACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTG GCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACC TGGAGCAAGAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGGTA ATACGCTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAA ATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcaagggcgaat

小鼠11G9.6抗体的轻链可变区的氨基酸序列(140a.a.)[大写 字母：小鼠11G9.6VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]加 下划线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1, CDR2和CDR3)(SEQ ID NO:95)。

MMSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISC

WYQQKPDGTVKLLIY

GVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFC

TFGGGTKLEIKradaaptvsikge

11G9.6抗体的轻链可变区中的CDR1

(SEQ ID NO:5)

11G9.6抗体的轻链可变区中的CDR2

(SEQ ID NO:6)

11G9.6抗体的轻链可变区中的CDR3

(SEQ ID NO:7)

【2.抗-PLD4小鼠3B4抗体】

获得的抗-PLD4小鼠3B4抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:76，及氨基酸序列是SEQ ID NO:77。小鼠3B4抗体的重链可 变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO: 8，SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10。

抗-PLD4小鼠3B4抗体的重链可变区的核酸序列(437bp)[大 写字母：小鼠3B4VH可变区，小写字母：小鼠IgG1重链恒定区]

ATGGAATGTAACTGGATACTTCCTTTTATTCTGTCGGTAA TTTCAGGGGTCTCCTCAGAGGTTCAGCTCCAGCAGTCTGGGA CTGTGCTGTCAAGGCCTGGGGCTTCCGTGACGATGTCCTGCA AGGCTTCTGGCGACAGCTTTACCACCTACTGGATGCACTGGG TAAAACAGAGGCCTGGACAGGGTCTAGAATGGATTGGTGCT ATCTATCCTGGAAATAGTGAAACTAGCTACAACCAGAAGTTC AAGGGCAAGGCCAAACTGACTGCAGTCACATCCGCCAGCACTGCCTATATGGAGTTCACTAGCCTGACAAATGAGGACTCTGC GGTCTATTACTGTACGGGGGGTTATTCCGACTTTGACTACTG GGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCAgccaaaacgacacccc catctgtctatccact

小鼠3B4抗体的重链可变区的氨基酸序列(145a.a.)[大写字 母：小鼠3B4VH可变区，小写字母：小鼠IgG1重链恒定区]加下划 线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1,CDR2 和CDR3)。

MECNWILPFILSVISGVSSEVQLQQSGTVLSRPGASVTMSCKASGDSFT

WVKQRPGQGLEWIG

KAKLTAVTSASTAYMEFTSLTNEDSAVYY CTG

WGQGTTLTVSSakttppsvyp

3B4抗体的重链可变区中的CDR1

TYWMH

3B4抗体的重链可变区中的CDR2

AIYPGNSETSYNQKFKG

3B4抗体的重链可变区中的CDR3

GYSDFDY

获得的抗-PLD4小鼠3B4抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:96，及氨基酸序列是SEQ ID NO:97。小鼠3B4抗体的轻链可 变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO: 11，SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13。

抗-PLD4小鼠3B4抗体的轻链可变区的核酸序列(459bp)[大 写字母：小鼠3B4VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]

ATGATGGTCCTTGCTCAGTTTCTTGCATTCTTGTTGCTTT GGTTTCCAGGTGCAGGATGTGACATCCTGATGACCCAATCTC CATCCTCCATGTCTGTATCTCTGGGAGACACAGTCAGCATCA CTTGCCATGCAAGTCAGGGCATTAGAAGTAATATAGGGTGGT TGCAGCAGAAACCAGGGAAATCATTTAAGGGCCTGATCTTTC ATGGAACCAACTTGGAAGATGGAGTTCCATCAAGGTTCAGTG GCAGAGGATCTGGAGCAGATTATTCTCTCACCATCAACAGCC TGGAATCTGAAGATTTTGCAGACTATTACTGTGTACAGTATG TTCAGTTTCCTCCAACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAA TAAGAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcagttaacatct ggaggtgcctcagtcgtg

小鼠3B4抗体的轻链可变区的氨基酸序列(153a.a.)[大写字 母：小鼠3B4VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]加下划 线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1,CDR2 和CDR3)。

MMVLAQFLAFLLLWFPGAGCDILMTQSPSSMSVSLGDTVSITC

WLQQKPGKSFKGLIF

GVPSRFSGRGSGADYSLTINSLESEDFADYYC

PTFGSGTKLEIRradaaptvsifppsseqltsggasvv

3B4抗体的轻链可变区中的CDR1

HASQGIRSNIG

3B4抗体的轻链可变区中的CDR2

HGTNLED

3B4抗体的轻链可变区中的CDR3

VQYVQFP

【3.抗-PLD4小鼠5B7抗体】

获得的抗-PLD4小鼠5B7抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:78，及氨基酸序列是SEQ ID NO:79。小鼠5B7抗体的重链可 变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO: 14，SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16。

抗-PLD4小鼠5B7抗体的重链可变区的核酸序列(475bp)[大 写字母：小鼠5B7VH可变区，小写字母：小鼠IgG2b重链恒定区]

ATGGGATGGAGCTGGATCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGGA ACTGCAGGCGTCCACTCTGAGGTCCAGCTTCAGCAGTCAGG ACCTGAACTGGTGAAACCTGGGGCCTCAGTGAAGATATCCTG CAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTACAACTTGCACTG GGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGAT ATATTTATCCTTACAATGGTAATACTGGCTACAACCAGAAGT TCAAGAGGAAGGCCACATTGACTGTAGACAATTCCTCCGGCACAGTCTACATGGAGCTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTG CAGTCTATTACTGTGCAAGAGGAGGGATCTATGATGATTACT ACGACTATGCTATCGACTATTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCA CCGTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggcgaat

小鼠5B7抗体的重链可变区的氨基酸序列(158a.a.)[大写字 母：小鼠5B7VH可变区，小写字母：小鼠IgG2b重链恒定区]加下 划线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1,CDR2 和CDR3)。

MGWSWIFLFLLSGTAGVHSEVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFT

WVKQSHGKSLEWIG

KATLTVDNSSGTVYMELRSLTSEDSAV YYCAR

WGQGTSVTVSSakttppsvyplapkge

5B7抗体的重链可变区中的CDR1

DYNLH

5B7抗体的重链可变区中的CDR2

YIYPYNGNTGYNQKFKR

5B7抗体的重链可变区中的CDR3

GGIYDDYYDYAIDY

获得的抗-PLD4小鼠5B7抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:98，及氨基酸序列是SEQ ID NO:99。小鼠5B7抗体的轻链可 变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO: 17，SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19。

抗-PLD4小鼠5B7抗体的轻链可变区的核酸序列(467bp)[大 写字母：小鼠5B7VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]

ATGAGTGTGCCCACTCAGGTCCTGGGGTTGCTGCTGCTG TGGCTTACAGATGCCAGATGTGACATCCAGATGACTCAGTCT CCAGCCTCCCTATCTGTATCTGTGGGAGAAACTGTCGCCATC ACATGTCGAGCAAGTGAGAATATTTACAGTCATATAGCATGG TATCAGCAGAAAGAGGGAAAATCTCCTCAGCGCCTGGTCTAT GGTGCAACAAACTTAGCACATGGTGTGCCATCAAGGTTCAGT GGCAGTGGATCAGGCACACAGTATTCCCTCAAGATCAACAGCCTTCAGTCTGAAGATTTTGGGAGTTATTACTGTCAACATTTTT GGGGTACTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAA ATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcagttaacatctggaggtgcctcagtcgtgtgcttctt

小鼠5B7抗体的轻链可变区的氨基酸序列(155a.a.)[大写字 母：小鼠5B7VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]加下划 线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1,CDR2 和CDR3)。

MSVPTQVLGLLLLWLTDARCDIQMTQSPASLSVSVGETVAITC

WYQQKEGKSPQRLVY

GVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQSEDFGSYYC

WTFGGGTKLEIKradaaptvsifppsseqltsggasvvcf

5B7抗体的轻链可变区中的CDR1

RASENIYSHIA

5B7抗体的轻链可变区中的CDR2

GATNLAH

5B7抗体的轻链可变区中的CDR3

QHFWGTP

【4.抗-PLD4小鼠7B4抗体】

获得的抗-PLD4小鼠7B4抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:80，及氨基酸序列是SEQ ID NO:81。小鼠7B4抗体的重链可 变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO: 14，SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16。

抗-PLD4小鼠7B4抗体的重链可变区的核酸序列(470bp)[大 写字母：小鼠7B4VH可变区，小写字母：小鼠IgG2b重链恒定区]

ATGGGATGGAGCTGGATCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGGA ACTGCAGGCGTCCACTCTGAGGTCCAGCTTCAGCAGTCAGG ACCTGAACTGGTGAAACCTGGGGCCTCAGTGAAGATATCCTG CAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTACAACTTGCACTG GGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGAT ATATTTATCCTTACAATGGTAATACTGGCTACAACCAGAAGT TCAAGAGGAAGGCCACATTGACTGTAGACAATTCCTCCGGCACAGTCTACATGGAGCTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTG CAGTCTATTACTGTGCAAGAGGAGGGATCTATGATGATTACT ACGACTATGCTATCGACTATTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCA CCGTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaaggg

小鼠7B4抗体的重链可变区的氨基酸序列(156a.a.)[大写字 母：小鼠7B4VH可变区，小写字母：小鼠IgG2b重链恒定区]加下 划线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1,CDR2 和CDR3)。

MGWSWIFLFLLSGTAGVHSEVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFT

WVKQSHGKSLEWIG

KATLTVDNSSGTVYMELRSLTSEDSAV YYCAR

WGQGTSVTVSSakttppsvyplapk

7B4抗体的重链可变区中的CDR1

DYNLH

7B4抗体的重链可变区中的CDR2

YIYPYNGNTGYNQKFKR

7B4抗体的重链可变区中的CDR3

GGIYDDYYDYAIDY

获得的抗-PLD4小鼠7B4抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:100，及氨基酸序列是SEQ ID NO:101。小鼠7B4抗体的轻链 可变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:17，SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19。

抗-PLD4小鼠7B4抗体的轻链可变区的核酸序列(454bp)[大 写字母：小鼠7B4VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]

ATGAGTGTGCCCACTCAGGTCCTGGGGTTGCTGCTGCTG TGGCTTACAGATGCCAGATGTGACATCCAGATGACTCAGTCT CCAGCCTCCCTATCTGTATCTGTGGGAGAAACTGTCGCCATC ACATGTCGAGCAAGTGAGAATATTTACAGTCATATAGCATGG TATCAGCAGAAAGAGGGAAAATCTCCTCAGCGCCTGGTCTAT GGTGCAACAAACTTAGCACATGGTGTGCCATCAAGGTTCAGT GGCAGTGGATCAGGCACACAGTATTCCCTCAAGATCAACAGCCTTCAGTCTGAAGATTTTGGGAGTTATTACTGTCAACATTTTT GGGGTACTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAA ATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcagttaacatctggaggtgcctcag

小鼠7B4抗体的轻链可变区的氨基酸序列(151a.a.)[大写字 母：小鼠7B4VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]加下划 线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1,CDR2 和CDR3)。

MSVPTQVLGLLLLWLTDARCDIQMTQSPASLSVSVGETVAITC

WYQQKEGKSPQRLVY

GVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQSEDFGSYYC

WTFGGGTKLEIKradaaptvsifppsseqltsggas

7B4抗体的轻链可变区中的CDR1

RASENIYSHIA

7B4抗体的轻链可变区中的CDR2

GATNLAH

7B4抗体的轻链可变区中的CDR3

QHFWGTP

【5.抗-PLD4小鼠8C11抗体】

获得的抗-PLD4小鼠8C11抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:82，及氨基酸序列是SEQ ID NO:83。小鼠8C11抗体的重链 可变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22。

抗-PLD4小鼠8C11抗体的重链可变区的核酸序列(462bp)[大 写字母：小鼠8C11VH可变区，小写字母：小鼠IgG2b重链恒定区]

ATGGGATGGAGCTATATCATCCTCTTTTTGGTAGCAACA GCAACAGGGGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCAGTCGGG GGCTGAACTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGTTGTCCT GCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTATTTGTACT GGGTGAGGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGA CTGATTAATCCTACCAATAGTGATACTATCTTCAATGAGAAG TTCAAGAGCAAGGCCACACTGACTGTAGACAAATCCTCCAGC ACAGCATACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCT GCGGTCTATTACTGTACACGAGAGGGGGGATATGGTTACGG CCCGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTC TGCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggc

小鼠8C11抗体的重链可变区的氨基酸序列(154a.a.)[大写字 母：小鼠8C11VH可变区，小写字母：小鼠IgG2b重链恒定区]加 下划线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1, CDR2和CDR3)。

MGWSYIILFLVATATGVHSQVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFT

WVRQRPGQGLEWIG

KATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYY CTR

WGQGTLVTVSAakttppsvyplapkg

8C11抗体的重链可变区中的CDR1

SYYLY

8C11抗体的重链可变区中的CDR2

LINPTNSDTIFNEKFKS

8C11抗体的重链可变区中的CDR3

EGGYGYGPFAY

获得的抗-PLD4小鼠8C11抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:102，及氨基酸序列是SEQ ID NO:103。小鼠8C11抗体的轻 链可变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:23，SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:25。

抗-PLD4小鼠8C11抗体的轻链可变区的核酸序列(457bp)[大 写字母：小鼠8C11VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]

ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGG ATTCCTGCTTCCAGCAGTGATGTTGTGATGACCCAAACTCCA CTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCT TGCACATCTAGTCAGACCCTTGTACACAGTAATGGAAACACC TATTTACATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCAAAG CTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCA GACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATT TCTGCTCTCACAGTACACATGTTCCATTCACGTTCGGCTCGG GGACAAAGTTGGAAATAAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcagttaacatctggag

小鼠8C11抗体的轻链可变区的氨基酸序列(152a.a.)[大写字 母：小鼠8C11VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]加下划 线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1,CDR2 和CDR3)。

MKLPVRLLVLMFWIPASSSDVVMTQTPLSLPVSLGDQASISC

WYLQKPGQSPKLLIY

GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCS

FTFGSGTKLEIKradaaptvsifppsseqltsg

8C11抗体的轻链可变区中的CDR1

TSSQTLVHSNGNTYLH

8C11抗体的轻链可变区中的CDR2

KVSNRFS

8C11抗体的轻链可变区中的CDR3

HSTHVP

【6.抗-PLD4小鼠10C3抗体】

获得的抗-PLD4小鼠10C3抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:84，及氨基酸序列是SEQ ID NO:85。小鼠10C3抗体的重链 可变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:26，SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28。

抗-PLD4小鼠10C3抗体的重链可变区的核酸序列(450bp)[大 写字母：小鼠10C3VH可变区，小写字母：小鼠IgG2a重链恒定区]

ATGAACTTCGGGCTCAGCTTGATTTTCCTTGCCCTCATTT TAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGG GGAGACTTAGTGAGGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCAGTTTCAGTAGCTATGGCATGTCTTG GTTTCGCCAGACTCCAGACAAGAGGCTGGAGTGGGTCGCAA CCATTAGTAGTGGTGGTAGTTACATCTACTATCCAGAAAGTG TGAAGGGGCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAGGAAC ATCCTGTACCTGCAAATGAGCAGTCTGAAGTCTGAGGACACA GCCATGTATTATTGTGTAAGACTCTACGGTGGTAGGAGAGGC TATGGTTTGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTC TCCTCAgccaaaacaacagccccatcggtctatcca

小鼠10C3抗体的重链可变区的氨基酸序列(150a.a.)[大写字 母：小鼠10C3VH可变区，小写字母：小鼠IgG2a重链恒定区]加 下划线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1, CDR2和CDR3)。

MNFGLSLIFLALILKGVQCEVQLVESGGDLVRPGGSLKLSCAASGFSFS

WFRQTPDKRLEWVA

RFTISRDNARNILYLQMSSLKSEDTAMYYCV R

WGQGTSVTVSSakttapsvyp

10C3抗体的重链可变区中的CDR1

SYGMS

10C3抗体的重链可变区中的CDR2

TISSGGSYIYYPESVKG

10C3抗体的重链可变区中的CDR3

LYGGRRGYGLDY

获得的抗-PLD4小鼠10C3抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:104，及氨基酸序列是SEQ ID NO:105。小鼠10C3抗体的轻 链可变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:29，SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:31。

抗-PLD4小鼠10C3抗体的轻链可变区的核酸序列(423bp)[大 写字母：小鼠10C3VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]

ATGAGGTTCTCTGCTCAGCTTCTGGGGCTGCTTGTGCTC TGGATCCCTGGATCCACTGCGGAAATTGTGATGACGCAGGCT GCATTCTCCAATCCAGTCACTCTTGGAACATCAGCTTCCATC TCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTACATAGTGATGGCATC ACTTATTTGTATTGGTATCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCT CAGCTCCTGATTTATCAGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTC CCAGACAGGTTCAGTAGCAGTGGGTCAGGAACTGATTTCACACTGAGAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTA TTACTGTGCTCAAAATCTAGAACTTTACACGTTCGGAGGGGG GACCAAGCTGGAAATAAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatc

小鼠10C3抗体的轻链可变区的氨基酸序列(141a.a.)[大写字 母：小鼠10C3VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]加下划 线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1,CDR2 和CDR3)。

MRFSAQLLGLLVLWIPGSTAEIVMTQAAFSNPVTLGTSASISC

WYLQKPGQSPQLLIY

GVPDRFSSSGSGTDFTLRISRVEAEDVGVYYC

YTFGGGTKLEIKradaaptvsi

10C3抗体的轻链可变区中的CDR1

RSSKSLLHSDGITYLY

10C3抗体的轻链可变区中的CDR2

QMSNLAS

10C3抗体的轻链可变区中的CDR3

AQNLEL

【7.抗-PLD4小鼠11D10抗体】

获得的抗-PLD4小鼠11D10抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:86，及氨基酸序列是SEQ ID NO:87。小鼠11D10抗体的重链 可变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:26，SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28。

抗-PLD4小鼠11D10抗体的重链可变区的核酸序列(450bp)[大 写字母：小鼠11D10VH可变区，小写字母：小鼠IgG2b重链恒定区]

ATGAACTTCGGGCTCAGCTTGATTTTCCTTGCCCTCATTT TAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGG GGAGACTTAGTGAGGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTG TGCAGCCTCTGGATTCAGTTTCAGTAGCTATGGCATGTCTTG GTTTCGCCAGACTCCAGACAAGAGGCTGGAGTGGGTCGCAA CCATTAGTAGTGGTGGTAGTTACATCTACTATCCAGAAAGTG TGAAGGGGCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAGGAAC ATCCTGTACCTGCAAATGAGCAGTCTGAAGTCTGAGGACACA GCCATGTATTATTGTGTAAGACTCTACGGTGGTAGGAGAGGC TATGGTTTGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTC TCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatcca

小鼠11D10抗体的重链可变区的氨基酸序列(150a.a.)[大写 字母：小鼠11D10VH可变区，小写字母：小鼠IgG2b重链恒定区] 加下划线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1, CDR2和CDR3)。

MNFGLSLIFLALILKGVQCEVQLVESGGDLVRPGGSLKLSCAASGFSFS

WFRQTPDKRLEWVA

RFTISRDNARNILYLQMSSLKSEDTAMYYCV R

WGQGTSVTVSS akttppsvyp

11D10抗体的重链可变区中的CDR1

SYGMS

11D10抗体的重链可变区中的CDR2

TISSGGSYIYYPESVKG

11D10抗体的重链可变区中的CDR3

LYGGRRGYGLDY

获得的抗-PLD4小鼠11D10抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:106，及氨基酸序列是SEQ ID NO:107。小鼠11D10抗体的轻 链可变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:29，SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:31。

抗-PLD4小鼠11D10抗体的轻链可变区的核酸序列(423bp)[大 写字母：小鼠11D10VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]

ATGAGGTTCTCTGCTCAGCTTCTGGGGCTGCTTGTGCTC TGGATCCCTGGATCCACTGCGGAAATTGTGATGACGCAGGCT GCATTCTCCAATCCAGTCACTCTTGGAACATCAGCTTCCATC TCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTACATAGTGATGGCATC ACTTATTTGTATTGGTATCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCT CAGCTCCTGATTTATCAGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTC CCAGACAGGTTCAGTAGCAGTGGGTCAGGAACTGATTTCACACTGAGAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTA TTACTGTGCTCAAAATCTAGAACTTTACACGTTCGGAGGGGG GACCAAGCTGGAAATAAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatc

小鼠11D10抗体的轻链可变区的氨基酸序列(141a.a.)[大写 字母：小鼠11D10VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]加 下划线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1, CDR2和CDR3)。

MRFSAQLLGLLVLWIPGGSTAEIVMTQAAFSNPVTLGTSASISC

WYLQKPGQSPQLLIY

GVPDRFSSSGSGTDFTLRISRVEAEDVGVYYC

YTFGGGTKLEIKradaaptvsi

11D10抗体的轻链可变区中的CDR1

RSSKSLLHSDGITYLY

11D10抗体的轻链可变区中的CDR2

QMSNLAS

11D10抗体的轻链可变区中的CDR3

AQNLEL

【8.抗-PLD4小鼠13D4抗体】

获得的抗-PLD4小鼠13D4抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:88，及氨基酸序列是SEQ ID NO:89。小鼠13D4抗体的重链 可变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:32，SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34。

抗-PLD4小鼠13D4抗体的重链可变区的核酸序列(472bp)[大 写字母：小鼠13D4VH可变区，小写字母：小鼠IgG2b重链恒定区]

ATGAAAGTGTTGAGTCTGTTGTACCTGTTGACAGCCATT CCTGGTATCCTGTCTGATGTACAGCTTCAGGAGTCAGGACCT GGCCTCGTGAAACCTTCTCAATCTCTGTCTCTCACCTGCTCT GTCACTGGCTACTCCATCACCAGTCATTATTACTGGACCTGG ATCCGGCAGTTTCCAGGAAACAAACTGGAATGGATGGGCTA CATAAGCTACGACGGTAGCAATAACTACAACCCATCTCTCAA AAATCGAATCTCCATCACTCGTGACACATCTAAGAACCAGTTTTTCCTGAAGTTGAATTCTGTGACTACTGAGGACACAGCTAC ATATAACTGTGCAAGAGAGGGCCCGCTCTACTATGGTAACCC CTACTGGTATTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCA CCGTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggcg

小鼠13D4抗体的重链可变区的氨基酸序列(157a.a.)[大写字 母：小鼠13D4VH可变区，小写字母：小鼠IgG2b重链恒定区]加 下划线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1, CDR2和CDR3)。

MKVLSLLYLLTAIPGILSDVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSIT

WIRQFPGNKLEWMG

RISITRDTSKNQFFLKLNSVTTEDTATYNCAR

WGAGTTVTVSSakttppsvyplapkg

13D4抗体的重链可变区中的CDR1

SHYYWT

13D4抗体的重链可变区中的CDR2

YISYDGSNNYNPSLKN

13D4抗体的重链可变区中的CDR3

EGPLYYGNPYWYFDV

获得的抗-PLD4小鼠13D4抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:108，及氨基酸序列是SEQ ID NO:109。小鼠13D4抗体的轻 链可变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:36和SEQ ID NO:37。

抗-PLD4小鼠13D4抗体的轻链可变区的核酸序列(404bp)[大 写字母：小鼠13D4VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]

ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCT GTTTTCAAGGTACCAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTA CATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGGGACAGAGTCACCATCA GTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTGACAATTATTTAAACTGGT ATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACT ACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTG GCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACC TGGAGCAAGAAGATGTTGCCACTTACTTTTGCCAGCAGTTTA ATACGCTTCCTCGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAACTGGAA ATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgt

小鼠13D4抗体的轻链可变区的氨基酸序列(134a.a.)[大写字 母：小鼠13D4VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]加下划 线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1,CDR2 和CDR3)。

MMSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISC

WYQQKPDGTVKLLIY

GVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDVATYFC

RTFGGGTKLEIKradaapt

13D4抗体的轻链可变区中的CDR1

RASQDIDNYLN

13D4抗体的轻链可变区中的CDR2

YTSRLHS

13D4抗体的轻链可变区中的CDR3

QQFNTLP

【9.抗-PLD4小鼠13H11抗体】

获得的抗-PLD4小鼠13H11抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:90，及氨基酸序列是SEQ ID NO:91。小鼠13H11抗体的重 链可变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:38，SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40。

抗-PLD4小鼠13H11抗体的重链可变区的核酸序列(471bp)[大 写字母：小鼠13H11VH可变区，小写字母：小鼠IgG2b重链恒定区]

ATGAAAGTGTTGAGTCTGTTGTACCTGTTGACAGCCATT CCTGGTATCCTGTCTGATGTACAGCTTCAGGAGTCAGGACCT GGCCTCGTGAAACCTTCTCAGTCTCTGTCTCTCACCTGCTCT GTCACTGGCTACTCCATCTCCAGTCATTATTACTGGAGTTGG ATCCGGCAGTTTCCAGGAAACAGACTGGAATGGATGGGCTA CATAAGCTACGACGGTAGCAATAACTACAACCCATCTCTCAA AAATCGAATCTCCATCACTCGTGACACATCTAAGAACCAGTTTTTCCTGAAGTTGAATTCTGTGACTACTGAGGACACAGCTAC ATATAACTGTGCAAGAGAGGGCCCGCTCTACTATGGTAACCC CTACTGGTATTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCA CCGTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggc

小鼠13H11抗体的重链可变区的氨基酸序列(157a.a.)[大写 字母：小鼠13H11VH可变区，小写字母：小鼠IgG2b重链恒定区] 加下划线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1, CDR2和CDR3)。

MKVLSLLYLLTAIPGILSDVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSIS

WIRQFPGNRLEWMG

RISITRDTSKNQFFLKLNSVTTEDTATYNCAR

WGAGTTVTVSSakttppsvyplapkg

13H11抗体的重链可变区中的CDR1

SHYYWS

13H11抗体的重链可变区中的CDR2

YISYDGSNNYNPSLKN

13H11抗体的重链可变区中的CDR3

EGPLYYGNPYWYFDV

获得的抗-PLD4小鼠13H11抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:110，及氨基酸序列是SEQ ID NO:111。小鼠13H11抗体的 轻链可变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:41，SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43。

抗-PLD4小鼠13H11抗体的轻链可变区的核酸序列(414bp)[大 写字母：小鼠13H11VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]

ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCT GTTTTCAAGGTACCAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTA CATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGGGGCAGCGTCACCATCA GTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTGACAATTATTTAAACTGGT ATCAGCAAAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACT ACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTG GCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACC TGGAACAAGAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGTTTA ATACGCTTCCTCGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAA ATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttc

小鼠13H11抗体的轻链可变区的氨基酸序列(138a.a.)[大写 字母：小鼠13H11VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]加 下划线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1, CDR2和CDR3)。

MMSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIQMTQTTSSLSASLGGSVTISC

WYQQKPDGTVKLLIY

GVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFC

RTFGGGTKLEIKradaaptvsif

13H11抗体的轻链可变区中的CDR1

RASQDIDNYLN

13H11抗体的轻链可变区中的CDR2

YTSRLHS

13H11抗体的轻链可变区中的CDR3

QQFNTLP

【10.抗-PLD4小鼠14C1抗体】

获得的抗-PLD4小鼠14C1抗体的重链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:92，及氨基酸序列是SEQ ID NO:93。小鼠14C1抗体的重链 可变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:38，SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40。

抗-PLD4小鼠14C1抗体的重链可变区的核酸序列(470bp)[大 写字母：小鼠14C1VH可变区，小写字母：小鼠IgG1重链恒定区]

ATGAAAGTGTTGAGTCTGTTGTACCTGTTGACAGCCATT CCTGGTATCCTGTCTGATGTACAGCTTCAGGAGTCAGGACCT GGCCTCGTGAAACCTTCTCAGTCTCTGTCTCTCACCTGCTCT GTCACTGGCTACTCCATCTCCAGTCATTATTACTGGAGTTGG ATCCGGCAGTTTCCAGGAAACAGACTGGAATGGATGGGCTA CATAAGCTACGACGGTAGCAATAACTACAACCCATCTCTCAA AAATCGAATCTCCATCACTCGTGACACATCTAAGAACCAGTTTTTCCTGAAGTTGAATTCTGTGACTACTGAGGACACAGCTAC ATATAACTGTGCAAGAGAGGGCCCGCTCTACTATGGTAACCC CTACTGGTATTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCA CCGTCTCCTCAgccaaaacgacacccccatctgtctatccactggcccctaaggg

小鼠14C1抗体的重链可变区的氨基酸序列(156a.a.)[大写字 母：小鼠14C1VH可变区，小写字母：小鼠IgG1重链恒定区]加下 划线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1,CDR2 和CDR3)。

MKVLSLLYLLTAIPGILSDVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSIS

WIRQFPGNRLEWMG

RISITRDTSKNQFFLKLNSVTTEDTATYNCAR

WGAGTTVTVSS akttppsvyplapk

14C1抗体的重链可变区中的CDR1

SHYYWS

14C1抗体的重链可变区中的CDR2

YISYDGSNNYNPSLKN

14C1抗体的重链可变区中的CDR3

EGPLYYGNPYWYFDV

获得的抗-PLD4小鼠14C1抗体的轻链可变区的核酸序列是SEQ ID NO:112，及氨基酸序列是SEQ ID NO:113。小鼠14C1抗体的轻 链可变区之内的CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别是SEQ ID NO:41，SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43。

抗-PLD4小鼠14C1抗体的轻链可变区的核酸序列(465bp)[大 写字母：小鼠14C1VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]

ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCT GTTTTCAAGGTACCAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTA CATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGGGGCAGCGTCACCATCA GTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTGACAATTATTTAAACTGGT ATCAGCAAAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACT ACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTG GCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACC TGGAACAAGAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGTTTA ATACGCTTCCTCGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAA ATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcagttaacatctggaggtgcctcagtcgtgtgcttc

小鼠14C1抗体的轻链可变区的氨基酸序列(155a.a.)[大写字 母：小鼠14C1VL可变区，小写字母：小鼠Igκ轻链恒定区]加下划 线的序列显示其信号序列及双下划线显示其CDR区(CDR1,CDR2 和CDR3)。

MMSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIQMTQTTSSLSASLGGSVTISC

WYQQKPDGTVKLLIY

GVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFC

R TFGGGTKLEIKradaaptvsifppsseqltsggasvvcf

14C1抗体的轻链可变区中的CDR1

RASQDIDNYLN

14C1抗体的轻链可变区中的CDR2

YTSRLHS

14C1抗体的轻链可变区中的CDR3

QQFNTLP

产生的嵌合11G9.6抗体的重链和轻链的碱基序列和氨基酸序列 如以下给出的序列号。

重链

SEQ ID NO:120(碱基序列)

SEQ ID NO:121(氨基酸序列)

轻链

SEQ ID NO:122(碱基序列)

SEQ ID NO:123(氨基酸序列)

【11.抗-PLD4嵌合11G9.6抗体的重链的核酸序列(1401bp) [大写字母：嵌合11G9VH可变区，小写字母：人IgG1重链恒定区] (SEQ ID NO:120)】

ATGAAAGTGTTGAGTCTGTTGTACCTGTTGACAGCCATT CCTGGTATCCTGTCTcagGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTG AACTGGTGAAGCCTGGGACTTCAGTGAAAATGTCCTGCAAG GCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTG AAGCAGAGGCCGGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAGATAT TTATCCTGGTAGTGATAGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAA GAGCAAGGCCACACTGACTGTAGACACATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGG TCTATTACTGTGCAAGAGGAGGGTGGTTGGATGCTATGGACT ACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAgctagcaccaa gggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctggg ctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccag cggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgacc gtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacacc aaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagc acctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatc tcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttc aactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtaca acagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagt acaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaa gggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaacc aggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagca atgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcc tctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtga tgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatga

【12.抗-PLD4嵌合11G9.6抗体的重链的氨基酸序列(466a.a.) [大写字母：嵌合11G9VH可变区，小写字母：人IgG1重链恒定区] (SEQ ID NO:121)】

MKVLSLLYLLTAIPGILSQVQLQQPGAELVKPGTSVKMSCK ASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGDIYPGSDSTNYNEKFKS KATLTVDTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGWLDAMDYW GQGTSVTVSSastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvh tfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpape llggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeq ynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdelt knqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

【13.抗-PLD4嵌合11G9.6抗体的轻链的核酸序列(705bp)[大 写字母：嵌合11G9VL可变区，小写字母：人Igκ轻链恒定区](SEQ ID NO:122)】

ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCT GTTTTCAAGGTACCAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTA CATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGACAGAGTCACCATCA GTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGCAATTATTTAAACTGGT ATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACT ACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTG GCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACC TGGAGCAAGAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGGTA ATACGCTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAA ATCAAAcgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaag gtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggaca gcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtcta cgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagt gctag

【14.抗-PLD4嵌合11G9.6抗体的轻链的氨基酸序列(234a.a.) [大写字母：嵌合11G9VL可变区，小写字母：人Igκ轻链恒定区] (SEQ ID NO:123)】

MMSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIQMTQTTSSLSASLGDRVTI SCRASQDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGS GSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFGGGTKLEIKrtva apsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstysls stltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

<PLD4-相关的分子的cDNA和蛋白序列>

>人PLD4cDNA(1521bp)(SEQ ID NO:44)

ATGCTGAAGCCTCTTTGGAAAGCAGCAGTGGCCCCCACA TGGCCATGCTCCATGCCGCCCCGCCGCCCGTGGGACAGAGA GGCTGGCACGTTGCAGGTCCTGGGAGCGCTGGCTGTGCTGT GGCTGGGCTCCGTGGCTCTTATCTGCCTCCTGTGGCAAGTGC CCCGTCCTCCCACCTGGGGCCAGGTGCAGCCCAAGGACGTG CCCAGGTCCTGGGAGCATGGCTCCAGCCCAGCTTGGGAGCC CCTGGAAGCAGAGGCCAGGCAGCAGAGGGACTCCTGCCAGC TTGTCCTTGTGGAAAGCATCCCCCAGGACCTGCCATCTGCAG CCGGCAGCCCCTCTGCCCAGCCTCTGGGCCAGGCCTGGCTG CAGCTGCTGGACACTGCCCAGGAGAGCGTCCACGTGGCTTC ATACTACTGGTCCCTCACAGGGCCTGACATCGGGGTCAACGA CTCGTCTTCCCAGCTGGGAGAGGCTCTTCTGCAGAAGCTGCA GCAGCTGCTGGGCAGGAACATTTCCCTGGCTGTGGCCACCA GCAGCCCGACACTGGCCAGGACATCCACCGACCTGCAGGTT CTGGCTGCCCGAGGTGCCCATGTACGACAGGTGCCCATGGG GCGGCTCACCAGGGGTGTTTTGCACTCCAAATTCTGGGTTGT GGATGGACGGCACATATACATGGGCAGTGCCAACATGGACT GGCGGTCTCTGACGCAGGTGAAGGAGCTTGGCGCTGTCATC TATAACTGCAGCCACCTGGCCCAAGACCTGGAGAAGACCTTC CAGACCTACTGGGTACTGGGGGTGCCCAAGGCTGTCCTCCC CAAAACCTGGCCTCAGAACTTCTCATCTCACTTCAACCGTTT CCAGCCCTTCCACGGCCTCTTTGATGGGGTGCCCACCACTGC CTACTTCTCAGCGTCGCCACCAGCACTCTGTCCCCAGGGCCG CACCCGGGACCTGGAGGCGCTGCTGGCGGTGATGGGGAGCG CCCAGGAGTTCATCTATGCCTCCGTGATGGAGTATTTCCCCACCACGCGCTTCAGCCACCCCCCGAGGTACTGGCCGGTGCTG GACAACGCGCTGCGGGCGGCAGCCTTCGGCAAGGGCGTGCG CGTGCGCCTGCTGGTCGGCTGCGGACTCAACACGGACCCCA CCATGTTCCCCTACCTGCGGTCCCTGCAGGCGCTCAGCAACC CCGCGGCCAACGTCTCTGTGGACGTGAAAGTCTTCATCGTGC CGGTGGGGAACCATTCCAACATCCCATTCAGCAGGGTGAAC CACAGCAAGTTCATGGTCACGGAGAAGGCAGCCTACATAGG CACCTCCAACTGGTCGGAGGATTACTTCAGCAGCACGGCGG GGGTGGGCTTGGTGGTCACCCAGAGCCCTGGCGCGCAGCCCGCGGGGGCCACGGTGCAGGAGCAGCTGCGGCAGCTCTTTGA GCGGGACTGGAGTTCGCGCTACGCCGTCGGCCTGGACGGAC AGGCTCCGGGCCAGGACTGCGTTTGGCAGGGCTGA

>人PLD4蛋白(506氨基酸)(SEQ ID NO:1)

MLKPLWKAAVAPTWPCSMPPRRPWDREAGTLQVLGALAV LWLGSVALICLLWQVPRPPTWGQVQPKDVPRSWEHGSSPAWE PLEAEARQQRDSCQLVLVESIPQDLPSAAGSPSAQPLGQAWLQL LDTAQESVHVASYYWSLTGPDIGVNDSSSQLGEALLQKLQQLL GRNISLAVATSSPTLARTSTDLQVLAARGAHVRQVPMGRLTRG VLHSKFWVVDGRHIYMGSANMDWRSLTQVKELGAVIYNCSHL AQDLEKTFQTYWVLGVPKAVLPKTWPQNFSSHFNRFQPFHGLF DGVPTTAYFSASPPALCPQGRTRDLEALLAVMGSAQEFIYASVM EYFPTTRFSHPPRYWPVLDNALRAAAFGKGVRVRLLVGCGLNT DPTMFPYLRSLQALSNPAANVSVDVKVFIVPVGNHSNIPFSRVNH SKFMVTEKAAYIGTSNWSEDYFSSTAGVGLVVTQSPGAQPAGA TVQEQLRQLFERDWSSRYAVGLDGQAPGQDCVWQG

>短尾猴PLD4cDNA(1521bp)(SEQ ID NO:63)

ATGCTGAAGCCTCTTCGGAGAGCgGCAGTGACCCCCATG TGGCCGTGCTCCATGCTGCCCCGCCGCCTGTGGGACAGAGA GGCTGGCACGTTGCAGGTCCTGGGAGTGCTGGCTATGCTGT GGCTGGGCTCCATGGCTCTTACCTACCTCCTGTGGCAAGTGC GCCGTCCTCCCACCTGGGGCCAGGTGCAGCCCAAGGACGTG CCCAGGTCCTGGGGGCATGGTTCCAGCCCAGCTCTGGAGCC CCTGGAAGCGGAGGTCAGGAAGCAGAGGGACTCCTGCCAGC TTGTCCTTGTGGAAAGCATCCCCCAGGACCTGCCATTTGCAG CCGGCAGCCTCTCCGCCCAGCCTCTGGGCCAGGCCTGGCTG CAGCTGCTGGACACTGCCCAGGAGAGCGTCCACGTGGCTTC ATACTACTGGTCCCTCACAGGGCCCGACATTGGGGTCAACGA CTCATCTTCCCAGCTGGGAGAGGCCCTTCTGCAGAAGCTGCA GCAGCTGCTGGGCAGGAACATTTCCTTGGCTGTGGCCACCA GCAGTCCAACACTGGCCAGGAAGTCCACCGACCTGCAGGTC CTGGCTGCCCGAGGTGCCCAGGTACGACGGGTGCCCATGGG GCGGCTCACCAGGGGCGTTTTGCACTCCAAATTCTGGGTTGT GGATGGACgGCACATATACATGGGCAGTGCcAACATGGACTG GCGGTCCCTGACGCAGGTGAAGGAGCTTGGCGCTGTCATCT ATAACTGCAGCCACCTGGCCCAAGACCTGGAGAAGACCTTCC AGACCTACTGGGTGCTGGGGGTGCCCAAGGCTGTCCTCCCC AAAACCTGGCCTCAGAACTTCTCATCTCACATCAACCGTTTC CAGCCCTTCCAGGGCCTCTTTGATGGGGTGCCCACCACTGCC TACTTCTCAGCATCGCCACCcGCACTCTGTCCCCAGGGCCGC ACCCCTGACCTGGAGGCGCTGTTGGCGGTGATGGGGAGCGC CCAGGAGTTCATCTATGCCTCCGTGATGGAGTATTTCCCTAC CACgCGCTTCAGCCACCCCCGCAGGTACTGGCCGGTGCTGGA CAACGCGCTGCGGGCGGCAGCCTTCAGCAAGGGTGTGCGCG TGCGCCTGCTGGTCAGCTGCGGACTCAACACGGACCCCACC ATGTTCCCCTATCTGCGGTCCCTGCAGGCGCTCAGCAACCCC GCGGCCAACGTCTCTGTGGACGTGAAAGTCTTCATCGTGCCG GTGGGGAATCATTCCAACATCCCGTTCAGCAGGGTGAACCAC AGCAAGTTCATGGTCACGGAGAAGGCAGCCTACATAGGCAC CTCCAACTGGTCGGAGGATTACTTCAGCAGCACGACGGGGG TGGGCCTGGTGGTCACCCAGAGCCCCGGCGCGCAGCCCGCG GGGGCCACGGTACAGGAGCAGCTGCGGCAGCTCTTTGAGCG GGACTGGAGTTCGCGCTACGCCGTCGGCCTGGACGGACAGG CTCCGGGCCAGGACTGCGTTTGGCAGGGCTGA

>短尾猴PLD4蛋白(506氨基酸)(SEQ ID NO:129)

MLKPLRRAAVTPMWPCSMLPRRLWDREAGTLQVLGVLA MLWLGSMALTYLLWQVRRPPTWGQVQPKDVPRSWGHGSSPA LEPLEAEVRKQRDSCQLVLVESIPQDLPFAAGSLSAQPLGQAWL QLLDTAQESVHVASYYWSLTGPDIGVNDSSSQLGEALLQKLQQ LLGRNISLAVATSSPTLARKSTDLQVLAARGAQVRRVPMGRLT RGVLHSKFWVVDGRHIYMGSANMDWRSLTQVKELGAVIYNCS HLAQDLEKTFQTYWVLGVPKAVLPKTWPQNFSSHINRFQPFQG LFDGVPTTAYFSASPPALCPQGRTPDLEALLAVMGSAQEFIYAS VMEYFPTTRFSHPRRYWPVLDNALRAAAFSKGVRVRLLVSCGL NTDPTMFPYLRSLQALSNPAANVSVDVKVFIVPVGNHSNIPFSRV NHSKFMVTEKAAYIGTSNWSEDYFSSTTGVGLVVTQSPGAQPA GATVQEQLRQLFERDWSSRYAVGLDGQAPGQDCVWQG

>恒河猴PLD4cDNA(1521bp)(SEQ ID NO:124)

ATGCTGAAGCCTCTTCGGAGAGCGGCAGTGACCCCCATG TGGCCGTGCTCCATGCTGCCCCGCCGCCTGTGGGACAGAGA GGCTGGCACGTTGCAGGTCCTGGGAGTGCTGGCTATGCTGT GGCTGGGCTCCATGGCTCTTACCTACCTCCTGTGGCAAGTGC GCTGTCCTCCCACCTGGGGCCAGGTGCAGCCCAGGGACGTG CCCAGGTCCTGGGGGCATGGTTCCAGCCTAGCTCTGGAGCC CCTGGAAGCGGAGGTCAGGAAGCAGAGGGACTCCTGCCAGC TTGTCCTTGTGGAAAGCATCCCCCAGGACCTGCCATTTGCAG CCGGCAGCCTCTCCGCCCAGCCTCTGGGCCAGGCCTGGCTG CAGCTGCTGGACACTGCCCAGGAGAGCGTCCACGTGGCTTC ATACTACTGGTCCCTCACAGGGCCCGACATTGGGGTCAACGA CTCATCTTCCCAGCTGGGAGAGGCCCTTCTGCAGAAGCTGCA GCAGCTGCTGGGCAGGAACATTTCCTTGGCTGTGGCCACCA GCAGTCCAACACTGGCCAGGAAGTCCACCGACCTGCAGGTC CTGGCTGCCCGAGGTGCCCAGGTACGACGGGTGCCCATGGG GCGGCTCACCAGGGGCGTTTTGCACTCCAAATTCTGGGTTGT GGATGGACGGCACATATACATGGGCAGTGCCAACATGGACT GGCGGTCCCTGACGCAGGTGAAGGAGCTTGGCGCTGTCATC TATAACTGCAGCCACCTGGCCCAAGACCTGGAGAAGACCTTC CAGACCTACTGGGTGCTGGGGGTGCCCAAGGCTGTCCTCCC CAAAACCTGGCCTCAGAACTTCTCATCTCACATCAACCGTTT CCAGCCCTTCCAGGGCCTCTTTGATGGGGTGCCCACCACTGC CTACTTCTCAGCATCGCCACCCGCACTCTGTCCCCAGGGCCG CACCCCTGACCTGGAGGCGCTGTTGGCGGTGATGGGGAGCG CCCAGGAGTTCATCTATGCCTCCGTGATGGAGTATTTCCCTACCACGCGCTTCAGCCACCCCCGCAGGTACTGGCCGGTGCTG GACAACGCGCTGCGGGCGGCAGCCTTCAGCAAGGGTGTGCG CGTGCGCCTGCTGGTCAGCTGCGGACTCAACACGGACCCCA CCATGTTCCCCTATCTGCGGTCCCTGCAGGCGCTCAGCAACC CCGCGGCCAACGTCTCTGTGGACGTGAAAGTCTTCATCGTGC CGGTGGGGAATCATTCCAACATCCCGTTCAGCAGGGTGAAC CACAGCAAGTTCATGGTCACGGAGAAGGCAGCCTACATAGG CACCTCCAACTGGTCGGAGGATTACTTCAGCAGCACGACGG GGGTGGGCCTGGTGGTCACCCAGAGCCCCGGCGCGCAGCCCGCGGGGGCCACGGTACAGGAGCAGCTGCGGCAGCTCTTTGA GCGGGACTGGAGTTCGCGCTACGCCGTCGGCCTGGACGGAC AGGCTCCGGGCCAGGACTGCGTTTGGCAGGGCTGA

>恒河猴PLD4蛋白(506氨基酸)(SEQ ID NO:130)

MLKPLRRAAVTPMWPCSMLPRRLWDREAGTLQVLGVLA MLWLGSMALTYLLWQVRCPPTWGQVQPRDVPRSWGHGSSLA LEPLEAEVRKQRDSCQLVLVESIPQDLPFAAGSLSAQPLGQAWL QLLDTAQESVHVASYYWSLTGPDIGVNDSSSQLGEALLQKLQQ LLGRNISLAVATSSPTLARKSTDLQVLAARGAQVRRVPMGRLT RGVLHSKFWVVDGRHIYMGSANMDWRSLTQVKELGAVIYNCS HLAQDLEKTFQTYWVLGVPKAVLPKTWPQNFSSHINRFQPFQG LFDGVPTTAYFSASPPALCPQGRTPDLEALLAVMGSAQEFIYAS VMEYFPTTRFSHPRRYWPVLDNALRAAAFSKGVRVRLLVSCGL NTDPTMFPYLRSLQALSNPAANVSVDVKVFIVPVGNHSNIPFSRV NHSKFMVTEKAAYIGTSNWSEDYFSSTTGVGLVVTQSPGAQPA GATVQEQLRQLFERDWSSRYAVGLDGQAPGQDCVWQG

>小鼠PLD4cDNA(1512bp)(SEQ ID NO:131)

ATGGACAAGAAGAAAGAGCACCCAGAGATGCGGATACC ACTCCAGACAGCAGTGGAGGTCTCTGATTGGCCCTGCTCCAC ATCTCATGATCCACATAGCGGACTTGGCATGGTACTGGGGAT GCTAGCTGTACTGGGACTCAGCTCTGTGACTCTCATCTTGTT CCTGTGGCAAGGGGCCACTTCTTTCACCAGTCATCGGATGTT CCCTGAGGAAGTGCCCTCCTGGTCCTGGGAGACCCTGAAAG GAGACGCTGAGCAGCAGAATAACTCCTGTCAGCTCATCCTTGTGGAAAGCATCCCCGAGGACTTGCCATTTGCAGCTGGCAGC CCCACTGCCCAGCCCCTGGCCCAGGCTTGGCTGCAGCTTCTT GACACTGCTCGGGAGAGCGTCCACATTGCCTCGTACTACTGG TCCCTCACTGGACTGGACATTGGAGTCAATGACTCGTCTTCT CGGCAGGGAGAGGCCCTTCTACAGAAGTTCCAACAGCTTCTT CTCAGGAACATCTCTGTGGTGGTGGCCACCCACAGCCCAACA TTGGCCAAGACATCCACTGACCTCCAGGTCTTGGCTGCCCAT GGTGCCCAGATACGACAAGTGCCCATGAAACAGCTTACTGG GGGTGTTCTACACTCCAAATTCTGGGTTGTGGATGGGCGACA CGTCTACGTGGGCAGCGCCAACATGGACTGGCGGTCCCTGA CTCAGGTGAAGGAACTTGGTGCAATCATCTACAACTGCAGCA ACCTGGCTCAAGACCTTGAGAAAACATTCCAGACCTACTGGG TGCTAGGGACTCCCCAAGCTGTTCTCCCTAAAACCTGGCCTC GGAACTTCTCATCCCACATCAACCGCTTCCATCCCTTGCGGG GTCCCTTTGATGGGGTTCCCACCACGGCCTATTTCTCGGCCT CCCCTCCCTCCCTCTGCCCGCATGGCCGGACCCGGGATCTGGACGCAGTGTTGGGAGTGATGGAGGGTGCTCGCCAGTTCAT CTATGTCTCGGTGATGGAGTATTTCCCTACCACGCGCTTCAC CCACCATGCCAGGTACTGGCCCGTGCTGGACAATGCGCTAC GGGCAGCGGCCCTCAATAAGGGTGTGCATGTGCGCTTACTG GTCAGCTGCTGGTTCAACACAGACCCCACCATGTTCGCTTAT CTGAGGTCCCTGCAGGCTTTCAGTAACCCCTCGGCTGGCATC TCAGTGGATGTGAAAGTCTTCATCGTGCCTGTGGGAAATCAT TCCAACATCCCGTTCAGCCGCGTGAACCACAGCAAGTTCATG GTCACAGACAAGACAGCCTATGTAGGCACCTCTAACTGGTCA GAAGACTACTTCAGCCACACCGCTGGTGTGGGCCTGATTGTC AGCCAGAAGACCCCCAGAGCCCAGCCAGGCGCAACCACCGT GCAGGAGCAGCTGAGGCAACTCTTTGAACGAGACTGGAGTT CCCACTATGCTATGGACCTAGACAGACAAGTCCCGAGCCAG GACTGTGTCTGGTAG

>小鼠PLD4蛋白(503氨基酸)(SEQ ID NO:132)

MDKKKEHPEMRIPLQTAVEVSDWPCSTSHDPHSGLGMVL GMLAVLGLSSVTLILFLWQGATSFTSHRMFPEEVPSWSWETLK GDAEQQNNSCQLILVESIPEDLPFAAGSPTAQPLAQAWLQLLDT ARESVHIASYYWSLTGLDIGVNDSSSRQGEALLQKFQQLLLRNIS VVVATHSPTLAKTSTDLQVLAAHGAQIRQVPMKQLTGGVLHSK FWVVDGRHVYVGSANMDWRSLTQVKELGAIIYNCSNLAQDLE KTFQTYWVLGTPQAVLPKTWPRNFSSHINRFHPLRGPFDGVPT TAYFSASPPSLCPHGRTRDLDAVLGVMEGARQFIYVSVMEYFPT TRFTHHARYWPVLDNALRAAALNKGVHVRLLVSCWFNTDPTM FAYLRSLQAFSNPSAGISVDVKVFIVPVGNHSNIPFSRVNHSKFM VTDKTAYVGTSNWSEDYFSHTAGVGLIVSQKTPRAQPGATTVQ EQLRQLFERDWSSHYAMDLDRQVPSQDCVW

>人PLD3cDNA序列(SEQ ID NO:55)

ATGAAGCCTAAACTGATGTACCAGGAGCTGAAGGTGCCT GCAGAGGAGCCCGCCAATGAGCTGCCCATGAATGAGATTGA GGCGTGGAAGGCTGCGGAAAAGAAAGCCCGCTGGGTCCTGC TGGTCCTCATTCTGGCGGTTGTGGGCTTCGGAGCCCTGATGA CTCAGCTGTTTCTATGGGAATACGGCGACTTGCATCTCTTTG GGCCCAACCAGCGCCCAGCCCCCTGCTATGACCCTTGCGAA GCAGTGCTGGTGGAAAGCATTCCTGAGGGCCTGGACTTCCC CAATGCCTCCACGGGGAACCCTTCCACCAGCCAGGCCTGGC TGGGCCTGCTCGCCGGTGCGCACAGCAGCCTGGACATCGCC TCCTTCTACTGGACCCTCACCAACAATGACACCCACACGCAG GAGCCCTCTGCCCAGCAGGGTGAGGAGGTCCTCCGGCAGCT GCAGACCCTGGCACCAAAGGGCGTGAACGTCCGCATCGCTG TGAGCAAGCCCAGCGGGCCCCAGCCACAGGCGGACCTGCAG GCTCTGCTGCAGAGCGGTGCCCAGGTCCGCATGGTGGACAT GCAGAAGCTGACCCATGGCGTCCTGCATACCAAGTTCTGGGT GGTGGACCAGACCCACTTCTACCTGGGCAGTGCCAACATGG ACTGGCGTTCACTGACCCAGGTCAAGGAGCTGGGCGTGGTC ATGTACAACTGCAGCTGCCTGGCTCGAGACCTGACCAAGATC TTTGAGGCCTACTGGTTCCTGGGCCAGGCAGGCAGCTCCATC CCATCAACTTGGCCCCGGTTCTATGACACCCGCTACAACCAA GAGACACCAATGGAGATCTGCCTCAATGGAACCCCTGCTCTG GCCTACCTGGCGAGTGCGCCCCCACCCCTGTGTCCAAGTGG CCGCACTCCAGACCTGAAGGCTCTACTCAACGTGGTGGACAA TGCCCGGAGTTTCATCTACGTCGCTGTCATGAACTACCTGCC CACTCTGGAGTTCTCCCACCCTCACAGGTTCTGGCCTGCCAT TGACGATGGGCTGCGGCGGGCCACCTACGAGCGTGGCGTCA AGGTGCGCCTGCTCATCAGCTGCTGGGGACACTCGGAGCCA TCCATGCGGGCCTTCCTGCTCTCTCTGGCTGCCCTGCGTGAC AACCATACCCACTCTGACATCCAGGTGAAACTCTTTGTGGTC CCCGCGGATGAGGCCCAGGCTCGAATCCCATATGCCCGTGT CAACCACAACAAGTACATGGTGACTGAACGCGCCACCTACAT CGGAACCTCCAACTGGTCTGGCAACTACTTCACGGAGACGG CGGGCACCTCGCTGCTGGTGACGCAGAATGGGAGGGGCGGC CTGCGGAGCCAGCTGGAGGCCATTTTCCTGAGGGACTGGGA CTCCCCTTACAGCCATGACCTTGACACCTCAGCTGACAGCGT GGGCAACGCCTGCCGCCTGCTCTGA

>人PLD3蛋白(490氨基酸)(SEQ ID NO:127)

MKPKLMYQELKVPAEEPANELPMNEIEAWKAAEKKARWV LLVLILAVVGFGALMTQLFLWEYGDLHLFGPNQRPAPCYDPCE AVLVESIPEGLDFPNASTGNPSTSQAWLGLLAGAHSSLDIASFYW TLTNNDTHTQEPSAQQGEEVLRQLQTLAPKGVNVRIAVSKPSGP QPQADLQALLQSGAQVRMVDMQKLTHGVLHTKFWVVDQTHF YLGSANMDWRSLTQVKELGVVMYNCSCLARDLTKIFEAYWFL GQAGSSIPSTWPRFYDTRYNQETPMEICLNGTPALAYLASAPPP LCPSGRTPDLKALLNVVDNARSFIYVAVMNYLPTLEFSHPHRFW PAIDDGLRRATYERGVKVRLLISCWGHSEPSMRAFLLSLAALRD NHTHSDIQVKLFVVPADEAQARIPYARVNHNKYMVTERATYIG TSNWSGNYFTETAGTSLLVTQNGRGGLRSQLEAIFLRDWDSPYS HDLDTSADSVGNACRLL

>人PLD5cDNA(1338bp)(SEQ ID NO:56)

ATGGGAGAGGATGAGGATGGACTCTCAGAAAAAAATTG CCAAAATAAATGTCGAATTGCCCTGGTGGAAAATATTCCTGA AGGCCTTAACTATTCAGAAAATGCACCATTTCACTTATCACTT TTCCAAGGCTGGATGAATTTACTCAACATGGCCAAAAAGTCT GTTGACATAGTGTCTTCCCATTGGGATCTCAACCACACTCAT CCATCAGCATGTCAGGGTCAACGTCTTTTTGAAAAGTTGCTC CAGCTGACTTCGCAAAATATTGAAATCAAGCTAGTGAGTGATGTAACAGCTGATTCAAAGGTATTAGAAGCCTTGAAATTAAAG GGAGCCGAGGTGACGTACATGAACATGACCGCTTACAACAA GGGCCGGCTGCAGTCCTCCTTCTGGATCGTGGACAAACAGC ACGTGTATATCGGCAGTGCCGGTTTGGACTGGCAATCCCTGG GACAGATGAAAGAACTCGGTGTCATCTTCTACAACTGCAGCT GCCTGGTCCTAGATTTACAAAGGATATTTGCTCTATATAGTT CATTAAAATTCAAAAGCAGAGTGCCTCAAACCTGGTCCAAAA GACTCTATGGAGTCTATGACAATGAAAAGAAATTGCAACTTC AGTTGAATGAAACCAAATCTCAAGCATTTGTATCGAATTCTC CAAAACTCTTTTGCCCTAAAAACAGAAGTTTTGACATAGATG CCATCTACAGTGTGATAGATGATGCCAAGCAGTATGTGTACA TCGCTGTCATGGACTACCTGCCTATCTCCAGCACAAGCACCA AAAGGACTTACTGGCCAGACTTGGATGCAAAAATAAGAGAA GCATTAGTTTTACGAAGCGTTAGAGTTCGACTCCTTTTAAGC TTCTGGAAGGAAACTGATCCCCTTACGTTTAACTTTATTTCAT CTCTTAAAGCGATTTGCACTGAAATAGCCAACTGCAGTTTGAAAGTTAAATTTTTTGATCTGGAAAGAGAGAATGCTTGTGCTA CAAAAGAACAAAAGAATCACACCTTTCCTAGGTTAAATCGCA ACAAGTACATGGTGACAGATGGAGCAGCTTATATTGGAAATT TTGATTGGGTAGGGAATGATTTCACTCAGAATGCTGGCACGG GCCTTGTTATCAACCAGGCAGATGTGAGGAACAACAGAAGC ATCATTAAGCAACTTAAAGATGTGTTTGAAAGGGACTGGTAT TCACCGTATGCCAAAACCTTACAGCCAACCAAACAGCCGAAC TGCTCAAGCCTGTTCAAACTCAAACCCCTCTCCAACAAAACT GCCACAGACGACACAGGCGGAAAGGATCCCCGGAACGTATG A

>人PLD5蛋白(445氨基酸)(SEQ ID NO:128)

MGEDEDGLSEKNCQNKCRIALVENIPEGLNYSENAPFHLSL FQGWMNLLNMAKKSVDIVSSHWDLNHTHPSACQGQRLFEKLL QLTSQNIEIKLVSDVTADSKVLEALKLKGAEVTYMNMTAYNKG RLQSSFWIVDKQHVYIGSAGLDWQSLGQMKELGVIFYNCSCLV LDLQRIFALYSSLKFKSRVPQTWSKRLYGVYDNEKKLQLQLNE TKSQAFVSNSPKLFCPKNRSFDIDAIYSVIDDAKQYVYIAVMDYL PISSTSTKRTYWPDLDAKIREALVLRSVRVRLLLSFWKETDPLTF NFISSLKAICTEIANCSLKVKFFDLERENACATKEQKNHTFPRLN RNKYMVTDGAAYIGNFDWVGNDFTQNAGTGLVINQADVRNNR SIIKQLKDVFERDWYSPYAKTLQPTKQPNCSSLFKLKPLSNKTATDDTGGKDPRNV

>人PLD4-Ig融合蛋白cDNA(2142bp)(SEQ ID NO:125)

ATGGAGTTTCAGACCCAGGTCTTTGTATTCGTGTTGCTC TGGTTGTCTGGTGTTGATGGAgattacaaggatgacgacgataaaGGATC Ccccagagggcccacaatcaagccctgtcctccatgcaaatgcccagcacctaacctcttgggtgg accatccgtcttcatcttccctccaaagatcaaggatgtactcatgatctccctgagccccatagtca catgtgtggtggtggatgtgagcgaggatgacccagatgtccagatcagctggtttgtgaacaacg tggaagtacacacagctcagacacaaacccatagagaggattacaacagtactctccgggtggtc agtgccctccccatccagcaccaggactggatgagtggcaaggagttcaaatgcaaggtcaacaa caaagacctcccagcgcccatcgagagaaccatctcaaaacccaaagggtcagtaagagctccac aggtatatgtcttgcctccaccagaagaagagatgactaagaaacaggtcactctgacctgcatgg tcacagacttcatgcctgaagacatttacgtggagtggaccaacaacgggaaaacagagctaaac tacaagaacactgaaccagtcctggactctgatggttcttacttcatgtacagcaagctgagagtgg aaaagaagaactgggtggaaagaaatagctactcctgttcagtggtccacgagggtctgcacaat caccacacgactaagagcttctcccggactccgggtaaaCGTCCTCCCACCTGGGG CCAGGTGCAGCCCAAGGACGTGCCCAGGTCCTGGGAGCATG GCTCCAGCCCAGCTTGGGAGCCCCTGGAAGCAGAGGCCAGG CAGCAGAGGGACTCCTGCCAGCTTGTCCTTGTGGAAAGCATC CCCCAGGACCTGCCATCTGCAGCCGGCAGCCCCTCTGCCCA GCCTCTGGGCCAGGCCTGGCTGCAGCTGCTGGACACTGCCC AGGAGAGCGTCCACGTGGCTTCATACTACTGGTCCCTCACAG GGCCTGACATCGGGGTCAACGACTCGTCTTCCCAGCTGGGA GAGGCTCTTCTGCAGAAGCTGCAGCAGCTGCTGGGCAGGAA CATTTCCCTGGCTGTGGCCACCAGCAGCCCGACACTGGCCA GGACATCCACCGACCTGCAGGTTCTGGCTGCCCGAGGTGCC CATGTACGACAGGTGCCCATGGGGCGGCTCACCAGGGGTGT TTTGCACTCCAAATTCTGGGTTGTGGATGGACGGCACATATA CATGGGCAGTGCCAACATGGACTGGCGGTCTCTGACGCAGG TGAAGGAGCTTGGCGCTGTCATCTATAACTGCAGCCACCTGG CCCAAGACCTGGAGAAGACCTTCCAGACCTACTGGGTACTG GGGGTGCCCAAGGCTGTCCTCCCCAAAACCTGGCCTCAGAA CTTCTCATCTCACTTCAACCGTTTCCAGCCCTTCCACGGCCT CTTTGATGGGGTGCCCACCACTGCCTACTTCTCAGCGTCGCC ACCAGCACTCTGTCCCCAGGGCCGCACCCGGGACCTGGAGG CGCTGCTGGCGGTGATGGGGAGCGCCCAGGAGTTCATCTAT GCCTCCGTGATGGAGTATTTCCCCACCACGCGCTTCAGCCAC CCCCCGAGGTACTGGCCGGTGCTGGACAACGCGCTGCGGGC GGCAGCCTTCGGCAAGGGCGTGCGCGTGCGCCTGCTGGTCG GCTGCGGACTCAACACGGACCCCACCATGTTCCCCTACCTGC GGTCCCTGCAGGCGCTCAGCAACCCCGCGGCCAACGTCTCT GTGGACGTGAAAGTCTTCATCGTGCCGGTGGGGAACCATTC CAACATCCCATTCAGCAGGGTGAACCACAGCAAGTTCATGGT CACGGAGAAGGCAGCCTACATAGGCACCTCCAACTGGTCGG AGGATTACTTCAGCAGCACGGCGGGGGTGGGCTTGGTGGTC ACCCAGAGCCCTGGCGCGCAGCCCGCGGGGGCCACGGTGCA GGAGCAGCTGCGGCAGCTCTTTGAGCGGGACTGGAGTTCGC GCTACGCCGTCGGCCTGGACGGACAGGCTCCGGGCCAGGAC TGCGTTTGGCAGGGCTGA

>人PLD4-Ig融合蛋白(713氨基酸)(SEQ ID NO:126)

MEFQTQVFVFVLLWLSGVDGDYKDDDDKGSPRGPTIKPCP PCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDP DVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWM SGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEM TKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRT PGKRPPTWGQVQPKDVPRSWEHGSSPAWEPLEAEARQQRDSC QLVLVESIPQDLPSAAGSPSAQPLGQAWLQLLDTAQESVHVASY YWSLTGPDIGVNDSSSQLGEALLQKLQQLLGRNISLAVATSSPT LARTSTDLQVLAARGAHVRQVPMGRLTRGVLHSKFWVVDGRH IYMGSANMDWRSLTQVKELGAVIYNCSHLAQDLEKTFQTYWV LGVPKAVLPKTWPQNFSSHFNRFQPFHGLFDGVPTTAYFSASPP ALCPQGRTRDLEALLAVMGSAQEFIYASVMEYFPTTRFSHPPRY WPVLDNALRAAAFGKGVRVRLLVGCGLNTDPTMFPYLRSLQA LSNPAANVSVDVKVFIVPVGNHSNIPFSRVNHSKFMVTEKAAYIG TSNWSEDYFSSTAGVGLVVTQSPGAQPAGATVQEQLRQLFERD WSSRYAVGLDGQAPGQDCVWQG

【登录号】

NITE ABP-1211

NITE ABP-1212

NITE ABP-1213

NITE ABP-1214

【序列表自由文本】

SEQ ID NO:45：正向引物

SEQ ID NO:46：反向引物

SEQ ID NO:47：正向引物

SEQ ID NO:48：反向引物

SEQ ID NO:49：正向引物

SEQ ID NO:50：反向引物

SEQ ID NO:51：正向引物

SEQ ID NO:52：反向引物

SEQ ID NO:53：正向引物

SEQ ID NO:54：反向引物

SEQ ID NO:70：锚定引物

SEQ ID NO:70：n是脱氧肌苷

SEQ ID NO:71：AUAP引物

SEQ ID NO:72：引物

SEQ ID NO:73：引物

SEQ ID NO:114：引物

SEQ ID NO:115：引物

SEQ ID NO:116：引物

SEQ ID NO:117：引物

SEQ ID NO:118：引物

SEQ ID NO:119：引物

【序列表】

Claims (12)

1.与磷脂酶D4蛋白结合的单克隆抗体或其含有抗原-结合区的抗体片段用于制备预防或治疗活化的B细胞引起的疾病的药物的用途，其中所述单克隆抗体或其含有抗原-结合区的抗体片段包含：

(a)下列CDR：

SEQ ID NO:2所示的重链CDR1，

SEQ ID NO:3所示的重链CDR2，

SEQ ID NO:4所示的重链CDR3，

SEQ ID NO:5所示的轻链CDR1，

SEQ ID NO:6所示的轻链CDR2，以及

SEQ ID NO:7所示的轻链CDR3；

(b)下列CDR：

SEQ ID NO:8所示的重链CDR1，

SEQ ID NO:9所示的重链CDR2，

SEQ ID NO:10所示的重链CDR3，

SEQ ID NO:11所示的轻链CDR1，

SEQ ID NO:12所示的轻链CDR2，以及

SEQ ID NO:13所示的轻链CDR3；

(c)下列CDR：

SEQ ID NO:14所示的重链CDR1，

SEQ ID NO:15所示的重链CDR2，

SEQ ID NO:16所示的重链CDR3，

SEQ ID NO:17所示的轻链CDR1，

SEQ ID NO:18所示的轻链CDR2，以及

SEQ ID NO:19所示的轻链CDR3；

(d)下列CDR：

SEQ ID NO:32所示的重链CDR1，

SEQ ID NO:33所示的重链CDR2，

SEQ ID NO:34所示的重链CDR3，

SEQ ID NO:35所示的轻链CDR1，

SEQ ID NO:36所示的轻链CDR2，以及

SEQ ID NO:37所示的轻链CDR3；或者

(e)下列CDR：

SEQ ID NO:38所示的重链CDR1，

SEQ ID NO:39所示的重链CDR2，

SEQ ID NO:40所示的重链CDR3，

SEQ ID NO:41所示的轻链CDR1，

SEQ ID NO:42所示的轻链CDR2，以及

SEQ ID NO:43所示的轻链CDR3。

2.权利要求1的用途，其中所述单克隆抗体或其含有抗原-结合区的抗体片段包含：

(a)SEQ ID NO:75所示的重链可变区，和

SEQ ID NO:95所示的轻链可变区；

(b)SEQ ID NO:77所示的重链可变区，和

SEQ ID NO:97所示的轻链可变区；

(c)SEQ ID NO:79所示的重链可变区，和

SEQ ID NO:99所示的轻链可变区；

(e)SEQ ID NO:89所示的重链可变区，和

SEQ ID NO:109所示的轻链可变区；或者

(f)SEQ ID NO:91所示的重链可变区，和

SEQ ID NO:111所示的轻链可变区。

3.由保藏号NITE BP-1211、NITE BP-1213和NITE BP-1214的杂交瘤mp5B7、mp13D4和mp13H11中的任何一种产生的单克隆抗体、或其含有抗原-结合区的抗体片段用于制备预防或治疗活化的B细胞引起的疾病的药物的用途。

4.权利要求1的用途，其中所述单克隆抗体或其含有抗原-结合区的抗体片段是嵌合的或人源化的。

5.权利要求1的用途，其中所述单克隆抗体或其含有抗原-结合区的抗体片段包含：

SEQ ID NO:121所示的重链，和

SEQ ID NO:123所示的轻链。

6.权利要求1～权利要求5之任一项的用途，其中所述疾病是自身免疫疾病。

7.权利要求1～权利要求5之任一项的用途，其中所述疾病是过敏性疾病。

8.体外检测活化的B细胞的方法，所述方法包括下列步骤：

(a)使权利要求1～7之任一项中定义的单克隆抗体或其含有抗原-结合区的抗体片段接触待测试的细胞，以及

(b)检测与细胞结合的单克隆抗体或其含有抗原-结合区的抗体片段。

9.权利要求1～7之任一项中定义的单克隆抗体或其含有抗原-结合区的抗体片段用于制备检测活化的B细胞的试剂的用途。

10.体外抑制活化的B细胞的方法，所述方法包括使以下任一组分接触活化的B细胞的步骤：

(a)权利要求1～7之任一项中定义的单克隆抗体或其含有抗原-结合区的抗体片段，以及

(b)移接了(a)中的单克隆抗体的互补性-决定区的免疫球蛋白，或其含有抗原-结合区的抗体片段。

11.下列物质用于制备抑制活化的B细胞的活性的药物的用途：

(a)权利要求1～7之任一项中定义的单克隆抗体或其含有抗原-结合区的抗体片段，或者

(b)移接了(a)中的单克隆抗体的互补性-决定区的免疫球蛋白，或其含有抗原-结合区的抗体片段。

12.权利要求11的用途，其中所述活化的B细胞的活性是产生抗体的活性。

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