JP6431523B2

JP6431523B2 - 抗ホスホリパーゼｄ４抗体を含む医薬

Info

Publication number: JP6431523B2
Application number: JP2016503264A
Authority: JP
Inventors: 智英山崎; まゆき遠藤; 晃司石田
Original assignee: SBI Biotech Co Ltd
Current assignee: SBI Biotech Co Ltd
Priority date: 2013-07-30
Filing date: 2014-07-30
Publication date: 2018-11-28
Anticipated expiration: 2034-07-30
Also published as: KR20160034934A; AU2014297217A1; TR201910330T4; KR102367760B1; CA2919736A1; ES2736324T3; EP3027656B1; BR112016002001B1; JP6843449B2; DK3027656T3; CN105745226B; RU2016106708A; CA2919736C; CN105745226A; PL3027656T3; WO2015016386A1; EP3027656A1; JP2019014759A; US20210130493A1; HUE044469T2

Description

本発明は、ホスホリパーゼＤ４に結合する抗体の用途発明に関する。以下、「ホスホリパーゼＤ」をＰＬＤと、また「ホスホリパーゼＤ４」等をＰＬＤ４等と略記することもある。

ＰＬＤはホスファチジルコリンを加水分解してホスファチジン酸とコリンを産生する反応を触媒し、様々な細胞内シグナル伝達を引き起こす酵素である。産生されたホスファチジン酸が脂質性のシグナル分子として機能するものと考えられている。
従来から知られている２種類の哺乳類ＰＬＤとしてＰＬＤ１とＰＬＤ２が知られており、そのＮ末端領域にはホスファチジルイノシチド結合性のＰｈｏｘホモロジードメイン（ＰＸドメイン）及びプレクストリン（ｐｌｅｃｋｓｔｒｉｎ）ホモロジードメイン（ＰＨドメイン）を含んでいる。両ドメインともＰＬＤの膜局在化に関与している。
ＰＬＤ１とＰＬＤ２はさらに、二つのＨｉｓ−ｘ−Ｌｙｓ−ｘ−ｘ−ｘ−ｘ−Ａｓｐ配列（ＨＫＤモチーフ）を含んでいる。このＨＫＤモチーフはＰＬＤ活性にとって必須のドメインである。
ＰＬＤ１とＰＬＤ２により産生されたホスファチジン酸は、細胞骨格の再構成、エキソサイトーシス、食作用、癌化、細胞接着、走化性等に関与し、神経系や免疫系等を中心に作用していると考えられる。

ヒトＨｕ−Ｋ４とマウスＳＡＭ９は今では公式にＰＬＤ３と名づけられているが、ＰＸ及びＰＨドメインを欠き、２つのＨＫＤモチーフを有しているにもかかわらずＰＬＤ活性を示さない。さらに３つのＰＬＤファミリーメンバー、ＰＬＤ４、ＰＬＤ５及びＰＬＤ６があるが、これらの非古典的ＰＬＤ類についてはほとんど分かっていない。

マウス小脳発達における遺伝子発現パターンについて小脳発達トランスクリプトームデータベース（ＣＤＴ−ＤＢ）をサーチした結果、発達時において制御された転写産物ＰＬＤ４が同定された（非特許文献１参照）。ＰＬＤ４の基本特性は報告されていない。糖付加のある、または糖付加がないＰＬＤ４が酵素活性を示すかどうかはまだわかっていない。

ＰＬＤ４は、配列番号：１に示す５０６アミノ酸配列であり、配列番号４４に記載のｃＤＮＡ塩基配列によってコードされている（非特許文献１及び２）。ＰＬＤ４蛋白質はＣ末端領域に保存された２つのＨＫＤモチーフ(Ｈｉｓ−x−Ｌｙｓ−x−x−x−x−Ａｓｐアミノ酸配列、xはその他のアミノ酸)で構成される２つの暫定的なＰＤＥ領域(ホスホジエステラーゼモチーフ)と、推定的なリン酸化部位（Ｔｈｒ４７２）を有する。ＰＬＤ４蛋白質の構造はII型一回膜貫通蛋白質と予測される。また、Ｎ末端領域には古典的なＰＬＤファミリーであるＰＬＤ１とＰＬＤ２が有するＰＸ領域とＰＨ領域を持っていない。
一方ＰＬＤ４は２つのＨＫＤモチーフを有していることからＰＬＤファミリーに属するものではあるが、ＰＸドメインやＰＨドメインを欠く代わりに推定上の膜貫通ドメイン（トランスメンブランドメイン）を有している（非特許文献３）。

低レベルから中レベルではあるがＰＬＤ４ｍＲＮＡの発現は、生後1週間の、マウスの脳梁や小脳白質を含む白質領域周辺に優先的に局在化した細胞小集団に見出だされた。これらのＰＬＤ４ｍＲＮＡ発現細胞は、Ｉｂａ１陽性ミクログリアとして同定されている（非特許文献３）。しかし、マウス小脳のＰＬＤ４陽性細胞は、１０日齢の個体では消散する。ＰＬＤ４の発現は、出生後のマウス小脳発達時期の初期の間一時期に限定されていると考えられている。
生後１週間という時期は、マウスの脳梁や小脳白質ではミエリンの形成が活発化し始める時期であり、この時期に白質内に存在するアメボイド（活性化状態）ミクログリアにおいてＰＬＤ４が高発現することから、この時期の白質内におけるＰＬＤ４発現細胞がミエリンの形成に関与している可能性も考えられ、また特にＰＬＤ４が食胞に集積することも明らかとなっており、貪食に関与している可能性も示唆されている。活性化状態であるアメボイドミクログリアでは様々なサイトカインや成長因子が分泌されるとともに貪食作用が活発化している。発達期のマウス脳の白質では、余分なオリゴデンドロサイト（軸索に巻きついてミエリンを形成する中枢神経系グリア細胞）がアポトーシスを起こしていると考えられ、それらがアメボイドミクログリアで分解除去され、シグナル分子を分泌することにより白質内のミエリン形成環境を整えている可能性が考えられる。ＰＬＤ４はミエリン形成を含むこれらの過程に関与していることが示唆されている。

非神経組織においてもマウスＰＬＤ４ｍＲＮＡ発現は広く見られるが、主として脾臓に分布している。強いＰＬＤ４タンパク質発現が脾赤色髄の境界域周辺に検出され、細胞内膜フラクションから回収された脾ＰＬＤ４タンパクは高度にＮ−グリコシル化されている。ＰＬＤ４を異種細胞系で発現させたところ、小胞体とゴルジ体に局在化した。異種発現したＰＬＤ４はＰＬＤ酵素活性を示さなかった（非特許文献３）。
ＰＬＤ４の時間的にも場所的にも制限されたその発現パターンから、生後初期の脳の発達時のミクログリアや脾臓境界領域細胞の間で共通する機能において役割を演じているであろうことが示唆されていた。

一方、ＰＬＤ４が静止期のｐＤＣ（形質細胞様樹状細胞：plasmacytoid Dendritic Cell）（ｒｅｓｔｉｎｇｐＤＣ）において特異的に高発現していることを、本発明者らは見出した（特許文献１）。さらにＰＬＤ４特異的抗体を用いて、ｐＤＣの活性抑制に利用することができることも報告している。

さらに、日本人を母集団とする場合、全身性硬化症（ＳｙｓｔｅｍｉｃＳｃｌｅｒｏｓｉｓ）の新規の感受性遺伝子の１つとしてＰＬＤ４が報告された（非特許文献４）。しかしながらヨーロッパにおける同様の解析の結果、ＰＬＤ４との有意な相関関係は見つかっておらず、ＰＬＤ４と全身性硬化症をはじめとする自己免疫疾患との関係を示す有力な結果は得られていない。

免疫機構は大きく２つに分類される。病原体等の異物の発見と初期攻撃を行う「自然免疫(先天免疫)」、及び異物由来の抗原ペプチド等の提示という情報交換を介した「獲得免疫」である。「自然免疫」には主に白血球（好中球）、マクロファージ、樹状細胞（ＤＣ）、ＮＫ（ＮａｔｕｒａｌＫｉｌｌｅｒ）細胞などが関与し、「獲得免疫」には、上記樹状細胞等から提示された抗原ペプチド等の情報の伝達を受けたＴ細胞やＢ細胞が関与し、抗原ペプチド情報の伝達を受け活性化したＴ細胞は細胞性免疫として直接的に、同じく活性化したＢ細胞は抗体を産生する（液性免疫）ことにより間接的に、病原体に対する特異的認識と攻撃を可能にする。

「自然免疫」において、病原体に普遍的に存在する病原体関連分子パターン（pathogen-associated molecular patterns:ＰＡＭＰｓ）（ＬＰＳ、ＣｐＧＤＮＡ、リポタンパク質、ＲＮＡ等）を、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を介して認識し、ＮＦ−ｋＢ経由で炎症性サイトカインの分泌を促し、あるいはＩＲＦ（Interferon regulatory factor）経由でインターフェロン（ＩＦＮ）の分泌を促す。ＴＬＲは細胞内局在部位により、大きく２グループに分類され、細胞表面に発現するものと、エンドソームや小胞体（ＥＲ）に発現するものがある。ｐＤＣにおいてはエンドソームや小胞体に局在するＴＬＲ７及びＴＬＲ９を経由して、ＩＲＦ７を活性化し、ＩＦＮ−α産生を誘導する。これらのＴＬＲが細胞表面ではなく、細胞内に発現している理由は、自己免疫疾患発症の危険性を低下させるためではないかと示唆されている。ＴＬＲ７は１本鎖ＲＮＡ、ＴＬＲ９はＤＮＡをそれぞれリガンドとして認識する。これらの核酸は外来の病原性微生物のみならず宿主も保持しているため、核酸を認識し、免疫細胞を活性化させる受容体は常に自己免疫疾患を誘導することが示唆されてきた。

一方「獲得免疫」において重要な役割を示すＢ細胞（Ｂリンパ球）は表面にイムノグロブリンＩｇ受容体を発現するリンパ球である。Ｂ細胞は骨髄において造血幹細胞から作られ、プレＢ細胞、未熟Ｂ細胞へと分化した後ナイーブＢ細胞（成熟した、未感作のＢ細胞）へと成熟する。ナイーブＢ細胞は上記Ｔ細胞を介した刺激だけでなく、直接的な抗原刺激により活性化し、さらに分化し増殖して抗体産生細胞となり、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３等のサブクラスを含む）などの抗体を産生し分泌する。Ｂ細胞には特定の外来抗原を認識するＢ細胞受容体（ＢＣＲ）以外にも上記ＴＬＲが発現していることが知られている。たとえば以前より、Ｂ細胞の増殖・抗体産生を惹起すると知られていたＬＰＳはＴＬＲ４のリガンドであり、上記ＴＬＲ７やＴＬＲ９はＢ細胞にも発現していることが知られていた。かかるＢ細胞は、上記自己免疫疾患だけでなく、その抗体産生能から、その過剰反応により、アレルギー性疾患を誘導する可能性が示唆されてきた。
ＩｇＧまたはイムノグロブリンＧは、４つのペプチド鎖‐２つの相同な重鎖と２つの相同な軽鎖‐からなる、抗体のアイソタイプである。ＩｇＧはＢ細胞から産生され、獲得免疫において重要な役割を果たしている。ＩｇＧを産生していないナイーブ（抗原刺激を受けていない）Ｂ細胞は、形質芽細胞に分化し、最終的に形質細胞に分化する。形質芽細胞と形質細胞は大量の抗体を産生することができる。通常、骨髄系樹状細胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓ，ＤＣｓ）はＩＬ−１２とＩＬ−６及び／またはＢＡＦＦ／ＡＰＲＩＬといった膜タンパク質による活性化により、Ｂ細胞の増殖と分化を惹き起こす（非特許文献５，６及び７）。さらに、形質細胞様樹状細胞（ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄＤＣｓ，ｐＤＣｓ）は、ナイーブＢ細胞の、成熟化及び抗体分泌形質芽細胞とＩＦＮ−αとＩＬ−６を産生する形質細胞への分化を誘導する（非特許文献８）。ＩｇＧの可変領域は、ウイルス・細菌・菌類のような様々な病原体を捕え、そのような感染から個体を守る。
ＳＬＥは古典的な免疫介在性自己免疫疾患とされている。二重鎖ＤＮＡ・リボ核酸タンパク質やヒストンなどの、核酸やそれに結合するタンパク質に対して自己抗体が産生されることにより、免疫複合体（Ｉｍｍｕｎｅｃｏｍｐｌｅｘｅｓ，ＩＣｓ）が血液中または組織内に形成される。そのようなＩＣｓは、腎炎・関節炎・皮膚の発疹・疾患特異的な病態・血管炎などの疾患特異的な病態を伴う炎症反応を惹き起こす。ＳＬＥ患者の血液は、ナイーブＢ細胞の減少と、メモリーＢ細胞・形質芽細胞・形質細胞の増加に特徴づけられる（非特許文献９、１０、１１）。したがって、自己反応性抗体を分泌する形質芽細胞の操作を通じて、形質細胞への分化の抑制や抗体産生を抑制することは、自己免疫疾患の治療のための有望な戦略となるであろう。
ＰＢＭＣには、ナイーブＢ細胞、メモリーＢ細胞や形質芽細胞などの様々なＢ細胞サブセットが存在する。ＰＢＭＣ中のほとんどのＢ細胞サブセットは、ナイーブＢ細胞である。ナイーブＢ細胞は、外来抗原にさらされていないＢ細胞である。メモリーＢ細胞は初回感染で形成されたＢ細胞で、形質芽細胞へ分化することにより、素早い抗体媒介性免疫反応に重要である。形質芽細胞は、大量の抗体を分泌する細胞であり、ＣＤ１９陽性ＣＤ２７陽性ＩｇＤ陰性ＣＤ３８陽性で特徴づけられる。
外来抗原にさらされることにより、ナイーブＢ細胞が活性化Ｂ細胞になる。活性化Ｂ細胞はさらに、メモリーＢ細胞及び／または同様に抗体を産生する形質芽細胞に分化する。この変化は「成熟」と呼ばれる。
Ｂ細胞の成熟は複数の段階を経て起きる。最初の抗原非依存的段階では、特有の抗原に結合できる成熟Ｂ細胞を誘導する。この成熟段階は生体の骨髄及び脾臓で起きる。抗原結合及び共刺激によるＢ細胞活性化に続いて、抗原依存的なＢ細胞成熟段階が起きる。これらの情報がメモリーＢ細胞または抗体を分泌する形質芽細胞どちらかへのＢ細胞成熟化を促す。このＢ細胞成熟化の抗体依存段階には、活性化Ｂ細胞の増殖、抗体の親和性成熟、そして、抗体のクラススイッチが起きる。
インビトロの実験条件ではｐＤＣはＩＦＮ−αとＩＬ−６の分泌を通して、活性化Ｂ細胞のイムノグロブリン分泌形質芽細胞への成熟化を誘導することが、報告されている。ＣｐＧ２２１６はｐＤＣを活性化し、ＩＦＮ‐α産生及びＢ細胞成熟化が開始するのを誘導する。ｐＤＣからのＩＦＮ−αはＩＬ−６存在下で、活性化Ｂ細胞の形質芽細胞への成熟をさらに支えている。

ＰＣＴ／ＪＰ２０１３／０５２７８１

Ｔａｏｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２（８），ｐｐ５９１−５９８（２００５）Ｃｌａｒｋｅｔａｌ．，ＧｅｎｏｍｅＲｅｓ．１３（１０），ｐｐ２２６５−２２７０（２００３）ＰｌｏｓＯＮＥｗｗｗ．ｐｌｏｓｏｎｅ．ｏｒｇ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ２０１０，Ｖｏｌｕｍｅ５，Ｉｓｓｕｅ１１，ｅ１３９３２ＡＲＴＨＲＩＴＩＳ＆ＲＨＥＵＭＡＴＩＳＭＶｏｌ．６５，Ｎｏ．２，Ｆｅｂｒｕａｒｙ２０１３，ｐｐ４７２-４８０Ｂａｌａｚｓｅｔａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１７，３４１−３５２Ｌｉｔｉｎｓｋｉｙｅｔａｌ．，２００２，ＮａｔＩｍｍｕｎｏｌ，３，８２２−８２９ＭａｃＬｅｎｎａｎａｎｄＶｉｎｕｅｓａ，２００２，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１７，２３５−２３８Ｊｅｇｏｅｔａｌ，２００３，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１９，２２５−２３４Ｏｄｅｎｄａｈｌｅｔａｌ．，２０００，ＪＩ，１６５，５９７０−５９７９Ａｒｃｅｅｔａｌ．，２００１，ＪＩ，１６７，２３６１−２３６９Ｗｅｉｅｔａｌ．，２００７，ＪＩ，１７８，６６２４−６６３３

本発明は、ＰＬＤ４に結合する抗体を用いた活性化Ｂ細胞の調節、及びそれに起因する病気症状の改善を、解決しようとする課題とする。

本発明者らは、ＰＬＤ４に関する研究を通じて、従来報告していた静止期のｐＤＣ細胞以外に、活性化したＢ細胞においてもＰＬＤ４の発現が誘導されていることを確認した。そこで本発明者は、抗ＰＬＤ４抗体の活性化Ｂ細胞に対する影響を調べた。ＰＬＤ４抗体の作製・精製方法は特許文献１の方法に準する。

すなわち本願発明は以下の抗ＰＬＤ４抗体を用いた第二用途に関する。
（１）ホスホリパーゼＤ４（ＰＬＤ４）タンパク質に結合するモノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片を活性成分として含む活性化Ｂ細胞を抑制する医薬組成物。。
（２）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＳＹＷＭＨ（配列番号：２）、ＣＤＲ２として配列ＤＩＹＰＧＳＤＳＴＮＹＮＥＫＦＫＳ（配列番号：３）及び配列ＣＤＲ３としてＧＧＷＬＤＡＭＤＹ（配列番号：４）を有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（３）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号:５）、ＣＤＲ２として配列ＹＴＳＲＬＨＳ（配列番号:６）及びＣＤＲ３として配列ＱＱＧＮＴＬＰＷ（配列番号:７）を有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（４）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＳＹＷＭＨ、ＣＤＲ２として配列ＤＩＹＰＧＳＤＳＴＮＹＮＥＫＦＫＳ及びＣＤＲ３として配列ＧＧＷＬＤＡＭＤＹを有し、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ、ＣＤＲ２として配列ＹＴＳＲＬＨ及びＣＤＲ３として配列ＱＱＧＮＴＬＰＷを有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（５）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＴＹＷＭＨ（配列番号：８）、ＣＤＲ２として配列ＡＩＹＰＧＮＳＥＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号：９）及び配列ＣＤＲ３としてＧＹＳＤＦＤＹ（配列番号：１０）を有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（６）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＨＡＳＱＧＩＲＳＮＩＧ（配列番号:１１）、ＣＤＲ２として配列ＨＧＴＮＬＥＤ（配列番号:１２）及びＣＤＲ３として配列ＶＱＹＶＱＦＰ（配列番号:１３）を有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（７）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＴＹＷＭＨ、ＣＤＲ２として配列ＡＩＹＰＧＮＳＥＴＳＹＮＱＫＦＫＧ及びＣＤＲ３として配列ＧＹＳＤＦＤＹを有し、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＨＡＳＱＧＩＲＳＮＩＧ、ＣＤＲ２として配列ＨＧＴＮＬＥＤ及びＣＤＲ３として配列VQYVQFPを有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（８）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＤＹＮＬＨ（配列番号：１４）、ＣＤＲ２として配列ＹＩＹＰＹＮＧＮＴＧＹＮＱＫＦＫＲ（配列番号：１５）及び配列ＣＤＲ３としてＧＧＩＹＤＤＹＹＤＹＡＩＤＹ（配列番号：１６）を有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（９）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＲＡＳＥＮＩＹＳＨＩＡ（配列番号:１７）、ＣＤＲ２として配列ＧＡＴＮＬＡＨ（配列番号:１８）及びＣＤＲ３として配列ＱＨＦＷＧＴＰ（配列番号:１９）を有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（１０）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＤＹＮＬＨ、ＣＤＲ２として配列ＹＩＹＰＹＮＧＮＴＧＹＮＱＫＦＫＲ及びＣＤＲ３として配列ＧＧＩＹＤＤＹＹＤＹＡＩＤＹを有し、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＲＡＳＥＮＩＹＳＨＩＡ、ＣＤＲ２として配列ＧＡＴＮＬＡＨ及びＣＤＲ３として配列ＱＨＦＷＧＴＰを有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（１１）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＳＹＹＬＹ（配列番号：２０）、ＣＤＲ２として配列ＬＩＮＰＴＮＳＤＴＩＦＮＥＫＦＫＳ（配列番号：２１）及び配列ＣＤＲ３としてＥＧＧＹＧＹＧＰＦＡＹ（配列番号：２２）を有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（１２）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＴＳＳＱＴＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ（配列番号:２３）、ＣＤＲ２として配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号:２４）及びＣＤＲ３として配列ＨＳＴＨＶＰ（配列番号:２５）を有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（１３）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＳＹＹＬＹ、ＣＤＲ２として配列ＬＩＮＰＴＮＳＤＴＩＦＮＥＫＦＫＳ及びＣＤＲ３として配列ＥＧＧＹＧＹＧＰＦＡＹを有し、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＴＳＳＱＴＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ、ＣＤＲ２として配列ＫＶＳＮＲＦＳ及びＣＤＲ３として配列ＨＳＴＨＶＰを有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（１４）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＳＹＧＭＳ（配列番号：２６）、ＣＤＲ２として配列ＴＩＳＳＧＧＳＹＩＹＹＰＥＳＶＫＧ（配列番号：２７）及び配列ＣＤＲ３としてＬＹＧＧＲＲＧＹＧＬＤＹ（配列番号：２８）を有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（１５）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＲＳＳＫＳＬＬＨＳＤＧＩＴＹＬＹ（配列番号:２９）、ＣＤＲ２として配列ＱＭＳＮＬＡＳ（配列番号:３０）及びＣＤＲ３として配列ＡＱＮＬＥＬ（配列番号:３１）を有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（１６）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＳＹＧＭＳ、ＣＤＲ２として配列ＴＩＳＳＧＧＳＹＩＹＹＰＥＳＶＫＧ及びＣＤＲ３として配列ＬＹＧＧＲＲＧＹＧＬＤＹを有し、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＲＳＳＫＳＬＬＨＳＤＧＩＴＹＬＹ、ＣＤＲ２として配列ＱＭＳＮＬＡＳ及びＣＤＲ３として配列ＡＱＮＬＥＬを有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（１７）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＳＨＹＹＷＴ（配列番号：３２）、ＣＤＲ２として配列ＹＩＳＹＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ（配列番号：３３）及び配列ＣＤＲ３としてＥＧＰＬＹＹＧＮＰＹＷＹＦＤＶ（配列番号：３４）を有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（１８）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＲＡＳＱＤＩＤＮＹＬＮ（配列番号:３５）、ＣＤＲ２として配列ＹＴＳＲＬＨＳ（配列番号:３６）及びＣＤＲ３として配列ＱＱＦＮＴＬＰ（配列番号:３７）を有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（１９）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＳＨＹＹＷＴ、ＣＤＲ２として配列ＹＩＳＹＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ及びＣＤＲ３として配列ＥＧＰＬＹＹＧＮＰＹＷＹＦＤＶを有し、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＲＡＳＱＤＩＤＮＹＬＮ、ＣＤＲ２として配列ＹＴＳＲＬＨＳ及びＣＤＲ３として配列ＱＱＦＮＴＬＰを有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（２０）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＳＨＹＹＷＳ（配列番号：３８）、ＣＤＲ２として配列ＹＩＳＹＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ（配列番号：３９）及び配列ＣＤＲ３としてＥＧＰＬＹＹＧＮＰＹＷＹＦＤＶ（配列番号：４０）を有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（２１）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＲＡＳＱＤＩＤＮＹＬＮ（配列番号:４１）、ＣＤＲ２として配列YＴＳＲＬＨＳ（配列番号:４２）及びＣＤＲ３として配列ＱＱＦＮＴＬＰ（配列番号:４３）を有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（２２）前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＳＨＹＹＷＳ、ＣＤＲ２として配列ＹＩＳＹＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ及びＣＤＲ３として配列ＥＧＰＬＹＹＧＮＰＹＷＹＦＤＶを有し、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＲＡＳＱＤＩＤＮＹＬＮ、ＣＤＲ２として配列ＹＴＳＲＬＨＳ及びＣＤＲ３として配列ＱＱＦＮＴＬＰを有する前記（１）に記載の医薬組成物。
（２３）受託番号ＮＩＴＥＢＰ−１２１１、ＮＩＴＥＢＰ−１２１２、ＮＩＴＥＢＰ−１２１３、ＮＩＴＥＢＰ−１２１４として寄託されたハイブリドーマｍｐ５Ｂ７、ｍｐ７Ｂ４、ｍｐ１３Ｄ４及びｍｐ１３Ｈ１１のいずれかが産生するモノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片を活性成分として含む活性化Ｂ細胞を抑制するための医薬組成物。

（２４）さらに自己免疫疾患を予防又は治療するための、前記（１）〜（２３）のいずれか１つに記載の医薬組成物。
（２５）さらにアレルギー性疾患を予防又は治療するための、前記（１）〜（２３）のいずれか１つに記載の医薬組成物。

（２６）ＰＬＤ４の細胞外ドメインに結合するモノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片を被検細胞と接触させ、該細胞に結合したモノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片を検出する工程を含む、活性化Ｂ細胞の検出方法。
（２７）ＰＬＤ４の細胞外ドメインに結合するモノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片を含む、活性化Ｂ細胞の検出用試薬。
（２８）次の成分のいずれかを活性化Ｂ細胞に接触させる工程を含む、活性化Ｂ細胞の抑制方法：
（ａ）ＰＬＤ４に結合し、活性化Ｂ細胞を抑制するモノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片、
（ｂ）（ａ）のモノクローナル抗体の相補性決定領域を移植したイムノグロブリン、又はその抗原結合領域を含む断片。
（２９）次の成分のいずれかを生体に投与する工程を含む、生体中の活性化Ｂ細胞の抑制方法：
（ａ）ＰＬＤ４に結合し、活性化Ｂ細胞の活性を抑制するモノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片、
（ｂ）（ａ）のモノクローナル抗体の相補性決定領域を移植したイムノグロブリン、又はその抗原結合領域を含む断片。
（３０）活性化Ｂ細胞の活性が、抗体産生活性である前記（２８）又は前記（２９）に記載の方法。
（３１）次の成分のいずれかを有効成分として含む、活性化Ｂ細胞の抑制剤：
（ａ）ＰＬＤ４に結合し、活性化Ｂ細胞を抑制するモノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片、
（ｂ）（ａ）のモノクローナル抗体の相補性決定領域を移植したイムノグロブリン、又はその抗原結合領域を含む断片。
（３２）活性化Ｂ細胞の活性が、抗体産生活性である前記（３１）に記載の活性化Ｂ細胞を抑制剤。

「活性化Ｂ細胞」とはＢＣＲやＴＬＲを介した直接的な刺激だけでなく、Ｔ細胞を介したした刺激によって、増殖・抗体産生分泌活性を有するＢ細胞も含んでもよい。

「抗原結合領域を含む断片」とは、これに限定されないが、パパイン又はペプシンによる部分消化によって得られるＦａｂ，Ｆａｂ’，Ｆ（ａｂ’）_２断片等を含んでもよい。また、あるモノクローナル抗体のＣＤＲ（complementarily-determining region）を移植された可変領域を含むイムノグロブリンの断片も抗原結合領域を含む断片に含まれていてもよい。これらの抗体断片は、抗原との結合親和性を有する抗体分子として利用しうることは周知である。或いは、必要な抗原結合活性を維持している限り、遺伝子組み換えによって構築された抗体を用いることもできる。遺伝子組み換えによって構築された抗体とは、たとえばキメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、シングルチェインＦｖ（ｓｃＦｖ）、ｄｉａｂｏｄｙ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）、線状抗体、及び抗体断片より形成された多特異性抗体等を示すことができる。モノクローナル抗体、又はそれを産生する抗体産生細胞をもとに、これらの抗体を得る方法は公知である。

「自己免疫疾患」とは自己の身体の組織を異物と誤解し、免疫機能の攻撃により、引き起こされる疾患である。これに限定されないが、臓器特異的自己免疫疾患としては、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、慢性胃炎（慢性萎縮性胃炎）、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、自己免疫性膵炎、大動脈炎症候群、グッドパスチャー症候群、急速進行性糸球体腎炎、巨赤芽球性貧血、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性好中球減少症、特発性血小板減少性紫斑病、バセドウ病、橋本病、原発性甲状腺機能低下症、特発性アジソン病、1型糖尿病、潰瘍性大腸炎、クローン病、セリアック病等が含まれ；全身性自己免疫疾患としては、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、抗リン脂質抗体症候群、多発性筋炎、強皮症、シェーグレン症候群、血管炎症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）等が含まれる。

「アレルギー性疾患」とは異物に対する異常な免疫反応により引き起こされる疾患である。これに限定されないが、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、花粉症、アレルギー性鼻炎、蕁麻疹、小児喘息、アレルギー性胃腸炎、接触性皮膚炎、血清病、血管性紫斑病等が含まれる。

本発明は、ＰＬＤ４を特異的に認識する抗体及びその断片を用いた、活性化Ｂ細胞の抑制に起因する治療方法、及びその治療効果を有する薬剤を提供する。

更に本発明は、活性化Ｂ細胞の抑制活性を利用すれば、自己免疫疾患あるいはアレルギー性疾患の患者においても、予防及び治療効果を期待することができる。

ヒトＢ細胞（ＣＤ１９＋）の抗ＰＬＤ４抗体での染色を示すＦＡＣＳ解析図。ＴＬＲ９リガンドのＣｐＧ２００６を用いた活性化により、ＣＤ１９陽性Ｂ細胞上にＰＬＤ４タンパク質が誘導された。ＴＬＲ９リガンド（ＣｐＧ２００６）により、活性化したＢ細胞（ＣＤ１９＋）におけるＰＬＤ４の誘導が検出できた。ＰＬＤ４の検出にはモノクローナル抗体１１Ｇ９.６及び５Ｂ７を用いた。ネガティブコントロールとしてマウスＩｇＧ２ｂ，κを用いた。ヒトＰＢＭＣの抗ＰＬＤ４抗体及び抗ＣＤ１９抗体での染色を示すＦＡＣＳ解析図。ＴＬＲ９リガンドによる刺激により、ＰＬＤ４陽性細胞は活性化されたＢ細胞（ＣＤ１９＋）において増えていた。ＴＬＲ９リガンドにより活性化したＢ細胞（ＣＤ１９＋）が有意に増加したことを抗ＰＬＤ４抗体（３Ｂ４）で検出できた。ネガティブコントロールとしてマウスＩｇＧ１，κを用いた。ＴＬＲ９リガンドによる活性化のある又はない条件下における、ヒトＰＢＭＣの抗ＰＬＤ４抗体及び抗ＣＤ１９抗体での染色を示すＦＡＣＳ解析図。ＰＬＤ４陽性でＴＬＲ９リガンド刺激を受けたＢ細胞（ＣＤ１９＋）が有意に増加したことを、抗ＰＬＤ４抗体（５Ｂ７、１３Ｄ４、１３Ｈ１１及び１１Ｇ９．６）で検出できた。ネガティブコントロールとしてマウスＩｇＧ２ｂ，κを用いた。各抗ＰＬＤ４キメラ抗体で示された、ヒトＰＬＤ４陽性活性化Ｂ細胞の減少を示すＦＡＣＳ解析図。ＰＢＭＣと抗ＰＬＤ４キメラ抗体（ｃｈ３Ｂ４、ｃｈ１３Ｄ４、ｃｈ１３Ｈ１１、ｃｈ５Ｂ７及びｃｈ１１Ｇ９．６）の共培養は、ＴＬＲ９リガンド（ＣｐＧ２００６）の存在下でＢ細胞の活性化を抑制したが、抗体を入れない場合（ＮｏＡｂ）及び非特異的な抗体を用いた場合（ＣｏｎｔｒｏｌＩｇ）は、ＣｐＧ２００６の添加によるＢ細胞の活性化を抑制できなかった。図４の抑制効果を数値化した図。コントロールＩｇで処理したＰＬＤ４を発現する活性化Ｂ細胞群を１００％とし、各抗ＰＬＤ４キメラ抗体処理した場合のＰＬＤ４を発現する活性化Ｂ細胞群の変化を示す。フローサイトメトリーの結果。ＰＢＭＣはＴＬＲ９リガンドとリコンビナントヒトＩＬ−６存在下で記載のキメラＰＬＤ４抗体とともに培養された。コントロールのＩｇ処理と比較して、ｃｈ３Ｂ４・ｃｈ５Ｂ７・ｃｈ１３Ｄ４・ｃｈ１３Ｈ１１またはｃｈ１１Ｇ９．６による処理により、形質芽細胞集団（ＣＤ１９陽性ＣＤ２７陽性ＩｇＤ陰性ＣＤ３８陽性）は減少した。図６の培養上清のELISA試験の結果。コントロールのＩｇ処理と比較して、ｃｈ３Ｂ４・ｃｈ５Ｂ７・ｃｈ１３Ｄ４・ｃｈ１３Ｈ１１又はｃｈ１１Ｇ９．６による処理により、形質芽細胞からのヒトイムノグロブリン産生が減少した。

本発明者らはＰＬＤ４が、Ｂ細胞の活性化に伴い、発現誘導されてくる分子であることを新たに見出した。

本発明者らは、以前、ヒトＰＬＤ４の発現、細胞内局在、構造、機能について報告した（特許文献１）。本発明においては更に、ｐＤＣだけでなく、活性化したＢ細胞にも、ＰＬＤ４が発現誘導されてくることがわかった。さらに、抗ＰＬＤ４抗体が活性化Ｂ細胞の抑制をすることを新たに見出した。かかる知見は、抗ＰＬＤ４抗体の、先に報告したｐＤＣの活性抑制による自己免疫疾患への治療効果の可能性を強化するだけでなく、B細胞に対する活性をも示唆している。

Ｂ細胞の表面には、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＢＡＦＦ−Ｒ等のタンパクが発現している。ＣＤ１９はプロＢ細胞から抗体産生形質細胞までを含むＢ細胞の初期段階で発現し、成熟Ｂ細胞では活性化を制御する補助受容体として機能する。ＣＤ２０はプレＢ細胞から活性化Ｂ細胞まで発現し、ＣＤ２２は成熟Ｂ細胞において細胞表面に発現し、ＢＡＦＦ−ＲはＢ細胞の広範な分化段階において発現がみられている。そのためこれらのタンパクを認識する抗体は活性化Ｂ細胞のみならず感作されていないナイーブＢ細胞をも抑制する懸念があるが、本発明の抗ＰＬＤ４抗体ではナイーブＢ細胞に影響を与えずに活性化Ｂ細胞を抑制するという特徴がある。

本発明で用いられる抗ＰＬＤ４抗体は以前報告したものと同じである（特許文献１）。簡略化して説明すると、ＰＬＤ４の細胞外ドメイン（配列番号１に示したアミノ酸配列の５４番目から５０６番目に相当するアミノ酸配列）を含むアミノ酸配列をコードするリコンビナントＰＬＤ４−Ｉｇ融合タンパク質を免疫原として、ＰＬＤ４に対する抗体の取得を以下のように行った。

＜抗ヒトＰＬＤ４モノクローナル抗体の作製＞
１）免疫
免疫原は、上記の組換えPLD4-Ig融合蛋白質を用いた。BALB/cマウス3匹の背部皮下に、PLD4-Ig 融合蛋白質を投与した。アジュバントには、Freund's Adjuvant, Complete及びIncomplete(SIGMA)を用い、初回は200μg/匹、2回目以降4回目までは50μg/匹を投与した。
２）抗血清力価の確認
3回目及び、4回目免疫後に採血し、抗血清の力価をELISAで評価した。
96wellマイクロタイタープレートに、PLD4-Ig 融合蛋白質を固相化した。抗血清は1000倍から3倍ずつ段階希釈し、729000倍までの希釈系列を調製した。各サンプルは、抗原固相化プレートに50μLずつ添加し、一次反応を行った。洗浄後、HRP標識抗マウスIgG(κ，λ)抗体で二次反応を行い、OPD（オルトフェニレンジアミン）で発色検出(490 nm)した。
３）細胞融合
抗血清力価の上昇が認められたマウスから脾細胞を摘出した。摘出した脾細胞とマウスミエローマ細胞（P3U1）を、PEG法で融合させ、HAT培地により融合脾細胞の選択培養を行った。

＜CAL-1細胞を用いたハイブリドーマのFACSスクリーニング＞
HAT選択培養により得られた融合脾細胞各クローンの産生抗体について、FACSで評価した。その結果、ハイブリドーマ培養上清の3B4, 5B7, 7B4, 8C11, 10C3, 11D10, 13D4, 13H11, 14C1, 11G9.6はヒトPLD4に良く反応した。

上記ハイブリドーマから産生される各々のモノクローナル抗体の可変領域内のCDR領域(CDRs; CDR1, CDR2, CDR3)、FW領域(Frame work regions)と可変領域の配列をKabat numbering system(Kabat et al, 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health Publication No. 91-3242, 5th ed., United States Department of Health and Human Services, Bethesda, MD)の解析方法に従って決定した。

得られたマウス11G9.6抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：７４、アミノ酸配列は配列番号：７５である。マウス11G9.6抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４である。
得られたマウス3B4抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：７６、アミノ酸配列は配列番号：７７である。マウス3B4抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０である。
得られたマウス5B7抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：７８、アミノ酸配列は配列番号：７９である。マウス5B7抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６である。
得られたマウス7B4抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：８０、アミノ酸配列は配列番号：８１である。マウス7B4抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６である。7B4抗体は、5B7抗体と重鎖と軽鎖の可変領域CDR配列が同じである抗体である。
得られたマウス8C11抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：８２、アミノ酸配列は配列番号：８３である。マウス8C11抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：２２である。
得られたマウス10C3抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：８４、アミノ酸配列は配列番号：８５である。マウス10C3抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：２８である。
得られたマウス11D10抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：８６、アミノ酸配列は配列番号：８７である。マウス11D10抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：２８である。11D10抗体は、10C3抗体と重鎖と軽鎖の可変領域CDR配列が同じ抗体である。ただし、重鎖のisotype（10C3はマウスIgG2aで、11D10はマウスIgG2bの定常領域）の違いがある。
得られたマウス13D4抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：８８、アミノ酸配列は配列番号：８９である。マウス13D4抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：３４である。
得られたマウス13H11抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：９０、アミノ酸配列は配列番号：９１である。マウス13H11抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０である。
得られたマウス14C1抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：９２、アミノ酸配列は配列番号：９３である。マウス14C1抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０である。14C1抗体は、13H11抗体と重鎖と軽鎖の可変領域CDR配列が同じ抗体である。ただし、重鎖のisotype（13H11はmouse IgG2bで、14C1はmouse IgG1のconstant region）の違いがある。

マウス11G9.6抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：９４、アミノ酸配列は配列番号：９５である。マウス11G9.6抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７である。
マウス3B4抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：９６、アミノ酸配列は配列番号：９７である。マウス3B4抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３である。
マウス5B7抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：９８、アミノ酸配列は配列番号：９９である。マウス5B7抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：１７、配列番号：１８、配列番号：１９である。
マウス7B4抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：１００、アミノ酸配列は配列番号：１０１である。マウス7B4抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：１７、配列番号：１８、配列番号：１９である。
マウス8C11抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：１０２、アミノ酸配列は配列番号：１０３である。マウス8C11抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：２３、配列番号：２４、配列番号：２５である。
マウス10C3抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：１０４、アミノ酸配列は配列番号：１０５である。マウス10C3抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：２９、配列番号：３０、配列番号：３１である。
マウス11D10抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：１０６、アミノ酸配列は配列番号：１０７である。マウス11D10抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：２９、配列番号：３０、配列番号：３１である。
マウス13D4抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：１０８、アミノ酸配列は配列番号：１０９である。マウス13D4抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：３５、配列番号：３６、配列番号：３７である。
マウス13H11抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：１００、アミノ酸配列は配列番号：１１１である。マウス13H11抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３である。
マウス14C1抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：１１２、アミノ酸配列は配列番号：１１３である。マウス14C1抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３である。

本発明におけるより好ましいモノクローナル抗体として、たとえば、
ハイブリドーマｍｐ５Ｂ７、ｍｐ７Ｂ４、ｍｐ１３Ｄ４、ｍｐ１３Ｈ１１
が産生するモノクローナル抗体を示すことができる。
ハイブリドーマｍｐ５Ｂ７、ｍｐ７Ｂ４、ｍｐ１３Ｄ４、ｍｐ１３Ｈ１１
は、２０１２年１月２７日付けで
受託番号ＮＩＴＥＢＰ−１２１１、ＮＩＴＥＢＰ−１２１２、ＮＩＴＥＢＰ−１２１３、ＮＩＴＥＢＰ−１２１４
独立行政法人製品評価技術基盤機構内特許微生物寄託センターが受託した。以下に、寄託を特定する内容を記載する。
（１）寄託機関の名称・あて名
名称：独立行政法人製品評価技術基盤機構産業技術総合研究所特許微生物寄託センター
あて名：日本国千葉県茨城県木更津市かずさ鎌足２−５−８（郵便番号２９２−０８１８）
（２）寄託日：２０１２年１月２７日
（３）受託番号ＮＩＴＥＢＰ−１２１１（ハイブリドーマｍｐ５Ｂ７）
ＮＩＴＥＢＰ−１２１２（ハイブリドーマｍｐ７Ｂ４）
ＮＩＴＥＢＰ−１２１３（ハイブリドーマｍｐ１３Ｄ４）
ＮＩＴＥＢＰ−１２１４（ハイブリドーマｍｐ１３Ｈ１１）

特に、可変領域を構成するＣＤＲの配列として、
重鎖ＣＤＲ１：DYNLH，ＣＤＲ２：YIYPYNGNTGYNQKFKR，ＣＤＲ３：GGIYDDYYDYAIDY，
軽鎖ＣＤＲ１：RASENIYSHIA，ＣＤＲ２：GATNLAH，ＣＤＲ３：QHFWGTP，
の組み合わせをもつ抗体、可変領域を構成するＣＤＲの配列として、
重鎖ＣＤＲ１：SHYYWT，ＣＤＲ２：YISYDGSNNYNPSLKN，ＣＤＲ３：EGPLYYGNPYWYFDV，
軽鎖ＣＤＲ１：RASQDIDNYLN，ＣＤＲ２：YTSRLHS，ＣＤＲ３：QQFNTLP，
の組み合わせをもつ抗体、可変領域を構成するＣＤＲの配列として、
重鎖ＣＤＲ１：SHYYWS，ＣＤＲ２：YISYDGSNNYNPSLKN，ＣＤＲ３：EGPLYYGNPYWYFDV，
軽鎖ＣＤＲ１：RASQDIDNYLN，ＣＤＲ２：YTSRLHS，ＣＤＲ３：QQFNTLP，
の組み合わせをもつ抗体はより好ましい抗体である。

ＰＬＤ４を認識するキメラ抗体、又はヒト化抗体は、それをコードするポリヌクレオチドを利用して遺伝子工学的に製造することができる。たとえば、特許文献１に記載されているように上記マウスモノクローナル抗体（３Ｂ４，５Ｂ７，７Ｂ４，８Ｃ１１，１０Ｃ３，１１Ｄ１０，１３Ｄ４，１３Ｈ１１，１４Ｃ１，１１Ｇ９．６等）の各ＣＤＲの領域を用いて、活性のある各キメラ抗体（ｃｈ３Ｂ４Ａｂ、ｃｈ５Ｂ７Ａｂ、ｃｈ７Ｂ４Ａｂ，ｃｈ８Ｃ１１Ａｂ，ｃｈ１０Ｃ３Ａｂ，ｃｈ１１Ｄ１０Ａｂ，ｃｈ１３Ｄ４Ａｂ，ｃｈ１３Ｈ１１Ａｂ，ｃｈ１４Ｃ１Ａｂ，ｃｈ１１Ｇ９．６Ａｂ等）をそれぞれ作ることは当業者には容易にできる。

本発明者らは、ＰＬＤ４に対するモノクローナル抗体がＰＬＤ４発現細胞に対するＣＤＣ（補体依存性細胞傷害：Complement Dependent Cytotoxicity）活性及びＡＤＣＣ（抗体依存性細胞障害活性：Antibody-dependent cellular cytotoxicity）活性を有することを確認している。従って本発明に係る抗ＰＬＤ４モノクローナル抗体はＰＬＤ４発現細胞に対する細胞障害作用を有する。

即ち本発明は、ＰＬＤ４の細胞外ドメインに結合する抗体を有効成分として含有する、活性化Ｂ細胞抑制剤に関する。或いは本発明は、ＰＬＤ４の細胞外ドメインに結合する抗体を投与する工程を含む、抗体産生抑制方法を提供する。更に本発明は、ＰＬＤ４の細胞外ドメインに結合する抗体の、活性化Ｂ細胞を抑制するための医薬組成物の製造における使用に関する。

本発明において、抗体は、必要に応じて修飾して使用することができる。本発明によれば、ＰＬＤ４の細胞外ドメインを認識する抗体は、活性化Ｂ細胞を抑制する作用を有する。即ち、抗体そのものが活性化Ｂ細胞に対する細胞障害作用を有している可能性が考えられた。強いエフェクター作用を示す抗体のサブクラスは公知である。或いは、抗体を細胞障害物質(cytotoxic agent)によって修飾することによって、活性化Ｂ細胞の抑制効果を更に増強することができる。細胞障害物質としては、以下のような物質を示すことができる。
トキシン類：緑膿菌毒素(Pseudomonas Endotoxin; PE)、ジフテリアトキシン、リシン
放射性同位元素：Tc99m、Sr89、I131、Y90
抗癌剤：カリキアマイシン、マイトマイシン、パクリタキセル
蛋白質からなるトキシン類は、２官能性試薬によって抗体又はその断片などに結合することができる。或いは、抗体をコードする遺伝子にトキシン類をコードする遺伝子を接合し、両者の融合蛋白質を得ることもできる。放射性同位元素を抗体に結合する方法も公知である。たとえば、キレート剤を利用して、抗体を放射性同位元素で標識する方法が公知である。更に抗癌剤は、糖鎖又は２官能性試薬などの利用により、抗体に結合することができる。

本発明においては、人為的に構造を改変された抗体を有効成分として利用することもできる。例えば、抗体の細胞障害作用や安定性を改善するための様々な修飾方法が公知である。具体的には、重鎖の糖鎖が改変されたイムノグロブリンが知られている(Shinkawa, T. et al. J. Biol. Chem.278:3466-3473. 2003.)。糖鎖の改変によって、イムノグロブリンのＡＤＣＣ（抗体依存性の細胞障害;Antibody Dependent Cell-mediated Cytotoxicity）活性が増強された。

本発明においては、１種類又は複数種類のモノクローナル抗体を利用することができる。たとえば、ＰＬＤ４の細胞外ドメインを認識する複数種のモノクローナル抗体を配合して、本発明に利用することができる。

抗ＰＬＤ４抗体が活性化Ｂ細胞の獲得免疫性抗体産生活性の抑制作用を有することは次のようにして確認することができる。Ｂ細胞はＢＣＲリガンド又はＴＬＲリガンド（好ましくはＴＬＲ４リガンド、ＴＬＲ７リガンド又はＴＬＲ９リガンド）の刺激によって抗体を大量に産生する。Ｂ細胞に対する上記リガンド刺激の前、後、又はリガンド刺激と同時に抗ＰＬＤ４抗体を与え、抗ＰＬＤ４抗体を与えないＢ細胞を対照として、Ｂ細胞由来の獲得免疫性抗体の産生能を比較する。抗体産生能は、Ｂ細胞の培養上清中に含まれる分泌型イムノグロブリンを測定することによって評価することができる。比較の結果、抗ＰＬＤ４抗体の添加によって、上清中のＢ細胞由来の獲得免疫性抗体の量が有意に低下すれば、試験された抗ＰＬＤ４抗体は、Ｂ細胞の抗体産生能を抑制する作用を有することが確認できる。これら抗体の測定方法は公知である。Ｂ細胞は、生体における液性免疫（分泌型抗体）を産生する細胞である。従って、Ｂ細胞の抗体産生能の抑制によって、液性免疫を調節することができる。

ＰＬＤ４の細胞外ドメインを認識する抗体を、その抗体が由来する生物種とは異なる宿主に投与する場合には、当該宿主にとって異物と認識されにくい形に加工するのが望ましい。たとえば、次のような分子に加工することにより、イムノグロブリンを異物として認識されにくくすることができる。イムノグロブリン分子を以下のように加工する手法は公知である。
・定常領域を欠失した抗原結合領域を含む断片(Monoclonal Antibodies : Principles and Practice, third edition, Academic Press Limited. 1995; Antibody Engineering, A Practical Approach, IRL PRESS, 1996)
・モノクローナル抗体の抗原結合領域と宿主のイムノグロブリンの定常領域とで構成されるキメラ抗体(遺伝子発現実験マニュアル講談社 1994年（石田功、安東民衛編）)
・宿主のイムノグロブリンにおける相補性決定領域(CDR)をモノクローナル抗体のCDRに置換したCDR置換抗体(遺伝子発現実験マニュアル講談社 1994年（石田功、安東民衛編）)

或いは、ファージディスプレー法(McCafferty J. et al., Nature 348:552-554,1990; Kretzschmar T et.al., Curr Opin Biotechnol. 2002 Dec;13(6):598-602.)によって、ヒトのイムノグロブリン可変領域遺伝子を取得することもできる。ファージディスプレー法においては、ヒトイムノグロブリン可変領域をコードする遺伝子がファージ遺伝子に組み込まれる。多様なイムノグロブリン遺伝子をソースとして、ファージライブラリーを作成することもできる。ファージは自身を構成する蛋白質の融合蛋白質として、当該可変領域を発現する。ファージによって発現されたファージ表面の可変領域は、抗原との結合活性を維持している。従って、抗原又は抗原を発現した細胞などに結合するファージを選択することによって、ファージライブラリーから、目的とする結合活性を有する可変領域を発現したファージをスクリーニングすることができる。更に、こうして選択されたファージ粒子の中には、目的とする結合活性を有する可変領域をコードする遺伝子が保持されている。即ち、ファージディスプレー法においては、可変領域の結合活性を指標として、目的とする結合活性を有する可変領域をコードしている遺伝子を取得することができる。

本発明によるＢ細胞の活性抑制剤、又は抑制方法において、ＰＬＤ４の細胞外ドメインを認識する抗体、又はその少なくとも抗原結合領域を含む抗体断片は、蛋白質として、或いはそれをコードするポリヌクレオチドとして、投与することができる。ポリヌクレオチドを投与するには、目的とする蛋白質を発現できるように、適当なプロモーターの制御下に目的とする蛋白質をコードするポリヌクレオチドを配置したベクターを利用するのが望ましい。ベクターには、エンハンサーやターミネーターを配置することもできる。イムノグロブリンを構成する重鎖と軽鎖の遺伝子を保持し、イムノグロブリン分子を発現することができるベクターが公知である。イムノグロブリンを発現することができるベクターは、細胞に導入することにより投与することができる。生体への投与にあたっては、生体への投与によって細胞に感染させることができるものはそのまま投与することができる。或いは、いったん生体から分離したリンパ球にベクターを導入して再び生体に戻すこともできる(ex vivo)。

本発明に基づくＢ細胞の活性抑制剤、又は抑制方法において、生体に投与されるモノクローナル抗体の量は、イムノグロブリンとして体重１ｋｇあたり、通常０．５ｍｇ〜１００ｍｇ、たとえば１ｍｇ〜５０ｍｇ、好ましくは２ｍｇ〜１０ｍｇである。生体への抗体の投与間隔は、治療期間中の生体内におけるイムノグロブリンの有効濃度が維持できるように適宜調節することができる。具体的には、例えば、１〜２週間間隔で投与することができる。投与経路は、任意である。当業者は、治療に際して効果的な投与経路を適宜選択することができる。具体的には、経口的に、又は非経口的な投与を示すことができる。たとえば、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、又は皮下注射等により、全身又は局所に抗体を投与することができる。本発明における非経口投与に適当な製剤として、注射剤、座剤、噴霧剤などが挙げられる。また細胞に与える場合には、培養液中に通常１μｇ／ｍＬ、好ましくは１０μｇ／ｍＬ以上、より好ましくは５０μｇ／ｍＬ以上、更に好ましくは０．５ｍｇ／ｍＬ以上のイムノグロブリンを与える。

本発明に基づくＢ細胞の活性抑制剤又は抑制方法において、モノクローナル抗体は、任意の方法により生体に投与することができる。通常モノクローナル抗体は、薬学的に許容される担体と配合される。モノクローナル抗体には、必要に応じて増粘剤、安定剤、防腐剤及び可溶化剤などの添加剤を配合することができる。このような担体又は添加剤としては、ラクトース、クエン酸、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、スクロース、デンプン、タルク、ゼラチン、寒天、植物油、エチレングリコールなどが挙げられる。「薬学的に許容される」という用語は、各国政府の監督当局により承認されているか、又は各国の薬局方若しくは一般的に認知されている薬局方に動物、哺乳動物、及び特にヒトへの使用に関して列記されていることを言う。本発明のＢ細胞の活性抑制剤は、１回又は複数回の用量の凍結乾燥粉末又は錠剤の形態で供給することもできる。凍結乾燥粉末又は錠剤には、更に、投与の前に該組成物を所望の濃度となるように溶解するための注射用の滅菌済みの水、生理的食塩水又は緩衝液を組み合わせることもできる。

更に、イムノグロブリンを発現するベクターとして投与する場合には、重鎖と軽鎖を別のプラスミドとしてコトランスフェクトするとして、体重１ｋｇあたり各プラスミドを０．１〜１０ｍｇ、例えば１〜５ｍｇを投与することができる。また in vitro において細胞に導入するためには、１〜５μｇ／１０^６ｃｅｌｌのベクターが用いられる。以下、実施例に基づいて本発明を更に具体的に説明する。

なお本明細書において引用されたすべての先行技術文献は、参照として本明細書に組み入れられる。

以下実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明はかかる実施例により何ら制限されるものではない。

実施例１
ヒトＰＢＭＣ（１ｘ１０^７ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）をＴＬＲ９のリガンドであるＣｐＧ２００６（最終濃度１μＭ）で刺激し、２４穴プレートでＣＯ_２インキュベーター（３７℃，５％ＣＯ_２）で約２０時間インキュベーションした。並行して、刺激を与えないヒトＰＢＭＣ（１ｘ１０^７ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）もＣＯ_２インキュベーター（３７℃，５％ＣＯ_２）で約２０時間培養した。
ヒトＰＢＭＣをＦＡＣＳバッファー（１％ＦＢＳ／ＰＢＳ）で５倍希釈したＦｃＲＢｌｏｃｋｉｎｇＲｅａｇｅｎｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）で４℃に２０分間処理した。洗浄後、１次抗体の５Ｂ７、１１Ｇ９．６またはｍｏｕｓｅＩｇＧ２ｂ，κ（各１０μｇ／ｍｌ）で４℃、１５分間染色した。２次抗体以降の抗体は、ＦｃＲＢｌｏｃｋｉｎｇＲｅａｇｅｎｔが２５倍希釈になるよう加えたＦＡＣＳバッファーで希釈した。２次抗体のＰＥ標識−抗マウスＩｇ（ＢＤ）を１００倍希釈し、加えて混和した。あわせて、Ｂ細胞をＦＡＣＳ上で分画するためにＡＰＣ標識−抗ヒトＣＤ１９抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）をＦｃＲＢｌｏｃｋｉｎｇＲｅａｇｅｎｔを含むＦＡＣＳバッファーで３０倍に希釈し、４℃、１５分間染色した。ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ）を使用してデータの取り込みを行った。Ｘ軸：ＦＳＣとＹ軸：ＳＳＣのドットプロット上で生細胞にゲートをかけた。生細胞ゲート内の細胞数が１００，０００ｃｏｕｎｔになるまでデータを取り込んだ。Ｂ細胞：抗マーカー分子抗体陽性細胞をゲーティングした。ゲーティングした細胞をＸ軸：ＰＬＤ４のヒストグラムで解析し、ｍｏｕｓｅＩｇＧ２ｂ，κでの染色結果をオーバーレイした。その結果、抗ＰＬＤ４抗体は刺激を入れていないＢ細胞にはほとんど結合しないが、ＴＬＲ９リガンドによる刺激により選択的に結合した（図１）。このことはＰＬＤ４が活性化したＢ細胞上に発現することを示す。

実施例２
＜各モノクローナル抗体によるＢ細胞への結合試験＞
ヒトＰＢＭＣを最終濃度１μＭのＣｐＧ２００６で約２０時間刺激をした。細胞を回収し、ＦｃＲＢｌｏｃｋｉｎｇＲｅａｇｅｎｔで４℃に２０分間処理した。洗浄後、１次抗体の３Ｂ４、５Ｂ７、１３Ｄ４、１３Ｈ１１、１１Ｇ９．６、ｍｏｕｓｅＩｇＧ１，κまたはｍｏｕｓｅＩｇＧ２ｂ，κを各１０μｇ／ｍｌで４℃に１５分間染色した。２次抗体にＰＥ標識−抗マウスＩｇで４℃に１５分間染色した。Ｂ細胞群のゲーティングのために、ＡＰＣ標識− 抗ヒトＣＤ１９抗体を４℃に１５分間で二重染色した。Ｘ軸：ＦＳＣとＹ軸：ＳＳＣのドットプロット上の生細胞群を抗ＰＬＤ４抗体のＣＤ１９陽性細胞への結合により解析した（図２および図３）。その結果、試験したすべての抗ＰＬＤ４モノクローナル抗体はＴＬＲ９刺激したＢ細胞に結合した。すなわち、すべての抗ＰＬＤ４モノクローナル抗体で、活性化依存的にＢ細胞においてＰＬＤ４の発現誘導が起こっていることが確認された。

実施例３
＜抗ＰＬＤ４キメラ抗体の活性化Ｂ細胞に対する細胞障害活性＞
活性はTLRリガンド（１μＭ）による刺激で誘導された、ＰＬＤ４陽性活性化Ｂ細胞群の頻度を指標とした。ヒトＰＢＭＣをＣｐＧ２００６および各抗ＰＬＤ４キメラ抗体またはコントロールＩｇで約１６時間培養した。培地はＲＰＭＩ１６４０（ＳＩＧＭＡ）を使用した（１０％ＦＢＳ（Ｅｑｕｉｔｅｃｈ−ｂｉｏ）、５ｍｌ２００ｍＭＬ−Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ（ＧＩＢＣＯ）、５ｍｌＰｅｎ−Ｓｔｒｅｐ（ＧＩＢＣＯ）、５ｍｌＳｏｄｉｕｍＰｙｒｕｖａｔｅ（ＧＩＢＣＯ）、０．５ｍｌ５０ｍＭ２−ＭＥ（ＳＩＧＭＡ）を含む。）。細胞を回収し、ＦｃＲＢｌｏｃｋｉｎｇＲｅａｇｅｎｔで４℃に２０分間処理した。洗浄後、さらに、１次抗体の５Ｂ７または１３Ｄ４で３Ｂ４、またはｍｏｕｓｅＩｇＧ２ｂ，κで４℃、１５分間染色した（各１０μｇ／ｍｌ）。ＰＢＭＣをキメラ３Ｂ４抗体（ｃｈ３Ｂ４）、キメラ３Ｄ４抗体（ｃｈ３Ｄ４）、またはキメラ１３Ｈ１１抗体（ｃｈ１３Ｈ１１）で処理したサンプルは５Ｂ７で染色し、キメラ５Ｂ７抗体（ｃｈ５Ｂ７）またはキメラ１１Ｇ９．６抗体（ｃｈ１１Ｇ９．６）で処理したサンプルは１３Ｄ４で染色した。ＡＤＣＣ用に処理した抗ＰＬＤ４抗体クローンと染色に用いた抗ＰＬＤ４抗体クローンは互いに拮抗しないことを確認済みである。抗ＰＬＤ４抗体の結合は、２次抗体のＰＥ標識−抗マウスＩｇで４℃に１５分間の処理により見出された。Ｂ細胞のゲーティングのために、ＡＰＣ標識−抗ヒトＣＤ１９抗体で４℃、１５分間で二重染色した（図４）。各抗PLD4キメラ抗体で処理されたＰＬＤ４陽性活性化Ｂ細胞集団をコントロール抗体処理したＰＬＤ４陽性活性化Ｂ細胞集団と比較した（図５）。その結果、すべての抗ＰＬＤ４キメラ抗体は、活性化したＰＬＤ４陽性Ｂ細胞をコントロールＩｇ処理よりも減少させた（コントロールＩｇで処理した場合を１００％とした時、ｃｈ３Ｂ４：７０．２％、ｃｈ１３Ｄ４：５６．０％、ｃｈ１３Ｈ１１：５５．３％、ｃｈ５Ｂ７：２５．８％、ｃｈ１１Ｇ９．６：６６．４％）。

実施例４
＜活性化Ｂ細胞に対する、抗ＰＬＤ４キメラ抗体の抑制効果＞
抗ヒトＰＬＤ４抗体のＢ細胞の活性化によるＢ細胞成熟化とイムノグロブリン産生に対する効果を測定するために、全血からのヒトＰＢＭＣをｃｈ３Ｂ４・ｃｈ５Ｂ７・ｃｈ１３Ｄ４・ｃｈ１３Ｈ１１・ｃｈ１１Ｇ９．６またはコントロールＩｇで２４時間処理した。そして、Ｂ細胞の活性化を誘導するために、ＰＢＭＣをさらにＣｐＧ２２１６（１μＭ）とヒトＩＬ−６存在下で培養し、その結果Ｂ細胞の成熟化が起きた。７日間の活性化Ｂ細胞の培養の結果、活性化Ｂ細胞の中のＣＤ１９陽性ＣＤ２７陽性ＩｇＤ陰性ＣＤ３８陽性形質芽細胞を、ＰＥ標識‐抗ヒトＣＤ１９抗体を用いたフローサイトメトリーで解析した。ヒトＩｇＧ産生を測定するために、培養された活性化Ｂ細胞は、ＰＢＳで二回洗った後、５０ｎｇ／ｍｌのＰＭＡ（ホルボールミリステートアセテート）で再度活性化された。二日後に、培養上清中のヒトＩｇＧ産生はＥＬＩＳＡで測定された。活性化Ｂ細胞中の形質芽細胞はコントロールＩｇ処理と比較して、ｃｈ３Ｂ４・ｃｈ５Ｂ７・ｃｈ１３Ｄ４・ｃｈ１３Ｈ１１又はｃｈ１１Ｇ９．６による処理で減少した（図６）。ヒトＩｇＧ産生も、コントロールＩｇ処理と比較して、ｃｈ３Ｂ４・ｃｈ５Ｂ７・ｃｈ１３Ｄ４・ｃｈ１３Ｈ１１又はｃｈ１１Ｇ９．６による処理で減少した（図７）。これらの結果は、ヒトＰＬＤ４キメラ抗体の処理により、活性化された抗体分泌ヒトＢ細胞が減少されたということを示していた。

上記実施例が示すように、抗ＰＬＤ４抗体は、活性化Ｂ細胞を認識及び抑制する。従って、免疫機能が関与する疾患（自己免疫疾患及びアレルギー性疾患）の予防及び治療に有用である。

＜本発明に係る抗ＰＬＤ４モノクローナル抗体の配列情報の説明＞
１. 抗PLD4マウス11G9.6抗体
得られた抗PLD4マウス11G9.6抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：７４、アミノ酸配列は配列番号：７５である。マウス11G9.6抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４である。
抗PLD4マウス11G9.6抗体の重鎖可変領域の核酸配列(504bp) [大文字: マウス 11G9.6VH 可変領域, 小文字: マウス IgG2b 重鎖定常領域](配列番号：７４)
ATGAGATCACAGTTCTCTATACAGTTACTGAGCACACAGAACCTCACCTTGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAACTGGTGAAGCCTGGGACTTCAGTGAAAATGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCGGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTTATCCTGGTAGTGATAGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACACTGACTGTAGACACATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGAGGAGGGTGGTTGGATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggc

マウス11G9.6抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列(168 a.a.) [大文字: マウス11G9.6VH 可変領域, 小文字: マウス IgG2b 重鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す(配列番号：７５)。

11G9.6抗体の重鎖可変領域のCDR1
SYWMH (配列番号：２)
11G9.6抗体の重鎖可変領域のCDR2
DIYPGSDSTNYNEKFKS (配列番号：３)
11G9.6抗体の重鎖可変領域のCDR3
GGWLDAMDY (配列番号：４)
得られた抗PLD4マウス11G9.6抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：３８、アミノ酸配列は配列番号：３９である。マウス11G9.6抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：４０、配列番号：４１、配列番号：４２である。
抗PLD4マウス11G9.6抗体の軽鎖可変領域の核酸配列(421bp)[大文字: マウス 11G9.6VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域] (配列番号：９４)
ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTACCAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGACAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGCAATTATTTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACTACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAGCAAGAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGGTAATACGCTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcaagggcgaat
マウス11G9.6抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列(140 a.a.) [大文字: マウス 11G9.6VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す(配列番号：９５)。

11G9.6抗体の軽鎖可変領域のCDR1
RASQDISNYLN (配列番号：５)
11G9.6抗体の軽鎖可変領域のCDR2
YTSRLHS (配列番号：６)
11G9.6抗体の軽鎖可変領域のCDR3
QQGNTLPW (配列番号：７)

２. 抗PLD4マウス3B4抗体
得られた抗PLD4マウス3B4抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：７６、アミノ酸配列は配列番号：７７である。マウス3B4抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０である。
抗PLD4マウス3B4抗体の重鎖可変領域の核酸配列(437bp) [大文字: マウス3B4VH 可変領域, 小文字: マウス IgG1 重鎖定常領域]
ATGGAATGTAACTGGATACTTCCTTTTATTCTGTCGGTAATTTCAGGGGTCTCCTCAGAGGTTCAGCTCCAGCAGTCTGGGACTGTGCTGTCAAGGCCTGGGGCTTCCGTGACGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGCGACAGCTTTACCACCTACTGGATGCACTGGGTAAAACAGAGGCCTGGACAGGGTCTAGAATGGATTGGTGCTATCTATCCTGGAAATAGTGAAACTAGCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCAAACTGACTGCAGTCACATCCGCCAGCACTGCCTATATGGAGTTCACTAGCCTGACAAATGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTACGGGGGGTTATTCCGACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCAgccaaaacgacacccccatctgtctatccact
マウス3B4抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列(145 a.a.) [大文字: マウス 3B4VH 可変領域, 小文字: マウス IgG1 重鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す。

3B4抗体の重鎖可変領域のCDR1
TYWMH
3B4抗体の重鎖可変領域のCDR2
AIYPGNSETSYNQKFKG
3B4抗体の重鎖可変領域のCDR3
GYSDFDY
得られた抗PLD4マウス3B4抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：９６、アミノ酸配列は配列番号：９７である。マウス3B4抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３である。
抗PLD4マウス3B4抗体の軽鎖可変領域の核酸配列(459bp)[大文字: マウス3B4VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]
ATGATGGTCCTTGCTCAGTTTCTTGCATTCTTGTTGCTTTGGTTTCCAGGTGCAGGATGTGACATCCTGATGACCCAATCTCCATCCTCCATGTCTGTATCTCTGGGAGACACAGTCAGCATCACTTGCCATGCAAGTCAGGGCATTAGAAGTAATATAGGGTGGTTGCAGCAGAAACCAGGGAAATCATTTAAGGGCCTGATCTTTCATGGAACCAACTTGGAAGATGGAGTTCCATCAAGGTTCAGTGGCAGAGGATCTGGAGCAGATTATTCTCTCACCATCAACAGCCTGGAATCTGAAGATTTTGCAGACTATTACTGTGTACAGTATGTTCAGTTTCCTCCAACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAGAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcagttaacatctggaggtgcctcagtcgtg
マウス3B4抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列(153 a.a.) [大文字: マウス 3B4VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す。

3B4抗体の軽鎖可変領域のCDR1
HASQGIRSNIG
3B4抗体の軽鎖可変領域のCDR2
HGTNLED
3B4抗体の軽鎖可変領域のCDR3
VQYVQFP

３. 抗PLD4マウス5B7抗体
得られた抗PLD4マウス5B7抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：７８、アミノ酸配列は配列番号：７９である。マウス5B7抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６である。
抗PLD4マウス5B7抗体の重鎖可変領域の核酸配列(475bp) [大文字: マウス5B7VH可変領域, 小文字: マウスIgG2b重鎖定常領域]
ATGGGATGGAGCTGGATCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGCGTCCACTCTGAGGTCCAGCTTCAGCAGTCAGGACCTGAACTGGTGAAACCTGGGGCCTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTACAACTTGCACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGATATATTTATCCTTACAATGGTAATACTGGCTACAACCAGAAGTTCAAGAGGAAGGCCACATTGACTGTAGACAATTCCTCCGGCACAGTCTACATGGAGCTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGAGGAGGGATCTATGATGATTACTACGACTATGCTATCGACTATTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggcgaat
マウス5B7抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列(158 a.a.) [大文字: マウス 5B7VH 可変領域, 小文字: マウス IgG2b 重鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す。

5B7抗体の重鎖可変領域のCDR1
DYNLH
5B7抗体の重鎖可変領域のCDR2
YIYPYNGNTGYNQKFKR
5B7抗体の重鎖可変領域のCDR3
GGIYDDYYDYAIDY
得られた抗PLD4マウス5B7抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：９８、アミノ酸配列は配列番号：９９である。マウス5B7抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：１７、配列番号：１８、配列番号：１９である。
抗PLD4マウス5B7抗体の軽鎖可変領域の核酸配列(467 bp)[大文字: マウス5B7VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]
ATGAGTGTGCCCACTCAGGTCCTGGGGTTGCTGCTGCTGTGGCTTACAGATGCCAGATGTGACATCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGTATCTGTGGGAGAAACTGTCGCCATCACATGTCGAGCAAGTGAGAATATTTACAGTCATATAGCATGGTATCAGCAGAAAGAGGGAAAATCTCCTCAGCGCCTGGTCTATGGTGCAACAAACTTAGCACATGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACACAGTATTCCCTCAAGATCAACAGCCTTCAGTCTGAAGATTTTGGGAGTTATTACTGTCAACATTTTTGGGGTACTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcagttaacatctggaggtgcctcagtcgtgtgcttctt
マウス5B7抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列(155 a.a.) [大文字: マウス 5B7VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す。

5B7抗体の軽鎖可変領域のCDR1
RASENIYSHIA
5B7抗体の軽鎖可変領域のCDR2
GATNLAH
5B7抗体の軽鎖可変領域のCDR3
QHFWGTP

４. 抗PLD4マウス7B4抗体
得られた抗PLD4マウス7B4抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：８０、アミノ酸配列は配列番号：８１である。マウス7B4抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６である。
抗PLD4マウス7B4抗体の重鎖可変領域の核酸配列(470bp) [大文字: マウス7B4VH可変領域, 小文字: マウスIgG2b重鎖定常領域]
ATGGGATGGAGCTGGATCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGCGTCCACTCTGAGGTCCAGCTTCAGCAGTCAGGACCTGAACTGGTGAAACCTGGGGCCTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTACAACTTGCACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGATATATTTATCCTTACAATGGTAATACTGGCTACAACCAGAAGTTCAAGAGGAAGGCCACATTGACTGTAGACAATTCCTCCGGCACAGTCTACATGGAGCTCCGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGAGGAGGGATCTATGATGATTACTACGACTATGCTATCGACTATTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaaggg
マウス7B4抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列(156 a.a.) [大文字: マウス 7B4VH 可変領域, 小文字: マウス IgG2b 重鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す。

7B4抗体の重鎖可変領域のCDR1
DYNLH
7B4抗体の重鎖可変領域のCDR2
YIYPYNGNTGYNQKFKR
7B4抗体の重鎖可変領域のCDR3
GGIYDDYYDYAIDY
得られた抗PLD4マウス7B4抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：１００、アミノ酸配列は配列番号：１０１である。マウス7B4抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：１７、配列番号：１８、配列番号：１９である。
抗PLD4マウス7B4抗体の軽鎖可変領域の核酸配列(454 bp)[大文字: マウス7B4VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]
ATGAGTGTGCCCACTCAGGTCCTGGGGTTGCTGCTGCTGTGGCTTACAGATGCCAGATGTGACATCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGTATCTGTGGGAGAAACTGTCGCCATCACATGTCGAGCAAGTGAGAATATTTACAGTCATATAGCATGGTATCAGCAGAAAGAGGGAAAATCTCCTCAGCGCCTGGTCTATGGTGCAACAAACTTAGCACATGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACACAGTATTCCCTCAAGATCAACAGCCTTCAGTCTGAAGATTTTGGGAGTTATTACTGTCAACATTTTTGGGGTACTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcagttaacatctggaggtgcctcag
マウス7B4抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列(151 a.a.) [大文字: マウス 7B4VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す。

7B4抗体の軽鎖可変領域のCDR1
RASENIYSHIA
7B4抗体の軽鎖可変領域のCDR2
GATNLAH
7B4抗体の軽鎖可変領域のCDR3
QHFWGTP

５. 抗PLD4マウス8C11抗体
得られた抗PLD4マウス8C11抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：８２、アミノ酸配列は配列番号：８３である。マウス8C11抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：２２である。
抗PLD4マウス8C11抗体の重鎖可変領域の核酸配列(462 bp) [大文字: マウス8C11VH 可変領域, 小文字: マウス IgG2b 重鎖定常領域]
ATGGGATGGAGCTATATCATCCTCTTTTTGGTAGCAACAGCAACAGGGGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCAGTCGGGGGCTGAACTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGTTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTATTTGTACTGGGTGAGGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGACTGATTAATCCTACCAATAGTGATACTATCTTCAATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACACTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCATACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTACACGAGAGGGGGGATATGGTTACGGCCCGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggc
マウス8C11抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列(154 a.a.) [大文字: マウス 8C11VH 可変領域, 小文字: マウス IgG2b 重鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す。

8C11抗体の重鎖可変領域のCDR1
SYYLY
8C11抗体の重鎖可変領域のCDR2
LINPTNSDTIFNEKFKS
8C11抗体の重鎖可変領域のCDR3
EGGYGYGPFAY
得られた抗PLD4マウス8C11抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：１０２、アミノ酸配列は配列番号：１０３である。マウス8C11抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：２３、配列番号：２４、配列番号：２５である。
抗PLD4マウス8C11抗体の軽鎖可変領域の核酸配列(457 bp)[大文字: マウス8C11VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]
ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGGATTCCTGCTTCCAGCAGTGATGTTGTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCACATCTAGTCAGACCCTTGTACACAGTAATGGAAACACCTATTTACATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTTCTGCTCTCACAGTACACATGTTCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcagttaacatctggag マウス8C11抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列(152 a.a.) [大文字: マウス 8C11VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す。

8C11抗体の軽鎖可変領域のCDR1
TSSQTLVHSNGNTYLH
8C11抗体の軽鎖可変領域のCDR2
KVSNRFS
8C11抗体の軽鎖可変領域のCDR3
HSTHVP

６. 抗PLD4マウス10C3抗体
得られた抗PLD4マウス10C3抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：８４、アミノ酸配列は配列番号：８５である。マウス10C3抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：２８である。
抗PLD4マウス10C3抗体の重鎖可変領域の核酸配列(450bp) [大文字: マウス10C3VH 可変領域, 小文字: マウス IgG2a 重鎖定常領域]
ATGAACTTCGGGCTCAGCTTGATTTTCCTTGCCCTCATTTTAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACTTAGTGAGGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCAGTTTCAGTAGCTATGGCATGTCTTGGTTTCGCCAGACTCCAGACAAGAGGCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTAGTGGTGGTAGTTACATCTACTATCCAGAAAGTGTGAAGGGGCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAGGAACATCCTGTACCTGCAAATGAGCAGTCTGAAGTCTGAGGACACAGCCATGTATTATTGTGTAAGACTCTACGGTGGTAGGAGAGGCTATGGTTTGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAgccaaaacaacagccccatcggtctatcca
マウス10C3抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列(150 a.a.) [大文字: マウス 10C3VH 可変領域, 小文字: マウス IgG2a 重鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す。

10C3抗体の重鎖可変領域のCDR1
SYGMS
10C3抗体の重鎖可変領域のCDR2
TISSGGSYIYYPESVKG
10C3抗体の重鎖可変領域のCDR3
LYGGRRGYGLDY
得られた抗PLD4マウス10C3抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：１０４、アミノ酸配列は配列番号：１０５である。マウス10C3抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：２９、配列番号：３０、配列番号：３１である。
抗PLD4マウス10C3抗体の軽鎖可変領域の核酸配列(423 bp)[大文字: マウス10C3VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]
ATGAGGTTCTCTGCTCAGCTTCTGGGGCTGCTTGTGCTCTGGATCCCTGGATCCACTGCGGAAATTGTGATGACGCAGGCTGCATTCTCCAATCCAGTCACTCTTGGAACATCAGCTTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTACATAGTGATGGCATCACTTATTTGTATTGGTATCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATTTATCAGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTAGCAGTGGGTCAGGAACTGATTTCACACTGAGAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTGCTCAAAATCTAGAACTTTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatc
マウス10C3抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列(141 a.a.) [大文字: マウス 10C3VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す。

10C3抗体の軽鎖可変領域のCDR1
RSSKSLLHSDGITYLY
10C3抗体の軽鎖可変領域のCDR2
QMSNLAS
10C3抗体の軽鎖可変領域のCDR3
AQNLEL

７. 抗PLD4マウス11D10抗体
得られた抗PLD4マウス11D10抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：８６、アミノ酸配列は配列番号：８７である。マウス11D10抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：２８である。
抗PLD4マウス11D10抗体の重鎖可変領域の核酸配列(450bp) [大文字: マウス11D10VH 可変領域, 小文字: マウス IgG2b 重鎖定常領域]
ATGAACTTCGGGCTCAGCTTGATTTTCCTTGCCCTCATTTTAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACTTAGTGAGGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCAGTTTCAGTAGCTATGGCATGTCTTGGTTTCGCCAGACTCCAGACAAGAGGCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTAGTGGTGGTAGTTACATCTACTATCCAGAAAGTGTGAAGGGGCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAGGAACATCCTGTACCTGCAAATGAGCAGTCTGAAGTCTGAGGACACAGCCATGTATTATTGTGTAAGACTCTACGGTGGTAGGAGAGGCTATGGTTTGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatcca
マウス11D10抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列(150 a.a.) [大文字: マウス 11D10VH 可変領域, 小文字: マウス IgG2b 重鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す。

11D10抗体の重鎖可変領域のCDR1
SYGMS
11D10抗体の重鎖可変領域のCDR2
TISSGGSYIYYPESVKG
11D10抗体の重鎖可変領域のCDR3
LYGGRRGYGLDY
得られた抗PLD4マウス11D10抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：１０６、アミノ酸配列は配列番号：１０７である。マウス11D10抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：２９、配列番号：３０、配列番号：３１である。
抗PLD4マウス11D10抗体の軽鎖可変領域の核酸配列(423 bp)[大文字: マウス11D10VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]
ATGAGGTTCTCTGCTCAGCTTCTGGGGCTGCTTGTGCTCTGGATCCCTGGATCCACTGCGGAAATTGTGATGACGCAGGCTGCATTCTCCAATCCAGTCACTCTTGGAACATCAGCTTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTACATAGTGATGGCATCACTTATTTGTATTGGTATCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATTTATCAGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTAGCAGTGGGTCAGGAACTGATTTCACACTGAGAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTGCTCAAAATCTAGAACTTTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatc
マウス11D10抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列(141 a.a.) [大文字: マウス 11D10VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す。

11D10抗体の軽鎖可変領域のCDR1
RSSKSLLHSDGITYLY
11D10抗体の軽鎖可変領域のCDR2
QMSNLAS
11D10抗体の軽鎖可変領域のCDR3
AQNLEL

８. 抗PLD4マウス13D4抗体
得られた抗PLD4マウス13D4抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：８８、アミノ酸配列は配列番号：８９である。マウス13D4抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：３２、配列番号：３３、配列番号：３４である。
抗PLD4マウス13D4抗体の重鎖可変領域の核酸配列(472bp) [大文字: マウス13D4VH 可変領域, 小文字: マウス IgG2b 重鎖定常領域]
ATGAAAGTGTTGAGTCTGTTGTACCTGTTGACAGCCATTCCTGGTATCCTGTCTGATGTACAGCTTCAGGAGTCAGGACCTGGCCTCGTGAAACCTTCTCAATCTCTGTCTCTCACCTGCTCTGTCACTGGCTACTCCATCACCAGTCATTATTACTGGACCTGGATCCGGCAGTTTCCAGGAAACAAACTGGAATGGATGGGCTACATAAGCTACGACGGTAGCAATAACTACAACCCATCTCTCAAAAATCGAATCTCCATCACTCGTGACACATCTAAGAACCAGTTTTTCCTGAAGTTGAATTCTGTGACTACTGAGGACACAGCTACATATAACTGTGCAAGAGAGGGCCCGCTCTACTATGGTAACCCCTACTGGTATTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggcg
マウス13D4抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列(157 a.a.) [大文字: マウス 13D4VH 可変領域, 小文字: マウス IgG2b 重鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す。

13D4抗体の重鎖可変領域のCDR1
SHYYWT
13D4抗体の重鎖可変領域のCDR2
YISYDGSNNYNPSLKN
13D4抗体の重鎖可変領域のCDR3
EGPLYYGNPYWYFDV
得られた抗PLD4マウス13D4抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：１０８、アミノ酸配列は配列番号：１０９である。マウス13D4抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：３５、配列番号：３６、配列番号：３７である。
抗PLD4マウス13D4抗体の軽鎖可変領域の核酸配列(404 bp)[大文字: マウス13D4VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]
ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTACCAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGGGACAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTGACAATTATTTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACTACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAGCAAGAAGATGTTGCCACTTACTTTTGCCAGCAGTTTAATACGCTTCCTCGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAACTGGAAATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgt
マウス13D4抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列(134 a.a.) [大文字: マウス 13D4VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す。

13D4抗体の軽鎖可変領域のCDR1
RASQDIDNYLN
13D4抗体の軽鎖可変領域のCDR2
YTSRLHS
13D4抗体の軽鎖可変領域のCDR3
QQFNTLP

９. 抗PLD4マウス13H11抗体
得られた抗PLD4マウス13H11抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：９０、アミノ酸配列は配列番号：９１である。マウス13H11抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０である。
抗PLD4マウス13H11抗体の重鎖可変領域の核酸配列(471bp) [大文字: マウス13H11VH 可変領域, 小文字: マウス IgG2b 重鎖定常領域]
ATGAAAGTGTTGAGTCTGTTGTACCTGTTGACAGCCATTCCTGGTATCCTGTCTGATGTACAGCTTCAGGAGTCAGGACCTGGCCTCGTGAAACCTTCTCAGTCTCTGTCTCTCACCTGCTCTGTCACTGGCTACTCCATCTCCAGTCATTATTACTGGAGTTGGATCCGGCAGTTTCCAGGAAACAGACTGGAATGGATGGGCTACATAAGCTACGACGGTAGCAATAACTACAACCCATCTCTCAAAAATCGAATCTCCATCACTCGTGACACATCTAAGAACCAGTTTTTCCTGAAGTTGAATTCTGTGACTACTGAGGACACAGCTACATATAACTGTGCAAGAGAGGGCCCGCTCTACTATGGTAACCCCTACTGGTATTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggc

マウス13H11抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列(157 a.a.) [大文字: マウス 13H11VH 可変領域, 小文字: マウス IgG2b 重鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す。

13H11抗体の重鎖可変領域のCDR1
SHYYWS
13H11抗体の重鎖可変領域のCDR2
YISYDGSNNYNPSLKN
13H11抗体の重鎖可変領域のCDR3
EGPLYYGNPYWYFDV
得られた抗PLD4マウス13H11抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：１１０、アミノ酸配列は配列番号：１１１である。マウス13H11抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３である。
抗PLD4マウス13H11抗体の軽鎖可変領域の核酸配列(414 bp)[大文字: マウス13H11VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]
ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTACCAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGGGGCAGCGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTGACAATTATTTAAACTGGTATCAGCAAAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACTACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAACAAGAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGTTTAATACGCTTCCTCGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttc
マウス13H11抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列(138 a.a.) [大文字: マウス 13H11VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す。

13H11抗体の軽鎖可変領域のCDR1
RASQDIDNYLN
13H11抗体の軽鎖可変領域のCDR2
YTSRLHS
13H11抗体の軽鎖可変領域のCDR3
QQFNTLP

１０. 抗PLD4マウス14C1抗体
得られた抗PLD4マウス14C1抗体の重鎖可変領域の核酸配列は配列番号：９２、アミノ酸配列は配列番号：９３である。マウス14C1抗体の重鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０である。
抗PLD4マウス14C1抗体の重鎖可変領域の核酸配列(470bp) [大文字: マウス14C1VH 可変領域, 小文字: マウス IgG1 重鎖定常領域]
ATGAAAGTGTTGAGTCTGTTGTACCTGTTGACAGCCATTCCTGGTATCCTGTCTGATGTACAGCTTCAGGAGTCAGGACCTGGCCTCGTGAAACCTTCTCAGTCTCTGTCTCTCACCTGCTCTGTCACTGGCTACTCCATCTCCAGTCATTATTACTGGAGTTGGATCCGGCAGTTTCCAGGAAACAGACTGGAATGGATGGGCTACATAAGCTACGACGGTAGCAATAACTACAACCCATCTCTCAAAAATCGAATCTCCATCACTCGTGACACATCTAAGAACCAGTTTTTCCTGAAGTTGAATTCTGTGACTACTGAGGACACAGCTACATATAACTGTGCAAGAGAGGGCCCGCTCTACTATGGTAACCCCTACTGGTATTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAgccaaaacgacacccccatctgtctatccactggcccctaaggg

マウス14C1抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列(156 a.a.) [大文字: マウス 14C1VH 可変領域, 小文字: マウス IgG1 重鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す。

14C1抗体の重鎖可変領域のCDR1
SHYYWS
14C1抗体の重鎖可変領域のCDR2
YISYDGSNNYNPSLKN
14C1抗体の重鎖可変領域のCDR3
EGPLYYGNPYWYFDV
得られた抗PLD4マウス14C1抗体の軽鎖可変領域の核酸配列は配列番号：１１２、アミノ酸配列は配列番号：１１３である。マウス14C1抗体の軽鎖可変領域内のCDR1、CDR2、CDR3のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３である。
抗PLD4マウス14C1抗体の軽鎖可変領域の核酸配列(465 bp)[大文字: マウス14C1VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]
ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTACCAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGGGGCAGCGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTGACAATTATTTAAACTGGTATCAGCAAAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACTACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAACAAGAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGTTTAATACGCTTCCTCGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcagttaacatctggaggtgcctcagtcgtgtgcttc
マウス14C1抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列(155 a.a.) [大文字: マウス 14C1VL 可変領域, 小文字: マウス Ig κ 軽鎖定常領域]下線の配列はシグナル配列、二重下線はCDR 領域(CDR1, CDR2, CDR3)を示す。

14C1抗体の軽鎖可変領域のCDR1
RASQDIDNYLN
14C1抗体の軽鎖可変領域のCDR2
YTSRLHS
14C1抗体の軽鎖可変領域のCDR3
QQFNTLP

作製されたキメラ11G9.6抗体の重鎖、及び軽鎖の塩基配列とアミノ酸配列は、それぞれ次の配列番号の通りである。
重鎖軽鎖
配列番号：１２０（塩基配列）配列番号：１２２（塩基配列）
配列番号：１２１（アミノ酸配列）配列番号：１２３（アミノ酸配列）

１１. 抗PLD4キメラ11G9.6抗体の重鎖の核酸配列 (1401 bp) [大文字: chimeric 11G9VH 可変領域, 小文字: ヒトIgG1 重鎖定常領域]（配列番号：１２０）
ATGAAAGTGTTGAGTCTGTTGTACCTGTTGACAGCCATTCCTGGTATCCTGTCTcagGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAACTGGTGAAGCCTGGGACTTCAGTGAAAATGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCGGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTTATCCTGGTAGTGATAGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACACTGACTGTAGACACATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGAGGAGGGTGGTTGGATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAgctagcaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatga

１２. 抗PLD4キメラ11G9.6抗体の重鎖のアミノ酸配列 (466 a.a.) [大文字: chimeric 11G9VH 可変領域, 小文字: ヒトIgG1 重鎖定常領域]（配列番号：１２１）
MKVLSLLYLLTAIPGILSQVQLQQPGAELVKPGTSVKMSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGDIYPGSDSTNYNEKFKSKATLTVDTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGWLDAMDYWGQGTSVTVSSastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

１３. 抗PLD4キメラ11G9.6抗体の軽鎖の核酸配列 (705 bp) [大文字: chimeric 11G9VL 可変領域, 小文字: ヒトIg κ 軽鎖定常領域]（配列番号：１２２）
ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTACCAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGACAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGCAATTATTTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACTACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAGCAAGAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGGTAATACGCTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAAcgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgctag

１４. 抗PLD4キメラ11G9.6抗体の軽鎖のアミノ酸配列 (234 a.a.) [大文字: chimeric 11G9VL 可変領域, 小文字: ヒトIg κ 軽鎖定常領域] （配列番号：１２３）
MMSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFGGGTKLEIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

＜PLD4関連分子のcDNAとタンパク質配列＞
> ヒトPLD4 cDNA (1521 bp)（配列番号：４４）
ATGCTGAAGCCTCTTTGGAAAGCAGCAGTGGCCCCCACATGGCCATGCTCCATGCCGCCCCGCCGCCCGTGGGACAGAGAGGCTGGCACGTTGCAGGTCCTGGGAGCGCTGGCTGTGCTGTGGCTGGGCTCCGTGGCTCTTATCTGCCTCCTGTGGCAAGTGCCCCGTCCTCCCACCTGGGGCCAGGTGCAGCCCAAGGACGTGCCCAGGTCCTGGGAGCATGGCTCCAGCCCAGCTTGGGAGCCCCTGGAAGCAGAGGCCAGGCAGCAGAGGGACTCCTGCCAGCTTGTCCTTGTGGAAAGCATCCCCCAGGACCTGCCATCTGCAGCCGGCAGCCCCTCTGCCCAGCCTCTGGGCCAGGCCTGGCTGCAGCTGCTGGACACTGCCCAGGAGAGCGTCCACGTGGCTTCATACTACTGGTCCCTCACAGGGCCTGACATCGGGGTCAACGACTCGTCTTCCCAGCTGGGAGAGGCTCTTCTGCAGAAGCTGCAGCAGCTGCTGGGCAGGAACATTTCCCTGGCTGTGGCCACCAGCAGCCCGACACTGGCCAGGACATCCACCGACCTGCAGGTTCTGGCTGCCCGAGGTGCCCATGTACGACAGGTGCCCATGGGGCGGCTCACCAGGGGTGTTTTGCACTCCAAATTCTGGGTTGTGGATGGACGGCACATATACATGGGCAGTGCCAACATGGACTGGCGGTCTCTGACGCAGGTGAAGGAGCTTGGCGCTGTCATCTATAACTGCAGCCACCTGGCCCAAGACCTGGAGAAGACCTTCCAGACCTACTGGGTACTGGGGGTGCCCAAGGCTGTCCTCCCCAAAACCTGGCCTCAGAACTTCTCATCTCACTTCAACCGTTTCCAGCCCTTCCACGGCCTCTTTGATGGGGTGCCCACCACTGCCTACTTCTCAGCGTCGCCACCAGCACTCTGTCCCCAGGGCCGCACCCGGGACCTGGAGGCGCTGCTGGCGGTGATGGGGAGCGCCCAGGAGTTCATCTATGCCTCCGTGATGGAGTATTTCCCCACCACGCGCTTCAGCCACCCCCCGAGGTACTGGCCGGTGCTGGACAACGCGCTGCGGGCGGCAGCCTTCGGCAAGGGCGTGCGCGTGCGCCTGCTGGTCGGCTGCGGACTCAACACGGACCCCACCATGTTCCCCTACCTGCGGTCCCTGCAGGCGCTCAGCAACCCCGCGGCCAACGTCTCTGTGGACGTGAAAGTCTTCATCGTGCCGGTGGGGAACCATTCCAACATCCCATTCAGCAGGGTGAACCACAGCAAGTTCATGGTCACGGAGAAGGCAGCCTACATAGGCACCTCCAACTGGTCGGAGGATTACTTCAGCAGCACGGCGGGGGTGGGCTTGGTGGTCACCCAGAGCCCTGGCGCGCAGCCCGCGGGGGCCACGGTGCAGGAGCAGCTGCGGCAGCTCTTTGAGCGGGACTGGAGTTCGCGCTACGCCGTCGGCCTGGACGGACAGGCTCCGGGCCAGGACTGCGTTTGGCAGGGCTGA
> ヒト PLD4 タンパク質 (506 アミノ酸) （配列番号：１）
MLKPLWKAAVAPTWPCSMPPRRPWDREAGTLQVLGALAVLWLGSVALICLLWQVPRPPTWGQVQPKDVPRSWEHGSSPAWEPLEAEARQQRDSCQLVLVESIPQDLPSAAGSPSAQPLGQAWLQLLDTAQESVHVASYYWSLTGPDIGVNDSSSQLGEALLQKLQQLLGRNISLAVATSSPTLARTSTDLQVLAARGAHVRQVPMGRLTRGVLHSKFWVVDGRHIYMGSANMDWRSLTQVKELGAVIYNCSHLAQDLEKTFQTYWVLGVPKAVLPKTWPQNFSSHFNRFQPFHGLFDGVPTTAYFSASPPALCPQGRTRDLEALLAVMGSAQEFIYASVMEYFPTTRFSHPPRYWPVLDNALRAAAFGKGVRVRLLVGCGLNTDPTMFPYLRSLQALSNPAANVSVDVKVFIVPVGNHSNIPFSRVNHSKFMVTEKAAYIGTSNWSEDYFSSTAGVGLVVTQSPGAQPAGATVQEQLRQLFERDWSSRYAVGLDGQAPGQDCVWQG
> カニクイザル PLD4 cDNA (1521 bp) （配列番号：６３）
ATGCTGAAGCCTCTTCGGAGAGCgGCAGTGACCCCCATGTGGCCGTGCTCCATGCTGCCCCGCCGCCTGTGGGACAGAGAGGCTGGCACGTTGCAGGTCCTGGGAGTGCTGGCTATGCTGTGGCTGGGCTCCATGGCTCTTACCTACCTCCTGTGGCAAGTGCGCCGTCCTCCCACCTGGGGCCAGGTGCAGCCCAAGGACGTGCCCAGGTCCTGGGGGCATGGTTCCAGCCCAGCTCTGGAGCCCCTGGAAGCGGAGGTCAGGAAGCAGAGGGACTCCTGCCAGCTTGTCCTTGTGGAAAGCATCCCCCAGGACCTGCCATTTGCAGCCGGCAGCCTCTCCGCCCAGCCTCTGGGCCAGGCCTGGCTGCAGCTGCTGGACACTGCCCAGGAGAGCGTCCACGTGGCTTCATACTACTGGTCCCTCACAGGGCCCGACATTGGGGTCAACGACTCATCTTCCCAGCTGGGAGAGGCCCTTCTGCAGAAGCTGCAGCAGCTGCTGGGCAGGAACATTTCCTTGGCTGTGGCCACCAGCAGTCCAACACTGGCCAGGAAGTCCACCGACCTGCAGGTCCTGGCTGCCCGAGGTGCCCAGGTACGACGGGTGCCCATGGGGCGGCTCACCAGGGGCGTTTTGCACTCCAAATTCTGGGTTGTGGATGGACgGCACATATACATGGGCAGTGCcAACATGGACTGGCGGTCCCTGACGCAGGTGAAGGAGCTTGGCGCTGTCATCTATAACTGCAGCCACCTGGCCCAAGACCTGGAGAAGACCTTCCAGACCTACTGGGTGCTGGGGGTGCCCAAGGCTGTCCTCCCCAAAACCTGGCCTCAGAACTTCTCATCTCACATCAACCGTTTCCAGCCCTTCCAGGGCCTCTTTGATGGGGTGCCCACCACTGCCTACTTCTCAGCATCGCCACCcGCACTCTGTCCCCAGGGCCGCACCCCTGACCTGGAGGCGCTGTTGGCGGTGATGGGGAGCGCCCAGGAGTTCATCTATGCCTCCGTGATGGAGTATTTCCCTACCACgCGCTTCAGCCACCCCCGCAGGTACTGGCCGGTGCTGGACAACGCGCTGCGGGCGGCAGCCTTCAGCAAGGGTGTGCGCGTGCGCCTGCTGGTCAGCTGCGGACTCAACACGGACCCCACCATGTTCCCCTATCTGCGGTCCCTGCAGGCGCTCAGCAACCCCGCGGCCAACGTCTCTGTGGACGTGAAAGTCTTCATCGTGCCGGTGGGGAATCATTCCAACATCCCGTTCAGCAGGGTGAACCACAGCAAGTTCATGGTCACGGAGAAGGCAGCCTACATAGGCACCTCCAACTGGTCGGAGGATTACTTCAGCAGCACGACGGGGGTGGGCCTGGTGGTCACCCAGAGCCCCGGCGCGCAGCCCGCGGGGGCCACGGTACAGGAGCAGCTGCGGCAGCTCTTTGAGCGGGACTGGAGTTCGCGCTACGCCGTCGGCCTGGACGGACAGGCTCCGGGCCAGGACTGCGTTTGGCAGGGCTGA

> カニクイザル PLD4 タンパク質 (506 アミノ酸) （配列番号：１２９）
MLKPLRRAAVTPMWPCSMLPRRLWDREAGTLQVLGVLAMLWLGSMALTYLLWQVRRPPTWGQVQPKDVPRSWGHGSSPALEPLEAEVRKQRDSCQLVLVESIPQDLPFAAGSLSAQPLGQAWLQLLDTAQESVHVASYYWSLTGPDIGVNDSSSQLGEALLQKLQQLLGRNISLAVATSSPTLARKSTDLQVLAARGAQVRRVPMGRLTRGVLHSKFWVVDGRHIYMGSANMDWRSLTQVKELGAVIYNCSHLAQDLEKTFQTYWVLGVPKAVLPKTWPQNFSSHINRFQPFQGLFDGVPTTAYFSASPPALCPQGRTPDLEALLAVMGSAQEFIYASVMEYFPTTRFSHPRRYWPVLDNALRAAAFSKGVRVRLLVSCGLNTDPTMFPYLRSLQALSNPAANVSVDVKVFIVPVGNHSNIPFSRVNHSKFMVTEKAAYIGTSNWSEDYFSSTTGVGLVVTQSPGAQPAGATVQEQLRQLFERDWSSRYAVGLDGQAPGQDCVWQG

> アカゲザル PLD4 cDNA (1521 bp) （配列番号：１２４）
ATGCTGAAGCCTCTTCGGAGAGCGGCAGTGACCCCCATGTGGCCGTGCTCCATGCTGCCCCGCCGCCTGTGGGACAGAGAGGCTGGCACGTTGCAGGTCCTGGGAGTGCTGGCTATGCTGTGGCTGGGCTCCATGGCTCTTACCTACCTCCTGTGGCAAGTGCGCTGTCCTCCCACCTGGGGCCAGGTGCAGCCCAGGGACGTGCCCAGGTCCTGGGGGCATGGTTCCAGCCTAGCTCTGGAGCCCCTGGAAGCGGAGGTCAGGAAGCAGAGGGACTCCTGCCAGCTTGTCCTTGTGGAAAGCATCCCCCAGGACCTGCCATTTGCAGCCGGCAGCCTCTCCGCCCAGCCTCTGGGCCAGGCCTGGCTGCAGCTGCTGGACACTGCCCAGGAGAGCGTCCACGTGGCTTCATACTACTGGTCCCTCACAGGGCCCGACATTGGGGTCAACGACTCATCTTCCCAGCTGGGAGAGGCCCTTCTGCAGAAGCTGCAGCAGCTGCTGGGCAGGAACATTTCCTTGGCTGTGGCCACCAGCAGTCCAACACTGGCCAGGAAGTCCACCGACCTGCAGGTCCTGGCTGCCCGAGGTGCCCAGGTACGACGGGTGCCCATGGGGCGGCTCACCAGGGGCGTTTTGCACTCCAAATTCTGGGTTGTGGATGGACGGCACATATACATGGGCAGTGCCAACATGGACTGGCGGTCCCTGACGCAGGTGAAGGAGCTTGGCGCTGTCATCTATAACTGCAGCCACCTGGCCCAAGACCTGGAGAAGACCTTCCAGACCTACTGGGTGCTGGGGGTGCCCAAGGCTGTCCTCCCCAAAACCTGGCCTCAGAACTTCTCATCTCACATCAACCGTTTCCAGCCCTTCCAGGGCCTCTTTGATGGGGTGCCCACCACTGCCTACTTCTCAGCATCGCCACCCGCACTCTGTCCCCAGGGCCGCACCCCTGACCTGGAGGCGCTGTTGGCGGTGATGGGGAGCGCCCAGGAGTTCATCTATGCCTCCGTGATGGAGTATTTCCCTACCACGCGCTTCAGCCACCCCCGCAGGTACTGGCCGGTGCTGGACAACGCGCTGCGGGCGGCAGCCTTCAGCAAGGGTGTGCGCGTGCGCCTGCTGGTCAGCTGCGGACTCAACACGGACCCCACCATGTTCCCCTATCTGCGGTCCCTGCAGGCGCTCAGCAACCCCGCGGCCAACGTCTCTGTGGACGTGAAAGTCTTCATCGTGCCGGTGGGGAATCATTCCAACATCCCGTTCAGCAGGGTGAACCACAGCAAGTTCATGGTCACGGAGAAGGCAGCCTACATAGGCACCTCCAACTGGTCGGAGGATTACTTCAGCAGCACGACGGGGGTGGGCCTGGTGGTCACCCAGAGCCCCGGCGCGCAGCCCGCGGGGGCCACGGTACAGGAGCAGCTGCGGCAGCTCTTTGAGCGGGACTGGAGTTCGCGCTACGCCGTCGGCCTGGACGGACAGGCTCCGGGCCAGGACTGCGTTTGGCAGGGCTGA

> アカゲザル PLD4 タンパク質 (506 アミノ酸) （配列番号：１３０）
MLKPLRRAAVTPMWPCSMLPRRLWDREAGTLQVLGVLAMLWLGSMALTYLLWQVRCPPTWGQVQPRDVPRSWGHGSSLALEPLEAEVRKQRDSCQLVLVESIPQDLPFAAGSLSAQPLGQAWLQLLDTAQESVHVASYYWSLTGPDIGVNDSSSQLGEALLQKLQQLLGRNISLAVATSSPTLARKSTDLQVLAARGAQVRRVPMGRLTRGVLHSKFWVVDGRHIYMGSANMDWRSLTQVKELGAVIYNCSHLAQDLEKTFQTYWVLGVPKAVLPKTWPQNFSSHINRFQPFQGLFDGVPTTAYFSASPPALCPQGRTPDLEALLAVMGSAQEFIYASVMEYFPTTRFSHPRRYWPVLDNALRAAAFSKGVRVRLLVSCGLNTDPTMFPYLRSLQALSNPAANVSVDVKVFIVPVGNHSNIPFSRVNHSKFMVTEKAAYIGTSNWSEDYFSSTTGVGLVVTQSPGAQPAGATVQEQLRQLFERDWSSRYAVGLDGQAPGQDCVWQG

> マウス PLD4 cDNA (1512 塩基対) （配列番号：１３１）
ATGGACAAGAAGAAAGAGCACCCAGAGATGCGGATACCACTCCAGACAGCAGTGGAGGTCTCTGATTGGCCCTGCTCCACATCTCATGATCCACATAGCGGACTTGGCATGGTACTGGGGATGCTAGCTGTACTGGGACTCAGCTCTGTGACTCTCATCTTGTTCCTGTGGCAAGGGGCCACTTCTTTCACCAGTCATCGGATGTTCCCTGAGGAAGTGCCCTCCTGGTCCTGGGAGACCCTGAAAGGAGACGCTGAGCAGCAGAATAACTCCTGTCAGCTCATCCTTGTGGAAAGCATCCCCGAGGACTTGCCATTTGCAGCTGGCAGCCCCACTGCCCAGCCCCTGGCCCAGGCTTGGCTGCAGCTTCTTGACACTGCTCGGGAGAGCGTCCACATTGCCTCGTACTACTGGTCCCTCACTGGACTGGACATTGGAGTCAATGACTCGTCTTCTCGGCAGGGAGAGGCCCTTCTACAGAAGTTCCAACAGCTTCTTCTCAGGAACATCTCTGTGGTGGTGGCCACCCACAGCCCAACATTGGCCAAGACATCCACTGACCTCCAGGTCTTGGCTGCCCATGGTGCCCAGATACGACAAGTGCCCATGAAACAGCTTACTGGGGGTGTTCTACACTCCAAATTCTGGGTTGTGGATGGGCGACACGTCTACGTGGGCAGCGCCAACATGGACTGGCGGTCCCTGACTCAGGTGAAGGAACTTGGTGCAATCATCTACAACTGCAGCAACCTGGCTCAAGACCTTGAGAAAACATTCCAGACCTACTGGGTGCTAGGGACTCCCCAAGCTGTTCTCCCTAAAACCTGGCCTCGGAACTTCTCATCCCACATCAACCGCTTCCATCCCTTGCGGGGTCCCTTTGATGGGGTTCCCACCACGGCCTATTTCTCGGCCTCCCCTCCCTCCCTCTGCCCGCATGGCCGGACCCGGGATCTGGACGCAGTGTTGGGAGTGATGGAGGGTGCTCGCCAGTTCATCTATGTCTCGGTGATGGAGTATTTCCCTACCACGCGCTTCACCCACCATGCCAGGTACTGGCCCGTGCTGGACAATGCGCTACGGGCAGCGGCCCTCAATAAGGGTGTGCATGTGCGCTTACTGGTCAGCTGCTGGTTCAACACAGACCCCACCATGTTCGCTTATCTGAGGTCCCTGCAGGCTTTCAGTAACCCCTCGGCTGGCATCTCAGTGGATGTGAAAGTCTTCATCGTGCCTGTGGGAAATCATTCCAACATCCCGTTCAGCCGCGTGAACCACAGCAAGTTCATGGTCACAGACAAGACAGCCTATGTAGGCACCTCTAACTGGTCAGAAGACTACTTCAGCCACACCGCTGGTGTGGGCCTGATTGTCAGCCAGAAGACCCCCAGAGCCCAGCCAGGCGCAACCACCGTGCAGGAGCAGCTGAGGCAACTCTTTGAACGAGACTGGAGTTCCCACTATGCTATGGACCTAGACAGACAAGTCCCGAGCCAGGACTGTGTCTGGTAG

> マウス PLD4 タンパク質 (503 アミノ酸) （配列番号：１３２）
MDKKKEHPEMRIPLQTAVEVSDWPCSTSHDPHSGLGMVLGMLAVLGLSSVTLILFLWQGATSFTSHRMFPEEVPSWSWETLKGDAEQQNNSCQLILVESIPEDLPFAAGSPTAQPLAQAWLQLLDTARESVHIASYYWSLTGLDIGVNDSSSRQGEALLQKFQQLLLRNISVVVATHSPTLAKTSTDLQVLAAHGAQIRQVPMKQLTGGVLHSKFWVVDGRHVYVGSANMDWRSLTQVKELGAIIYNCSNLAQDLEKTFQTYWVLGTPQAVLPKTWPRNFSSHINRFHPLRGPFDGVPTTAYFSASPPSLCPHGRTRDLDAVLGVMEGARQFIYVSVMEYFPTTRFTHHARYWPVLDNALRAAALNKGVHVRLLVSCWFNTDPTMFAYLRSLQAFSNPSAGISVDVKVFIVPVGNHSNIPFSRVNHSKFMVTDKTAYVGTSNWSEDYFSHTAGVGLIVSQKTPRAQPGATTVQEQLRQLFERDWSSHYAMDLDRQVPSQDCVW

> ヒト PLD3 cDNA 配列（配列番号：５５）
ATGAAGCCTAAACTGATGTACCAGGAGCTGAAGGTGCCTGCAGAGGAGCCCGCCAATGAGCTGCCCATGAATGAGATTGAGGCGTGGAAGGCTGCGGAAAAGAAAGCCCGCTGGGTCCTGCTGGTCCTCATTCTGGCGGTTGTGGGCTTCGGAGCCCTGATGACTCAGCTGTTTCTATGGGAATACGGCGACTTGCATCTCTTTGGGCCCAACCAGCGCCCAGCCCCCTGCTATGACCCTTGCGAAGCAGTGCTGGTGGAAAGCATTCCTGAGGGCCTGGACTTCCCCAATGCCTCCACGGGGAACCCTTCCACCAGCCAGGCCTGGCTGGGCCTGCTCGCCGGTGCGCACAGCAGCCTGGACATCGCCTCCTTCTACTGGACCCTCACCAACAATGACACCCACACGCAGGAGCCCTCTGCCCAGCAGGGTGAGGAGGTCCTCCGGCAGCTGCAGACCCTGGCACCAAAGGGCGTGAACGTCCGCATCGCTGTGAGCAAGCCCAGCGGGCCCCAGCCACAGGCGGACCTGCAGGCTCTGCTGCAGAGCGGTGCCCAGGTCCGCATGGTGGACATGCAGAAGCTGACCCATGGCGTCCTGCATACCAAGTTCTGGGTGGTGGACCAGACCCACTTCTACCTGGGCAGTGCCAACATGGACTGGCGTTCACTGACCCAGGTCAAGGAGCTGGGCGTGGTCATGTACAACTGCAGCTGCCTGGCTCGAGACCTGACCAAGATCTTTGAGGCCTACTGGTTCCTGGGCCAGGCAGGCAGCTCCATCCCATCAACTTGGCCCCGGTTCTATGACACCCGCTACAACCAAGAGACACCAATGGAGATCTGCCTCAATGGAACCCCTGCTCTGGCCTACCTGGCGAGTGCGCCCCCACCCCTGTGTCCAAGTGGCCGCACTCCAGACCTGAAGGCTCTACTCAACGTGGTGGACAATGCCCGGAGTTTCATCTACGTCGCTGTCATGAACTACCTGCCCACTCTGGAGTTCTCCCACCCTCACAGGTTCTGGCCTGCCATTGACGATGGGCTGCGGCGGGCCACCTACGAGCGTGGCGTCAAGGTGCGCCTGCTCATCAGCTGCTGGGGACACTCGGAGCCATCCATGCGGGCCTTCCTGCTCTCTCTGGCTGCCCTGCGTGACAACCATACCCACTCTGACATCCAGGTGAAACTCTTTGTGGTCCCCGCGGATGAGGCCCAGGCTCGAATCCCATATGCCCGTGTCAACCACAACAAGTACATGGTGACTGAACGCGCCACCTACATCGGAACCTCCAACTGGTCTGGCAACTACTTCACGGAGACGGCGGGCACCTCGCTGCTGGTGACGCAGAATGGGAGGGGCGGCCTGCGGAGCCAGCTGGAGGCCATTTTCCTGAGGGACTGGGACTCCCCTTACAGCCATGACCTTGACACCTCAGCTGACAGCGTGGGCAACGCCTGCCGCCTGCTCTGA

> ヒト PLD3 タンパク質 (490 アミノ酸) （配列番号：１２７）
MKPKLMYQELKVPAEEPANELPMNEIEAWKAAEKKARWVLLVLILAVVGFGALMTQLFLWEYGDLHLFGPNQRPAPCYDPCEAVLVESIPEGLDFPNASTGNPSTSQAWLGLLAGAHSSLDIASFYWTLTNNDTHTQEPSAQQGEEVLRQLQTLAPKGVNVRIAVSKPSGPQPQADLQALLQSGAQVRMVDMQKLTHGVLHTKFWVVDQTHFYLGSANMDWRSLTQVKELGVVMYNCSCLARDLTKIFEAYWFLGQAGSSIPSTWPRFYDTRYNQETPMEICLNGTPALAYLASAPPPLCPSGRTPDLKALLNVVDNARSFIYVAVMNYLPTLEFSHPHRFWPAIDDGLRRATYERGVKVRLLISCWGHSEPSMRAFLLSLAALRDNHTHSDIQVKLFVVPADEAQARIPYARVNHNKYMVTERATYIGTSNWSGNYFTETAGTSLLVTQNGRGGLRSQLEAIFLRDWDSPYSHDLDTSADSVGNACRLL

> ヒト PLD5 cDNA (1338 塩基対) （配列番号：５６）
ATGGGAGAGGATGAGGATGGACTCTCAGAAAAAAATTGCCAAAATAAATGTCGAATTGCCCTGGTGGAAAATATTCCTGAAGGCCTTAACTATTCAGAAAATGCACCATTTCACTTATCACTTTTCCAAGGCTGGATGAATTTACTCAACATGGCCAAAAAGTCTGTTGACATAGTGTCTTCCCATTGGGATCTCAACCACACTCATCCATCAGCATGTCAGGGTCAACGTCTTTTTGAAAAGTTGCTCCAGCTGACTTCGCAAAATATTGAAATCAAGCTAGTGAGTGATGTAACAGCTGATTCAAAGGTATTAGAAGCCTTGAAATTAAAGGGAGCCGAGGTGACGTACATGAACATGACCGCTTACAACAAGGGCCGGCTGCAGTCCTCCTTCTGGATCGTGGACAAACAGCACGTGTATATCGGCAGTGCCGGTTTGGACTGGCAATCCCTGGGACAGATGAAAGAACTCGGTGTCATCTTCTACAACTGCAGCTGCCTGGTCCTAGATTTACAAAGGATATTTGCTCTATATAGTTCATTAAAATTCAAAAGCAGAGTGCCTCAAACCTGGTCCAAAAGACTCTATGGAGTCTATGACAATGAAAAGAAATTGCAACTTCAGTTGAATGAAACCAAATCTCAAGCATTTGTATCGAATTCTCCAAAACTCTTTTGCCCTAAAAACAGAAGTTTTGACATAGATGCCATCTACAGTGTGATAGATGATGCCAAGCAGTATGTGTACATCGCTGTCATGGACTACCTGCCTATCTCCAGCACAAGCACCAAAAGGACTTACTGGCCAGACTTGGATGCAAAAATAAGAGAAGCATTAGTTTTACGAAGCGTTAGAGTTCGACTCCTTTTAAGCTTCTGGAAGGAAACTGATCCCCTTACGTTTAACTTTATTTCATCTCTTAAAGCGATTTGCACTGAAATAGCCAACTGCAGTTTGAAAGTTAAATTTTTTGATCTGGAAAGAGAGAATGCTTGTGCTACAAAAGAACAAAAGAATCACACCTTTCCTAGGTTAAATCGCAACAAGTACATGGTGACAGATGGAGCAGCTTATATTGGAAATTTTGATTGGGTAGGGAATGATTTCACTCAGAATGCTGGCACGGGCCTTGTTATCAACCAGGCAGATGTGAGGAACAACAGAAGCATCATTAAGCAACTTAAAGATGTGTTTGAAAGGGACTGGTATTCACCGTATGCCAAAACCTTACAGCCAACCAAACAGCCGAACTGCTCAAGCCTGTTCAAACTCAAACCCCTCTCCAACAAAACTGCCACAGACGACACAGGCGGAAAGGATCCCCGGAACGTATGA

> ヒト PLD5 タンパク質 (445 アミノ酸) （配列番号：１２８）
MGEDEDGLSEKNCQNKCRIALVENIPEGLNYSENAPFHLSLFQGWMNLLNMAKKSVDIVSSHWDLNHTHPSACQGQRLFEKLLQLTSQNIEIKLVSDVTADSKVLEALKLKGAEVTYMNMTAYNKGRLQSSFWIVDKQHVYIGSAGLDWQSLGQMKELGVIFYNCSCLVLDLQRIFALYSSLKFKSRVPQTWSKRLYGVYDNEKKLQLQLNETKSQAFVSNSPKLFCPKNRSFDIDAIYSVIDDAKQYVYIAVMDYLPISSTSTKRTYWPDLDAKIREALVLRSVRVRLLLSFWKETDPLTFNFISSLKAICTEIANCSLKVKFFDLERENACATKEQKNHTFPRLNRNKYMVTDGAAYIGNFDWVGNDFTQNAGTGLVINQADVRNNRSIIKQLKDVFERDWYSPYAKTLQPTKQPNCSSLFKLKPLSNKTATDDTGGKDPRNV

> ヒト PLD4-Ig 融合タンパク質 cDNA (2142 bp) （配列番号：１２５）
ATGGAGTTTCAGACCCAGGTCTTTGTATTCGTGTTGCTCTGGTTGTCTGGTGTTGATGGAgattacaaggatgacgacgataaaGGATCCcccagagggcccacaatcaagccctgtcctccatgcaaatgcccagcacctaacctcttgggtggaccatccgtcttcatcttccctccaaagatcaaggatgtactcatgatctccctgagccccatagtcacatgtgtggtggtggatgtgagcgaggatgacccagatgtccagatcagctggtttgtgaacaacgtggaagtacacacagctcagacacaaacccatagagaggattacaacagtactctccgggtggtcagtgccctccccatccagcaccaggactggatgagtggcaaggagttcaaatgcaaggtcaacaacaaagacctcccagcgcccatcgagagaaccatctcaaaacccaaagggtcagtaagagctccacaggtatatgtcttgcctccaccagaagaagagatgactaagaaacaggtcactctgacctgcatggtcacagacttcatgcctgaagacatttacgtggagtggaccaacaacgggaaaacagagctaaactacaagaacactgaaccagtcctggactctgatggttcttacttcatgtacagcaagctgagagtggaaaagaagaactgggtggaaagaaatagctactcctgttcagtggtccacgagggtctgcacaatcaccacacgactaagagcttctcccggactccgggtaaaCGTCCTCCCACCTGGGGCCAGGTGCAGCCCAAGGACGTGCCCAGGTCCTGGGAGCATGGCTCCAGCCCAGCTTGGGAGCCCCTGGAAGCAGAGGCCAGGCAGCAGAGGGACTCCTGCCAGCTTGTCCTTGTGGAAAGCATCCCCCAGGACCTGCCATCTGCAGCCGGCAGCCCCTCTGCCCAGCCTCTGGGCCAGGCCTGGCTGCAGCTGCTGGACACTGCCCAGGAGAGCGTCCACGTGGCTTCATACTACTGGTCCCTCACAGGGCCTGACATCGGGGTCAACGACTCGTCTTCCCAGCTGGGAGAGGCTCTTCTGCAGAAGCTGCAGCAGCTGCTGGGCAGGAACATTTCCCTGGCTGTGGCCACCAGCAGCCCGACACTGGCCAGGACATCCACCGACCTGCAGGTTCTGGCTGCCCGAGGTGCCCATGTACGACAGGTGCCCATGGGGCGGCTCACCAGGGGTGTTTTGCACTCCAAATTCTGGGTTGTGGATGGACGGCACATATACATGGGCAGTGCCAACATGGACTGGCGGTCTCTGACGCAGGTGAAGGAGCTTGGCGCTGTCATCTATAACTGCAGCCACCTGGCCCAAGACCTGGAGAAGACCTTCCAGACCTACTGGGTACTGGGGGTGCCCAAGGCTGTCCTCCCCAAAACCTGGCCTCAGAACTTCTCATCTCACTTCAACCGTTTCCAGCCCTTCCACGGCCTCTTTGATGGGGTGCCCACCACTGCCTACTTCTCAGCGTCGCCACCAGCACTCTGTCCCCAGGGCCGCACCCGGGACCTGGAGGCGCTGCTGGCGGTGATGGGGAGCGCCCAGGAGTTCATCTATGCCTCCGTGATGGAGTATTTCCCCACCACGCGCTTCAGCCACCCCCCGAGGTACTGGCCGGTGCTGGACAACGCGCTGCGGGCGGCAGCCTTCGGCAAGGGCGTGCGCGTGCGCCTGCTGGTCGGCTGCGGACTCAACACGGACCCCACCATGTTCCCCTACCTGCGGTCCCTGCAGGCGCTCAGCAACCCCGCGGCCAACGTCTCTGTGGACGTGAAAGTCTTCATCGTGCCGGTGGGGAACCATTCCAACATCCCATTCAGCAGGGTGAACCACAGCAAGTTCATGGTCACGGAGAAGGCAGCCTACATAGGCACCTCCAACTGGTCGGAGGATTACTTCAGCAGCACGGCGGGGGTGGGCTTGGTGGTCACCCAGAGCCCTGGCGCGCAGCCCGCGGGGGCCACGGTGCAGGAGCAGCTGCGGCAGCTCTTTGAGCGGGACTGGAGTTCGCGCTACGCCGTCGGCCTGGACGGACAGGCTCCGGGCCAGGACTGCGTTTGGCAGGGCTGA

> ヒト PLD4-Ig 融合タンパク質(713 アミノ酸) （配列番号：１２６）
MEFQTQVFVFVLLWLSGVDGDYKDDDDKGSPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGKRPPTWGQVQPKDVPRSWEHGSSPAWEPLEAEARQQRDSCQLVLVESIPQDLPSAAGSPSAQPLGQAWLQLLDTAQESVHVASYYWSLTGPDIGVNDSSSQLGEALLQKLQQLLGRNISLAVATSSPTLARTSTDLQVLAARGAHVRQVPMGRLTRGVLHSKFWVVDGRHIYMGSANMDWRSLTQVKELGAVIYNCSHLAQDLEKTFQTYWVLGVPKAVLPKTWPQNFSSHFNRFQPFHGLFDGVPTTAYFSASPPALCPQGRTRDLEALLAVMGSAQEFIYASVMEYFPTTRFSHPPRYWPVLDNALRAAAFGKGVRVRLLVGCGLNTDPTMFPYLRSLQALSNPAANVSVDVKVFIVPVGNHSNIPFSRVNHSKFMVTEKAAYIGTSNWSEDYFSSTAGVGLVVTQSPGAQPAGATVQEQLRQLFERDWSSRYAVGLDGQAPGQDCVWQG

ＮＩＴＥＢＰ−１２１１
ＮＩＴＥＢＰ−１２１２
ＮＩＴＥＢＰ−１２１３
ＮＩＴＥＢＰ−１２１４

配列番号４５：フォワードプライマー
配列番号４６：リバースプライマー
配列番号４７：フォワードプライマー
配列番号４８：リバースプライマー
配列番号４９：フォワードプライマー
配列番号５０：リバースプライマー
配列番号５１：フォワードプライマー
配列番号５２：リバースプライマー
配列番号５３：フォワードプライマー
配列番号５４：リバースプライマー
配列番号７０：アンカープライマー
配列番号７０：ｎはデオキシイノシンである
配列番号７１：ＡＵＡＰプライマー
配列番号７２：プライマー
配列番号７３：プライマー
配列番号１１４：プライマー
配列番号１１５：プライマー
配列番号１１６：プライマー
配列番号１１７：プライマー
配列番号１１８：プライマー
配列番号１１９：プライマー

Claims

ホスホリパーゼＤ４（ＰＬＤ４）タンパク質に結合するモノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片を活性成分として含む活性化Ｂ細胞に起因する病気症状を予防又は治療するための医薬組成物。
前記モノクローナル抗体又はその抗原結合領域を含む断片が、
（Ａ）重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＳＹＷＭＨ（配列番号：２）、ＣＤＲ２として配列ＤＩＹＰＧＳＤＳＴＮＹＮＥＫＦＫＳ（配列番号：３）及びＣＤＲ３として配列ＧＧＷＬＤＡＭＤＹ（配列番号：４）を有し、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号：５）、ＣＤＲ２として配列ＹＴＳＲＬＨ（配列番号：６）及びＣＤＲ３として配列ＱＱＧＮＴＬＰＷ（配列番号：７）を有する；
（Ｂ）重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＴＹＷＭＨ（配列番号：８）、ＣＤＲ２として配列ＡＩＹＰＧＮＳＥＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号：９）及びＣＤＲ３として配列ＧＹＳＤＦＤＹ（配列番号：１０）を有し、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＨＡＳＱＧＩＲＳＮＩＧ（配列番号：１１）、ＣＤＲ２として配列ＨＧＴＮＬＥＤ（配列番号：１２）及びＣＤＲ３として配列ＶＱＹＶＱＦＰ（配列番号：１３）を有する；
（Ｃ）重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＤＹＮＬＨ（配列番号：１４）、ＣＤＲ２として配列ＹＩＹＰＹＮＧＮＴＧＹＮＱＫＦＫＲ（配列番号：１５）及びＣＤＲ３として配列ＧＧＩＹＤＤＹＹＤＹＡＩＤＹ（配列番号：１６）を有し、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＲＡＳＥＮＩＹＳＨＩＡ（配列番号：１７）、ＣＤＲ２として配列ＧＡＴＮＬＡＨ（配列番号：１８）及びＣＤＲ３として配列ＱＨＦＷＧＴＰ（配列番号：１９）を有する；
（Ｄ）重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＳＹＹＬＹ（配列番号：２０）、ＣＤＲ２として配列ＬＩＮＰＴＮＳＤＴＩＦＮＥＫＦＫＳ（配列番号：２１）及びＣＤＲ３として配列ＥＧＧＹＧＹＧＰＦＡＹ（配列番号：２２）を有し、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＴＳＳＱＴＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ（配列番号：２３）、ＣＤＲ２として配列ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号：２４）及びＣＤＲ３として配列ＨＳＴＨＶＰ（配列番号：２５）を有する；
（Ｅ）重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＳＹＧＭＳ（配列番号：２６）、ＣＤＲ２として配列ＴＩＳＳＧＧＳＹＩＹＹＰＥＳＶＫＧ（配列番号：２７）及びＣＤＲ３として配列ＬＹＧＧＲＲＧＹＧＬＤＹ（配列番号：２８）を有し、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＲＳＳＫＳＬＬＨＳＤＧＩＴＹＬＹ（配列番号：２９）、ＣＤＲ２として配列ＱＭＳＮＬＡＳ（配列番号：３０）及びＣＤＲ３として配列ＡＱＮＬＥＬ（配列番号：３１）を有する；
（Ｆ）重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＳＨＹＹＷＴ（配列番号：３２）、ＣＤＲ２として配列ＹＩＳＹＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ（配列番号：３３）及びＣＤＲ３として配列ＥＧＰＬＹＹＧＮＰＹＷＹＦＤＶ（配列番号：３４）を有し、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＲＡＳＱＤＩＤＮＹＬＮ（配列番号：３５）、ＣＤＲ２として配列ＹＴＳＲＬＨＳ（配列番号：３６）及びＣＤＲ３として配列ＱＱＦＮＴＬＰ（配列番号：３７）を有する；
或いは
（Ｇ）重鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＳＨＹＹＷＳ（配列番号：３８）、ＣＤＲ２として配列ＹＩＳＹＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ（配列番号：３９）及びＣＤＲ３として配列ＥＧＰＬＹＹＧＮＰＹＷＹＦＤＶ（配列番号：４０）を有し、軽鎖の可変領域にＣＤＲ１として配列ＲＡＳＱＤＩＤＮＹＬＮ（配列番号：４１）、ＣＤＲ２として配列ＹＴＳＲＬＨＳ（配列番号：４２）及びＣＤＲ３として配列ＱＱＦＮＴＬＰ（配列番号：４３）を有する；
請求項１に記載の医薬組成物。
前記モノクローナル抗体又はその抗原結合領域を含む断片が、
（Ａ）配列番号７５に記載の配列の可変領域の配列を重鎖の可変領域として有し、配列番号９５に記載の配列の可変領域の配列を軽鎖の可変領域として有する；
（Ｂ）配列番号７７に記載の配列の可変領域の配列を重鎖の可変領域として有し、配列番号９７に記載の配列の可変領域の配列を軽鎖の可変領域として有する；
（Ｃ）配列番号７９に記載の配列の可変領域の配列を重鎖の可変領域として有し、配列番号９９に記載の配列の可変領域の配列を軽鎖の可変領域として有する；
（Ｄ）配列番号８１に記載の配列の可変領域の配列を重鎖の可変領域として有し、配列番号１０１に記載の配列の可変領域の配列を軽鎖の可変領域として有する；
（Ｅ）配列番号８３に記載の配列の可変領域の配列を重鎖の可変領域として有し、配列番号１０３に記載の配列の可変領域の配列を軽鎖の可変領域として有する；
（Ｆ）配列番号８５に記載の配列の可変領域の配列を重鎖の可変領域として有し、配列番号１０５に記載の配列の可変領域の配列を軽鎖の可変領域として有する；
（Ｇ）配列番号８７に記載の配列の可変領域の配列を重鎖の可変領域として有し、配列番号１０７に記載の配列の可変領域の配列を軽鎖の可変領域として有する；
（Ｈ）配列番号８９に記載の配列の可変領域の配列を重鎖の可変領域として有し、配列番号１０９に記載の配列の可変領域の配列を軽鎖の可変領域として有する；
（Ｉ）配列番号９１に記載の配列の可変領域の配列を重鎖の可変領域として有し、配列番号１１１に記載の配列の可変領域の配列を軽鎖の可変領域として有する；
（Ｊ）配列番号９３に記載の配列の可変領域の配列を重鎖の可変領域として有し、配列番号１１３に記載の配列の可変領域の配列を軽鎖の可変領域として有する；
請求項１に記載の医薬組成物。
受託番号ＮＩＴＥＢＰ−１２１１、ＮＩＴＥＢＰ−１２１２、ＮＩＴＥＢＰ−１２１３、ＮＩＴＥＢＰ−１２１４として寄託されたハイブリドーマｍｐ５Ｂ７、ｍｐ７Ｂ４、ｍｐ１３Ｄ４及びｍｐ１３Ｈ１１のいずれかが産生するモノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片を活性成分として含む、活性化Ｂ細胞に起因する病気症状を予防又は治療するための医薬組成物。
前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片がさらにキメラ化、ヒト化を受けている、モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片が、重鎖として配列番号１２１に記載の配列を有し、軽鎖として配列番号１２３に記載の配列を有する請求項１に記載の医薬組成物。
前記病気症状が自己免疫疾患である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
自己免疫疾患が、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、慢性胃炎（慢性萎縮性胃炎）、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、自己免疫性膵炎、大動脈炎症候群、グッドパスチャー症候群、急速進行性糸球体腎炎、巨赤芽球性貧血、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性好中球減少症、特発性血小板減少性紫斑病、バセドウ病、橋本病、原発性甲状腺機能低下症、特発性アジソン病、1型糖尿病、潰瘍性大腸炎、クローン病、セリアック病、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、抗リン脂質抗体症候群、多発性筋炎、強皮症、シェーグレン症候群、血管炎症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）である、請求項７に記載の医薬組成物。
前記病気症状がアレルギー性疾患である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
アレルギー性疾患が、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、花粉症、アレルギー性鼻炎、蕁麻疹、小児喘息、アレルギー性胃腸炎、接触性皮膚炎、血清病、血管性紫斑病である、請求項９に記載の医薬組成物。
ヒトＰＬＤ４の細胞外ドメインに結合するモノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片を被検細胞と接触させ、該細胞に結合したモノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片を検出する工程を含む、活性化Ｂ細胞のインビトロ検出方法。
ヒトＰＬＤ４の細胞外ドメインに結合するモノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片を含む、活性化Ｂ細胞の検出用試薬。
活性化Ｂ細胞の検出用試薬製造における、ヒトＰＬＤ４の細胞外ドメインに結合する、モノクローナル抗体またはその抗原結合領域を含む抗体断片の使用。
次の成分のいずれかを活性化Ｂ細胞に接触させる工程を含む、活性化Ｂ細胞のインビトロ抑制方法：
（ａ）ヒトＰＬＤ４に結合し、活性化Ｂ細胞を抑制するモノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片、
（ｂ）（ａ）のモノクローナル抗体の相補性決定領域を移植したイムノグロブリン、又はその抗原結合領域を含む断片。
活性化Ｂ細胞の活性が、抗体産生活性である請求項１４に記載の方法。
次の成分のいずれかを有効成分として含む、活性化Ｂ細胞の抑制剤：
（ａ）ヒトＰＬＤ４に結合し、活性化Ｂ細胞を抑制するモノクローナル抗体、又はその抗原結合領域を含む断片、
（ｂ）（ａ）のモノクローナル抗体の相補性決定領域を移植したイムノグロブリン、又はその抗原結合領域を含む断片。
活性化Ｂ細胞の活性が、抗体産生活性である請求項１６に記載の活性化Ｂ細胞抑制剤。