KR102288417B1

KR102288417B1 - 페메트렉시드 및 이의 라이신 염의 제조공정

Info

Publication number: KR102288417B1
Application number: KR1020157005932A
Authority: KR
Inventors: 파브리치오 보나코르시; 페데리코 칼바니; 프랑코 파스퀴
Original assignee: 베를린-케미 악티엔 게젤샤프트
Priority date: 2012-08-08
Filing date: 2013-08-08
Publication date: 2021-08-11
Also published as: CY1118514T1; SMT201600474B; SI2882753T1; AU2013301156A1; BR112015002429A2; RU2015108042A; ZA201501549B; MX362858B; PT2882753T; PL2882753T3; IN2015DN00833A; HK1209426A1; CN104736540B; ES2607890T3; MX2015001712A; EP2882753A1; RS55515B1; RU2609006C2; HUE032304T2; WO2014024164A1

Abstract

본 발명은 페메트렉시드 및 이의 염, 특히 이의 라이신 염의 합성공정, 그러한 상기 염 및 이를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 더욱이, 본 개시는 또한 합성 중간체 페메트렉시드 디에틸 에테르의 결정질 형태 및 페메트렉시드 라이신 염의 결정질 형태에 관한 것이다.

Description

페메트렉시드 및 이의 라이신 염의 제조공정 {PROCESS FOR THE PREPARATION OF PEMETREXED AND LYSIN SALT THEREOF}

본 발명은 페메트렉시드 (pemetrexed) 및 이의 염, 특히 이의 라이신 염 (lysine salt)의 제조공정, 그러한 상기 염 및 이를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.

페메트렉시드는 보통 이나트륨 (disodium) 염, 구체적으로는 상표명 ALIMTA^®로 Eli Lilly and Company에 의해 시판된 제품이고, EP1259513호에 기재된, 이나트륨 헵타하이드레이트 (disodium heptahydrate) 염의 형태로 약제학적 제제로 사용된다.

페메트렉시드는 원래 EP432677/US5344932호에 기재되었다. 상기 특허에 나타낸 합성법은 원료로서 2-아미노-7H-피롤 (2,3-d)피리미딘-4-올을 제공하고, 이러한 유도체의 아미노기는 염화 피발로일 (pivaloyl chloride)로 보호되며, 얻어진 생산물은 상응하는 3-요오드 유도체에서 두 단계로 변형된다. 디메틸 N-(4-에티닐벤조일)-L-글루타메이트 (glutamate)와의 뒤이은 결합 반응 (coupling reaction)은, 촉매 수소화반응 및 뒤이은 비누화반응 (saponification)에 의해 페메트렉시드로 전환되는 유도체 바이아릴아세틸렌 (derivative biarilacetylenic)을 제공한다. 그러나, 이러한 절차는 산업적 적용에 적합하지 않다.

상기 페메트렉시드 이산 (diacid)은 또한 중간체 페메트렉시드 디에틸 에스테르 (3)의 제조를 요구하는 산업적인 합성법 (하기 반응식 1)을 사용하여, U.S. 5,416,211, EP 9916742 및 905128/WO CJ Barnett et al., Org. Proc Res & Develop., 1999, 3, 184-188에 보고된 것들 중에서 가장 최근의 합성 절차에 따라 얻어질 수 있다:

[반응식 1]

상기 문헌들에서 인용된 페메트렉시드 디에틸 에스테르 (4)는, 용매로서 N,N-디메틸포름아미드에서 축합제 (condensing agent)의 존재하에서 L 디에틸 염산 (hydrochloride) 글루타메이트와, 상기 4-(2-(2-아미노-4,7-디하이드로-4-옥소-3H-피롤(2,3-d) 피리미딘-5-일) 에틸) 벤조산 (2)을 반응시켜 제조된다. 이러한 절차는 페메트렉시드 디에틸 에스테르 (3)를 분리할 필요가 없고: 디클로로메탄으로 추출 작업, 및 에탄올로 용매 교환 후, 전술된 생산물은 염기 가수분해 및 산성화에 의해 페메트렉시드 (5)로 나중에 전환되는 p-톨루엔술폰산의 염 (4)으로 분리되고 정제된다. 상기 이산 페메트렉시드 (5)는 수성 소다로 처리하여 상응하는 이나트륨염으로 전환된다.

이러한 공정은 결합 반응의 용매로서 DMF (높은 독성을 갖는 용매)의 사용을 포함하며, 또한 상기 페메트렉시드를 고순도로 얻을지라도, 상기 페메트렉시드 디에스테르 염 (4)를 분리 및 정제하기 위해 긴 연속적 작동, 즉, 3번의 그라인딩 및 상대적인 여과과정을 갖는 결정화로 이루어져, 결과적으로 공정의 효율을 감소시킨다.

p-톨루엔술폰산 염의 형성을 통해 페메트렉시드 에스테르 (3)의 정제 절차의 또 다른 부정적인 관점은 알코올과 p-톨루엔술폰산의 반응에 의한 에스테르의 가능한 형성으로 나타낸다. 이러한 에스테르 p-톨루엔술폰기 생산물은 유전자독성물질 알킬화제 (genotoxic alkylating agent)로 분류되고, 이들의 함량은 반드시 매우 낮은 값으로 감소되어야 한다 (약물 물질에서 유전자독성물질 및 발암물질 불순물 및 생산물: Recommended Approaches, FDA Guidance for Industry, 2008; Guideline on the Limits of genotoxic Impurities, EMEA/CHMP 2006).

그러나, 상기 페메트렉시드 디에틸 에스테르 (3)는 고체 화합물로서 문헌에 기재되었고: CJ Barnett et al, Org. Proc Res & Develop., 1999, 3, 184-188에서, 화합물 (13)은 169-171℃의 pf (Hot plate)를 나타내며; E.C. Taylor and B.Liu, J.Org. Chem., 2003, 68, 9938-9947에서, 화합물 (25a)은 pf 84-86℃를 나타내고; T.Miwa et al, J.Org. Chem., 1993, 58, 1696-1701에서, 화합물 (23a)은 pf 131-133℃를 나타낸다.

EP 2409978호에서는 (4)의 합성 및 정제의 절차를 제거한 상기 페메트렉시드 디에스테르 (3)를 제조하는 새로운 공정을 청구한다. 특히, 상기 산 (2) 및 디에틸 글루타메이트 사이의 결합 반응은 비양성자성 유기용매, 특히 DMF 및 디클로로메탄의 혼합물에서 수행되고; 상기 반응의 말단에서, 상기 혼합물은 염기 수성 용액으로 세척되며, 상기 용액은 농축되고, 극성 유기용매, 바람직하게는 에탄올이 첨가되며, 페메트렉시드 디에스테르 (3)는 결정화에 의해 분리된다. 이들 공정에서도 높은 독성을 갖는 용매 (DMF 및 디클로로메탄)는 사용되며, 그리고 또한 결합 후 반응 혼합물의 작업은 필연적으로 고용량의 용매를 포함하고 존재하는 DMF를 제거하기 위해 수성 용액으로 유기 상을 많은 세척을 포함하여, 결과적으로 공정의 효율 및 생산성을 제한한다. 페메트렉시드 이나트륨염 (6)은 그 다음 상기 에스테르 (4)의 비누화에 의해 얻어진다.

약제학적 제형에 사용된 페메트렉시드 이나트륨염은 열악한 안정성을 특징으로 하고, 제어된 분위기에서 취급 및 패킹의 적합한 조건을 요구하며 사용하기에 쉬운 액체 제형의 사용을 불가능하게 하는, 산화 타입의 영향에 관련된, 고체 상태 및 용액에서 모두, 분해 불순물의 형성을 나타낸다. 최근, WO 2012/015810호에서, 더 긴 장기간 안정성을 갖는 항산화제 및 킬레이트제 (chelating agents)를 갖는 페메트렉시드 염의 수성 제형이 보고되었지만, 이들은, 만약 적절하게 처리되지 않는다면, 약제학적 생산물의 ICH 지침의 기준을 수용할 수 없는 불순물 양인, 1-5%의 값까지의 분해 생산물의 증가를 나타낸다.

본 발명의 범주는 기술분야에서 존재하고 페메트렉시드의 합성에 관한 문제점 및 이의 이나트륨염의 불안정성을 극복하는 데 있다.

본 발명은 페메트렉시드의 합성의 결합 반응 (결합 (coupling))에서 용매로서 물-알코올 혼합물의 사용이, DMF의 필요 없이, 반응 혼합물에 직접 중간체 디에틸 에스테르의 침전을 허용한다는 발견에 기초한다. 따라서 얻어진 페메트렉시드 디에틸 에스테스는, DMF가 사용되는 방법에 따른 기술분야에서 기재된 바와 같은, 염화 (salification), 정제, 및/또는 세척 단계를 수행할 필요없이 페메트렉시드의 합성의 후속 단계에서 이의 사용을 직접 허용하는 고순도를 갖는다.

더욱이, 본 발명의 발명자들은 상기 페메트렉시드 (바이)라이신 염이 놀랍고도, 예상외로, 이미 알려진 이나트륨염보다 좀더 안정하다는 것을 관찰하였다. 상기 바이라이신 염의 이러한 더 큰 안정성은 이들이 취급 및 저장 단계에서 활성 성분 페메트렉시드의 불안정성의 문제점을 극복하기 때문에, 상당한 기술적인 장점을 포함한다.

본 발명의 이러한 목적을 위하여, 상기 페메트렉시드 바이라이신 염은 일반적으로 라이신 염으로 언급될 수 있을 뿐만 아니라 이나트륨염은 일반적으로 나트륨염으로 언급될 수 있다.

따라서, 본 출원의 목적은:

a) 페메트렉시드 디에틸 에스테르 (3)를 얻기 위해 결합제 (coupling reagent)의 존재하에서 L 디에틸 염산 글루타민산과 4-(2-(2-아미노-4,7-디하이드로-4-옥소-3H-피롤(2,3-d) 피리미딘-5-일) 에틸) 벤조산 (2)을 반응시키는 단계;

b) 상기 페메트렉시드 디에틸 에스테르 (3)를 페메트렉시드 산 (5)으로 가수분해시키는 단계;

c) 상응하는 페메트렉시드 염을 얻기 위해 NaOH 또는 라이신으로부터 선택된 염기로 염화시키는 단계를 포함하는 하기 화학식 I을 갖는 페메트렉시드 염의 제조공정이며:

[화학식 I]

여기서 B+는 적합한 양이온이고, 바람직하게는 Na+ 또는 양성자화된 라이신이며,

단계 a)에서:

i) 상기 산 (2)은 분리될 수 있거나 또는 직접 반응될 수 있는 상응하는 카르복실산 나트륨 또는 카르복실산 모르포린으로 사전에 인시튜 전환되며,

ⅱ) 사용된 반응 용매는 용매들의 하이드로-알코올성 혼합물로 이루어지고, 여기서 상기 알코올은: 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, n-프로판올로부터 선택되며;

ⅲ) 중간체 페메트렉시드 디에틸 에스테르 (3)은 >98% 순도로 반응 혼합물로부터 직접 침전되는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 또 다른 목적은 무수 또는 수화 형태 (hydrate form), 바람직하게는 도 7에 도시된 회절 X-선 스펙트럼에 의해 정의된 결정질 형태로 하기 화학식 1의 (바이)라이신의 산-N-[4-[2-(2-아미노-4-옥소-4,7-디하이드로-3H-피롤 [2,3-d] 피리미딘-5-일)에틸]벤조일]-L-글루타믹 (페메트렉시드) 염이다:

[화학식 1]

본 출원의 또 다른 목적은 약제 (medicament), 바람직하게는 항-종양제로서 사용하기 위한 상기 화학식 1에 따른 화합물이고;

상기 라이신 염기와 페메트렉시드 이산 (5)의 염화의 단계를 포함하는 화학식 1의 화합물의 합성공정이며;

- 화학식 1에 따른 화합물 및/또는 전술된 바와 같은 이의 결정질 형태 및 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 부형제 (excipient)를 포함하는 약제학적 조성물이다.

도 1은 이소프로판올/물로부터 침전된 디에틸 에스테르 페메트렉시드의 X-선 회절 스펙트럼을 나타낸다.
도 2는 에탄올/물/아세톤으로부터 침전된 디에틸 에스테르 페메트렉시드의 X-선 회절 스펙트럼을 나타낸다.
도 3은 에탄올/물/아세톤으로부터 침전된 페메트렉시드 디에틸 에스테르의 DSC (시차주사 열량측정법 (differential scanning calorimetry)) 프로파일이다.
도 4는 2-메틸 테트라하이드로퓨란/에탄올로부터 결정화된 페메트렉시드 디에틸 에스테르의 X-선 회절 스펙트럼을 나타낸다.
도 5는 에탄올/메틸에틸케톤으로부터 결정화된 페메트렉시드 디에틸 에스테르의 X-선 회절 스펙트럼을 나타낸다.
도 6은 에탄올/메틸에틸케톤으로부터 결정화된 페메트렉시드 디에틸 에스테르의 DSC (시차주사 열량측정법) 프로파일이다.
도 7은 페메트렉시드 라이신 염의 X-선 회절 스펙트럼을 나타낸다.
도 8은 페메트렉시드 라이신 염의 X-선 회절의 데이터를 나타낸다.
도 9는 라이신 염의 DSC (시차주사 열량측정법) 프로파일을 나타낸다.

본 발명은, 이하 더욱 상세하게 기재되는, 하기 관점들로 이루어진다.

합성 공정

본 개시의 합성 공정의 목적은 하기 화학식 I의, 페메트렉시드 염의 제조공정이고,

[화학식 I]

여기서 B+는 적합한 양이온이고, 바람직하게는 Na+ 또는 양성자화된 라이신으로부터 선택된다.

이러한 염은, DMF의 사용이 없는 고체 상태에서, 합성의 중간체 (3)인, 상기 페메트렉시드 에틸 디에스테르를 쉽게 얻는 산업적으로 적용가능한 새로운 합성공정 (반응식 2)에 의해 얻어진다.

[반응식 2]

특히, 결합 반응 (결합)의 용매로서 하이드로알코올성 혼합물의 사용 (바람직하게는 이소프로판올/물)은 반응 혼합물로부터 중간체 (3)의 침전을 결과한다. 여과 후 얻어진 페메트렉시드 디에스테르 (3)는 추가 정제 없이 후속 단계에서 이의 사용을 직접 허용하는 고순도 (≥98%)를 갖는다.

따라서 제조된 상기 페메트렉시드 디에스테르 (3)는, 기술분야에서 기재된 바와 같은, p-톨루엔 설폰산으로 페메트렉시드 에스테르염을 제조하는 경우 필수적인 자유 산 (free acid) 형태에서 상기 페메트렉시드를 분리할 필요없이, 원하는 페메트렉시드 염, 예를 들어, 라이신의 이나트륨염으로 직접 전환될 수 있다. 산 형태에서 상기 페메트렉시드를 분리할 필요없는 페메트렉시드 염의 직접 형성은 본 발명의 제조공정의 목적의 또 다른 장점을 대표한다.

본 발명의 공정 목적으로 얻어질 수 있는 약학적으로 허용가능한 페메트렉시드 염은, 특히 이나트륨염 및 (바이)라이신 염이고, 그러나 이에 제한되는 것은 아니다.

이들 염들은 무수 형태 또는 수화된 형태일 수 있다. 바람직하게는, 상기 염은 0-22 중량% 범위를 포함하는 물의 퍼센트를 포함한다. 예를 들어, 시판 화합물인, Alimta^®는 헵타하이드레이트 이나트륨 페메트렉시드에 상응하고, 21 중량%의 물의 퍼센트를 함유하며, 그리고 공지 문헌에서 또 다른 페메트렉시드 염인, 헤미펜타하이드레이트 이나트륨 페메트렉시드는 대신에 8.7 중량%의 물의 퍼센트를 갖는 것으로 고려해야 한다.

본 발명에 따른, 화학식 1의 염의 제조공정은 특히, 하기 단계를 포함한다:

a) 페메트렉시드 디에틸 에스테르 (3)를 얻기 위해 결합제의 존재하에서 L 디에틸 염산 글루타민산과 4-(2-(2-아미노-4,7-디하이드로-4-옥소-3H-피롤(2,3-d) 피리미딘-5-일) 에틸) 벤조산 (2)을 반응시키는 단계;

c) 상응하는 페메트렉시드 염을 얻기 위해 NaOH 또는 라이신으로부터 선택된 염기로 염화시키는 단계.

4-(2-(2-아미노-4,7-디하이드로-4-옥소-3H-피롤(2,3-d)피리미딘-5-일)에틸)벤조산 (2)의 합성을 위한, 다수의 합성 절차는 EP432677, EP 905 128, U.S. 5,416,211, EP 2301909, CJ Barnett et al., Org. Proc Res & Dev., 1999, 3, 184-188 등의 문헌 중에서 보고된다. 일반적으로, 상기 산 (2)은 하기 반응식 3에 기재된 일반 합성 절차에 따라 전통적으로 제조될 수 있다:

[반응식 3]

EP 905 128 (실시 예 1, p 10)에서, 조 (crude) 알데하이드 (7) (수율 87%)은 분리되고 정제되지 않지만, 얻어진 알데하이드 (7)를 함유하는 유기 용액은 여전히 존재하는 원소 Pd 및 건조 증발에 의해 유기 용매를 제거하기 위해 수지상에서 여과된다. 이렇게 얻어진 조 알데하이드 (7)는 그 다음 이황화 나트륨 (sodium bisulfide)으로 처리 및 고체 결정질의 형태로 (또한 'Bertagnini의 화합물'로 알려진) 상응하는 유도체 술폰산 나트륨염의 형성에 의해 정제된다.

EP 2301909호에서, 유도체 술폰산 나트륨염의 수단으로 조 알데하이드 (7)를 정제하는 것이 필수적이진 않지만, 대신에 상기 반응 혼합물의 유기 용매 (바람직하게는 용매의 혼합물)로 추출, 실리카 겔 상에 변색 및 후속 합성 단계에 대해 적절한 96%의 순도로 알데하이드 (7)를 얻기 위한 유기 용매의 후속 건조 증발이 충분한 것으로 보고된다.

본 발명자들은 대신에, EP905128호에서 예상된 바와 같은, 염 나트륨 술폰 유도체에 의한 정제, 또는 EP2301909호에서 예상된 바와 같은, 추출, 분리, 및 변색할 어떤 필요없이, 브롬화의 후속 단계에 직접 사용될 수 있는, 조 알데하이드 (7)의 에틸 아세테이트에서 용액을 얻기 위해, EP905128호, 실시 예 1에 기재된 것으로 작동하는 것이 충분하다는 것을 확인하였다.

상기 조 알데하이드 (7)는 결과적으로 2,4-디아미노-6-하이드록시 피리미딘과 직접 반응되는, 상응하는 브롬 알데하이드로 변형되고, 그래서 메틸 4-(2-(2-아미노-4,7-디하이드로-4-옥소-1H-피롤 (2,3-d)피리미딘-5-일)에틸)벤조에이트 (9) (EP905128호, 실시 예 4, 페이지 11)를 얻는다.

상기 에스테르 (9)의 비누화 및 상기 반응 혼합물의 후속 산성화는 약제학적 사용을 위한 이나트륨 페메트렉시드의 제조를 위한 적절한 순도를 갖는 카르복실산 (2) (EP905128호, 실시 예 5, 페이지 11)을 유도한다.

본 출원의 페메트렉시드 합성공정의 목적은 반응식 1의 합성 단계 a)에서 사용된 반응 용매가 알코올 용매 및 물의 혼합물에 의해 구성되고, 여기서 상기 알코올은 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, n-프로판올의 군으로부터 선택되는 사실을 특징으로 한다. 바람직하게는 상기 용매 혼합물은 이소프로판올/물 또는 물/에탄올로 대표된다. 특히, 상기 물 및 이소프로필 알코올 또는 에틸 알코올은 v/v 비로 3/1 및 1/3 사이, 바람직하게는 6/4 및 4/6 사이를 포함한다. 사용된 용매 혼합물의 양은 산 전구체 (2)에 대하여 5 및 25 부피 사이, 바람직하게는 10 및 20 부피 사이이고, 상기 용어 "부피"는 용매의 ml/전구체의 g으로 표시된 용매/용질 비를 의미한다.

합성 단계 a)에서의 반응 조건 하에서, 중간체 페메트렉시드 디에틸 에스테르 (3)는 >98% 순도로 반응 혼합물로부터 직접 침전되고, 추가 정제 없이 다음 단계에 직접 사용이 가능할 수 있다.

더군다나, 합성 단계 a)에서, 상기 산 (3)은 분리되거나 (US2008/0146799, 실시 예 5, p 13) 또는 직접 반응될 수 있는 상응하는 카르복실산 나트륨으로 사전에 인시튜 전환된다. 선택적으로, 항상 합성 단계 a)에 있어서, 상기 산 (2)은 그 다음 직접 반응되는 상응하는 모폴리늄 카르복실염 (morpholinium carboxylate)으로 인시튜 전환될 수 있다. 상기 염화는 당업자에게 알려진 일반적 방법에 따라 인시튜 수행될 수 있다.

상기 결합제는 CDMT (2-클로로-4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진), EDC (1-에틸-3 (3-디메틸아미노프로필) 카보디이미드, DMTMM (4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르포린 클로라이드) 및 좀더 바람직하게는 CDMT (2-클로로-4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진)로부터 선택된다.

상기 반응은 0℃ 및 60℃ 사이, 바람직하게는 15 및 50℃ 사이의 온도에서 일어난다.

페메트렉시드 디에틸 에스테르 (3)의 완전 침전은 5-35 부피, 바람직하게는 10-25 부피의, 2/1 내지 1/1을 포함하는 비로 물/아세톤 혼합물 또는 물을, 반응 혼합물에 더욱 첨가하여 얻어진다.

얻어진 현탁액은 1 및 24시간 사이, 바람직하게는 5 및 12시간 사이의 시간 동안, 0 및 5℃ 사이, 바람직하게는 5 및 30℃ 사이의 온도에서 교반 하에서 유지될 수 있다.

따라서 하이드로 알코올성 용매 혼합물로 세척 및 여과 후에, 얻어진 디에스테르 페메트렉시드 (3)는 정량 (constant weight)까지 약 50℃의 진공하에서 나중에 건조될 수 있다. 이러한 조 생산물은 >98%의 고 HPLC 순도를 나타내고, 본 발명의 목적을 위하여, 자유 산으로 가수분해의 후속 반응에서 추가 정제 없이 직접 사용될 수 있다.

그 다음, 산 (5)으로 디에스테르 페메트렉시드 (3)의 전환은 염기의 존재하에서 수성 용액에서 가수분해에 의해 US 5,416,211호 또는 EP 905128호에서 이미 기재된 공정에 따라 수행될 수 있다. 페메트렉시드는 그 다음 물-알코올 혼합물로부터 침전에 의해, 산성화 후 분리된다.

상기 반응 온도는 0 및 40℃ 사이, 바람직하게는 10 및 30℃ 사이이다.

상기 페메트렉시드 염의 형성에 있어서, 상기 산 (5)은 상응하는 페메트렉시드 염을 얻기 위해 NaOH 또는 라이신으로부터 바람직하게 선택된, 적절한 염으로 염화된다.

여기에 기재된 공정은, 예를 들어, EP 905 128에 보고된 것과 유사한 수용성 용제 (water miscible solvent)로 침전 및 pH 8까지의 수성 용액 내의 수산화나트륨으로 처리하여, 이산 전구체 (5)로부터 얻어질 수 있는 페메트렉시드 이나트륨염을 제조하는데 또한 사용될 수 있다.

선택적으로, 고순도의 디에스테르 페메트렉시드 (3)는 수용성 용제의 첨가에 의한 이나트륨염의 침전 및 (3)의 하이드로 알코올성 용액에서 염기 가수분해에 의해 직접적으로 단일 단계에서 이나트륨염을 얻게 한다.

상기 기재된 공정에 따라 얻어진 하기 화학식 3의 디에스테르 페메트렉시드는 주로 무수 형태를 가지며, 이의 결정화도 (degree of crystallinity)는 반응의 배치에 의존하여 변화될 수 있다 (도 1).

[화학식 3]

상기 조 디에스테르 페메트렉시드는 후속 반응에서 추가 정제 없이 사용될 수 있거나, 또는, 예를 들어, 더 우수한 특성을 위해, 아세토니트릴, 에틸 아세테이트/에탄올, 2-메틸 테트라하이드로퓨란/에탄올, 메틸에틸케톤/에탄올, 이소프로판올/물로부터 선택된 일련의 용매를 사용하는 결정화에 의해, 더욱 정제될 수 있어, HPLC에 의해 나타낸 바와 같이, > 99.5%의 순도를 갖는 페메트렉시드 디에틸 에스테르 (3)를 산출한다.

특히, 본 발명의 발명자들은, 결정화 혼합물로서 2-메틸 테트라하이드로퓨란/에탄올을 사용하여, 도 4에서 나타낸 X-선 회절의 스펙트럼을 나타내는 페메트렉시드 디에스테르 (3)의 결정질 고체가 얻어지는 반면, 결정화 혼합물로서 에탄올/메틸에틸케톤을 사용하여, 도 5에 나타낸 X-선 회절의 스펙트럼이 나타내는 페메트렉시드 디에스테르 (3)의 결정질 고체가 얻어진다는 것을 관찰하였다.

페메트렉시드 라이신 염.

본 발명의 목적은 또한 무수 또는 수화된 형태에서 화학식 1의 산 화합물인 산 N-[4-[2-(2-아미노-4-옥소-4,7-디하이드로-3H-피롤 [2,3-d] 피리미딘-5-일) 에틸] 벤조일]-L-글루타믹 (페메트렉시드) 라이신 염이다.

[화학식 1]

바람직하게는, 이러한 염은 0-22 중량% 범위를 포함하는 물의 퍼센트를 갖는다.

더욱이, 상기 라이신 염은 결정질 고체로서 얻어질 수 있고, 도 7에서 나타내고 도 8에 요약된 X-선 회절 스펙트럼을 특징으로 한다.

상기 라이신 염은 또한 도 9에서 나타낸 프로파일 DSC (시차주사 열량측정법)를 특징으로 하고, 여기서 분해를 수반하는 230℃에서 용융점을 갖는다. 열중량 분석 (thermogravimetric analysis) (TGA)은 3.8%의 중량 손실을 나타낸다.

본 출원의 목적인 페메트렉시드 라이신 염은 하기 표들에 나타낸 바와 같이 이나트륨염과 비교하여 상당히 더 높은 안정성을 특징으로 한다.

25℃±5℃ 및 40℃±5℃에서 저장된 페메트렉시드 헤미펜타하이드레이트 이나트륨염에 대한 HPLC 순도 (면적%)의 결과 (습도는 제어되지 않음)

		25℃±5℃			40℃±5℃
		개월			개월
연관된 물질(R_R)	0	1	3	6	1	3	6
0.19	n.r.	n.r.	n.r.	0.04	n.r.	0.50	0.40
0.26	n.r.	n.r.	n.r.	0.31	n.r.	0.17	0.98
페메트렉시드	99.78	99.71	99.78	99.47	99.66	99.00	98.00
1.15	n.r.	n.r.	0.02	n.r.	0.03	0.11	0.10
기타 (max)	0.06	0.07	0.07	0.06	0.05	0.06	0.20

25℃±5℃ 및 40℃±5℃에서 저장된 페메트렉시드 라이신 염에 대한 HPLC 순도 (면적%)의 결과 (습도는 제어되지 않음)

		25℃±5℃			40℃±5℃
		개월			개월
관련 물질(R_R)	0	1	3	6	1	3	6
0.19	n.r.	n.r.	0.07	0.05	n.r.	0.14	0.08
0.26	n.r.	n.r.	n.r.	n.r.	n.r.	n.r.	n.r.
0.44	0.03	0.03	0.04	0.04	0.04	0.05	0.06
페메트렉시드	99.83	99.82	99.74	99.72	99.79	99.61	99.58
1.15	0.04	0.04	0.07	0.04	0.04	0.09	0.08
기타 (max)	0.04	0.05	0.04	0.08	0.04	0.05	0.08

6일 동안 100℃에서 저장된 페메트렉시드 헤미펜타하이드레이트 이나트륨염, 헵타하이드레이트 및 라이신 염에 대한 HPLC 순도 (면적%)의 결과 (습도는 제어되지 않음)

	페메트렉시드 헤미펜타하이드레이트 이나트륨염		페메트렉시드 헵타하이드레이트 이나트륨염		페메트렉시드 라이신 염
	일 (days)		일		일
관련 물질 (R_R)	0	6	0	6	0	6
0.19	n.r.	0.38	n.r.	1.01	0.07	0.13
0.26	n.r.	2.08	n.r.	0.46	n.r.	n.r.
0.44	n.r.	0.06	n.r.	0.12	0.09	0.22
페메트렉시드	99.88	96.72	99.95	97.36	99.67	99.41
1.15	n.r.	0.54	n.r.	0.55	0.11	0.10
기타 (max)	0.06	0.06	n.r.	0.30	n.r.	n.r.

상기 페메트렉시드 이나트륨염은 40℃의 가속 조건 (accelerated conditions)에서 상당한 분해를 나타내고, 0.19, 0.26 및 1.15의 상대 보유 시간에서 3 가지 주요 불순물의 형성은 3 개월 후에 이미 관찰되었다. 동일한 조건에 있어서, 상기 라이신 염은 거의 변하지 않는다.

6일 동안 100℃의 스트레스 조건 (stress conditions)에서 연구는 0.19, 0.26 및 1.15의 보유 시간에서 및 헤미펜타하이드레이트 이나트륨염 (0.4% -2%) 및 상업적인 헵타하이드레이트 이나트륨염 (0.4-1%)의 경우 모두에서 불순물의 현저한 증가를 나타낸다.

주요 분해 생산물은 HPLC/MS에 의해 확인되고, 이들 구조들은 생산물의 산화에 기인하는 것으로 나타난다. 불순물의 유사한 패턴은 과산화 수소 10%와 같은 산화제의 존재하에서 수성 용액 내의 페메트렉시드 이나트륨염의 처리에 의해 얻어진다.

산화 타입 분해의 또 다른 확인을 위하여, 6일 동안 100℃의 스트레스 조건 하에서, 질소 하의 제어 분위기에서 포장된 이나트륨염의 샘플은 불순물 함량에서 현저한 감소를 나타낸다.

상기 라이신 염은 또한 6일 동안 100℃의 스트레스 조건 하에 훨씬 더 안정하고, 동일한 불순물은 0.2%의 값을 초과하지 않는다.

따라서, 이들 데이터는 페메트렉시드 라이신 염이 상응하는 이나트륨염보다 상당히 더 안정하다는 것을 입증하며, 따라서 이것이 산화 스트레스에 의해 유발된 분해/열화의 경향이 덜하기 때문에, 활성 성분 페메트렉시드의 염으로서 유리하게 사용될 수 있다.

도 7의 X-선 회절 스펙트럼에 의해 정의된 이의 결정질 형태로서, 페메트렉시드 라이신 염은, 바람직하게는, 항-종양 약물로서, 페메트렉시드 이나트륨염과 비슷한, 약제로서 유리하게 사용가능하다.

상기 페메트렉시드 라이신 염은 염기 라이신으로 페메트렉시드 이산 (5)의 염화의 경로를 통해 일반적으로 얻어질 수 있다. 특히, 상기 방법의 하나의 구현 예에 있어서, 화학식 1의 염은 라이신 하이드레이트의 2 내지 4 당량, 바람직하게는 3 당량을 페메트렉시드 산 (5)의 수성 용액에 첨가하여 얻어질 수 있다. 나중에, 형성된 라이신 염은 아세톤, 에탄올, 메탄올 또는 이소프로판올, 바람직하게는 에탄올과 같은, 수용성 용매의 첨가에 의해 반응 혼합물로부터 침전된다.

물의 부피는 산 전구체에 대하여 3 및 8 사이이고, 바람직하게는 5 부피이며, 상기 유기 용매의 부피는 산 전구체와 비교하여 18 및 48 부피 사이이고, 바람직하게는 30 부피이며, 용어 "부피"는 용매의 ml/전구체의 g의 용매/용질 비를 의미한다.

약제학적 조성물

본 발명의 약제학적 조성물은 화학식 1의 페메트렉시드 라이신 염 또는 도 3의 스펙트럼에 의해 정의된 이의 결정질 형태 및 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 조성물/제형이다. 상기 조성물은 항-종양제로서 사용하기 위해 주로 의도된다.

여기에 기재된 조성물은 바람직하게는 구강, 비경구 (parenteral) 또는 정맥주사 경로로 및, 어떤 경우에 있어서, 약제학적 관심의 표적 위치를 달성하는데 적절하고 기술분야에서 당업자에게 알려진 모든 투여 경로에 따라 투여된다.

구강 투여를 위한 조성물은 액체 용액 또는 현탁액 또는 분말의 형태를 취할 수 있다. 상기 조성물은 투여를 용이하게 하기 위하여 단위 투여 형태로 존재할 수 있다.

각각 단위 복용량은 적절한 약학적인 부형제와 연관하여, 원하는 치료학적 효과를 내도록 계산된 미리결정된 양의 활성 성분을 함유한다. 통상적인 단위 복용 형태는, 고체 조성물의 경우에서, 알약, 정제, 캡슐 등을 포함하고, 액체 조성물의 경우에서, 바이알 또는 시린지를 포함한다.

이러한 고체 형태에 있어서, 활성 성분(들)은 적어도 하나의 불활성 약제학적으로 허용가능한 부형제 또는 담체 및 일반 첨가제와 혼합된다.

비경구 사용을 위한 조성물은, 예를 들어, 용액, 수성 또는 오일 현탁액 또는 유화제일 수 있고, 적절한 분산제, 습윤제 및 현탁제를 사용하는 알려진 기술에 따라 제형화될 수 있다.

이들은 또한 보존제 및 항-균성, 항-산화, 킬레이트제 및 불활성 가스 (Mack (1982) Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th Edition)와 같은 다른 첨가제가 존재할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물에서 포함된 성분은 또한 사용 전에 적절한 담체에서 저장 및 재구성하기 위해 동결 건조될 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물의 통상적 예는 아래와 같이 나타낼 수 있다:

페메트렉시드 이나트륨 또는 라이신 염: 25mg/ml (페메트렉시드 산으로)

만니톨: 25 mg/ml

HCl pH = 7.0 - 7.4까지

NaOH pH = 7.0 - 7.4까지

물 q.s.

원하는 양의 약제를 카운터링하는 다량의 용액은 바이알에 분포되고, 동결 건조된다.

실시 예

다음은 본 발명의 비-제한 구현 예이다.

실시 예 1

반응식 3의 화합물 (7)인, 메틸 4-(4-옥소부틸)벤조에이트, (4-(4-카보메톡시페닐)부타날)의 제조.

13.0 g의 리튬 아세테이트 디하이드레이트, 14.7 g의 염화 리튬 및 17.1 g의 테트라 부틸 암모늄 클로라이드는 285 ml의 DMF 내의 25.0 g의 메틸 p-브롬 벤조에이트의 용액에 첨가된다. 질소는 상기 혼합물에 거품을 일으키고, 그 다음 12 ml의 3-부텐-1-올 및 0.52 g의 팔라듐 아세테이트를 첨가한다. 상기 혼합물은 75℃로 가열되고, 메틸 p-브롬 벤조에이트의 완전 전환될 때까지 반응시킨다 (HPLC 제어).

상기 반응 혼합물을 실온까지 냉각시킨 후에, 285 ml 물 및 285 ml 에틸 아세테이트는 첨가된다. 상들 (phases)의 분리 후에, 수성 상은 에틸 아세테이트 (2 x 143 ml)로 추출되고, 조합된 유기 상은 3% NaCl (3 x 285 ml) 및 물 (2 x 285 ml)로 세척된다. 생산물 (7)은 약 85%의 수율로 에틸 아세테이트의 용액에서 얻어지고, 다음 반응에, 분리 또는 추가 정제 없이 그대로 사용된다.

실시 예 2

반응식 3의 화합물 (8)인, 메틸 (RS)-4-(3-브롬-4-옥소 부틸)벤조에이트의 제조.

3 g의 (7)을 함유하는, 실시 예 1로부터의 에틸 아세테이트 내의 125 ml의 용액은, 약 22 ml로 진공 하에서 농축된다. 최종 용액은 0℃로 냉각되고, AcOH 내의 0.126 ml의 33% HBr 및 0.97 ml의 브롬을 첨가된다. 0℃에서 교반 1시간 후에, 2% 메타중아황산 나트륨 (sodium metabisulphite) (21 ml)은 상기 반응 혼합물에 첨가되고, 분리된 유기 상은 포화된 중탄산나트륨 (21 ml) 및 3% NaCl (21 ml)로 세척된다. 상기 용액은 감소된 압력에서 건조-증발되고, 잔류물은 46 ml의 아세토니트릴에서 용해되고, 최종 용액은 다음 단계에서 직접 사용된다.

실시 예 3

반응식 3의 화합물 (9)인, 메틸 4(2-(2-아미노-4,7-디하이드로-4-옥소-3H-피롤(2,3-d) 피리미딘-5-일) 에틸) 벤조에이트의 제조.

46 ml의 물, 6.2 g의 2,4-디아민-6-하이드록시피리미딘 및 2.72 g의 초산 나트륨 (sodium acetate)은 실시 예 2의 아세토니트릴 내의 브롬-유도체 (8)의 용액에 첨가된다. 상기 혼합물은 약 3.5시간 동안 40℃에서 교반되고, 실온으로 냉각되며, 여과된다. 고체는 35 ml의 아세토니트릴/물 1/1로 세척되고, 50℃의 진공 하에서 건조된다. 옅은 핑크 고체의 형태로 3.4 g의 (9) ((7)에 대하여 조합된 수율은 69%)는 얻어진다.

실시 예 4

반응식 1의 화합물 (2)인, 4-(2-(2-아미노-4,7-디하이드로-4-옥소-3H-피롤(2,3-d) 피리미딘-5-일) 에틸)벤조산의 제조.

162 ml의 2 M NaOH 내의 실시 예 3으로부터 14.0 g의 (9)의 현탁액은 1시간 동안 40℃에서 가열된다. 실온으로 냉각시킨 후에, 상기 반응 혼합물은 170 ml의 아세톤으로 희석되고, pH는 6N HCl로 약 4.4로 조정된다. 얻어진 현탁액은 여과되고, 60 ml의 아세톤/물 1/1 및 60 ml의 아세톤으로 필터 상에서 세척된다. 고체는 황백색 (off-white) 고체로서 13.58 g의 생산물 (2)를 얻기 위해 50℃의 진공하에서 건조된다 (정량적 수율).

실시 예 5

반응식 1의 화합물 (2)의 나트륨염인, 산 4-(2-(2-아미노-4,7-디하이드로-4-옥소-3H-피롤(2,3-d) 피리미딘-5-일) 에틸) 벤조익 나트륨염)의 제조.

2 M NaOH (pH 약 13)는 60 ml의 물 내의 실시 예 4로부터의 10.0 g의 화합물 (2)의 현탁액에 완전 용해까지 첨가된다. pH는 그 다음 1M HCl로 9로 조정되고, 따라서 풍부한 침전의 생산물을 얻는다. 실온에서 1시간의 교반, 여과 및 50℃의 진공하에서 건조 후에, 백색 고체로서 (2)의 나트륨염은 얻어진다.

실시 예 6

반응식 1의 화합물 (3)인, 디에틸 N-(4-(2-(2-아미노-4,7-디하이드로-4-옥소-3H-피롤(2,3-d) 피리미딘-5-일) 에틸) 벤조일-L-글루타메이트의 제조.

36 ml의 1 M NaOH, 60 ml의 물 및 64 ml의 이소프로판올은 실온에서 실시 예 4로부터의 10.72 g의 산 (2)에 첨가된다. 실온에서 60분의 교반 후에 5.93 ml의 N-메틸 모르포린 (NMM), 64 ml의 이소프로판올 및 9.47 g의 2-클로로-4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진 (CDMT)은 상기 혼합물에 첨가된다. 상기 혼합물은 20분 동안 실온에서 교반하에 유지되고, 그 다음 2.18 ml의 NMM 및 4.74 g의 디에틸-L-염산 글루타민산이 첨가된다. 40분 후에, 2.18 ml의 NMM 및 4.74 g의 디에틸-L-염산 글루타민산은 추가 첨가된다. 반응 6 시간 후에, 192 ml의 물은 상기 혼합물에 첨가되고, 얻어진 현탁액은 밤샘 교반하에 유지되며, 여과되고, 고체는 물 (3x 30 ml)로 세척되며 50℃의 진공하에 건조되어, 크림-색 고체로서 15.76 g의 디에틸 에스테르의 페메트렉시드 (3) (수율 90.7%)는 얻어진다.

분석 데이터: HPLC 순도 98.9%

상기 생산물은 도 1에서 나타낸 X-선 회절 스펙트럼을 가지며 부분적인 무정형 생산물에 상응한다.

반응 화합물의 다른 배치들에 의존하여 더 적은 결정화도 (degree of crystallinity)는 얻어질 수 있다.

실시 예 7

반응식 1의 화합물 (3)인, 디에틸 N-(4-(2-(2-아미노-4,7-디하이드로-4-옥소-3H-피롤 (2,3-d) 피리미딘-5-일) 에틸) 벤조일-L-글루타메이트의 제조.

실시 예 4로부터의 10.00 g의 산 (2)은 실온에서 90 ml의 에탄올, 40 ml의 물 및 8.83 g의 2-클로로-4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진 (CDMT)에 첨가된다.

21.1 g NaOH, 20 ml의 물 및 10.3 ml의 N-메틸 모르포린으로 이루어진 혼합물은 얻어진 현탁액에 먼저 첨가되고, 그 다음 10.45 g의 디에틸-L-염산 글루타민산에 첨가된다.

상기 반응 혼합물은 3시간 동안 40℃에 교반하에 유지되고, 0.48 g의 활성탄 및 0.48 g의 셀라이트 (Celite)로 이루어진 층 (bed)에서 여과된다. 20 ml의 에탄올/물 혼합물 3/2로 필터를 세척 후에, 여과액은 40℃로 가열되고, 49 ml의 물 및 55 ml의 아세톤에 첨가된다.

상기 혼합물은 그 다음 실온으로 냉각되고, 1시간 동안 0℃로 냉각시킨 후에, 얻어진 현탁액은 여과되고, 고체는 80 ml의 물/아세톤 혼합물 3/1 및 80 ml의 아세톤으로 세척한다. 상기 고체는 그 다음 50℃의 진공 하에서 건조된다. 크림-색 고체로서 14.25 g의 디에틸 에스테르의 페메트렉시드 (3) (수율 93.5%)는 얻어진다.

pf (핫 플레이트): 171℃ (다른 배치로 138℃의 p.f.은 얻어진다)

X-선 회절 스펙트럼: 도 2에서 나타냄

DSC는 도 3에 나타냄

실시 예 8

실시 예 4로부터의 10.0 g의 산 (2)은 실온에서 40 ml의 이소프로판올 및 60 ml의 NaOH 0:50 M에 첨가된다. 실온에서 교반 10분 후에, 25 ml의 이소프로판올, 5.15 ml의 N-메틸모르포린 (NMM), 8.83 g의 CDMT 및 다시 25 ml의 이소프로판올은 상기 혼합물에 첨가된다. 5분 후에 4.80 ml의 N-메틸모르포린은 첨가되고 10.45 g의 H-Glu (OEt)₂·HCl이 뒤따른다.

상기 반응 혼합물은 그 다음 1시간 동안 40℃에 가열된 다음 30 ml의 물은 첨가된다. 용액은 실온으로 냉각되고, 그 다음 180 ml의 물이 첨가되며, 1시간 동안 실온에서 교반하에 유지된다. 현탁액은 여과되고, 물/iPrOH = 3/1 (3x30 ml), 물 (3 x 40 ml)로 세척되며, 고체는 50℃의 진공 하에서 건조된다. 크림-색 고체로서 14:52 g의 디에틸 에스테르의 페메트렉시드 (3) (수율 89.1%)는 얻어진다.

분석 데이터: HPLC 순도 98.4%

실시 예 9

실시 예 4로부터의 10.0 g의 산 (2)은 실온에서 40 ml의 이소프로판올 및 60 ml의 NaOH 0.50 M에 첨가된다. 실온에서 교반 10분 후에, 25 ml의 이소프로판올, 5.15 ml의 N-메틸모르포린 (NMM), 8.83 g의 CDMT 및 다시 25 ml의 이소프로판올은 상기 혼합물에 첨가된다. 5분 후에, 4.80 ml의 N-메틸모르포린은 첨가되고 10.45 g의 H-Glu (OEt)₂·HCl이 뒤따른다.

상기 반응 혼합물은 그 다음 1시간 동안 40℃에서 가열되고, 그 다음 80 ml의 물 및 80 ml의 아세톤은 첨가된다. 용액은 실온으로 냉각되고, 그 다음 2시간 동안 0℃에서 유지된다. 현탁액은 여과되고, 물/아세톤 = 3/1 (40 ml), 물 (3 x 40 ml) 및 아세톤 (2 x 20 ml)으로 세척되며, 고체는 50℃의 진공 하에서 건조된다. 크림-색 고체로서 13.90 g의 디에틸 에스테르의 페메트렉시드 (3) (수율 85.7%)는 얻어진다.

분석 데이터: HPLC 순도 98.5%

실시 예 10

실시 예 4로부터의 10.0 g의 산 (2)은 실온에서 60 ml의 이소프로판올, 60 ml의 물 및 13.65 ml의 NMM에 첨가된다. 혼합물은 40℃로 가열되고, 40분 후에 8.83 g의 CDMT, 30 ml의 이소프로판올, 10.45 g의 H-Glu (OEt)₂·HCl는 첨가된다. 상기 반응 혼합물은 2시간 동안 40℃로 가열되고, 그 다음 80 ml의 물 및 50 ml의 아세톤은 첨가된다. 상기 혼합물은 실온으로 냉각되고, 그 다음 2시간 동안 0℃에서 유지된다. 현탁액은 여과되고, 물/아세톤 = 3/1 (40 ml), 물 (3 x 40 ml) 및 아세톤 (2 x 20 ml)으로 세척되며, 고체는 50℃의 진공 하에서 건조된다. 크림-색 고체로서 13.58 g의 디에틸 에스테르의 페메트렉시드 (3) (수율 83.8%)는 얻어진다.

분석 데이터: HPLC 순도 98.7%

실시 예 11

반응식 1의 화합물 (3)인, 디에틸 N-(4-(2-(2-아미노-4,7-디하이드로-4-옥소-3H-피롤(2,3-d) 피리미딘-5-일) 에틸) 벤조일-L-글루타메이트의 2-메틸 테트라하이드로퓨란/무수 에탄올 10/1로 균질화 (Trituration)/결정화.

10:36 g의 조 (crude) 페메트렉시드 디에틸 에스테르 (3)은 62 ml의 2-Me THF /무수 에탄올 10/1의 혼합물에서 약한 환류로 잘게 썰어지고 결정화된다. 용액은 실온으로 천천히 냉각되고, 5시간 동안 0℃에서 유지된다. 현탁액은 그 다음 여과되고, 고체는 0℃로 냉각된 10 ml의 2-Me THF로 세척된다. 40℃ 진공 하에서 건조한 후에, 크림 고체로서 11.8 g의 생산물 (3) (수율 78.3%)은 얻어진다.

분석 데이터: HPLC 순도 99.9%

X-선 회절 스펙트럼: 도 4에 나타냄.

실시 예 12

반응식 1의 화합물 (3)인, 디에틸 N-(4-(2-(2-아미노-4,7-디하이드로-4-옥소-3H-피롤(2,3-d)피리미딘-5-일)에틸) 벤조일-L-글루타메이트의 메틸에틸케톤/에탄올 96% 9/2로 결정화.

14:00 g의 조 페메트렉시드 디에틸 에스테르 (3)은 182 ml의 메티에틸케톤/EtOH 96% 9/2 혼합물로 약한 환류에서 교반하면서 용해된다. 얻어진 용액은 실온에서 냉각되고, 현탁액은 2시간 동안 0℃로 냉각되며, 여과되고, 고체는 84 ml의 메틸에틸케톤으로 세척된다. 50℃의 진공 하에서 건조한 후에, 크림 고체로서 13:24 g의 생산물 (3) (수율 94.5%)은 얻어진다.

분석: HPLC 순도 99.83%

p.f. (Hot Stage): 175℃ (pf는 상기 배치에 다소 의존하여 변화된다).

X-선 회절 스펙트럼: 도 5에서 나타낸다.

DSC는 도 6에서 나타낸다.

유사한 화합물은 다음의 용매: 에탄올, 에틸 아세테이트/에탄올, 아세토니트릴로부터 결정화에 의해 얻어질 수 있다.

실시 예 13 (비교 예)

반응식 1의 화합물 (4)인, 디에틸 N-(4-(2-(2-아미노-4,7-디하이드로-4-옥소-3H-피롤(2,3-d)피리미딘-5-일)에틸)벤조일-L-글루타메이트의 p-톨루엔설포네이트의 제조.

실시 예 5의 11.4 g의 생산물 (3)은 142 ml의 무수 에탄올에서 현탁된다. 상기 혼합물은 50℃로 가열되고, 따라서 얻어진 용액은 142 ml의 무수 에탄올 내의 11.2 g의 p-톨루엔설포닌산 모노하이드레이트 (p-toluenesulfonic acid monohydrate) (pTsOH·H₂O)의 용액에 첨가된다. 얻어진 현탁액은 2시간 동안 80℃에 가열되며, 그 다음 실온으로 냉각되고, 여과된다. 습한 고체는 242 ml의 무수 에탄올로 1시간 동안 환류에서 균질화된다.

상기 현탁액은 여과되고, 상기 고체는 50℃의 진공하에서 건조된다. 밝은 핑크 생산물은 1.5시간 동안 65 ml의 DMSO 및 260 ml의 무수 에탄올에서 환류로 가열된다. 10℃에 냉각 후에 상기 현탁액은 여과되고, 상기 습한 고체는 30분 동안 250 ml의 무수 에탄올로 5℃에서 균질화된다. 상기 고체는 12.2 g의 밝은 핑크 고체 (수율 79%)를 제공하기 위해 50℃의 진공 하에서 건조된다.

분석 데이터: HPLC 순도 99.2%

실시 예 14

화합물 (5)인, 페메트렉시드의 제조.

62 ml의 1M NaOH에서 실시 예 6 (또는 실시 예 7-12의 선택적인 하나)에서 얻어진 9.60 g의 생산물 (3)의 현탁액은 약 1시간 동안 실온에서 교반 하면서 유지된다. 75 ml의 에탄올의 첨가 후에, 상기 용액은 4M HCl로 pH 3으로 산성화되고, 상기 혼합물은 약 20분 동안 70-75℃로 가열된다. 얻어진 현탁액은 실온으로 냉각되고 여과된다. 상기 습한 고체는 2시간 동안 실온에서 93 ml의 에탄올/물 1/1로 균질화된다. 여과 후에, 상기 고체는 6.15 g의 황백색 고체 (98% 수율)을 제공하기 위해 50℃의 진공 하에서 건조된다.

분석 데이터: HPLC 순도 99.8%

실시 예 15

화합물 (6)인, 페메트렉시드 헤미펜타하이드레이트 이나트륨염의 제조.

38 ml의 물 내의 7.0 g의 페메트렉시드 5의 현탁액에, 1M NaOH은 약 8의 pH 까지 첨가된다 (pH는 7.5 내지 8.5 범위이다). 상기 용액은 70℃로 가열되고, 398 ml의 에탄올에 첨가된다. 상기 현탁액은 실온에서 냉각되고, 여과되며, 상기 고체는 50℃에서 건조된다.

백색 고체로서 페메트렉시드의 7.4 g의 이나트륨 헤미펜타하이드레이트 (수율 88%)는 얻어진다.

분석 데이터: HPLC 순도 99.8%

실시 예 16

실시 예 6에서 얻어진 것 (또는 실시 예 7-12 중 선택적인 하나)으로 10.0 g의 페메트렉시드 에스테르 (3)의 현탁액에, 100 ml의 1M NaOH는 첨가되고, 상기 혼합물은 고체가 완전 용해될 때까지 실온에서 교반된다. 60 ml의 에탄올의 첨가 후에, 약 8의 pH까지로 1M HCl의 용액이 천천히 첨가된다 (pH는 7.5 내지 8.5의 범위이다). 상기 혼합물은 55℃로 가열되고, 160 ml의 에탄올에 첨가된다. 상기 현탁액은 실온에서 냉각되고, 여과되며, 상기 고체는 50℃에서 건조된다.

백색 고체로서 9.6 g의 헤미펜타하이드레이트 이나트륨의 페메트렉시드 (수율 90%)는 얻어진다. 분석 데이터: HPLC 순도 99.8%.

실시 예 17

화합물 (1)인, 페메트렉시드 라이신 염의 제조.

8.8 g의 페메트렉시드 (5)는 41 ml의 물 내의 9g의 라이신 하이드레이트의 용액에 첨가된다. 상기 용액은 70℃로 가열되고, 249 ml의 에탄올에 첨가된다. 상기 현탁액은 실온으로 냉각되고, 여과되며, 상기 고체는 50℃에서 건조된다.

백색 고체로서 13.8 g의 페메트렉시드 라이신 염은 얻어진다 (수율 93%).

분석 데이터: HPLC 순도 99.93%, 라이신 함량 (HPLC): 39.5%

중량 손실 (TGA): 3.8%

X-선 회절 스펙트럼: 도 7 및 8에서 도시됨

도 9에서 나타낸, DSC: p.f. 230 ℃ (dec)

¹H-NMR (D2O): δ1.46 (m, 2H), 1.52 (m, 2H), 1.73 (m, 4H), 1.92 (m, 4H), 2.9 (m, 1H), 2.22 (m, 1H), 2.37 (m, 2H), 2.81 (s, 4H), 3.03 (t, 4H), 3.78 (t, 2H), 4:37 (dd, 1H), 6.34 (s, 1H), 7.19 (d, 2H), 7.68 (d, 2H)

13C_NMR (D 2 O): δ24.2, 29.2, 29.6, 31.2, 32.7, 37.1, 38.2, 41.8, 57.3, 58.8, 101.5, 118.3, 120.9, 129.8, 131.3, 133.4, 149.5, 153.5, 154.8, 163.9, 172.8, 177.4, 181.8, 185.0.

실시 예 18

(바이) 및 페메트렉시드 라이신 이나트륨염의 안정성 연구

25℃±5℃, 45℃±5℃ 및 100℃에서 안정성 연구는 실시 예 9, 11에 보고된 절차에 따라 얻어진 이의 상기 염 및 비교를 위해, EP 1259513호 절차에 따라 제조된 헵타하이드레이트 나트륨염에 대해 수행된다.

상기 샘플은 공기 중 또는 선택적으로 제어된 분위기에서 유리 용기에 팩킹된다.

상기 샘플의 순도는 하기 절차를 사용하여 HPLC 분석에 의해 변화하는 시간 간격에서 결정된다 (25℃±5℃ 및 45℃±5℃에서 저장된 샘플에 대해 1, 3, 6 개월, 100℃에 저장된 샘플에 대해 6일):

가변 파장 Agilent 1100 또는 등가물을 갖는 UV 검출기를 구비한 고압 액체 크로마토그래피 장치

컬럼: Sunfire C18, 3.5 ㎛, 100x4.6 mm

작동 조건:

이동상 (Mobile phase) A: 0.1% H₃PO₄

이동상 B = CH₃CN

기울기 용리 (Gradient elution): t = 0, A/B 88/12, t = 10 min, A/B 88/12, t = 30min, A/B 30/7

유속: 1.5 ml/min, 검출기: λ= 230 nm, 주입 부피:20 ℓ, T: 35℃

백색: 물

실시 예 19

상기 페메트렉시드 나트륨염을 갖는 약제학적 조성물의 제조

불활성 분위기의 적절한 반응기에 페메트렉시드 이나트륨염 (6), 만니톨 및 물 (주입용 물-WFI)은 25 mg/ml의 페메트렉시드 산, 25 mg/ml의 만니톨로 이루어진 용액을 구성하기 위하여 충진된다. 얻어진 용액의 pH는 0.1 N NaOH 또는 HCl 0.1 N로 7.2±0.6으로 조정된다. 상기 용액은 그 다음 0.22 ㎛로 두 번 여과되고, 바이알에, 요구된 분량으로 첨가되며 동결 건조된다.

실시 예 20

페메트렉시드 나트륨염을 갖는 약제학적 조성물의 제조

불활성 분위기의 적절한 반응기에 상기 페메트렉시드 라이신 염 (1), 만니톨 및 물 (주입용 물-WFI)은 25 mg/ml의 페메트렉시드 산, 25 mg/ml의 만니톨로 이루어진 용액을 구성하기 위하여 충진된다. 얻어진 용액의 pH는 0.1 N NaOH 또는 HCl 0.1 N로 7.2±0.6으로 조정된다. 상기 용액은 그 다음 0.22 ㎛로 두 번 여과되고, 바이알에, 요구된 분량으로 첨가되며 동결 건조된다.

Claims

a) 페메트렉시드 디에틸 에스테르 (3)를 얻기 위해 결합제의 존재하에서 L 디에틸 염산 글루타민산과 4-(2-(2-아미노-4,7-디하이드로-4-옥소-3H-피롤(2,3-d) 피리미딘-5-일) 에틸) 벤조산 (2)을 반응시키는 단계;

b) 상기 페메트렉시드 디에틸 에스테르 (3)를 페메트렉시드 산 (5)으로 가수분해시키는 단계;

c) 상응하는 페메트렉시드 염을 얻기 위해 NaOH 또는 라이신으로부터 선택된 염기로 염화시키는 단계를 포함하는 하기 화학식 I을 갖는 페메트렉시드 염의 제조공정으로:
[화학식 I]

여기서 B+는 Na⁺ 또는 양성자화된 라이신을 나타내고,
단계 a)에서:
i) 상기 산 (2)은 분리될 수 있거나 또는 직접 반응될 수 있는 상응하는 카르복실산 나트륨 또는 카르복실산 모르포린으로 사전에 인시튜 전환되며,
ⅱ) 사용된 반응 용매는 용매들의 하이드로-알코올성 혼합물로 이루어지고, 여기서 상기 알코올은 그룹: 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, n-프로판올로부터 선택되며;
ⅲ) 중간체 페메트렉시드 디에틸 에스테르 (3)은 >98% 순도로 반응 혼합물로부터 직접 침전되는 것을 특징으로 하는 페메트렉시드 염의 제조공정.
청구항 1에 있어서,
상기 용매들의 하이드로-알코올성 혼합물은 이소프로필 알코올 또는 에틸 알코올과 혼합된 물로 대표되는 페메트렉시드 염의 제조공정.
청구항 2에 있어서,
단계 a)에서 상기 혼합물인 물/이소프로필 알코올 또는 에틸 알코올의 성분은 서로 3/1 내지 1/3의 부피비인 페메트렉시드 염의 제조공정.
청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서,
단계 a)에서 결합제는 그룹: CDMT (2-클로로-4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진), EDC (1-에틸-3(3-디메틸아미노프로필) 카보디이미드 및 DMTMM (4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르포린 클로라이드)로부터 선택되는 것인 페메트렉시드 염의 제조공정.
청구항 1에 있어서,
단계 a)에서 반응은 0℃ 및 50℃ 사이 또는 15℃ 및 50℃ 사이의 온도에서 수행되는 페메트렉시드 염의 제조공정.
청구항 1에 있어서,
상기 라이신 염은 2 내지 4 당량의 하이드레이트 라이신을 함유하는 수성 용액의 페메트렉시드 산 (5)으로의 첨가에 의해 얻어지는 페메트렉시드 염의 제조공정.
청구항 1에 있어서,
단계 c)에서 용액에 형성된 라이신 염은 그룹: 아세톤, 에탄올, 메탄올 또는 이소프로판올로부터 선택된 물과 혼화성의 유기 용매의 첨가에 의해 침전되는 페메트렉시드 염의 제조공정.
청구항 1에 있어서,
합성 단계 b) 및 c)를 대신하여, 중간체 페메트렉시드 산 (5)의 분리 없이, 디에스테르 (3)의 직접 가수분해에 의해 페메트렉시드 이나트륨염을 얻을 수 있는, 페메트렉시드 염의 제조공정.
청구항 1에 있어서,
상기 페메트렉시드 디에틸 에스테르 (3)는 어떤 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용되는 페메트렉시드 염의 제조공정.
무수 또는 수화 형태로 (바이)라이신의 산-N-[4-[2-(2-아미노-4-옥소-4,7-디하이드로-3H-피롤 [2,3-d]피리미딘-5-일)에틸] 벤조일]-L-글루타믹 (페메트렉시드) 염인, 하기 화학식 1의 화합물.
[화학식 1]
청구항 10에 있어서,
상기 화합물은 0-22 중량%의 범위로 물을 포함하는 화합물.
삭제
양성자화된 라이신에 의한 청구항 1에 기재된 페메트렉시드 산(5)의 염화 단계를 포함하는, 청구항 10에 따른 화합물의 합성공정.
청구항 10 또는 11에 있어서,
상기 화합물은 약제로서 사용되는 화합물.
청구항 14에 있어서,
상기 화합물은 항-암 약제로 사용되는 화합물.
청구항 10 또는 11에 따른 화합물 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 항-암 조성물로서 사용되는 약제학적 조성물.
삭제