KR102287584B1 - 금은화 유래 락토바실러스 사케이 또는 그 배양산물을 유효성분으로 포함하는 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 명세서에는 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP) 또는 그 배양산물을 유효성분으로 포함하는 조성물과 이들의 신규한 용도가 개시된다. 상기 균주 또는 그 배양산물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 DPPH 라디칼 소거능이 우수하고, 병원성 미생물에 대한 항균력이 있으며, 총 폴리페놀의 함량이 높고, 멜라닌 세포 생장 억제 능력이 있다. 따라서, 본 발명의 조성물은 노화방지, 피부 주름 개선, 피부 미백, 항미생물의 효과가 있으며, 이러한 효과를 요하는 화장료 조성물, 약학적 조성물 또는 건강 식품에 널리 활용될 수 있다.

Description

금은화 유래 락토바실러스 사케이 또는 그 배양산물을 유효성분으로 포함하는 조성물{Composition comprising Lactobacillus sakei derived from Lonicera japonica Thunb. or cultured products thereof as a active ingredient}
본 명세서에는 금은화 유래 락토바실러스 사케이 또는 그 배양 산물을 유효성분으로 포함하는 조성물이 개시된다. 또한, 상기 조성물의 신규한 용도가 개시된다.
미생물 중에는 생육하면서 유산을 대사 산물로서 많이 생성하는 것이 있는데 이러한 세균들을 총칭하여 유산균(lactic acid bacteria)이라고 한다. 현대 과학이 발달하기 오래 전부터 인류는 유산균이 가지고 있는 독특한 성질들을 의식적, 또는 무의식적으로 사용하여 왔다. 유산균은 인간이 이용할 수 있는 가장 유익한 미생물의 한 종류로서 오랜 역사를 두고 발효 유제품을 중심으로 하여 각종 발효 식품, 장류, 김치, 발효 소시지, 의약품 및 가축의 사료 첨가제에 이르기까지 인류 생활에 광범위하게 활용되어 오고 있다. 또한 유산균은 사람이나 포유 동물의 소화관, 구강, 질, 각종 발효 식품과 토양 등 자연계에 널리 분포되어 있으며, 이들 유산균은 인류의 생활에 직간접적으로 밀접한 관계를 맺고 있는 유익한 공생체의 하나이다.
유산균은 산소가 적은 곳에서 잘 증식하는 통성 혐기성균 또는 편성 혐기성균이다. 유산균은 5개 속으로 구분할 수 있는데, 스트렙토코커스(Streptococcus), 페디오코커스(Pediococcus), 루코노스탁(Leuconostoc), 비피도박테리아(Bifidobacteria), 그리고 락토바실러스(Lactobacillus)로 나뉜다. 이 중 락토바실러스 속 미생물은 동형 또는 이형발효를 하는 유산간균으로서, 유제품이나 채소의 발효과정에서 흔히 볼 수 있는 균이다.
최근 유산균의 효능에 대한 관심이 높아지면서, 특히 락토바실러스 속 미생물을 생균제, 식품 첨가제 등으로 개발하고자 하는 연구가 활발히 진행되고 있다. 이에 본 발명자들은 락토바실러스 속 미생물에 대한 연구를 계속한 결과, 금은화에서 신규한 락토바실러스 사케이 균주를 분리함으로써 본 발명을 완성하였다.
Sung Hee Chung et al, Isolation of Flavonoid from Carthami Flos and their Antioxidative Activity(2008), Yakhak hoeji, 52(4), pp.241-251 Ste´phane Chaillou et al, The complete genome sequence of the meat-borne lactic acid bacterium Lactobacillussakei23K(2005), nature biotechnology, 23(12), pp.1527-1533 Shuwen Zhang et al, Antioxidative activity of lactic acid bacteria in yogurt(2011), African Journal of Microbiology Research ,5(29), pp.5194-5201
일 측면에서, 본 발명의 목적은, 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP) 또는 그 배양산물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 제공하는 것이다.
다른 측면에서, 본 발명의 목적은, 화장료 조성물, 약학적 조성물 및 건강식품으로 유용한 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP) 균주 또는 그 배양산물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 제공하는 것이다.
일 측면에서, 본 발명은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 제공한다.
일 측면에서, 본 발명은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 항노화용 조성물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 발명은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 발명은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선용 조성물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 발명은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 항미생물용 조성물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 발명은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 조성물을 제공한다.
일 측면에 있어서, 본 발명의 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP) 또는 그 배양산물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은 DPPH 라디칼 소거능이 우수하고, 병원성 미생물에 대한 항균력이 있으며, 총 폴리페놀의 함량이 높고, 멜라닌 세포 생장 억제 능력이 있다. 따라서, 본 발명의 조성물은 노화방지, 피부 주름 개선, 피부 미백, 항미생물, 항산화의 효과가 있으며, 이러한 효과를 요하는 화장료 조성물, 약학적 조성물 또는 건강 식품에 널리 사용될 수 있어 유용하다.
도 1은 아가 디스크 확산 시험(Agar disk diffusion assay)에 사용되는 페이퍼 디스크의 구역을 보이는 도이다.
도 2는 아가 디스크 확산 시험 과정을 보이는 도이다.
도 3은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP)의 병원성 미생물(V. choleeerae)에 대한 아가 디스크 확산 시험의 결과를 보이는 도이다.
도 4는 동정 균주인 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP)과 표준 균주인 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei (KCTC 13416))의 4가지 병원성 미생물 각각에 대한 아가 디스크 확산 시험의 결과를 보이는 도이다.
도 5는 동정 균주와 표준 균주의 콜로니 계수 측정의 결과를 보이는 도이다(log(CFU/ml)).
도 6은 동정 균주와 표준 균주의 DPPH assay 라디칼 소거능을 확인한 도이다.
도 7은 총 폴리페놀 함량 측정을 위한, 갈산을 이용한 검량선을 보이는 도이다.
도 8은 동정 균주와 표준 균주의 총 폴리페놀 함량을 보이는 도이다.
도 9은 각 샘플 처리시 세포외 멜라닌의 음성대조군 대비 함량을 보이는 도이다: MSH(멜라닌세포자극호르몬)만을 처리한 군은 vehicle, 코직산을 처리한 군은 kojic acid, 알부틴을 처리한 군은 arbutin, 동정균주 자체를 초음파 분쇄한 후 그 여액을 처리한 군은 LBS sonication, 동정균주 자체를 열처리 사멸시킨 여액을 처리한 군은 LBS heat, 동정균주를 배양하고 배양액으로부터 균주를 제거한 액을 처리한 군은 배양액으로 표시하였다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 일 관점에서, 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 항노화용 조성물이다.
본 발명은 다른 관점에서, 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물이다.
상기와 같은 관점에서, 상기 조성물은 멜라닌 세포(melanocyte) 생성을 억제하는 것일 수 있다.
본 발명은 다른 관점에서 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선용 조성물이다.
본 발명은 다른 관점에서 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 항미생물용 조성물이다.
상기와 같은 관점에서, 상기 미생물은 대장균속(Escherichia), 포도상구균속(Staphylococcus), 살모넬라속(Salmonella) 및 비브리오속(Vibrio)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다. 구체적으로, Escherichia coli K12W3110, Staphylococcus aureus (ATCC 65389), Salmonella typhiurium (KCTC 2053), Vibrio cholerae (KCTC 2730)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명은 다른 관점에서 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 조성물이다.
상기와 같은 관점에서 상기 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물은, 시료를DPPH(Diphenylpicryl hydrazyl)와 반응 시키기 전과 반응시킨 후의 515nm에서의 흡광도 차이와, 시료를 DPPH와 반응시키기 전의 515nm에서의 흡광도 간의 비로 계산되는 DPPH 라디칼 소거능에 있어서, L-아스크로빈 산(L-ascrobic acid)을 시료로 사용할 때보다 상기 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물을 시료로 사용할 때DPPH 라디칼 소거능이 5배 이상 높을 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 예컨대, 2배 이상, 3배 이상, 4배 이상, 5배 이상, 6배 이상, 7배 이상, 8배 이상, 9배 이상, 10배 이상, 11배 이상일 수 있다.
본 명세서에서, 발효 산물은, 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei)의 발효 과정에서 만들어지는 물질을 의미할 수 있으며, 예컨대 발효액에 함유된 대사체를 의미할 수 있다.
본 명세서에서, 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP)는 금은화(Lonicera japonica Thunb.)로부터 유래된 것일 수 있다.
본 명세서에서, 금은화(Lonicera japonica Thunb.)는 인동과(忍冬科 Caprifoliaceae)에 속하는 반상록 덩굴성 관목을 의미할 수 있다. 인동과 겨우살이덩굴 또는 인동초라고도 불리운다. 어린가지와 잎에 갈색 털이 있는 것을 털인동(var. repens), 잎가장자리를 제외한 부분에 거의 털이 없고, 위 꽃잎이 반 이상 갈라지며 겉에 홍색이 도는 것을 잔털인동(for. chinensis)이라고 한다. 금은화는 한국 전역 산야의 숲가나 구릉지 또는 인가 주변에서 자란다. 줄기는 오른쪽으로 감고 올라가 길이가 3m에 이르고, 어린가지는 적갈색으로 털이 있으며 속이 비어 있다. 잎은 넓은 피침형 또는 난형으로 마주나며, 끝은 둔하다. 잎은 길이 3~8㎝, 너비 1~3㎝이고, 가장자리는 밋밋하다. 꽃은 6~7월경 잎겨드랑이에 1, 2개씩 피며, 꽃잎은 길이 3~4㎝로 처음에는 흰색이지만 곧 노란색으로 변한다. 꽃잎의 끝은 5개로 갈라지며 그중 1개가 깊게 갈라져 뒤로 말린다. 꽃잎 안쪽에는 굽은 털이 있고, 수술은 5개, 암술은 1개이다. 열매는 9~10월에 익는데 지름은 7~8㎜이다. 주요성분으로 루테올린 이노시톨과 타닌 성분이 있다.
본 명세서에서, 상기 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP)는 서열번호 1의 16s rRNA를 포함할 수 있다. 상기 서열번호 1의 16s rRNA는 하기와 같다.
서열 번호 1: 16s rRNA(1506 bps)
Figure 112015013422686-pat00001
본 명세서에서, 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP) 또는 그 배양산물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 화장료 조성물일 수 있고, 약학적 조성물일 수 있으며, 또한 건강 식품일 수 있다.
구체적으로, 화장료 조성물로는 예를 들어, 모발용 화장료, 바디용 화장료, 기초 화장료, 메이크업 화장료 등이 있을 수 있고, 그 제형은 특별히 제한되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다.
예를 들면, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 샴푸, 린스, 바디클렌저 등의 세정료, 헤어토닉, 젤 또는 무스 등의 정발제, 양모제 또는 염모제 등의 모발용 화장료 조성물, 유연화장수, 영양화장수, 로션, 바디로션, 영양 크림, 마사지 크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 젤, 패치, 수중유(O/W)형, 유중수(O/W)형 등의 기초 화장료로 제형화 될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 화장품학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀) 및/또는 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적 방법에 따라 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시태양에서, 상기 화장료 조성물에 추가적으로 점증제를 함유할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 점증제는 메틸 셀룰로스, 카르복시 메틸 셀룰로스, 카르복시 메틸 하이드록시 구아닌, 하이드록시 메틸 셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 카르복시 비닐 폴리머, 폴리쿼터늄, 세테아릴 알콜, 스테아릭산, 카라기난 등을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 카르복시 메틸 셀룰로스, 카르복시 비닐 폴리머, 폴리쿼터늄 중에서 1종 이상을 사용할 수 있으며, 가장 바람직하게는 카르복시 비닐 폴리머가 될 수 있다.
본 발명의 일 실시태양에서 상기 화장료 조성물은 필요에 따라 적절한 각종의 기제와 첨가제를 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 발명자에 의해 용이하게 선정될 수 있다. 필요에 따라 허용 가능한 첨가제를 함유할 수 있으며, 예를 들면, 당업계에 통상적인 방부제, 색소, 첨가제 등의 성분을 추가로 포함할 수 있다.
방부제는 구체적으로 페녹시에탄올(Phenoxyethanol) 또는 1,2-헥산디올 (1,2-Hexanediol) 등이 될 수 있고, 향료는 인공향료 등이 될 수 있다.
그리고, 본 발명의 일 실시태양에서 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함할 수 있다. 이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한제, 정제수 등을 들 수 있다.
또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하다.
본 발명의 일 관점에 따른 약학 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 연질 또는 경질 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 일 관점에 있어서, 조성물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로 허용되는 것이면 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 염산, 황산, 질산, 인산, 불화수소산, 브롬화수소산, 포름산 아세트산, 타르타르산, 젖산, 시트르산, 푸마르산, 말레산, 숙신산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, 톨루엔술폰산, 나프탈렌술폰산 등을 사용할 수 있다.
본 발명의 일 관점에 있어서, 조성물은 목적하는 바에 따라 비경구 투여하거나 경구 투여할 수 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 락토바실러스 사케이 105 내지 1013 CFU/일, 보다 구체적으로는 106 내지 1010 CFU/일이 될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 특정 환자에 대한 투여용량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강 상태, 식이, 투여 시간, 투여 방법, 배설률, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.
본 발명의 일 관점에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 연질 또는 경질 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 연고, 크림 등의 피부 외용제, 좌제, 주사제 및 멸균 주사용액 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 주사제 또는 피부 외용제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
본 발명의 일 관점에 따른 조성물은, 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 비경구, 경구 등의 다양한 경로로 투여될 수 있으며, 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 경피(trandermally), 정맥, 근육, 피하주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 일 관점에 따른 조성물은, 통상의 기술자가 용이하게 적용할 수 있는 다양한 경로로 투여될 수 있다. 특히 본 발명의 일 관점에 따른 약학 조성물은 피부 외용제로서 피부 표면에 도포되는 경로로 투여될 수 있다.
본 발명의 일 관점에 있어서, 상기 조성물은 식품 조성물일 수 있고, 상기 식품 조성물은 건강기능식품 조성물일 수 있으며, 차(茶)류, 유제품류, 김치류, 양조 식품류를 예로 들 수 있는 발효가 필요한 발효 식품 조성물일 수 있다.
본 발명의 일 관점에 따른 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 분말제, 드링크제와 같은 액제, 캐러멜, 겔, 바 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.
본 발명의 일 관점에 따른 식품 조성물에 있어서, 상기 유효 성분의 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 락토바실러스 사케이 105 내지 1013 CFU/일, 보다 구체적으로는 106 내지 1010 CFU/일이 될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등의 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.
상기 외에 본 발명의 일 관점에 있어서, 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 일 관점에 있어서, 기능성 식품 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 일 관점에 있어서, 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 포함되는 것이 일반적이다.
상기 락토바실러스 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle 는 2014년 9월 11일에 미생물자원센터(Korean Collection for Type Cultures, KCTC)에 미생물 기탁번호 KCTC12675BP로 기탁하였다.
이하, 실시예 및 실험예를 통하여, 본 발명에 따른 신규 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle 의 분리 방법, 동정 방법 및 특성을 상세하게 설명한다. 하지만 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.
[실시예 1] 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle 의 분리동정
금은화 꽃을 증류수로 단계 희석(serial dilution)하고 MRS(de Man, Rogosa and Sharpe) 아가 플레이트(Agar Plate)에 도말하고, 30℃에서 배양한 후 흑색 집락을 보이는 콜로니를 취하였다. 단일 균주 집락을 만들기 위해 반복적으로 MRS 아가 플레이트 도말을 반복하여 단일 콜로니(Single Colony)를 확보하였다.
이후 하기 방법에 의하여, 단일 균주로부터 16S rRNA 염기 서열 분석을 통해 Lactobacillus sakei(기탁번호 KCTC13416, 이하 표준 균주라고 한다)와의 상동성을 비교하여 최종적으로 Lactobacillus sakei MD_honey suckle 임을 확인하였다.
[실시예 1-1] 균주의 배양
실시예 1에서 얻은 단일 콜로니를 MRS(de Man, Rogosa and Sharpe) 브로쓰(broth) (Difco) 100mL에 접종하고 30℃에서 배양하여, 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle의 배양액을 제조하였다.
[실시예 1-2] DNA 추출
DNA는 FastDNA SPIN for Soil Kit (MP Biomedicals, France)를 이용하여, 제작사의 포로토콜에 따라 DNA를 추출하였다. DNA 추출은 분쇄 물질 E 튜브(Lysing matrix E tube)에 978 ㎕의 시료와 MT buffer 122 ㎕를 첨가하고, 5 분간 볼텍싱(voltexing)한 후, 14,000 rpm으로 10 분간 원심분리를 하였다. 원심분리 후 상층액을 2㎖ catch tube에 옮기고, 250 ㎕ PPS를 첨가한 후, 10 회 인버팅(inverting)을 실시하였으며, 다시 14,000 rpm으로 원심분리 후 상층액을 새로운 2 ㎖ catch tube에 옮겼다. 바인딩 매트릭스 용액(Binding matrix solution)을 1 ㎖ 첨가하고 상온에 3 분간 침전시켰으며, 상층액 500 ㎕를 제거하고, 나머지 용액을 재부유한 후 스핀필터(spin filter)에 600 ㎕를 취하여 넣었다. 14,000 rpm 으로 1 분간 원심분리하고, SEWS-M를 이용하여 필터안의 바인딩 매트릭스(binding matrix)를 재부유하였으며, 다시 14,000 rpm으로 1 분간 원심분리한 후, 세척을 2회 반복하였다. 필터를 상온에 완전히 건조시킨 후, DES 용액을 50 ㎕ 넣고 14,000 rpm으로 1 분간 원심분리하여 균주 DNA를 얻었다.
[실시예 1-3] PCR(16S rRNA의 증폭)
16S rRNA 유전자 증폭은 균주 특정 프라이머(specific primer)인 27F와 유니버설프라이머(universal primer)인 1492R을 사용하였다 (표 1). 반응액의 조성은 10XPCR buffer 2 ㎕, 25 mM MgCl2 1 ㎕, 10 mM dNTPs 2 ㎕, forward primer (10 pmole) 1 ㎕, reverse primer (10 pmole) 1 ㎕, 0.5 unit Taq polymerase 0.5 ㎕를 사용하였으며, 최종 반응 용량이 20 ㎕가 되도록 하였다. PCR 반응은 95℃ 1 분, 55℃ 1 분, 75℃ 1 분 30 초씩 30 회를 실시하였으며, 마지막으로 72℃에서 8 분간 처리 후 4℃에서 보관하였다.
PCR thermocycler는 GeneAmp PCR system 9700 (Applied Biosystem, USA)를 이용하였다. 증폭된 PCR 산물은 1% agarose gel에서 전기영동 후, 브롬화 에티듐(ethidium bromide)로 염색하여 특정 band를 확인하였다.
프라이머 시퀀스 타겟 DNA
27F(서열번호 : 2) 5’-AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG-3’ bacterial 16S rDNA
1492R(서열번호 : 3) 5’-TAC GGY TAC CTT GTT ACG ACT T-3’ universal 16S rDNA
[실시예 1-4] Lactobacillus sakei(KCTC13416)와의 유사도 분석
염기서열정보는 MEGA 4.1 (Center of Evolutionary Functional Genomics Biodesign Institute, USA) program을 사용하였으며, Lactobacillus sakei MD Honeycuckle와 Lactobacillus sakei(KCTC13416)의, 16S rRNA 시퀀스의 계통학적 관계를 분석하였다. 그 결과, Lactobacillus sakei MD Honeycuckle와 Lactobacillus sakei(KCTC13416)의 유사도가 약 63%임을 알 수 있었다.
[실시예 2] 무세포 여액(Cellpfree filtrates)의 준비
실시예 1에서 얻은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle 1mL를 100mL의 MRS 브로쓰(broth)에 접종하였다. 그 후, 진탕 배양기에서 180rpm, 37℃의 조건하에 3일간 배양하면서, 24시간 간격으로(24시간, 48시간, 72시간) 10mL씩 샘플링하였다. 샘플링한 배양액을 원심분리(3000rpm, 15분)하고, 필터(pore size: 0,2um)를 이용하여 여과하여, 무세포 여액을 각각 얻었다.
[실험예 1] 아가 디스크 확산 시험(Agar disk diffusion assay)
[실험예 1-1] 무세포 여액의 준비
상기 실시예 2에서 얻은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle의 무세포 여액을 준비하였다.
[실험예 1-2] 병원성 미생물의 배양
병원성 미생물 각각(Escherichia coli K12W3110, Staphylococcus aureus (ATCC 65389), Salmonella typhiurium (KCTC 2053), Vibrio cholerae (KCTC 2730))을 100 ul씩 10ml의 브로쓰(broth)에 접종하고, 진탕배양기에서 180rpm, 37℃의 조건하에 24시간 배양하고, OD600을 측정하여, 배양액을 약 106CFU/ml로 희석하였다.
[실험예 2] 페이퍼 디스크(paper disk)의 적용
준비된 무세포 여액 50ul을 8mm 페이퍼 디스크에 분주하여, 페이퍼 디스크를 적셨다. 그 후 무세포 여액이 분주된 페이퍼 디스크를 약 10분 내지 15분간 방치하여 말렸다.
상기 실험예 1-2에서 얻은 병원성 미생물의 배양액 200ul을 분주하여 도말한 각각의 아가 플레이트(agar plate)에, 멸균 핀셋을 이용하여 상기 페이퍼 디스크를 각 구역에 심어주었다. 구역 1은 대조군으로서, MRS 브로쓰가 분주된 페이퍼 디스크를 심은 구역이고, 구역 2는 24시간 배양한 무세포 여액이 분주된 디스크를 심은 구역, 구역 3은 48시간 배양한 무세포 여액이 분주된 디스크를 심은 구역, 구역 4는 72시간 배양한 무세포 여액이 분주된 디스크를 심은 구역이다(도 1 참조 및 도 2 참조).
이후, 인큐베이터에서 37℃에서 12시간 배양한 후 투명대(clear zone)영역을 확인하였다.
또한, 양성 대조군으로, 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei (KCTC 13416), 이하 표준 균주라고 한다)을 사용하여, 상기와 동일한 실험을 하였다.
그 결과, 도 3에서 볼 수 있듯이, Vibrio cholerae (KCTC 2730)가 도말된 플레이트에서 투명대의 형성을 확인할 수 있었다. 또한, 본원 발명 균주인 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle이, 양성 대조군으로 사용된 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei (KCTC 13416))보다 더 넓은 투명대를 형성하는 것을 확인할 수 있었다(도 4 참조 및 표 2 참조).
V. cholera 동정균주 실험시 투명대 직경 크기(mm) 표준균주 실험시 투명대 크기(mm)
대조군 (MRS broth) 0 0
24시간 발효 배양 12 11
48시간 발효 배양 11.5 11.5
72시간 발효 배양 12.5 10
[실험예 2] 콜로니 계수
[실험예 2-1] 무세포 여액의 준비
상기 실시에 2에서 얻은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle의 무세포 여액을 준비하였다.
[실험예 2-2] 병원성 미생물의 배양
병원성 미생물 각각(Escherichia coli K12W3110, Staphylococcus aureus (ATCC 65389), Salmonella typhiurium (KCTC 2053), Vibrio cholerae (KCTC 2730))을 100 ul씩 10ml의 브로쓰(broth)에 각각 접종하고, 진탕배양기에서 180rpm, 37℃의 조건하에, 중간 로그 기(mid-log phase, OD600=0.4±0.1)까지 각각 배양하였다. 이 후 배양액 100 ul을 브로쓰에 각각 접종하고, 그 후 무세포 여액 400ul을 각각의 브로쓰에 분주하였다. 이 후, 진탕배양기에서 8시간 동안 배양하고 브로쓰로 희석하여, 희석한 배양액을 아가 플레이트에 100ul씩 분주하여 도말하였다. 이 후 24시간 동안 37℃에서 배양하고, 콜로니 계수를 실시하였다.콜로니 계수는 배양액을 순차적으로 희석하여 고체 배지에 도말한 후 100~200개의 군집이 형성된 플레이트에서 군집수를 확인한후 희색배수 만큼 곱하여 총 미생물 수를 산출하였다.
표준 균주에 대하여도 상기와 동일한 실험을 수행하여, 콜로니 계수를 실시하였다.
콜로니 계수의 결과는 로그값(log(CFU/ml))을 취하였다. 로그값이 낮을수록 처리해준 시료의 향균력이 큰 것으로 볼 수 있다. 결과는 도 5와 같다.
[실험예 3] DPPH assay
실시에 2에서 얻은 각각의 무세포 여액(24시간, 48시간, 72시간) 20ul과 0.2mM의 DPPH(SIGMA Aldrich) 1ml를 30분간 반응시켰다. 이때, L-ascorbic acid(SIGMA Aldrich)를 양성 대조군으로 이용하였고, L-아스크로빈 산은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle 무세포 여액과 동량으로, 12.5uM, 25uM, 50uM, 100uM의 농도로 각각 사용되었다. 균주를 접종하지 않은 MRS 브로쓰를 음성 대조군으로 하였다.
상기 반응 이후, 스펙트로포토메터를 이용하여 OD515를 측정하고, DPPH 라디칼 소거능을 계산하였다. 계산 방법은 하기와 같다.
Figure 112015013422686-pat00002
또한, 표준 균주에 대하여도 동일하게 실험을 수행하였다. 상기 실험은 3번 반복하였으며, 평균값을 도출하였다. 그 결과, 도 6에서 보이는 바와 같이, 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle은, 양성 대조군인 L-ascorbic acid에 비하여 우수한 DPPH 라디칼 소거능이 있음을 알 수 있었고(락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle은 평균 41%의 라디칼 소거능을 보였으나, L-ascorbic acid는 100uM의 농도에서 약 7%의 라디칼 소거능을 보임), 표준 균주인Lactobacillus sakei (KCTC 13416)보다도 우수한 DPPH 라디칼 소거능이 있음을 알 수 있었다.
[실험예 4] 총 폴리페놀 함량 측정
[실험예 4-1] 무세포 여액의 준비
상기 실시에 2에서 얻은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle의 무세포 여액을 준비하였다.
또한, 동일한 방법으로 표준 균주의 무세포 여액을 준비하였다.
[실험예 4-2] 총 폴리페놀 함량 측정
총 폴리페놀 함량은, 특정농도의 갈산(gallic acid)이 갖는 폴리페놀 함량을 통해 간접적인 방법으로 측정되었다.
0.2M의 Folin-Ciocalteu’s phenol 시약(SIGMA Aldrichi) 1ml를 1/10배 희석한 동정 균주의 무세포 여액 및 표준 균주의 무세포 여액 각각 1ml와 섞어, 실온(25℃)에서 5분간 반응시켰다. 반응시킨 용액에 6% sodium bicarbonate(SIGMA Aldrich)를 1ml 첨가하고 90분간 실온에서 반응시켰다. 이후, 스펙트로포토메타(Biochrom Libra S22)를 이용하여 725nm에서의 흡광도를 측정하였다. 그 후, Gallic acid(SIGMA Aldrich) 0ug/ml, 2ug/ml, 4ug/ml, 10ug/ml, 20ug/ml를 이용하여 검량선을 작성하였다. 시료의 총 폴리페놀 함량은 mg gallic acid/ml로 나타내었고, 그 결과는 도8에 나타내어진 바와 같다. 도 7에서 표현된 y=0.0274x+0.0165의 검량선의, y값은 흡광도를 의미하고, x값은 시료가 해당되는 갈산 농도의 폴리페놀 함량을 의미한다. 검량선을 기초로, 동정 균주 및 표준 균주의 발효 산물의 총 폴리페놀 함량을 계산하고, 그 결과는 도 8에 나타내었다.
[실험예 5] 멜라닌 생성 억제 능력 확인(B16 melanoma cell melanin assay)
하기 방법에 의하여 본원발명의 미백 효능을 평가하였다. B16 melanoma cell을 12웰 플레이트(12 well plate)에 웰당 1.5 X 105 cell이 되도록 시딩(seeding)하였다. 이때 배지는10%의 우태아 혈청이 함유된 배지인 DMEM(Dulbeco's Modified Eagle's Medium)를 사용하였고, 이후 24시간 동안 배양하였다(10% CO2, 37℃).
B16 melanoma cell이 시딩된 12 웰 플레이트에 200nM의 멜라닌세포자극호르몬(melanocyte-stimulating hormone, MSH)을 처리한 후, 실험군인 각 샘플 (각 25, 50, 100, 200ppm)을 12웰 플레이트에 처리하였다. 실험군은, 동정균주 자체를 초음파 분쇄한 후 그 여액을 처리한 군(LBS sonication), 동정균주 자체를 열처리 사멸시킨 여액을 처리한 군(LBS heat), 동정균주를 배양하고 배양액으로부터 균주를 제거한 액(배양액)으로 이루어진다. 양성대조군에는 코직산(kojic acid), 알부틴(arbutin) 각 100 ppm을 처리한 후 다시 3일간 배양하였다. 아무런 처리도 하지 않은 군은 음성대조군(negative control)으로 하였고, MSH만을 처리한 군은 비이클(vehicle)로 하였다. 상기 물질 처리 완료 후, 세포 배양액(세포외 멜라닌)을 96 well plate에 옮겨 475 nm 에서 흡광도를 측정했다. 측정된 값은 synthetic melanin에 대한 표준 곡선으로부터 멜라닌 함량(melanin content)로 산출되었다. 산출된 멜라닌 함량은 각 실험군의 단백질 총량으로 표준화한 다음 대조군과 비교하여 효능을 평가하였다. 실험은 각각 3회 실시하였다.
결과는 하기 표 3 에 나타내었으며, 측정된 값의 평균값은 도 9 에 나타내었다.
Figure 112015013422686-pat00003
한국생명공학연구원 KCTC12675BP 20140911
<110> AMOREPACIFIC CORPORATION <120> Composition comprising Lactobacillus sakei derived from Lonicera japonica Thunb. or cultured products thereof as a active ingredient <130> 15p016ind <160> 3 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1506 <212> RNA <213> Lactobacillus sakei MD_honey suckle <400> 1 ttttttgatt tttttatctc gacccaggcg aacgctgacc gcgtgcctaa tacatccaag 60 tcgaacgcac tctcgtttag attgaaggag cttgctcctg attgataaac atttgagtga 120 gtggcggacg ggtgactaac acgtgggtaa cctgccctaa agtgggggat aacatttgga 180 aacagatgct aataccgcat aaaacctaac accgcatggt gtagggttga aagatggttt 240 cggctatcac tttaggatgg acccgcggtg cattagttag ttggtgaggt aaaggctcac 300 caagaccgtg atgcatagcc gacctgagag ggtaatcggc cacactggga ctgagacacg 360 gcccagactc ctacgggagg cagcagtagg gaatcttcca caatggacga cagtctgatg 420 gagcaacgcc gcgtgagtga agaaggtttt cggatcgtaa aactctgttg tttgagaaga 480 atgtatctga tagtaactga tcaggtagtg acggtatcca accagaaagc cacggctaac 540 tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg tggcaagcgt tgtccggatt tattgggcgt 600 aaagcgagcg caggcggttt cttaagtctg atgtgaaagc cttcggctca accgaagaag 660 tgcatcgaaa cctgggaaac ttgagtgcag aagaggacag tggaactcca tgtgtagcgg 720 tgaaatgcgt agatatatgg aagaacacca gtggcgaagg cggctgtctg gtctgtaact 780 gacgctgagg ctcgaaagca tgggtagcaa acaggattag ataccctggt agtccatgcc 840 gtaaacgatg agtgctaggt gttggagggt ttccgccctt tagtgccgca gctaacgcat 900 taagcactcc gcctggggag tacgaccgca aggttgaaac tcaaaggaat tgacgggggc 960 ccgcacaagc ggtggagcat gtggtttaat tcgaagcaac gcgaagaacc ttaccaggtc 1020 ttgacatcct ttgaccactc tagagataga gctttccctt cggggacaaa gtgacaggtg 1080 gtgcatggtt gtcgtcagct cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccgc aacgagcgca 1140 acccttatta ctagctgcca gcatttagtt gggcactcta gtgagactgc cggtgacaaa 1200 ccggaggaag gtggggacga cgtcaaatca tcatgcccct tatgacctgg gctacacacg 1260 tgctacaatg gatggtacaa cgagttgcga gaccgcgagg tttagctaat ctcttaaaac 1320 cattctcagt tcggattgta ggctgcaact cgcctacatg aaaccggaat cgctagtaat 1380 cgcggatcag catgccgcgg tgaatacgtt cccgggcctt gtacacaccg cccgtcacac 1440 catgagagtt tgtaacaccc aaagccggtg aggtaccctg gggagccgcg tcttgtgtct 1500 cgttaa 1506 <210> 2 <211> 20 <212> RNA <213> Lactobacillus sakei MD_honey suckle <400> 2 agagtttgat cmtggctcag 20 <210> 3 <211> 22 <212> RNA <213> Lactobacillus sakei MD_honey suckle <400> 3 tacggytacc ttgttacgac tt 22

Claims (13)

  1. 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 항노화용 조성물.
  2. 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물.
  3. 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선용 조성물.
  4. 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 항미생물용 조성물.
  5. 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 조성물.
  6. 제2항에 있어서,
    상기 조성물은 멜라닌 세포 생성을 억제하는, 조성물.
  7. 제4항에 있어서,
    상기 미생물은 대장균속(Escherichia), 포도상구균속(Staphylococcus), 살모넬라속(Salmonella) 및 비브리오속(Vibrio)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 조성물.
  8. 제5항에 있어서,
    상기 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물은,
    시료를DPPH(Diphenylpicryl hydrazyl)와 반응 시키기 전과 반응시킨 후의 515nm에서의 흡광도 차이와, 시료를 DPPH와 반응시키기 전의 515nm에서의 흡광도 간의 비로 계산되는 DPPH 라디칼 소거능에 있어서,
    L-아스크로빈 산(L-ascrobic acid)을 시료로 사용할 때보다 상기 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP), 그 파쇄물, 그 배양산물 또는 그 추출물을 시료로 사용할 때DPPH 라디칼 소거능이 5배 이상 높은, 조성물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP)는 금은화(Lonicera japonica Thunb.)로부터 유래된 것인 조성물.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) MD_honey suckle(기탁번호: KCTC12675BP)는 서열번호 1의 16s rRNA를 포함하는 조성물.
  11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 화장료 조성물인 조성물.
  12. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 약학적 조성물인 조성물.
  13. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 건강 식품인 조성물.
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