KR102221097B1 - 스트레스 완화 및 피부 장벽 개선용 화장료 조성물 - Google Patents
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Abstract
락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus) HB-8023로 발효한 대추, 산조인, 단삼 및 강황 혼합물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 스트레스 관련 인자를 감소시키는 항스트레스 효과, 염증 억제 효과 및 피부 장벽 개선 효과를 나타내며, 화장료 조성물, 피부 외용제 및 식품 조성물로 다양한 방면에 활용될 수 있다.
Description
스트레스 완화 및 피부 장벽 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
피부 스트레스를 쌓이게 하는 요인으로는 자외선, 유해환경, 과도한 화장품의 사용, 심리적 스트레스 등이 있다. 이러한 다양한 요인으로 인해 피부가 스트레스를 받게 되면 피부는 민감한 상태가 되어 피부 재생 능력이 저하되고 이로 인해 피부 탄력이 저하되어 피부색이 칙칙해진다. 또한 유해환경이나 심리적인 스트레스로 인해 피부 노화가 촉진되고 피부 트러블이 생겨 피부에 염증을 유발하게 된다.
피부의 장벽 기능은 주로 피부의 가장 외각에 위치하는 각질층에 의해 나타나게 된다. 각질층은 단순한 장벽 기능뿐만 아니라 내부의 살아있는 세포층, 즉 표피층이나 진피층의 기능 및 역할, 구조 등에도 영향을 미치는 것으로 보고된 바 있어 그 중요성이 지속적으로 증가하고 있다.
피부가 스트레스 상태에 노출되게 되면 피부 장벽 손상으로 인한 피부 수분량 감소가 나타나게 되는데, 이로 인해 피부 표면 각질층의 유연성이 상실하게 되면서 피부가 건조하게 된다. 건조하게 변한 피부는 피부장벽의 기능이 상실하므로, 피부 장벽을 강화하기 위해서는 피부의 보습력을 유지하는 것이 매우 중요하다.
이러한 기술적 배경 하에서, 피부장벽기능 개선에 대한 연구(KR 등록번호 10-1552398)가 활발히 이루어지고 있으나 아직은 미비한 실정이다.
일 양상은 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus) HB-8023로 발효한 대추, 산조인, 단삼 및 강황 혼합물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
다른 양상은 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus) HB-8023로 발효한 대추, 산조인, 단삼 및 강황 혼합물을 유효성분으로 포함하는 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus) HB-8023로 발효한 대추, 산조인, 단삼 및 강황 혼합물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물을 제공하는 것이다.
일 양상은 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus) HB-8023로 발효한 대추, 산조인, 단삼 및 강황 혼합물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
용어 “락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus) HB-8023(수탁번호 KCTC 13322BP)”는 락토바실러스 속의 미생물 중 하나로서, 그람 음성 세균이며 젖산을 생산하는 미생물일 수 있다. 상기 락토바실러스 펜토서스 균주는 구체적으로 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus) HB-8023일 수 있으며, 이는 기탁번호 KCTC 13322BP로 기탁된 것일 수 있다.
용어 "개선"이란 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들어, 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미할 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 대추, 산조인, 단삼 및 강황 혼합물의 혼합 중량비는 1~5: 1~5: 1~5: 1~5일 수 있다. 또는 1~4:1~5:1~3:1~3, 1~4:1~5:1~3:1~2, 2~4:3~5:1~3:1~2일 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 스트레스 감소 효과가 있는 것일 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 장벽 개선 효과가 있는 것일 수 있다.
용어 “피부장벽”이란 피부 가장 바깥층인 표피의 상부층으로 각질형성세포와 지질로 이루어진 각질층을 의미할 수 있다. 이를 구성하는 지질은 세라마이드(50%), 콜레스테롤(25%), 및 지방산(25%)일 수 있다. 이들 지질이 감소하면 피부는 장벽이 무너져 외부자극에 쉽게 노출되며, 건조해지고, 노화가 일어날 수 있다. 보통 아토피 피부염이나 건조피부에서 세라마이드 감소를 확인할 수 있으며, 또한 나이가 들어감에 따라 콜레스테롤의 함량이 감소될 수 있다. 이러한 표피지질의 합성에서 표피 콜레스테롤 합성은 3-hydroxy-3methylglutaryl-Coenzyme A (HMG CoA) reductase의 활성도 증가와 관련되어 있으며, 표피 지방산 합성은 acetyl CoA carboxylase 와 fatty acid synthase(FAS) 활성도 증가와 연관이 되고, 표피 세라마이드 합성은 serine palmitoyl transferase(SPT)와 연관될 수 있다. 따라서 이들 효소의 증가는 표피지질의 합성을 증가시켜 장기적인 피부 장벽 기능 개선에도 도움을 주어 피부의 수분 함유 능력 증강, 피부 건조의 방지 등의 표피 보호 효능을 가질 수 있음을 의미할 수 있다.
또한, 상기 화장료 조성물은 화장료 조성물에 통상적으로 첨가되는 성분, 예컨대 항산화제, 안정화제, 가용화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 추가적으로 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등과 같은 화장수, 훼이셜 로션, 바디로션 등과 같은 유액, 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등과 같은 크림, 에센스, 화장연고, 스프레이, 젤, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션, 파우더 등의 제형으로 제조될 수 있다. 이 경우 상기 화장료 조성물은 유화제, 비누산, 용매, 착색제, 보존제, 항산화제, 소포제, 항균제, 항재침착제, 효소, 식물 또는 미네랄 오일, 지방, 형광물질, 살진균제, 굴수성 유발물질, 보습제, 방향제, 방향제 담체, 단백질, 실리콘, 용해화제, 당 유도체, 일광차단제, 비타민, 식물 추출물, 왁스 등을 포함하는 부형제를 함유할 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 가용화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜, 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌, 소르비톨, 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라가칸트 등이 이용될 수 있다.
다른 양상은 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus) HB-8023로 발효한 대추, 산조인, 단삼 및 강황 혼합물을 유효성분으로 포함하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.
상기 피부 외용제 조성물은 약학 조성물일 수 있으며, 상기 약학 조성물의 제형으로는 일예로 경고제(PLASTERS), 로션제(LOTIONS), 리니멘트제(LINIMENTS), 액제(LIQUIDS AND SOLUTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 엑스제(EXTRACTS), 연고제(OINTMENTS), 유동엑스제(FLUIDEXTRACTS), 유제(EMULSIONS), 현탁제(SUSPESIONS), 캅셀제(CAPSULES), 크림제(CREAMS), 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 첩부제, 서방화제제일 수 있다. 또한, 각각 통상의 방법에 따라 토닉, 로션, 유액(乳液), 크림, 연고, 젤, 스프레이, 무스, 액상제, 마스크팩제 또는 첩부제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
또 다른 양상은 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus) HB-8023로 발효한 대추, 산조인, 단삼 및 강황 혼합물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물 또는 건강기능식품을 제공한다.
상기 식품 조성물 또는 건강기능식품에서, 유효성분은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 상기 건강기능식품은 원료에 대하여 구체적으로 약 15 중량% 이하, 보다 구체적으로 약 10 중량% 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있다.
상기 식품 조성물 또는 건강기능식품은 담체, 희석제, 부형제 및 첨가제 중 하나 이상을 더 포함하여 정제, 환제, 산제, 과립제, 분말제, 캡슐제 및 액제 제형으로 이루어진 군에서 선택된 하나로 제형될 수 있다. 일 양상에 따른 화합물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 각종 식품류, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽제, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강기능성 식품류 등이 있다.
상기 식품 조성물 또는 건강기능식품은 상기 유효성분을 함유하는 것 외에 특별한 제한없이 다른 성분들을 필수 성분으로서 함유할 수 있다. 예를 들어, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 당업자의 선택에 의해 적절하게 결정될 수 있다.
또 다른 양상은 개체의 피부에 상기 조성물을 적용하는 단계를 포함하는 피부 스트레스 감소 또는 피부 장벽 개선 방법을 제공한다.
용어 "적용"은 손가락, 브러쉬, 솜뭉치, 패드, 스프레이, 스폰지, 면봉, 롤-온(roll-on) 등에 의한 적용과 같이, 개체의 피부에 투여 또는 도포하는 방법을 포함한다. 해당 분야의 통상의 기술자는 적용하는 적절한 방법을 용이하게 결정할 수 있다.
상기 조성물은 전술한 범위 내의 조성물일 수 있으며, 상기 조성물의 적용을 통해 전술한 바와 같이 피부 스트레스 감소 또는 피부 장벽 개선 효과를 달성할 수 있다.
일 실시예에 따르면, 상기 조성물은 코르티솔의 농도를 증가시키는 효소인 11β-HSD1를 억제하는 효과가 있으며, 전염증 사이토카인인 TNF-α를 억제하는 효과가 있고, 세라마이드를 합성하는 효소인 serine palmitoyl transferase(SPT), 물과 글리세롤을 피부 곳곳으로 운반하여 피부를 촉촉하게 유지해 주는 aquaporin 3, 표피에서 생성해 미생물 침입을 방어하는 항균 펩타이드 RNase7의 합성을 촉진하는 효과가 있다.
일 실시예에 따른 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus) HB-8023로 발효한 대추, 산조인, 단삼 및 강황 혼합물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 스트레스 관련 인자를 감소시키는 항스트레스 효과, 염증 억제 효과 및 피부 장벽 개선 효과가 있다.
이하 본 출원을 실시예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 출원을 예시적으로 설명하기 위한 것으로, 본 출원의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니며, 본 출원이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 명백할 것이다.
[실시예]
락토바실러스 펜토서스 HB-8023 균주의 분리 배양 및 동정
제주감귤김치 10 g을 채취하고 이를 멸균수 100 ㎖에 넣어 37℃에서 1 시간 동안 정치하였다. 정치된 멸균수를 식염수로 희석하여 락토바실리 MRS 브로스 (difco) 고체배지에 희석단계별로 100 ㎕ 분주하여 평판도말하고, 도말된 고체배지를 37℃에서 2 일간 배양하였다. 배양 후 생성된 락토바실러스 펜토서스 HB-8023(Lactobacillus pentosus; KCTC 13322 BP)의 콜로니를 분취하였다.
실시예의 제조
실시예 1: 락토바실러스 펜토서스 HB-8023 대추 발효물
Lactobacilli MRS Broth (BD사, 288130)에 37℃에서 1일 배양한 락토바실러스 펜토서스 HB-8023을 대추 열수추출물에 접종하여 37℃에서 1~7일 배양 후 균체를 제거한 배양물로부터 실시예 1을 제조하였다.
실시예 2: 락토바실러스 펜토서스 HB-8023 산조인 발효물
Lactobacilli MRS Broth (BD사, 288130)에 37℃에서 1일 배양한 락토바실러스 펜토서스 HB-8023을 산조인 열수추출물에 접종하여 37℃에서 1~7일 배양 후 균체를 제거한 배양물로부터 실시예 2를 제조하였다.
실시예 3: 락토바실러스 펜토서스 HB-8023 단삼 발효물
Lactobacilli MRS Broth (BD사, 288130)에 37℃에서 1일 배양한 락토바실러스 펜토서스 HB-8023을 단삼 열수추출물에 접종하여 37℃에서 1~7일 배양 후 균체를 제거한 배양물로부터 실시예 3을 제조하였다.
실시예 4: 락토바실러스 펜토서스 HB-8023 강황 발효물
Lactobacilli MRS Broth (BD사, 288130)에 37℃에서 1일 배양한 락토바실러스 펜토서스 HB-8023을 강황 열수추출물에 접종하여 37℃에서 1~7일 배양 후 균체를 제거한 배양물로부터 실시예 4를 제조하였다.
실시예 5: 락토바실러스 펜토서스 HB-8023 혼합 발효물
Lactobacilli MRS Broth (BD사, 288130)에 37℃에서 1일 배양한 락토바실러스 펜토서스 HB-8023을 천연물 4종(대추, 산조인, 단삼, 강황)을 혼합한 추출물에 접종하여 37℃에서 1~7일 배양 후 균체를 제거한 배양물로부터 실시예 5를 제조하였다. 상기 천연물 4종의 혼합 중량비는 3: 4: 2: 1, 3: 3: 2: 2, 2: 2: 3: 3, 1: 1: 1: 1 네가지로 실험하였다.
[비교예]
비교예의 제조
비교예 1: 대추 추출물
대추 건고물 함량 1~20%를 1~4시간 동안 열수추출 방법으로 제조 후, 건고물을 필터 하여 비교예 1을 제조하였다.
비교예 2: 락토바실러스 펜토서스 표준 균주 JCM 1558 대추 발효물
Lactobacilli MRS Broth (BD사, 288130)에 37℃에서 1일 배양한 락토바실러스 펜토서스 표준 균주 JCM 1558을 대추 열수추출물에 접종하여 37℃에서 1~7일 배양 후 균체를 제거한 배양물로부터 비교예 2을 제조하였다.
비교예 3: 산조인 추출물
산조인 건고물 함량 1~20%를 1~4시간 동안 열수추출 방법으로 제조 후, 건고물을 필터 하여 비교예 3을 제조하였다.
비교예 4: 락토바실러스 펜토서스 표준 균주 JCM 1558 산조인 발효물
Lactobacilli MRS Broth (BD사, 288130)에 37℃에서 1일 배양한 락토바실러스 펜토서스 표준 균주JCM 1558을 산조인 열수추출물에 접종하여 37℃에서 1~7일 배양 후 균체를 제거한 배양물로부터 비교예 4를 제조하였다.
비교예 5: 단삼 추출물
단삼 건고물 함량 1~20%를 1~4시간 동안 열수추출 방법으로 제조 후, 건고물을 필터 하여 비교예 5을 제조하였다.
비교예 6: 락토바실러스 펜토서스 표준 균주 JCM 1558 단삼 발효물
Lactobacilli MRS Broth (BD사, 288130)에 37℃에서 1일 배양한 락토바실러스 펜토서스 표준 균주JCM 1558을 단삼 열수추출물에 접종하여 37℃에서 1~7일 배양 후 균체를 제거한 배양물로부터 비교예 6을 제조하였다.
비교예 7: 강황 추출물
강황 건고물 함량 1~20%를 1~4시간 동안 열수추출 방법으로 제조 후, 건고물을 필터 하여 비교예 7을 제조하였다.
비교예 8: 락토바실러스 펜토서스 표준 균주 JCM 1558 강황 발효물
Lactobacilli MRS Broth (BD사, 288130)에 37℃에서 1일 배양한 락토바실러스 펜토서스 표준 균주JCM 1558을 강황 열수추출물에 접종하여 37℃에서 1~7일 배양 후 균체를 제거한 배양물로부터 비교예 8을 제조하였다.
비교예 9: 혼합 추출물
대추, 산조인, 단삼, 강황 혼합 건고물 함량 1~20%를 1~4시간 동안 열수추출 방법으로 제조 후, 건고물을 필터하여 비교예 9을 제조하였다. 상기 혼합 추춤물의 혼합 중량비는 3: 4: 2: 1, 3: 3: 2: 2, 2: 2: 3: 3, 1: 1: 1: 1 네가지로 실험하였다.
비교예 10: 락토바실러스 펜토서스 표준 균주 JCM 1558 혼합 발효물
Lactobacilli MRS Broth (BD사, 288130)에 37℃에서 1일 배양한 락토바실러스 펜토서스 표준 균주JCM 1558을 천연물 4종(대추, 산조인, 단삼, 강황)을 혼합한 추출물에 접종하여 37℃에서 1~7일 배양 후 균체를 제거한 배양물로부터 비교예 10을 제조하였다. 상기 혼합 발효물의 혼합 중량비는 3: 4: 2: 1, 3: 3: 2: 2, 2: 2: 3: 3, 1: 1: 1: 1 네가지로 실험하였다.
[실험예]
실험예 1: 피부 스트레스 인자 억제 효과의 확인
실시예 및 비교예의 피부 스트레스 인자인 11β-HSD1 억제를 통한 스트레스 저감 효과를 확인하기 위하여 하기와 같은 실험을 실시했다.
11β-HSD1 저해효과와 코르티솔의 농도를 평가하기 위해, 사람각질형성세포를 6 well plate에 3X105/ml 로 희석한 각질형성세포주를 3 ml씩 분주하여 10%의 FBS 가 첨가된 배지를 이용하여 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후 배지를 제거하고 DPBS를 넣어 세척 후 serum free 배지(스트레스 조건)에 1 μM cortisone 첨가한 뒤 실시예 및 비교예를 첨가하여 48시간 동안 추가로 배양하였다. 실시예 5, 비교예 9 및 10은 대추, 산조인, 단삼, 강황의 혼합 중량비 1:1:1:1로 실시하였다. 양성대조군으로 11β-HSD1의 특이 저해제인 PF 915257를 사용하였다. 그 후 각 샘플의 세포 및 배지를 수거하였다. 세포에서 Total RNA 추출은 RNeasy mini kit (Qiagen, Hilden, Germany)을 이용하였고, RNA를 분리한 뒤 nanodrop을 이용하여 260㎚에서 RNA를 정량한 후, 각각 1㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(2720 Thermal Cycler, Applied Biosystems, USA). 합성된 cDNA에 타겟 단백질인 11β-HSD1 주형(primer)과 시아닌 염료인 사이버그린 (Luna Universal qPCR Master Mix, New England BioLabs, 미국)을 첨가한 혼합물을 이용하여 real-time PCR 기계에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 실시함으로써 최종적으로 11β-HSD1 유전자의 발현 정도를 평가하였다. 주형의 서열은 하기의 표 1과 같았으며, 유전자의 발현량은 RPL13A 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다. 이에 대한 결과는 하기 표 1에 나타내었다.
| 프라이머 | 서열 | |
| 11β-HSD1 | F | 5'-TCT CCT CTC TGG CTG GGA AAG-3’ |
| R | 5'-GAA CCC ATC CAA AGC AAA CTT G-3' | |
| RPL13A | F | 5’-CTC AAG GTC GTG CGT CTG AA-3’ |
| R | 5’-TGG CTG TCA CTG CCT GGT ACT-3’ | |
배지에서 코르티솔의 농도는 Cortisol Parameter assay kit (KGE008B, R&D System, USA)를 이용하여 측정하였다. 이에 대한 결과는 하기 표 2에 나타내었다.
| 시료명 | 11β-HSD1 mRNA발현량 | Cortisol 농도 (ng/ml) |
| 5% FBS | 0.323 | 2.25 |
| 0% FBS (스트레스 조건) | 1.000 | 7.07 |
| 비교예 1 | 0.615 | 5.05 |
| 비교예 2 | 0.612 | 4.36 |
| 비교예 3 | 0.584 | 4.49 |
| 비교예 4 | 0.531 | 3.85 |
| 비교예 5 | 0.672 | 5.64 |
| 비교예 6 | 0.625 | 5.01 |
| 비교예 7 | 0.695 | 6.12 |
| 비교예 8 | 0.653 | 5.25 |
| 비교예 9 | 0.532 | 4.32 |
| 비교예 10 | 0.495 | 4.05 |
| 실시예 1 | 0.412 | 3.52 |
| 실시예 2 | 0.395 | 3.25 |
| 실시예 3 | 0.450 | 3.84 |
| 실시예 4 | 0.497 | 4.05 |
| 실시예 5 | 0.305 | 2.14 |
| PF 915275 5uM | 0.332 | 2.80 |
11β-HSD1 효소의 발현은 각 천연물 추출물마다 차이는 있으며, 추출물로는 비교예 9가 가장 발현 억제 효과가 좋았다. 또한, 발효물로는 표준균주를 이용한 발효물보다 HB-8023을 이용한 발효물이 발현 억제 효과가 높았으며, 그 중 혼합추출물을 HB-8023으로 발효한 실시예 5가 가장 우수한 효능을 가지고 있었다. 11β-HSD1 효소의 억제가 높은 시료 일수록 코르티솔 농도 또한 낮게 확인되었으며, 그 중 실시예 5가 가장 낮게 나와 스트레스 호르몬 저감효과가 뛰어난 시료인 것을 확인할 수 있었다.
실험예 2: 피부 염증 억제 효과의 확인
피부 염증 유발인자인 TNF-α를 억제를 통한 피부 염증 억제 효과를 확인하기 위하여 하기와 같은 실험을 실시했다.
실험예 1과 동일한 방법으로 실시예 및 비교예를 처리한 후 그 후 각 샘플의 세포를 수거하였다. 양성대조군으로 PF 915257를 사용하였다. 세포에서 Total RNA 추출은 RNeasy mini kit (Qiagen, Hilden, Germany)을 이용하였고, RNA를 분리한 뒤 nanodrop을 이용하여 260㎚에서 RNA를 정량 한 후, 각각 1㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(2720 Thermal Cycler, Applied Biosystems, USA). 합성된 cDNA에 타겟 단백질인 11β-HSD1 주형(primer)과 시아닌 염료인 사이버그린 (Luna Universal qPCR Master Mix, New England BioLabs, 미국)을 첨가한 혼합물을 이용하여 real-time PCR 기계에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 실시함으로써 최종적으로 TNF-α 유전자의 발현 정도를 평가하였다. 주형의 서열은 하기의 표 3과 같았으며, 유전자의 발현량은 RPL13A 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다. 이에 대한 결과는 표 4에 나타내었다. 그 결과, 표 4에서 나타난 바와 같이 스트레스 호르몬인 코르티솔이 농도가 증가하는 조건에서는 염증 유발인자가 증가하였고 실시예 5를 처리하였을 때 염증 반응을 억제하는 효과가 가장 우수하다는 것을 확인하였다.
| 프라이머 | 서열 | |
| TNF-α | F | 5’-CCC AGG GAC CTC TCT CTA ATC -3’ |
| R | 5’-GGT TTG CTA CAA CAT GGG CTA CA-3’ | |
| RPL13A | F | 5’-CTC AAG GTC GTG CGT CTG AA-3’ |
| R | 5’-TGG CTG TCA CTG CCT GGT ACT-3’ | |
| 시료명 | TNF-α mRNA발현량 |
| 5% FBS | 0.111 |
| 0% FBS (스트레스 조건) | 1.000 |
| 비교예 1 | 0.595 |
| 비교예 2 | 0.492 |
| 비교예 3 | 0.584 |
| 비교예 4 | 0.503 |
| 비교예 5 | 0.465 |
| 비교예 6 | 0.397 |
| 비교예 7 | 0.482 |
| 비교예 8 | 0.415 |
| 비교예 9 | 0.575 |
| 비교예 10 | 0.434 |
| 실시예 1 | 0.450 |
| 실시예 2 | 0.403 |
| 실시예 3 | 0.345 |
| 실시예 4 | 0.372 |
| 실시예 5 | 0.216 |
| PF 915275 5uM | 0.342 |
실험예 3: 피부 장벽 강화 효과의 확인
피부 스트레스 조건에서는 피부장벽 구성의 지질인 세라마이드를 합성하는 효소인 serine palmitoyl transferase(SPT), 물과 글리세롤을 피부 곳곳으로 운반하여 피부를 촉촉하게 유지해 주는 aquaporin 3, 표피에서 생성해 미생물 침입을 방어하는 항균 펩타이드 RNase7가 감소하여 피부장벽을 무너뜨린다.
실험예 1과 같이 코티손을 첨가하여 코티솔로 전환되는 조건의 세포에 대한 실시예 및 비교예들의 영향을 SPT, AQP3, RNase 7를 증가시켜 피부장벽을 강화하는 측면에서 비교하여 확인하였다. 양성대조군으로 PF 915257을 사용하였다.
실험예 1과 실험예 2에서 가장 우수한 시료인 비교예 9, 비교예 10, 실시예 5 총 3종을 선별하여, 각각 세포에 처리하였다. 각 처리된 세포의 Total RNA 추출은 RNeasy mini kit (Qiagen, Hilden, Germany)을 이용하였고, RNA를 분리한 뒤 nanodrop을 이용하여 260㎚에서 RNA를 정량한 후, 각각 1㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(2720 Thermal Cycler, Applied Biosystems, USA). 합성된 cDNA에 타겟 단백질인 11β-HSD1 주형(primer)과 시아닌 염료인 사이버그린 (Luna Universal qPCR Master Mix, New England BioLabs, 미국)을 첨가한 혼합물을 이용하여 real-time PCR 기계에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 실시함으로써 최종적으로 SPT, AQP3, RNase 7 유전자의 발현 정도를 평가하였다. 주형의 서열은 하기의 표 5와 같았으며, 유전자의 발현량은 RPL13A 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다. 이에 대한 결과는 하기 표 6에 나타내었다.
| 프라이머 | 서열 | |
| SPT | F | 5'- AGT GGG TTC TGG TGG AGA TG -3' |
| R | 5'- TTT GGG ACA GGA GGA ACA AG -3' | |
| AQP3 | F | 5’- CCT TTG GCT TTG CTG TCA CTC -3’ |
| R | 5’- CGG GGG ACG GGG TTG TTG TAA -3’ | |
| RNase 7 | F | 5’- GGA GTC ACA GCA CGA AGA CCA -3’ |
| R | 5’- CAT GGC TGA GTT GCA TGC TTG A -3’ | |
| RPL13A | F | 5’-CTC AAG GTC GTG CGT CTG AA-3’ |
| R | 5’-TGG CTG TCA CTG CCT GGT ACT-3’ | |
| 시료명 | SPT mRNA발현량 | AQP3 mRNA발현량 | RNase 7 mRNA발현량 |
| 5% FBS | 1.430 | 4.100 | 2.400 |
| 0% FBS (스트레스 조건) | 1.000 | 1.000 | 1.000 |
| 비교예 9 | 0.981 | 1.474 | 1.206 |
| 비교예 10 | 1.000 | 2.458 | 1.509 |
| 실시예 5 | 1.452 | 3.543 | 1.911 |
| PF 915275 5uM | 1.370 | 1.027 | 0.948 |
그 결과, 실시예 5가 피부장벽에 영향을 주는 3개의 인자 발현효과가 가장 우수함을 확인하였으며, 이는 곧 실시예 5의 피부장벽강화 효과가 가장 우수함을 의미한다.
실험예 4: 대추, 산조인, 단삼 강황 혼합물의 피부 스트레스 인자 억제 효과에 대한 최적의 혼합 중량비의 확인
실시예 5의 대추, 산조인, 단삼, 강황 혼합물의 최적의 혼합 중량비를 확인하기 위하여, 동일한 조건 하에 다양한 혼합 중량비를 실시하여 실험예 1의 실험을 동일하게 수행하였다.
그 결과 하기 표 7에 나타난 바와 같이, 대추, 산조인, 단삼, 강황의 혼합 중량비 3:4:2:1에서 가장 높은 스트레스 인자 감소 효과를 확인하였다. 이는 곧, 상기 혼합 중량비는 현저한 시너지 효과를 가짐을 의미한다.
|
혼합 중량비
(대추:산조인:단삼:강황) |
11β-HSD1 mRNA발현 억제율(%) | Cortisol 농도(ng/ml) | |
| 0% FBS (스트레스 조건) | 0 | 7.07 | |
| 비교예 9 | 3: 4: 2: 1 | 46.8 | 4.32 |
| 3: 3: 2: 2 | 41.0 | 4.99 | |
| 2: 2: 3: 3 | 33.2 | 5.84 | |
| 1: 1: 1: 1 | 37.3 | 5.51 | |
| 비교예 10 | 3: 4: 2: 1 | 50.5 | 4.05 |
| 3: 3: 2: 2 | 47.4 | 4.25 | |
| 2: 2: 3: 3 | 39.5 | 5.14 | |
| 1: 1: 1: 1 | 43.1 | 4.35 | |
| 실시예 5 | 3: 4: 2: 1 | 69.5 | 2.14 |
| 3: 3: 2: 2 | 64.2 | 2.57 | |
| 2: 2: 3: 3 | 56.7 | 3.92 | |
| 1: 1: 1: 1 | 59.8 | 3.35 | |
| PF 915275 5uM (양성대조군) | 66.8 | 2.80 | |
실험예 5: 대추, 산조인, 단삼 강황 혼합물의 피부 염증 억제 효과에 대한 최적의 혼합 중량비의 확인
실험예 4에서 선별된 대추, 산조인, 단삼, 강황의 혼합 중량비 3:4:2:1의 최적 혼합 중량비를 토대로 실험예 2의 실험을 동일하게 수행하였다.
그 결과 하기 표 8에 나타난 바와 같이, 스트레스 호르몬인 코르티솔의 농도가 증가하는 조건에서는 염증 유발인자가 증가하였고 실시예와 비교예 중 스트레스 인자 저감효과가 가장 우수한 실시예 5를 처리할 시 염증 반응을 억제하는 효과가 가장 우수하다는 것을 확인하였다.
| 시료명 | TNF-α mRNA발현 억제율(%) |
| 비교예 9 | 42.5 |
| 비교예 10 | 56.6 |
| 실시예 5 | 78.4 |
| PF 915275 5uM | 65.8 |
실험예 6: 대추, 산조인, 단삼 강황 혼합물의 피부 장벽 강화 효과에 대한 최적의 혼합 중량비의 확인
실험예 4에서 선별된 대추, 산조인, 단삼, 강황의 혼합 중량비 3:4:2:1의 최적 혼합 중량비를 토대로 실험예 3의 실험을 동일하게 수행하였다.
그 결과, 하기 표 9에 나타난 바와 같이, 실시예 5가 피부장벽에 영향을 주는 3개의 인자에 대한 발현 촉진 효과가 가장 우수하였다. 이는 곧, 실시예 5의 피부장벽강화 효과가 우수함을 의미한다.
| 시료명 | mRNA발현 증가율 (%) | ||
| claudin 1 | AQP3 | LL-37 | |
| 비교예 9 | 27.2 | 36.0 | 46.3 |
| 비교예 10 | 30.9 | 60.0 | 50.6 |
| 실시예 5 | 43.4 | 86.4 | 66.1 |
| PF 915275 5uM | -16.5 | 25.0 | 21.5 |
Claims (6)
- 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus) HB-8023로 발효한 대추, 산조인, 단삼 및 강황 혼합물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 대추, 산조인, 단삼 및 강황 혼합물의 혼합 중량비는 1~5: 1~5: 1~5: 1~5인 것인 화장료 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 스트레스 감소 효과가 있는 것인 화장료 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 장벽 강화 또는 개선 효과가 있는 것인 화장료 조성물.
- 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus) HB-8023로 발효한 대추, 산조인, 단삼 및 강황 혼합물을 유효성분으로 포함하는 피부 염증 억제용 조성물.
- 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus) HB-8023로 발효한 대추, 산조인, 단삼 및 강황 혼합물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020200121800A KR102221097B1 (ko) | 2020-09-21 | 2020-09-21 | 스트레스 완화 및 피부 장벽 개선용 화장료 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
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| KR1020200121800A KR102221097B1 (ko) | 2020-09-21 | 2020-09-21 | 스트레스 완화 및 피부 장벽 개선용 화장료 조성물 |
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|---|---|
| KR102221097B1 true KR102221097B1 (ko) | 2021-02-26 |
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| KR1020200121800A KR102221097B1 (ko) | 2020-09-21 | 2020-09-21 | 스트레스 완화 및 피부 장벽 개선용 화장료 조성물 |
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| KR (1) | KR102221097B1 (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102376622B1 (ko) * | 2022-01-14 | 2022-03-18 | 재단법인 발효미생물산업진흥원 | 항염증 및 항산화 활성을 갖는 락토바실러스 펜토수스 srcm209254 균주 및 이의 용도 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| KR101226758B1 (ko) * | 2010-09-28 | 2013-01-25 | 한국 한의학 연구원 | 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물 |
| KR20200058900A (ko) * | 2018-11-20 | 2020-05-28 | 주식회사 뉴랜드올네이처 | 단삼(Salvia miltiorrhiza) 추출물 또는 발효물을 포함하는 화장료 조성물 및 이의 용도 |
| KR102152878B1 (ko) * | 2020-03-02 | 2020-09-07 | 주식회사 잇츠한불 | 락토바실러스 펜토서스 균주 및 이를 포함하는 미생물 균총 개선 및 피부 장벽 개선용 조성물 |
| KR20200106332A (ko) * | 2019-03-04 | 2020-09-14 | 김영수 | 대추 발효액을 포함하는 항산화 및 주름 개선용 조성물 |
-
2020
- 2020-09-21 KR KR1020200121800A patent/KR102221097B1/ko active IP Right Grant
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