KR102250462B1

KR102250462B1 - 꽃 추출물을 함유하는 다기능 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102250462B1
Application number: KR1020200017165A
Authority: KR
Inventors: 이태범; 유병완; 김지효; 소양강; 황지영; 김세율
Original assignee: 재단법인 남원시화장품산업지원센터
Priority date: 2020-02-12
Filing date: 2020-02-12
Publication date: 2021-05-11

Abstract

본 발명은 꽃 추출물을 함유하는 다기능 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따르면, 꽃 추출물을 함유하는 다기능 화장료 조성물에 있어서, 상기 꽃 추출물은 꽃향유 추출물, 왕벚나무꽃 추출물, 흰민들레 추출물 및 복사나무꽃 추출물을 포함하는 다기능 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

Description

꽃 추출물을 함유하는 다기능 화장료 조성물{Multifunctional cosmetic composition containing a flower extract}

본 발명은 꽃 추출물을 함유하는 다기능 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 남원·지리산권 자원식물을 이용하여 추출한 꽃 추출물을 함유함으로써, 항산화, 미백, 주름 개선, 보습 기능을 나타내는 다기능 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 대기오염, 온도, 과도한 자외선 등 외부자극에 노출되어 있어 산화적 스트레스를 발생시키고(Wlaschek M,), 이러한 노출은 피부 조직을 손상해 외인성 노화 과정을 촉진하는 것으로 보고되어 있다(Matsumura Y,). 그리고 피부는 미생물이나 물리화학적 외부환경으로부터 신체 내부를 보호하는 장벽으로서의 역할을 수행할 뿐만 아니라 주름 형성과 색소침착에 연관되어 있으며 면역 기능을 수행하고 있다(Ha TK). 또한 수분을 함유하고 있어 피부 보습을 증가시키고 수분의 증발을 막아 건강하고 탄력 있는 피부 유지 및 피부 노화를 방지한다(Kim DS).

천연물에 포함되어 있는 수 많은 phenolic compounds 및 flavonoids 성분들이 항산화, 미백, 주름, 보습에 효과가 있다고 알려져 있다(Panzella L, Garg C,).

그리고 최근 화장품 원료의 안전성과 건강에 대한 소비자 의식 증가로 인해 친환경적인 천연원료 화장품에 대한 욕구가 높아감에 따라 생물자원 유래 화장품 원료 개발이 활발히 추진되고 있다.

따라서, 이를 예방하기 위하여 항산화, 미백, 주름 개선, 보습 기능이 있는 기능성 화장품에 대한 요구가 증가하고 있으며, 이에 따라 천연물을 이용한 화장품 소재로서의 가능성에 대한 연구가 필요한 실정이다.

또한 나고야의 정서가 발효됨에 따라 해외 자원 의존성이 높은 화장품 바이오소재 분야의 장기적 경쟁력 제고를 위하여 수입 의존도가 높은 화장품 기초소재 국산화 및 나고야 의정서 대응 자생 천연 생물자원 화장품 소재 국산화가 시급한 실정이다.

상기와 같은 문제를 해결하고자, 본 발명은 남원·지리산권 자원식물을 이용하여 추출한 꽃 추출물을 함유함으로써, 항산화, 미백, 주름 개선, 보습 기능을 나타내는 다기능 화장료 조성물을 제공하는데 목적이 있다.

상기와 같은 과제를 해결하기 위하여, 본 발명의 실시예에 따른 꽃 추출물을 함유하는 다기능 화장료 조성물은 꽃 추출물을 함유하는 다기능 화장료 조성물에 있어서, 상기 꽃 추출물은 꽃향유 추출물, 왕벚나무꽃 추출물, 흰민들레 추출물 및 복사나무꽃 추출물을 포함하는 다기능 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

여기서, 상기 꽃 추출물은상기 꽃향유 추출물 20 내지 30중량부, 왕벚나무꽃 추출물 20 내지 30중량부, 흰민들레 추출물 45 내지 55중량부 및 복사나무꽃 추출물 45 내지 55중량부를 포함하는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 꽃 추출물은 상기 다기능 화장료 조성물 전체 중량에 대하여, 1 내지 5중량%로 함유되는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 꽃 추출물은 캐모마일 추출물, 찔레 추출물, 연 추출물, 산구절초 추출물, 감국 추출물 및 국화 추출물 중 하나 이상을 더 포함할 수 있다.

삭제

또한, 유액, 크림, 화장수, 에센스, 팩, 현탁액, 페이스트, 젤, 파우더, 립스틱, 메이컵 베이스, 파운데이션, 로션, 연고, 겔, 패취, 미용액, 클렌징 폼, 클렌징 크림, 클렌징 워터, 비누, 샴푸, 린스, 분무제의 제형인 것을 특징으로 한다.

상기와 같은 본 발명의 실시예에 따른 꽃 추출물을 함유하는 다기능 화장료 조성물은 남원·지리산권 자원식물을 이용하여 추출한 꽃 추출물을 함유함으로써, 항산화, 미백, 주름 개선, 보습 기능을 나타낼 수 있다.

또한, 각 추출물을 함께 사용함으로써 상호 보완되어 단독으로 사용하는 경우보다 우수한 기능을 가질 수 있다.

도 1의 (a) 및 (b)는 제조예 1 내지 10의 Melanin 생성량 및 tyrosinase 활성을 측정한 결과 그래프.
도 2의 (a) 및 (b)는 제조예 1 내지 10의 Elastase 활성 억제능 및 matrix metalloproteinase-1(MMP-1) 활성을 측정한 결과 그래프.
도 3의 (a) 및 (b)는 제조예 1 내지 10의 HAS-2와 HAS-3 mRNA의 발현량을 측정한 결과 그래프.

이하, 도면을 참조한 본 발명의 설명은 특정한 실시 형태에 대해 한정되지 않으며, 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있다. 또한, 이하에서 설명하는 내용은 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

이하의 설명에서 제1, 제2 등의 용어는 다양한 구성요소들을 설명하는데 사용되는 용어로서, 그 자체에 의미가 한정되지 아니하며, 하나의 구성요소를 다른 구성요소로부터 구별하는 목적으로만 사용된다.

본 명세서 전체에 걸쳐 사용되는 동일한 참조번호는 동일한 구성요소를 나타낸다.

본 발명에서 사용되는 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 또한, 이하에서 기재되는 "포함하다", "구비하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것으로 해석되어야 하며, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.

본 발명의 실시예에 따른 꽃 추출물을 함유하는 다기능 화장료 조성물(이하 '화장료 조성물'이라 함)은 꽃 추출물로 꽃향유 추출물, 왕벚나무꽃 추출물, 흰민들레 추출물 및 복사나무꽃 추출물을 포함함으로써, 항산화, 미백, 주름, 보습의 다기능을 나타내는 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

또한, 꽃 추출물에 캐모마일 추출물, 찔레 추출물, 연 추출물, 산구절초 추출물, 감국 추출물 및 국화 추출물 중 하나 이상을 더 포함함으로써, 보다 우수한 기능을 나타내도록 할 수 있다.

삭제

여기서, 꽃향유 추출물은 항산화, 주름 및 보습 기능을 가지는 것으로, 꽃향유 추출물 제조시 사용되는 꽃향유는 남원·지리산권에서 자란 것이고, 꽃 부위가 사용되며 꽃은 9~10월에 붉은 빛이 강한 자주색 또는 보라색으로 피고 줄기와 가지 끝에 빽빽하게 한쪽으로 치우쳐서 이삭으로 달리며 바로 밑에 잎이 있고, 포는 콩팥 모양으로 끝이 갑자기 바늘처럼 뾰족해지고 자줏빛이 돈다. 화관은 길이가 6mm 정도이고 입술 모양으로 갈라지는데, 윗입술꽃잎은 오목하게 들어가고 아랫입술꽃잎은 3개로 갈라진다. 꽃받침은 통 모양이고 끝이 5개로 갈라지며 털이 있다. 수술은 4개인데 그 중 2개가 길다.

왕벚나무꽃 추출물은 항산화, 주름 및 미백 활성 효과를 가지는 것으로, 왕벚나무꽃 추출물 제조시 사용되는 왕벚나무꽃은 남원·지리산권에서 자란 것이고, 4 내지 5월에 분홍색 또는 백색으로 피며 지름은 3㎝ 정도이고, 2 내지 5개가 잎겨드랑이에 달려 산방 또는 총상꽃차례를 이룬다. 꽃자루는 길이 3 내지 3.5㎝로서 가늘고 털이 없으며 밑부분에 포(苞)가 있다. 꽃잎과 꽃받침 조각은 각각 5개이고 수술은 40개 내외이다. 열매는 핵과(核果)로서 길이 6 내지 8㎜의 구형이며 6-7월에 적색에서 흑색으로 익는데, 이것을 버찌라고 한다.

흰민들레 추출물은 주름 및 보습 기능이 우수하고, 미백 기능을 가지는 것으로, 흰민들레 추출물 제조시 사용되는 흰민들레는 남원·지리산권에서 자란 것이고, 꽃 부위가 사용되며 꽃은 4~6월에 피고 처음에는 잎보다 짧은 꽃줄기가 자라서 끝에 1개씩 두상꽃차례가 하늘을 향하여 달리며 두화 밑에 털이 밀생한다.

복사나무꽃 추출물은 미백 및 보습 기능이 우수한 것으로, 복사나무꽃 추출물 제조시 사용되는 복사나무꽃은 남원·지리산권에서 자란 것이고, 4~5월에 잎보다 먼저 흰색 또는 옅은 홍색으로 피며, 꽃잎은 5장이다.

이러한 꽃향유 추출물, 왕벚나무꽃 추출물, 흰민들레 추출물 및 복사나무꽃 추출물은 각각 물 또는 유기용매 중 하나를 용매로하여 추출하는 것으로 제조될 수 있으며, 유기용매를 통해 추출되는 것이 바람직하다.

여기서 유기용매는 에탄올 또는 1,3-부틸렌글리콜(1,3-butylene glycol)이 바람직하나, 메탄올, 이소프로탄올, 부탄올 등도 사용할 수 있다. 또한, 에탄올을 사용할 경우 50% 에탄올을 사용하는 것이 바람직하나, 이는 본 발명의 실시예에 불과하므로 한정되지는 않는다.

이때 사용되는 꽃향유, 왕벚나무꽃, 흰민들레, 복사나무꽃은 남원·지리산권 자원식물로써, 전라북도 남원시에서 채취한 것으로 건조시켜 사용될 수 있는데, 35 내지 50℃에서 48시간 내지 84시간 건조한 것을 사용할 수 있고, 40℃에서 72시간 건조시킨 것을 사용하는 것이 바람직하다.

건조 온도가 35℃미만일 경우 건조시간이 너무 오래걸리거나 수분 증발이 잘 이루어지지 않아 추출 효율이 저하될 수 있으며, 50℃를 초과할 경우 타거나 유효성분에 파괴, 변형 등이 일어날 수 있다.

또한, 건조 시간이 48시간 미만일 경우 건조가 잘 이루어지지 않고, 84시간을 초과할 경우 이미 건조가 충분히 이루어져 있기 때문에 비효율적이며 오히려 추출 효율이 저하될 수 있다.

더욱 구체적으로, 꽃향유 추출물 또는 왕벚나무꽃 추출물 또는 흰민들레 추출물 또는 복사나무꽃 추출물은 원료(꽃향유, 왕벚나무꽃, 흰민들레 및 복사나무꽃 중 하나) 4 내지 6중량부에 95 내지 105중량부의 물 또는 유기용매를 첨가하고 가열한 후 여과하고 농축시키고 동결건조하여 제조될 수 있다. 이때, 원료 5중량부에 100중량부의 물 또는 유기용매를 첨가하는 것이 바람직하다.

이 경우 원료가 4중량부 미만일 경우 추출물의 효능이 적게 나타나고 6중량부를 초과할 경우 화장료의 관능적인 특성인 향과 색상에 영향을 미칠 수 있기 때문이다.

또한, 용매가 95중량부 미만일 경우 유효성분이 완전히 침출되지 않고 약간만 증발해도 추출액이 농축되고, 추출액의 유효성분이 과다한 열에 의해 국소적으로 파괴될 수 있으며, 105중량부 초과일 경우 유효성분의 용출량은 증가할 수 있으나 동결건조 시 비효율적이다.

한편, 용매로 유기용매를 사용할 경우 추출 시 75 내지 85℃에서 230 내지 250분 동안 가열할 수 있으며, 80℃에서 240분 동안 가열하는 것이 바람직하다. 또한 물을 사용할 경우에는 추출 시 95 내지 105℃에서 230 내지 250분 동안 가열할 수 있으며, 100℃에서 240분 동안 가열하는 것이 바람직할 수 있다.

이때, 유기용매를 사용할 때 온도가 75℃, 시간이 230분, 물을 사용할 때 온도가 95℃, 시간이 230분 미만이면 유효성분이 완전하게 추출되지 못할 수 있고, 유기용매를 사용할 때 온도가 85℃, 시간이 250분, 물을 사용할 때 온도가 105℃, 시간이 250분 초과하면 유효성분이 파괴될 수 있으며, 더 이상 추출되는 유효성분 수율이 더 증가하지 않으므로 더 이상의 추출은 의미가 없다.

화장료 조성물은 이와 같이 추출된 추출물을 배합하여 구성된 꽃 추출물을 함유함으로써, 항산화, 미백, 주름 및 보습의 다기능을 나타낼 수 있다.

여기서 각 추출물을 바람직한 배합비로 혼합하여 꽃 추출물을 구성함으로써, 항산화, 미백, 주름 및 보습의 각 기능이 보다 효과적으로 나타나도록 할 수 있다.

바람직한 배합비로 혼합된 꽃 추출물은 꽃향유 추출물 20 내지 30중량부, 왕벚나무꽃 추출물 20 내지 30중량부, 흰민들레 추출물 45 내지 55중량부 및 복사나무꽃 추출물 45 내지 55중량부를 포함할 수 있고, 추출물은 꽃향유 추출물 25중량부, 왕벚나무꽃 추출물 25중량부, 흰민들레 추출물 50중량부 및 복사나무꽃 추출물 50중량부를 포함하는 것이 보다 바람직하다.

또한, 꽃 추출물은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여, 1 내지 5중량%로 함유될 수 있으며, 2중량%가 가장 바람직하다.

이때, 화장료 조성물 전체 중량에 대하여, 꽃 추출물이 1 중량% 미만일 경우 항산화, 미백, 주름 및 보습 효과가 미미하고, 5중량%를 초과할 경우 피부 안전성에 문제가 발생할 수 있으며 관능적인 특성에 영향을 줄 수 있다.

또한 본 발명의 실시예에 따른 꽃 추출물을 함유하는 다기능 화장료 조성물의 꽃 추출물은 캐모마일 추출물, 찔레 추출물, 연 추출물, 산구절초 추출물, 감국 추출물 및 국화 추출물 중 하나 이상을 더 포함할 수 있으며, 모두 포함하는 것이 보다 바람직하다.

상기 추출물들도 상기에서 설명한 추출물과 동일한 방법으로, 원료(캐모마일, 찔레, 연, 산구절초, 감국 및 국화 중 하나)를 물 또는 유기용매 중 하나를 용매로 하여 추출하는 것으로 제조할 수 있다. 각 조건은 상기에서 설명한 바와 동일하므로 자세한 설명은 생략하도록 한다.

캐모마일 추출물은 미백 및 주름 기능을 나타내는 것으로, 캐모마일 추출물 추출시 사용되는 캐모마일은 남원·지리산권에서 자란 것으로 꽃 부위가 사용되며, 꽃은 5~9월에 피며, 혀 모양으로 생긴 15개의 흰색 테두리 꽃잎은 꽃턱이 커지면서 뒤로 젖혀진다. 꽃에서는 사과향이 난다. 씨는 2㎜ 크기로, 동물의 배설물에 의해 퍼진다.

찔레 추출물은 지표물질로 아스트라갈린(Astragalin) 및 갈산(Gallic acid)을 가지고 있어 우수한 항산화 효과를 나타낼 수 있으며, 히알루론산 생성능을 가져 보습효과를 나타낼 수 있다. 이때 찔레 추출물은 항산화 및 보습 기능뿐만 아니라 방부효과를 나타내어 화장료 조성물의 보존성을 향상시킬 수 있다.

이와 같은 찔레 추출물 제조시 사용되는 찔레는 남원·지리산권에서 자란 것으로 꽃 부위가 사용되며, 꽃은 5월에 흰색 또는 연한 붉은 색으로 피고 새 가지 끝에 원추꽃차례를 이루며 달린다. 작은꽃자루에 선모가 있고, 꽃받침조각은 바소꼴이며 뒤로 젖혀지고 안쪽에 털이 빽빽이 있다. 꽃잎은 달걀을 거꾸로 세운 모양이고 끝 부분이 파지며 향기가 있다

연 추출물은 소염작용과 진정 효과가 뛰어나 피부 진정 및 얼굴 빛을 맑게 해주는데 탁월한 효과를 가지고, 캄페놀, 비타민E, 무기질, 필수아미노산이 다량으로 함유되어 있어 항산화 작용을 통해 유해활성산소를 중화시켜 피부세포를 보호하기 때문에 체내의 유해산소를 감소시킬 수 있는 효과가 있다. 또한, 피부세포를 보호해 자외선으로부터 피부를 보호하고, 노화 예방, 모공 수렴, 피부결 개선에 효과가 있으며, 수분 공급 및 탄력관리에 효과적이다.

이와 같은 연 추출물 제조시 사용되는 연은 남원·지리산권에서 자란 것으로 꽃 부위가 사용되며, 연은 연못, 저수지 등에 심는 여러해살이풀로 잎은 둥근 방패처럼 생겼으며 여름철에 분홍색 또는 희색의 큰 꽃이 핀다. 주요성분은 꽃받침에 d-(-)-N-노르아르메파빈, 리리오데닌, N-노르누시페린, 누시페린, 꽃잎에는 플라보노이드인 루테올린, 7-글루코시드, 쿠에르세틴-7-글루코시드, 켐페롤-3-글루코실글루코시드(넬루보시드)가 있으며, 수렴, 지혈, 강장약으로 유정, 혈붕, 치루, 토혈, 신경쇠약 등에 쓰인다고 알려져 있다.

산구절초 추출물은 미백 및 보습 기능이 우수한 것으로, 산구절초 추출물 제조시 사용되는 산구절초는 남원·지리산권에서 자란 것이고 꽃 부위가 사용되며, 산기슭 풀밭에서 자라는데 높이 50cm 정도로 땅속줄기가 옆으로 길게 벋으면서 번식한다. 뿌리에 달린 잎과 밑부분의 잎은 1회깃꼴로 갈라진다. 생약 산구절초는 줄기와 잎을 말린 것이며, 한방과 민간에서는 꽃이 달린 풀 전체를 치풍·부인병·위장병에 처방되고 있다.

감국 추출물은 아피게닌, 루테오린, 아카세틴을 함유하므로, 활성 산소에 대한 보호 능력을 가져 피부의 산화적 손상을 예방하여 주름을 방지하고 탄력에 도움을 줄 수 있다. 또한, 피부에 유해한 물질의 활성을 잃게 하고 제거하며, 피부의 저항성을 증대시켜 피부 면역력 향상에 도움을 줄 수 있다.

이와 같은 감국 추출물 제조시 사용되는 감국은 남원·지리산권에서 자란 것으로 꽃 부위가 사용되며, 감국은 황국이라고도 하며 10 내지 11월에 황색으로 피고, 가지와 줄기 끝에 산방상으로 달리며 머리모양꽃차례의 지름은 2.5cm 정도이다. 총포는 길이 5~6mm이고, 화편은 4열로 배열하며 외편의 작고 달걀모양 또는 장타원형으로 등에 털이 있다.

국화 추출물은 미백 및 주름 기능이 우수한 것으로, 국화 추출물 제조시 사용되는 국화는 남원·지리산권에서 자란 것이고 꽃 부위가 사용되며, 꽃은 노란색·흰색·빨간색·보라색 등 품종에 따라 다양하고 크기나 모양도 품종에 따라 다르다. 꽃의 지름에 따라 18cm 이상인 것을 대륜, 9cm 이상인 것을 중륜, 그 이하인 것을 소륜이라 하며 꽃잎의 형태에 따라 품종을 분류하기도 한다.

이러한 캐모마일 추출물, 찔레 추출물, 연 추출물, 산구절초 추출물, 감국 추출물 및 국화 추출물은 꽃 추출물에 포함될 시 각각 5 내지 15중량부로 더 포함될 수 있다.

이때, 추출물이 각각 상기 범위 미만일 경우 추출물의 함유에 따른 기능성 향상 효과가 미미하고, 초과할 경우 중량 대비 상승 효과가 낮고, 피부 안전성에 문제가 발생할 수 있다.

삭제

이와 같은 꽃 추출물을 함유하는 다기능 화장료 조성물은 유액, 크림, 화장수, 에센스, 팩, 현탁액, 페이스트, 젤, 파우더, 립스틱, 메이컵 베이스, 파운데이션, 로션, 연고, 겔, 패취, 미용액, 클렌징 폼, 클렌징 크림, 클렌징 워터, 비누, 샴푸, 린스, 분무제의 제형과 같이 형성될 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다.

상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명의 실시예에 따른 꽃 추출물을 함유하는 다기능 화장료 조성물은 남원·지리산권 자원식물을 이용하여 추출한 꽃 추출물을 함유함으로써, 항산화, 미백, 주름 개선, 보습 기능을 나타낼 수 있다.

이하, 실시되는 실험 예들은 이해를 돕기 위하여 제시되는 것으로서, 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 하기 실험 예들에 한정되는 것은 아니다.

또한, 하기에서 화장료 조성물의 효과를 알아보기 위해 용매로 에탄올을 사용하여 실시예 및 실험예를 설명하였으나, 실질적으로 화장료 조성물을 제조 시엔 1,3-부틸렌글리콜(1,3-butylene glycol)가 주로 사용될 수 있다.

[ 제조예 1 내지 10]

하기 표 1의 원료를 가지고, 원료 5중량부에 대하여 100중량부의 50%에탄올을 첨가하고 첨가하고 80℃로 4시간 동안 가열한 후 여과하고 농축시키고 동결건조하는 것으로 제조예 1 내지 10의 추출물을 제조하였다.

[ 실험예 1] 세포독성 검사

WST-1 assay를 이용하여 제조예 1 내지 10의 세포 생존율을 측정하였다.

96 well plate에 B16F10 세포는 1Х10³ cells로 HS27과 HaCaT 세포는 5Х10³ cells로 분주한 후, 24h 동안 5% CO₂, 37℃조건에서 부착 및 안정화를 시킨 후, 제조예 1 내지 10을 각각 농도별(3.125~100㎍/ml)로 처리하여 B16F10 세포는 72h, HS27과 HaCaT 세포는 48h 동안 배양하였다.

WST-1 assay는 cell viability assay kit(EZ-Cytox, Dogen, Korea)를 이용하였고, 모든 well에 EZ-Cytox 용액 10㎕를 가해주고 다시 37℃, 5% CO₂에서 2h 배양한 뒤 흡광도 측정을 위해 1min 정도 부드럽게 shaking을 한 뒤 microplate reader(Tecan, Seestrasse, Switzerland)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과 제조예 1 내지 10는 모든 농도에서 큰 세포독성을 보이지 않는 것을 확인할 수 있었다.

[ 실험예 2] 폐놀성화합물 분석

제조예 1 내지 10의 페놀성화합물을 검출하기 위하여, HPLC를 이용하여 동시 다분석을 실시하였다.

제조예 1 내지 10 10㎎ 또는 표준품 1㎎을 취하여 50% 에탄올 1 ㎖에 용해하였고, 제조예 1 내지 10 10㎕를 HPLC에 주입하고 0.8㎖/min 속도로 분석하였다.

이동상으로는 water(0.1% formic acid)와 acetonitrile(0.1% formic acid)를 사용하였고, column은 Shim-pack VP-ODS(4.6 ㎜ x 250 ㎜, 5 ㎛)(Shimadzu, Kyoto, Japan)를 이용하여 흡광도 280 ㎚에서 분석하였다.

19종 표준품은 갈산(gallic acid), 클로로겐산(chlorogenic acid), 메틸 갈레이트(methyl gallate), 커피산(caffeic acid), 에피갈로카테인 갈레이트(EGCG), 시링산(syringic acid), p-쿠마르산(p-coumaric acid), 루틴(rutin), 엘라그산(ellagic acid), 페룰산(ferulic acid), 아스트라갈린(astragalin), 퀘르시트린(quercitrin), 로즈마린산(rosmarinic acid), 미리세틴(myricetin), 루테올린(luteolin), 퀘르세틴(quercetin), 아피제닌(apigenin), 캠퍼롤(kaempferol) 및 헤스페레틴(hesperetin)(Sigma-aldrich, St. Louis, MO, USA)을 이용하였다. 19종 페놀성 화합물의 retention time과 최대흡수파장은 표 2와 같다.

그 결과는 하기 표 3과 같다.

상기 표 3을 보면 알 수 있듯이, 제조예 1(왕벚나무), 제조예2(복사나무), 제조예3(흰민들레), 제조예4(저먼캐모마일), 제조예7(꽃향유), 제조예8(산구절초), 제조예9(감국), 제조예10(국화)에서 클로로겐산(chlorogenic acid)이 검출되었으며, 제조예2(복사나무), 제조예7(꽃향유), 제조예9(감국)에서 2% 이상의 높은 함량이 나타나는 것을 확인할 수 있었다.

제조예 1(왕벚나무), 제조예3(흰민들레)에서 커피산(caffeic acid)이 검출되었고, 제조예2(복사나무), 제조예5(찔레꽃), 제조예6(연꽃)에서 아스트라갈린(astragalin)이 검출되었으며, 제조예5(찔레꽃)에서 3% 이상의 높은 함량이 나타나는 것을 확인할 수 있었다.

제조예3(흰민들레), 제조예8(산구절초)에서 루테올린(luteolin), 제조예5(찔레꽃)에서 갈산(gallic acid), 제조예7(꽃향유)에서 로즈마린산(rosmarinic acid), 제조예10(국화)에서 아피제닌(apigenin)이 검출된 것을 확인할 수 있었다.

<클로로겐산(chlorogenic acid)과 갈산(gallic acid)은 항산화, 미백, 주름 및 보습 효과가, 커피산(caffeic acid)은 항산화, 주름, 보습 효과가, 아스트라갈린(astragalin)은 항산화 및 미백 효과가, 로즈마린산(rosmarinic acid)은 항산화, 미백 및 보습 효과가,루테올린(luteolin)은 항산화, 미백 및 주름 효과가 있다>

[ 실험예 3] 항산화 기능

항산화 기능을 확인하기 위하여 제조예 1 내지 10의 추출물에 대해 하기와 같은 방법으로 폴리페놀 및 플라보노이드 함량과 자유라디칼 소거능(free radical scavenging activity, SC)을 측정하여 항산화 기능을 평가하였다.

폴리페놀은 96well plate에 각 제조예 1 내지 10 80㎕와 1N Folin 시약 20㎕를 넣고, 실온에서 5분동안 배양하고, 2% Na₂CO₃ 시약 100㎕를 첨가한 다음, 실온에서 30분동안 배양한 후, ELISA 흡광도 750nm로 측정하였다.

플라보노이드는 96well plate에 각 제조예 1 내지 10 10㎕와 diethylene glycol 시약 100㎕를 넣고, 1N NaOH 10㎕를 첨가한 다음, 37℃에서 1시간동안 배양한 후, ELISA 흡광도 420nm로 측정하였다.

자유라디칼 소거능(free radical scavenging activity, SC)은 DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical) 용액 (60 M)을 준비하였다. 그런 다음 제조예 1 내지 10의 농도를 1 %로 조정하고, 여기에 DPPH 용액을 1:1 비율로 섞은 다음 볼텍싱(와류 혼합)하였다. 30분 동안 상온에서 반응시킨 후 520 nm에서 흡광도를 측정하여 하기 수학식 1의 공식에 따라 자유라디칼 소거능(free radical scavenging activity, SC)을 구하였다.

양성대조군으로는 Ascorbic acid을 사용하였다.

[수학식 1]

자유라디칼 소거능(%)=(대조군 흡광도-실시예 흡광도)/(대조군 흡광도)X100

그 결과는 하기 표 4와 같다.

상기 표 4를 보면 알 수 있듯이, 총폴리페놀 함량은 제조예5(찔레꽃), 제조예6(연꽃), 제조예7(꽃향유)이 각각 224mg/g, 177mg/g, 92mg/g으로 높았으며, 총플라보이드 함량은 제조예5(찔레꽃), 제조예6(연꽃), 제조예7(꽃향유), 제조예8(산구절초)이 각각 109mg/g, 87mg/g, 84mg/g, 80mg/g으로 높게 나타났다.

그리고 DPPH 라디칼 소거능은 제조예1(왕벚나무), 제조예5(찔레꽃), 제조예6(연꽃), 제조예7(꽃향유)이 각각 206㎍/ml, 105㎍/ml, 319㎍/ml으로 높게 나타났으며, 양성대조군인 L-ascorbic acid는 37㎍/ml 보다 높은 함량으로 나타나는 것을 확인하였다.

종합적으로 항산화 지표인 총폴리페놀과 총플라보노이드 함량, DPPH 라디칼 소거능이 우수한 소재는 제조예5(찔레꽃), 제조예6(연꽃), 제조예7(꽃향유)로 판단되었다.

[ 실험예 4] 미백 기능

미백 기능을 확인하기 위하여 제조예 1 내지 10의 추출물에 대해 하기와 같은 방법으로 멜라닌(Mealnin) 생성량 및 tyrosinase 활성을 측정하여 미백 기능을 평가하였다.

Mealnin 생성량은 B16F10 세포를 6 well plate에 1×10⁵ cells로 분주한 후 24시간 동안 배양하고, phenol-red free 배지로 교환한 후 제조예 1 내지 10을 100㎍/ml의 농도로 1시간 전처리 다음 200nM α-melanocyte stimulating hormone(α-MSH; Sigma, Saint Louis, MO, USA)를 72시간 처리하였다. 세포 내 멜라닌 생성량은 PBS로 세포를 수확한 후 13,000rpm에서 10분 동안 원심분리 한 후, 상층액은 버리고 세포 pellet 상태에 10% dimethyl sulfoxide가 함유된 1N NaOH 용액 120㎕를 첨가한 후 60℃에서 30분간 중탕하고 pellet을 용해시킨 후 405nm에서 흡광도를 측정하였다.

tyrosinase 활성은 B16F10 세포를 6 well plate에 1×10⁵ cells로 분주한 후 24시간 동안 배양하고, phenol-red free배지로 교환한 후 시료를 100㎍/ml의 농도로 1시간 전처리 다음 200nM α-MSH를 72시간 처리하였다. 세포를 PBS로 수확한 후 13,000rpm에서 10분 동안 원심분리 한 다음 상층액을 제거하였다. 세포 pellet에 1% triton X-100이 함유된 PBS 용액 150㎕를 첨가한 후 vortex 한 다음 -70℃에 얼렸다가 녹인 후 13,000rpm에서 10분 동안 원심분리하였다. 50㎍ 상층액에 5mM L-DOPA 20㎕를 첨가한 후 37℃에서 1시간동안 반응시킨 후 475nm에서 흡광도를 측정하였다.

Melanin 생성량 및 tyrosinase 활성 억제능의 양성대조군으로 rucinol(4-r-Butyiresorcinol, 4BR) 150μM를 사용하였다.

그 결과는 도 1과 같다.

도 1을 참고하면, 제조예2(복사나무), 제조예5(찔레꽃), 제조예6(연꽃), 제조예8(산구절초)이 Melanin 생성 억제 효과가 우수하게 나타나는 것을 확인할 수 있었고, α-MSH를 처리한 군 보다도 Melanin 생성 억제 효과가 높은 것을 확인할 수 있었다.

또한, 제조예5(찔레꽃), 제조예6(연꽃), 제조예8(산구절초)이 tyrosinase 활성 억제 효과가 우수하게 나타나는 것을 확인할 수 있었다.

[ 실험예 5] 주름 기능

주름 기능을 확인하기 위하여 제조예 1 내지 10의 추출물에 대해 하기와 같은 방법으로 Elastase 활성 억제능 및 matrix metalloproteinase-1(MMP-1) 활성을 측정하여 주름 기능을 평가하였다.

Elastase 활성 억제능은 0.1M Tris-HCl buffer(pH 8.0) 200㎕에 elastase(0.5 unit/ml) 100㎕와 500㎍/ml의 시료 50㎕를 넣은 혼합물을 실온에서 2분간 대기한 후 2mM N-succinyl-Ala-Ala-Ala-ρ-nitroanilide 200㎕를 첨가하고 25℃에서 10분간 mix하여 반응시킨 뒤 410nm에서 흡광도를 측정하였다.

양성대조군으로 ursolic acid 100㎍/ml를 사용하였다.

콜라겐분해효소(matrix metalloproteinase-1, MMP-1) 활성은 섬유아세포주인 HS27 세포를 24 well plate에 2×10⁵ cells로 분주한 후 24시간 동안 배양하였다. 배양한 세포는 serum free DMEM 배지로 2번 세척 후 serum free DMEM 배지로 교체한 뒤 시료를 100㎍/ml의 농도로 48시간 처리한 후, 배지를 수거하여 13,000rpm에서 5분 동안 원심분리하였다. ELISA는 시료를 1/40으로 희석한 후 MMP-1 ELISA(R&D systems DY901B, Minneapolis, MN, USA)를 이용하였으며 제조사에서 제공한 방법에 의해 측정하였다.

양성대조군으로 retinyl palmitate 100㎍/ml를 사용하였다.

그 결과는 도 2와 같다.

도 2를 참조하면, elastase 활성 억제능는 제조예 6(연꽃)이 51%로 가장 우수하였고, 제조예 5(찔레), 제조예 7(꽃향유), 제조예 10(국화)이 높게 나타난 것을 확인할 수 있었다.

MMP-1 활성 억제 효과는 제조예 6(연꽃), 제조예 5(찔레), 제조예 4(흰민들레), 제조예 8(산구절초), 제조예 9(감국)이 97%, 73%, 62%, 55%, 41%로 우수한 억제 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.

[ 실험예 6] 보습 기능

보습 기능을 확인하기 위하여 제조예 1 내지 10의 추출물에 대해 하기와 같은 방법으로 피부각질세포인 HaCaT 세포에서 히알루론산 생성효소(hyaluronan synthase, HAS)인 HAS-2와 HAS-3 mRNA의 발현량을 측정하여 보습 기능을 평가하였다.

피부보습에 대한 양성대조군은 all-trans retinoic acid (ATRA) 1㎕을 사용하였다.

그 결과는 도 3과 같다.

도 3을 참조하면, HAS-2 mRNA의 발현은 제조예 3(흰민들레), 제조예 2(복사나무), 제조예 8(산구절초), 제조예 7(꽃향유)이 대조군에 비해 2배이상 증가하였으며, 각각 10.1배, 2.7배, 2.5배, 2.2배 증가하였다.

그리고 HAS-3 mRNA 발현은 제조예 3(흰민들레), 제조예 10(국화), 제조예 9(감국), 제조예 4(저먼캐모마일), 제조예 8(산구절초), 제조예 7(꽃향유)이 대조군에 비해 2배 이상 증가하였고, 각각 8.0배, 4.0배, 3.5배, 3.4배, 2.5배, 2.2배 증가하였다.

종합적으로 히알루론산 생성유전자인 HAS-2와 HAS-3 mRNA의 발현이 높은 소재는 제조예 3(흰민들레), 제조예 8(산구절초), 제조예 7(꽃향유)로 판단되었다.

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[ 실시예 1 내지 4, 비교예 1 내지 4]

제조예 1 내지 10을 표 5의 중량부로 배합하여 실시예 1 내지 3, 비교예 1 내지 4의 꽃 추출물을 각각 제조하였다.

[ 제형예 1 내지 8] 크림 제조

실시예 1 내지 3, 비교예 1 내지 4의 꽃 추출물을 각각 이용하여 화장료 조성물인 제형예 1 내지 3, 5 내지 8을 제조하였고 하기 표 6에 나타내었다.

[ 실험예 7] 다기능 효과 확인

실시예 1 내지 3 및 비교예 1 내지 4를 이용하여 화장료 조성물을 제조한 제형예 1 내지 3, 5 내지 7의 다기능성을 확인하기 위하여, 항산화 활성, 보습 개선 효과, 주름 개선 효과를 확인하였다.

1) 항산화 효과는 다른 항산화제 즉, BHT를 비교샘플로 하여, NBT법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다.

항산화 효과를 측정하기 위해서 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성산소를 NBT법에 의해 측정하고 피검물질이 활성산소를 제거하는 효과, 즉 활성산소 소거효과를 평가하였다. 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성된 활성산소를 니트로블루테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium;NBT)과 반응시켜 이것에 의해 생성되는 청색을 파장 560nm에서 측정하는 것으로 활성산소 소거율을 측정하였으며, 구체적인 활성산소 소거율 측정방법은 다음과 같다. 바이알(5ml vial)에 0.05M Na₂CO₃ 2.4ml, 3mM 크산틴 용액 0.1ml, 3mM EDTA 용액 0.1ml, BSA 용액 0.1ml 및 0.72mM NBT 용액 0.1ml를 가하고, 여기에 DMSO(dimethyl sulfoxide)에 0.1(wt/v)%농도로 제조한 시료용액 0.1ml을 첨가하고 25℃에서 10분간 방치한다. 그 후 크산틴 옥시다제 용액 0.1ml을 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 20분간의 배양을 개시한다. 그 후 6Mm CuCl₂ 용액 0.1ml을 가하여 반응을 정지시키고 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다. 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다. 역시, 시료용액의 블랭크(Blank)는 크산틴 옥시다제 용액 대신에 증류수를 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다. 효과의 결과는 하기 수학식 2에 의하여 산출하였으며, 결과는 하기 표 7에 나타내었다.

[수학식 2]

억제율(%) = 〔1-([0039] St-So)/(Bt-Bo)〕Х 100

St : 시료용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도

Bt : 공시험용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도

So : 시료용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도

Bo : 공시험용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도

상기 표 7에서 알 수 있듯이, 모든 시료에서 항산화 효과를 확인할 수 있었다. 다만, 실시예 1 내지 3을 이용하여 제조된 제형예 1 내지 3이 비교예 1 내지 4를 이용하여 제조된 제형예 5 내지 8보다 우수한 항산화 효과를 나타내었으며, BHT보다 우수한 항산화 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.

2) 피부 보습 개선 효과는 건강한 30세에서 50세의 여성 90명을 대상으로, 피부 보습 개선 효과를 확인하기 위해, 각 10명씩 나누어 제형예 1 내지 3, 5 내지 8을 안면부에 하루 2회씩(아침 및 저녁) 2주간 도포하였다. 실험이 시작되기 전, 측정하고자 하는 2부위를 정하고 피부의 수분량을 각각 3회에 걸쳐 측정한 후 2주간 도포(2회/일) 한 후, 피부 수분함량 측정 장치를 이용하여 각질층 바로 아래의 표피층의 수분을 측정하였다. 상기 측정결과는 표 8과 같다.

상기 표 8을 보면 알 수 있듯이, 모든 시료에서 수분 함량이 증가하여 보습 효과를 확인할 수 있었다. 다만, 실시예 1 내지 3을 이용하여 제조된 제형예 1 내지 3이 비교예 1 내지 4를 이용하여 제조된 제형예 5 내지 8보다 우수한 보습 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.

3) 주름 개선 효과는 건강한 피부를 가진 30세에서 40세(평균 36세)의 피험자 20명을 대상으로 하여 8주간 제형예 1 내지 3, 5 내지 8을 사용하도록 하되, 얼굴의 각 면에 구분지어 사용하게 하였으며, 주름개선 효과를 숙련된 의사의 육안 관찰을 통하여 평가하였다. 그 결과는 표 9에 나타내었다.

상기 표 9를 보면 알 수 있듯이, 모든 시료에서 일부분 주름 개선 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 다만, 실시예 1 내지 3을 이용하여 제조된 제형예 1 내지 3이 비교예 1 내지 4를 이용하여 제조된 제형예 5 내지 8보다 우수한 주름 개선 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.

이상으로 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예를 설명하였으나, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고 다른 구체적인 형태로 실시할 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 따라서 이상에서 기술한 실시예는 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것이다.

Claims

꽃 추출물을 함유하는 다기능 화장료 조성물에 있어서,
꽃향유 추출물 20 내지 30중량부, 왕벚나무꽃 추출물 20 내지 30중량부, 흰민들레 추출물 45 내지 55중량부 및 복사나무꽃 추출물 45 내지 55중량부를 포함하는 꽃 추출물이 전체 중량에 대하여, 1 내지 5중량%로 함유되는 것을 특징으로 하는 다기능 화장료 조성물.
삭제
삭제
제1항에 있어서,
상기 꽃 추출물은,
캐모마일 추출물, 찔레 추출물, 연 추출물, 산구절초 추출물, 감국 추출물 및 국화 추출물 중 하나 이상을 더 포함하는 다기능 화장료 조성물.
삭제
제1항에 있어서,
유액, 크림, 화장수, 에센스, 팩, 현탁액, 페이스트, 젤, 파우더, 립스틱, 메이컵 베이스, 파운데이션, 로션, 연고, 겔, 패취, 미용액, 클렌징 폼, 클렌징 크림, 클렌징 워터, 비누, 샴푸, 린스, 분무제의 제형인 것을 특징으로 하는 다기능 화장료 조성물.